JP2007166908A - Method for producing optically active 3-(3-hydroxyphenyl)-2-alkoxypropanoic acid or 3-(3-hydroxyphenyl)-2-alkoxypropanoic acid ester - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、光学活性な３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−アルコキシプロパン酸や３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−アルコキシプロパン酸エステルの製法に関する。 The present invention relates to a process for producing optically active 3- (3-hydroxyphenyl) -2-alkoxypropanoic acid and 3- (3-hydroxyphenyl) -2-alkoxypropanoic acid ester.
光学活性な３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−アルコキシプロパン酸や３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−アルコキシプロパン酸エステルの製法としては、例えば、下記特許文献１の方法が公知である。
しかしながら、上記の光学活性化合物を酵素による不斉水解で合成した例は、本発明者の知る限りにおいて、知られていない。
As a method for producing optically active 3- (3-hydroxyphenyl) -2-alkoxypropanoic acid or 3- (3-hydroxyphenyl) -2-alkoxypropanoic acid ester, for example, the method of Patent Document 1 below is known. .
However, as far as the present inventor knows, an example of synthesizing the above optically active compound by asymmetric hydrolysis with an enzyme is not known.
上記特許文献１記載の方法では、光学活性化合物を製造するために不斉補助基の導入工程と除去工程が余分に必要となり、工程が長くなるという問題があった。また、反応温度が−７５℃であるので、工業的な製法としては必ずしも有利なものではないという問題があった。
本発明者は、光学活性な３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−アルコキシプロパン酸や３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−アルコキシプロパン酸エステルの工業的にも有利な製法を提供すべく鋭意検討した。その結果、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−アルコキシプロパン酸エステルを特定の酵素を用いて不斉加水分解すると、上記課題を解決できることを見出して、本発明を完成するに至った。
The method described in Patent Document 1 has a problem that an extra step for introducing an asymmetric auxiliary group and a step for removing an asymmetric auxiliary group are required to produce an optically active compound, resulting in a longer process. Moreover, since reaction temperature was -75 degreeC, there existed a problem that it was not necessarily advantageous as an industrial manufacturing method.
The present inventor intends to provide an industrially advantageous process for producing optically active 3- (3-hydroxyphenyl) -2-alkoxypropanoic acid and 3- (3-hydroxyphenyl) -2-alkoxypropanoic acid ester. We studied diligently. As a result, it has been found that the above problem can be solved by asymmetric hydrolysis of 3- (3-hydroxyphenyl) -2-alkoxypropanoic acid ester using a specific enzyme, and the present invention has been completed.
すなわち、本発明は、下式（２）で示される光学活性な３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−アルコキシプロパン酸の製造方法であって、下式（１）で示される３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−アルコキシプロパン酸エステルの鏡像異性体混合物のうち、一方の鏡像異性体のエステル基を優先的に加水分解する能力を有する下記の不斉加水分解酵素、又は該酵素の産生能を有する微生物の培養物若しくはその処理物を用いて不斉加水分解することを特徴とする光学活性な３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−アルコキシプロパン酸の製造方法を提供するものである。 That is, the present invention is a method for producing an optically active 3- (3-hydroxyphenyl) -2-alkoxypropanoic acid represented by the following formula (2), which comprises 3- (3 -Hydroxyphenyl) -2-alkoxypropanoic acid ester enantiomer mixture, the following asymmetric hydrolase having the ability to preferentially hydrolyze the ester group of one enantiomer, or production of the enzyme It is intended to provide a method for producing optically active 3- (3-hydroxyphenyl) -2-alkoxypropanoic acid, which comprises asymmetric hydrolysis using a culture of microorganisms having the ability or a processed product thereof .
［式中、Ｒ１は炭素数１〜４のアルキル基、Ｒ２は炭素数１〜６のアルキル基を表す。＊印を付した炭素原子は不斉炭素原子を表す。］
［不斉加水分解酵素］
Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ属、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属、Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ属及びＡｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ属からなる群より選ばれる微生物を起源とする加水分解酵素
[Wherein, R 1 represents an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms, and R 2 represents an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms. The carbon atom marked with * represents an asymmetric carbon atom. ]
[Asymmetric hydrolase]
Hydrolytic enzyme originating from a microorganism selected from the group consisting of the genus Penicillium, Pseudomonas, Rhizomucor and Arthrobacter
また、本発明は、下式（３）で示される光学活性な３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−アルコキシプロパン酸エステルの製造方法であって、上式（１）で示される３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−アルコキシプロパン酸エステルの鏡像異性体混合物のうち、一方の鏡像異性体のエステル基を優先的に加水分解する能力を有する下記の不斉加水分解酵素、又は該酵素の産生能を有する微生物の培養物若しくはその処理物を用いて不斉加水分解した後、不斉加水分解反応液における未反応の式（３）で示される残存エステルを不斉加水分解反応生成物である光学活性な３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−アルコキシプロパン酸から分離した後、上記未反応の残存エステルを単離することを特徴とする光学活性な３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−アルコキシプロパン酸エステルの製造方法を提供するものである。
［不斉加水分解酵素］
Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ属、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属、Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ属及びＡｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ属からなる群より選ばれる微生物を起源とする加水分解酵素
The present invention also provides a method for producing an optically active 3- (3-hydroxyphenyl) -2-alkoxypropanoic acid ester represented by the following formula (3), which comprises 3- (3- ( Among the enantiomeric mixture of 3-hydroxyphenyl) -2-alkoxypropanoic acid ester, the following asymmetric hydrolase having the ability to preferentially hydrolyze the ester group of one enantiomer, or the enzyme After asymmetric hydrolysis using a culture of microorganisms having productivity or a processed product thereof, the remaining ester represented by the unreacted formula (3) in the asymmetric hydrolysis reaction solution is converted into an asymmetric hydrolysis reaction product. After separation from an optically active 3- (3-hydroxyphenyl) -2-alkoxypropanoic acid, the unreacted residual ester is isolated. There is provided a method for producing phenyl) -2-alkoxy propanoic acid ester.
[Asymmetric hydrolase]
Hydrolytic enzyme originating from a microorganism selected from the group consisting of the genus Penicillium, Pseudomonas, Rhizomucor and Arthrobacter
さらに、本発明は、上式（２）で示される光学活性な３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−アルコキシプロパン酸の製造方法であって、上式（１）で示される３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−アルコキシプロパン酸エステルの鏡像異性体混合物のうち、一方の鏡像異性体のエステル基を優先的に加水分解する能力を有する下記の不斉加水分解酵素、又は該酵素の産生能を有する微生物の培養物若しくはその処理物を用いて不斉加水分解した後、不斉加水分解反応液における未反応の上式（３）で示される残存エステルを不斉加水分解反応生成物である光学活性な３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−アルコキシプロパン酸から分離した後、上記未反応の残存エステルを加水分解することを特徴とする光学活性な３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−アルコキシプロパン酸の製造方法を提供するものである。
［不斉加水分解酵素］
Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ属、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属、Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ属及びＡｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ属からなる群より選ばれる微生物を起源とする加水分解酵素
Furthermore, the present invention relates to a method for producing an optically active 3- (3-hydroxyphenyl) -2-alkoxypropanoic acid represented by the above formula (2), which comprises 3- (3 -Hydroxyphenyl) -2-alkoxypropanoic acid ester enantiomer mixture, the following asymmetric hydrolase having the ability to preferentially hydrolyze the ester group of one enantiomer, or production of the enzyme After the asymmetric hydrolysis using the culture of the microorganism having the ability or its treated product, the unreacted residual ester represented by the above formula (3) in the asymmetric hydrolysis reaction solution is converted into the asymmetric hydrolysis reaction product. After separation from an optically active 3- (3-hydroxyphenyl) -2-alkoxypropanoic acid, the unreacted residual ester is hydrolyzed, and the optically active 3- (3-hydroxy There is provided a method for producing phenyl) -2-alkoxy propanoic acids.
[Asymmetric hydrolase]
Hydrolytic enzyme originating from a microorganism selected from the group consisting of the genus Penicillium, Pseudomonas, Rhizomucor and Arthrobacter
本発明によれば、酵素、又は該酵素の産生能を有する微生物の培養物若しくはその処理物を用いることによって、光学活性な３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−アルコキシプロパン酸、及び光学活性な３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−アルコキシプロパン酸エステルを、工程数が少なく、且つ常温で反応させることができる。したがって、本発明は、工業的にも有利なものである。 According to the present invention, an optically active 3- (3-hydroxyphenyl) -2-alkoxypropanoic acid and an optically active substance are obtained by using an enzyme, or a culture of a microorganism capable of producing the enzyme or a processed product thereof. 3- (3-Hydroxyphenyl) -2-alkoxypropanoic acid ester can be reacted at room temperature with few steps. Therefore, the present invention is industrially advantageous.
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明において、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−アルコキシプロパン酸エステル（１）［以下、基質ということもある］は、例えば、上記の特許文献１（ＷＯ ０２／１００８１２号公報）の９３頁に記載の方法に準じて、２−アルコキシ酢酸エステルと３−ベンジルオキシベンズアルデヒドの出発物質から３工程を経て製造することができる。
Hereinafter, the present invention will be described in detail.
In the present invention, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-alkoxypropanoic acid ester (1) [hereinafter sometimes referred to as a substrate] is, for example, 93 of Patent Document 1 (WO 02/100812). According to the method described on the page, it can be produced from a starting material of 2-alkoxyacetic acid ester and 3-benzyloxybenzaldehyde through three steps.
上記の基質は、特許文献１以外の文献記載の方法により製造されたものを使用してもよい。 As the substrate, a substrate produced by a method described in a document other than Patent Document 1 may be used.
基質（１）におけるＲ１は炭素数１〜４のアルキル基を表す。該アルキル基としては、例えばメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基又はｔｅｒｔ−ブチル基等が挙げられる。
基質（１）におけるＲ１としては、メチル基又はエチル基が好ましく、エチル基が特に好ましい。
R 1 in the substrate (1) represents an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms. Examples of the alkyl group include a methyl group, an ethyl group, an n-propyl group, an isopropyl group, an n-butyl group, an isobutyl group, a sec-butyl group, and a tert-butyl group.
As R 1 in the substrate (1), a methyl group or an ethyl group is preferable, and an ethyl group is particularly preferable.
基質（１）におけるＲ２は炭素数１〜６のアルキル基を表す。該アルキル基としては、例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、シクロプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、シクロブチル基、ｎ−ペンチル基、イソペンチル基、ｓｅｃ−ペンチル基、ｔｅｒｔ−ペンチル基、シクロペンチル基、ｎ−ヘキシル基、イソへキシル基、ｓｅｃ−ヘキシル基、ｔｅｒｔ−ヘキシル基又はシクロヘキシル基等が挙げられる。
基質（１）におけるＲ２としては、エチル基又はイソプロピル基が好ましく、イソプロピル基が特に好ましい。
R 2 in the substrate (1) represents an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms. Examples of the alkyl group include methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, cyclopropyl, n-butyl, isobutyl, sec-butyl, tert-butyl, cyclobutyl, and n-pentyl. Group, isopentyl group, sec-pentyl group, tert-pentyl group, cyclopentyl group, n-hexyl group, isohexyl group, sec-hexyl group, tert-hexyl group or cyclohexyl group.
As R 2 in the substrate (1), an ethyl group or an isopropyl group is preferable, and an isopropyl group is particularly preferable.
基質（１）としては、例えば、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−メトキシプロパン酸メチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−メトキシプロパン酸エチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−メトキシプロパン酸ｎ−プロピルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−メトキシプロパン酸イソプロピルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−メトキシプロパン酸ｎ−ブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−メトキシプロパン酸イソブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−メトキシプロパン酸ｓｅｃ−ブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−メトキシプロパン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−エトキシプロパン酸メチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−エトキシプロパン酸エチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−エトキシプロパン酸ｎ−プロピルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−エトキシプロパン酸イソプロピルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−エトキシプロパン酸ｎ−ブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−エトキシプロパン酸イソブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−エトキシプロパン酸ｓｅｃ−ブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−エトキシプロパン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｎ−プロポキシプロパン酸メチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｎ−プロポキシプロパン酸エチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｎ−プロポキシプロパン酸ｎ−プロピルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｎ−プロポキシプロパン酸イソプロピルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｎ−プロポキシプロパン酸ｎ−ブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｎ−プロポキシプロパン酸イソブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｎ−プロポキシプロパン酸ｓｅｃ−ブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｎ−プロポキシプロパン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−イソプロポキシプロパン酸メチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−イソプロポキシプロパン酸エチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−イソプロポキシプロパン酸ｎ−プロピルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−イソプロポキシプロパン酸イソプロピルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−イソプロポキシプロパン酸ｎ−ブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−イソプロポキシプロパン酸イソブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−イソプロポキシプロパン酸ｓｅｃ−ブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−イソプロポキシプロパン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−シクロプロポキシプロパン酸メチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−シクロプロポキシプロパン酸エチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−シクロプロポキシプロパン酸ｎ−プロピルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−シクロプロポキシプロパン酸イソプロピルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−シクロプロポキシプロパン酸ｎ−ブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−シクロプロポキシプロパン酸イソブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−シクロプロポキシプロパン酸ｓｅｃ−ブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−シクロプロポキシプロパン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｎ−ブトキシプロパン酸メチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｎ−ブトキシプロパン酸エチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｎ−ブトキシプロパン酸ｎ−プロピルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｎ−ブトキシプロパン酸イソプロピルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｎ−ブトキシプロパン酸ｎ−ブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｎ−ブトキシプロパン酸イソブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｎ−ブトキシプロパン酸ｓｅｃ−ブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｎ−ブトキシプロパン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−イソブトキシプロパン酸メチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−イソブトキシプロパン酸エチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−イソブトキシプロパン酸ｎ−プロピルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−イソブトキシプロパン酸イソプロピルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−イソブトキシプロパン酸ｎ−ブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−イソブトキシプロパン酸イソブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−イソブトキシプロパン酸ｓｅｃ−ブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−イソブトキシプロパン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｓｅｃ−ブトキシプロパン酸メチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｓｅｃ−ブトキシプロパン酸エチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｓｅｃ−ブトキシプロパン酸ｎ−プロピルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｓｅｃ−ブトキシプロパン酸イソプロピルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｓｅｃ−ブトキシプロパン酸ｎ−ブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｓｅｃ−ブトキシプロパン酸イソブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｓｅｃ−ブトキシプロパン酸ｓｅｃ−ブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｓｅｃ−ブトキシプロパン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｔｅｒｔ−ブトキシプロパン酸メチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｔｅｒｔ−ブトキシプロパン酸エチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｔｅｒｔ−ブトキシプロパン酸ｎ−プロピルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｔｅｒｔ−ブトキシプロパン酸イソプロピルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｔｅｒｔ−ブトキシプロパン酸ｎ−ブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｔｅｒｔ−ブトキシプロパン酸イソブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｔｅｒｔ−ブトキシプロパン酸ｓｅｃ−ブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｔｅｒｔ−ブトキシプロパン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−シクロブトキシプロパン酸メチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−シクロブトキシプロパン酸エチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−シクロブトキシプロパン酸ｎ−プロピルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−シクロブトキシプロパン酸イソプロピルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−シクロブトキシプロパン酸ｎ−ブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−シクロブトキシプロパン酸イソブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−シクロブトキシプロパン酸ｓｅｃ−ブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−シクロブトキシプロパン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｎ−ペントキシプロパン酸メチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｎ−ペントキシプロパン酸エチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｎ−ペントキシプロパン酸ｎ−プロピルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｎ−ペントキシプロパン酸イソプロピルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｎ−ペントキシプロパン酸ｎ−ブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｎ−ペントキシプロパン酸イソブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｎ−ペントキシプロパン酸ｓｅｃ−ブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｎ−ペントキシプロパン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−イソペントキシプロパン酸メチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−イソペントキシプロパン酸エチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−イソペントキシプロパン酸ｎ−プロピルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−イソペントキシプロパン酸イソプロピルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−イソペントキシプロパン酸ｎ−ブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−イソペントキシプロパン酸イソブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−イソペントキシプロパン酸ｓｅｃ−ブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−イソペントキシプロパン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｓｅｃ−ペントキシプロパン酸メチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｓｅｃ−ペントキシプロパン酸エチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｓｅｃ−ペントキシプロパン酸ｎ−プロピルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｓｅｃ−ペントキシプロパン酸イソプロピルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｓｅｃ−ペントキシプロパン酸ｎ−ブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｓｅｃ−ペントキシプロパン酸イソブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｓｅｃ−ペントキシプロパン酸ｓｅｃ−ブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｓｅｃ−ペントキシプロパン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｔｅｒｔ−ペントキシプロパン酸メチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｔｅｒｔ−ペントキシプロパン酸エチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｔｅｒｔ−ペントキシプロパン酸ｎ−プロピルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｔｅｒｔ−ペントキシプロパン酸イソプロピルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｔｅｒｔ−ペントキシプロパン酸ｎ−ブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｔｅｒｔ−ペントキシプロパン酸イソブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｔｅｒｔ−ペントキシプロパン酸ｓｅｃ−ブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｔｅｒｔ−ペントキシプロパン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−シクロペントキシプロパン酸メチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−シクロペントキシプロパン酸エチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−シクロペントキシプロパン酸ｎ−プロピルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−シクロペントキシプロパン酸イソプロピルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−シクロペントキシプロパン酸ｎ−ブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−シクロペントキシプロパン酸イソブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−シクロペントキシプロパン酸ｓｅｃ−ブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−シクロペントキシプロパン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｎ−ヘキソキシプロパン酸メチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｎ−ヘキソキシプロパン酸エチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｎ−ヘキソキシプロパン酸ｎ−プロピルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｎ−ヘキソキシプロパン酸イソプロピルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｎ−ヘキソキシプロパン酸ｎ−ブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｎ−ヘキソキシプロパン酸イソブチルエステル、３−（３−ヒド
ロキシフェニル）−２−ｎ−ヘキソキシプロパン酸ｓｅｃ−ブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｎ−ヘキソキシプロパン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−イソヘキソキシプロパン酸メチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−イソヘキソキシプロパン酸エチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−イソヘキソキシプロパン酸ｎ−プロピルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−イソヘキソキシプロパン酸イソプロピルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−イソヘキソキシプロパン酸ｎ−ブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−イソヘキソキシプロパン酸イソブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−イソヘキソキシプロパン酸ｓｅｃ−ブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−イソヘキソキシプロパン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｓｅｃ−ヘキソキシプロパン酸メチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｓｅｃ−ヘキソキシプロパン酸エチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｓｅｃ−ヘキソキシプロパン酸ｎ−プロピルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｓｅｃ−ヘキソキシプロパン酸イソプロピルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｓｅｃ−ヘキソキシプロパン酸ｎ−ブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｓｅｃ−ヘキソキシプロパン酸イソブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｓｅｃ−ヘキソキシプロパン酸ｓｅｃ−ブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｓｅｃ−ヘキソキシプロパン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｔｅｒｔ−ヘキソキシプロパン酸メチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｔｅｒｔ−ヘキソキシプロパン酸エチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｔｅｒｔ−ヘキソキシプロパン酸ｎ−プロピルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｔｅｒｔ−ヘキソキシプロパン酸イソプロピルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｔｅｒｔ−ヘキソキシプロパン酸ｎ−ブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｔｅｒｔ−ヘキソキシプロパン酸イソブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｔｅｒｔ−ヘキソキシプロパン酸ｓｅｃ−ブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｔｅｒｔ−ヘキソキシプロパン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−シクロヘキソキシプロパン酸メチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−シクロヘキソキシプロパン酸エチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−シクロヘキソキシプロパン酸ｎ−プロピルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−シクロヘキソキシプロパン酸イソプロピルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−シクロヘキソキシプロパン酸ｎ−ブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−シクロヘキソキシプロパン酸イソブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−シクロヘキソキシプロパン酸ｓｅｃ−ブチルエステル、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−シクロヘキソキシプロパン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル等が挙げられる。
Examples of the substrate (1) include 3- (3-hydroxyphenyl) -2-methoxypropanoic acid methyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-methoxypropanoic acid ethyl ester, and 3- (3-hydroxyphenyl). ) -2-methoxypropanoic acid n-propyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-methoxypropanoic acid isopropyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-methoxypropanoic acid n-butyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-methoxypropanoic acid isobutyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-methoxypropanoic acid sec-butyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-methoxypropanoic acid tert- Butyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-eth Cypropanoic acid methyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-ethoxypropanoic acid ethyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-ethoxypropanoic acid n-propyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl)- 2-Ethoxypropanoic acid isopropyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-ethoxypropanoic acid n-butyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-ethoxypropanoic acid isobutyl ester, 3- (3-hydroxy Phenyl) -2-ethoxypropanoic acid sec-butyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-ethoxypropanoic acid tert-butyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-n-propoxypropanoic acid methyl ester , 3- (3-hydroxyphenyl)- -N-propoxypropanoic acid ethyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-n-propoxypropanoic acid n-propyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-n-propoxypropanoic acid isopropyl ester, 3 -(3-hydroxyphenyl) -2-n-propoxypropanoic acid n-butyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-n-propoxypropanoic acid isobutyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2- n-propoxypropanoic acid sec-butyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-n-propoxypropanoic acid tert-butyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-isopropoxypropanoic acid methyl ester, 3 -(3-hydroxyphenyl) -2-isopropoxypro Panic acid ethyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-isopropoxypropanoic acid n-propyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-isopropoxypropanoic acid isopropyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) ) -2-Isopropoxypropanoic acid n-butyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-isopropoxypropanoic acid isobutyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-isopropoxypropanoic acid sec-butyl ester 3- (3-hydroxyphenyl) -2-isopropoxypropanoic acid tert-butyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-cyclopropoxypropanoic acid methyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2- Cyclopropoxypropanoic acid ethyl ester 3- (3-hydroxyphenyl) -2-cyclopropoxypropanoic acid n-propyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-cyclopropoxypropanoic acid isopropyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2 -Cyclopropoxypropanoic acid n-butyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-cyclopropoxypropanoic acid isobutyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-cyclopropoxypropanoic acid sec-butyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-cyclopropoxypropanoic acid tert-butyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-n-butoxypropanoic acid methyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-n- Butoxypropanoic acid ethyl ester, 3- ( -Hydroxyphenyl) -2-n-butoxypropanoic acid n-propyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-n-butoxypropanoic acid isopropyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-n-butoxy Propanoic acid n-butyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-n-butoxypropanoic acid isobutyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-n-butoxypropanoic acid sec-butyl ester, 3- ( 3-hydroxyphenyl) -2-n-butoxypropanoic acid tert-butyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-isobutoxypropanoic acid methyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-isobutoxypropane Acid ethyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-isobut X-propanoic acid n-propyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-isobutoxypropanoic acid isopropyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-isobutoxypropanoic acid n-butyl ester, 3- (3- Hydroxyphenyl) -2-isobutoxypropanoic acid isobutyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-isobutoxypropanoic acid sec-butyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-isobutoxypropanoic acid tert- Butyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-sec-butoxypropanoic acid methyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-sec-butoxypropanoic acid ethyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl)- 2-sec-Butoxypropanoic acid n-propiate Esters, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-sec-butoxypropanoic acid isopropyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-sec-butoxypropanoic acid n-butyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) 2-sec-butoxypropanoic acid isobutyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-sec-butoxypropanoic acid sec-butyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-sec-butoxypropanoic acid tert- Butyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-tert-butoxypropanoic acid methyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-tert-butoxypropanoic acid ethyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl)- 2-tert-Butoxypropanoic acid n-pro Ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-tert-butoxypropanoic acid isopropyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-tert-butoxypropanoic acid n-butyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) 2-tert-butoxypropanoic acid isobutyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-tert-butoxypropanoic acid sec-butyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-tert-butoxypropanoic acid tert- Butyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-cyclobutoxypropanoic acid methyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-cyclobutoxypropanoic acid ethyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2- Cyclobutoxypropanoic acid n-propiate Ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-cyclobutoxypropanoic acid isopropyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-cyclobutoxypropanoic acid n-butyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2 -Cyclobutoxypropanoic acid isobutyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-cyclobutoxypropanoic acid sec-butyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-cyclobutoxypropanoic acid tert-butyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-n-pentoxypropanoic acid methyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-n-pentoxypropanoic acid ethyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-n -Pentoxypropanoic acid n-propyl ester, 3- (3 Hydroxyphenyl) -2-n-pentoxypropanoic acid isopropyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-n-pentoxypropanoic acid n-butyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-n- Pentooxypropanoic acid isobutyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-n-pentoxypropanoic acid sec-butyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-n-pentoxypropanoic acid tert-butyl ester 3- (3-hydroxyphenyl) -2-isopentoxypropanoic acid methyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-isopentoxypropanoic acid ethyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2- Isopentoxypropanoic acid n-propyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) 2-Isopentoxypropanoic acid isopropyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-isopentoxypropanoic acid n-butyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-isopentoxypropanoic acid isobutyl ester 3- (3-hydroxyphenyl) -2-isopentoxypropanoic acid sec-butyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-isopentoxypropanoic acid tert-butyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) ) -2-sec-pentoxypropanoic acid methyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-sec-pentoxypropanoic acid ethyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-sec-pentoxypropanoic acid n-propyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-s ec-pentoxypropanoic acid isopropyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-sec-pentoxypropanoic acid n-butyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-sec-pentoxypropanoic acid isobutyl ester 3- (3-hydroxyphenyl) -2-sec-pentoxypropanoic acid sec-butyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-sec-pentoxypropanoic acid tert-butyl ester, 3- (3- Hydroxyphenyl) -2-tert-pentoxypropanoic acid methyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-tert-pentoxypropanoic acid ethyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-tert-pentoxy Propanoic acid n-propyl ester, 3- (3-hydroxy Enyl) -2-tert-pentoxypropanoic acid isopropyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-tert-pentoxypropanoic acid n-butyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-tert-pen Toxipropanoic acid isobutyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-tert-pentoxypropanoic acid sec-butyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-tert-pentoxypropanoic acid tert-butyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-cyclopentoxypropanoic acid methyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-cyclopentoxypropanoic acid ethyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-cyclo Pentoxypropanoic acid n-propyl ester, 3- 3-hydroxyphenyl) -2-cyclopentoxypropanoic acid isopropyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-cyclopentoxypropanoic acid n-butyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-cyclopent Toxipropanoic acid isobutyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-cyclopentoxypropanoic acid sec-butyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-cyclopentoxypropanoic acid tert-butyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-n-hexoxypropanoic acid methyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-n-hexoxypropanoic acid ethyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-n -Hexoxypropanoic acid n-propyl ester, 3- (3-hydro Xyphenyl) -2-n-hexoxypropanoic acid isopropyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-n-hexoxypropanoic acid n-butyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-n-hex Soxypropanoic acid isobutyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-n-hexoxypropanoic acid sec-butyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-n-hexoxypropanoic acid tert-butyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-isohexoxypropanoic acid methyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-isohexoxypropanoic acid ethyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-iso Hexoxypropanoic acid n-propyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2- Sohexoxypropanoic acid isopropyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-isohexoxypropanoic acid n-butyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-isohexoxypropanoic acid isobutyl ester, 3- ( 3-hydroxyphenyl) -2-isohexoxypropanoic acid sec-butyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-isohexoxypropanoic acid tert-butyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2- sec-Hexoxypropanoic acid methyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-sec-hexoxypropanoic acid ethyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-sec-hexoxypropanoic acid n-propyl ester , 3- (3-hydroxyphenyl) -2-sec- Isopropyl propanoic acid isopropyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-sec-hexoxypropanoic acid n-butyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-sec-hexoxypropanoic acid isobutyl ester, 3 -(3-hydroxyphenyl) -2-sec-hexoxypropanoic acid sec-butyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-sec-hexoxypropanoic acid tert-butyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) ) -2-tert-hexoxypropanoic acid methyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-tert-hexoxypropanoic acid ethyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-tert-hexoxypropanoic acid n-propyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) ) -2-tert-hexoxypropanoic acid isopropyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-tert-hexoxypropanoic acid n-butyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-tert-hexoxy Propanoic acid isobutyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-tert-hexoxypropanoic acid sec-butyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-tert-hexoxypropanoic acid tert-butyl ester, 3 -(3-hydroxyphenyl) -2-cyclohexoxypropanoic acid methyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-cyclohexoxypropanoic acid ethyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-cyclohexoxypropanoic acid n-propyl ester, 3- (3- Loxyphenyl) -2-cyclohexoxypropanoic acid isopropyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-cyclohexoxypropanoic acid n-butyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-cyclohexoxypropanoic acid isobutyl ester 3- (3-hydroxyphenyl) -2-cyclohexoxypropanoic acid sec-butyl ester, 3- (3-hydroxyphenyl) -2-cyclohexoxypropanoic acid tert-butyl ester, and the like.
鏡像異性体混合物である基質（１）のうち、一方の鏡像異性体のエステル基を優先的に加水分解する能力を有する酵素としては、例えば、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ属、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属、Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ属及びＡｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ属からなる群より選ばれる微生物を起源とする加水分解酵素が挙げられる。
上記加水分解酵素としては、例えば、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｉｔｒｉｎｕｍ、Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ ｍｉｅｈｅｉ又はＡｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ ｇｌｏｂｉｆｏｒｍｉｓ等の微生物を起源とする加水分解酵素を挙げることができる。
Among the substrates (1) that are enantiomeric mixtures, enzymes having the ability to preferentially hydrolyze the ester group of one enantiomer include, for example, the genus Penicillium, Pseudomonas, Rhizomucor, and Arthrobacter Examples include hydrolases originating from microorganisms selected from the group.
Examples of the hydrolase include hydrolase originating from microorganisms such as Penicillium citrinum, Rhizomucor miehei, or Arthrobacter globebiformis.
上記微生物を起源とする加水分解酵素としては、例えばアルスロバクター・グロビフォルミス ＳＣ−６−９８−２８株（ＦＥＲＭ ＢＰ−３６５８）由来の酵素（エステラーゼ又はリパーゼ）や、次の市販酵素が挙げられる。
プロテアーゼＢ「アマノ」［Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｉｔｒｉｎｕｍ由来；天野エンザイム社製］、ＣＨＥ’Ａｍａｎｏ’２［Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｐ．由来；天野エンザイム社製］、Ｃｈｉｒａｚｙｍｅ Ｌ−６［Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｐ．由来；Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社製］、ＬＩＰＯＳＡＭ［Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｐ．由来；昭和電工社製］、及びＬｉｐａｓｅ ６２２９１［Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ ｍｉｅｈｅｉ由来；Ｆｌｕｋａ社製］等を挙げることができる。
Examples of the hydrolase originating from the microorganism include an enzyme (esterase or lipase) derived from Arthrobacter globiformis SC-6-98-28 strain (FERM BP-3658) and the following commercially available enzymes.
Protease B “Amano” [derived from Penicillium citrinum; manufactured by Amano Enzyme Co., Ltd.], CHE'Amano'2 [Pseudomonas sp. Origin: Amano Enzyme], Chirazyme L-6 [Pseudomonas sp. Origin: Roche Diagnostics], LIPOSAM [Pseudomonas sp. Origin; manufactured by Showa Denko KK] and Lipase 62291 [derived from Rhizomucor miehei; manufactured by Fluka].
上記のアルスロバクター・グロビフォルミス ＳＣ−６−９８−２８株（ＦＥＲＭ ＢＰ−３６５８）由来の酵素等は、前記微生物から突然変異剤又は紫外線等の処理により産生された突然変異体由来の酵素であってもよく、該微生物が有する本酵素をコードする遺伝子が導入されて形質転換された組換え微生物により産生された酵素であってもよい。
また、遺伝子工学的手法により、酵素のアミノ酸配列中における特定のアミノ酸が１個〜数個欠失、付加又は置換されてなる変異型酵素であってもよい。
The above-mentioned enzyme derived from Arthrobacter globiformis SC-6-98-28 (FERM BP-3658) is an enzyme derived from a mutant produced from the above microorganism by treatment with a mutagen or ultraviolet light. Alternatively, it may be an enzyme produced by a recombinant microorganism transformed by introducing a gene encoding the present enzyme of the microorganism.
Further, it may be a mutant enzyme in which one to several specific amino acids in the amino acid sequence of the enzyme are deleted, added or substituted by genetic engineering techniques.
酵素をコードする遺伝子が導入されて形質転換された組換え微生物を作製する方法としては、例えばＪ．Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｅ．Ｆ．Ｆｒｉｔｓｃｈ，Ｔ．Ｍａｎｉａｔｉｓ著；モレキュラー クローニング 第２版（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ ２ｅｄ ｅｄｉｔｉｏｎ）や、１９８９年発行のコールドスプリングハーバー ラボラトリー（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂａｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）等に記載の通常の遺伝子工学的手法に準じた方法を挙げることができる。より具体的には、特開平７−１６３３６４号公報に記載の方法を挙げることができる。 As a method for producing a recombinant microorganism transformed by introducing a gene encoding an enzyme, for example, J. Org. Sambrook, E .; F. Fritsch, T .; Maniatis; Molecular Cloning 2ed edition, and 1989 Cold Spring Harbor Laboratory (Cold Spring Harbor Laboratory), etc., can be used. More specifically, the method described in JP-A-7-163364 can be exemplified.
遺伝子工学的手法による変異型酵素の作製方法としては、例えばＯｌｆｅｒｔ Ｌａｎｄｔ（Ｇｅｎｅ ９６ １２５−１２８ １９９０）らの方法を挙げることができる。より具体的には、特開２０００−７８９８８号公報や特開平７−２１３２８０号公報に記載の方法に準じた方法を挙げることができる。このようにして作製することのできる変異型酵素の例としては、アルスロバクター・グロビフォルミス ＳＣ−６−９８−２８株由来のエステラーゼから作製される変異型のエステラーゼ又は変異型のリパーゼ等を挙げることができる。 As a method for producing a mutant enzyme by a genetic engineering technique, for example, the method of Olfant Landt (Gene 96 125-128 1990) can be exemplified. More specifically, methods according to the methods described in JP-A-2000-78988 and JP-A-7-213280 can be mentioned. Examples of mutant enzymes that can be prepared in this way include mutant esterases or mutant lipases prepared from esterases derived from Arthrobacter gloviformis SC-6-98-28. Can do.
酵素を産生する微生物は、いずれも通常の方法によって液体培養することができる。培地としては、通常の微生物培養に使用される炭素源、窒素源や無機物等を適宜含む各種の培地を使用することができる。
例えば、炭素源としては、グルコース、グリセリン、有機酸や糖蜜等を挙げることができる。窒素源としては、ペプトン、酵母エキス、麦芽エキス、大豆粉、コーンスティープリカー、綿実粉、乾燥酵母、カザミノ酸、塩化アンモニウム、硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウムや尿素等を挙げることができる。
無機物としては、カリウム、ナトリウム、マグネシウム、鉄、マンガン、コバルトや亜鉛等の金属の塩酸塩、上記金属の硫酸塩及び前記金属のリン酸塩等が挙げられる。具体的には、塩化カリウム、塩化ナトリウム、硫酸マグネシウム、硫酸第一鉄、硫酸マンガン、塩化コバルト、硫酸亜鉛、リン酸カリウムやリン酸ナトリウム等を使用することができる。また、上記微生物の不斉水解能を高めるために、適宜、オリーブ油若しくはトリブチリン等のトリグリセリド又は上述した基質を培地に添加してもよい。
Any microorganism that produces the enzyme can be liquid-cultured by a conventional method. As the medium, various mediums appropriately containing a carbon source, a nitrogen source, an inorganic substance and the like used for normal microorganism culture can be used.
For example, examples of the carbon source include glucose, glycerin, organic acid, molasses and the like. Examples of the nitrogen source include peptone, yeast extract, malt extract, soybean flour, corn steep liquor, cottonseed flour, dry yeast, casamino acid, ammonium chloride, ammonium nitrate, ammonium sulfate and urea.
Examples of inorganic substances include potassium, sodium, magnesium, iron, manganese, metal hydrochlorides such as cobalt and zinc, the metal sulfates, and metal phosphates. Specifically, potassium chloride, sodium chloride, magnesium sulfate, ferrous sulfate, manganese sulfate, cobalt chloride, zinc sulfate, potassium phosphate, sodium phosphate, and the like can be used. In addition, in order to enhance the asymmetric water decomposing ability of the microorganism, a triglyceride such as olive oil or tributyrin or the above-mentioned substrate may be added to the medium as appropriate.
培養は、通常は、好気的雰囲気で行うのがよく、振とう培養又は通気撹拌培養が好ましい。培養温度は、通常２０〜４０℃程度、好ましくは２５〜３５℃程度であり、ｐＨは６〜８程度が好ましい。培養時間は、種々の条件によって異なるが、１〜７日間程度が好ましい。また、上記基質の不斉水解能を有する微生物菌体が得られる方法であれば、固体培養法も採用することができる。 The culture is usually carried out in an aerobic atmosphere, and shaking culture or aeration-agitation culture is preferable. The culture temperature is usually about 20 to 40 ° C., preferably about 25 to 35 ° C., and the pH is preferably about 6 to 8. The culture time varies depending on various conditions, but is preferably about 1 to 7 days. Moreover, a solid culture method can also be employ | adopted if it is the method of obtaining the microbial cell which has the asymmetric water decomposability of the said substrate.
上述した酵素を、上記のようにして培養された微生物培養物から精製するには、酵素の精製において一般に使用されている方法に従えばよい。
例えば、先ず、超音波処理、ダイノミル処理又はフレンチプレス処理等の方法により、微生物培養物中の菌体を破砕する。次に、得られた破砕液から遠心分離等により不溶物を除去した後、通常酵素の精製に使用される陽イオン交換カラムクロマトグラフィー、陰イオン交換カラムクロマトグラフィー、疎水カラムクロマトグラフィー及びゲル濾過カラムクロマトグラフィー等の一つ又は二つ以上を適宜組合せることによって、目的とする酵素を精製することができる。これらのカラムクロマトグラフィーに使用する担体の一例としては、ＤＥＡＥ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ｆａｓｔｆｌｏｗ（アマシャム・ファルマシア・バイオテク社製）や、Ｂｕｔｙｌ−Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ６５０Ｓ（東ソー株式会社製）等を挙げることができる。
In order to purify the above-mentioned enzyme from the microorganism culture cultured as described above, a method generally used in the purification of the enzyme may be followed.
For example, first, the cells in the microorganism culture are crushed by a method such as ultrasonic treatment, dynomill treatment, or French press treatment. Next, after removing insoluble matter from the obtained crushed liquid by centrifugation or the like, cation exchange column chromatography, anion exchange column chromatography, hydrophobic column chromatography and gel filtration column which are usually used for enzyme purification The target enzyme can be purified by appropriately combining one or two or more such as chromatography. Examples of carriers used in these column chromatography include DEAE-Sepharose fastflow (Amersham Pharmacia Biotech), Butyl-Toyopearl 650S (Tosoh Corporation), and the like.
酵素は、精製酵素、粗酵素、微生物培養物、菌体、及びこれらを処理したもの等の種々の形態で用いることができる。上記の処理したものとは、例えば、凍結乾燥菌体、アセトン乾燥菌体、菌体摩砕物、菌体の自己消化物、菌体の超音波処理物、菌体抽出物又は菌体のアルカリ処理物等をいう。さらに、上記のような種々の純度又は形態の酵素を、例えば、シリカゲルやセラミックス等の無機担体、セルロース、イオン交換樹脂等への吸着法、ポリアクリルアミド法、カラギーナンゲル法のような含硫多糖ゲル法、アルギン酸ゲル法、及び寒天ゲル法等の公知の方法により固定化して用いてもよい。 The enzyme can be used in various forms such as a purified enzyme, a crude enzyme, a microbial culture, a microbial cell, and a product obtained by treating these. What was processed above is, for example, freeze-dried microbial cells, acetone-dried microbial cells, pulverized microbial cells, self-digested microbial cells, sonicated microbial cells, microbial cell extracts or alkaline treatment of microbial cells. It refers to things. Furthermore, an enzyme having various purities or forms as described above can be used for, for example, an adsorption method on an inorganic carrier such as silica gel or ceramics, cellulose, ion exchange resin, or the like, a sulfur-containing polysaccharide gel such as a polyacrylamide method or a carrageenan gel method. It may be used after being immobilized by a known method such as a method, an alginate gel method, and an agar gel method.
酵素の使用量は反応時間の遅延や選択性の低下が起こらないように適宜選択される。
例えば精製酵素や粗酵素を用いる場合、その使用量は上記の基質に対して、通常は０．００１〜２重量倍程度、好ましくは０．００２〜０．５重量倍程度である。
また、微生物培養物、菌体及びそれらの処理物を用いる場合の使用量は、前記基質に対して、通常は０．０１〜２００重量倍程度であり、好ましくは０．１〜５０重量倍程度である。
The amount of the enzyme used is appropriately selected so that the reaction time is not delayed and the selectivity is not lowered.
For example, when a purified enzyme or a crude enzyme is used, the amount used is usually about 0.001 to 2 times by weight, preferably about 0.002 to 0.5 times by weight with respect to the substrate.
Moreover, the usage-amount in the case of using a microorganism culture, a microbial cell, and those processed materials is about 0.01 to 200 weight times normally with respect to the said substrate, Preferably it is about 0.1 to 50 weight times. It is.
不斉加水分解反応に用いられる水は、緩衝水溶液であってもよい。緩衝水溶液としては、例えばリン酸ナトリウム水溶液、リン酸カリウム水溶液等といったリン酸アルカリ金属塩水溶液等の無機酸塩の緩衝水溶液、酢酸ナトリウム水溶液、酢酸カリウム水溶液等といった酢酸アルカリ金属塩等の有機酸塩の緩衝水溶液等が挙げられる。
水の使用量は、通常は基質に対して０．５モル倍〜２００重量倍の範囲である。
The water used for the asymmetric hydrolysis reaction may be a buffered aqueous solution. Examples of the buffer aqueous solution include inorganic acid buffer aqueous solutions such as sodium phosphate aqueous solution and potassium phosphate aqueous solution, and organic acid salts such as alkali metal acetate such as sodium acetate aqueous solution and potassium acetate aqueous solution. And buffered aqueous solutions.
The amount of water used is usually in the range of 0.5 mole to 200 weight times the substrate.
本発明における不斉加水分解反応は、疎水性有機溶媒や親水性有機溶媒等の有機溶媒の存在下に行ってもよい。
疎水性有機溶媒としては、例えばｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテルやジイソプロピルエーテル等の脂肪族エーテル類や、トルエン、ヘキサン、シクロヘキサン、ヘプタン、オクタンやイソオクタン等の炭化水素類等が用いられる。
また、親水性有機溶媒としては、例えばｔｅｒｔ−ブタノール、メタノール、エタノール、イソプロパノール、イソブタノールやｎ−ブタノール等のアルコール類、テトラヒドロフラン等の脂環式エーテル類、ジメチルスルホキサイド等のスルホキサイド類、アセトン等のケトン類、アセトニトリル等のニトリル類や、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド等のアミド類等が挙げられる。
これらの疎水性有機溶媒や親水性有機溶媒は、それぞれ単独で、又は２種以上を混合して用いられる。また、疎水性有機溶媒と親水性有機溶媒とを混合して用いてもよい。
The asymmetric hydrolysis reaction in the present invention may be performed in the presence of an organic solvent such as a hydrophobic organic solvent or a hydrophilic organic solvent.
Examples of the hydrophobic organic solvent include aliphatic ethers such as tert-butyl methyl ether and diisopropyl ether, and hydrocarbons such as toluene, hexane, cyclohexane, heptane, octane and isooctane.
Examples of the hydrophilic organic solvent include tert-butanol, methanol, ethanol, isopropanol, alcohols such as isobutanol and n-butanol, alicyclic ethers such as tetrahydrofuran, sulfoxides such as dimethyl sulfoxide, acetone, and the like. And the like, nitriles such as acetonitrile, amides such as N, N-dimethylformamide, and the like.
These hydrophobic organic solvents and hydrophilic organic solvents are used alone or in admixture of two or more. Further, a hydrophobic organic solvent and a hydrophilic organic solvent may be mixed and used.
上記の有機溶媒を用いる場合の使用量は、基質に対して、通常は２００重量倍以下、好ましくは０．１〜１００重量倍の範囲である。 The amount of the organic solvent used is usually 200 times or less, preferably 0.1 to 100 times the weight of the substrate.
不斉加水分解反応は、例えば、水、基質及び酵素を混合する方法により行われる。また、有機溶媒を用いる場合には、該有機溶媒、水、基質及び酵素を混合すればよい。 The asymmetric hydrolysis reaction is performed, for example, by a method of mixing water, a substrate and an enzyme. Moreover, what is necessary is just to mix this organic solvent, water, a substrate, and an enzyme, when using an organic solvent.
反応系のｐＨは、酵素による不斉加水分解反応が選択性よく進行する値が適宜選択される。反応系のｐＨは、通常４〜１０程度、好ましくは６〜８程度の範囲である。反応中、塩基を加えることにより、ｐＨを上記範囲内に調整してもよい。
上記の塩基としては、例えば水酸化ナトリウムや水酸化カリウム等のアルカリ金属水酸化物、炭酸ナトリウムや炭酸カリウム等のアルカリ金属の炭酸塩、炭酸カルシウム等のアルカリ土類金属の炭酸塩、炭酸水素ナトリウムや炭酸水素カリウム等のアルカリ金属重炭酸塩、リン酸２水素ナトリウム、リン酸水素２ナトリウム、リン酸２水素カリウムやリン酸水素２カリウム等のリン酸塩、トリエチルアミンやピリジン等の有機塩基、及びアンモニア等が使用される。
前記の塩基は単独で用いてもよく、２種以上を混合して用いてもよい。塩基は通常は水溶液として添加されるが、有機溶媒と水の混合物の溶液として添加してもよい。上記の有機溶媒は反応で使用する溶媒と同じものを使用することもできる。さらに、塩基は固体として添加してもよいし、懸濁液として添加してもよい。
The pH of the reaction system is appropriately selected so that the asymmetric hydrolysis reaction by the enzyme proceeds with good selectivity. The pH of the reaction system is usually in the range of about 4 to 10, preferably about 6 to 8. During the reaction, the pH may be adjusted within the above range by adding a base.
Examples of the base include alkali metal hydroxides such as sodium hydroxide and potassium hydroxide, alkali metal carbonates such as sodium carbonate and potassium carbonate, alkaline earth metal carbonates such as calcium carbonate, and sodium hydrogen carbonate. And alkali metal bicarbonates such as potassium hydrogen carbonate, sodium dihydrogen phosphate, disodium hydrogen phosphate, phosphates such as potassium dihydrogen phosphate and dipotassium hydrogen phosphate, organic bases such as triethylamine and pyridine, and Ammonia or the like is used.
The above bases may be used alone or in combination of two or more. The base is usually added as an aqueous solution, but may be added as a solution of a mixture of an organic solvent and water. The same organic solvent as that used in the reaction can be used as the organic solvent. Furthermore, the base may be added as a solid or as a suspension.
不斉加水分解の反応温度は、高すぎると酵素の安定性が低下する傾向にあり、低すぎると反応速度が低下する傾向にある。反応温度は、通常は５〜６５℃程度の範囲であり、好ましくは１０〜５０℃程度の範囲である。 If the reaction temperature for asymmetric hydrolysis is too high, the stability of the enzyme tends to decrease, and if it is too low, the reaction rate tends to decrease. The reaction temperature is usually in the range of about 5 to 65 ° C, preferably in the range of about 10 to 50 ° C.
かくして、光学活性な３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−アルコキシプロパン酸（２）［以下、不斉加水分解カルボン酸ということもある］を含む反応液が得られるが、反応で使用した酵素や緩衝剤、又は残存する基質［以下、残存エステルということもある］等と分離するために、さらに後処理操作を行ってもよい。後処理操作としては、例えば、反応液中の溶媒を留去した後、シリカゲルクロマトグラフィーを用いて分離精製する方法や、分液操作により分離精製する方法等が挙げられる。 Thus, a reaction solution containing optically active 3- (3-hydroxyphenyl) -2-alkoxypropanoic acid (2) [hereinafter also referred to as asymmetrically hydrolyzed carboxylic acid] is obtained, but the enzyme used in the reaction Further, a post-treatment operation may be performed in order to separate from the buffer, the remaining substrate [hereinafter sometimes referred to as the remaining ester], and the like. Examples of the post-treatment operation include a method of separating and purifying using silica gel chromatography after distilling off the solvent in the reaction solution, and a method of separating and purifying by liquid separation operation.
分液操作により分離精製する際に、反応時に水と疎水性有機溶媒のいずれにも溶解する有機溶媒を用いた場合は、この水と疎水性有機溶媒のいずれにも溶解する溶媒を留去により除去した後、分液操作を行ってもよい。
また、不斉加水分解カルボン酸を含む液に不溶の酵素や固定化担体等が存在する場合は、これらの酵素や固定化担体を濾過により除去してもよい。
When separating and purifying by separation operation, if an organic solvent that is soluble in both water and hydrophobic organic solvent is used during the reaction, the solvent that is soluble in both water and hydrophobic organic solvent is distilled off. After removal, a liquid separation operation may be performed.
Moreover, when an insoluble enzyme, an immobilization support, etc. exist in the liquid containing asymmetric hydrolysis carboxylic acid, you may remove these enzymes and an immobilization support by filtration.
不斉加水分解反応液中に含まれる残存エステルの分離は、該残存エステルを疎水性有機溶媒によって抽出後、水層と分液すればよい。
上記の抽出に用いる疎水性有機溶媒としては、例えばｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテルやイソプロピルエーテル等の脂肪族エーテル類；トルエン、ヘキサン、シクロヘキサン、ヘプタン、オクタンやイソオクタン等の炭化水素類；ジクロロメタン、ジクロロエタン、クロロホルム、クロロベンゼンやオルトジクロロベンゼン等のハロゲン化炭化水素類；酢酸メチル、酢酸エチルや酢酸ブチル等のエステル類が挙げられる。
不斉加水分解反応時に上記例示の疎水性有機溶媒を使用した場合は、そのまま分液操作を行うこともできる。また、不斉加水分解反応時に疎水性有機溶媒を用いなかった場合や、疎水性有機溶媒又は水の使用量が少ないために容易に分液できない場合には、疎水性有機溶媒及び／又は水を適宜添加した後、静置して分液すればよい。
上記の疎水性有機溶媒の使用量は特に限定されるものではないが、基質に対して、通常は０．１〜２００重量倍、好ましくは０．２〜１００重量倍程度の範囲である。
上述した抽出や分液操作時のｐＨは、通常６〜１２程度の範囲、好ましくは７〜１０程度の範囲である。
Separation of the remaining ester contained in the asymmetric hydrolysis reaction solution may be performed by separating the remaining ester from the aqueous layer after extraction with a hydrophobic organic solvent.
Examples of the hydrophobic organic solvent used for the extraction include aliphatic ethers such as tert-butyl methyl ether and isopropyl ether; hydrocarbons such as toluene, hexane, cyclohexane, heptane, octane and isooctane; dichloromethane, dichloroethane and chloroform. Halogenated hydrocarbons such as chlorobenzene and orthodichlorobenzene; esters such as methyl acetate, ethyl acetate and butyl acetate.
When the hydrophobic organic solvent exemplified above is used during the asymmetric hydrolysis reaction, the liquid separation operation can be performed as it is. In addition, when a hydrophobic organic solvent is not used during the asymmetric hydrolysis reaction, or when the hydrophobic organic solvent or water cannot be easily separated due to a small amount of use, the hydrophobic organic solvent and / or water may be added. What is necessary is just to leave still after liquid addition suitably.
Although the usage-amount of said hydrophobic organic solvent is not specifically limited, Usually, it is 0.1-200 weight times with respect to a substrate, Preferably it is the range of about 0.2-100 weight times.
The pH at the time of the above-described extraction or liquid separation operation is usually in the range of about 6 to 12, preferably in the range of about 7 to 10.
不斉加水分解カルボン酸と残存エステルを分離する際には、液のｐＨを上記範囲に調整するために、適宜、酸や塩基を使用することもできる。上記の酸としては例えば、塩化水素、臭化水素、硫酸やリン酸等の無機酸、該無機酸と金属との酸性塩、酢酸、クエン酸やメタンスルホン酸等の有機酸、及び該有機酸と金属との酸性塩等が挙げられる。また、上記の塩基としては反応時のｐＨ調整に用いたものと同様の塩基が使用可能である。
不斉加水分解カルボン酸と残存エステルとの分離が不十分な場合は、上述した抽出や分液の操作を複数回繰り返してもよい。
上記の抽出により、不斉加水分解物であるカルボン酸と分離された残存エステルは、油層中の有機溶媒を留去することにより単離することができる。
上記の油層中の有機溶媒を留去することにより単離された残存エステルは、さらにカラムクロマトグラフィー等によって精製されてもよい。
上記操作により得られた残存エステルは、例えばアルカリの存在下に加水分解することによって、光学活性な３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−アルコキシプロパン酸に誘導することができる。この光学活性な３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−アルコキシプロパン酸は、さらにカラムクロマトグラフィーや再結晶等によって精製してもよい。
When separating the asymmetrically hydrolyzed carboxylic acid and the residual ester, an acid or a base can be appropriately used in order to adjust the pH of the liquid to the above range. Examples of the acid include an inorganic acid such as hydrogen chloride, hydrogen bromide, sulfuric acid and phosphoric acid, an acid salt of the inorganic acid and a metal, an organic acid such as acetic acid, citric acid and methanesulfonic acid, and the organic acid. And acid salts of metal and metal. Moreover, as said base, the base similar to what was used for pH adjustment at the time of reaction can be used.
When the separation between the asymmetrically hydrolyzed carboxylic acid and the residual ester is insufficient, the above-described extraction and liquid separation operations may be repeated a plurality of times.
The residual ester separated from the carboxylic acid which is an asymmetric hydrolyzate by the above extraction can be isolated by distilling off the organic solvent in the oil layer.
The residual ester isolated by distilling off the organic solvent in the oil layer may be further purified by column chromatography or the like.
The residual ester obtained by the above operation can be derived into optically active 3- (3-hydroxyphenyl) -2-alkoxypropanoic acid, for example, by hydrolysis in the presence of alkali. This optically active 3- (3-hydroxyphenyl) -2-alkoxypropanoic acid may be further purified by column chromatography, recrystallization or the like.
不斉加水分解カルボン酸は、上記の抽出操作において水層に存在する。水層に存在する不斉加水分解カルボン酸を酵素や緩衝剤等の水溶性成分と分離するには、疎水性有機溶媒を用いて有機層に抽出後、水層と分液すればよい。上記の抽出時に使用する疎水性有機溶媒としては、前述した残存エステルを抽出する際に用いた溶媒と同じ溶媒を用いることができる。該疎水性有機溶媒の使用量は、基質に対して、通常は０．１〜２００重量倍程度の範囲であり、好ましくは０．２〜１００重量倍程度の範囲である。
不斉加水分解カルボン酸の抽出時のｐＨは、通常は１〜７程度の範囲、好ましくは２〜５程度の範囲である。抽出時の液性を上記ｐＨ範囲に調整するため、酸及び塩基を適宜使用することもできる。かかる酸及び塩基としては、上述した残存エステルと分離する際の分液操作時に用いた酸及び塩基と同じものを用いることができる。
不斉加水分解カルボン酸の水層からの抽出量が少ない場合は、抽出操作と分液操作とを、複数回繰り返してもよい。
The asymmetrically hydrolyzed carboxylic acid is present in the aqueous layer in the above extraction operation. In order to separate the asymmetrically hydrolyzed carboxylic acid present in the aqueous layer from water-soluble components such as enzymes and buffering agents, extraction with an organic layer using a hydrophobic organic solvent may be performed, followed by liquid separation from the aqueous layer. As the hydrophobic organic solvent used at the time of the extraction, the same solvent as the solvent used at the time of extracting the residual ester described above can be used. The amount of the hydrophobic organic solvent used is usually in the range of about 0.1 to 200 times by weight, preferably in the range of about 0.2 to 100 times by weight with respect to the substrate.
The pH during the extraction of the asymmetrically hydrolyzed carboxylic acid is usually in the range of about 1 to 7, preferably in the range of about 2 to 5. In order to adjust the liquid property at the time of extraction to the above pH range, an acid and a base can be appropriately used. As the acid and base, the same acid and base used in the liquid separation operation for separating from the above-described residual ester can be used.
When the amount of asymmetrically hydrolyzed carboxylic acid extracted from the aqueous layer is small, the extraction operation and the liquid separation operation may be repeated a plurality of times.
不斉加水分解カルボン酸は、上述の方法で得た油層中の疎水性有機溶媒を留去することにより、単離することができる。不斉加水分解カルボン酸は、さらにカラムクロマトグラフィーや再結晶等によって精製されてもよい。 The asymmetrically hydrolyzed carboxylic acid can be isolated by distilling off the hydrophobic organic solvent in the oil layer obtained by the above method. The asymmetric hydrolysis carboxylic acid may be further purified by column chromatography, recrystallization or the like.
本発明によって得られる不斉加水分解カルボン酸（２）としては、次の化合物が挙げられる。
（Ｓ）−３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−メトキシプロパン酸、（Ｓ）−３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−エトキシプロパン酸、（Ｓ）−３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｎ−プロポキシプロパン酸、（Ｓ）−３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−イソプロポキシプロパン酸、（Ｓ）−３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−シクロプロポキシプロパン酸、（Ｓ）−３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｎ−ブトキシプロパン酸、（Ｓ）−３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−イソブトキシプロパン酸、（Ｓ）−３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｓｅｃ−ブトキシプロパン酸、（Ｓ）−３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｔｅｒｔ−ブトキシプロパン酸、（Ｓ）−３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−シクロブトキシプロパン酸、（Ｓ）−３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｎ−ペントキシプロパン酸、（Ｓ）−３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−イソペントキシプロパン酸、（Ｓ）−３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｓｅｃ−ペントキシプロパン酸、（Ｓ）−３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｔｅｒｔ−ペントキシプロパン酸、（Ｓ）−３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−シクロペントキシプロパン酸、（Ｓ）−３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｎ−ヘキソキシプロパン酸、（Ｓ）−３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−イソヘキソキシプロパン酸、（Ｓ）−３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｓｅｃ−ヘキソキシプロパン酸、（Ｓ）−３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｔｅｒｔ−ヘキソキシプロパン酸、（Ｓ）−３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−シクロヘキソキシプロパン酸、（Ｒ）−３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−メトキシプロパン酸、（Ｒ）−３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−エトキシプロパン酸、（Ｒ）−３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｎ−プロポキシプロパン酸、（Ｒ）−３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−イソプロポキシプロパン酸、（Ｒ）−３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−シクロプロポキシプロパン酸、（Ｒ）−３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｎ−ブトキシプロパン酸、（Ｒ）−３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−イソブトキシプロパン酸、（Ｒ）−３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｓｅｃ−ブトキシプロパン酸、（Ｒ）−３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｔｅｒｔ−ブトキシプロパン酸、（Ｒ）−３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−シクロブトキシプロパン酸、（Ｒ）−３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｎ−ペントキシプロパン酸、（Ｒ）−３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−イソペントキシプロパン酸、（Ｒ）−３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｓｅｃ−ペントキシプロパン酸、（Ｒ）−３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｔｅｒｔ−ペントキシプロパン酸、（Ｒ）−３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−シクロペントキシプロパン酸、（Ｒ）−３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｎ−ヘキソキシプロパン酸、（Ｒ）−３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−イソヘキソキシプロパン酸、（Ｒ）−３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｓｅｃ−ヘキソキシプロパン酸、（Ｒ）−３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−ｔｅｒｔ−ヘキソキシプロパン酸、（Ｒ）−３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−シクロヘキソキシプロパン酸等。
Examples of the asymmetric hydrolysis carboxylic acid (2) obtained by the present invention include the following compounds.
(S) -3- (3-hydroxyphenyl) -2-methoxypropanoic acid, (S) -3- (3-hydroxyphenyl) -2-ethoxypropanoic acid, (S) -3- (3-hydroxyphenyl) 2-n-propoxypropanoic acid, (S) -3- (3-hydroxyphenyl) -2-isopropoxypropanoic acid, (S) -3- (3-hydroxyphenyl) -2-cyclopropoxypropanoic acid, ( S) -3- (3-hydroxyphenyl) -2-n-butoxypropanoic acid, (S) -3- (3-hydroxyphenyl) -2-isobutoxypropanoic acid, (S) -3- (3-hydroxy Phenyl) -2-sec-butoxypropanoic acid, (S) -3- (3-hydroxyphenyl) -2-tert-butoxypropanoic acid, (S) -3- (3-hydroxyphenyl) -2- Clobutoxypropanoic acid, (S) -3- (3-hydroxyphenyl) -2-n-pentoxypropanoic acid, (S) -3- (3-hydroxyphenyl) -2-isopentoxypropanoic acid, (S ) -3- (3-hydroxyphenyl) -2-sec-pentoxypropanoic acid, (S) -3- (3-hydroxyphenyl) -2-tert-pentoxypropanoic acid, (S) -3- (3) -Hydroxyphenyl) -2-cyclopentoxypropanoic acid, (S) -3- (3-hydroxyphenyl) -2-n-hexoxypropanoic acid, (S) -3- (3-hydroxyphenyl) -2- Isohexoxypropanoic acid, (S) -3- (3-hydroxyphenyl) -2-sec-hexoxypropanoic acid, (S) -3- (3-hydroxyphenyl) -2-tert-hexoxy Lopanic acid, (S) -3- (3-hydroxyphenyl) -2-cyclohexoxypropanoic acid, (R) -3- (3-hydroxyphenyl) -2-methoxypropanoic acid, (R) -3- (3 -Hydroxyphenyl) -2-ethoxypropanoic acid, (R) -3- (3-hydroxyphenyl) -2-n-propoxypropanoic acid, (R) -3- (3-hydroxyphenyl) -2-isopropoxypropane Acid, (R) -3- (3-hydroxyphenyl) -2-cyclopropoxypropanoic acid, (R) -3- (3-hydroxyphenyl) -2-n-butoxypropanoic acid, (R) -3- ( 3-hydroxyphenyl) -2-isobutoxypropanoic acid, (R) -3- (3-hydroxyphenyl) -2-sec-butoxypropanoic acid, (R) -3- (3-hydroxyphenyl) ) -2-tert-butoxypropanoic acid, (R) -3- (3-hydroxyphenyl) -2-cyclobutoxypropanoic acid, (R) -3- (3-hydroxyphenyl) -2-n-pentoxypropane Acid, (R) -3- (3-hydroxyphenyl) -2-isopentoxypropanoic acid, (R) -3- (3-hydroxyphenyl) -2-sec-pentoxypropanoic acid, (R) -3 -(3-hydroxyphenyl) -2-tert-pentoxypropanoic acid, (R) -3- (3-hydroxyphenyl) -2-cyclopentoxypropanoic acid, (R) -3- (3-hydroxyphenyl) 2-n-hexoxypropanoic acid, (R) -3- (3-hydroxyphenyl) -2-isohexoxypropanoic acid, (R) -3- (3-hydroxyphenyl) -2-sec-hex Kishipuropan acid, (R) -3- (3- hydroxyphenyl) -2-tert-hexoxyphenyl propanoic acid, (R) -3- (3- hydroxyphenyl) -2-cyclohexoxy propanoic acid and the like.
以下、実施例等により本発明をより詳細に説明するが、本発明はこれらの例によって限定されるものではない。 EXAMPLES Hereinafter, although an Example etc. demonstrate this invention in detail, this invention is not limited by these examples.
実施例１〜６
光学活性な３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−イソプロポキシプロパン酸、及び光学活性な３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−イソプロポキシプロパン酸エチルエステルの製造例
Examples 1-6
Example of production of optically active 3- (3-hydroxyphenyl) -2-isopropoxypropanoic acid and optically active 3- (3-hydroxyphenyl) -2-isopropoxypropanoic acid ethyl ester
リン酸水素２ナトリウム１．７０ｇ、リン酸２水素ナトリウム０．９６ｇを水２００ｇに溶解させ、バッファー水溶液を調製した。別途、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−イソプロポキシプロパン酸エチルエステル１０．０９ｇを含むｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（以下、ＭＴＢＥという）溶液１００ｍｌを調製した。 1.70 g of disodium hydrogen phosphate and 0.96 g of sodium dihydrogen phosphate were dissolved in 200 g of water to prepare an aqueous buffer solution. Separately, 100 ml of a tert-butyl methyl ether (hereinafter referred to as MTBE) solution containing 10.09 g of 3- (3-hydroxyphenyl) -2-isopropoxypropanoic acid ethyl ester was prepared.
下記の表１に示した種々の酵素を、それぞれ秤取り（秤取量は下記の表２参照）、これにバッファー水溶液５ｍｌと、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−イソプロポキシプロパン酸エチルエステルのＭＴＢＥ溶液０．５ｍｌを加えた。次に、２５℃で２１時間攪拌後、ＭＴＢＥ１０ｍｌ及び５％リン酸水溶液１ｍｌを加えて混合した。分液後に得た油層を、高速液体クロマトグラフ（ＨＰＬＣ）［カラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｃｋ ＡＤ−Ｈ，４．６ｍｍφ×２５ｃｍ（ダイセル社製）］にて分析して、光学活性な３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−イソプロポキシプロパン酸への転化率と不斉加水分解カルボン酸及び残存エステルの鏡像体過剰率とを求めた。結果を表２に示す。 Each of the various enzymes shown in Table 1 below was weighed (see Table 2 below for the weighed amount), and 5 ml of an aqueous buffer solution and ethyl 3- (3-hydroxyphenyl) -2-isopropoxypropanoate were added thereto. 0.5 ml of an ester MTBE solution was added. Next, after stirring at 25 ° C. for 21 hours, 10 ml of MTBE and 1 ml of 5% phosphoric acid aqueous solution were added and mixed. The oil layer obtained after the separation was analyzed by high performance liquid chromatograph (HPLC) [column: Chiralpack AD-H, 4.6 mmφ × 25 cm (manufactured by Daicel)], and optically active 3- (3-hydroxyphenyl). ) -2-Isopropoxypropanoic acid conversion and enantiomeric excess of asymmetrically hydrolyzed carboxylic acid and residual ester were determined. The results are shown in Table 2.
＃・・特開平５−５６７８７号公報記載の方法に準じて作製した。 #. Prepared according to the method described in JP-A-5-56787.
実施例７
（Ｓ）−３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−イソプロポキシプロパン酸及び（Ｒ）−３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−イソプロポキシプロパン酸エチルエステルの製造例
Example 7
Production examples of (S) -3- (3-hydroxyphenyl) -2-isopropoxypropanoic acid and (R) -3- (3-hydroxyphenyl) -2-isopropoxypropanoic acid ethyl ester
３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−イソプロポキシプロパン酸エチルエステル４．００ｇ（０．０１５９ｍｏｌ）とＭＴＢＥ２９ｇより成る溶液を調製した。
リン酸水素２ナトリウム０．８４ｇ、リン酸２水素ナトリウム０．４８ｇを水９６ｇに溶解させ、プロテアーゼ Ｂ アマノ０．０８ｇ、及び３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−イソプロポキシプロパン酸エチルエステルのＭＴＢＥ溶液を加えた。これを２５℃で５時間、さらに４０℃で２０時間攪拌後、ＭＴＢＥで２回洗浄抽出して残存エステルをＭＴＢＥ層に分離し、水層に、酢酸エチル、１０％塩酸、ラジオライトを加えて不斉加水分解カルボン酸を油層に抽出し、濾過後、分液して油層を得た。水層を酢酸エチルでさらに抽出し、混合した油層を水で洗浄分液した。この油層を減圧下に濃縮して溶媒を留去した。淡黄色油状物の濃縮残分（１．９８ｇ）の含量を定量したところ、８５．０％であった（収率４７％）。また、ＨＰＬＣ［カラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｃｋ ＡＤ−Ｈ，４．６ｍｍφ×２５ｃｍ（ダイセル社製）］にて鏡像体過剰率を分析したところ、＞９９％ｅｅ（Ｓ）であった。
ＭＴＢＥ層中の残存エステル含量を定量したところ、収率は４２％であった。また、ＨＰＬＣ［カラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｃｋ ＡＤ−Ｈ，４．６ｍｍφ×２５ｃｍ（ダイセル社製）］にて鏡像体過剰率を分析したところ、９４％ｅｅ（Ｒ）であった。
A solution consisting of 4.00 g (0.0159 mol) of 3- (3-hydroxyphenyl) -2-isopropoxypropanoic acid ethyl ester and 29 g of MTBE was prepared.
Dissolve 0.84 g of disodium hydrogen phosphate and 0.48 g of sodium dihydrogen phosphate in 96 g of water, 0.08 g of protease B amano, and 3- (3-hydroxyphenyl) -2-isopropoxypropanoic acid ethyl ester MTBE solution was added. This was stirred at 25 ° C. for 5 hours and further at 40 ° C. for 20 hours, washed and extracted twice with MTBE to separate the remaining ester into the MTBE layer, and ethyl acetate, 10% hydrochloric acid and radiolite were added to the aqueous layer. Asymmetrically hydrolyzed carboxylic acid was extracted into the oil layer, filtered and then separated to obtain an oil layer. The aqueous layer was further extracted with ethyl acetate, and the mixed oil layer was washed and separated with water. The oil layer was concentrated under reduced pressure to remove the solvent. When the content of the concentrated residue (1.98 g) of the pale yellow oil was quantified, it was 85.0% (yield 47%). Further, when the enantiomer excess was analyzed by HPLC [column: Chiralpack AD-H, 4.6 mmφ × 25 cm (manufactured by Daicel)], it was> 99% ee (S).
When the residual ester content in the MTBE layer was quantified, the yield was 42%. Further, when the enantiomer excess was analyzed by HPLC [column: Chiralpack AD-H, 4.6 mmφ × 25 cm (manufactured by Daicel)], it was 94% ee (R).
比較例１〜５
別の酵素を用いた比較実験
Comparative Examples 1-5
Comparative experiments using different enzymes
リン酸水素２ナトリウム１．７０ｇ、リン酸２水素ナトリウム０．９６ｇを水２００ｇに溶解させ、バッファー水溶液を調製した。別途、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−イソプロポキシプロパン酸エチルエステル１０．０９ｇを含むＭＴＢＥ溶液１００ｍｌを調製した。 1.70 g of disodium hydrogen phosphate and 0.96 g of sodium dihydrogen phosphate were dissolved in 200 g of water to prepare an aqueous buffer solution. Separately, 100 ml of MTBE solution containing 10.09 g of 3- (3-hydroxyphenyl) -2-isopropoxypropanoic acid ethyl ester was prepared.
下記の表３に示した種々の酵素を、それぞれ秤取り（秤取量は下記の表４参照）、これにバッファー水溶液５ｍｌと、３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−イソプロポキシプロパン酸エチルエステルのＭＴＢＥ溶液０．５ｍｌを加えた。次に、２５℃で２１時間攪拌後、ＭＴＢＥ１０ｍｌ及び５％リン酸水溶液１ｍｌを加えて混合した。分液後に得た油層を、高速液体クロマトグラフ（ＨＰＬＣ）［カラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｃｋ ＡＤ−Ｈ，４．６ｍｍφ×２５ｃｍ（ダイセル社製）］にて分析して、光学活性な３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−イソプロポキシプロパン酸への転化率と鏡像体過剰率とを求めた。結果を表４に示す。 Each of the various enzymes shown in Table 3 below was weighed (see Table 4 below for the amount weighed), to which 5 ml of an aqueous buffer solution and ethyl 3- (3-hydroxyphenyl) -2-isopropoxypropanoate 0.5 ml of an ester MTBE solution was added. Next, after stirring at 25 ° C. for 21 hours, 10 ml of MTBE and 1 ml of 5% phosphoric acid aqueous solution were added and mixed. The oil layer obtained after the separation was analyzed by high performance liquid chromatograph (HPLC) [column: Chiralpack AD-H, 4.6 mmφ × 25 cm (manufactured by Daicel)], and optically active 3- (3-hydroxyphenyl). ) -2-Isopropoxypropanoic acid conversion and enantiomeric excess were determined. The results are shown in Table 4.
本発明の光学活性な３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−アルコキシプロパン酸及び光学活性な３−（３−ヒドロキシフェニル）−２−アルコキシプロパン酸エステルは、糖尿病治療薬の合成用中間体化合物等として有用である（例えば、ＷＯ ０２／１００８１２号公報を参照）。
The optically active 3- (3-hydroxyphenyl) -2-alkoxypropanoic acid and the optically active 3- (3-hydroxyphenyl) -2-alkoxypropanoic acid ester of the present invention are intermediate compounds for the synthesis of antidiabetic agents. Etc. (see, for example, WO 02/100812).
Claims (18)
［不斉加水分解酵素］
Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ属、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属、Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ属及びＡｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ属からなる群より選ばれる微生物を起源とする加水分解酵素 A method for producing an optically active 3- (3-hydroxyphenyl) -2-alkoxypropanoic acid represented by the following formula (2), which comprises 3- (3-hydroxyphenyl) -2 represented by the following formula (1) -In the enantiomeric mixture of alkoxypropanoic acid ester, the following asymmetric hydrolase having the ability to preferentially hydrolyze the ester group of one of the enantiomers, or culture of a microorganism having the ability to produce the enzyme A process for producing optically active 3- (3-hydroxyphenyl) -2-alkoxypropanoic acid, which comprises asymmetric hydrolysis using a product or a treated product thereof.
[Asymmetric hydrolase]
Hydrolytic enzyme originating from a microorganism selected from the group consisting of the genus Penicillium, Pseudomonas, Rhizomucor and Arthrobacter
［不斉加水分解酵素］
Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ属、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属、Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ属及びＡｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ属からなる群より選ばれる微生物を起源とする加水分解酵素 A method for producing an optically active 3- (3-hydroxyphenyl) -2-alkoxypropanoic acid ester represented by the following formula (3), wherein 3- (3- Of the enantiomeric mixture of hydroxyphenyl) -2-alkoxypropanoic acid ester, the following asymmetric hydrolase having the ability to preferentially hydrolyze the ester group of one enantiomer, or the ability to produce the enzyme An asymmetric hydrolysis reaction product obtained by asymmetric hydrolysis using a culture of a microorganism having a microorganism or a treated product thereof, and then converting the unreacted ester represented by the formula (3) in the asymmetric hydrolysis reaction liquid to an asymmetric hydrolysis reaction product After separation from the active 3- (3-hydroxyphenyl) -2-alkoxypropanoic acid, the unreacted residual ester is isolated. ) -2- alkoxy manufacturing method of propanoic acid ester.
[Asymmetric hydrolase]
Hydrolytic enzyme originating from a microorganism selected from the group consisting of the genus Penicillium, Pseudomonas, Rhizomucor and Arthrobacter
［不斉加水分解酵素］
Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ属、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属、Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ属及びＡｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ属からなる群より選ばれる微生物を起源とする加水分解酵素 A method for producing an optically active 3- (3-hydroxyphenyl) -2-alkoxypropanoic acid represented by the formula (2) according to claim 1, wherein the 3- (3-hydroxyphenyl) propanoic acid represented by the formula (1) according to claim 1 is used. The following asymmetric hydrolase having the ability to preferentially hydrolyze the ester group of one enantiomer in the enantiomeric mixture of (3-hydroxyphenyl) -2-alkoxypropanoic acid ester or the ability to produce the enzyme Asymmetric hydrolysis reaction of unreacted ester represented by formula (3) according to claim 2 in an asymmetric hydrolysis reaction solution after asymmetric hydrolysis using a culture of microorganisms having the above or a treated product thereof The product is separated from the product, optically active 3- (3-hydroxyphenyl) -2-alkoxypropanoic acid, and then the unreacted residual ester is hydrolyzed. (3-hydroxyphenyl) -2-alkoxy manufacturing method of propanoic acid.
[Asymmetric hydrolase]
Hydrolytic enzyme originating from a microorganism selected from the group consisting of the genus Penicillium, Pseudomonas, Rhizomucor and Arthrobacter
The enzyme according to any one of claims 3, 6 and 9, wherein the enzyme is a mutant enzyme in which one or more specific amino acids in the enzyme according to claim 12 or 15 are deleted, added or substituted. A method for producing optically active 3- (3-hydroxyphenyl) -2-alkoxypropanoic acid.
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2006
- 2006-12-15 WO PCT/JP2006/325035 patent/WO2007072753A1/en active Application Filing
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