JP2007055923A

JP2007055923A - ミトコンドリア機能障害抑制剤

Info

Publication number: JP2007055923A
Application number: JP2005241950A
Authority: JP
Inventors: Takaaki Yamada; 貴亮山田; Hatsuo Kojima; 肇夫小島
Original assignee: Nippon Menard Cosmetic Co Ltd
Current assignee: Nippon Menard Cosmetic Co Ltd
Priority date: 2005-08-24
Filing date: 2005-08-24
Publication date: 2007-03-08

Abstract

【課題】細胞におけるＡＴＰ産生を促進し、老化の予防、症状の改善に有効なミトコンドリア機能障害抑制剤および／または老化防止用組成物を提供する。
【解決手段】トコフェリルリン酸エステル誘導体および／またはその塩（リン酸エステル基のアルコール部分として、アルキル基、アリール基、アシル基、酢酸エチレンから選ばれる基を有する）を含有することを特徴とするミトコンドリア障害抑制剤に関する。トコフェリルリン酸エステル誘導体および／またはその塩は、ミトコンドリア障害を抑制し、シワ、タルミの形成等をはじめとする細胞や生体組織の老化の改善に有用である。
【選択図】なし

Description

本発明は、細胞内のミトコンドリア機能障害抑制剤に関し、これを有効成分として配合することによりミトコンドリアの機能低下を抑制し、細胞機能の改善に効果を発揮する老化防止用組成物に関する。

ミトコンドリアは、細胞内のエネルギー産生の中心となるオルガネラであり、電子伝達系において、酸化的リン酸化反応により酸素を消費してＡＴＰを産生する。この反応過程で生じたプロトンがミトコンドリア外膜と内膜の間（膜間間隙）に汲み出され、電位差（ミトコンドリア膜電位）が生じる。次いで、膜間間隙のプロトンがＡＴＰ合成酵素により利用され、ＡＴＰが産生される。
老化した細胞や紫外線によるダメージを受けた細胞では、活性酸素や、これによる脂質過酸化産物が生成する（非特許文献１、２）。このような細胞ではミトコンドリア膜電位の低下や電子伝達系の異常、ＡＴＰ産生の低下が認められる。したがって、ミトコンドリアは老化や光老化と密接な関わりがあると考えられている。

ＭａｓａｋｉＨ, ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｓｃｉ．，１９９７，１４，２０７−２１６Ｄｊａｖａｈｅｒｉ−ＭｅｒｇｎｙＭ，ｅｔａｌ．，ＦｒｅｅＲａｄｉｃ．Ｒｅｓ．，２００１，３４，５８３−５９４

老化した細胞や紫外線などのストレスによりダメージを受けた細胞において、ミトコンドリアの機能障害を抑制することにより、細胞の機能低下を防ぐことが出来ると考えられる。これまで、ミトコンドリア機能障害を抑制するペプチドや、Ｎ−ａｃｅｔｙｌＬ−ｃｙｓｔｅｉｎｅおよびグルタチオンなどの抗酸化物質が報告されているが、より効果の高い物質が期待されている（非特許文献３〜５）。

ＷＡＮＧＣｈｕｎ−Ｂｏ，ｅｔａｌ．，Ａｃｔａ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｉｎ．，２００３，２４，６９２−６９６ＰｅｒｉａｎａｙａｇａｍＭＣ，ｅｔａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｔ．，２００５，３５，１４８−１５３ＺｈａｎｇＳ，ｅｔａｌ．，Ｔｏｘｉｃｏｌ．ＩｎＶｉｔｒｏ．，２００４，１８，７１−７７

本発明においては、ミトコンドリア機能障害を抑制することにより、細胞機能の改善に効果を発揮する老化防止組成物を提供することを目的とした。

このような事情により、本発明者らは鋭意研究を重ねた結果、化学式（１）で表される化合物および/またはそれらの塩が安定で、優れたミトコンドリア機能障害抑制効果を持つことを見出し、さらに化学式（１）で表される化合物および/またはそれらの塩を含有する組成物が優れた老化防止効果を有することを見出し、本発明を完成するに至った。

すなわち、本発明は、化学式（１）で表される化合物および/またはそれらの塩を含有することを特徴とするミトコンドリア機能障害抑制剤である。Ｒ１、Ｒ２はそれぞれ水素、アルキル基、アリール基、アシル基、酸化エチレンから選ばれる。

本発明の化学式（１）で表される化合物および／またはそれらの塩は、天然由来のものを利用することができるほか、市販されているトコフェロールから常法により合成でき、下記の文献も参考にできる。

特公昭６１−２０５８３特公平３−３２５５８

また、本発明においては化学式（１）の塩も使用可能であり、塩の種類は限定されないが、一般的にはナトリウム、カリウム等のアルカリ金属塩、カルシウム、マグネシウム等のアルカリ土類金属塩が用いられる。とくにナトリウム塩は市販されており、利用ができる。

本発明のミトコンドリア機能障害抑制剤は、医薬品、医薬部外品、化粧品または食品いずれにも用いることができ、その剤型としては、例えば、散剤、丸剤、錠剤、注射剤、座剤、乳剤、カプセル剤、顆粒剤、液剤（チンキ剤、流エキス剤、酒精剤、懸濁剤、リモナーデ剤等を含む）、化粧水、クリーム、乳液、ゲル剤、エアゾール剤、パック、洗浄剤、浴用剤、ファンデーション、打粉、口紅、軟膏、パップ剤、ペースト剤、プラスター剤、エッセンス、錠菓、飲料等が挙げられる。また、本発明の効果を損なわない範囲内で、通常の化粧品、医薬部外品、医薬品、食品等に用いられる各種成分、例えば油性成分、乳化剤、保湿剤、増粘剤、薬効成分、防腐剤、顔料、粉体、ｐＨ調整剤、紫外線吸収剤、抗酸化剤、香料等を適宜配合することができる。

油性成分としては、例えば流動パラフィン、ワセリン、マイクロクリスタリンワックス、スクワラン、ホホバ油、ミツロウ、カルナウバロウ、ラノリン、オリーブ油、ヤシ油、高級アルコール、脂肪酸、高級アルコールと脂肪酸のエステル、シリコーン油等が挙げられる。乳化剤としては、例えばポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油等の非イオン界面活性剤、ステアロイル乳酸ナトリウム等のアニオン界面活性剤、大豆リン脂質等の両性界面活性剤、塩化アルキルトリメチルアンモニウム等のカチオン界面活性剤が挙げられる。保湿剤としては、例えばグリセリン、ソルビトール、キシリトール、マルチトール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、１，３−ブチレングリコールなどが挙げられる。増粘剤としては、例えばカルボキシビニルポリマー、キサンタンガム、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ゼラチン、ベントナイト等の粘土鉱物等が挙げられる。薬効成分としては、例えば各種ビタミンおよびその誘導体、アラントイン、グリチルリチン酸およびその誘導体、各種動植物抽出物等が挙げられる。

本発明のミトコンドリア機能障害抑制剤中に配合される化合物の量は、剤型や期待する効果の程度により異なるが、通常０．０００１〜５０重量％、好ましくは０．００１〜５重量％程度配合するのがよい。０．０００１重量％未満では十分な効果は望みにくい場合があり、５０重量％を超えて配合した場合、効果の増強は認められにくく不経済である。

本発明の新規な化学式（１）で表される化合物および／またはそれらの塩は、優れたミトコンドリア障害抑制効果を有し、細胞および生体組織の老化を抑制する。

次に本発明による効果を具体的な実施例を挙げ説明する。これらの実施例は効果を具体的に説明するもので、発明の範囲を限定するものではない。実施例中の配合量は重量％である。

本発明の化学式（１）で表される化合物および/またはそれらの塩は、処方例として下記の製剤化を行うことができる。

処方例１クリーム配合量
１．ｄｌ−α−トコフェリルリン酸ナトリウム２．０重量％
２．スクワラン５．５
３．オリーブ油３．０
４．ステアリン酸２．０
５．ミツロウ２．０
６．ミリスチン酸オクチルドデシル３．５
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）３．０
８．ベヘニルアルコール１．５
９．モノステアリン酸グリセリン２．５
１０．香料０．１
１１．１，３−ブチレングリコール８．５
１２．パラオキシ安息香酸エチル０．０５
１３．パラオキシ安息香酸メチル０．２
１４．精製水にて全量を１００とする
[製造方法]成分２〜９を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１および１１〜１４を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分１０を加え、さらに３０℃まで冷却して製品とする。

比較例１従来のクリーム
処方例１において、ｄｌ−α−トコフェリルリン酸ナトリウムを精製水に置き換えたものを従来のクリームとした。

処方例２化粧水配合量
１．ｄ−α−トコフェリルリン酸ナトリウム０．０５重量％
２．ｄ−α−トコフェリルリン酸ジナトリウム０．０５
３．１，３−ブチレングリコール８．０
４．グリセリン２．０
５．キサンタンガム０．０２
６．クエン酸０．０１
７．クエン酸ナトリウム０．１
８．エタノール５．０
９．パラオキシ安息香酸メチル０．１
１０．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（４０Ｅ．Ｏ．）０．１
１１．香料適量
１２．精製水にて全量を１００とする
[製造方法]成分１〜７および１２１と、成分８〜１１をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合し濾過して製品とする。

処方例３乳液配合量
１．ｄｌ−α−トコフェリルリン酸ジナトリウム０．５重量％
２．スクワラン５．０
３．オリーブ油５．０
４．ホホバ油５．０
５．セタノール１．５
６．モノステアリン酸グリセリン２．０
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）３．０
８．ポリオキシエチレンソルビタンモノオレート（２０Ｅ．Ｏ．）２．０
９．香料０．１
１０．プロピレングリコール１．０
１１．グリセリン２．０
１２．パラオキシ安息香酸メチル０．２
１３．精製水にて全量を１００とする
[製造方法]成分２〜８を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１および１０〜１３を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分９を加え、さらに３０℃まで冷却して製品とする。

処方例４ゲル剤配合量
１．ｄ−α−トコフェリルリン酸カリウム０．１重量％
２．エタノール５．０
３．パラオキシ安息香酸メチル０．１
４．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油０．１
５．香料適量
６．１，３−ブチレングリコール５．０
７．グリセリン５．０
８．キサンタンガム０．１
９．カルボキシビニルポリマー０．２
１０．水酸化カリウム０．２
１１．精製水にて全量を１００とする
[製造方法]成分２〜５と、成分１および６〜１１をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合して製品とする。

処方例５軟膏配合量
１．ｄｌ−α−トコフェリルリン酸ナトリウム５．０重量％
２．ポリオキシエチレンセチルエーテル（３０Ｅ．Ｏ．）２．０
３．モノステアリン酸グリセリン１０．０
４．流動パラフィン５．０
５．セタノール６．０
６．パラオキシ安息香酸メチル０．１
７．プロピレングリコール１０．０
８．精製水にて全量を１００とする
[製造方法]成分２〜５を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１および６〜８を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化し、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。

処方例６パック配合量
１．ｄｌ−α−トコフェリルリン酸カリウム０．１重量％
２．ポリビニルアルコール１２．０
３．エタノール５．０
４．１，３−ブチレングリコール８．０
５．パラオキシ安息香酸メチル０．２
６．パラオキシエチレン硬化ヒマシ油（２０Ｅ．Ｏ．）０．５
７．クエン酸０．１
８．クエン酸ナトリウム０．３
９．香料適量
１０．精製水にて全量を１００とする
[製造方法]成分１〜１０を均一に溶解し製品とする。

処方例７ファンデーション配合量
１．ｄ−α−トコフェリルリン酸ジナトリウム０．０５重量％
２．ステアリン酸２．４
３．ポリオキシエチレンソルビタンモノオレート（２０Ｅ．Ｏ．）１．０
４．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）２．０
５．セタノール１．０
６．液状ラノリン２．０
７．流動パラフィン３．０
８．ミリスチン酸イソプロピル６．５
９．パラオキシ安息香酸ブチル０．１
１０．カルボキシメチルセルロースナトリウム０．１
１１．ベントナイト０．５
１２．プロピレングリコール４．０
１３．トリエタノールアミン１．１
１４．パラオキシ安息香酸メチル０．２
１５．二酸化チタン８．０
１６．タルク４．０
１７．ベンガラ１．０
１８．黄酸化鉄２．０
１９．香料適量
２０．精製水にて全量を１００とする
[製造方法]成分２〜９を加熱溶解し、８０℃に保ち油相とする。成分２０に成分１０をよく膨潤させ、続いて、成分１および１１〜１４を加えて均一に混合する。これに粉砕機で粉砕混合した成分１５〜１８を加え、冷却し、４５℃で成分１９を加え、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。

処方例８浴用剤配合量
１．ｄｌ−α−トコフェリルリン酸ナトリウム１．０重量％
２．炭酸水素ナトリウム５０．０
３．黄色２０２号適量
４．香料適量
５．無水硫酸ナトリウムにて全量を１００とする
[製造方法]成分１〜５を均一に混合し製品とする。

処方例９飲料配合量
１．ｄ−α−トコフェリルリン酸ジナトリウム１．０重量％
２．ステビア０．０５
３．リンゴ酸５．０
４．香料０．１
５．精製水９２．８５
［製造方法］成分１〜５を混合溶解し、製品とする。

処方例１０錠剤配合量
１．ｄｌ−α−トコフェリルリン酸カリウム１．０重量％
２．乾燥コーンスターチ２５．０
３．カルボキシメチルセルロースカルシウム２０．０
４．微結晶セルロース４０．０
５．ポリビニルピロリドン７．０
６．タルク３．０
［製造方法］成分１〜５を混合し、次いで成分６の水溶液を結合剤として加えて顆粒成形する。成形した顆粒に成分６を加えて打錠する。１錠０．５２ｇとする。

次に、本発明の効果を詳細に説明するため、実験例を挙げる。

実験例１ミトコンドリア障害抑制効果
ヒト皮膚由来線維芽細胞ＮＢ１−ＲＧＢ細胞におけるミトコンドリア障害抑制効果を、ミトコンドリア膜電位を指標に下記の条件にて測定した。

コンフルエントな状態のＮＢ１−ＲＧＢ細胞に１０μＭの試料を添加した０．５％ウシ胎児血清を含むＤＭＥＭ培地にて１時間培養した後、培地をＰＢＳに置換し、Ａ領域の紫外線（ＵＶＡ）を照射１０Ｊ／ｃｍ^２、あるいは１００μＭとなるように過酸化水素を添加したＰＢＳを培地に置換し、さらに６時間培養した。蛍光物質５，５‘，６，６’−ｔｅｔｒａｃｈｌｏｒｏ−１，１‘，３，３’−ｔｅｔｒａｅｔｈｙｌｂｅｎｚｉｍｉｄａｚｏｉｌｃａｒｂｏｃｙａｎｉｎｅｉｏｄｉｄｅ（ＪＣ−１）は、膜電位が高いほどミトコンドリアに多く取り込まれ、赤色の蛍光を発し、膜電位が低いとミトコンドリアに取り込まれず、緑色の蛍光を発する。このＪＣ−１を培地に添加し、３０分間培養した後、培地を捨て、細胞をＰＢＳで洗浄し、蛍光顕微鏡により観察した。ランダムに細胞を２０個選択し、画像解析ソフト（ＮＩＨｉｍａｇｅ）を用いて赤色／緑色の蛍光強度の値（相対蛍光強度）を算出した。

これらの試験結果を表１に示した。その結果、化学式（１）で表される化合物および／またはそれらの塩には、ＵＶＡ照射や過酸化水素といったストレスによるミトコンドリア膜電位の低下に対する抑制効果が認められた。また、この効果は代表的な抗酸化剤であるｄｌ−α−トコフェロールやアスコルビン酸に比べて顕著に優れていた。

実験例２抗老化作用の評価
３０週齢の老化促進マウス（ＳＡＭＰ１０）を雌雄５匹ずつ、対照群、ｄｌ−α−トコフェリルリン酸ナトリウム投与群を設けた。対照群には生理食塩水を、ｄｌ−α−トコフェリルリン酸ナトリウム投与群は、ｄｌ−α−トコフェリルリン酸ナトリウムを０．１％となるように生理食塩水に溶解したものを、シェーバーで剃毛したマウス背部の皮内に投与した。投与１週間後に、刈毛したマウスの背部皮膚を、母指と人差指で挟んでつまみ上げ、直ちに離し、皮膚のシワが復元する秒数を測定した。その結果、表２に示すように、対照群に比べｄｌ−α−トコフェリルリン酸ナトリウム投与群では、復元時間が有意に短くなった。

実験例３使用試験
処方例１のクリームおよび比較例１のクリームを用いて、各々女性３０人（２５〜４５才）を対象に２ヶ月間の使用試験を行った。使用後、皮膚の乾燥状態、小じわ、くすみ、肌のキメの乱れの改善効果についてのアンケート調査を行って、老化防止効果を判定した。アンケートの評価基準は、有効なもの「優」、やや有効なものを「良」、わずかに有効なものを「可」、無効なものを「不可」として評価した。

これらの結果を表３に示した。本発明のミトコンドリア機能障害抑制剤を含有した組成物は優れた皮膚の老化防止効果を示した。なお、試験期間中皮膚トラブルは一人もなく、安全性においても問題なかった。

処方例２〜１０について同様な使用試験を行ったところ、いずれも安全で優れた皮膚の老化防止効果を示した。

本発明の化学式（１）で表される化合物および／またはその塩は、ミトコンドリア機能障害を抑制し、シワ、タルミの形成等をはじめとする細胞や生体組織の老化を予防または改善する医薬品、医薬部外品、化粧品または食品に配合することが可能である。

Claims

化学式（１）で表される化合物および／またはこれらの塩を配合することを特徴とするミトコンドリア機能障害抑制剤。
Ｒ１および／またはＲ２がナトリウムであることを特徴とする請求項１記載の皮膚細胞におけるミトコンドリア機能障害抑制剤。
請求項１または２記載のミトコンドリア機能障害抑制剤を含有することを特徴とする老化防止用組成物。