JP2006511532A - 三官能性試薬によって連結された、エフェクター機能および親和性機能を有する抗リンパ腫ターゲティング剤 - Google Patents

三官能性試薬によって連結された、エフェクター機能および親和性機能を有する抗リンパ腫ターゲティング剤 Download PDF

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Abstract

抗リンパ腫抗体とコンジュゲートした試薬を含む薬剤が開示され、同様に前記薬剤を含むキット、前記薬剤の使用、およびリンパ腫の処置のための方法が開示される。該試薬はエフェクター、例えば抗腫瘍剤または診断マーカー、および該剤の体外クリアランスを可能にする親和性リガンドを含んでよい。この３つの成分は三官能性のリンカーによって結合される。

Description

発明の背景
発明の分野
本発明は、抗リンパ腫抗体とコンジュゲートした試薬を含む薬剤、リンパ腫を処置または診断するためのキット、前記薬剤の使用、およびリンパ腫の処置のための方法に関する。
背景技術
リンパ腫はリンパ系への悪性の細胞浸潤である。リンパ系は、首、腋窩、および鼠径部に位置するリンパ節を含む。これらのリンパ節は、導管のネットワークによって互いと、ならびに脾臓、胸腺ならびに扁桃腺、胃、および小腸の部分と接続しているリンパ系の唯一の部分である。この導管はリンパ球を含むリンパ液と呼ばれる液体を運搬する。ひとたびリンパ系の一部に悪性腫瘍が生じると、検知されるまでに残りのリンパ系全体に広がることが多い。
それぞれの癌の種類について病期を定義する国際的に合意された判断基準がある。リンパ腫について、これは何個のリンパ節が罹患しているかを調査することをさす。また、これはリンパ腫がリンパ系の外部の他の器官へ広がっているかどうかを見出すこともさす。
Ｉ期：１箇所のリンパ節またはリンパ系外部の単一器官もしくは部位に限定される癌
ＩＩ期：横隔膜の同じ側にある２箇所以上のリンパ節の癌
ＩＩＩ期：横隔膜の両側にあるがリンパ系外部にはない癌
ＩＶ期：リンパ系外部に拡散している癌
リンパ腫は細胞の種類に従って多くのサブグループに分けられる。一般に、リンパ腫は非ホジキン型（non-Hodgkin's）とホジキン型に分類される。近年では、ホジキンリンパ腫のほうが非ホジキンリンパ腫よりも治癒しやすい。非ホジキンリンパ腫は、Ｂ細胞とＴ細胞双方の起源に由来し、総ての症例の９０％はＢ細胞に由来し、残りの１０％はＴ細胞に由来する。
あらゆる種類のリンパ腫の処置は、疾病の種類、病期および悪性度によって決まる。ステージおよび悪性度について、以下に概略を説明する。
病期：
Ｉ：１つの癌部位、骨髄を含まない
ＩＩ：２つの癌部位で、双方とも横隔膜の上側または下側のいずれかにあり、骨髄は含まない
ＩＩＩ：横隔膜の上下の複数部位で、骨髄は含まない
ＩＶ：骨髄が罹患しているか癌細胞がリンパ系外部に拡散している
悪性度：
高悪性度：通常Ｂ細胞およびＴ細胞種に見られる
中悪性度：通常Ｂ細胞およびＴ細胞種に見られる
低悪性度：主にＢ細胞種に見られる
リンパ腫は通常化学療法、放射線、外科手術および／または骨髄移植を併用して処置される。治癒率はリンパ腫の種類および疾病の進行によって著しく変動する。
リンパ組織は身体の多くの部分に見られるため、非ホジキンリンパ腫は身体のほとんどの場所に発生し得る。この癌は、肝臓、骨髄、脾臓および鼻をはじめとする身体のほとんどの器官または組織に拡散し得る。
組織学に基づいて、非ホジキンリンパ腫は２つの群に分類される。進行が遅く症状の少ない緩徐進行性リンパ腫と、急速に進行する急速進行性リンパ腫である。
リンパ腫には、濾胞性核に切れ込みを有する小細胞型リンパ腫、成人びまん性混合細胞型リンパ腫、濾胞性混合細胞型リンパ腫、成人びまん性大細胞型リンパ腫、濾胞性大細胞型リンパ腫、成人免疫芽球型大細胞型リンパ腫、成人びまん性核に切れ込みを有する小細胞型リンパ腫、成人リンパ芽球性リンパ腫、***リンパ球性（辺縁体）核に切れ込みを有する小細胞型リンパ腫が挙げられる。
その他の種類の緩徐進行性非ホジキンリンパ腫／白血病としては、リンパ形質細胞リンパ腫、単球様Ｂ細胞性リンパ腫、粘膜関連リンパ組織型リンパ腫（ＭＡＬＴ）、脾辺縁体リンパ腫、毛様細胞白血病、および皮膚Ｔ細胞性リンパ腫（菌状息肉症／セザリー症候群）がある。
その他の種類の急速進行性非ホジキンリンパ腫としては、未分化大細胞型リンパ腫、成人Ｔ細胞性リンパ腫／白血病、マントル細胞リンパ腫、血管内リンパ腫症、血管免疫芽球性Ｔ細胞性リンパ腫、血管中心性リンパ腫、腸管症型Ｔ細胞リンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、末梢Ｔ細胞リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫、移植後リンパ増殖性疾患、真性組織球性リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、および原発性滲出性リンパ腫がある。急速進行性リンパ腫はまた、ＨＩＶ陽性の患者に高い頻度で見出される（ＡＩＤＳ関連リンパ腫）。
再発性成人非ホジキンリンパ腫はリンパ系または身体のその他の部分に再発する可能性がある。
緩徐進行性リンパ腫は急速進行性リンパ腫として再発する可能性がある。急速進行性リンパ腫は緩徐進行性リンパ腫として再発する可能性がある。
非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）は癌の罹患率および死亡率の主な原因の第５位である(Wingo P, Tong T, Bolden S. Cancer statistics, 1995. CA Cancer J. clin 1995; 45, 8-30 & Parker SL, Tong T, Bolden S., Wingo PA. Cancer statistics, 1996. CA Cancer J. Clin 1996; 46:5-27)。過去２０年で米国におけるこうしたリンパ腫の有病率は急速に増加している。５年前に新規診断は５２，０００件を超え、２３．０００の死亡数の原因がＮＨＬであり、発生率は毎年７％の割合で増加している(Parker SL, Tong T, Bolden S., Wingo PA. Cancer statistics, 1996. CA Cancer J. Clin 1996; 46: 5-27)。これは、過去５０年でＮＨＬの新規症例が人口調整をして１５０％増加したことを意味する。
圧倒的大多数の患者（約８０％）をＢ細胞起源のＮＨＬ患者が占めている(Harris N. L., Jaffe E. S., Stein H. et. al., Lymphoma classification proposal: clarification [letter]. Blood 1995; 85: 857-860)。進行期の中悪性度および高悪性度のリンパ腫のための、種々の併用化学療法の使用にもかかわらず、約半数の処置患者が完全寛解しないか、または寛解後最終的に再発している。この状況はほぼ２０年間目立って改善されていない(Gordon LI, Harrington D, Andersen J, et.al. N. Engl. J. Med. 1992; 327:1342-9 & Fisher RI, Gaynor ER, Dahlberg S, et.al. N. Engl. J. Med. 1993; 328: 1002-6)。
標準用量救援療法での処置は稀に永続的寛解という結果となるが、重大な毒性のある場合が多い。骨髄移植と共に高用量化学療法を用いることが有望であることが示されているが、総ての患者がこの種の処置から長期間の恩恵を導き出せるとは限らない(Armitage JO. Blood 1989; 73: 1749-58)。進行型の低悪性度リンパ腫患者のための治療処置はなお確立が待たれている(DeVite VT Jr., Jaffe ES, Mauch P, Longo DL. Lymphocytic lymphomas. In: DeVita VT Jr., Hellman S., Rosenberg SA. Eds. Cancer: principles and practice of oncology. 3rd ed. Vol. 2. Philadelphia: J. B. Lippincott, 1989;1741-98)。アントラサイクリンを基盤とした化学療法での処置の結果は、中悪性度および高悪性度の非ホジキンリンパ腫患者の５０〜９０％が完全寛解、長期の無病生存率は３０〜６０％である。
残念ながら、従来型のアプローチで治癒できる低悪性度リンパ腫、または再発したいずれかの種類のリンパ腫の患者は少数である(Armitage JO. N. Engl. J. Med. 1993; 328: 1023-30)。骨髄移植をして高用量放射線化学療法を用いると、再発したリンパ腫患者の１０〜５０％を治癒できるが、４０〜８０％の患者は再び再発し、５〜２０％の患者は移植関連合併症で死亡している(Appelbaum FR, Sullivan KM, Buckner CD et. al. J. Clin. Oncol. 1987; 5:1340-7 & Freedman AS, Takvorian T, Anderson KC et. al. J. Clin. Oncol. 1990; 8:784-91)。大用量の放射線化学療法の使用は、罹患率および死亡率が許容されないので実施されていない(Bearman SI, Appelbaum FR, Bruchner CD. et.al. J.Clin.Oncol. 1988; 6:1562-8)。
薬剤の組織または器官特異的局在性は、それを有効に適用する際に極めて重要な要素である。特定の組織への局在性を欠くと、癌の処置など、所望の効果がある種の細胞を死滅させるということにある細胞傷害性薬を用いる処置において特に重要である。
宿主に害を与えずに腫瘍細胞に特異的な薬剤を用いる癌の処置は、長い間、腫瘍学の目標であった。モノクローナル抗体の開発が、腫瘍を標的にした治療がいつの日か癌の処置において役割を果たすであろうとの希望をもたらした。実際に、いくつかの部位で有望な結果が示されている。しかし、その処置法のほとんどが技術的に困難であることがたびたび証明されており、満足な効果は得られず、特定の悪性度の患者へ広く適用できない場合が多かった。
リンパ腫患者の処置は例外である。進行期または再発低悪性度非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）の患者は従来型のアプローチを用いて治療不可能であり、通常、疾病を軽減させ症状を緩和する必要に応じて強度を増してゆく併用化学療法で処置される。骨髄移植の後に放射線治療を併用する致死量を超える化学療法を利用する最近の試みは、約２０％の長期無病生存率という結果をあげている(F. Applebaum et al, J. Clin. Oncol. 5: 1340, 1987)。しかし、この方法で処置された患者の大部分がリンパ腫または処置による合併症で亡くなっている。従って、非ホジキンリンパ腫の処置に対する新規な戦略が必要とさていれる。このような戦略は、毒性の最小化とともに治療効果の最大化を目標とするべきである。
一つのアプローチは、腫瘍細胞へ薬物または放射性同位元素をターゲッティングする手段として腫瘍関連抗原を認識するモノクローナル抗体の使用を伴う。このアプローチは、ＮＨＬについて言えば、リンパ腫腫瘍細胞がそれらの細胞表面へのターゲッティングに利用できると思われる種々の腫瘍特異的抗原を提示するということで特に魅力的である(A. J. McMichael, Leukocyte Typing III, pp 302-363 and 432-469, Oxford University Press, Oxford, England, 1987)。このようなアプローチを利用する理論的根拠は、モノクローナル抗体がそれだけでin vivoで抗腫瘍効果を提示し得るという知見によってさらに支持される。現在まで、モノクローナル抗体を用いて処置されてきたあらゆる悪性腫瘍のうちで、リンパ腫が最も劇的な結果をもたらしてきた。モノクローナル抗イディオタイプ抗体で処置された患者に著しい腫瘍退行が報告されている(R.A Miller et, New Eng. J. Med. 306:517, 1982; T.C. Meeker et al, Blood 65:1349, 1985)。しかし、腫瘍応答の大部分は不完全であり、相対的に持続時間が短かった。抗イディオタイプ抗体を産生することの実際的な問題によって、このようなアプローチの活用は制限されている(T. Meeker et al, New. Eng. J. Med 312:1658, 1985)。
最近、悪性および正常ヒトＢ細胞の双方で抗原性部位を認識する多数のモノクローナル抗体が開発されている。このような汎Ｂ細胞抗体はリンパ腫の分類および個体発生の定義ならびに正常Ｂ細胞の生物学に有用である。改変されない抗体は総じて効果が限定されるため、最近は細胞傷害性薬とコンジュゲートした抗体の使用に注目が集まっている。考慮されうる細胞傷害性薬の中では、リンパ腫は放射線の影響に特に敏感であることから、放射性同位元素が特に魅力的である。さらに、このように放射性標識された抗体は、腫瘍を含む部位の診断用イメージングの点からかなりの有用性があると思われる。このような細胞傷害性抗リンパ腫抗体の大部分はＣＤ２０に対して作られている。
ＣＤ２０は、３５キロダルトンの抗原で、末梢血またはリンパ器官由来のＢ細胞の９０％を超える表面に見られるグリコシル化されていないリンタンパク質である。この抗原は、実質的には培養中で維持される全ての休止Ｂ細胞の表面に発現するが、Ａタンパク質またはエプスタイン−バーウイルスへの暴露による細胞の活性化の際にその集団の約３分の１が失われる。この結果は、ＣＤ２０がＢ細胞の最終分化中に失われることを意味すると解釈されている(L. M. Nadler, Lymphcyte typing II, vol 2 pp 3-37 and 65 Appendix, E. L. Renling et al eds Springer Verlag, 1986)。
ＣＤ１９などその他の多数の抗原もＢ系統の細胞の表面に発現する。しかし、ＣＤ２０とは対照的に、ＣＤ１９と結合する抗体は急速にインターナライズされる。これらの種類の細胞と結合するとされるその他の抗体は、ＣＤ２１抗原と結合するＢ２；ＣＤ２２抗原と結合するＢ３およびＣＤ１０抗原と結合するＪ５である。汎Ｂ細胞抗体ＭＢ−１も注目され、ＣＤ３７と結合することが示されている。
ＣＤ２０に対して作られた裸の抗体は効力を有することが示されている。登録されている裸の抗体の１つがリツキシマブ（rituximab）で、緩徐進行性リンパ腫、特に濾胞性リンパ腫の処置に効力を示すキメラマウス／ヒト抗ＣＤ２０抗体である。緩徐進行性リンパ腫患者に対する全体的な奏功率は５０％であり、完全寛解率は１０％である(McLaughlin P et al, J. Clin. Oncol. 16: 2825-2833, 1998.)。腫瘍増殖停止時間は１３ヶ月であると報告されている。リツキシマブはまた、奏功率は低いけれども急速進行性リンパ腫において客観的な寛解を生じる。それにもかかわらず実質的に単独の薬剤としてリツキシマブで処置した総ての患者が最終的に再発する。
全身への放射線治療は確立された処置形態である。播種性の甲状腺癌の処置での放射性ヨウ素の使用は治療の頼みの綱であることが多い。放射免疫療法（ＲＩＴ）は、放射性核種が抗体によって腫瘍細胞へターゲッティングされる、全身に対する放射線治療のもう１つの形態である。ＲＩＴは、抗体自体が抗腫瘍効果を発揮する可能性があるため、一部の例では放射線治療と免疫療法との併用様式である。ＲＩＴの使用はいまだ実験的であるが、いくつかの有望な研究が発表されている。Ｂ細胞リンパ腫の処置においていくつかのグループがＲＩＴ後の長期の寛解を報告している。ほとんどの研究者がＣＤ２０抗原に対する１３１Ｉまたは９０Ｙ標識されたマウス抗体を用いている(Kaminski, M. S. et al, J. Clin. Oncol., 14:1974 -1981, 1996, Knox, S. J et al, Clin. Cancer Res., 2: 457-470, 1996.)。
Ｂ細胞リンパ腫の処置のためのキメラ抗体および放射性標識された抗体の治療的適用は、ＥＰ０７５２２４８Ｂ１；ＥＰ６６９８３６Ｂ１および米国特許第５，８４３，４３９号；同第５，７７６，４５６号；同第５，７３６，１３７号にAnderson, D.R. et.al.により記載されている。Ｂ細胞特異的抗体の投与によるリンパ腫の処置のための方法は、Kaminski, M.S. et.al.米国特許第５，５９５，７２１号；同第６，０１５，５４２号；同第５，８４３，３９８号；同第６，０９０，３６５号に、またGoldenberg, D.M. et.al.によって米国特許第６，１８３，７４４ Ｂ１号に記載されている。本主題に関連するその他の特許および特許出願は、米国特許第６，３９９，０６１Ｂ１号、ＥＰ１００５８７０Ａ２、ＷＯ９８／４２３７８、ＷＯ９９／５７９８１、ＷＯ００／０９１６０、ＷＯ００／２７４２８、ＷＯ００／２７４３３、ＷＯ０１／３４１９４Ａ１、ＷＯ０１／１０４６２Ａ１、ＷＯ０１／１０４６０Ａ１、ＷＯ００／６７７９５、ＷＯ００／５２４７３である。
リツキシマブは、そのマウス親抗体であるイブリツモマブ（ibritumomab）から作り出されたキメラマウス／ヒト抗体である。イブリツモマブを９０Ｙで標識したものは、ゼバリン(Zevalin)（商標）という名がつけられている。Wiseman et. al. Critical reviews in Oncology/Hematology 39 (2001), 181-194に、ゼバリンは事前の線量測定を行わなくとも１４９×１０９／Ｌを超えるの血小板数の患者に対し１５ＭＢｑ／ｋｇの放射線量で安全に投与される可能性があると報告されている。血小板数が１００〜１４９×１０９の患者に対し、１１．１ＭＢｑ／ｋｇの放射線量は十分許容される。リツキシマブの標準経過と比較した、再発もしくは治療抵抗性の緩徐進行性リンパ腫または形質転換リンパ腫患者におけるゼバリンの、無作為化試験予想が報告されている。調査した１４３名の患者のうち、総合的な奏功が８０％見出されたゼバリン群に対して標識されていないリツキシマブを与えられた群は５６％（Ｐ＝０．００２）であり、ゼバリンで３０％が完全寛解したのに対してリツキシマブに関するＣＲ（完全寛解）は１６％であった（Ｐ＝０．０４）。ゼバリンはまた、リツキシマブに抵抗性のある濾胞性リンパ腫の患者でも評価された。先のリツキシマブと比較してゼバリンに対する反応持続時間は有意に長かった（８．４＋対４ヶ月）（Ｐ＝０．００８）。
トシツモマブ（tositumomab）は、ＣＤ２０抗原に対して作られたネズミＩｇＧ２ａλモノクローナル抗体である。Ｉ１３１−トシツモマブ(Ｂｅｘｘａｒ（商標））は、ヨウ素−１３１と共有結合しているトシツモマブの放射性ヨウ化誘導体である。ヨウ素−１３１は物理的半減期が８．０４日のβ線およびγ線の放出を伴って減衰する。Ｉ１３１−トシツモマブ治療法に見込まれる作用機序には、アポトーシス誘発、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）（ならびに抗体に媒介される抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ））が挙げられる(Cardarelli PM et. al. Cancer Immunol Immunother. 2002 Mar; 51(1): 15-24; Stashenko P, et. al. J Immunol 1980; 125:1678-85)。さらに、細胞死は、放射性同位元素からの電離放射線に関連している。
この治療法は、２つの別個の工程、すなわち線量測定工程および治療工程で行う。各工程はトシツモマブ、その後Ｉ１３１−トシツモマブの逐次注入からなる。 臨床試験で投与されたＩ１３１−トシツモマブ治療法の最大線量は８８ｃＧｙであった。用量漸増試験において３名の患者が全身線量８５ｃＧｙのヨウ素Ｉ１３１−トシツモマブで処理された。３名のうち２名の患者に、グレード４の毒性が発生し、５週間の持続期間の後回復した。さらに、この治療法の偶発的な過量摂取が１名の患者に全身線量８８ｃＧｙで起こった。
正常器官への毒性は、患者へ安全に投与され得る放射線量を制限し、その結果腫瘍へ吸収される量を制限する。最初の用量制限器官は骨髄である。局在したＢ細胞リンパ腫は、３０〜４４Ｇｙの線量での放射線外部照射治療によって治癒される可能性がある。幹細胞支持療法を用いない従来型の放射免疫療法で達成されうる用量は実質的に低下する。Wisemanらは、第３相試験でＢ細胞リンパ腫における用量の中央値は１５Ｇｙであると報告している(Wiseman G et al., Critical reviews in Oncology/Hematology 39 (2001) 181-194)。奏功率は奏功８０％および完全奏功３４％であった。幹細胞支持療法を用いるシアトルのグループは最高の寛解率である完全寛解率８０％を報告している(Liu Steven Y. et al., J. Clin. Oncol.16(10): 3270-3278, 1998)。彼らは腫瘍部位を推定して２７〜９２Ｇｙを達成した。
非血液学的な用量制限毒性は、２７Ｇｙ以上の線量で肺に起こる、可逆性肺機能不全であった。この研究は完全に比較できるものではないが、ＲＩＴにおける線量効果関係を示すものである。線量との関係が存在する場合、高用量を腫瘍へ送達できるのであれば効力を増加させることは可能であると思われる。ＲＩＴの後の完全寛解はより長い寛解の持続時間に関連するので、これは臨床上最も関連性がある(Wahl et al., J.Nucl. Med.39:21S-26S, 1998.)。
これに対する障害が骨髄の放射線感受性である。骨髄へ吸収される用量が多いほど、骨髄の消耗を生じる可能性がある。従って、より有効な治療に到達するために必要な用量は、骨髄などの正常器官の毒性につながる血液循環中の放射能の蓄積によって妨げられる。静脈内投与後の細胞傷害性のターゲッティング生体分子（例えば治療用または診断用モノクローナル抗体）から血液を浄化するための種々の手段が報告されている（Schriber G.J.およびKerr D. E.による総論、Current Medical Chemistry 2:616-629, (1995)参照)。
いわゆるアビジン追跡様式では、ビオチンがそれに付着する治療用または診断用抗体の投与後、十分な量の抗体が腫瘍内に蓄積した時点で、アビジンまたはストレプトアビジンを全身に投与する。アビジンまたはストレプトアビジンは抗体と会合し、そのようにして生じた免疫複合体は細網内皮系（ＲＥＳ）を介して血液循環から排出され、肝臓を介して患者から排出される。このような方法はビオチニル化した細胞傷害性抗体のクリアランスを改善する。同じ目的に対する別のアプローチとして抗イディオタイプ抗体の使用がある。しかし、これらの方法は総て血液クリアランスを肝臓または腎臓に頼るもので、その結果生命維持に重要なこれらの器官のいずれかまたは双方、ならびに膀胱が高用量の細胞毒性に暴露される。
この方法のもう１つの主な欠点は、このような薬剤、特にストレプトアビジンの免疫原性である。これは、ひとたび免疫応答が起こると反復処置の妨げとなる。血液クリアランスのための体外技術は、腎臓機能の不足によって有毒物質が血液中に蓄積している場合の腎臓透析に広く用いられている。体外装置が使用され得るその他の医療用適用としては、放射性物質の除去、有毒レベルの金属の除去、細菌またはウイルスから産生される毒素の除去、有毒レベルの薬物の除去、および細胞全体の除去（例えば癌細胞、特定の造血細胞―例えばＢ細胞、Ｔ細胞、またはＮＫ細胞）あるいは細菌およびウイルスの除去が挙げられる。
腫瘍に十分な量の免疫複合体が蓄積した後に、放射性標識された抗体を迅速に血液循環から排出して診断または治療法を得る種々の方法が提案されている。用いられる方法のいくつかは、免疫複合体の形成を通じて身体自体の排出機構を高めることを含む。放射性標識された抗体の血中クリアランスの向上は、治療用抗体に対するその他のモノクローナル抗体(Klibanov et al, J. Nucl. Med 29:1951-1956 (1988); Marshall et al, Br. J. Cancer 69: 502-507 (1994); Sharkey et al, Bioconjugate Chem. 8:595-604, (1997), avidin/streptavidin (Sinitsyn et al J. Nucl. Med. 30:66-69 (1989), Marshall et al Br. J. Cancer 71:18-24 (1995))などの治療用抗体と結合する分子、または肝細胞上の受容体によって除去されるグリコシル含有化合物(Ashwell and Morell Adv. Enzymol. 41:99-128 (1974))を用いて得ることができる。さらにその他の方法は、体外の方法によって循環する免疫複合体を除去することを含む（Schreiber G.J. and Kerr D.E., Current Medical Chemistry 2:616-629 (1995)による総説を参照）。
血液循環から薬剤を排出するために用いられる体外技術は、有毒物質が身体から迅速に除去されるので特に魅力的である。
このような方法の適用は免疫療法との関連で既に記載されている(Henry Chemical Abstract 18:565 (1991); Hofheinze D. et al Proc. Am. Assoc. Cancer Res. 28:391 (1987); Lear J. K. et al Antibody Immunoconj. Radiopharm. 4:509 (1991); Dienhart D. G. et al Antibody Immunoconj. Radiopharm. 7:225 (1991); DeNardo S.J. et al J. Nucl. Med 33:862-863 (1992); DeNardo G.L. et al J.Nucl.Med 34:1020-1027 (1993); DeNardo G. L. J. Nucl. Med 33:863-864 (1992);および米国特許第５，４７４，７７２号(Method of treatment with medical agents)。
血液クリアランスをより効果的にし、かつ全血の処理を可能にするためには、上記の方法に言及される血漿よりも、薬剤（例えば腫瘍局在のための、殺細胞薬または放射性核種を有する腫瘍特異的モノローナル抗体）をビオチニル化し、カラムマトリックス上でアビジンを基にした吸収剤によって排出する。多数の出版物が、ビオチニル化し放射性核種で標識した腫瘍特異的抗体のクリアランスにこの技術が効果的かつ実際的であることを示すデータを提供している(Norrgren K. et al, Antibody Immunoconj. Radiopharm. 4:54 (1991), Norrgren K. et al J. Nucl. Med 34:448-454 (1993); Garkavij M. et al Acta Oncologica 53:309-312 (1996); Garkavij M. et al, J. Nucl. Med. 38:895-901 (1997))。
このような技術は、ＥＰ０５６７５１４および米国特許第６，２５１，３９４号にも記載されている。Mitra Medical Technology AB, Lund, Swedenが開発および製造したＭｉｔｒａｄｅｐ（商標）という装置はこの技術に基づいている。ビオチン標識した治療用抗体とのコンジュゲートの際にアビジンコートフィルターを用いることによって、この血液クリアランス技術をキメラまたは完全ヒト化抗体へ同様にうまく適用することができる。実験データから、３時間の吸着手順の間に、９０％を越える循環するビオチニル化抗体がＭｉｔｒａｄｅｐ（商標）システム（臨床研究者のカタログ - Ｍｉｔｒａｄｅｐ（商標）)によって除去され得ることが明らかとなっている。
体外フィルターへ吸着させるため、細胞傷害性物質（例えば放射性核種）を有するモノクローナル抗体は、患者へ投与する前にビオチニル化する（ビオチンがフィルター中のアビジンと不可逆的に結合する）必要がある。ビオチニル部分の数は、ＩｇＧ分子につき３〜６の範囲、一般的には４である。
ビオチンおよび放射性核種を同時に標識化するこの方法のさらなる発展形態は、生体分子とのコンジュゲートのための三官能性試薬を開示する、S. Wilbur and B. E. B. Sandbergによる特許出願ＰＣＴ／ＳＥ９８／０１３４５に記載されている。
この後者の方法は連続する放射性核種の標識化およびビオチニル化に数多くの利点があり、裸の（キレート化していない）抗体が病院へ提供される場合には特に魅力的である。それはキレート化基とビオチニル基の双方が、放射性標識工程に加えて抗体とコンジュゲートされる必要があるためである。
しかし、ほとんどの場合、キレート化基およびビオチニル基との結合のために、抗体上の同じ種類の官能基（ε−アミノ基）が利用され、最も利用しやすい部位の競合につながる。
抗体のキレート化および／またはビオチニル化の結果、不均一な製剤が生じる。例えばもしキレート抗体が１抗体につき３つのキレートを有すると決まれば、製剤は１キレート／抗体〜７キレート／抗体の抗体混合物を含む。キレートとビオチンは抗体上の同じ部分と結びつくので、キレート数の多い抗体はビオチンの数が少なくなるかもしれない。ビオチンを全く含まないキレート数の多い抗体という結果となることもあるかもしれない。
このことは、統計上は、放射性核種を有するがビオチンを含まない抗体の集団が血液中に循環し、それらの抗体はＭｉｔｒａｄｅｐ（商標）フィルターによっては取り除かれないことを意味する。
裸の治療用または診断用抗体の標識化を促進するため、また必ずビオチンと放射性標識の割合を１対１にするため、Mitra Medical Technology AB, Lund, Swedenは、２種類の官能基を含み、それによってキレート化基（放射性標識用）およびビオチン基の同時かつ部位特異的コンジュゲートを可能にする、一連の新規な水溶性構造（タグ試薬；ＭｉｔｒａＴａｇ（商標））を開発した。
キレート化基ＤＯＴＡで標識されるタグ試薬はＭｉｔｒａＴａｇ−１０３３と呼ばれる。
本発明は、抗リンパ腫抗体とコンジュゲートした試薬を含む薬剤、およびリンパ腺癌、すなわちリンパ腫、および特にＮＨＬの処置のための種々の方法を包含する。
発明の概要
本発明の目的は、特定のリンパ腫疾患の処置との関連において上に論じた問題を解決することである。この目的は、下に明記される本発明によって達成される。
本発明は、一態様では抗リンパ腫抗体またはその変異体とコンジュゲートした試薬を含んでなる薬剤に関するものであって、前記試薬は少なくとも３つの官能部分ｂ）〜ｄ）を有する単一の分子であり、
ａ）三官能性架橋部分は
ｂ）リンカー１を介して、親和性リガンドと
ｃ）共有結合を介して、所望によりリンカー２を介してエフェクター剤と、かつ
ｄ）所望によりリンカー３を介して生体分子反応部分と
結合し、
前記生体分子反応部分は、抗リンパ腫抗体またはその変異体と結合を形成して、それによってコンジュゲートを形成することができる、抗リンパ腫抗体反応部分であり、かつ、抗リンパ腫抗体またはその変異体がリンパ腫腫瘍細胞の表面に存在する１以上の異なるＣＤ抗原と相互作用する。
別の態様では、本発明は前記薬剤を含む組成物に関する。
さらなる態様では、本発明は、哺乳類ホストの血漿または全血中で組織と結合していない前記に定義される治療用または診断用薬剤の体外排出または少なくとも濃度の減少のためのキットであって、前記薬剤は、特定の組織または細胞へその上に接着することによって集中させるために事前に哺乳類ホストに導入されてそこで一定の時間置かれ、かつ
ａ）薬剤、および
ｂ）親和性リガンドと接着する固定化された受容体を含む体外装置
を含んでなる、キットに関する。
さらなる態様では、本発明は、リンパ腫、好ましくは非ホジキンリンパ腫の処置のための前記薬剤の使用に関する。
なおさらなる態様では、本発明は前記薬剤の投与によるリンパ腫、好ましくは非ホジキンリンパ腫の処置のための方法に関する。
なおさらなる態様では、本発明は前記薬剤の投与によるリンパ腫、好ましくは非ホジキンリンパ腫を診断するための方法、ならびにリンパ腫の診断および処置を組み合わせた方法に関する。
本発明のさらなる利点および目的を、添付の図面を参照して下記に詳しく説明する。
発明の具体的説明
本発明を用いると、細胞傷害性物質の投与後に血液循環中の細胞傷害性薬の濃度を減少させることにより、またその結果、投薬量の増加を促進することにより、播種性の血液癌、特にリンパ腫の処置における細胞傷害性ターゲティング剤の腫瘍対非腫瘍比率を改善することが可能であり、故に生命維持に必要な器官をより高い毒性に曝さずにより効果的な処置法が可能である。さらに、本発明は新規の医薬およびこれらの薬剤の、特にリンパ腺癌およびＮＨＬの処置における使用を提供する。
一実施形態では、放射性標識された抗リンパ腫抗体は、造血機能を再構成することなく患者に許容されると考えられる量に制限された単一の用量で骨髄移植を通じて、または別の手段によって投与される、つまり「低用量」である。抗リンパ腫抗体の用量範囲は１０〜２０ＭＢｑ／体重ｋｇ、好ましくは１１〜１５ＭＢｑ／ｋｇ９０Ｙ−であり、局在を標的とするための１１１Ｉｎ−抗リンパ腫抗体の用量範囲は２０〜２５０ＭＢｑ、好ましくは５０〜１５０ＭＢｑである。この実施形態では、結合しなかった治療用または診断用の放射性標識抗体の体外クリアランスは任意選択である。
別の実施形態では、放射性標識された抗リンパ腫抗体は、患者へ高用量の放射能を送達するよう指定された単一用量で投与される。この「高用量法」は、骨髄を再構成する方法または好ましくはＭｉｔｒａｄｅｐ（商標）システムを用いて骨髄への放射能の影響を減らす方法と併用する必要がある。９０Ｙ−抗リンパ腫抗体に関して、「高用量」とは、２０ＭＢｑ／体重ｋｇを超える単一用量をさす。
好ましい実施形態では、用量５０〜１５０ＭＢｑの１１１Ｉｎ−抗リンパ腫を、「高用量」（＞２０ＭＢｑ／体重ｋｇ）の９０Ｙ−抗リンパ腫抗体と、いずれも６〜８日の間隔をあけて順に投与するかまたは同時に投与して併用する。
本発明の以下の実施例もまた、本発明の詳細を説明するために示す。
リンパ腫はリンパ球を起源とする腫瘍である。リンパ腫に対応する正常部分、すなわち正常リンパ球は、骨髄中の多能性の幹細胞から生じ、分化して完全に成熟したリンパ球となる。その分化の間に、リンパ球は異なる細胞表面抗原（ＣＤ抗原）を発現し、そのうちのいくつかは系統および／または段階に特異的である。リンパ腫は種々の分化の段階でリンパ球から生じる可能性があり、この段階で発現したＣＤ抗原を提示することも多い。このようなＣＤ抗原は、診断目的だけでなく異なる種類の抗体治療のための標的としても使用できる。
主にモノクローナル抗体技術によるヒト白血球抗原の研究は、急速に基礎研究および臨床研究の分野を変えている。抗体によって定義される白血球表面分子には一連の国際ワークショップ(Paris, 1982；Boston, 1984；Oxford, 1986；Vienna, 1989, Osaka, 1996)において、クラスター分化（ＣＤ）番号（ＣＤ抗原）が割り当てられている。このような抗原のＣＤ分類は出版物の中での標準形となり、臨床報告の標準化の基盤をもたらした。現在のＣＤ分類を、各エントリー項目の傍らに概要を添えて一覧表形式で表す。
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本明細書中で用いられる「ＣＤ１〜ＣＤ２４７の群」とは、上記一覧表中の全てのＣＤ分子をさす。
最も好ましい実施形態では、抗リンパ腫抗体は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、特にＣＤ２０に対して作出される。
本特許出願において、免疫ターゲッティング剤(免疫複合体)とは、細胞傷害性部分を有する薬剤で、一般的な細胞傷害性薬とは反対に、リンパ管の腫瘍細胞と高い親和性で特異的に結合し、ヒトへ非経口投与、好ましくは静脈内投与され得る。好ましい適用では、免疫ターゲティング剤は抗体であり、異なるイソ型であり得、どのような種由来でもあり得る。特に注目されるのはモノクローナル抗体およびその誘導体である。後者にはＦ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ’）、Ｆ（ａｂ）その他などのフラグメントが挙げられる。また、遺伝子操作されたハイブリッド、あるいは１または数個の標的特異的モノクローナル抗体、例えばキメラまたはヒト化抗体、一本鎖抗体などの抗原結合領域の特異性に基づいて化学的に合成したペプチドも挙げられる。
生体分子結合部分は、抗リンパ腫抗体反応部分であり、抗リンパ腫抗体と少なくとも１０８Ｍ−１の親和性結合定数で共有または非共有的に結合またはコンジュゲートしている。
本明細書において「抗リンパ腫抗体」とは、リンパ腫腫瘍細胞上のＣＤ抗原と少なくとも５×１０６Ｍ−１、好ましくは少なくとも１０８Ｍ−１の親和性結合定数で特異的結合可能な抗体をさす。
本明細書において抗リンパ腫抗体の「変異体」とは、ＣＤ抗原分子と結合する際に同じまたは本質的に同様の親和性結合定数、すなわち少なくとも５×１０６Ｍ−１、好ましくは少なくとも１０８Ｍ−１の親和性結合定数を有するいずれのその改変体、フラグメントまたは誘導体をもさす。
このような変異体はいずれも、腫瘍組織中で体液中の半減期および抗体もしくは抗体フラグメントまたは誘導体の保持率を最適化するため、様々な数のポリエチレングリコール鎖の共役によって改変しておくことができる。最も好ましい適用では、抗体または抗体誘導体は、ターゲッティング剤の結合特性を著しく減少させることなく、固定化されたアビジンとの相互作用による体外除去に使用するための十分な数のビオチン残基の接着を可能にさせるべきである。
特異性を高めるためには、腫瘍特異的モノクローナル抗体を、限定されるものではないが、放射性核種、化学療法薬、合成または天然に存在する毒素、免疫抑制剤、免疫賦活剤およびプロドラッグプロトコールで用いられる酵素などの種々の細胞傷害性部分の担体（免疫複合体）として用いる。この細胞傷害性部分は、γ線放射体、例えばヨウ素−１３１またはその金属がイットリウムもしくはレニウムなどのβ粒子放射体から選択される金属イオンコンジュゲートなどの放射性核種であるのが好ましい。米国特許第４，４７２，５０９号Gansow, et al.は、放射性金属とモノクローナル抗体との結合のためのジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＤＴＰＡ）キレート剤を開示している。この特許は、結合していない金属および偶発的に結合した（非キレート）金属を放射性医薬品から取り除くための精製技術を特に対象とするが、当技術分野において承認されている放射性核種標識された抗体の製造のためのプロトコールを例証するものではない。
このような一般手順に従って、標的組織関連抗原と特異的に反応する抗体を、いくらかの量の、タンパク質結合および金属結合機能を有する選択された二官能性のキレート剤と反応させてキレート剤／抗体コンジュゲートを製造する。抗体をキレート剤とをコンジュゲートする際に、具体的な比率は試薬の性質および抗体あたりのキレート剤の所望数に左右される、過剰なキレート剤を抗体と反応させる。放射性核種は、生体分子コンジュゲートが用いられる（例えば患者内）条件で、ビオチニル化／放射性標識化合物から分離しないような方法でキレート化（金属に対して）または共有結合によって結合することが要件である。従って、最も安定性のあるキレートまたは共有結合配置が好ましい。このような結合(binding/bonding)部分の例としては、ハロゲン放射性核種に対するハロゲン化アリールおよびハロゲン化ビニル；ＴｃおよびＲｅ放射性核種に対するＮ２Ｓ２およびＮ３Ｓキレート；Ｉｎ、Ｙ、Ｐｂ、Ｂｉ、Ｃｕ、ＳｍおよびＬｕ放射性核種に対するＥＤＴＡ、ＤＴＰＡ、Ｍｅ−ＤＴＰＡおよびシクロヘキシル−ＤＴＰＡの誘導体、ならびにＮＯＴＡ、ＤＯＴＡ、ＴＥＴＡ、ＣＩＴＣ−ＤＴＰＡ、およびトリエチレンテトラアミン五酢酸誘導体(Yuangfang and Chuanchu、Pure & Appl. Chem. 63,427-463、1991)などの環状アミンなどのアミノ−カルボキシ誘導体が挙げられ、この放射性核種は、限定されるものではないが、以下の元素のいずれかである。
β線放射体は、細胞傷害薬として有用であり、スカンジウム−４６、スカンジウム−４７、スカンジウム−４８、銅−６７、ガリウム−７２、ガリウム−７３、イットリウム−９０、ルテニウム−９７、パラジウム−１００、ロジウム−１０１、パラジウム−１０９、サマリウム−１５３、ルテチウム−１７７、レニウム−１８６、レニウム−１８８、レニウム−１８９、金−１９８、ラジウム−２１２ および鉛−２１２などの同位元素が挙げられる。最も有用なγ線放射体はヨウ素−１３１およびインジウム−ｍｌｌ４である。本発明で有用なその他の金属イオンとしては、２１２−ビスマス、２１３−ビスマス、およびＡｔ−２１１などのα線放射物質ならびにガリウム−６８およびジルコニウム−８９などの陽電子放射体が挙げられる。
本発明の別の実施形態では、放射性核種標識されたターゲティング剤は、リンパ腺癌の処置だけでなく、そのような癌のイメージングにも有用である。
投与後の適当な時に、「細胞傷害性ターゲティング剤」が体外装置により血液系から排出される。体外の枯渇を促進するため、全血または血漿を体外循環させる器具を、チューブおよびブラッドアクセス（blood access）用の装置を介して患者へ接続する。このような器具は、血液を吸着装置へ輸送するための導管、および処理した血液または血漿を患者へ戻すための導管を備える。吸着装置を通じて血漿を処理する場合、血漿分離装置ならびに濃縮血液と処理血漿とを混合する装置が必要である。後者は、通常２つの成分がエアトラップに入って混合が生じることによって達成される。
全血を処理する場合、通常の透析機がかかる器具の土台となり得る。透析機には、標準的に必要な安全装置および監視装置が全て備え付けられ、患者の安全要件を満たし、またシステムの操作を容易にしている。故に、好ましい実施形態では、全血が処理され、しかも機械設備のごくわずかな変更だけで標準的な透析機が利用される。しかし、このような機械は新規に意図される目的に適う新規なプログラムを必要とする。
この器具に加えて、意図する流量および患者からの距離に適した専用の血液チューブ、ならびに機械が必要である。このようなラインチューブは、血液または血漿に適合すればどのような材料からできていてもよく、透析で用いられる通常のチューブに用いられる材料が挙げられるであろう。
ブラッドアクセスは、末梢静脈カテーテルによって、または多い血流が必要であれば、限定されるものではないが、鎖骨下もしくは大腿のカテーテルなどの中心静脈カテーテルによって達成され得る。
親和性吸着剤のためのマトリックスは、種々の形状および化学組成であってよい。それは例えば、粒子状の高分子を充填したカラムハウスを構成してよく、この高分子は天然由来のものでも人工的に製造したものでもよい。この粒子はマクロ孔質であるか、またはそれらの表面が継ぎ合わされていてよく、これは表面積を増やすためである。この粒子は球状または粒状であってよく、多糖類、セラミック材、ガラス、シリカ、プラスチック、またはこれらまたは類似物質の組み合わせに基づいてよい。これらの組み合わせは、例えば、天然由来または人工的に作られた好適な高分子で被覆された固形粒子であり得る。人工の膜を用いてもよい。これらはセルロース、ポリアミド、ポリサルフォン、ポリプロピレン、あるいは、十分に不活性で、生体適合性があり、無毒であり、かつ、受容体がそこへ直ちに、または膜表面の化学修飾後に固定化されるその他の種類の材料から作られた平板膜であってよい。セルロース、ポリプロピレンまたはこの種類の膜に好適なその他の材料から作られた中空糸のようなキャピラリー膜を用いてもよい。好ましい実施形態はアガロースを基盤とした、体外の適用に好適な粒子状材料である。
一実施形態では、親和標識は抗リンパ腫抗体に接着し、吸着装置は親和性リガンドへと特異的に結合している固定化された受容体を含む。「抗体と抗原／ハプテン」ならびに「タンパク質と補因子」などのいずれの種類の親和性リガンド／固定化された受容体の組み合わせも、それらが十分に高い結合親和性および腫瘍マーカーへの選択性を示し、かつ親和性リガンド−受容体相互作用が、血液もしくはその他の体液または免疫ターゲッティング剤および／もしくは装置と接触している組織に干渉されないならば、本出願において使用されうる。
最も好ましい一適用では、親和性リガンド／固定化された受容体の組み合わせは、ビオチンもしくはビオチン誘導体とビオチン結合分子、特に親和性リガンドがビオチンもしくはその誘導体で、固定化された受容体がアビジンもしくはストレプトアビジンまたはその他のビオチン結合分子である。ビオチン／アビジンおよびビオチン／ストレプトアビジンからなるこの親和性リガンド対は、生体分子と共に用いられることが多い。タンパク質アビジンおよびストレプトアビジンとのビオチンの非常に強い相互作用（すなわちＫ＝１０１３〜１０１５Ｍ−１）(Green, Methods Enzymol. 184, 51-67, 1990; Green, Adv. Prot. Chem. 29, 85-133, 1975)が、in vitroおよびin vivo双方での使用を目的とする多数の適用において両者を使用するための基礎をもたらしている。本発明のさらなる適用は、同じ体外手順を通じていくつもの異なるビオチニル化した「抗癌薬」を同時に除去することである。
本発明で用いられる試薬を概略的に下に示す。図中、生体分子反応部分は抗リンパ腫反応部分である。
Figure 2006511532
本発明に記載の薬剤を概略的に下に示す。図中、抗リンパ腫抗体は試薬の抗リンパ腫抗体反応部分を介して試薬と結合またはコンジュゲートしている。
Figure 2006511532
概略的に示された試薬および薬剤それぞれにおいて、相違する成分を下に詳細に紹介する。
抗リンパ腫抗体反応部分は、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、スルホ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、およびフェノールエステルからなる活性エステル；アリールおよびアルキルイミデート；抗リンパ腫抗体上のアミノ基と反応するアルキルもしくはアリールイソシアネートまたはイソチオシアネート、あるいは抗リンパ腫抗体上のスルフヒドリル基と反応するマレイミドもしくはα−ハロアミド；あるいは抗リンパ腫抗体上の天然に存在するまたは合成によって作出されたアルデヒドまたはケトン基と反応するアリールもしくはアルキルヒドラジンまたはアルキルもしくはアリールヒドロキシルアミンからなる群から選択される。
エフェクター剤は、放射性核種結合部分であり、所望により放射性核種、合成または天然に存在する毒素、プロドラッグを有効な薬剤へ変換することのできる酵素、免疫抑制剤または免疫賦活剤、放射線増感剤、Ｘ線もしくはＭＲＩまたは超音波用の造影剤、外部照射によって放射性元素へ変換可能であり、その後前記元素を有する抗リンパ腫抗体が特定の細胞または組織へ蓄積されている非放射性元素、あるいは光活性化合物または光イメージングまたは光線力学療法に使用される化合物、あるいはリンパ腫細胞またはリンパ腫組織へ直接または間接的に同一または類似の影響を有するその他の分子と共に提供される。より正確には、エフェクター剤はＭｅ−ＤＴＰＡ、ＣＩＴＣ−ＤＴＰＡ、およびシクロヘキシル−ＤＴＰＡを含む。
親和性リガンドは、別の分子と１０６Ｍ−１以上の親和性結合定数で結合できるいずれの部分でもあり得る。好ましい親和性リガンドは、アビジン、ストレプトアビジン、またはこの親和性リガンドに対して本質的に同じ結合機能を有するアビジンもしくはストレプトアビジンのその他の誘導体、変異体または断片と特異的に結合する部分である。親和性リガンドは、ビオチン、またはアビジンまたはストレプトアビジンに対してビオチンと本質的に同じ結合機能を有するビオチン誘導体であるのが好ましい。前記ビオチン誘導体は、アビジンまたはストレプトアビジンに対してビオチンと本質的に同じ結合機能を有するビオチン誘導体からなる群から選択してよい。
前記抗リンパ腫抗体反応部分とコンジュゲートする能力を有する抗リンパ腫抗体は、リンパ腫腫瘍細胞の表面に存在する１以上の異なる細胞表面抗原と相互作用し、前記１以上の細胞表面抗原は１以上の異なるＣＤ抗原、またはその変異体であり、抗リンパ腫抗体は抗ＣＤ２０抗体、好ましくはリツキシマブ、イブリツモマブおよびトシツモマブから選択されるのが好ましい。
三官能性の架橋部分は、トリアミノベンゼン、トリカルボキシベンゼン、ジカルボキシアニリンおよびジアミノ安息香酸からなる群から選択される。
リンカー１は、アビジンもしくはストレプトアビジンとの結合、またはその他のビオチン結合種が立体障害により弱められないように、三官能性の架橋部分と親和性リガンド、好ましくはビオチン部分との間の接着部分およびスペーサーである化学的部分である。リンカー１は、αカルボン酸基またはＮ−メチル基を導入することによって、水溶性の向上、および好ましくはビオチニダーゼによる切断に対するビオチニダーゼの安定の向上を付与する可能性もある。さらに、リンカー１は、水素結合原子、好ましくはエーテルもしくはチオエーテル、またはビオチン部分の水溶性化に役立つイオン化可能な基、好ましくはカルボン酸基、スルホン酸基、もしくはアンモニウム基を含む。
ビオチン含有部分の構造上の要件のため、以下の本発明の実施形態に関連して下記の化学式が適用される：
一般化された１０３３−抗ＣＤ２０抗体の構造
Figure 2006511532
 この構造はエフェクター剤と結合しており、好ましくは前記抗ＣＤ２０抗体がリツキシマブであり、ｎは２〜４、好ましくは３であり；ｏは１〜６、好ましくは３であり；ｐは１〜６、好ましくは３であり；Ｒ２は＝ＣＨ２ＯＨまたは−ＣＯ２Ｈであり；かつＲ１は−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨ、または−Ｈである。
１０３３構造のビオチン部分には本出願で重要な３つの態様、つまり（１）ビオチニダーゼ切断の阻害、（２）高いビオチン結合親和性の維持、および（３）適度な水溶性への到達、がある。これらの特性をもたらすため、ビオチンコンジュゲートはビオチン分子および架橋部分と共役する適切なリンカーから構成されなければならない。
ビオチンコンジュゲートは、ペンタン酸側鎖（ｎ＝３）上のカルボン酸基とのコンジュゲートによって製造されなければならない。ビオチン分子のその他の位置でのコンジュゲートは、アビジンおよびストレプトアビジンとの結合を全く失うという結果を招く。それではビオチン分子が本出願の用を果たさなくなる。コンジュゲートの好ましい形態は、カルボン酸基とのアミド結合の形成である（一般式に示した通り）。ビオチンのアビジンおよびストレプトアビジンとの結合は深いポケット中にあるので（例えば９オングストローム）、ペンタン酸側鎖を短くする（ｎ＜３）または長くする（ｎ＞３）と結合親和性が低くなり、本出願に望ましくない。
ビオチニダーゼ活性の阻害は、適切な置換基をビオチンアミドアミン（すなわちＲ１）またはそのアミンに隣接する原子（すなわちＲ２）と接着させることによって達成される。ビオチニダーゼは、ビオチンカルボン酸コンジュゲートのアミド結合を切断（加水分解）する酵素である。この酵素は、動物およびヒトにおいてビオチンを再循環させる上で非常に重要である。ビオチン代謝は（いくつかの異なる）タンパク質カルボキシラーゼにおいてビオチン−ｗ−Ｎ−リジン（ビオシチン）を放出し、ビオチニダーゼがそのアミド結合を特異的に切断して遊離ビオチンを放出する。ビオチニダーゼも、その他のビオチンアミド結合を（非特異的に）切断することができる。本出願において、ビオチニダーゼがコンジュゲートからビオチンを切断しないことは重要で、そうでなければ所望の結果は達成されない。従って、有用なビオチンコンジュゲート構造はビオチニダーゼの酵素活性を阻害する官能基（Ｒ１またはＲ２）を組み込む。Ｒ１のどのような構造でもビオチニダーゼを阻害すると思われるが、その構造は概ねメチル（ＣＨ３）基に限定される、この基は完全にビオチニダーゼ活性を阻害するためである。Ｎ−メチル基はビオチンのアビジンおよびストレプトアビジンとの結合親和性を有意に低下させるが、なお本出願では有用である。Ｒ１の大きな群（例えばエチル、アリール等）は、結合親和性がないために有用ではない。置換基Ｒ１を有する別の方法は、ビオチンアミドアミンに隣接する原子（例えばメチレン）上に置換基Ｒ２を有することである。この位置ならビオチンの結合親和性に有意な影響なく、より大きく、より多様な置換基が使用できる。ビオチニダーゼは、Ｒ２＝ＣＨ３またはＣＨ２ＣＨ３の場合、切断速度は相当遅くなるが（すなわち、それぞれ２５％および１０％まで）完全には阻害されない。ビオチニダーゼ活性の完全な阻害は、Ｒ２＝ＣＨ２ＯＨおよびＣＯ２Ｈの官能基の場合に達成される。重要な考慮点は、これらの基がＲ２として組み込まれる時に結合親和性が低下しないことである。より大きな官能基をＲ２として用いてビオチニダーゼ活性を阻害することもできるが、結合親和性が低下する。より大きな官能基は、もしそれらがＲ１＝ＣＨ３の場合に得られるよりも大きな結合親和性の低下をもたらさないならば、Ｒ２として本出願で有用である。
１０３３のビオチン部分のビオチン親和性および水溶性は、用いるリンカー部分の影響を受ける。リンカー部分（リンカー１）の長さおよび性質は、それが共にコンジュゲートされる分子の性質に多少依存する。リンカー部分は、ビオチン結合がタンパク質（またはその他のコンジュゲートされた分子）からの立体障害の影響を受けないように、ビオチン部分とコンジュゲートの残部との間のスペーサーをもたらす役割を果たす。リンカーの長さ（直鎖の原子数）は、小さな分子（例えばステロイド）とのコンジュゲートにはｏ＝４〜２０から、大きなコンジュゲート分子（例えばＩｇＧ分子）にはｏ＞２０まで変動する。リンカー中の原子（直鎖またはそれからの分岐鎖）の性質も変化して水溶性を向上させる。例えば、５以上のメチレンユニットを含むリンカーは、酸素もしくは硫黄原子（エーテルもしくはチオエーテルを形成）の組み込みによって、または付加されたイオン化可能な官能基（例えばスルホン酸基、カルボン酸基、アミンもしくはアンモニウム基）を有することによって改良される。
リンカー２は、存在するとすれば、放射性核種結合部分を三官能性の架橋部分へ接着するのに用いられる化学的部分である。これは１〜２５原子の長さ、好ましくは６〜１８原子の長さ、または原子団のスペーサーを提供する。リンカー２は、水素結合原子、好ましくはエーテルもしくはチオエーテル、または水溶性化に役立つイオン化可能な基の存在によって水溶性を向上させる可能性もある。
リンカー３は必要ではないが、利点がある場合は、生体分子反応部分を三官能性の架橋部分へ接着するのに用いられる化学的部分である。リンカー３は、１〜２５原子の長さ、好ましくは６〜１８原子の長さ、または原子団のスペーサーとして用いてもよく、かつ／またはエーテルもしくはチオエーテルなどの水素結合原子、または水溶性化に役立つイオン化可能な基、好ましくはカルボン酸基、スルホン酸基、もしくはアンモニウム基の存在によって化合物の水溶性を向上させてもよい。
さらに、本発明に記載の試薬は、三官能性または四官能性の架橋部分と結合した１以上の親和性リガンドおよび／または１以上のエフェクター剤を含んでよい。
本発明に記載の薬剤の好ましい実施形態は、以下の概略構造を有する。
Figure 2006511532
図中、キレート化基は、限定されるものではないが、以下の化合物のうちのいずれかである。ハロゲン放射性核種に対するハロゲン化アリールおよびハロゲン化ビニル；ＴｃおよびＲｅ放射性核種に対するＮ２Ｓ２およびＮ３Ｓキレート；Ｉｎ、Ｙ、Ｐｂ、Ｂｉ、Ｃｕ、ＳｍおよびＬｕ放射性核種に対するＥＤＴＡ、ＤＴＰＡ、Ｍｅ−ＤＴＰＡ、およびシクロヘキシル−ＤＴＰＡの誘導体、ならびにＮＯＴＡ、ＤＯＴＡ、ＴＥＴＡ、ＣＩＴＣ−ＤＴＰＡ、およびトリエチレンテトラアミン五酢酸誘導体(Yuangfang and Chuanchu、Pure & Appl. Chem. 63,427-463、1991)などの環状アミンなどのアミノ−カルボキシ誘導体、この放射性核種は、限定されるものではないが、以下の元素のいずれかである。β線放射体は、細胞傷害薬として有用であり、スカンジウム−４６、スカンジウム−４７、スカンジウム−４８、銅−６７、ガリウム−７２、ガリウム−７３、イットリウム−９０、ルテニウム−９７、パラジウム−１００、ロジウム−１０１、パラジウム−１０９、サマリウム−１５３、ルテチウム−１７７、レニウム−１８６、レニウム−１８８、レニウム−１８９、金−１９８、ラジウム−２１２ および２１２鉛などの同位元素が挙げられる。最も有用なγ線放射体はヨウ素−１３１およびインジウム−ｍｌｌ４である。本発明で有用なその他の金属イオンとしては、２１２−ビスマス、２１３−ビスマス、およびＡｔ−２１１などのα線放射物質ならびにガリウム−６８およびジルコニウム−８９などの陽電子放射体が挙げられる。
本発明の最も好ましい実施形態では、この薬剤は、１〜５基の３−（１３’−チオ尿素ベンジルＤＯＴＡ）トリオキサジアミン−１−（１３”−ビオチン−Ａｓｐ−ＯＨ）トリオキサジアミン−５−イソチオシアネート−アミノイソフタラートとのリツキシマブコンジュゲートである（下記参照）。放射性核種は、治療適用のためには９０Ｙであり、in vivoの診断適用のためには１１１Ｉｎである。最も好ましい実施形態では、リツキシマブコンジュゲートは１．５〜３．５基の３−（１３’−チオ尿素ベンジルＤＯＴＡ）トリオキサジアミン−１−（１３”−ビオチン−Ａｓｐ−ＯＨ）トリオキサジアミン−５−イソチオシアネート−アミノイソフタラートを含む。
Figure 2006511532
イブリツモマブまたはトシツモマブも、薬剤中の抗リンパ腫抗体として効果的である。
以下の実施例は本発明を限定するものではなく、本発明の適用の証拠として見なされるものである。
実施例１ リツキシマブのコンジュゲートおよび放射性標識化
これ以降の実施例では、インジウム−１１１は場合によってはイットリウム−９０の代用として用いられるが、これは前者はγ線放射体で、イットリウム−９０よりも放射線障害が少ないためである。
モノクローナル抗体リツキシマブを、Wilbur D. S et al in Bioconjugate Chem. 13: 1079-1092,2002に記載の方法を用いて、３−（１３’−チオ尿素ベンジルＤＯＴＡ）トリオキサジアミン−１−（１３”−ビオチン−Ａｓｐ−ＯＨ）トリオキサジアミン−５−イソチオシアネート−アミノイソフタラート（ＭｉｔｒａＴａｇ−１０３３）（略して以下「１０３３」とも呼ぶ）でコンジュゲートした。５ｍｇ量のモノクローナル抗体を、金属を含まない１Ｌ ＨＥＰＥＳに対して最低５回バッファー交換をして３日間にわたり４℃にて透析した。ＭｉｔｒａＴａｇ−１０３３の水溶液を作製し、適量を抗体溶液に加えた。室温にて一晩インキュベートした後、抗体コンジュゲートを金属を含まない５００ｍＭ酢酸アンモニウムバッファー、ｐＨ５．３に対して最低３回バッファー交換をして３日間にわたり４℃にて透析した。金属を除去したコンジュゲート抗体を、放射線標識化実験に用いられるまで４〜８℃で保存した。
５００ｍＭ酢酸アンモニウムバッファーｐＨ５．３中の２７５μｌの抗体コンジュゲート（１３７５μｇ；１０３３−リツキシマブ）を、５０ｍ ＭＨＣｌ中の１５μｌ１１１ＩｎＣｌ３（または９０ＹＣｌ３）と混合した。４５℃にて１６分間標識化を行った。２８μｌ ＤＴＰＡを反応が停止するまで加えた。放射性コンジュゲートの品質はＴＬＣおよびＨＰＬＣによって測定した。モノクローナル抗体分子あたりのＭｉｔｒａＴａｇ−１０３３の数はＨＡＢＡ法によって測定した。
実施例２ １０３３とコンジュゲートしたモノクローナル抗体とアビジン吸着剤の結合
Ｍｉｔｒａｄｅｐ（商標）装置で利用されるアビジン吸着剤と結合している１０３３−リツキシマブ放射性コンジュゲートの画分を、微小カラムを利用して分析した。
２．４コンジュゲート／ＩｇＧ １０３３−リツキシマブの非結合タンパク質画分は９％で、４．６コンジュゲート／ＩｇＧ １０３３−リツキシマブの非結合タンパク質画分は３％であった。これはこのコンジュゲートのポアソン分布によく一致している。故に、上記リツキシマブコンジュゲートは、ＭｉｔｒａＴａｇ−１０３３で標識されていない画分を含むはずである。故に、結合していない画分は、コンジュゲートしていないリツキシマブ、すなわち非放射性画分の予測画分に従う。
放射性標識した１０３３−コンジュゲート試料中の９９％を超える放射能が、アビジン吸着剤を含む微小カラムと結合した。
実施例３ in vitroでの模擬実験処置の間の１０３３−リツキシマブコンジュゲートの枯渇
患者の処置中の１０３３−リツキシマブの枯渇動態を、Schindhelm K. (Artificial Organs 13: 21-27 (1989))に記載の原則に基づく再循環法を利用してin vitroで模擬実験した。
１０３３−リツキシマブを、ヒト血液と同じ相対粘度の溶液中に希釈し、Ｍｉｔｒａｄｅｐ（商標）装置の小型モデルを通じてin vitroで再循環させた。１０ｍｇの１０３３−リツキシマブを含む１２５ｍｌの血液代替物を、６．２５ｍｌ／分で再循環させた（Ｍｉｔｒａｄｅｐ（商標）での１００ｍｌ／分に相当）。リザーバ３本分の量を処理した。リザーバ中の１０３３−リツキシマブのレベルをモニタリングした。
リツキシマブ１分子につき異なる数のＭｉｔｒａＴａｇ（商標）−１０３３部分を有する２種類の１０３３−リツキシマブ製剤を分析した際に、図１に示される結果を得た。見れば分かるように、１０３３−リツキシマブの枯渇は理論枯渇ラインと異なっていない、すなわち装置を通過する、溶液中に存在する全ての１０３３−リツキシマブが除去される。ビオチニル化したヒトＩｇＧでの研究は、ビオチン／ＩｇＧ比１．４ビオチン／ＩｇＧ（試験した最低の比）までの効果的な枯渇が得られたことを示している。
１０３３−リツキシマブは、装置Ｍｉｔｒａｄｅｐ（商標）を利用する体外の親和性吸着手順中に効果的に除去され得るものと結論付けられた。
実施例４ １０３３−コンジュゲートと標的抗原ＣＤ２０との結合
ＭｉｔｒａＴａｇ（商標）−１０３３とのコンジュゲートの後、１０３３− リツキシマブコンジュゲートを標的抗原ＣＤ２０との結合について分析してコンジュゲートの過程で抗原結合が変性していないか確認した。ＣＤ２０抗原は、精製された可溶性形態では利用できない。従って、Ｂ細胞リンパ腫細胞系統を発現しているＣＤ２０を試験している間、Ｒａｊｉおよび／またはＳＢを標的として利用した。
抗原結合の特異性を、フローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）法での免疫蛍光によって分析した。要するに、Ｒａｊｉ細胞を、ビオチニル化リツキシマブおよび１０３３−リツキシマブコンジュゲートでインキュベートした。インキュベーション後、細胞を洗浄し、蛍光標識されたアビジンでインキュベートした。洗浄後、細胞をＦＡＣＳ機器で分析した。陽性対照として、ＣＤ２０に対するビオチニル化マウスモノクローナル抗体を用い、陰性対照としてＰＢＳバッファーを用いた。細胞上のＦｃ−受容体結合の対照に、ビオチニル化正常ヒトＩｇＧを用いた。結果を、Ｘ軸に対数目盛に細胞あたりの蛍光の量を表し、Ｙ軸に、指定された蛍光を呈する細胞の数を表すグラフに表した。
図２に見られるように、アビジンと細胞との非特異的結合は検出されなかった。ビオチニル化したヒトＩｇＧを利用するＦｃ受容体との結合も見出されなかった。試験した対照マウス抗体、ビオチニル化リツキシマブ、または２種類のＭｉｔｒａＴａｇ（商標）−１０３３コンジュゲートとの間の結合に有意な差はなかった。
コンジュゲートと、同じ個体から樹立したＣＤ２０陽性細胞系統（ＳＢ）およびＣＤ２０陰性細胞系統（ＨＳＢ）との結合をＥＬＩＳＡで分析することによって特異性も測定した。細胞を乾燥させてＥＬＩＳＡプレートのウェルに入れた。１０３３−リツキシマブコンジュゲートでのコンジュゲートの後、結合した抗体を、酵素とコンジュゲートしたストレプトアビジンを用いて検出した。ビオチニル化したリツキシマブおよびビオチニル化した正常ヒトＩｇＧを、それぞれ陽性対照および陰性対照として用いた。図３に見られるように、対照細胞との非特異的結合はごくわずかであった。
リツキシマブは、ＭｉｔｒａＴａｇ（商標）１０３３−試薬でのコンジュゲートの後も、抗原ＣＤとの結合特異性を保持しているものと結論付けられた。
実施例５ ＣＤ２０抗原との結合の親和性分析
リツキシマブの標的抗原ＣＤ２０との結合親和性（力）へのコンジュゲートの影響を、競合阻害試験を用いて調査した。
要するに、放射性標識されていないリツキシマブおよび１０３３−リツキシマブコンジュゲートの量を増加させて、Ｂｏｌｔｏｎ−Ｈｕｎｔｅｒ試薬を用いて標識した一定量の１２５Ｉ標識されたリツキシマブと混合した。この混合物を、９６プレートウェル中に固定したＳＢリンパ腫細胞に加えた。室温にて２時間のインキュベートの後、ウェルを洗浄し、細胞と結合した放射能を自動ＮａＩ（Ｔｌ）シンチレーションウェルカウンタで測定した。
各濃度の非放射性リツキシマブおよび１０３３−リツキシマブコンジュゲートに対して、放射能と結合している細胞の阻害率％を計算した。この阻害率％を濃度に対してプロットし（図４）、５０％阻害（ＩＣ５０）に必要とされる濃度をグラフから計算した（表１）。ＩＣ５０とは試験される抗体の相対親和性（アビディティ）の尺度であり、親和性の低下はＩＣ５０濃度の増加と考えられる。親和性の有意な変化のためには、ＩＣ５０の差は少なくとも１０倍であるべきとされることが多い。
Figure 2006511532
親和性にわずかな減少が、１．６および２．４ １０３３−リツキシマブコンジュゲートに関して見られるのに対して、３．４および４．６ １０３３−リツキシマブコンジュゲートの減少はリツキシマブのＩＣ５０濃度に対して１０倍をわずかに上回った。３．４および４．６ １０３３−リツキシマブコンジュゲートの親和性はおそらくその後も患者において適切な腫瘍への取り込みを得るのに十分なほど高いであろう。
臨床研究で、親和性での１０倍の差は腫瘍への取り込みに有意な差を生じないことが示されている（６参照）。従って、１抗体につき最大３〜４コンジュゲートでのリツキシマブのコンジュゲートは、in vivoで抗体の結合特性を低下させないものと結論付けられた。
実施例６ リツキシマブの ＭｉｔｒａＴａｇ（商標）−１０３３コンジュゲートの薬物動態
Ｓｐｒａｑｕｅ Ｄａｗｌｅｙ系ラットに、１．２ｍｇ／ラットの非コンジュゲートリツキシマブと混合した３〜４ＭＢｑ１１１インジウムで標識した約５０μｇの１０３３−リツキシマブ（１抗体につき４．６ １０３３部分）を静脈内注射した。中エネルギー用コリメータを装備したシンチレーションカメラ（General Electric 400T, GE, Milwaukee, WI, USA）を用いて全身（ＷＢ）イメージングを行った。画像を保存し、Ｎｕｃｌｅａｒ ＭＡＣ ２．７ソフトウェアで分析した。画像から、全身のカウントの総数が得られた。放射能の減衰補正およびバックグラウンド除去の後、このカウントを、身体内の放射線量保持率（％）の計算に用いた。図５参照。
１１１Ｉｎ−１０３３−リツキシマブの薬物動態を定義し、それを１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ｈＭｎ１４と比較するため、約０．２ｍｌの血液を眼窩周囲の静脈叢から次の時間：注射後１０分、１、８、２４、４８および９６時間に得た。放射能を自動ＮａＩ（Ｔｌ）シンチレーションウェルカウンタで測定し、１１１Ｉｎ減衰を補正した血液グラムあたりの注射放射線量（％／ｇ）のパーセントで表した（図６）。
実施例７ 器官および組織へのコンジュゲートの体内分布
注射後１、８、２４、４８および９６時間に行った解剖で、対象となる器官および組織を取り出し、計量し、放射能含量を測定した。放射能を自動ＮａＩ（Ｔｌ）シンチレーションウェルカウンタで測定し、カウント数を減衰について補正した。注射した放射線量の分布を図７、および表２に示す。
Figure 2006511532
実施例８ 放射性標識されたＭｉｔｒａＴａｇ（商標）−１０３３抗体コンジュゲートのin vivo安定性
ＭｉｔｒａＴａｇ（商標）−１０３３部分のin vivoでの安定性を、アビジン-微小カラムと結合する血液中の放射能のパーセンテージを分析することによって測定した。
約０．１ｍｌの血液を、眼窩周囲の静脈叢から次の時間：注射後１、８、２４、４８および９６時間に得た。５０μｌの血液をアビジン−アガロース（０．３ｍｌ吸着剤）を含む微小カラムへ適用した。１０分間のインキュベーションの後、結合しなかった放射能をカラムから洗い落とした。カラムおよび回収した洗液中の放射能を自動ＮａＩ（Ｔｌ）シンチレーションウェルカウンタで測定し、結合した画分をカラムに適用した総放射能のうちのパーセントとして表した。
Figure 2006511532
調査期間中、血液中に存在する放射能のアビジンとの結合の減少は検出されなかった。
従って、ビオチンとＤＯＴＡキレートとの間の結合は注射後９６時間まで血液循環中で安定しているものと結論付けられた。
血漿をＨＰＬＣサイズ排除カラム上で分離した場合、１０分の試料を４７時間の試料と比較してサイズ分布に有意な変化は見出されなかった（図８）。
実施例９ 本発明の最も好ましい実施形態に従うＢ細胞リンパ腫における処置法
この処置法は次の事象に分けることができる：
・全ての患者に、循環するＢ−細胞を除去するため治療１週間前（−７日）に用量２５０ｍｇ／ｍ２のリツキシマブを投与し、その後直ちに診断用の用量５０〜１５０ＭＢｑ（１．５〜４ｍＣｉ）の１１１Ｉｎ−１０３３−リツキシマブを投与する。
・０日に全ての患者に２５０ｍｇ／ｍ２リツキシマブを投与し、その後直ちに治療用の用量の９０Ｙ−１０３３−リツキシマブ（＞１０ＭＢｑ／体重ｋｇ）を投与する。所望により、患者に線量測定のためのイメージング用に用いられる用量１５０〜２５０ＭＢｑ（４〜７ｍＣｉ）の１１１Ｉｎ−１０３３−リツキシマブを投与してよい。
・１または２日目に、患者をＭｉｔｒａｄｅｐ（商標）で処置し、３血液量をＭｉｔｒａｄｅｐ（商標）装置に通す。
小型Ｍｉｔｒａｄｅｐ（商標）を通る再循環の間の１０３３−リツキシマブコンジュゲートの枯渇を示す図である。 ＣＤ２０陽性細胞系統Ｒａｊｉとの結合のフローサイトメトリーアッセイを示す図である。 １０３３−コンジュゲートとＣＤ２０＋（ＳＢ）およびＣＤ２０−（ＨＳＢ）細胞系統との結合を示す図である。 非放射性リツキシマブおよび１０３３−リツキシマブコンジュゲートによる、ＳＢ細胞と結合する１２５Ｉ標識されたリツキシマブの競合阻害を示す図である。 パーセンテージ±標準偏差として表される、１１１Ｉｎ−１０３３−リツキシマブ抗体コンジュゲートを注射したラットにおける放射能の全身クリアランスを示す図である。 ％注射量／ｇ±標準偏差として表される、１１１Ｉｎ−１０３３−リツキシマブ抗体コンジュゲートの血中クリアランスを示す図である。 ラットにおける１１１Ｉｎ−１０３３−リツキシマブ（４．６ １０３３／ＩｇＧ）の体内分布を示す図である。 １１１Ｉｎ−１０３３−リツキシマブ（４．６ １０３３／ＩｇＧ）を注射したラットから採取した血液試料のＨＰＬＣサイズ排除分離を示す図である。

Claims (40)

  1. 抗リンパ腫抗体またはその変異体とコンジュゲートした試薬を含んでなる薬剤であって、
    該試薬が少なくとも３つの官能部分ｂ）〜ｄ）を有する単一の分子であり、
    ａ）三官能性架橋部分が
    ｂ）リンカー１を介して、親和性リガンドと
    ｃ）共有結合を介して、所望によりリンカー２を介して、エフェクター剤と、かつ
    ｄ）所望によりリンカー３を介して、生体分子反応部分と
    結合し、
    前記生体分子反応部分が、抗リンパ腫抗体またはその変異体と結合を形成して、それによってコンジュゲートを形成することができる、抗リンパ腫抗体反応部分であり、かつ、抗リンパ腫抗体またはその変異体がリンパ腫腫瘍細胞の表面に存在する１以上の異なるＣＤ抗原と相互作用する、薬剤。
  2. 抗リンパ腫抗体またはその変異体が、モノクローナルであり、かつ、ＣＤ１〜ＣＤ２４７からなる群から選択される１以上のＣＤ抗原と相互作用する、請求項１に記載の薬剤。
  3. 抗リンパ腫抗体またはその変異体が、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、およびＣＤ３０と、最も好ましくはＣＤ２０と相互作用する、請求項２に記載の薬剤。
  4. 抗リンパ腫抗体が、イブリツモマブ（ibritumomab）、リツキシマブ（rituximab）、またはトシツモマブ（tositumomab）であり、好ましくはリツキシマブである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の薬剤。
  5. 抗リンパ腫抗体変異体が、抗リンパ腫抗体が抗リンパ腫抗体反応部分および前記ＣＤ抗原／リンパ腫腫瘍細胞表面上の抗原の双方と結合する能力と同じまたは本質的に同じ能力を有し、前記変異体が抗体誘導体、好ましくはＦ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ’）、またはＦ（ａｂ）フラグメント；遺伝子操作されたハイブリッドまたは化学的に合成されたペプチド、好ましくはキメラまたはヒト化抗体、および一本鎖抗体である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の薬剤。
  6. 前記抗リンパ腫抗体またはその変異体が、リンパ腫腫瘍細胞上の細胞表面抗原と少なくとも５×１０６Ｍ−１、好ましくは少なくとも１０８Ｍ−１の親和性結合定数で結合する、請求項１〜５のいずれか一項に記載の薬剤。
  7. 抗リンパ腫抗体反応部分と抗リンパ腫抗体またはその変異体との間に形成された結合が、少なくとも１０８Ｍ−１の結合親和性定数の共有結合または非共有結合のいずれかである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の薬剤。
  8. 抗リンパ腫抗体反応部分が、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、スルホ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、およびフェノールエステルからなる活性エステル；アリールおよびアルキルイミデート；抗リンパ腫抗体上のアミノ基と反応するアルキルもしくはアリールイソシアネートまたはイソチオシアネート、あるいは抗リンパ腫抗体上のスルフヒドリル基と反応するマレイミドもしくはα−ハロアミド；あるいは抗リンパ腫抗体上の天然に存在するまたは合成によって作出されたアルデヒドまたはケトン基と反応するアリールもしくはアルキルヒドラジンまたはアルキルもしくはアリールヒドロキシルアミンからなる群から選択される、請求項１に記載の薬剤。
  9. 抗リンパ腫抗体反応部分が、抗リンパ腫抗体と結合する能力と本質的に同じ能力を有する変異体をさらに含む、請求項８に記載の薬剤。
  10. エフェクター剤が、放射性核種結合部分であって、所望により放射性核種、合成または天然に存在する毒素、プロドラッグを有効な薬剤へ変換することのできる酵素、免疫抑制剤または免疫賦活剤、放射線増感剤、Ｘ線もしくはＭＲＩまたは超音波用の造影剤、外部照射によって放射性元素へ変換可能であり、その後放射性元素を有する抗リンパ腫抗体が特定の細胞または組織へ蓄積される非放射性元素、光活性化合物または光イメージングまたは光線力学療法に使用される化合物、あるいはリンパ腫細胞またはリンパ腫組織へ直接または間接的に同一または類似の影響を有するその他の分子と共に提供される、請求項１に記載の薬剤。
  11. エフェクター剤が、ハロゲン放射性核種に対するハロゲン化アリールおよびハロゲン化ビニル、ＴｃおよびＲｅ放射性核種に対するＮ２Ｓ２およびＮ３Ｓキレート、アミノ−カルボキシ誘導体、好ましくはＥＤＴＡおよびＤＴＰＡまたはその誘導体、ならびにＩｎ、Ｙ、Ｐｂ、Ｂｉ、Ｃｕ、ＳｍおよびＬｕ放射性核種または前記キレートと錯体を形成することのできるその他の放射性核種に対する環状アミン、好ましくはＮＯＴＡ、ＤＯＴＡおよびＴＥＴＡ、ならびにその誘導体を含む、請求項１０に記載の薬剤。
  12. ＤＴＰＡ誘導体が、Ｍｅ−ＤＴＰＡ、ＣＩＴＣ−ＤＴＰＡ、およびシクロヘキシル−ＤＴＰＡである、請求項１１に記載の薬剤。
  13. エフェクター剤が、ＤＯＴＡを含んでなり、治療適用のためにＹ−９０と共に、または診断適用のためにＩｎ−１１１と共に提供される、請求項１０〜１２のいずれか一項に記載の薬剤。
  14. エフェクター剤が、ポジトロンイメージング用放射性核種、好ましくはＦ−１８、Ｂｒ−７５、Ｂｒ−７６、およびＩ−１２４；治療用放射性核種、好ましくはＹ−９０、Ｉ−１３１、Ｉｎ−１１４ｍ、Ｒｅ−１８６、Ｒｅ−１８８、Ｃｕ−６７、Ｓｍ−１５７、Ｌｕ−１７７、Ｂｉ−２１２、Ｂｉ−２１３、Ａｔ−２１１、Ｒａ−２２３；γ線イメージング用放射性核種、好ましくはＴｃ−９９ｍ、Ｉｎ−１１１、Ｉ−１２３、およびＩ−１２５；β線放射体、好ましくはスカンジウム−４６、スカンジウム−４７、スカンジウム−４８、銅−６７、ガリウム−７２、ガリウム−７３、イットリウム−９０、ルテニウム−９７、パラジウム−１００、ロジウム−１０１、パラジウム−１０９、サマリウム−１５３、ルテチウム−１７７、レニウム−１８６、レニウム−１８８、レニウム−１８９、金−１９８、ラジウム−２１２および鉛−２１２、γ線放射体、好ましくはヨウ素−１３１およびインジウム−ｍ１１４；ならびに陽電子放射体、好ましくはガリウム−６８およびジルコニウム−８９と共に提供される、請求項１０〜１３のいずれか一項に記載の薬剤。
  15. 親和性リガンドが、そのリガンドに対し親和性を有する他の分子と少なくとも１０６Ｍ−１、好ましくは少なくとも１０８Ｍ−１の親和性結合定数で結合可能である、請求項１に記載の薬剤。
  16. 親和性リガンドが、アビジン、ストレプトアビジン、またはこの親和性リガンドに対して本質的に同じ結合機能を有するアビジンもしくはストレプトアビジンのその他の誘導体、変異体または断片と特異的に結合する部分である、請求項１５に記載の薬剤。
  17. 親和性リガンドが、ビオチン、または、アビジンもしくはストレプトアビジンに対してビオチンと本質的に同じ結合機能を有するビオチン誘導体である、請求項１６に記載の薬剤。
  18. ビオチン誘導体が、ノルビオチン、ホモビオチン、オキシビオチン、イミノビオチン、デスチビオチン(destibiotin)、ジアミノビオチン、ビオチンスルホキシド、およびビオチンスルホン、または本質的に同じ結合機能を有するその誘導体からなる群から選択される、請求項１７に記載の薬剤。
  19. ビオチンを放出するためのビオチンアミド結合の酵素切断に対する安定性、好ましくはビオチニダーゼによる切断に対する安定性が、ビオチン誘導体、好ましくはノルビオチンまたはホモビオチンを用いることによって改良された、請求項１５〜１８のいずれか一項に記載の薬剤。
  20. 前記三官能性架橋部分が、トリアミノベンゼン、トリカルボキシベンゼン、ジカルボキシアニリンおよびジアミノ安息香酸からなる群から選択される、請求項１に記載の薬剤。
  21. アビジンもしくはストレプトアビジンとの結合、またはその他のビオチン結合種が立体障害によって弱まらないように、リンカー１が三官能性の架橋部分と親和性リガンド、好ましくはビオチン部分との間の接着部分およびスペーサーとしての機能を果たす、請求項１に記載の薬剤。
  22. リンカー１が、水素結合原子、好ましくはエーテルもしくはチオエーテル、またはビオチン部分の水溶性化に役立つイオン化可能な基、好ましくはカルボン酸基、スルホン酸基、もしくはアンモニウム基を含む、請求項２１に記載の薬剤。
  23. ビオチンを放出するためのビオチンアミド結合の酵素切断に対する安定性、好ましくはビオチニダーゼによる切断に対する安定性が、リンカー１へαカルボン酸基またはＮ−メチル基を導入することによって提供されている、請求項２２に記載の薬剤。
  24. リンカー２が、１〜２５原子の長さ、好ましくは６〜１８原子の長さのスペーサーを提供する、請求項１に記載の薬剤。
  25. リンカー２が、水素結合原子、好ましくはエーテルもしくはチオエーテル、または水溶性化に役立つイオン化可能な基を含む、請求項２４に記載の薬剤。
  26. リンカー２を除いた、請求項１に記載の薬剤。
  27. リンカー３が、１〜２５原子の長さ、好ましくは６〜１８原子の長さのスペーサーを提供する、請求項１に記載の薬剤。
  28. リンカー３が、エーテルもしくはチオエーテルなどの水素結合原子、または水溶性化に役立つイオン化可能な基、好ましくはカルボン酸基、スルホン酸基、もしくはアンモニウム基を含む、請求項２７に記載の薬剤。
  29. リンカー３を除いた、請求項１に記載の薬剤。
  30. １以上の親和性リガンドおよび／または１以上のエフェクター剤が、三官能性または四官能性の架橋部分と結合している、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の薬剤。
  31. エフェクター剤と結合している
    Figure 2006511532
     であり、
    好ましくは前記抗ＣＤ２０抗体がリツキシマブであり、
    ｎは２〜４、好ましくは３であり；ｏは１〜６、好ましくは３であり；ｐは１〜６、好ましくは３であり；Ｒ２は＝ＣＨ２ＯＨまたは−ＣＯ２Ｈであり；かつＲ１は−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨ、または−Ｈである、請求項１〜２５および２７〜２８のいずれか一項に記載の薬剤。
  32. ３−（１３’−チオ尿素ベンジル−（ＤＯＴＡ）トリオキサジアミン−１−（１３”−ビオチン−Ａｓｐ−ＯＨ）トリオキサミン−５−イソチオ−シアナト−アミノイソフタラート−イブリトムマブ(ibritomumab)、３−（１３’−チオ尿素ベンジル（ＤＯＴＡ）トリオキサジアミン−１−（１３”−ビオチン−Ａｓｐ−ＯＨ）トリオキサミン−５−イソチオ−シアナト−アミノイソフタラート−リツキシマブ、または、１−イソシアナト−３−（（１Ｓ’−（Ｎ−ビオチニル）−β−Ｌ−アスパルチル）−４’，７’，１０’−トリオキサ−ペンタ−デカニルアミノ）−１−（（１３−（ベンジルチオ尿素−ＣＨＸ−Ａ”）−４，７，１０−トリオキサトリデカンジアミン）−アミノイソフタラート−リツキシマブ、好ましくは３−（１３’−チオ尿素−ベンジル（ＤＯＴＡ）トリオキサジアミン−１−（１３”−ビオチン−Ａｓｐ−ＯＨ）トリオキサミン−５−イソチオ−シアナト−アミノイソフタラート−リツキシマブである、請求項１〜３１のいずれか一項に記載の薬剤。
  33. 請求項１〜３２のいずれか一項に記載の薬剤を含む組成物であって、
    生理学的に許容される添加剤、好ましくは酢酸アンモニウム溶液をさらに含んでなる、組成物。
  34. 組織と結合していない請求項１〜３２のいずれか一項に記載の治療用または診断用薬剤の哺乳類ホストの血漿または全血中での体外排出または少なくとも濃度の減少のためのキットであって、
    前記薬剤が、哺乳類宿主に事前に導入されて、特定の組織または細胞へそこに接着させることによって集中させるためにそこで一定の時間置かれ、
    ａ）薬剤、および
    ｂ）親和性リガンドと接着する固定化された受容体を含む体外装置
    を含んでなる、キット。
  35. 請求項１〜３２のいずれか一項に記載の薬剤の、リンパ腫、好ましくは非ホジキンリンパ腫の処置のための医薬の製造のための使用。
  36. リンパ腫、好ましくは非ホジキンリンパ腫の処置のための方法であって、
    請求項２〜６のいずれか一項に定義される抗リンパ腫抗体またはその変異体をそれを必要とする患者へ投与し、その後前記抗リンパ腫抗体またはその変異体と前記１以上の細胞表面抗原を有する白血球との間に形成された複合体が患者の身体から排出され、その後に請求項１〜３２のいずれか一項に記載の薬剤を所望により前記抗リンパ腫抗体またはその変異体をそれ自体とともに投与し、その後、リンパ腫腫瘍細胞上の細胞表面抗原と結合していない薬剤が体外へ排出される、方法。
  37. 前記薬剤のエフェクター剤が９０Ｙであり、該薬剤が２０ＭＢｑ／体重ｋｇを超える単一用量で投与される、請求項３６に記載の方法。
  38. リンパ腫、好ましくは非ホジキンリンパ腫を診断するための方法であって、
    請求項２〜６のいずれか一項に定義される抗リンパ腫抗体またはその変異体をそれを必要とする患者へ投与し、その後前記抗リンパ腫抗体またはその変異体と前記１以上の細胞表面抗原を有する白血球との間に形成された複合体が患者の身体から排出され、その後に請求項１〜３２のいずれか一項に記載の薬剤を所望により前記抗リンパ腫抗体またはその変異体をそれ自体とともに投与し、その後、リンパ腫腫瘍細胞上の細胞表面抗原と結合していない薬剤が体外へ排出される、方法。
  39. 前記薬剤のエフェクター剤が９０Ｙまたは１１１Ｉｎであり、該薬剤が９０Ｙでは１０〜２０、好ましくは１１〜１５ＭＢｑ／体重ｋｇの用量範囲、１１１Ｉｎでは２０〜２５０、好ましくは５０〜１５０ＭＢｑ／体重ｋｇの用量範囲で投与される、請求項３８に記載の方法。
  40. リンパ腫、好ましくは非ホジキンリンパ腫の診断および処置の併用のための方法であって、エフェクター剤が１１１Ｉｎである請求項１〜３２のいずれか一項に記載の薬剤を５０〜１５０ＭＢｑ／体重の用量範囲で患者に投与し、エフェクター剤が９０Ｙである請求項１〜３２のいずれか一項に記載の薬剤を、２０ＭＢｑ／体重ｋｇを超える用量で６〜８日の間隔を開けてまたは同時に投与する、方法。
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