JP2006503080A - 疾患治療用のカプセルで包んだ生物材料の移植 - Google Patents
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Abstract
Description
a)小さな管にそれらの酵素を分泌する外分泌性の細胞、
b)酵素を腸へ運ぶ管細胞、
c)血流にそれらのホルモン類を分泌する内分泌細胞、
外分泌性の部分は、腺房細胞のように知られているピラミッド状の上皮細胞の円柱に含む多数の小さな腺(粒状果)に組織される。腺房細胞は、膵臓細胞のおよそ80%から成り、膵管系に消化酵素(例えばアミラーゼ、リパーゼ、ホスホリパーゼ、トリプシン、キモトリプシン、アミノペプチダーゼ、エラスターゼおよびさまざまな他のタンパク質)を分泌する。1日に約1.5および3リットルのアルカリ流体が、消化を補助するために、総胆管に放出される。
生物材料に第1のバッファーを含む溶液を添加する工程;
ペレット状の生物材料を形成するために、生物材料を遠心分離する工程;
上澄みを除去する工程;
ペレット状の生物材料に、細胞吸着材料と結合した光重合開始剤染料を含む溶液を添加する工程;
効果的な時間、細胞吸着材料と結合した光重合開始剤染料を含む溶液に、ペレット状の生物材料を再懸濁させ、インキュベートする工程;
混合物を遠心分離する工程;
細胞吸着材料と結合した光重合開始剤染料を含む溶液を除去する工程;
第2のバッファーを含む第2溶液でペレット状の生物材料を再懸濁する工程;
第2のバッファーを遠心分離し除去する工程;
光学活性ポリマー溶液に生物材料を再懸濁させ、混合する工程;及び
カプセル化した生物材料を形成するために、光学活性ポリマー溶液で再懸濁された生物材料に対し、エネルギ源を用いて照射する工程。
好ましくは、カプセル化した生物材料は、PEGでコンフォーマルコーティングされた膵島の同種移植である。
例えば、膵島、肝組織、内分泌組織、皮膚細胞、造血細胞、骨髄幹細胞、腎組織、筋細胞、神経細胞、幹細胞、胚性幹細胞、器官特異的前駆(始原)細胞などの細胞や組織、あるいは、特定因子を生産するよう遺伝子工学的に改変された細胞や組織を提供すること。さらに、次のような由来の細胞や組織を提供すること、
アルギン酸塩、アガロース、キトサン、ポリ(アミノ酸)、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、デキストラン、デキストラン硫酸、ヘパリン、ヘパリン硫酸、ヘパラン硫酸、ジェランガム、キサンタンガム、グアーガム、水溶性セルロース誘導体、カラゲナンなどの多糖類、ゼラチン、コラーゲン、アルブミンなどのタンパク質、ポリ(メタクリル酸メチル)(PMMA)、ポリ(2-ヒドロキシエチルメタクリル酸)(PHEMA)、ポリ(エチレングリコール)(PEG)、ポリ(酸化エチレン)(PEO)、ポリ(ビニルアルコール)(PVA)、ポリ(ビニルピロリドン)(PVP)、ポリ(thyloxazoline)(PEOX)、又はこれらの組み合わせ(例えば、PEGとアルギン酸塩との混合物)などの、不飽和の官能基または誘導体を有する水溶性合成ポリマー、あるいは、ポリ(グリコール酸)(PGA)、ポリ(乳酸)(PLA)、これらの共重合体(PLA-GA)、又はポリテトラフルオロエチレン(PTFE)などの、より疎水性又は不溶性ポリマーといった、物理的または化学的に架橋可能なポリマーからなる、ヒドロゲルなどの少なくとも1つのカプセル化のための材料内に細胞や組織を包むこと、及び
治療を必要とする個体に対して、皮下注射または移植、あるいは器官実質への直接注射、又は器官の血管系を介した注射によって器官へ直接、カプセル化した細胞または組織を治療上効果量投与すること。
a)細胞または組織を提供すること、
b)前記細胞または組織について、アルギン酸塩、アガロース、キトサン、ポリ(アミノ酸)、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、デキストラン、デキストラン硫酸、ヘパリン、ヘパリン硫酸、ヘパラン硫酸、ジェランガム、キサンタンガム、グアーガム、水溶性セルロース誘導体、カラゲナンなどの多糖類、ゼラチン、コラーゲン、アルブミンなどのタンパク質、メタクリル酸メチル(MMA)、2-ヒドロキシエチルメタクリル酸(HEMA)、ポリエチレングリコール(PEG)、ポリ(酸化エチレン)(PEO)、ポリ(ビニルアルコール)(PVA)、ポリ(ビニルピロリドン)(PVP)、ポリ(thyloxazoline)(PEOX)、又はこれらの組み合わせ(例えば、PEGとアルギン酸塩との混合物)などの、水溶性合成ポリマー又はその誘導体、あるいは、ポリ(グリコール酸)(PGA)、ポリ(乳酸)(PLA)、これらの共重合体(PLA-GA)、又はポリテトラフルオロエチレン(PTFE)などの、より疎水性又は不溶性ポリマーといった、物理的または化学的に架橋可能なポリマーからなる、ヒドロゲルなどの少なくとも1つのカプセル化のための材料内に細胞や組織を包むこと、及び
c)治療を必要とする個体に対して、皮下注射または移植、あるいは器官実質への直接注射、又は器官の血管系を介した注射によって器官へ直接、カプセル化した細胞または組織を投与すること。
定義
(a) 個体の予防的治療。特に疾患または不具合の素因をもつことがわかったが、まだ疾患とは診断されていない場合。
(b) 疾患または不具合を阻害すること。及び/又は、
(c) 疾患または不具合を、全部又は一部除去すること。及び/又は、
(d) 個体の健康および安寧を改善すること。
本発明の好ましい実施形態
細胞起源
疾患治療
コンフォーマルコーティング成分
モノマーまたはマクロマー
光重合開始用染料
共触媒またはラジカル発生剤
促進剤またはコモノマー
粘度増強剤
密度調整剤
放射線波長
マウス膵島細胞の単離
18週齢で33グラムの平均的な大きさのドナーマウス[C57BL/6]が供給者から得られ、使用された。膵臓は、安楽死後の開腹手術によって摘出された。膵臓は、Sigma社のコラゲナーゼ(Type V)によって処理された。膵臓は、取り除かれ、単離場所の研究所に輸送される間、冷コラゲナーゼ中に保持された。単離プロセスは、消化処理のために30の膵臓片を組み合わせた。消化物は、10%ウシ胎児血清を含むRPMIによって洗浄され、遠心分離された。COBEが精製のため調製され、勾配密度を作るために連続的な勾配マーカーが使用された。精製プロセスを行うため、まずCOBEに勾配(gradient)が加えられ、膵臓の消化物が上部に乗せられた。精製した膵島は回収され、RPMI溶媒で洗浄された。膵島は、カプセル化の準備ができるまで、T75フラスコにおいて10%ウシ胎児血清を含む改変ICM培地で培養された。
霊長類膵島細胞の単離
実施例2
コンフォーマルコーティング材料の調製
実施例3
膵島のカプセル化
マウス膵島のカプセル化
霊長類膵島のカプセル化
実施例4
カプセル化膵島のin vitroでの特徴
実施例5
コンフォーマルコーティングされた膵島のマウスへの移植
実施例6
霊長類カニクイザルでのカプセル化膵島の皮下移植
レシピエント霊長類
膵島移植
薬物治療
代謝試験
部検
検査分析
薬物治療なしのストレプトゾトシン誘発糖尿病レシピエント
ストレプトゾトシン誘発糖尿病レシピエントへの30日間の低用量シクロスポリン投与
経口ブドウ糖負荷試験の結果
糖化ヘモグロビンの結果
カニクイザルでのカプセル化膵島の皮下移植のまとめ
実施例7
ヒヒへのカプセル化膵島の皮下移植
外科的手法
薬物治療
モニタリング
部検
ストレプトゾトシン糖尿病ヒヒの同種移植用カプセル化膵島
実施例8
PEG付およびPEGなしアルギン酸塩マイクロカプセルでカプセル化された細胞
アルギン酸塩マイクロカプセルでの膵島のコーティング
PEGを用いたアルギン酸塩マイクロカプセル膵島のコーティング
アルギン酸マイクロカプセルおよび非糖尿病霊長類皮下への異種移植としてブタ膵島を含むアルギン酸/PEGマイクロカプセルの移植
糖尿病霊長類の腹腔へのアルギン酸塩/PEGマイクロカプセルでカプセル化したブタ膵島の異種移植
異なるタンパク質選択透過性の膵島含有アルギン酸塩/PEGコートマイクロカプセルの生産
実施例9
膵島以外の細胞種類のアルギン酸塩/PEGコーティング
実施例10
アルギン酸塩とPEGポリマー混合物の共押出の使用による、膵島または他の細胞上でのアルギン酸/PEGコーティングの形成
PEGマイクロカプセルでの膵島のカプセル化
実施例11
マイクロビーズ上での膵島細胞または他の細胞のコンフォーマルコーティング
実施例12
PEGコンフォーマルコーティングによってカプセル化される他の細胞種類
実施例13
マイクロカプセル又はコンフォーマルコーティングでカプセル化された膵島治癒量の評価
マイクロカプセル又はコンフォーマルコーティングでカプセル化された細胞数の評価
実施例14
アルギン酸塩/PEGマイクロカプセルの特性
実施例15
PEGコーティングでコンフォーマルコーティングされ、血管由来成長因子を産生する遺伝子改変された細胞を用いた虚血性筋肉移植
実施例16
種々の疾患治療のための、PEGコンフォーマルコーティング膵島、肝細胞又は遺伝子改変細胞の脾臓移植、
実施例17
疾患または不具合の治療のための、CNS 剤運搬用カプセル化細胞の包膜内注入
実施例18
疾患、または実際の腫瘍や潜在的腫瘍の危険から外科的に除去され、副甲状腺または副腎細胞の機能を自らは持たない患者の筋肉、脾臓または肝臓へのカプセル化副甲状腺または副腎細胞の移植
実施例19
遺伝疾患治療用のカプセル化細胞の移植
実施例20
成長率または乳生産を増加させるため、農場または動物生産での成長ホルモン産生カプセル化細胞の使用
Claims (92)
- 約900ダルトンから約3,000ダルトンの間の分子量を有するポリエチレングリコール(PEG)コーティングを有する複数のカプセル状構造物と、
上記カプセル状構造物でカプセル化された複数の細胞とを含み、少なくとも約100,000 cells/mlの細胞密度を有する、細胞治療用組成物。 - 上記カプセル状構造物は、マイクロカプセルである、請求項1記載の組成物。
- 上記マイクロカプセルは、コンフォーマルコーティングされた細胞集合体である、請求項2記載の組成物。
- 上記細胞集合体は、膵島である、請求項3記載の組成物。
- 細胞密度は、少なくとも約6,000,000 cells/ml である、請求項4記載の組成物。
- 細胞は、神経、心血管、肝臓、内分泌、皮膚、造血、免疫、神経分泌の各細胞、代謝的、組織的、および遺伝的な細胞からなる群から選ばれる、請求項1記載の組成物。
- 細胞は、自己由来、同種異系、異種、および遺伝的に改変されたものからなる群から選ばれる、請求項6記載の組成物。
- 内分泌細胞は、インスリン産生細胞である、請求項7記載の組成物。
- 平均直径400μm未満の複数のカプセル状構造物を含み、当該カプセル状構造物はカプセル化のための材料でカプセル化された細胞を含むものであって、少なくとも約500,000 cells/mlの細胞密度を有する、治療上有効な組成物。
- カプセル状構造物の平均直径は300ミクロン未満である、請求項9の治療上有効な組成物。
- カプセル状構造物の平均直径は200ミクロン未満である、請求項9の治療上有効な組成物。
- カプセル状構造物の平均直径は100ミクロン未満である、請求項9の治療上有効な組成物。
- カプセル状構造物の平均直径は50ミクロン未満である、請求項9の治療上有効な組成物。
- 平均直径400μm未満の複数のカプセル状構造物を含み、当該カプセル状構造物はカプセル化の材料でカプセル化された細胞を含むものであって、細胞容量に対するカプセル状構造物の容量の比率が約20:1より少ない、治療上有効な組成物。
- 細胞容量に対するカプセル状構造物の容量の比率が約10:1より少ない、請求項14の治療上有効な組成物。
- 細胞容量に対するカプセル状構造物の容量の比率が約2:1より少ない、請求項14の治療上有効な組成物。
- 疾患または不具合に対する動物の治療に用いられる、請求項1〜16のいずれか1項に記載の組成物。
- 疾患または不具合は、神経、心血管、肝臓、内分泌、皮膚、造血、免疫、神経分泌のもの、代謝的、組織的、および遺伝的なものからなる群から選択される、請求項17記載の組成物。
- 内分泌性疾患は、糖尿病である、請求項18記載の組成物。
- 動物は、偶蹄目、食肉目、クジラ目、奇蹄目、霊長類、ゾウ目、およびウサギ目からなる群から選択される獣類亜綱目である、請求項17記載の組成物。
- 動物は、ヒトである、請求項20記載の組成物。
- 注射可能な組成物として用いられる、 請求項17記載の組成物。
- 皮下、筋肉内、臓器内、器官の動脈/静脈血管内、脳脊髄液、及びリンパ液からなる群から選択される移植部位で用いられる、請求項20記載の組成物。
- 移植部位は、皮下である、請求項23記載の組成物。
- シリンジ内の注射可能な組成物である、請求項22記載の組成物。
- 免疫抑制剤または抗炎症剤と併用される、請求項17記載の組成物。
- 免疫抑制剤または抗炎症剤の投与期間は、6月未満である、請求項26記載の方法。
- 免疫抑制剤または抗炎症剤の投与期間は、1月未満である、請求項27記載の方法。
- 疾患または不具合の治療のための移植可能な薬剤の調製における、請求項1〜16のいずれか1項に記載の組成物の使用。
- 疾患または不具合は、神経、心血管、肝臓、内分泌、皮膚、造血、免疫、神経分泌のもの、代謝的、組織的、および遺伝的なものからなる群から選択される、請求項29記載の使用。
- 内分泌性疾患は、糖尿病である、請求項30記載の使用。
- 動物は、偶蹄目、食肉目、クジラ目、奇蹄目、霊長類、ゾウ目、およびウサギ目からなる群から選択される獣類亜綱目である、請求項29記載の使用。
- 動物は、ヒトである、請求項32記載の使用。
- 薬剤は、注射可能な組成物である、請求項29記載の使用。
- 薬剤は、皮下、筋肉内、臓器内、器官の動脈/静脈血管内、脳脊髄液、及びリンパ液からなる群から選択される移植部位で用いられる、請求項29記載の使用。
- 移植部位は、皮下である、請求項35記載の使用。
- 薬剤は、シリンジ内の注射可能な組成物である、請求項34記載の使用。
- 薬剤は、免疫抑制剤または抗炎症剤と併用される、請求項29記載の使用。
- 免疫抑制剤または抗炎症剤の併用投与は、6月未満である、請求項38記載の使用。
- 免疫抑制剤または抗炎症剤の併用投与は、1月未満である、請求項39記載の方法。
- 組織は、一群のインスリン産生細胞である、請求項45記載の方法。
- 細胞は、インスリン産生細胞である、請求項46記載の方法。
- カプセルで包んだ生物材料は、PEGでコンフォーマルコーティングされた膵島の同種移植である、請求項41記載の方法。
- 第1及び第2のバッファーは、1〜200mMである、請求項41記載の方法。
- 第1及び第2のバッファーは、10〜50mMである、請求項49記載の方法。
- 第1及び第2のバッファーは、20mMである、請求項50記載の方法。
- 光重合開始剤は、カルボキシエオシン、エチルエオシン、エオシンY、フルオレセイン、2,2-ジメトキシ, 2-フェニルアセトフェノン、2-メトキシ, 2-フェニルアセトフェノン、カンホルキノン、ローズベンガル、メチレンブルー、エリトロシン、フロキシン、チオニン、リボフラビン、及びメチレングリーンからなる群から選択される、請求項41記載の方法。
- 光重合開始剤は、カルボキシエオシンである、請求項52記載の方法。
- 光学活性ポリマー溶液は、重合可能で高密度に不飽和化したPEGおよびスルホン化コモノマーを含む、請求項41記載の方法。
- 重合可能で高密度に不飽和化したPEGは、重合可能で高密度にアクリル酸化したPEGである、請求項54記載の方法。
- 重合可能で高密度にアクリル酸化したPEGは、1.1kDの分子量を有する、請求項55記載の方法。
- スルホン化コモノマーは、2-アクリルアミド-2-メチル-1-プロパンスルホン酸、ビニルスルホン酸、4-スチレンスルホン酸、3-スルホプロピルアクリル酸、3-スルホプロピルメタクリル酸、及び、n-ビニルマレイミドスルホン酸からなる群から選択される、請求項54記載の方法。
- スルホン化コモノマーは、2-アクリルアミド-2-メチル-1-プロパンスルホン酸である、請求項57記載の方法。
- 光学活性ポリマー溶液は、トリエタノールアミン、トリエチルアミン、エタノールアミン、N-メチルジエタノールアミン、N,N-ジメチルベンジルアミン、ジベンジルアミノN-ベンジルエタノールアミン、N-イソプロピルベンジルアミン、テトラメチルエチレンジアミン、過硫酸カリウム、テトラメチルエチレンジアミン、リジン、オルニチン、ヒスチジン及びアルギニンからなる群から選択される共触媒をさらに含む、請求項54記載の方法。
- 共触媒は、トリエタノールアミンである、請求項59記載の方法。
- 光学活性ポリマー溶液は、N-ビニルピロリジノン、2-ビニルピリジン、1-ビニルイミダゾール、9-ビニルカルバゾン、9-ビニルカルバゾール、アクリル酸、n-ビニルカルポラクタム、2-アリル-2-メチル-1,3-シクロペンタンジオン、及び、2-ヒドロキシエチルアクリル酸からなる群から選択される促進剤をさらに含む、請求項54記載の方法。
- 促進剤は、N-ビニルピロリジノンである、請求項61記載の方法。
- 光学活性ポリマー溶液は、天然ポリマー及び合成ポリマーからなる群から選択される粘度増強剤をさらに含む、請求項54記載の方法。
- 粘度増強剤は、3.5kD PEG-トリオールおよび4kD PEG-ジオールからなる群から選択される、請求項63記載の方法。
- 光学活性ポリマー溶液は、密度調整剤をさらに含む、請求項54記載の方法。
- 密度調整剤は、ナイコデンツ及びフィコールからなる群から選択される、請求項65記載の方法。
- 光学活性ポリマー溶液は、“Good”バッファーをさらに含む、請求項54記載の方法。
- “Good”バッファーは、HEPES及びMOPSからなる群から選択される、請求項67記載の方法。
- “Good”バッファーは、MOPSである、請求項68記載の方法。
- エネルギ源は、アルゴンレーザである、請求項54記載の方法。
- 生物材料は、神経、心血管、肝臓、内分泌、皮膚、造血、免疫、神経分泌のもの、代謝的、組織的、および遺伝的なものからなる群から選択される、請求項41記載の方法。
- 生物材料は、哺乳綱の獣類亜綱目の動物のものである、請求項41記載の方法。
- 動物は、偶蹄目、食肉目、クジラ目、奇蹄目、霊長類、ゾウ目、およびウサギ目からなる群から選択される獣類亜綱目である、請求項72記載の方法。
- 霊長類は、ヒトである、請求項73記載の方法。
- 900ダルトンから3,000ダルトンの間の分子量を有し、重合可能で高密度に不飽和したPEG、およびスルホン化コモノマーを含む、生物材料をカプセル化するための組成物。
- 重合可能で高密度に不飽和化したPEGは、高密度にアクリル酸化したPEGである、請求項75記載の組成物。
- 重合可能で高密度にアクリル酸化したPEGは、1.1kDの分子量を有する、請求項76記載の組成物。
- スルホン化コモノマーは、2-アクリルアミド-2-メチル-1-プロパンスルホン酸、ビニルスルホン酸、4-スチレンスルホン酸、3-スルホプロピルアクリル酸、3-スルホプロピルメタクリル酸、及び、n-ビニルマレイミドスルホン酸からなる群から選択される、請求項75記載の組成物。
- スルホン化コモノマーは、2-アクリルアミド-2-メチル-1-プロパンスルホン酸である、請求項78記載の組成物。
- トリエタノールアミン、トリエチルアミン、エタノールアミン、N-メチルジエタノールアミン、N,N-ジメチルベンジルアミン、ジベンジルアミノN-ベンジルエタノールアミン、N-イソプロピルベンジルアミン、テトラメチルエチレンジアミン、過硫酸カリウム、テトラメチルエチレンジアミン、リジン、オルニチン、ヒスチジン及びアルギニンからなる群から選択される共触媒をさらに含む、請求項75記載の組成物。
- 共触媒は、トリエタノールアミンである、請求項80記載の組成物。
- N-ビニルピロリジノン、2-ビニルピリジン、1-ビニルイミダゾール、9-ビニルカルバゾン、9-ビニルカルバゾール、アクリル酸、n-ビニルカルポラクタム、2-アリル-2-メチル-1,3-シクロペンタンジオン、及び、2-ヒドロキシエチルアクリル酸からなる群から選択される促進剤をさらに含む、請求項75記載の組成物。
- 促進剤は、N-ビニルピロリジノンである、請求項82記載の組成物。
- 組成物は、少なくともスコア約「2」で生体適合性である、請求項75記載の組成物。
- 組成物は、哺乳類に生体適合性である、請求項84記載の組成物。
- 組成物は、亜人霊長類に生体適合性である、請求項85記載の組成物。
- 組成物は、ヒトに生体適合性である、請求項86記載の組成物。
- 組成物は、選択透過性を有する、請求項75記載の組成物。
- 選択透過性は、組成物を加工することによって得ることができる、請求項88記載の組成物。
- 組成物は、少なくともスコア約「2」で細胞機能許容性を有する、請求項75記載の組成物。
- 組成物は、哺乳類で細胞機能許容性を有する、請求項90記載の組成物。
- 組成物は、亜人霊長類で細胞機能許容性を有する、請求項91記載の組成物。
- 組成物は、ヒトで細胞機能許容性を有する、請求項92記載の組成物。
- 生分解性である、請求項75記載の組成物。
- 哺乳類で生分解性である、請求項94記載の組成物。
- 亜人霊長類で生分解性である、請求項95記載の組成物。
- ヒトで生分解性である、請求項96記載の組成物。
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