JP2006306898A - 二次性免疫不全症の治療法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】患者における細胞性免疫不全症を治療する方法であって、細胞性免疫不全症の存在を決定する工程、および胸腺ペプチドの有効量を、天然サイトカイン製剤の有効量と共に、患者に共投与する工程を含み、上記胸腺ペプチドが、チモシンα1、チモシンα1類似体、チモシンα1フラグメント、チモシンα11、プロチモシン並びにチモシンα1配列を含む胸腺ペプチド、類似体およびフラグメントからなる群から選択される、治療方法。
【選択図】なし
Description
本発明は、改良された細胞性免疫不全症の治療方法に関する。
近年、免疫系を調節してその応答を改善することが可能になってきており、この場合、その系の成分はその成分の機能を部分的または完全に回復するのに非機能性である。例えば、幹細胞を置換し、または欠けている幹細胞を与えるのに使用される骨髄移植がひどい複合免疫不全症を治癒することができる。別の例において、免疫細胞が癌患者から除去され、治療され、腫瘍退縮がある患者に戻される(非特許文献1;非特許文献2)。更に、γ−グロブリン及び静脈内免疫グロブリン(IVIG)の如き体液性免疫系の成分は広い治療用途があることが知られている(非特許文献3;非特許文献4)。また、その他の免疫系成分が治療薬として使用されている(非特許文献5;非特許文献6;Talmadge及びHadden,1994)。
本発明により、細胞免疫不全症の存在を測定し、かつ細胞免疫不全症の患者に、チモシンα1等の胸腺ペプチドの効果的な量と天然のサイトカイン製剤の効果的な量とを共に投与する工程により、細胞免疫不全症の動物又は患者を治療する方法を提供する。
(項目1)
患者における細胞性免疫不全症を治療する方法であって、
細胞性免疫不全症の存在を決定する工程、および
胸腺ペプチドの有効量を、天然サイトカイン製剤の有効量と共に、患者に共投与する工程、を含む上記治療方法。
(項目2)
該胸腺ペプチドが、チモシンα1、チモシンα1類似体、チモシンα1フラグメント、チモシンα11、プロチモシン並びにチモシンα1配列を含む胸腺ペプチド、類似体およびフラグメントからなる群から選択される、項目1に記載の方法。
(項目3)
該胸腺ペプチドがチモシンα1である、項目2に記載の方法。
(項目4)
天然サイトカイン製剤が、天然サイトカイン混合物(NCM)、天然インターロイキン混合物(NIM)および天然インターロイキン製剤(NI)からなる群から選択される、項目1に記載の方法。
(項目5)
IL−1を10−2000pg/ml、IL−2を100−500単位/ml、IL−6を250−10,000pg/ml、IL−8を12,000−100,000pg/ml、IL−12を100−10,000pg/ml、IFN−γを50−15,000pg/ml、TNF−αを50−15,000pg/ml、CSF−Gを50−1500pg/ml、CSF−GMを10−1560pg/ml、および微量のIL−3、IL−4、IL−7を含むサイトカインプロフィールを含む項目4に記載のサイトカインの天然混合物。
(項目6)
治療される細胞性免疫不全症が、加齢、癌、HIV感染および他の急性および慢性感染により生じる細胞性免疫不全症群から選択される、項目1に記載の方法。
本発明は、免疫調節物質としての天然サイトカイン製剤を、チモシンα1のような胸腺ペプチドとともに投与することによって、細胞免疫不全を治療する方法を提供する。免疫調節物質は、免疫機能を調節し又は免疫系の活性に対して正又は負の効果を有し、かつサイトカインを含む化合物である。
IL−1 10−2000 pg/ml
IL−2 100−500単位/ml
IL−6 250−10,000pg/ml
IL−8 12,000−100,000pg/ml
IL−12 100−10,000pg/ml
IFN−γ 50−15,000pg/ml
TNF−α 50−15,000pg/ml
CSF−G 50−1500pg/ml
CSF−GM 10−1500pg/ml
IL−3/IL−4/IL−7 痕跡量
必要により、複合治療薬またはその成分は無菌の安定な凍結乾燥製剤にされ、その中で活性成分が水溶性キャリヤー、及び必要により、安定剤または無毒性防腐剤と混合される。抗菌性防腐剤、酸化防止剤、キレート剤、及び緩衝剤を含む組成物の安定性、無菌性、及び等張性を増強するこれらの種々の添加剤が使用し得る。微生物の作用の防止はシプロフロキサシンの存在及び種々の抗菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸等により確実にし得る。多くの場合、等張剤、例えば、糖、塩化ナトリウム等を含むことが望ましいであろう。注射可能な医薬形態の延長された吸収は、吸収を遅延する薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンの使用によりもたらされる。しかしながら、本発明によれば、使用されるあらゆるビヒクル、希釈剤、または添加剤もしくは送出ビヒクルはNCMと適合性にされる必要があり、また本発明の生物活性を変化しないであろう。
細胞培養に関する全ての工程を無菌条件下で行う。本明細書に記載されなかった細胞免疫学の全般の方法を、細胞免疫学技術に関する一般的な文献、例えば、Mishell及びShiigi(1981)に記載されたようにして、また当業界で知られているようにして行う。
チモシンフラクションV(TF5)および精製したチモシン−α1は、A.Goldstei博士(George Washington School of Medicine(Washington D.C.))から得た。うしTF5は、チモシン−α1、チモポエチンおよびチムリンを含む多数の胸腺ペプチドを含むことが知られている。
多数のHIV陰性、肝炎ウイルス陰性のドナーからのヒト血液のバフィコート白血球を回収する。別の実施態様において、動物は獣医学上の使用のための細胞源であり得る。ドナーからの細胞を溜め、フィコールハイペーク勾配(Pharmacia)の上で層形成して好中球及び赤血球を含まないリンパ球を得る(米国特許第4,390,623号及び同第4,448,879号)。当業界で知られているような同じ出発リンパ球集団をもたらす別法が使用し得る。
サイトカイン含量をIL−2についてバイオアッセイにより、また残りのインターロイキンIL−1〜IL−15、CSF、TNF、及びIFNについてELISAにより測定することにより、溜めた上澄みを特性決定する。無菌性をチオグルコレートブロース中の培養により試験し、内毒素を当業界で知られているようにリムルス細胞分解産物アッセイにより測定する。
比較を行うことができるように、夫々の上澄みを投与された濃度または量により標準化する。特に、各上澄み液に対するIL−2当量が使用される。
使用する場合、DNA及びウイルス排除は限外濾過、エタノール分別、ポリエチレングリコール/ベントナイト沈殿、および/または静脈内γグロブリン及びモノクローナル抗体に使用されたような溶媒/洗剤処理(例えば、IGIV News Updateパンフレット)の如き技術を使用するであろう。光化学的失活化、アルミニウムフタロシアニンまたはガンマ線照射を使用してもよい。
特に示されない限り、老化マウスにおけるヒドロコルチゾン誘導胸腺退縮のモデルを使用した(Haddenら,1992)。
胸腺が退縮し始めた雌BALB/c(Life Science,St.Petersburg,FL)老化した引退したブリーダーマウス(8−9ケ月)をin vivo試験に使用した。マウスを体重マッチングし、5匹のグループでランダムに溜めた。動物に随時飲用水とともに通常の実験食で給餌した。対照グループを除く、全てのマウスを連続2日間にわたってヒドロコルチゾン(0.9%の塩化ナトリウム0.1 ml中5mg/マウス)で腹腔内(i.p.)処理して化学的胸腺除去及び脾臓重量の減少を誘導した。
夫々の処理グループは5匹の動物を有し、夫々の実験を2〜5回繰り返した。
処理を3日目に腹腔内(i.p.)で開始し、合計5日間にわたって毎日1回続けた。
処理グループに本明細書に示されたようにして下記のin vivo処理の一つを注射した。
1.発熱物質を含まない食塩水(対照);
2.チモシンフラクションアルファ1(TFα1;投与量は明細書に示された通り);
3.チモシンフラクション5(TF5;100μg/マウス);
4.天然サイトカイン混合物(NCM;50単位IL−2当量)
5.NCM+TF5(夫々、50単位および100μg)
6.NCM+チモシンα1(夫々、50単位および5mg)
8日目に、マウスを計量し、頸部脱臼により犠牲にし、それらの脾臓及び胸腺を除去し、計量した。臓器を細断し、塩化アンモニウムを使用して残留赤血球を溶解し(Mishell及びShiigi「Selected Methods in Cellular Immunology」,1981)、細胞をカウントした。
1.対照希釈剤(完全RPMI 1640培地):
2.rIL−1(1ng/ml);
3.rIL−2(16単位/ml);
4.NCM(2単位/mlのIL−2当量)
5.コンカナバリンA(Con A;1.5μg/ml)
6.植物性血球凝集素(PHA;0.5μg/ml)
培養を終了して、トリチウム標識チミジン(3H−チミジン;New England Nuclear,Boston,MA;比活性6.7Ci/mM)の18時間パルスでDNA合成、ひいては細胞増殖を測定し、多重自動サンプル回収装置で回収、液体シンチレーションカウンティングのために処理した。結果を夫々の動物について四つのサンプルからのcpmの算術平均として表した。異なる動物で得られたデータの代表を簡素化するために、異なる動物による結果を溜め、一緒に計算し、幾つかの場合にコントロール+標準偏差(SEM)に対する比として表した。
スチューデントTテストを使用して適当にデータを分析した。
一連の実験において、退縮した胸腺を持つマウスを、NCM、チモシンα1、チモシンフラクションV、これらのファクターの組合せ、及び生理食塩水すなわち培地コントロールによりインビボで処理した。脾臓と胸腺を取り出し、これらの細胞を、インターロイキン(IL1、IL2、NCM)又はマイトジェン(PHA;ConA)によるインビトロでの刺激に対する細胞増殖応答について試験した。
脾臓及び胸腺の両者の応答重量へのNCMとチモシンα1の効果が、表IVに示される。
Claims (1)
- 患者における細胞性免疫不全症を治療する方法であって、
細胞性免疫不全症の存在を決定する工程、および
胸腺ペプチドの有効量を、天然サイトカイン製剤の有効量と共に、患者に共投与する工程、を含む上記治療方法。
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