JP2005247736A - メラニン産生促進剤 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】Ranunculaceae(キンポウゲ科)Nigella(クロタネソウ)属植物あるいはその抽出物を有効成分として含有し、外用剤や経口投与剤とすることができる。
【効果】メラニン産生促進効果に優れたものであり、外用剤、経口投与剤などとして好適に使用することができ、白毛症または白髪等のメラニン産生不全に基づく毛髪の症状又は状態を予防し、改善し若しくは治療することができる。
Description
本発明において、白毛症の治療剤とは白毛の症状を予防し、改善しおよび/又は治療する薬剤を意味し、白髪改善剤とは、白髪を予防し、および/又は改善する化粧料を意味する。
一方、メラニン産生能の欠落あるいは低下の結果、加齢に伴い白毛症がおこる。白毛症とは限局性島状に白色の毛の生ずる現象をいい、毛嚢内のメラノサイトのチロシナーゼの酵素活性の不全に伴うメラニン形成低下が主因である。このメラニンは、動植物界に広く分布しているが、脊椎動物においては、メラノサイト中に細胞質顆粒メラノソームで、チロシンがチロシナーゼにより酸化されて、ドーパ、ドーパキノンが生合成され、さらにドーパキノンは紫外線による自動酸化によってインドールキノンになり、複雑な経路を経てメラニンが生合成されることが知られている。
しかし、白毛症や白髪化の治療法または対処法としては、もっぱら染剤で染めるのがほとんどで、治療剤としても種々の毛髪用化粧料が報告されているが、根本的な治療剤として広く応用されるに至っているものはない。
すなわち、本発明のメラニン産生促進剤は、Ranunculaceae(キンポウゲ科)Nigella(クロタネソウ)属植物あるいはその抽出物を有効成分として含有するものである。好ましくはNigella(クロタネソウ)属植物が特にその種子(ブラックシード(Black Seed)あるいはブラッククミン(Black Cumin))の抽出物を有効成分として含有するものである。
本発明において、Nigella(クロタネソウ)属植物の抽出物は常法により得ることができる。例えば植物の種子、葉、根、根茎、茎などを水および/または有機溶媒を用いて抽出して抽出液を得る一般公知の方法を用いることができる。さらにこの抽出液から凍結乾燥、噴霧乾燥、減圧留去など一般公知の溶媒除去方法により粉末を得ることができる。有機溶媒としては、例えばメタノール、エタノール、プロパノール、ブタノールなどの炭素数1〜4の低級アルコール、エチルエーテル、メチルエーテルなど炭素数2〜4のエーテルやアセトン、メチルエチルケトンなど炭素数3〜4のケトンなどが挙げられる。これらの中で、特にエタノールが好ましい。また、これらの溶媒は単独でも、2種以上を組み合わせて使用してもよく、水とこれらの有機溶媒を混合して使用してもよい。
さらに、これらの抽出液や粉末を、カラムクロマトグラフィーなどを用いて精製することにより、単一成分としたものを用いることもできる。
これらの外用剤は、全組成中に、前記植物およびその抽出物を、乾燥固形分(抽出物の場合は抽出に用いた植物の乾燥固形分)として0.0001〜20重量%、特に0.01〜10重量%配合するのが好ましく、通常の方法に従って製造することができる。その際には、前記植物およびその抽出物のほか、通常の皮膚外用剤又は頭髪用化粧料に用いられる成分、例えば油剤、界面活性化剤、保湿剤、薬効成分、アルコール類、防腐剤、増粘剤、色素、香料などを、本発明の効果を損なわない範囲で適宣組み合わせて配合することができる。
参考例1
Nigella damascena(クロタネソウ)の種子10gを粉砕した後、100mlの50%エタノールで2時間2回熱時抽出後ろ過した。ろ液を減圧下で溶媒を留去し、その後凍結乾燥したエキス(収率17.9%)を被検体Aとした。同様に、メタノールで抽出後、ろ過し、ろ液を減圧下で溶媒を留去し得たエキス(収率11.8%)を被検体Bとした。
参考例1で得られた被検体A(50%エタノール抽出エキス)のメラニン産生促進作用を調べた。
細胞培養法;マウス由来のB16培養メラノーマ細胞を10%ウシ胎児血清(FBS、インビトロジェン社製)を含むD-MEM培地(インビトロジェン社製、以下D−MEM培地とする)で2×104cells/ウェル(6穴プレート)/1.9mlに調整し、CO2インキュベータ(5%CO2)内、37℃の条件下で24時間予備培養した。被検体を最終濃度が10および50μg/mLになるように、ジメチルスルホキシド(DMSO)、PBS(リン酸緩衝食塩水)の1:1溶液に溶解した。対照群にはDMSO、PBSの1:1溶液を用いた。この溶液4μlをD−MEM培地96μlの割合で希釈し、100μlを培養プレート中に添加した。なお、DMSOの最終濃度は0.1%に調整した。さらに3日間培養を継続し、以下の方法で細胞内および細胞外メラニン量を測定した。
細胞外メラニンの測定;等量の0.4M HEPES buffer(pH6.8)/エタノール(9:1、v/v)添加でpHを調整した培地の上清(700×g、10分間、4℃の遠心分離で調製)の吸光度(475nm)より細胞外メラニン量を求めた。
実験結果を表1に示す。表1から明らかなように、Nigella damascena(クロタネソウ)の種子から得た抽出エキスを添加して培養すると、B16メラノーマ細胞内および培養液中のメラニン量が増加し、Nigella damascena(クロタネソウ)の種子にメラニン産生促進作用が明らかになった。
参考例1で得られた抽出エキスのin vitro リダクターゼ阻害作用を調べた。
1.粗酵素液(S−9)の調製;24時間絶食した5週令のSlc:SD系雄性ラットの肝臓を氷冷したクレープス−リンガー液で潅流した。これに5倍量の氷冷したトリス−塩酸緩衝液(10mM、pH7.2)を加え、攪拌し、900×gで10分間遠心分離した。この上清を5000×gで10分間遠心分離し、さらに上清を9000×gで10分間遠心分離し、その上清をリダクターゼを含む粗酵素液(S−9)とした。S−9のタンパク量を14mg/mlに調整し、−80℃で凍結保存した。
阻害率(%)=(試験液を加えたときのテストステロン量−コントロール30分のテストステロン量)/(コントロール0分のテストステロン量−コントロール30分のテストステロン量)×100
・コントロール0分のテストステロン量:トリス−塩酸緩衝液、テストステロン、試験液および酵素液を混和した後に、NADPHを加える前に、ジクロロメタンを加えて反応を起こさないようにした時のテストステロン量
・コントロール30分のテストステロン量:試験液の代わりに、50%エタノール溶液を用いて、反応を行った時のテストステロン量
実験結果を表2に示す。表2から明らかなように、Nigella damascena(クロタネソウ)の種子から得た抽出液はリダクターゼ阻害作用を示した。
Claims (6)
- Ranunculaceae(キンポウゲ科)Nigella(クロタネソウ)属植物またはその抽出物を含有することを特徴とする毛髪用のメラニン産生促進剤。
- メラニン産生促進剤が白毛症の治療剤である、請求項1のメラニン産生促進剤。
- メラニン産生促進剤が白髪改善剤である、請求項1のメラニン産生促進剤。
- 外用剤であることを特徴とする、請求項1から3のいずれかに記載のメラニン産生促進剤。
- 経口投与剤であることを特徴とする、請求項1から3のいずれかに記載のメラニン産生促進剤。
- Nigella(クロタネソウ)属植物がブラックシード(Black Seed)あるいはブラッククミン(Black Cumin)である、請求項1から5のいずれかに記載のメラニン産生促進剤。
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