JP2005200386A - リパーゼ阻害効果、脂肪吸収抑制効果及びコレステロール吸収抑制効果を有する薬剤 - Google Patents

Abstract

【課題】リパーゼ阻害効果、脂肪吸収抑制効果及びコレステロール吸収抑制効果に優れ、えぐ味が少なく、食品への添加や加工も容易であり、胆汁酸の再吸収阻害効果があり、安全性が高く摂取し易い薬剤、及び該薬剤を含むリパーゼ阻害効果、脂肪吸収抑制効果及びコレステロール吸収抑制効果を有する食品を提供する。
【解決手段】塩基性基で修飾された多糖を含む薬剤、及び該薬剤を含む食品である。
【選択図】なし

Description

本発明は、リパーゼ阻害効果、脂肪吸収抑制効果及びコレステロール吸収抑制効果を有する薬剤、並びにこの薬剤を含む食品に関する。

食物繊維にはコレステロールや脂肪の吸収抑制効果のあることが知られている。しかし、食物繊維は安全性は高いが、それのみでは効果が低く、コレステロールや脂肪の吸収抑制効果をあげるためには、多量の摂取が必要になる。ところが、例えばアルギン酸のような食物繊維は、水に対する溶解度が非常に低いうえゲル化するため、多量に摂取することが難しい。また食物繊維の過剰摂取によりミネラルの体内吸収抑制等の弊害が生じることもある。

食物繊維の一種であるキトサンは、他の食物繊維と比較して、脂肪消化吸収抑制作用において優れていることが動物実験によって知られている（例えば、非特許文献１参照）。
しかし、キトサンは殆ど水に溶解しないため、飲料等の液体として摂取する場合には、乳酸や酢酸等の有機酸を用いて可溶化する必要がある。また、キトサンは強烈なえぐ味を有するため、そのままでは飲料に配合することが難しい。更に、キトサンを服用するとキトサンと脂質の重合体が形成されるため、糞便が固くなり、頻繁に便秘が起きる等の副作用の可能性が指摘されている。

血中コレステロール濃度を低下させる方法としては、スチレン系樹脂に官能基として脂肪族四級アンモニウム塩を固定した塩基性陰イオン交換樹脂を経口投与して胆汁酸を吸着する療法が従来から知られている（例えば、特許文献１、２及び３）。しかし、この療法では、一日当りの服用量が８〜１６ｇ／日と多く、該陰イオン交換樹脂が水にも溶解しないため、非常に飲みにくいという欠点があった。

米国特許第３４９９９６０号明細書 米国特許第３７８０１７１号明細書 特公昭６１−５４４５７号公報 金内 理、「化学と生物」、３４、５５３−５５７（１９９６）

本発明は、リパーゼ阻害効果、脂肪吸収抑制効果及びコレステロール吸収抑制効果に優れ、えぐ味が少なく、食品への添加や加工も容易であり、胆汁酸の再吸収阻害効果があり、安全性が高く摂取し易い薬剤、及び該薬剤を含むリパーゼ阻害効果、脂肪吸収抑制効果及びコレステロール吸収抑制効果を有する食品を提供することを課題とする。

本発明者らは、鋭意研究の結果、塩基性基で修飾された多糖を含む薬剤、及び該薬剤を含む食品によって前記課題が解決されることを知り、この知見に基づいて本発明を完成した。

本発明は、以下によって構成される。
（１）塩基性基で修飾された多糖を含む薬剤。
（２）塩基性基がポリアミンを含む基である前記（１）項記載の薬剤。
（３）塩基性基が三級アミンを含む基である前記（１）項記載の薬剤。
（４）塩基性基が四級アンモニウム塩を含む基である前記（１）項記載の薬剤。
（５）多糖が難消化性多糖である前記（１）〜（４）のいずれか１項記載の薬剤。
（６）多糖が水溶性多糖である前記（１）〜（５）のいずれか１項記載の薬剤。
（７）前記（１）〜（６）のいずれか１項記載の薬剤を含む食品。

本発明の薬剤は、リパーゼ阻害効果、脂肪吸収抑制効果及びコレステロール吸収抑制効果に優れ、えぐ味が少なく、食品への添加や加工も容易であり、胆汁酸の再吸収阻害効果があり、安全性が高く摂取し易い薬剤であり、多糖及び塩基性基を選択することにより、水に対する溶解性や水に溶解したときの粘度、脂肪吸収抑制効果等を適宜調節可能である。また、この薬剤を添加した食品は優れたリパーゼ阻害効果、脂肪吸収抑制効果及びコレステロール吸収抑制効果を示す。

本発明のリパーゼ阻害効果、脂肪吸収抑制効果及びコレステロール吸収抑制効果を有する薬剤は、塩基性基で修飾された多糖（以下、塩基修飾多糖という）からなる。
本発明で用いられる多糖の具体例としては、アガロース、アガロペクチン、アラビアガム、アルギン酸、カラギーナン、カロース、キシラン、グアーガム、ケラタン硫酸、デルマタン硫酸、デキストリン、シゾフィラン、ゾウゲヤシマンナン、コンニャクマンナン、アラビナン、セルロース、タマリンドシードガム、トラガガントガム、プスツラン、フコイダン、フノラン、ポルフィラン、ペクチン、ローカストビーンガム、デンプン、ニゲラン、リケナン、レンチナン等の天然物から抽出される多糖や、アルギン酸プロピレングリコールエステル、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリデキストロース、加工デンプン等の化学修飾・合成多糖等を挙げることができる。

中でも多糖が難消化性多糖であると、これを塩基性基で修飾して得られる薬剤には、食物繊維としての排便促進、便秘改善等の整腸作用、大腸ガン予防効果等が期待できる。難消化性多糖の例としては、アガロース、アガロペクチン、アラビアガム、アルギン酸、カラギーナン、カロース、キシラン、グアーガム、ケラタン硫酸、デルマタン硫酸、シゾフィラン、ゾウゲヤシマンナン、コンニャクマンナン、アラビナン、セルロース、タマリンドシードガム、トラガガントガム、プスツラン、フコイダン、フノラン、ポルフィラン、ペクチン、ローカストビーンガム、ニゲラン、リケナン、レンチナン等の天然物から抽出される多糖や、アルギン酸プロピレングリコールエステル、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリデキストロース、加工デンプン等の化学修飾・合成多糖等を挙げることができる。

また、多糖が水溶性多糖であると、これを塩基性基で修飾して得られる薬剤は、水溶性であることが多く、各種飲料、スープ、シチュー等の食品、溶液剤等に好適に使用できる。水溶性多糖の例としては、アガロース、アガロペクチン、アラビアガム、アルギン酸、カラギーナン、カロース、グアーガム、ケラタン硫酸、デルマタン硫酸、デキストリン、シゾフィラン、タマリンドシードガム、トラガガントガム、フノラン、ポルフィラン、ローカストビーンガム、ニゲラン、リケナン、レンチナン等の天然物から抽出される多糖や、アルギン酸プロピレングリコールエステル、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリデキストロース等の化学修飾・合成多糖等を挙げることができる。

多糖を修飾する塩基性基の具体例としては、アミノエチル基、アミノプロピル基等のアミノアルキル基、ジメチルアミノエチル基等のアルキルアミノアルキル基、アミノフェニル基、ジメチルアミノフェニル基、アミノベンジル基等の芳香族環含有アミノ基、ピペリジノ基、ピペリジル基、ピロリジノ基等の脂肪族環含有アミノ基、トリメチルアンモニオプロピル基、トリエチルアンモニオプロピル基等の四級アンモニウム塩を含む基、Ｎ−（２−（ジエチルアミノ）エチル）アミノエチル基等のジアミンを含む基、ジエチレントリアミン、トリエチレンテトラミン、ポリアリルアミン、ポリエチレンイミン、ポリビニルピリジン、α−ポリリジン、ε−ポリリジン等のポリアミンを含む基等を挙げることができる。これらは単独で用いても良いし、２種以上を適宜組み合わせて用いても良い。

中でも塩基性基がポリアミンを含む基であると、塩基性基の置換率を大きく変えることが可能で、得られる薬剤のリパーゼ阻害効果、脂肪吸収抑制効果及びコレステロール吸収抑制効果等を広い範囲で調節可能である。更にε−ポリリジンで修飾した多糖は、安全性が高く、本発明の薬剤に好適に用いることができる。
また、塩基性基が三級アミンを含む基であると、三級アミンの強い塩基性のため、塩基性基の置換率が小さくても、得られる薬剤には大きなリパーゼ阻害効果、脂肪吸収抑制効果及びコレステロール吸収抑制効果が期待できる。
更に、塩基性基が四級アンモニウム塩を含む基であると、四級アンモニウム塩の持つ三級アミンよりもさらに強い塩基性のため、塩基性基の置換率が小さくても、得られる薬剤には大きなリパーゼ阻害効果、脂肪吸収抑制効果及びコレステロール吸収抑制効果が期待できる。

多糖を塩基性基で修飾する方法は、特に限定されないが、例えば米国特許第２８１３０９３号明細書、米国特許第２８７６２１７号明細書、米国特許第２９７０１４０号明細書等に記載された方法が使用できる。

本発明の薬剤は、そのまま投与しても良いが、必要に応じてかつ本発明の目的を損なわない範囲で、医薬的に許容できる添加剤と共に、溶液剤、懸濁剤、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤等の形態で投与しても良い。添加剤としては、乳糖、白糖、ブドウ糖等の糖類、炭酸カルシウム、硫酸カルシウム等の無機物、デンプン、結晶セルロース、蒸留水、精製水、ゴマ油、大豆油、トウモロコシ油、オリーブ油、綿実油等の一般的に使用されているものを挙げることができる。製剤化する際には、結合剤、滑沢剤、分散剤、懸濁剤、乳化剤、希釈剤、緩衝剤、酸化防止剤、細菌抑制剤等の添加剤を使用することができる。

本発明の薬剤は、食品に含有させて投与することも有効である。本発明の薬剤を含有させる食品としては、パン、パスタ、うどん、ケーキ、クッキー、ビスケット、ハンバーグ、ミートソース、餃子、ソーセージ、カレー、シチュー、ジャム、チョコレート、コーンスープ等を例示することができる。本発明の薬剤を食品に含有させるには、食品の生地の製造工程等において生地に均一に混合する方法や、液状の食品の場合には、食品中に均一に溶解する等の方法が例示できる。これらの食品中における本発明の薬剤の含有割合は、食品の種類や摂取量によって適宜変更されるが、１〜２０重量％を例示することができる。

本発明の薬剤には、食物繊維を併用することも可能である。併用できる食物繊維は、特に限定されないが、ペクチン、ポリデキストロース、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、ガラクトマンナン、グルコマンナン、タマリンド種子ガム、キサンタンガム、ジェランガム、カラギーナン、カラヤガム、カルボキシメチルセルロース、セルロース、ヘミセルロース、リグニン、不溶性ペクチンや、複合型食物繊維である、アップルファイバー、シュガービートファイバー、コーンファイバー、小麦ファイバー、大豆ファイバー、キチン等を挙げることができる。これらの食物繊維は、単独で用いてもよく、２種以上を適宜組合せて用いてもよい。
中でも好ましい食物繊維としては、アップルファイバー、シュガービートファイバー、コーンファイバー、小麦ファイバー、大豆ファイバーを挙げることができる。

以下に、本発明の薬剤を含む食品の配合例を示す。尚、配合例中の数字は重量部を示す。
食品配合例１（スパゲッティー生地）
小麦粉 １００重量部
水 ３０
本発明の薬剤 ０．１〜０．２

食品配合例２（食パン生地）
小麦粉 １００重量部
水 ６４
イースト ３
食塩 ２
砂糖 ６
脱脂粉乳 ３
油脂 ５
本発明の薬剤 ０．１〜０．２

食品配合例３（ハンバーグ生地）
合挽き肉 ４０重量部
牛脂 ５
玉ねぎ ２０
生パン粉 ８
澱粉 ８
水 ５
香辛料・調味料 １．２
本発明の薬剤 ０．２〜０．５

以下、実施例によって更に詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。尚、塩基性基の置換度は、糖１ユニットあたりに導入した塩基性基の数で示した。また、以下の％表示は特に記載のない限り、重量％を意味する。
１．塩基修飾多糖ジエチルアミノエチル基置換ポリデキストロース（ＤＥＡＥ−ＰＤ）の合成（合成例１）
温度計、滴下ロート、及び攪拌装置を備えた１０００ｍｌの三ツ口フラスコに、ＮａＯＨ４０ｇ及びイオン交換水１７０ｍｌを仕込み、均一に溶解させた。氷浴で１０℃に冷却しながら、ポリデキストロース（和光純薬工業（株）製）６０．０ｇを投入し、均一に溶解させた。３０分後、氷浴を外し、４５ｍｌのイオン交換水に溶解した３５ｇのジエチルアミノエチルクロリド塩酸塩を数回に分けて滴下した。滴下終了後、８０℃まで昇温させ８０℃で３５分間反応させた。
反応終了後、反応容器を室温まで氷冷し、６ｍｏｌ／ｌ−ＨＣｌ水溶液で中和した。イオン交換水で透析し、凍結乾燥し、ジエチルアミノエチル基置換ポリデキストロース（ＤＥＡＥ−ＰＤ）を得た。収量は４５．０ｇであった。

２．塩基修飾多糖ＤＥＡＥ−ＰＤの合成（合成例２〜５）
温度計、滴下ロート、及び攪拌装置を備えた２００ｍｌの三ツ口フラスコに、表２に記載された量のポリデキストロース（和光純薬工業（株）製）及びイオン交換水を仕込み、均一に溶解させた。氷浴で１０℃に冷却しながら、表２記載の量のイオン交換水に溶解したＮａＯＨを１０分かけて滴下した。滴下終了２０分後、氷浴を外し、表２記載の量のイオン交換水に溶解したジエチルアミノエチルクロリド塩酸塩を５分かけて滴下した。滴下終了３０分後、８０℃まで昇温させ８０℃で３時間反応させた。
反応終了後、反応容器を室温まで氷冷し、反応混合物をメタノール３００ｍｌ中に注ぎ、ポリマーを析出させた。ポリマーをろ過し、再びイオン交換水２０ｍｌに溶解し、メタノール２５０ｍｌ中に注ぎ、ポリマーを析出させた。
ろ別したポリマーは、イオン交換水で透析し、凍結乾燥し、ジエチルアミノエチル基置換ポリデキストロース（ＤＥＡＥ−ＰＤ）を得た。収量は、合成例２：０．８７ｇ、合成例３：０．３９ｇ、合成例４：０．１５ｇ、合成例５：１．０７ｇであった。

３．塩基修飾多糖ＤＥＡＥ−ＰＤの置換度測定
得られたＤＥＡＥ−ＰＤ０．００４ｇを０．８ｇの重水に溶解し、^１Ｈ−ＷＥＦＴ−ＮＭＲ法により測定した。低磁場プロトン（２．４−５．５ｐｐｍ付近）／高磁場プロトン（０．５−１．５ｐｐｍ付近）面積比より、塩基性基の置換度を算出した。合成例１〜５のＤＥＡＥ−ＰＤの置換度を表１に示した。

（表１）

４．脂質分解酵素阻害効果テスト
４−１．基質溶液の調整
トリオレイン８０ｍｇ、ホスファチジルコリン１０ｍｇ、及びタウロコール酸ナトリウム５ｍｇを、０．１ｍｏｌ／ｌ−ＮａＣｌ−０．１ｍｏｌ／ｌ−ＴＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）９ｍｌに混合し、超音波処理して乳化し、基質溶液を得た。
４−２．塩基修飾多糖ＤＥＡＥ−ＰＤ溶液の調整
合成例１、２、３及び５で得られた塩基修飾多糖を０．１ｍｏｌ／ｌ−ＮａＣｌ−０．１ｍｏｌ／ｌ−ＴＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）１ｍｌに溶解し、各種濃度のＤＥＡＥ−ＰＤ溶液を調製した。

４−３．脂質分解酵素液の調製
膵リパーゼはラット膵臓より電気泳動的に単一にまで精製した酵素を用いた。０．１ｍｏｌ／ｌ−ＮａＣｌ−０．１ｍｏｌ／ｌ−ＴＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）で４μｇ／ｍｌに希釈し、使用した。

４−４．脂質分解酵素阻害活性の測定
上記で調製した基質溶液１００μｌに上記で調整した塩基修飾多糖ＤＥＡＥ−ＰＤ溶液を１００μｌ加えて５分間震盪した後、上記で調整した脂質分解酵素液５０μｌを加えて３７℃、３０分間震盪した。次いで抽出用溶媒（クロロホルム：メタノール：ヘプタン＝４９：２：４９）を３ｍｌ加えて１０分間震盪した後、回転数２５００ｒｐｍで５分間遠心分離した。その上層液をアスピレーターで除去した後、下層液に対して銅試薬（０．１ｍｏｌ／ｌ−トリエタノールアミン−０．０６ｍｏｌ／ｌ−ＮａＯＨ−０．０５ｍｏｌ／ｌ−硝酸銅三水和物溶液２００ｍｌに塩化ナトリウム６６ｇを溶解したもの）１ｍｌを加え、１０分間震盪した後、回転数２５００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。次いで上層液０．５ｍｌを採取し、これに発色試薬（０．１ｗ／ｖ％−バソクプロイン、０．０５ｗ／ｖ％−ブチル化ヒドロキシアニソール−クロロホルム溶液）０．５ｍｌを加えて震盪し、波長４８０ｎｍにおける吸光度を測定して、生成した遊離脂肪酸量、すなわち脂質分解酵素の活性度を調べた。脂質分解酵素の活性度を図１に示す。

［脂質分解酵素の活性測定］
ポリデキストロース（和光純薬工業（株）製）を０．１ｍｏｌ／ｌ−ＮａＣｌ−０．１ｍｏｌ／ｌ−ＴＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）１ｍｌに溶解し、各種濃度のポリデキストロース溶液を調製した。実施例１と同様に調製した基質溶液１００μｌに、塩基修飾多糖溶液に代えて各種濃度のポリデキストロース溶液１００μｌを加え、実施例１と同様に脂質分解酵素阻害活性の測定を行った。結果を図１に示した。

[塩基修飾多糖ピペリジノエチル基置換ポリデキストロースの合成（合成例６〜９）]
温度計、滴下ロート、及び攪拌装置を備えた２００ｍｌの三ツ口フラスコに、表２に記載された量のポリデキストロース（和光純薬工業（株）製）及びイオン交換水を仕込み、均一に溶解させた。氷浴で１０℃に冷却しながら、表２記載の量のイオン交換水に溶解したＮａＯＨを１０分かけて滴下した。滴下終了２０分後、氷浴を外し、表２記載の量のイオン交換水に溶解した１−（２−クロロエチル）ピペリジン塩酸塩を５分かけて滴下した。滴下終了３０分後、８０℃まで昇温させ８０℃で３時間反応させた。
反応終了後、反応容器を室温まで氷冷し、塩酸で中和し、イオン交換水で透析し、凍結乾燥し、ピペリジノエチル基置換ポリデキストロース（ＰＩＰＥ−ＰＤ）を得た。収量は、合成例６：０．７１ｇ、合成例７：０．５０ｇ、合成例８：０．５３ｇ、合成例９：１．１１ｇであった。
得られた塩基修飾多糖ＰＩＰＥ−ＰＤについて、実施例１と同様の方法で置換度測定と脂質分解酵素阻害効果テストを実施した。結果を表２と図２に示した。

（表２）

１．塩基修飾多糖３−トリエチルアンモニオ−２−ヒドロキシプロピル基置換コーンスターチの合成（合成例１０〜１２）]
温度計、及び攪拌装置を備えた３００ｍｌの三ツ口フラスコに、トリエチルアミン２０．２ｇ、エピクロロヒドリン１８．５ｇ及びイオン交換水１００ｍｌを仕込み、室温で５時間攪拌した。次に反応混合物を、エバポレーターを用いて３０℃で減圧留去し、トリエチルグリシジルアンモニウムクロリドを得た。収量３２．８ｇ。トリエチルグリシジルアンモニウムクロリドは、精製操作を行わず、以下の反応に用いた。
温度計、滴下ロート、及び攪拌装置を備えた２００ｍｌの三ツ口フラスコに、表４に記載された量のコーンスターチ（川光物産（株）製）、塩化ナトリウム及びイオン交換水を仕込み、攪拌しながら表４記載の量の上記で得たトリエチルグリシジルアンモニウムクロリド、続いて表４記載の量の１０％−水酸化ナトリウム水溶液を投入した。室温で２時間３０分攪拌した後、オイルバスで３５℃まで昇温し、３５℃で６８時間反応させた。
反応終了後、２．４Ｍ−塩酸で酸性としてろ過し、続いて０．０７ｍｏｌ／ｌ−塩酸で２回、０．２％−水酸化ナトリウム水溶液で２回、イオン交換水で２回、メタノールで２回洗浄し、４０℃で５時間、８０℃で６時間乾燥し、３−トリエチルアンモニオ−２−ヒドロキシプロピル基置換コーンスターチ（ＴＥＡＰ−ＳＴ）を得た。収量は、合成例１４：１４．４ｇ、合成例１５：７．７０ｇ、合成例１６：１０．６ｇであった。

２．塩基修飾多糖ＴＥＡＰ−ＳＴの置換度測定
塩基修飾多糖ＴＥＡＰ−ＳＴを１．０００ｇ秤量し、０．１ｍｏｌ／ｌ−ＨＣｌ水溶液を５０ｍｌ加え、２時間攪拌後、翌日まで静置した。上澄を１０ｍｌ量り取り、フェノールフタレインを指示薬として、０．１ｍｏｌ／ｌ−ＮａＯＨ水溶液で滴定した。中和に要した０．１ｍｏｌ／ｌ−ＮａＯＨ水溶液容量より、塩基性基の置換度を算出した。結果を表３に示した。
また、得られた塩基修飾多糖について、実施例１と同様に脂質分解酵素阻害効果テストを実施した。結果を図３に示した。

（表３）

[塩基修飾多糖ε−ポリリジン置換セルロースの合成（合成例１３〜１５）]
温度計、滴下ロート、及び攪拌装置を備えた５００ｍｌのセパラブルフラスコに、表５に記載された量の特開平１０−１９５１０３号公報記載の方法で得た多孔性球状セルロース（水分８８．８％）及びイオン交換水を仕込み、攪拌しながら表５記載の量の２０％−水酸化ナトリウム水溶液を投入した。オイルバスで３０℃まで昇温し、1時間攪拌後、表５記載の量のエピクロロヒドリンを投入し、３０℃で２時間反応させた。
反応終了後、セルロースをろ取し、イオン交換水で５回洗浄し、中性を確認し、再びセパラブルフラスコに戻した。ここに、表５記載の量のイオン交換水及び２５％−ε−ポリリジン水溶液（チッソ（株）製）を投入し、オイルバスで４５℃まで昇温し、２時間反応させた。
反応終了後、セルロースをろ取し、イオン交換水で５回、メタノールで２回洗浄し、６０℃で１時間、８０℃で２時間、１００℃で３時間乾燥し、ε−ポリリジン置換セルロース（ＥＰＬ−ＣＥＬ）を得た。収量は、合成例１７：７．９０ｇ、合成例１８：８．５５ｇ、合成例１９：７．２１ｇであった。
得られた塩基修飾多糖について、実施例４と同様の方法で置換度を測定し、実施例１と同様の方法で脂質分解酵素阻害効果テストを実施した。結果を表４と図４に示した。

（表４）

１．塩基修飾多糖アミノベンゾイル基置換ポリデキストロースの合成（合成例１６）
温度計、窒素ガス導入管及び攪拌装置を備えた１００ｍｌの三ツ口フラスコに、ポリデキストロース（和光純薬工業（株）製）６．０ｇ、及びジメチルホルムアミド２０ｍｌを仕込み、オイルバスで４０℃に加熱し、均一に溶解させた。ここに、トリエチルアミン５．０ｇを投入し、４０℃を保ちながら、１６ｍｌのジメチルホルムアミドに溶解したｐ−ニトロベンゾイルクロリド１３．５２ｇを３０分かけて滴下した。滴下終了５０分後、３時間後、及び５時間後にそれぞれ１．５ｇのトリエチルアミンを投入し、６時間反応させた。
反応終了後、反応器を室温まで放冷し、反応液を３００ｍｌのイソプロパノール中に注ぎ、ポリマーを沈殿させ、ろ過した。ポリマーを再び４０℃に加熱した２００ｍｌのイソプロパノール中に懸濁し、１時間攪拌後、ろ過し、８０℃で４時間乾燥させ、ニトロベンゾイル基置換ポリデキストロースを得た。
水素ガス導入管及び攪拌装置を備えた１００ｍｌの三ツ口フラスコに、上記で得たニトロベンゾイル基置換ポリデキストロースを全量、テトラヒドロフラン３０ｍｌ、イオン交換水５ｍｌ及び１０％−パラジウム−炭素（水分５１．４％）０．４ｇを仕込み反応容器内を水素ガスで置換後室温で８時間攪拌した。
反応終了後、触媒をろ過して除き、約２０ｍｌまで濃縮し、２００ｍｌのイソプロパノール中に注ぎ、ポリマーを沈殿させ、ろ過した。８０℃で６時間乾燥し、アミノベンゾイル基置換ポリデキストロース（ＡＢＺ−ＰＤ）を得た。収量は４．８ｇであった。

２．塩基修飾多糖ＡＢＺ−ＰＤの置換度測定
得られたＡＢＺ−ＰＤ０．００４ｇを、ＤＭＳＯ−ｄ６／重水＝１２／１（ｗｔ／ｗｔ）０．８ｇに溶解し、^１Ｈ−ＷＥＦＴ−ＮＭＲ法により測定した。芳香族性プロトン（７．５−９．５ｐｐｍ付近）／非芳香族性プロトン（２．４−５．５ｐｐｍ付近）面積比より、塩基性基の置換度を算出した。このようにして算出した置換度は０．５９であった。
更に、実施例１と同様の方法で実施した脂質分解酵素阻害効果テストの結果を図５に示した。

[塩基修飾多糖ジエチルアミノエチルアミド基含有ペクチンの合成（合成例１７）]
温度計、及び攪拌装置を備えた１００ｍｌの三ツ口フラスコに、ペクチン（東京化成工業（株）製）１．７６ｇ、イオン交換水５０ｍｌ及びＮ，Ｎ−ジエチルエチレンジアミン１．１６ｇを仕込み、均一に溶解させた。ここに、１ｍｏｌ／ｌ−ＨＣｌを２２ｍｌ、続いて１−エチル−３−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド１．９２ｇを加え、室温で３日間攪拌した。１ｍｏｌ／ｌ−ＨＣｌを１ｍｌ加えた後、イオン交換水、０．１％−ＮａＯＨ水溶液、イオン交換水の順に透析し、凍結乾燥し、ジエチルアミノエチルアミド基含有ペクチン（ＤＥＥＤＡ−ＰＥＣ）を得た。収量は、０．６８ｇであった。また、実施例１と同様の方法で測定した置換度は０．５４であった。更に、実施例１と同様の方法で実施した脂質分解酵素阻害効果テストの結果を図６に示した。

[塩基修飾多糖ジエチルアミノエチルアミド基含有ペクチンの合成（合成例１８）]
温度計、及び攪拌装置を備えた１００ｍｌの三ツ口フラスコに、ペクチン（東京化成工業（株）製）１．７６ｇ、イオン交換水５０ｍｌ及びＮ，Ｎ−ジエチルエチレンジアミン０．３４９ｇを仕込み、均一に溶解させた。ここに、１ｍｏｌ／ｌ−ＨＣｌを５ｍｌ、続いて１−エチル−３−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド０．５７５ｇ及びイオン交換水１５ｍｌを加え、室温で３日間攪拌した。イオン交換水、０．１％−ＮａＯＨ水溶液、イオン交換水の順に透析し、凍結乾燥し、ジエチルアミノエチルアミド基含有ペクチン（ＤＥＥＤＡ−ＰＥＣ）を得た。収量は、０．５２ｇであった。また、実施例１と同様の方法で測定した置換度は０．１４であった。更に、実施例１と同様の方法で実施した脂質分解酵素阻害効果テストの結果を図６に示した。

図１−６より、１μｇ／ｍｌ程度の濃度で脂質分解酵素阻害活性を示すものから、数ｍｇ／ｍｌオーダーで脂質分解酵素阻害活性を示すものまで多様な塩基修飾多糖が得られることがわかる。すなわち、多糖の種類、塩基性置換基の種類と置換率を変えることで脂質分解酵素阻害活性を制御できることが示された。

［味覚試験］
合成例２、８、及び１７で合成した塩基修飾多糖及び、比較例としてキトサン（和光純薬工業（株）製キトサン１０）を用いて、５人による味覚試験を行った。合成例２、８、１０、及び２１で合成した塩基修飾多糖は１％水溶液とし、キトサンは乳酸と２／１（ｗｔ／ｗｔ）で混合し、１％水溶液として試験に用いた。苦味、えぐ味の評価は、「苦味、えぐ味を感じる」、「苦味、えぐ味をわずかに感じる」、及び「苦味、えぐ味を感じない」で表現した。結果を表５に示す。表中の数字は人数を示す。
試験の結果、本発明の塩基修飾多糖は、比較例であるキトサンと比較して、苦味、えぐ味が少なく、摂取しやすいことが示された。また、この結果は、食品への添加も容易であることを示すものである。

（表５）

［溶解性テスト］
合成例５及び９で合成した塩基修飾多糖、比較例２として和光純薬工業（株）製キトサン１０、キトサン１００、及びアルギン酸ナトリウム（君津化学工業（株）製キミツアルギンＩ−３）を純水に溶解し、１％水溶液を作成した。キトサン１０、キトサン１００は純水には溶解しないので、０．５％−酢酸水溶液で溶解し１％溶液を作成した。各多糖水溶液の粘度を表６に示す。
試験の結果、本発明の塩基修飾多糖は、比較例であるキトサンと比較して、ｐＨ調整を行わなくても純水に容易に溶解し、比較例であるアルギン酸と比較して、水に溶解したときの粘度が低く、大量に摂取することも容易であることが示された。また、この結果は、食品への添加も容易であることを示すものである。

（表６）

［トリグリセリド吸収抑制テスト］
コーン油（６ｍｌ）、コール酸（８０ｍｇ）、コレステロールオリエート（２ｍｇ）、純水（６ｍｌ）を混合し、超音波処理して乳化し、コーン油エマルジョンを得た。体重２００ｇの雄ラットを一昼夜絶食し、２群に分け、コントロール群は１ｍｌのコーン油エマルジョンに１ｍｌの純水を加え投与した。ＤＥＡＥ−投与群（ＤＥＡＥ−ＰＤ群）は１ｍｌのコーン油エマルジョンにＤＥＡＥ−ＰＤ水溶液（合成例１で得たＤＥＡＥ−ＰＤを５０ｍｇ／ｍｌの濃度となるように純水で溶解したもの）１ｍｌを加え投与した。尾静脈あるいは尾動脈より経時的に採血し、トリグリセリド含量を測定した。図７に投与後の血中トリグリセリド濃度を示した。血中トリグリセリド濃度は、ＤＥＡＥ−ＰＤを投与しない場合（コントロール群）は投与２時間後に大きく上昇したが、ＤＥＡＥ−ＰＤを投与した場合（ＤＥＡＥ−ＰＤ群）は投与後も血中トリグリセリド濃度はほとんど上昇しないことが確認された。

［高脂肪食投与マウスの体重増加抑制効果、血清脂質上昇抑制効果及び脂肪組織重量増加抑制効果テスト］
Ｃ５７ＢＬ／６雄性マウス（７週齢）を購入し、１週間の予備飼育後、下記の高脂肪食にて２０週間飼育した。１群は８頭使用した。ＤＥＡＥ−ＰＤ投与群（ＤＥＡＥ−ＰＤ群）は、朝夕２回、合成例１で得たＤＥＡＥ−ＰＤを５００ｍｇ/ｋｇとなるように投与し、コントロール群は同量の純水を投与し、それぞれ経時的に体重を測定した。また、２０週目の血清脂質（トリグリセリドおよびコレステロール）及び脂肪組織重量を測定した。
図８に高脂肪食投与マウスの体重変化を示した。ＤＥＡＥ−ＰＤ群はコントロール群と比べ、１０週から体重が減少する傾向が認められた。
図９に２０週目の血清脂質含量を示した。ＤＥＡＥ−ＰＤ投与で、血清トリグリセリドおよびコレステロール含量の低下が認められた。
図１０に２０週目の脂肪組織重量を示した。ＤＥＡＥ−ＰＤ投与で、脂肪組織重量が減少する傾向が認められた。
・高脂肪食の組成（１００ｇ当り）
無塩バター（milk fat） ４５．０ｇ
コーンスターチ １７．１ｇ
スクロース １０．０ｇ
カゼイン ２０．０ｇ
セルロースパウダー ３．０ｇ
ミネラルミックス ３．５ｇ
ビタミンミックス １．０ｇ
コリンクロリド ０．４ｇ
計 １００ｇ

リパーゼ阻害効果、脂肪吸収抑制効果及びコレステロール吸収抑制効果に基づく高脂血症治療薬、高脂血症予防や肥満予防の食品添加剤及び健康食品等への利用が考えられる。

ＤＥＡＥ−ＰＤによる脂質分解酵素阻害効果テスト（実施例１） ＰＩＰＥ−ＰＤによる脂質分解酵素阻害効果テスト（実施例２） ＴＥＡＰ−ＳＴによる脂質分解酵素阻害効果テスト（実施例３） ＥＰＬ−ＣＥＬによる脂質分解酵素阻害効果テスト（実施例４） ＡＢＺ−ＰＤによる脂質分解酵素阻害効果テスト（実施例５） ＤＥＥＤＡ−ＰＥＣによる脂質分解酵素阻害効果テスト（実施例６） トリグリセリドの吸収に及ぼすＤＥＡＥ−ＰＤの影響（実施例９） 高脂肪食投与マウスの体重（実施例１０） 血清脂質の影響（実施例１０） 高脂肪食投与マウスの脂肪組織重量（実施例１０）

Claims (7)

1. 塩基性基で修飾された多糖からなる薬剤。
2. 塩基性基がポリアミンを含む基である請求項１記載の薬剤。
3. 塩基性基が三級アミンを含む基である請求項１記載の薬剤。
4. 塩基性基が四級アンモニウム塩を含む基である請求項１記載の薬剤。
5. 多糖が難消化性多糖である請求項１〜４のいずれか１項記載の薬剤。
6. 多糖が水溶性多糖である請求項１〜５のいずれか１項記載の薬剤。
7. 請求項１〜６のいずれか１項記載の薬剤を含む食品。
   

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