JP2005068145A - 医薬組成物 - Google Patents

Abstract

【課題】 α_Lβ₂インテグリン介在性の病態およびサブスタンスＰ関連性の病態の治療または予防に有用な医薬組成物を提供する。
【解決手段】 式（I)
【化１】

（式中、Ｒは水素原子、ヒドロキシル基またはカルバモイル基、ｎは１または２を表す）
で示される化合物またはその薬理学的に許容される塩を有効成分とする医薬組成物。
【選択図】なし

Description

本発明は、優れたα_Lβ₂インテグリン介在細胞接着阻害作用およびサブスタンスＰ受容体拮抗作用を有する新規化合物を有効成分としてなる医薬組成物に関する。

白血球インテグリンおよび細胞間接着分子（ＩＣＡＭ）は、標的細胞および細胞外マトリックスへの白血球接着に中心的な役割を果たす。β₂インテグリン(ＣＤ１８)サブファミリーは、４個の構成員、つまり、α_Lβ₂インテグリン(ＬＦＡ−１、ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８)、α_Mβ₂インテグリン(Ｍａｃ−１、ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８)、α_Xβ₂インテグリン（ｐ１５０／９５、ＣＤ１１ｃ／ＣＤ１８）およびα_Dβ₂インテグリン(ＣＤ１１ｄ／ＣＤ１８)から成り(非特許文献１）、これらはＣＤ１８と、互いに関連しているが別個のα鎖との非共有結合により構成される。とりわけ、ＬＦＡ−１は、Ｔ細胞、好酸球および他の白血球の細胞接着と血管外炎症組織への浸潤の主要因子であることが示されている(非特許文献２; 非特許文献３)。ＬＦＡ−１は、血管内皮細胞、樹状突起神経細胞、上皮細胞、マクロファージおよびＴリンパ芽球などの多くの細胞型に見られるＩＣＡＭファミリー（ＩＣＡＭ−１、２、３、４、５）に結合する(非特許文献４)。さらに、ＬＦＡ−１／ＩＣＡＭ−１およびＬＦＡ−１／ＩＣＡＭ−３の相互作用はＴ細胞活性化に必要とされる副刺激シグナル(co-stimulatory signal)として機能し得る(非特許文献５)。

細胞浸潤およびＴ細胞活性化は多数の炎症性疾患病態において重要な過程である。いくつかの異なる炎症疾患の動物モデルにおいて、ＬＦＡ−１やＩＣＡＭ−１に対する抗体が炎症を抑制していることから、炎症にＬＦＡ−１が重要な役割を有することが示されている(非特許文献６; 非特許文献７；非特許文献８）。さらに、ＣＤ１１ａ（ＬＦＡ−１のα鎖）に対するヒト化モノクロナル抗体は、乾癬を有する患者において効力を示している(非特許文献９）。

さらに、ＬＦＡ−１に対する抗体が臓器移植後の拒絶反応を抑制することが知られている(非特許文献１０、非特許文献１１)。また、α_Lβ₂インテグリンに対するモノクロナル抗体の移植への使用も開示されている（特許文献１）。

一方、サブスタンスＰの受容体（すなわち、ニューロキニン１受容体）に対して拮抗作用を有する物質が炎症性疾患（例えば、喘息、リウマチ様関節炎、炎症性腸疾患、膀胱炎および他の胃障害）の治療に有用であると考えられている (非特許文献１２、非特許文献１３、非特許文献１４）。

国際公開第９４／０４１８８号明細書 ボクナーら、Adhesion Molecules in Allergic Disease, Marcel Dekker, Inc. pp 1-24 (1997) ガームベルグ、Curr. Opin. Cell Biology, 9, 643-650 (1997) ペインズら、Br. J. Pharmacology, 126, 537-550 (1999) ダスティンら、J. Immunology, 137, 245-254 (1986) ウィングレンら、Crit. Rev. in Immunology, 15, 235-253 (1995) ロースレインら、Kidney International, 41, 617 (1992) イーゴら、J. Immunology, 147, 4167 (1991) ベネットら、J. Pharmacol. and Exp. Therapeutics, 280, 988 (1997) ゴットリーブら、J. Am. Acad. Dermatology, 42, 428-35 (2000) ポストンら、Transplantation 69, 2005-2013 (2000) ナカクラら、Transplantation 62, 547-552 (1996) クレインベルドら、Int. Immunopharmacology, 1, 1629-1650 (2001) スウェインら、Ann. Rep. Med. Chem., 34, 51-60 (1999) オーンマハトJr.ら、Ann.Rep.Med.Chem.,33,71-80(1998)

本発明は、式(Ｉ)：

（式中、Ｒは水素原子、ヒドロキシル基またはカルバモイル基、ｎは１または２を表す）
で示される化合物、またはその薬理学的に許容される塩を有効成分とする医薬組成物に関する。

本発明の有効成分はその不斉炭素に基づく光学異性体があり、本発明はこれらの異性体およびその混合物も包含する。

本発明の実施態様において、有効成分の結合の立体配置は固定される必要はない。本発明の有効成分は単一の配置を有する化合物、あるいはいくつかの異なる配置を有するものの混合物であってもよい。

有効成分(Ｉ)の好ましい実施態様において、Ｒは水素原子である。
有効成分(Ｉ)の他の好ましい実施態様において、Ｒはヒドロキシル基である。
有効成分(Ｉ)の他の好ましい実施態様において、Ｒはカルバモイル基である。
有効成分(Ｉ)の他の好ましい実施態様において、ｎは１である。
有効成分(Ｉ)の他の好ましい実施態様において、ｎは２である。
有効成分(Ｉ)のより好ましい実施態様において、Ｒは水素原子であり、ｎは１である。
有効成分(Ｉ)のより好ましい実施態様において、Ｒはヒドロキシル基であり、ｎは１である。
有効成分(Ｉ)のより好ましい実施態様において、Ｒはカルバモイル基であり、ｎは２である。

本発明の医薬組成物の有効成分として特に好ましい化合物は、以下の群から選ばれる化合物である。
（５Ｓ，７Ｓ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−アセチルアミノ−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオン、
（５Ｓ，７Ｓ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−［（２−ヒドロキシアセチル）アミノ］−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオン、および
（５Ｓ，７Ｓ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−［（３−カルバモイルプロピオニル）アミノ］−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオン。

本発明の有効成分の特徴は、１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン骨格の７位にアシルアミノ基、５位に４−シアノベンジル基が結合している点にあり、そのような特徴を有する化合物を記載した文献はこれまで見当たらない。

本発明の有効成分は、ＬＦＡ−１介在細胞接着と、ＬＦＡ−１介在Ｔ細胞同時活性化の両者に対して強力な阻害活性を有する。本発明の有効成分はまた、（ａ）血漿タンパク結合、（ｂ）水溶性、および（ｃ）logP（オクタノール・水分配率）において全体的に改善されており、このため経口投与で優れたバイオアベイラビリティを示す。したがって、本発明の有効成分はＬＦＡ−１介在細胞接着が関与する疾患に対し、インビボで優れた効果を示す。

さらに、本発明の有効成分はサブスタンスＰの受容体（すなわち、ニューロキニン１受容体）に対しても強力な拮抗活性を有している。サブスタンスＰ受容体拮抗薬は炎症性疾患、例えば、喘息、リウマチ様関節炎、炎症性腸疾患、膀胱炎および他の胃障害の治療に有用である (非特許文献１２−１４）。したがって、本発明の有効成分は、サブスタンスＰにより引き起こされる疾患に対して優れた治療効果を奏する。また、本発明の有効成分は、ＬＦＡ−１介在細胞接着阻害およびサブスタンスＰ受容体拮抗作用の２つの活性に基き、炎症性疾患の治療または予防により優れた効果を示しうる。

さらに、本発明の有効成分（I)は従来技術に記載された化合物と比較して、細胞毒性が低くかつシトクロムＰ４５０阻害活性も低いので、副作用の恐れが低い。

本発明の有効成分は遊離形態または薬理学的に許容される塩の形態のいずれでも疾患の予防・治療に使用できる。薬理学的に許容される塩としては、無機酸あるいは有機酸との酸付加塩(例えば、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、臭化水素酸塩、メタンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、酢酸塩)、および無機塩基、有機塩基、あるいはアミノ酸との塩(例えば、トリエチルアミン塩、リジンとの塩、アルカリ金属との塩、アルカリ土類金属との塩、等)が挙げられる。また、薬理学的に許容される塩にはこれらの分子内塩、溶媒和物あるいは水和物も含まれる。

本発明の医薬組成物は、治療有効量の有効成分（Ｉ）と、製薬上許容される担体あるいは希釈剤から製剤化される。薬理学的に許容される担体または希釈剤としては、例えば、結合剤(シロップ、アラビアゴム、ゼラチン、ソルビット、トラガント、ポリビニルピロリドン)、賦形剤(乳糖、ショ糖、コーンスターチ、リン酸カリウム、ソルビット、グリシン)、滑沢剤(ステアリン酸マグネシウム、タルク、ポリエチレングリコール、シリカ)、崩壊剤(バレイショデンプン)および湿潤剤(ラウリル硫酸ナトリウム)等を挙げることができる。

本発明の有効成分は、経口的または非経口的に投与でき、このため適当な医薬製剤として投与することができる。経口的に投与する場合の適当な医薬製剤としては、例えば、錠剤、顆粒剤、カプセル剤、粉剤などの固体製剤、または溶液製剤、懸濁製剤、乳化製剤などの液体製剤が挙げられる。非経口的に投与する場合の適当な医薬製剤としては、坐剤の形、あるいは注射用蒸留水、生理食塩水、ブドウ糖水溶液等を用いた注射製剤または静脈内点滴製剤、および常法による吸入剤が挙げられる。

本発明の有効成分の投与量は投与方法、患者の年齢、性別、体重、病状により変わるが、一般的には、一日あたりの投与量は好ましくは約０.１〜１００ｍｇ／ｋｇ、特に好ましくは１〜１００ｍｇ／ｋｇの範囲である。

本発明の医薬組成物は、ＬＦＡ−１介在細胞接着に関連した病態の治療または予防剤として用いることができる。また、本発明の化合物はＬＦＡ−１介在細胞接着に関連した病態に罹患した、または罹患しやすい患者の治療剤として用いることができる。ＬＦＡ−１介在細胞接着に関連した病態の例としては、炎症性疾患、自己免疫疾患およびアレルギー性疾患が挙げられる。

本発明の医薬組成物はまた、患者におけるサブスタンスＰにより引き起こされる、またはサブスタンスＰ介在性の病態の治療または予防剤として、並びにそのような病態に罹患したまたは罹患しやすい患者の治療剤として用いることができる。そのような病態の例として、炎症性疾患が挙げられる。

本発明の医薬組成物はリウマチ関節炎、喘息、慢性閉塞性肺疾患、アレルギー疾患、成人呼吸窮迫症候群、ＡＩＤＳ、心血管疾病、血栓症、有害な血小板凝集、血栓溶解後の再閉塞、再潅流障害、皮膚炎症疾患（例えば乾癬、湿疹、接触皮膚炎、アトピー性皮膚炎）、骨粗鬆症、変形性関節症、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症(移植後の移植片動脈硬化症も含む)、新生物疾患（新生物あるいは癌性成長の転移を含む）、外傷、網膜剥離、Ｉ型糖尿病、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス(ＳＬＥ)、眼炎症状態、炎症性腸疾患(クローン病、潰瘍性大腸炎)、膀胱炎、胃障害、限局性回腸炎、シェーグレン症候群、および他の自己免疫疾患などの、疾患の治療または予防剤として使用できる。

本発明の医薬組成物はまた、臓器移植等の移植後の拒絶反応(すなわち、慢性拒絶および急性拒絶)、および同種移植片拒絶（宿主対移植片疾患）および移植片対宿主疾患を含む、移植にも用いることができる。

本発明の医薬組成物は、好ましくは乾癬、リウマチ関節炎（または慢性関節リウマチ）、炎症性腸疾患(クローン病、潰瘍性大腸炎)、全身性エリテマトーデス、アトピー性皮膚炎、シェーグレン症候群、移植後の拒絶反応（同種移植片拒絶および移植片対宿主疾患）の治療および予防剤として用いることができる。

本発明の医薬組成物はまた、喘息、炎症性腸疾患、膀胱炎および他の胃障害のような炎症性疾患の治療または予防剤としても好適に用いることができる。

本発明の有効成分は、例えば、下記の方法により製造することができる。
製法Ａ
有効成分である式（Ｉ）で示される化合物の内、式（Ｉ−ａ）：

（式中、ｎは前記と同一意味を有する）
で示される化合物またはその薬理学的に許容される塩は、式（ＩＩ）：

で示される化合物を、式(ＩＩＩ−ａ):
Ｈ−（ＣＨ₂)_n−ＣＯＯＨ （ＩＩＩ−ａ）
（式中、ｎは前記と同一意味を有する）
で示される化合物またはその反応性誘導体と縮合させ、次いで、必要に応じて得られた化合物を薬理学的に許容される塩に変換することにより製造することができる。

化合物（ＩＩ）と化合物（ＩＩＩ−ａ）との縮合反応は、塩基（例えばＤＩＥＡ、トリエチルアミン、ピリジン、ＤＭＡＰ等）の存在下または非存在下、適当な溶媒中（例えば、酢酸エチル、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド等）、慣用の縮合剤（例えば、ＢＯＰ−Ｃｌ、ＢＯＰ試薬またはＥＤＣ等）を用いて、活性化剤（例えば、ＨＯＢＴ）の存在下で行うことができる。

また、化合物（ＩＩ）と化合物（ＩＩＩ−ａ）の反応性誘導体（例えば、酸クロリド等の酸ハライドや酸無水物等）との縮合反応は、塩基（例えばＤＩＥＡ、トリエチルアミン、ピリジン、ＤＭＡＰ等）の存在下または非存在下、適当な溶媒中（例えば、酢酸エチル、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド等）で、または無溶媒で、−３０℃〜室温の温度で行うことができる。

製法Ｂ
有効成分である式（Ｉ）で示される化合物の内、式（Ｉ−ｂ）：

（式中、ｎは前記と同一意味を有する）
で示される化合物またはその薬理学的に許容される塩は、式（ＩＩ）で示される化合物を、式（ＩＩＩ−ｂ）：
Ｒ¹Ｏ−（ＣＨ₂）_n−ＣＯＯＨ (ＩＩＩ−ｂ)
（式中、Ｒ¹Ｏは保護されたヒドロキシル基を表し、ｎは前記と同一意味を有する）
で示される化合物またはその反応性誘導体と縮合させ、保護基を除去し、次いで必要に応じて、得られた化合物を薬理学的に許容される塩に変換することにより製造することができる。

ヒドロキシル基の保護基は、常法に従って容易に除去しうる、ヒドロキシル基に対する通常の保護基（例えば、トリメチルシリル基、ベンジル基、メチル基等）から選択できる。

化合物（ＩＩ）と化合物（ＩＩＩ−ｂ）またはその反応性誘導体との縮合反応は、上記製法Ａに記載の方法と同様にして行うことができる。

脱保護は、除去すべき保護基の種類に従い、例えば、加水分解、酸処理、ＢＢｒ₃処理、及び接触還元等の常法により行うことができる。

接触還元は、水素雰囲気下、パラジウム−炭素等の触媒を用い、酢酸適当な溶媒中（例えば、メタノール、エタノール、酢酸）、室温〜加熱下で行うことができる。

ＢＢｒ₃を用いる脱メチル化は適当な溶媒（例えば、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、酢酸）中、−７８℃〜５０℃の温度で行うことができる。

製法Ｃ
目的化合物（Ｉ）の内、式（Ｉ−ｃ）：

（式中、ｎは前記と同一意味を有する）
またはその薬理学的に許容される塩は、化合物(ＩＩ)を、式(ＩＩＩ−ｃ)：
Ｈ₂ＮＣ(＝Ｏ)−(ＣＨ₂)_n−ＣＯＯＨ (ＩＩＩ−ｃ)
（式中、ｎは前記と同一意味を有する）
で示される化合物またはその反応性誘導体と縮合させ、次いで、必要に応じて得られた化合物を薬理学的に許容される塩に変換することにより製造することができる。

化合物（ＩＩ）と化合物（ＩＩＩ−ｃ）またはその反応性誘導体との縮合反応は、製法Ａに記載の方法と同様にして行うことができる。

式(ＩＩ)の化合物はＷＯ０１／３０７８１記載の方法、または後記参考例記載の方法に従って製造することができる。

本明細書および特許請求の範囲中、Ｃ_1-6アルキルは１〜６個の炭素原子を持つ直鎖または分岐鎖アルキル基を意味し、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基等が挙げられ、好ましくは１〜４個の炭素原子を持つものである

略語：
ＢＯＰ−Ｃｌ：ビス(２−オキソ−３−オキサゾリジニル)ホスフィン酸クロリド
ＢＯＰ試薬：ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ−トリス(ジメチルアミノ)ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート
ＢＳＡ：ウシ血清アルブミン
ＤＩＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＡＰ：４−ジメチルアミノピリジン
ＥＤＣ：１−(３−ジメチルアミノプロピル)−３−エチルカルボジイミド塩酸塩
ＨＢＳＳ：ハンク平衡塩溶液
ＨＯＢＴ：１−ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＨＳＡ：ヒト血清アルブミン
ＰＢＳ：リン酸緩衝生理食塩水

製造例１：（５Ｓ，７Ｓ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−アセチルアミノ−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオン
（５Ｓ，７Ｓ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−アミノ−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオン（７８．５ｍｇ）のテトラヒドロフラン（５ｍＬ）溶液に、無水酢酸（１．０ｍＬ）を加えた。反応混合物を４５℃で２時間攪拌し、混合物を濃縮し、分取用薄層クロマトグラフィー（シリカゲル；ジクロロメタン）により精製して標記化合物を得た（８４ｍｇ）。ＭＳ（ｍ／ｚ）４７８．８（ＭＮａ⁺）。

製造例２：（５Ｓ，７Ｓ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−［（３−カルバモイルプロピオニル）アミノ］−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオン
（５Ｓ，７Ｓ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−アミノ−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオン（８２．７ｍｇ）、スクシンアミド酸（４５．８６ｍｇ）、ＥＤＣ（９３．１２ｍｇ）、ＨＯＢＴ（６１．２４ｍｇ）、ＤＩＥＡ（１０４．７９μＬ）およびテトラヒドロフラン（５ｍＬ）の混合物を室温で一晩攪拌した。反応混合物を濃縮し、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（Ｂｅｃｋｍａｎ ５μ Ｃ１８カラム；勾配溶離：水／アセトニトリル＝１０〜１００％／０．１％トリフルオロ酢酸）により精製して標記化合物７２ｍｇを得た。ＭＳ（ｍ／ｚ）５３６（ＭＮａ⁺）。

製造例３：（５Ｓ，７Ｓ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−［（２−カルバモイルアセチル）アミノ］−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオン
（５Ｓ，７Ｓ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−アミノ−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオン（２００ｍｇ）、マロンアミド酸（５９．５ｍｇ）、ＥＤＣ（１１２ｍｇ）、ＨＯＢＴ（９７．５ｍｇ）、ＤＩＥＡ（１６８μＬ）およびテトラヒドロフラン（５ｍＬ）の混合物を室温で一晩攪拌した。反応混合物を濃縮した。残渣を酢酸エチルに溶解し、得られた溶液を洗浄し、乾燥し、濃縮して標記化合物を得た（２１２ｍｇ）。ＭＳ（ｍ／ｚ）５００（ＭＨ⁺）。

製造例４：（５Ｓ，７Ｓ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−［（３−ヒドロキシプロピオニル）アミノ］−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオン
（１）（５Ｓ，７Ｓ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−アミノ−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオン（０．３００ｇ）、３−メトキシプロピオン酸（０．２０９μＬ）、ＥＤＣ（０．２２４ｇ）、ＨＯＢＴ（０．２２１ｇ）、ＤＩＥＡ（０．３８μＬ）およびテトラヒドロフラン（１５ｍＬ）の混合物を室温で一晩攪拌した。反応混合物を濃縮した。残渣をＨＰＬＣ［Ｂｅｃｋｍａｎ ５μＣ１８カラム；勾配溶離：水／アセトニトリル（１０〜１００％）／０．１％酢酸］により精製して泡状体を得た。これを酢酸エチルに溶解し、得られた溶液を洗浄し、乾燥し、濃縮して（５Ｓ，７Ｓ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−［（３−メトキシプロピオニル）アミノ］−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオンを得た（０．２５９ｇ）。ＭＳ（ｍ／ｚ）５０１（ＭＨ⁺）。

（２）三臭化ホウ素（１Ｍ ジクロロメタン溶液、３ｍＬ）を、（５Ｓ，７Ｓ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−［（３−メトキシプロピオニル）アミノ］−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオン（０．１６ｇ）のジクロロメタン（１５ｍＬ）溶液に−７８℃で加え、混合物を８時間、−７８℃で攪拌した。混合物を濃縮し、残渣をＨＰＬＣ［Ｂｅｃｋｍａｎ ５μＣ１８カラム；勾配溶離：水／アセトニトリル（１０〜１００％）／０．１％酢酸）］により精製して泡状体を得た。これを酢酸エチルに溶解し、得られた溶液を洗浄し、乾燥し、濃縮して標記化合物を得た（０．１１９ｇ）。ＭＳ（ｍ／ｚ）４８７（ＭＨ⁺）。

製造例５：（５Ｓ，７Ｓ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−［（２−ヒドロキシアセチル）アミノ］−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオン
（１）（５Ｓ，７Ｓ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−アミノ−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオン（１５０ｍｇ）およびＤＩＥＡ（１８９μＬ）のテトラヒドロフラン（４ｍＬ）溶液に、塩化ベンジルオキシアセチル（５７μＬ）のテトラヒドロフラン（２ｍＬ）溶液を加え、混合物を室温で一晩攪拌した。反応混合物を濃縮し、残渣を酢酸エチル中に採取した。得られた溶液を洗浄し、乾燥し、ろ過し、濃縮した。残渣をＨＰＬＣ［Ｂｅｃｋｍａｎ ５μＣ１８カラム；勾配溶離：水／アセトニトリル（１０〜１００％）／０．１％酢酸］により精製して泡状体を得た。これを酢酸エチルに溶解し、得られた溶液を洗浄し、乾燥し、濃縮して（５Ｓ，７Ｓ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−［（２−ベンジルオキシアセチル）アミノ］−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオンを得た（０．１３５ｇ）。ＭＳ（ｍ／ｚ）５６３．４［ＭＨ⁺］。

（２）上記で得た（５Ｓ，７Ｓ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−［（２−ベンジルオキシアセチル）アミノ］−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオン（０．１２５ｇ）、５％パラジウム−炭素（１５ｍｇ）およびエタノール（１０ｍＬ）の混合物に水素をバブリングし、得られた混合物を一晩、水素雰囲気下で攪拌した。混合物に５％パラジウム−炭素（１０ｍｇ）を追加し、一晩水素雰囲気下で攪拌した。反応混合物をセライトろ過し、ろ液を濃縮した。残渣をＨＰＬＣ（Ｂｅｃｋｍａｎ ５μＣ１８カラム；勾配溶離：水／アセトニトリル（１０〜１００％）／０．１％トリフルオロ酢酸）により精製して標記化合物を得た（０．０２３ｇ）。ＭＳ（ｍ／ｚ）４７３［ＭＨ⁺］および４９５［ＭＮａ⁺］。

参考例：（５Ｓ，７Ｓ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−アミノ−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオン
標記化合物を、以下の反応工程式に従って製造した。
反応工程式

（上記の反応工程式において、ｔＢＤＭＳＯはｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ基であり、ＭｓＯはメタンスルホニルオキシ基である。）

（１）ｐ−トルエンスルホン酸（５０．６ｇ）を、Ｌ−４−トランス−ヒドロキシプロリン（２５．２５ｇ）のベンジルアルコール（１００ｍＬ）とベンゼン（２５０ｍＬ）の混合物中の懸濁液に加え、ディーン・シュターク（Ｄｅａｎ Ｓｔａｒｋ）トラップを使用しながら混合物を２４時間加熱した。反応混合物を濃縮し、ジエチルエーテルを加えて固形物を析出させた。固形物をろ過し、ジエチルエーテルで洗浄し、乾燥してＬ−４−トランス−ヒドロキシプロリンベンジルエステル（７５ｇ）を得た。

（２）上記で得たＬ−４−トランス−ヒドロキシプロリンベンジルエステル ｐ−トルエンスルホン酸塩（４０．４３ｇ）の、テトラヒドロフラン（５００ｍＬ）およびＤＩＥＡ（５１．３ｍＬ）中懸濁液に、３，５−ジクロロフェニルイソシアネート（２２．１ｇ）を加えた。一晩攪拌後、反応混合物を濃縮した。残渣を酢酸エチルに溶解し、洗浄し、乾燥し、ろ過し、濃縮した。残渣を酢酸エチル／ヘキサン（１：１）中で粉砕し、白色固形物をろ過し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ヘキサン／酢酸エチル＝２：１）により精製して（２Ｓ，４Ｒ）−２−［（３，５−ジクロロフェニル）カルバモイル］−４−ヒドロキシプロリンベンジルエステルを得た（３３．０７ｇ）。

（３）（２Ｓ，４Ｒ）−２−［（３，５−ジクロロフェニル）カルバモイル］−４−ヒドロキシプロリンベンジルエステル（３３．０７ｇ）のアセトニトリル（８００ｍＬ）中の懸濁液に、イミダゾール（１１ｇ）およびｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロリド（１３．６４ｇ）を加えた。４８時間攪拌した後、反応混合物を濃縮した。残渣を酢酸エチルに溶解し、洗浄し、乾燥し、ろ過し、濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ヘキサン／酢酸エチル＝２：１）により精製して（２Ｓ，４Ｒ）−２−［（３，５−ジクロロフェニル）カルバモイル］−４−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）プロリンベンジルエステルを得た（４４．４５ｇ）。

（４）（２Ｓ，４Ｒ）−２−［（３，５−ジクロロフェニル）カルバモイル］−４−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）プロリンベンジルエステル（２３．４９ｇ）のアセトニトリル（５００ｍＬ）溶液に、ＤＩＥＡ（３４．４４ｍＬ）を加え、混合物を加熱還流した。２４時間還流した後、反応混合物を濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ヘキサン〜ヘキサン／酢酸エチル＝１：１）により精製して、３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオンの２つのジアステレオマーを分離した。
ジアステレオマーＡ：７．４６ｇ，ＭＳ：ｍ／ｚ ４１５（Ｍ⁺）、および
ジアステレオマーＢ：１０．６６ｇ，ＭＳ：ｍ／ｚ ４１５（Ｍ⁺）。

（５）上記で得た化合物（ジアステレオマーＡまたはＢ：１２．７３ｇ）を以下のようにしてベンジル化した。窒素雰囲気下、ジイソプロピルアミン（６．５ｍＬ）のテトラヒドロフラン（１００ｍＬ）溶液に、攪拌しながらｎ−ブチルリチウム（１．６Ｍヘキサン溶液、３０ｍＬ）を−７８℃で加えた。混合物を−７８℃にさらに３０分間維持した。窒素雰囲気下、３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオン（１２．７３ｇ）のテトラヒドロフラン（１００ｍＬ）溶液に、カニューレを用いて混合物を−７８℃で加えた。−７８℃で３０分間攪拌した後、４−シアノ−α−ブロモトルエン（９．０８ｇ）のテトラヒドロフラン（１００ｍＬ）溶液を加えた。反応混合物を−７８℃で２．５時間、攪拌し、次いで、ゆっくりと室温まで昇温させ、室温で０．５時間、放置した。反応混合物を濃縮し、残渣を酢酸エチルに溶解した。酢酸エチル溶液を洗浄し、乾燥し、ろ過し、濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ヘキサン／酢酸エチル＝２４：１〜３：１）により精製して（５Ｓ，７Ｒ）−および（５Ｒ，７Ｒ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオンを得た。
（５Ｓ，７Ｒ）異性体：７．６ｇ，ＭＳ：ｍ／ｚ ５３０（Ｍ⁺）および
（５Ｒ，７Ｒ）異性体：１．８ｇ，ＭＳ：ｍ／ｚ ５３０（Ｍ⁺）。

（６）（５Ｓ，７Ｒ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオン（１．０ｇ）のテトラヒドロフラン（１ｍＬ）溶液を７０％ＨＦ／ピリジン（２５ｍＬ）に加えた。反応混合物を24時間攪拌した後、濃縮した。残渣を酢酸エチルに溶解し、得られた溶液を洗浄し、乾燥し、濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；メタノール／ジクロロメタン＝２〜７％）により精製して（５Ｓ，７Ｒ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−ヒドロキシ−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオン（０．５２ｇ）を得た。ＭＳ（ｍ／ｚ）４１６［ＭＨ⁺］。

（７）上記で得た（５Ｓ，７Ｒ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−ヒドロキシ−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオン（０．５２ｇ）のジクロロメタン（８ｍＬ）溶液に、０℃で、ＤＩＥＡ（０．４５ｍＬ）、次いでメタンスルホニルクロリド（０．１５ｍＬ）を添加し、混合物を１．５時間攪拌した。反応混合物をジクロロメタンで希釈し、得られた混合物を洗浄し、乾燥し、ろ過し、濃縮して（５Ｓ，７Ｒ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−メタンスルホニルオキシ−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオンを得た（０．７６ｇ）。この化合物をそのままで、次の工程に使用した。ＭＳ（ｍ／ｚ）５０１［ＭＨ⁺］。

（８）上記で得た（５Ｓ，７Ｒ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−メタンスルホニルオキシ−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオン（０．７６ｇ）のジメチルホルムアミド（５ｍＬ）溶液にアジ化ナトリウムを添加し、混合物を２４時間攪拌した。反応混合物を酢酸エチルと水の間で分配した。有機溶液を洗浄し、乾燥し、ろ過し、濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ジクロロメタン）により精製して（５Ｓ，７Ｓ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−アジド−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオン（０．４６ｇ）を得た。ＭＳ（ｍ／ｚ）４４１［ＭＨ⁺］。

（９）上記で得た（５Ｓ，７Ｓ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−アジド−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオン（０．４２ｇ）、５％パラジウム−炭素（１５ｍｇ）およびエタノール（１５ｍＬ）の混合物に、水素をバブリングし、反応混合物を一晩水素雰囲気下で攪拌した。反応混合物をセライトろ過し、ろ液を濃縮した。残渣をＨＰＬＣ（Ｂｅｃｋｍａｎ５μＣ１８カラム；勾配溶離、水／アセトニトリル（１０〜１００％）／０．１％トリフルオロ酢酸）により精製して（５Ｓ，７Ｓ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−アミノ−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオン（０．２１ｇ）を得た。ＭＳ（ｍ／ｚ）４１５［ＭＨ⁺］。

実験例１ 細胞接着阻害作用
組換え型ＩＣＡＭ−１を、ヒトＩＣＡＭ−１の５個の細胞外ドメインとヒトＩｇＧの定常領域との融合から構築した。組換え型ＩＣＡＭ−１（以下、ＩＣＡＭ−１）はプロテインＡアフィニティクロマトグラフィーで精製し、−２０℃で貯蔵した。ＩＣＡＭ−１をＰＢＳ(ｐＨ７.５)で希釈し、ファルコンプロバインド(Falcon Probind) ＩＩＩプレートに１００μｌ／ウェルずつ移し、４℃で一晩インキュベーションして固定した。非特異的バックグランド接着の基準として、ＢＳＡで被膜されたウェルを使用した。洗浄したプレートを卵白アルブミンの０．２５％ＰＢＳ溶液で３７℃下１時間ブロッキングした。ＨＢＳＳ洗浄ジャルカット(Jurkat)細胞を最終濃度２.５×１０⁶／ｍＬになるようにＴＢＳｇ接着緩衝液(２４ｍＭ Ｔｒｉｓ、ｐＨ７.４、０.１４Ｍ塩化ナトリウム、２.７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭグルコース、０.１％ＨＳＡ)に懸濁した。この懸濁液（１００μｌ）を、プレート緩衝液(ＴＢＳｇ緩衝液、１０ｍＭ塩化マグネシウム、２％ジメチルスルホキシド含有)１００μｌを含有したＩＣＡＭ−１被膜プレートに加えた。接着は３７℃で１時間行った。非接着細胞をＥＬ４０４プレートウォッシャー(バイオテック・インスツルメント；ハイランド・パーク、バーモント)を用いて除いた。接着した細胞数を、酵素基質としてｐ−ニトロフェノール−Ｎ−アセチル−β−Ｄ−グルコ−スアミニドを用いて、内因性Ｎ−アセチル−ヘキソサミニダーゼの酵素活性を測定することにより定量した。遊離したｐ−ニトロフェノールの量を、垂直経路分光光度計で４０５ｎｍでの光学密度を読むことにより計測し (ＶＭＡＸ カイネティック・マイクロプレート・リーダー、ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＤＥＶＩＣＥＳ、メンロ・パーク、カルフォルニア) 、細胞接着を定量した。試験化合物は、ジメチルスルホキシドに溶解し、プレート緩衝液で必要濃度に希釈した後、ＩＣＡＭ−１被膜プレートに移した。試験化合物（前記製造例記載化合物）がジャルカット細胞とＩＣＡＭ−１被膜プレートの接着（細胞接着）を５０％阻害する濃度（ＩＣ₅₀）を算出した。結果を表１に示す。

実験例２ ニューロキニン１（ＮＫ１）受容体結合阻害作用
ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・ファーマコロジー（European Journal of Pharmacology)２５４巻、２２１−２２７頁（１９９４年）記載の方法に準じて、ヒトリンパ芽球腫細胞（ＩＭ−９）（４×１０⁶個）を０．３ｎＭ［³Ｈ］（Ｓａｒ⁹，Ｍｅｔ¹¹（Ｏ₂））サブスタンスＰ（Ｋｄ値：０．１７ｎＭ）および公比１０にて調製した検体化合物とともに１５０ｍＭ塩化ナトリウム、３ｍＭ塩化マンガン、４０μg／ｍＬバシトラシン、４μg／ｍＬロイペプチン、４μg／ｍＬキモスタチン、４μg／ｍＬホスホラミドン、０．０２％ウシ血清アルブミンを含む５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．４、２５℃）０．５ｍＬ中にて室温で６０分間反応させた。予め０．３％ポリエチレンイミン処置したＧＦ／Ｃガラスフィルターで吸引ろ過し、ウシ血清アルブミンおよび各種蛋白分解酵素阻害剤を含まない氷冷反応緩衝液３ｍＬで２回洗浄し、液体シンチレーションカウンターにてフィルター上の放射能（ｄｐｍ）を測定した（総結合量）。非特異的結合量はＮＫ１受容体拮抗作用を持つＬ−７０３６０６（２μＭ）を用いて同様にして測定した。特異的結合量は、総結合量から非特異的結合量を差し引いて求め、各濃度における検体化合物の標識リガンドの特異的結合に対する阻害率を計算し、５０％阻害濃度（ＩＣ₅₀）を算出した。結果を表２に示す。なお、Ｌ−７０３６０６は下記の式で示される化合物である。

本発明の有効成分（Ｉ）はα_Lβ₂インテグリン介在細胞接着阻害作用およびサブスタンスＰ受容体拮抗作用を有する。このため、本発明の医薬組成物はＬＦＡ−１介在細胞接着に関連する病態の治療または予防剤として、並びにサブスタンスＰにより引き起こされる、または介在される病態の治療または予防剤として用いることができる。

Claims (18)

1. 式(Ｉ)：
   

   

   （式中、Ｒは水素原子、ヒドロキシル基またはカルバモイル基、ｎは１または２を表す）
   で示される化合物、またはその薬理学的に許容される塩を有効成分としてなる医薬組成物。
2. Ｒが水素原子である、請求項１記載の医薬組成物。
3. Ｒがヒドロキシル基である、請求項１記載の医薬組成物。
4. Ｒがカルバモイル基である、請求項１記載の医薬組成物。
5. ｎが１である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
6. ｎが２である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
7. Ｒが水素原子でありｎが１である、請求項１記載の医薬組成物。
8. Ｒがヒドロキシル基でありｎが１である、請求項１記載の医薬組成物。
9. Ｒがカルバモイル基でありｎが２である、請求項１記載の医薬組成物。
10. 化合物が、（５Ｓ，７Ｓ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−アセチルアミノ−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオン、
    （５Ｓ，７Ｓ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−［（２−ヒドロキシアセチル）アミノ］−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオン、および
    （５Ｓ，７Ｓ）−５−（４−シアノベンジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−７−［（３−カルバモイルプロピオニル）アミノ］−１，３−ジアザビシクロ［３．３．０］オクタン−２，４−ジオンから選択される、請求項１記載の医薬組成物。
11. ＬＦＡ−１介在病態の治療または予防剤である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
12. ＬＦＡ−１介在病態が炎症性疾患、自己免疫疾患またはアレルギー性疾患である、請求項１１記載の医薬組成物。
13. サブスタンスＰにより引き起こされる、または介在される疾患の治療または予防剤である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
14. 疾患が炎症性疾患である、請求項１３記載の医薬組成物。
15. リウマチ関節炎、喘息、慢性閉塞性肺疾患、アレルギー疾患、成人呼吸窮迫症候群、ＡＩＤＳ、心血管疾病、血栓症、有害な血小板凝集、血栓溶解後の再閉塞、再潅流障害、皮膚炎症疾患、骨粗鬆症、変形性関節症、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、新生物疾患、外傷、網膜剥離、Ｉ型糖尿病、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、眼炎症状態、炎症性腸疾患、膀胱炎、胃障害、限局性回腸炎、シェーグレン症候群および臓器移植後の拒絶反応から選択される疾患の治療または予防剤である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
16. 疾患が、乾癬、リウマチ関節炎、炎症性腸疾患、全身性エリテマトーデス、アトピー性皮膚炎、シェーグレン症候群または臓器移植後の拒絶反応である、請求項１５記載の医薬組成物。
17. 疾患が、リウマチ関節炎、喘息、慢性閉塞性肺疾患、乾癬、多発性硬化症または臓器移植後の拒絶反応である、請求項１５記載の医薬組成物。
18. 疾患が、喘息、炎症性腸疾患、膀胱炎または胃障害である、請求項１５記載の医薬組成物。