JP2004529086A - Ｓｎ−３８脂質複合体及び使用方法 - Google Patents

Abstract

本発明は、新規組成物、及び細胞増殖によって引き起こされる疾患の治療方法、特に、哺乳動物、より詳細には、ヒトにおける癌の治療方法のためにある。本発明の治療組成物は、ＳＮ−３８脂質複合体を含み、ここで、複合体は、種々の中性又は荷電した脂質の任意のもの、及び、望ましくはカルジオリピンを含み得る。組成物は、複合体中にＳＮ−３８を有効に組み込むことができ、比較的高濃度のＳＮ−３８を可溶化することができる。

Description

【０００１】
（発明の背景）
本発明は、ＳＮ−３８と脂質との複合体、それらの製造方法、及び疾患、特に真核細胞増殖を伴う疾患の治療におけるそれらの使用に関する。
【０００２】
（背景の説明）
米国特許４，４７３，６９２で最初に開示され、７−エチル−１０−ヒドロキシカンプトテシン（ＳＮ−３８）として、及びより正式には（（＋）−（４Ｓ）−４，１１−ジエチル−４，９−ジヒドロキシ−ｌＨ−ピラノ［３’，４’：６，７］−インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−３，１４（４Ｈ，１２Ｈ）−ジオンとして知られる化合物は、カンプトテシン（ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ）の誘導体であるイリノテカン（ｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ）の活性な代謝物である。それは、可逆的な単鎖切断を誘発することによって、ＤＮＡのねじれ歪みを緩和する役割を担う酵素である酵素トポイソメラーゼＩと結合すると考えられている。結合したＳＮ−３８は、トポイソメラーゼＩによる単鎖切断の再結合を阻害するようであり、それによって、明らかに他の方法では切断を十分に修復することができない哺乳動物の細胞中に細胞毒性を引き起こすようである。
【０００３】
イリノテカンのＳＮ−３８への代謝変換は、カンプトテシン部分とジピペリジノ側鎖との間のカルバメート結合をカルボキシルエステラーゼが媒介して開裂することによって主に肝臓中で起こる。次いで、この誘導体は抱合を受け、グルクロニド代謝物を形成する。
【０００４】
ヒト及びげっ歯類の腫瘍細胞系から精製されたトポイソメラーゼＩの阻害剤として、ＳＮ−３８は、イリノテカンより約１０００倍強力である。ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞毒性アッセイは、ＳＮ−３８が、イリノテカンより最高２，０００倍まで強力であることを示す。従って、ＳＮ−３８は、非常に有効な抗腫瘍剤である可能性を有する。更に、ＳＮ−３８は、肝臓による活性化を必要としない点で、そのカンプトテシン前駆体に対して利点を有する。それゆえ、適切な製剤が、局所ならびに全身の治療方法において使用できよう。
【０００５】
ＳＮ−３８は、水溶液に非常に不溶である。水溶性が欠けているにもかかわらず、それは脂質膜への親和性も低く、脂質膜から水層中に沈殿する傾向がある。これらの溶解性の特徴は、治療剤としてのＳＮ−３８の使用を妨害する。更に、繰返し投与後のＳＮ−３８の有効性は、その有効性を減少させるばかりでなく、ある種の他の抗腫瘍治療剤の有効性も減少させる多剤耐性の発展によって限定され得る。ＳＮ−３８の一般毒性によってもまた、その治療上の使用が限定される。
【０００６】
従って、細胞増殖と関連した疾患の治療に、ＳＮ−３８を有効に使用することができるように、ＳＮ−３８の効力を改善する製剤が必要である。このような製剤は、適切な溶解性及び毒性の特徴を有すべきであり、癌のようなある種の増殖性疾患の治療に有用であろう。
【０００７】
本発明は、このような組成物及び方法を提供する。本発明のこれらの及びその他の利点、ならびに更なる発明の特徴は、本明細書中に提供される本発明の説明から明らかとなろう。
【０００８】
（発明の概要）
本発明は、新規ＳＮ−３８組成物、それらの製造方法、及び、特に哺乳動物、とりわけヒトにおける、癌のような真核細胞増殖によって引き起こされる疾患の治療におけるそれらの使用のためにある。ＳＮ−３８組成物は、脂質と複合体を形成したＳＮ−３８を含み、ここでＳＮ−３８の５０重量％超が脂質と複合体を形成している。複合体はリポソームを含み、種々の中性又は荷電脂質物質の任意のもの、及び、望ましくはカルジオリピンを含み得る。適切な脂質は、ＳＮ−３８と結合して安定な医薬製剤を提供し、哺乳動物への投与を容易にする任意の医薬上許容される親油性物質を含む。カルジオリピンは、合成又は天然供給源由来であり得る。脂質複合体は、正味の陰性又は陽性電荷を帯びることができ、又は中性であり得る。好ましい複合体はまた、α−トコフェロールを含む。ＳＮ−３８複合体は、抗腫瘍剤、抗真菌剤、抗生物質、又は他の活性剤を含む、ＳＮ−３８以外の第２の治療剤と共に有利に使用することができる。リポソーム複合体は、所望であれば、多重膜ベシクル、単一膜ベシクル、又はそれらの混合物であり得る。本発明は、このようなＳＮ−３８複合体の製造方法も包含する。本発明は更に、治療有効量のＳＮ−３８複合体を医薬上許容される賦形剤中に含ませ、癌のような増殖性疾患を治療するためにヒトなどの哺乳動物へ投与する方法にも向けられている。
【０００９】
ＳＮ−３８複合体の１つの特に好ましい製造方法では、ＳＮ−３８をアルカリ溶液に溶解し、脂質フィルムを水和してリポソームを形成するのに用いる。
【００１０】
（好ましい実施形態の詳細な説明）
本発明は、哺乳動物の宿主へＳＮ−３８を送達するための組成物及び方法を提供する。該組成物及び方法は、ＳＮ−３８の溶解性問題の回避、高いＳＮ−３８及び複合体の安定性、高濃度でボーラス又は短時間の注射としてＳＮ−３８を投与する能力、ＳＮ−３８毒性の減少、ＳＮ−３８の治療効力の増大、及び多剤耐性の調節を特徴とする。
【００１１】
本発明の組成物は、複合体が望ましくはカルジオリピンを含む、ＳＮ−３８との脂質複合体である。適切な複合体は、安定な医薬製剤を製造して使用することができるような溶解性の特徴を付与する親油性化合物と結合したＳＮ−３８を有することを特徴とする。該複合体は、リポソーム及びミセルを含むが、それらに限定されない。該複合体中で、ＳＮ−３８は、共有結合、疎水結合、静電結合、水素結合、又は他の結合によって、脂質と結合し得るし、ＳＮ−３８が、単にリポソーム内部に取り込まれている場合でさえ、結合しているとみなされる。ＳＮ−３８組成物は、脂質と複合体を形成したＳＮ−３８を含み、ここで、ＳＮ−３８の約５０重量％以上が脂質と複合体を形成し、より好ましくは約７０重量％以上、更により好ましくは約８０重量％以上、そして最も好ましくは、ＳＮ−３８の約９０重量％以上が脂質と複合体を形成している。
【００１２】
望ましくは、ＳＮ−３８脂質複合体はカルジオリピンを含む。任意の適切なカルジオリピンを使用することができる。例えば、カルジオリピンは、天然供給源から精製することができるし、又は、当技術分野で公知の方法によって、テトラミリスチルカルジオリピンのように、化学的に合成することができる。
【００１３】
ＳＮ−３８複合体は一般に、カルジオリピンに加えて他の複合体形成剤を含む。適切な剤は、親水性領域及び疎水性領域を有する、医薬上許容される合成、半合成（改変した天然の）又は天然に存在する化合物を含む。このような化合物は、正味の陽性、陰性、若しくは中性電荷を有し得る、又は電荷を欠いた両親媒性分子を含む。適切な複合体形成剤は、合成の、又は卵若しくはダイズなどの天然供給源由来であり得るリン脂質などの化合物を含む。適切なリン脂質は、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、ホスファチジン酸（ＰＡ）、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、スフィンゴミエリン（ＳＰＭ）などの化合物を単独又は組み合わせて含む。リン脂質であるジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルグリセロール（ＤＭＰＧ）、ジオレオイルホスファチジルグリセロール（ＤＯＰＧ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジアラキドノイルホスファチジルコリン（ＤＡＰＣ）、又は水素化ダイズホスファチジルコリン（ＨＳＰＣ）を使用することができる。
【００１４】
ＳＮ−３８脂質複合体は一般に、コレステロール、コレステロールのポリエチレングリコール誘導体（ＰＥＧ−コレステロール）、コプロスタノール、コレスタノール、若しくはコレスタン、又はα−トコフェロールなどの少なくとも１つのステロイド成分を含む。それらはまた、コレステロールヘミスクシネート（ＣＨＳ）、硫酸コレステロールなどのステロール誘導体を含んでもよい。α−トコフェロールヘミスクシネート（ＴＨＳ）などのトコフェロールの有機酸誘導体も使用することができる。適切なＳＮ−３８複合体はまた、糖脂質、又は天然の若しくは誘導体化された脂肪酸などと共に形成することができる。好ましいＳＮ−３８複合体形成剤は、カルジオリピン、ホスファチジルコリン、コレステロール、及びα−トコフェロールを含み、それらを組み合わせてリポソームを形成する。
【００１５】
任意の適切な量のＳＮ−３８を使用することができる。ＳＮ−３８の適切な量は、本発明の複合体中に安定に取り込まれる量である。ＳＮ−３８は、約０．０１〜約５ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは約０．１〜約４ｍｇ／ｍｌ、更により好ましくは約０．５〜３ｍｇ／ｍｌ、及び一層好ましくは約０．８〜２、又は最も好ましくは約１〜１．５ｍｇ／ｍｌのＳＮ−３８濃度で、上記組成物中に好ましくは存在すべきである。
【００１６】
適切な組成物はまた一般に、約１〜約５０重量％のカルジオリピン、又は好ましくは約２〜約２５重量％のカルジオリピン、又はより好ましくは約５重量％〜約２０重量％のカルジオリピンを含む。このような組成物はまた一般に、約１重量％〜約９５重量％のホスファチジルコリン、又はより好ましくは約２０重量％〜約７５重量％のホスファチジルコリンを含む。好ましい組成物はまた一般に、α−トコフェロールを約０．００１重量％〜約５重量％の濃度で含む。
【００１７】
複合体形成剤は、公知の方法によりそれらを用いてリポソームを生成させるときにはリポソーム形成物質と考えることもできる。所望の複合体を生成するために、複合体形成剤を適切な溶媒中に単独で又はＳＮ−３８を含む他の親油性成分と共に溶解させることができる。適切な溶媒は、十分な溶解性を与え、医薬上許容されない残渣の医薬上許容されない量を残すことなく蒸発させることができる溶媒である。例えば、カルジオリピンは、エタノール、メタノール、クロロホルム、又はアセトンなどの非極性又は僅かに極性の溶媒に溶解させることができる。ＳＮ−３８は、非極性、僅かに極性、又は極性の溶媒に溶解させることができる。適切なＳＮ−３８溶媒の例は、メタノール、クロロホルム、アセトン、又は水性アルカリ溶媒を含む。
【００１８】
一般に、本方法は、溶解した親油性成分を一緒に混合し、溶媒を蒸発又は凍結乾燥させて均一な脂質フィルムを形成することを含む。溶媒の蒸発は、成分の安定性を保つ任意の適切な手段によることができる。薬剤の大部分がその化学構造、又はその化学構造と平衡状態にある化学構造を保持する限り、ＳＮ−３８は安定であると言うことができる。ＳＮ−３８と平衡状態にある化学構造は、特に、高いｐＨではより大きな溶解性を与えるが、ｐＨを下げるとＳＮ−３８に変わる構造を含む。
【００１９】
次いで乾燥脂質フィルム混合物に適切な溶媒を加えることによって、リポソーム又はミセルを含むＳＮ−３８複合体を形成することができる。適切な溶媒は、医薬上許容される極性溶媒を含む。一般に、溶媒は、医薬上許容される塩、バッファー、又はそれらの混合物を含む水溶液である。ある方法では、脂質フィルムを、アルカリ性ｐＨを有するＳＮ−３８水溶液で水和させる。適切なｐＨは約７〜約１１の範囲であり、約８〜約１０のｐＨがより好ましく、約９〜約１０のｐＨが最も好ましい。適切なｐＨを有する水溶液は、適当量のＮａＯＨを溶解させた水から調製することができる。あるいは、このような溶液は、所望のｐＨの約１ｐＨ単位内のｐＫを有する、Ｔｒｉｓ・ＨＣｌなどのバッファーで調製することができる。
【００２０】
リポソーム複合体は、激しく混合させながら、脂質を水溶液中に分散させることによって形成される。選択した方法により、脂質フィルムと極性溶媒との間に、混合物を強力に均質化し、所望の複合体を形成するのに十分な剪断力が誘導されるならば、任意の混合方法を使用することができる。例えば、混合は、渦状攪拌（ｖｏｒｔｅｘｉｎｇ）、磁気撹拌、及び／又は音波処理によることができる。多重膜リポソームが所望の場合、単に溶液を渦状に攪拌することによって形成できる。単一膜リポソームが所望の場合、音波処理又は濾過工程が方法に含まれる。
【００２１】
リポソームＳＮ−３８複合体は、適切な溶媒中でＳＮ−３８、カルジオリピン、コレステロール、ホスファチジルコリン及びα−トコフェロールを混合して均一混合物を形成することによって製造することができる。該混合物を乾燥して脂質フィルムを形成し、水若しくは水溶液の添加及び混合によってリポソームに水和させる。
【００２２】
あるいは、ＳＮ−３８リポソームは、親油性成分（ＳＮ−３８を除く）を一緒に溶解し、それらを蒸発させて脂質フィルムを形成することによって製造することができる。ＳＮ−３８の溶液は、アルカリ性ｐＨの水溶液として調製され、乾燥脂質フィルムを水和し、リポソームを形成するために使用される。
【００２３】
一般に、ＳＮ−３８を取り込んだリポソームを生成する限り、任意の適切なリポソーム形成方法を使用することができる。多重膜ベシクル、安定な複数膜（ｐｌｕｒｉｌａｍｅｌｌａｒ）ベシクル、及び逆相蒸発ベシクルを使用することができる。理解されることではあるが、本発明は、どのように製造されたＳＮ−３８を取り込んだリポソーム組成物であっても包含することが意図されている。
【００２４】
適切なリポソームは、中性、陰性若しくは陽性に荷電することができ、電荷は、リポソーム成分の電荷とリポソーム溶液のｐＨとの関数である。例えば、中性のｐＨで、陽性に荷電したリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロール及びステアリルアミンの混合物から形成することができる。陰性に荷電したリポソームは、例えば、ホスファチジルコリン、コレステロール及びホスファチジルセリンから形成することができる。
【００２５】
複合体が特定の組織又は器官をターゲッティングすることができるようなＳＮ−３８複合体に標的剤を結合させることができる。該剤は、共有結合、静電結合、又は疎水結合によって複合体と結合することができる。適切な標的剤は、炭水化物及びタンパク質、又は所望の組織若しくは器官をターゲッティングすることが知られている他の薬剤を含む。例えば、米国特許６，０５６，９７３（引用することにより本明細書の開示の一部とされる）は、多くの標的剤及び標的細胞を開示する（１１欄１−４１行参照）。適切なコンジュゲートの製造方法も開示されている（１１欄５５行―１４欄２０行参照）。
【００２６】
ＳＮ−３８複合体は、それらのサイズ分布を制御するために、適切なフィルターで濾過することができる。適切なフィルターは、濾液から所望サイズ範囲のリポソームを得るために使用することができるものを含む。例えば、リポソームを形成し、その後に５ミクロンのフィルターで濾過し、約５ミクロン以下の直径を有するリポソームを得ることができる。あるいは、１μｍ、５００ｎｍ、２００ｎｍ、１００ｎｍ又は他のフィルターを用いて、それぞれ、約１μｍ、５００ｎｍ、２００ｎｍ、１００ｎｍ又は任意の適切なサイズ範囲の直径を有するリポソームを得ることができる。あるいは、以下に記載するように、液状の賦形剤又は希釈剤中に製剤化した後に、濾過を行うことができる。
【００２７】
所望であれば、蒸発又は凍結乾燥などによってリポソームを乾燥することができ、そのリポソームを任意の望ましい極性溶媒中に再懸濁することができる。リポソームを凍結乾燥する場合、安定性を与えるために、凍結乾燥前に非還元糖を加えることができる。１つのこのような適切な糖はショ糖である。ＳＮ−３８を含むアルカリ性の水性溶媒で脂質フィルムを水和することによってリポソームを形成する場合、凍結乾燥したリポソームを再懸濁するために、低いｐＨのバッファーを使用するのが望ましい。リポソームを再懸濁するための適切な溶媒は、例えば、約３．５のｐＨを有する乳酸緩衝溶液を含む。
【００２８】
本発明は、非毒性の、不活性な医薬上適切な賦形剤に加えて、ＳＮ−３８複合体を含む医薬製剤、及びこのような組成物の製造方法を含む。非毒性の、不活性な医薬上適切な賦形剤によって、全ての種類の固体、半固体、又は液体の希釈剤、充填剤及び製剤補助剤が存在することが理解される。
【００２９】
本発明はまた、投与量単位の医薬製剤を含む。これは、製剤が個々のパーツの形態、例えば、カプセル、ピル、坐薬及びアンプルであり、それのＳＮ−３８複合体の含量が、個々の投与量の分数又は倍数に対応することを意味する。投与量単位は、例えば、個々の投与量の１、２、３若しくは４倍、又は個々の投与量の１／２、１／３若しくは１／４を含むことができる。個々の投与量は好ましくは、１回の投与で与えられ、通常、１日の投与量の全部、半分、１／３、又は１／４に対応するＳＮ−３８の量を含む。
【００３０】
錠剤、糖衣錠、カプセル、ピル、顆粒、坐薬、溶液、懸濁液及びエマルション、ペースト、軟膏、ゲル、クリーム、ローション、散剤及びスプレーが、適切な医薬製剤であり得る。
【００３１】
経口投与様式では、ＳＮ−３８複合体を、錠剤、カプセル、ロゼンジ、散剤、シロップ、水溶液、懸濁液などの形態で使用することができる。錠剤を製造するために、乳糖、クエン酸ナトリウム、及びリン酸塩などの担体を使用することができる。更に、デンプンなどの崩壊剤、ステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム及びタルクなどの潤滑剤を含めることができる。乳糖及び高分子量ポリエチレングリコールなどの希釈剤を、カプセル形態で投与する製剤に使用することができる。有効成分を乳化剤および懸濁剤と混合して経口使用用の水性懸濁液を生成することができる。所望であれば、甘味剤などのフレーバー剤を添加することができる。
【００３２】
局所投与及び坐薬では、薬剤複合体を、適切な水溶性又は水不溶性の賦形剤、例えば、ポリエチレングリコール、ある種の脂肪、及びエステル又はこれらの物質の混合物の添加によって、公知のゲル、オイル、及びエマルションの形態で提供することができる。適切な賦形剤は、薬剤複合体が治療用途を許容するために十分安定であるものである。
【００３３】
上記医薬組成物は、公知の方法による通常のやり方で投与するために、例えば、複合体を形成したＳＮ−３８と適切な賦形剤とを混合することによって製造される。
【００３４】
本発明はまた、ウシ、ウマ、ブタ、イヌ若しくはネコなどの任意の哺乳動物で、疾患、特に、癌のような細胞増殖によって引き起こされる疾患の予防、軽減及び／又は治療のためのヒト用及び獣医学用医薬における、本発明のＳＮ−３８の使用、及び本発明のＳＮ−３８を含む医薬製剤の使用を含む。しかしながら、それは、特に細胞増殖によって引き起こされる癌及び他の疾患のために、ヒト患者の治療における使用が特に好ましい。本発明の組成物は、多発性硬化症に加えて、ヒトリンパ腫、卵巣癌、乳癌、肺癌及び結腸癌の治療に特別の用途を有する。
【００３５】
活性化合物又はその医薬製剤は、経口で、非経口で、腹腔内に、直腸に、又は腫瘍内注射によって投与することができる。ＳＮ−３８は肝臓による活性化を必要としないので、例えば、腕若しくは脚、又はヒトの場合には手へ直接注射することによって本組成物を局所的に使用することは有利である。
【００３６】
体重約７０ｋｇのヒトでは、例えば、体重１ｋｇ当たり約０．１〜２ｍｇ又は約０．５〜１ｍｇのＳＮ−３８を投与することができる。好ましくは、体重１ｋｇ当たり約０．５〜２．０ｍｇのＳＮ−３８を投与する。しかしながら、上述した投与量から逸脱することも必要であり、特に、治療する患者の性質及び体重、疾患の性質及び重大性、製剤の性質、そして医薬を投与するならば、投与する時間又は間隔の相関関係としてそうすることが必要であり得る。従って、活性化合物の上記量未満で処理すれば十分である場合もあるし、活性化合物の上記量を超過しなければならない場合もある。ＳＮ−３８の特別に要求される最適投与量及び投与のタイプは、利用できる方法により当業者によって決定され得る。適切な量は、経験的研究によって決定されるように、過度の毒性を有さない治療有効量である。
【００３７】
カルジオリピン含有組成物の重要な利点は、該組成物がＳＮ−３８に付す癌細胞での多剤耐性の調節方法を提供するということである。特に、本組成物は、ＳＮ−３８を用いる化学療法に付した癌細胞の、それへの耐性を発達させる傾向を減少させ、タキソール又はドキソルビシンなどの他の治療剤への耐性を発達させる癌細胞の傾向を減少させる。従って、ＳＮ−３８と併用して、他の薬剤を本治療で有利に使用することができる。
【００３８】
本発明を説明したが、ここである種の実施例に言及する。実施例は、説明の目的のためだけに提供され、限定することを意図するものではない。
【００３９】
（実施例１）
ＳＮ−３８（３マイクロモル）を、３マイクロモルのカルジオリピンを含むクロロホルムに溶解することができる。この混合液に、ヘキサンに溶解した１４マイクロモルのホスファチジルコリン及びクロロホルムに溶解した１０マイクロモルのコレステロールを加えることができる。混合物を穏やかに撹拌し、溶媒を、真空下、３０℃未満で蒸発させて脂質と薬剤との薄い乾燥フィルムを形成することができる。次いで、２．５ｍｌの生理食塩溶液を加え、渦状攪拌によって成分を激しく混合してリポソームを形成することができる。次いで、フラスコで渦状攪拌して多重膜リポソームを提供することができ、所望により、音波処理器中で音波処理して小さい単一膜リポソームを提供することができる。ＳＮ−３８のカプセル化効率は、被検リポソームのアリコートを適切な水性溶媒中に一晩透析するか、又は被検リポソームのアリコートを５０，０００×ｇで１時間遠心することによって決定することができる。その後、リポソーム画分をメタノールに溶解し、逆相ＨＰＬＣなどの高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いる標準法によって分析する。一般に、リポソーム中のＳＮ−３８のカプセル化効率は、最初の投入用量の８０〜９５％であろう。
【００４０】
（実施例２）
種々の量の薬剤及び脂質を用いて同様の実験条件を利用することができる。例えば、６μＭ ＳＮ−３８、６μＭカルジオリピン、２８μＭホスファチジルコリン及び２０μＭコレステロールの濃度を、適切な溶媒にそれらを溶解し、溶媒を蒸発させ、そして乾燥した脂質／薬剤を５ｍｌの７％トレハロース−生理食塩溶液などの適切な水性溶媒中に分散させることによって使用することができる。リポソームの水和は、混合物を渦状に攪拌及び／又は音波処理することによって容易に行うことができる。次いで、所望の場合、リポソームを透析することができ、上述のように、リポソーム中のＳＮ−３８のカプセル化パーセントを測定することができる。典型的には、ＳＮ−３８のカプセル化は、ＨＰＬＣでアッセイすると、約７５％より多く、より一般には約８５〜９５％以上であろう。
【００４１】
（実施例３）
体積２．５ｍｌ中に３μＭの薬剤、１５μＭジパルミトイルホスファチジルコリン、１μＭカルジオリピン及び９μＭコレステロールを使用することによって、ＳＮ−３８をリポソーム中にカプセル化することができる。薬剤と脂質との混合物を真空下で蒸発させ、等体積の生理食塩溶液に再懸濁することができる。残りの方法は上述したものと同様であることができる。ＳＮ−３８のカプセル化効率は一般に、このシステムで７５％より高いであろう。
【００４２】
（実施例４）
本実施例において、実施例１に記載の方法によって製造した、２μＭ ＳＮ−３８、２μＭのホスファチジルセリン、１１μＭホスファチジルコリン、２μＭカルジオリピン及び７μＭコレステロールを含むリポソームは、ＳＮ−３８のカプセル化効率が７５％より多いと予想される。
【００４３】
（実施例５）
本実施例において、溶液中に１ｍｇ／ｍｌより多いＳＮ−３８を含むリポソームが示される。
約３５−４０℃に温めた約１ｋｇのｔ−ブチルアルコールへ、約０．２ｇのコハク酸Ｄ−α−トコフェロール酸（Ｄ−α−ｔｏｃｏｐｈｅｒｏｌ ａｃｉｄ ｓｕｃｃｉｎａｔｅ）を加えることによって、脂質フィルムを製造する。トコフェロールが溶解するまで、溶液を約５分間混合する。約６．０ｇのテトラミリストイルカルジオリピンを溶液に加え、その溶液を約５分間混合する。約１０ｇのコレステロールを溶液に加え、その溶液をもう約５分間混合し、次いで約３０ｇの卵ホスファチジルコリンを加え、もう５分間混合する。得られた約１１ｇの脂質溶液を凍結乾燥し、脂質フィルムを生成する。
リポソームＳＮ−３８を製造するために、８〜１０のｐＨを有するアルカリ性水溶液中に薬剤を溶解することによって、ＳＮ−３８の１．２ｍｇ／ｍｌ溶液を製造する。このＳＮ−３８溶液の約１５ｍｌを、脂質フィルムを含むバイアルに加える。バイアルを温和にかき混ぜ、室温で３０分間水和させ、２分間激しく渦状に攪拌し、浴型音波処理器中で最大強度で１０分間音波処理する。リポソーム溶液のｐＨを酸性ｐＨに下げる。この方法を用いて、ＳＮ−３８の９０重量％超が、リポソームの形態で脂質と複合体を形成する。
【００４４】
本発明を説明したが、当業者が、本発明の思想及び範囲を逸脱せずに、上記実施形態に多くの変更及び改変を加えることができることは明白であろう。

Claims (66)

1. 哺乳動物宿主における真核細胞増殖によって引き起こされる疾患の治療方法であって、ＳＮ−３８と脂質とを含む複合体（ここで、ＳＮ−３８の５０重量％超が、該脂質の一部との複合体中にある）の治療有効量及び医薬上許容される賦形剤を含む医薬組成物を製造すること、及び該組成物を哺乳動物宿主に投与することを含む方法。
2. ＳＮ−３８複合体がリポソームである、請求項１に記載の方法。
3. 脂質が、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジン酸、ホスファチジルイノシトール、スフィンゴミエリン、ステロール、トコフェロール、脂肪酸、カルジオリピン、及びそれらの混合物からなる脂質群から選択される脂質の少なくとも１つである、請求項１に記載の方法。
4. 脂質がカルジオリピンを含む、請求項１又は２に記載の方法。
5. カルジオリピンが、天然カルジオリピン及び合成カルジオリピンからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
6. 哺乳動物宿主がヒトである、請求項１に記載の方法。
7. ＳＮ−３８が皮膚に投与される、請求項１に記載の方法。
8. ＳＮ−３８が腫瘍に直接投与される、請求項１に記載の方法。
9. ＳＮ−３８が静脈内に投与される、請求項１に記載の方法。
10. 組成物中のＳＮ−３８濃度が、約０．１〜約２０ｍｇ／ｍｌである、請求項１に記載の方法。
11. ＳＮ−３８の約４０重量％以上が脂質と複合体を形成している、請求項１に記載の方法。
12. ＳＮ−３８の約７０重量％以上が脂質と複合体を形成している、請求項１に記載の方法。
13. ＳＮ−３８の約９０重量％以上が脂質と複合体を形成している、請求項１に記載の方法。
14. リポソームが約１ミクロン以下の直径を有する、請求項２に記載の方法。
15. リポソームが約５００ｎｍ以下の直径を有する、請求項２に記載の方法。
16. リポソームが約２００ｎｍ以下の直径を有する、請求項２に記載の方法。
17. リポソームが約１００ｎｍ以下の直径を有する、請求項２に記載の方法。
18. ＳＮ−３８と、カルジオリピンを含む脂質とを含むＳＮ−３８組成物であって、ＳＮ−３８の一部が、脂質の一部との複合体中にある組成物。
19. 脂質が更に、ホスファチジルコリン、ステロール及びトコフェロールを含む、請求項１８に記載の組成物。
20. 脂質が更に、ジミリストイルホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリン、ジオレオイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジアラキドノイルホスファチジルコリン、卵ホスファチジルコリン、ダイズホスファチジルコリン、水素化ダイズホスファチジルコリン、及びそれらの混合物からなる群から選択されるホスファチジルコリンを含む、請求項１８に記載の組成物。
21. 脂質が更に、ジミリストイルホスファチジルグリセロール、ジオレオイルホスファチジルグリセロール、ジステアロイルホスファチジルグリセロール、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール、ジアラキドノイルホスファチジルグリセロール、又はそれらの混合物からなる群から選択されるホスファチジルグリセロールを含む、請求項１８に記載の組成物。
22. 脂質が更に、コレステロール、コレステロールのポリエチレングリコール誘導体、コプロスタノール、コレスタノール、コレスタン、コレステロールヘミスクシネート、硫酸コレステロール、及びそれらの混合物からなる群から選択されるステロールを含む、請求項１８に記載の組成物。
23. 複合体が約１ミクロン以下の直径を有する、請求項１８に記載の組成物。
24. 複合体が約５００ｎｍ以下の直径を有する、請求項１８に記載の組成物。
25. 複合体が約２００ｎｍ以下の直径を有する、請求項１８に記載の組成物。
26. 複合体が約１００ｎｍ以下の直径を有する、請求項１８に記載の組成物。
27. 組成物が更に、医薬上許容される賦形剤を含む、請求項１８に記載の組成物。
28. カルジオリピンが、天然カルジオリピン及び合成カルジオリピンからなる群から選択される、請求項１８に記載の組成物。
29. 複合体がリポソームを含む、請求項１８に記載の組成物。
30. 複合体が更に、標的剤を含む、請求項１８に記載の組成物。
31. 標的剤がタンパク質である、請求項３０に記載の組成物。
32. タンパク質が、抗体、抗体フラグメント、ペプチド、ペプチドホルモン、レセプターリガンド、及びそれらの混合物からなるタンパク質群から選択される、請求項３１に記載の組成物。
33. 標的剤が炭水化物である、請求項３０に記載の組成物。
34. ＳＮ−３８濃度が約０．０１〜約５ｍｇ／ｍｌである、請求項１８に記載の組成物。
35. ＳＮ−３８濃度が約０．１〜約４ｍｇ／ｍｌである、請求項１８に記載の組成物。
36. ＳＮ−３８濃度が約０．５〜約３ｍｇ／ｍｌである、請求項１８に記載の組成物。
37. ＳＮ−３８濃度が約０．８〜約２ｍｇ／ｍｌである、請求項１８に記載の組成物。
38. ＳＮ−３８濃度が約１〜約１．５ｍｇ／ｍｌである、請求項１８に記載の組成物。
39. 哺乳動物の疾患の治療方法であって、請求項１８に記載の組成物を製造すること、及びその必要のある患者に治療有効量の組成物を投与することを含む方法。
40. 疾患が癌である、請求項３９に記載の方法。
41. 癌が、リンパ腫、卵巣癌、乳癌、肺癌、肝臓癌又は結腸癌である、請求項４０に記載の治療方法。
42. ＳＮ−３８と脂質とを含むＳＮ−３８組成物であって、ＳＮ−３８の約５０重量％以上が、脂質の一部との複合体中にある組成物。
43. ＳＮ−３８の約７０重量％以上が、脂質の一部との複合体中にある、請求項４２に記載の組成物。
44. ＳＮ−３８の約８０重量％以上が、脂質の一部との複合体中にある、請求項４２に記載の組成物。
45. ＳＮ−３８の約９０重量％以上が、脂質の一部との複合体中にある、請求項４２に記載の組成物。
46. ＳＮ−３８複合体がリポソームである、請求項４２に記載の組成物。
47. 脂質が更に、ホスファチジルコリン、ステロール、及びトコフェロールを含む、請求項４２に記載の組成物。
48. 脂質が更に、ジミリストイルホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリン、ジオレオイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジアラキドノイルホスファチジルコリン、卵ホスファチジルコリン、ダイズホスファチジルコリン、水素化ダイズホスファチジルコリン、及びそれらの混合物からなる群から選択されるホスファチジルコリンを含む、請求項４２に記載の組成物。
49. 脂質が更に、コレステロール、コレステロールのポリエチレングリコール誘導体、コプロスタノール、コレスタノール、コレスタン、コレステロールヘミスクシネート、硫酸コレステロール、及びそれらの混合物からなる群から選択されるステロールを含む、請求項４２に記載の組成物。
50. 複合体が約１ミクロン以下の直径を有する、請求項４２に記載の組成物。
51. 複合体が約５００ｎｍ以下の直径を有する、請求項４２に記載の組成物。
52. 複合体が約２００ｎｍ以下の直径を有する、請求項４２に記載の組成物。
53. 複合体が約１００ｎｍ以下の直径を有する、請求項４２に記載の組成物。
54. 組成物が更に、医薬上許容される賦形剤を含む、請求項４２に記載の組成物。
55. 複合体が更に、標的剤を含む、請求項４２に記載の組成物。
56. 標的剤がタンパク質である、請求項５５に記載の組成物。
57. タンパク質が、抗体、抗体フラグメント、ペプチド、ペプチドホルモン、レセプターリガンド、及びそれらの混合物からなるタンパク質群から選択される、請求項５６に記載の組成物。
58. 標的剤が炭水化物である、請求項５５に記載の組成物。
59. ＳＮ−３８濃度が約０．０１〜約５ｍｇ／ｍｌである、請求項４２に記載の組成物。
60. ＳＮ−３８濃度が約０．１〜約４ｍｇ／ｍｌである、請求項４２に記載の組成物。
61. ＳＮ−３８濃度が約０．５〜約３ｍｇ／ｍｌである、請求項４２に記載の組成物。
62. ＳＮ−３８濃度が約０．８〜約２ｍｇ／ｍｌである、請求項４２に記載の組成物。
63. ＳＮ−３８濃度が約１〜約１．５ｍｇ／ｍｌである、請求項４２に記載の組成物。
64. 哺乳動物の疾患の治療方法であって、請求項４２に記載の組成物を製造すること、及びその必要のある患者に治療有効量の組成物を投与することを含む方法。
65. 疾患が癌である、請求項６４に記載の方法。
66. 癌が、リンパ腫、卵巣癌、乳癌、肺癌、肝臓癌又は結腸癌である、請求項６５に記載の方法。