JP2004508372A - オキシインドール誘導体 - Google Patents

Abstract

ＣＤＫ４阻害剤として有用なオキシインドール誘導体、特にピロロ［３，２−ｆ］キノリン−２−オンを開示する。本発明はまた、こうしたオキシインドール誘導体の製造方法並びに増殖亢進性疾患の治療におけるその使用方法を包含する。

Description

【０００１】
発明の背景
本発明は、オキシインドール誘導体、該オキシインドール類の製造方法、及びある種の疾患または状態の治療におけるオキシインドール類の使用に関する。特に、本発明はサイクリン依存性キナーゼ阻害剤として有用なオキシインドール誘導体及び不適切なサイクリン依存性キナーゼ活性によって仲介される障害の治療における該インドール類の使用に関する。
【０００２】
タンパク質キナーゼは、細胞増殖及び分化の調節に関与するタンパク質を含むタンパク質中の種々の残基のリン酸化を触媒する。細胞の増殖、分化、代謝及び機能は、高等真核生物において非常に厳密に調節されている。細胞が、絶え間なく受け取る外部及び内部シグナルのアレイに迅速活適切に応答する能力は、これらのプロセス間のバランスを維持する上で非常に重要なことである（Ｒｏｚｅｎｇｕｒｔ， Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ １９９２， ４， １６１−５； Ｗｉｌｋｓ， Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １９９０， ２， ９７−１１１）。細胞制御の調節ができないと、しばしばａｂｅｒｒａｎｔ細胞機能または細胞死に到ることとなり、その生物にとっての疾患状態に至る場合が多い。タンパク質キナーゼは、細胞増殖及び分化の調節において重要な役割を果たしており、増殖因子及びサイトカインの産生に導く細胞性シグナルの鍵となるメディエーターである。例えば、Ｓｃｈｌｅｓｓｉｎｇｅｒ及びＵｌｌｒｉｃｈ， Ｎｅｕｒｏｎ １９９２， ９， ３８３を参照されたい。こうしたキナーゼの例として、ａｂｌ、ＡＴＫ、ｂｃｒ−ａｂｌ、Ｂｌｋ、Ｂｒｋ、Ｂｔｋ、ｃ−ｋｉｔ、ｃ−ｍｅｔ、ｃ−ｓｒｃ、ＣＤＫ１、ＣＤＫ２、ＣＤＫ４、ＣＤＫ６、ｃＲａｆ１、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＳＫ、ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、ＥＲＫ、Ｆａｋ、ｆｅｓ、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４、ＦＧＦＲ５、Ｆｇｒ、ＦＬＫ−４、ｆｌｔ−１、Ｆｐｓ、Ｆｒｋ、Ｆｙｎ、ＧＳＫ、Ｈｃｋ、ＩＧＦ−１Ｒ、ＩＮＳ−Ｒ、Ｊａｋ、ＪＮＫ、ＫＤＲ、Ｌｃｋ、Ｌｙｎ、ＭＥＫ、ｐ３８、ＰＤＧＦＲ、ＰＩＫ、ＰＫＣ、ＰＹＫ２、ｔｉｅ１、ｔｉｅ２、ＴＲＫ、ＵＬ９７、ＶＥＧＦ−Ｒ１、ＶＥＧＦ−Ｒ２、Ｙｅｓ及びＺＡＰ７０が挙げられる。
【０００３】
不適切なタンパク質キナーゼ活性は、広範囲にわたる疾患状態と関連しており、従ってこれらのキナーゼはこれら疾患の治療の標的として同定されてきた。例えば、タンパク質キナーゼはアルツハイマー病等の中枢神経系障害（Ｍａｎｄｅｌｋｏｗ， Ｅ．Ｍ．ら， ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ． １９９２， ３１４， ３１５； Ｓｅｎｇｕｐｔａ， Ａ．ら， Ｍｏｌ． Ｃｅｌｌ． Ｂｉｏｃｈｅｍ． １９９７， １６７，９９）、疼痛（Ｙａｓｈｐａｌ， Ｋ． Ｊ． Ｎｅｕｒｏｓｃｉ． １９９５， １５， ３２６３−７２）、関節炎等の炎症性障害（Ｂａｄｇｅｒ， Ｊ． Ｐｈａｒｍ． Ｅｘｐ． Ｔｈｅｒ． １９９６， ２７９， １４５３）、乾癬（Ｄｖｉｒら， Ｊ． Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ． １９９１， １１３， ８５７）、骨粗しょう症等の骨の疾患（Ｔａｎａｋａら， Ｎａｔｕｒｅ， １９９６， ３８３， ５２８）、癌（Ｈｕｎｔｅｒ及びＰｉｎｅｓ， Ｃｅｌｌ １９９４， ７９， ５７３）、アテローム性動脈硬化症（Ｈａｊｊａｒ及びＰｏｍｅｒａｎｔｚ， ＦＡＳＥＢ Ｊ． １９９２， ６， ２９３３）、血栓症（Ｓａｌａｒｉ， ＦＥＢＳ １９９０， ２６３， １０４）、糖尿病等の代謝系障害（Ｂｏｒｔｈｗｉｃｋ， Ａ．Ｃ．ら， Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ｒｅｓ． Ｃｏｍｍｕｎ． １９９５， ２１０， ７３８）、新脈管形成等の血管増殖性障害（Ｓｔｒａｗｎら， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． １９９６， ５６， ３５４０； Ｊａｃｋｓｏｎら， Ｊ． Ｐｈａｒｍ． Ｅｘｐ． Ｔｈｅｒ． １９９８， ２８４， ６８７）、再狭窄（Ｂｕｃｈｄｕｎｇｅｒら， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ １９９１， ９２， ２２５８）、自己免疫疾患及び移植拒絶（Ｂｏｌｅｎ及びＢｒｕｇｇｅ， Ａｎｎ． Ｒｅｖ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １９９７， １５， ３７１）及びウイルス感染（Ｌｉｔｔｌｅｒ， Ｅ． Ｎａｔｕｒｅ １９９２， ３５８， １６０）及び真菌感染（Ｌｕｍ， Ｒ．Ｔ． ＰＣＴ国際出願ＷＯ ９８０５３３５ Ａ１ ９８０２１２）等の感染性疾患における標的とされてきた。
【０００４】
タンパク質キナーゼによって仲介されるシグナルはまた、細胞周期プロセスを調節することによって細胞の増殖、死、及び分化を調節することが示された（Ｍａｓｓａｇｕｅ及びＲｏｂｅｒｔｓ， Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ １９９５， ７， ７６９−７２）。真核細胞の周期を通しての経過（ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ）は、サイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫｓ）と呼ばれるタンパク質キナーゼファミリー及びサイクリンと名付けられたタンパク質ファミリーとのその相互作用によって調節されている（Ｍｙｅｒｓｏｎら， ＥＭＢＯ Ｊｏｕｒｎａｌ １９９２， １１， ２９０９−１７）。種々のサイクリン／ＣＤＫ複合体の協調した活性化及び不活性化は、細胞周期を通した正常な経過のために必要である（Ｐｉｎｅｓ， Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １９９３， １８， １９５−７； Ｓｈｅｒｒ， Ｃｅｌｌ １９９３， ７３， １０５９−６５）。重大なＧ１−Ｓ及びＧ２−Ｍの移行の双方は種々のサイクリン／ＣＤＫ活性の活性化によって調節されている。Ｇ１において、サイクリンＤ／ＣＤＫ４及びサイクリンＥ／ＣＤＫ２の双方はＳ−期の開始を仲介すると考えられている。細胞周期のＧ１期を通した調節された経過はサイクリンＤによるＣＤＫ４の活性化に依存している。この活性化の結果、網膜芽細胞腫タンパク質（ｐＲｂ）のリン酸化が生じ、次いでその結合パートナー、Ｅ２Ｆからの解離が生じる。不活性なｐＲｂ−Ｅ２Ｆ複合体からのＥ２Ｆの放出によって、Ｅ２ＦがＤＮＡ合成のために必要な複数の遺伝子の転写を制御できるようになる。正常な生理学的条件下では、ｐＲｂ経路はＣＤＫ４／サイクリンＤ複合体の触媒活性を遮断するタンパク質（ｐ１６^{ＩＮＫ４Ａ}、ｐ２７、ｐ２１）によって厳密に制御されている。ヒト遺伝子による証拠から、腫瘍抑制経路としてのこのｐ１６^{ＩＮＫ４Ａ}／ＣＤＫ４／サイクリンＤ／ｐＲｂシグナルが多くのヒトの癌においてしばしば脱調節されていることが支持されている。
【０００５】
ＰＲｂの脱調節のメカニズムの多くは既に報告されている。これらには、ｐ１６^{ＩＮＫ４Ａ} ｌｏｃｕｓの遺伝子欠損及びｐ１６^{ＩＮＫ４Ａ}遺伝子発現のダウンレギュレーションが含まれる。ｐ１６^{ＩＮＫ４Ａ}タンパク質は、腫瘍抑制遺伝子として機能する天然に存在する細胞内ＣＤＫ４阻害剤である。この経路の脱調節の別のメカニズムはサイクリンＤ１、ＣＤＫ４の活性化サブユニットの過剰発現である。提唱されているｎｅｔ効果はＣＤＫ４活性及び高度にリン酸化された（ｈｙｐｅｒｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅｄ）ｐＲｂの増加である。
【０００６】
腫瘍の恐れのある哺乳動物におけるＣＤＫ４活性を阻害する方法はｐＲｂを活性腫瘍抑制状態に戻すことであろう。ｐＲｂ機能を回復させた結果、正常細胞の細胞周期停止（ａｒｒｅｓｔ）を引き起こし、哺乳動物内の腫瘍細胞はアポトーシスを起こすだろう。低度リン酸化（ｈｙｐｏｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅｄ）ｐＲｂタンパク質はｐ５３のアポトーシス機能をｍｄｍ２との相互作用を介してポジティブに制御する（Ｊ． −Ｋ． Ｈｓｉｅｈら， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｅｌｌ ３， １８１ １９９９）。低度リン酸化ｐＲｂはｍｄｍ２−介在性のｐ５３の脱調節を抑制し、その結果ｐ５３の活性化及び腫瘍細胞のアポトーシスに到る。
【０００７】
従ってＣＤＫ４活性を阻害する方法によっておそらく、ｐ１６^{ＩＮＫ４Ａ}／ＣＤＫ４／サイクリンＤ／ｐＲｂが脱調節されている野生型Ｒｂ状態を有するヒト腫瘍を選択的に殺すように作用するであろう。ＣＤＫ４活性を選択的に阻害し得る薬剤を投与することによって、ｐ１６^{ＩＮＫ４Ａ}発現の喪失及び／またはサイクリンＤ１タンパク質の過剰発現を有するＲｂ陽性ヒト腫瘍の治療を提供し、これによって腫瘍細胞の生存を遮断するであろう。
【０００８】
サイクリンＤ１に対するアンチセンス構築物によってヒト腫瘍細胞が化学療法に対して感受性を有するようになることから、ＣＤＫ４活性がＤＮＡ障害に応答して腫瘍細胞が生存するために必要であることが示唆される（Ｋｏｒｍａｎら， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， ５９， ３５０５ １９９９）。更に、ｐ１６^{ＩＮＫ４Ａ}タンパク質の過剰発現によって腫瘍細胞は照射に対して感受性を有するようになる（Ｘ．Ｙ．Ｆｕら， Ｊ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ １２４， ６２１ １９９８）。
【０００９】
腫瘍学の分野においては、新規でより有効な癌治療に対する需要が常にある。ＣＤＫ４は細胞***の一般的活性化剤として機能し、腫瘍細胞のアポトーシスを抑制する可能性があるため、ＣＤＫ４の特異的阻害剤は癌及び他の増殖亢進性障害の有効な治療法を提供し得る。現在、容易に合成でき、ＣＤＫ４／サイクリン複合体の強力な阻害剤である小分子化合物に対する需要は満たされていない。本発明者等は、ＣＤＫ４／サイクリンＤ及び／またはＣＤＫ２／サイクリンＥの触媒活性を選択的に阻害し、それによって、不適切なサイクリン依存性キナーゼ活性によって仲介される癌及び他の障害に罹患した患者に対する新規な治療戦略を提供する新規オキシインドール誘導体化合物を見出した。
【００１０】
発明の概要
本発明の一態様において、式Ｉ：
【化２】

［式中、Ｒ^１は−（ＣＲ^４Ｒ^５）ｎＮＲ^２Ｒ^３であり、
ｎは１または２であり、
Ｒ^２及びＲ^３は独立して水素、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_１−６アルケニル、Ｃ_１−６アルコキシ−Ｃ_１−６アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、ベンジル、フェニル、ナフチル、ヘテロアリール、ヘテロアリール−Ｃ_１−６アルキルであるか、あるいはＲ_２及びＲ_３はそれらが結合する窒素と共に５または６員の複素環または５から７員の複素芳香環を形成し、これらの環は任意に１または２個の更なる酸素、硫黄、Ｓ（Ｏ）ｍ、または窒素原子を含有し、該１または２個の更なる窒素原子は任意にＣ_１−６アルキルまたはアリール基によって置換されており、
ｍは０、１、または２であり、
Ｒ_４及びＲ_５は独立して水素またはＣ_１−６アルキルであり、そして
上記のＣ_１−６アルキル、Ｃ_１−６アルケニル、Ｃ_１−６アルキル−Ｃ_１−６アルコキシ、シクロアルキル、ヘテロシクリルまたはヘテロサイクリック、ベンジル、フェニル、ナフチル、ヘテロアリール及びヘテロアリール−Ｃ_１−６アルキル基はいずれも任意にハロゲン、ヒドロキシル、−ＣＦ_３及び−Ｎ（ＣＨ_３）_２からなる群から選択される３個までの基で置換され得る。］
で示される化合物、もしくはその塩、溶媒化合物、または生理学的機能性誘導体を提供する。
【００１１】
本発明の第二の態様において、治療的有効量の式Ｉの化合物、もしくはその塩、溶媒化合物、または生理学的機能性誘導体と、１種以上の薬学上許容し得る担体、希釈剤及び賦形剤を含む医薬組成物を提供する。
【００１２】
本発明の第三の態様において、哺乳動物における不適切なＣＤＫ４活性によって仲介される障害を治療する方法であって、治療的有効量の式Ｉの化合物もしくはその塩、溶媒化合物、または生理学的機能性誘導体を投与することを含む方法を提供する。
【００１３】
本発明の第四の態様において、治療に使用するための式Ｉの化合物もしくはその塩、溶媒化合物、または生理学的機能性誘導体を提供する。
【００１４】
本発明の第五の態様において、不適切なＣＤＫ４活性によって仲介される障害の治療での使用のための医薬の製造における式Ｉの化合物もしくはその塩、溶媒化合物、または生理学的機能性誘導体の使用を提供する。
【００１５】
本発明の第六の態様において、哺乳動物における不適切なＣＤＫ４活性によって仲介される障害の治療方法であって、該哺乳動物に治療的有効量の（ｉ）式Ｉの化合物もしくはその塩、溶媒化合物、または生理学的機能性誘導体及び（ｉｉ）増殖因子受容体機能を阻害する薬剤を投与することを含む方法を提供する。
【００１６】
本発明の第七の態様において、哺乳動物における不適切なサイクリン依存性キナーゼ活性によって仲介される障害の治療方法であって、該哺乳動物に治療的有効量の式Ｉの化合物もしくはその塩、溶媒化合物、または生理学的機能性誘導体を投与することを含む方法を提供する。
【００１７】
発明の詳細な説明
本明細書において使用する用語「有効量」とは、例えば研究者または臨床医が目的とする組織、システム、動物またはヒトの生物学的または医学的応答を引き出す薬剤（ａ ｄｒｕｇ ｏｒ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ａｇｅｎｔ）の量を意味する。更に、用語「治療的有効量」とは、そのような量を投与されていない対照被検体と比較して、疾患、障害、または副作用の治療の改善、治癒、予防、または軽減、あるいは疾患または障害の進行速度の低下を導く量を意味する。
【００１８】
本明細書で使用する用語「アルキル」とは、直鎖または分岐鎖状の炭化水素であって、場合によってハロゲン、ヒドロキシル、−ＣＦ_３及び−Ｎ（ＣＨ_３）_２からなる群から選択される３個までの基で置換されていても良く、かつ特定の数の炭素原子を含有するものをいう。例えば、Ｃ_１−６アルキルは、少なくとも１個、多くて６個までの炭素原子を含有する直鎖または分岐鎖状のアルキルを意味する。本明細書で使用する「アルキル」基の例として、限定するものではないが、メチル、エチル、２−ヒドロキシエチル、２−メトキシエチル、ｎ−ブチル、ｎ−ペンチル、イソブチル、またはイソプロピルが挙げられる。
【００１９】
本明細書で使用する用語「アルケニル」とは、少なくとも１個の炭素−炭素二重結合を有する直鎖または分岐鎖状の炭化水素基であって、場合によってハロゲン、ヒドロキシル、−ＣＦ_３及び−Ｎ（ＣＨ_３）_２からなる群から選択される３個までの基で置換されていても良く、かつ特定の数の炭素原子を含有するものをいう。例えば、Ｃ_１−６アルケニルとは、少なくとも１個、多くて６個までの炭素原子を含有する直鎖または分岐鎖状のアルケニルを意味する。「アルケニル」基の例として、限定するものではないが、エテニル、プロペニル、及びブテニルが挙げられる。
【００２０】
本明細書で使用する用語「シクロアルキル」とは、３個から１２個の炭素原子を有する非芳香環状炭化水素環であって、場合によってハロゲン、ヒドロキシル、−ＣＦ_３及び−Ｎ（ＣＨ_３）_２からなる群から選択される３個までの基で置換されているものをいう。「シクロアルキル」としては、限定するものではないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、またはシクロオクチルが挙げられる。
【００２１】
本明細書で使用する用語「ヘテロサイクリック」または用語「ヘテロシクリル」とは、３個から１２個の炭素を有する飽和または部分飽和非芳香環状炭化水素環系であって、Ｏ、Ｓ、またはＮから選択される少なくとも１個のへテロ原子をも含有するものをいう。この環系は、場合によってハロゲン、ヒドロキシル、−ＣＦ_３及び−Ｎ（ＣＨ_３）_２からなる群から選択される３個までの基で置換されていても良い。「ヘテロサイクル」の例としては、限定するものではないが、テトラヒドロフラン、ジヒドロピラン、テトラヒドロピラン、ピラン、オキセタン、チエタン、１，４−ジオキサン、１，３−ジオキサン、１，３−ジオキサラン、ピペリジン、４−ヒドロキシ−１−ピペリジン、ピペラジン、テトラヒドロピリミジン、ピロリジン、モルフォリン、チオモルフォリン、チアゾリジン、オキサゾリジン、テトラヒドロチオピラン、またはテトラヒドロチオフェンが挙げられる。
【００２２】
本明細書で使用する用語「ヘテロアリール」とは、単環で５から７員の芳香環、またはこうした単環の５から７員の芳香環２個を有する縮合した二環の芳香環系をいう。これらのヘテロアリール環は１個以上の窒素、硫黄、または酸素のヘテロ原子を含有し、Ｎ−オキシド及び硫黄オキシド及びジオキシドは許容し得るヘテロ原子の置換であり、場合によってハロゲン、ヒドロキシル、−ＣＦ_３及び−Ｎ（ＣＨ_３）_２からなる群から選択される３個までの基で置換されていても良い。本明細書で使用する「ヘテロアリール」基の例としては、フラン、チオフェン、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、トリアゾール、テトラゾール、チアゾール、オキサゾール、イソキサゾール、オキサジアゾール、チアジアゾール、イソチアゾール、ピリジン、ピリダジン、ピラジン、ピリミジン、キノリン、イソキノリン、ベンゾフラン、ベンゾチオフェン、インドール、及びインダゾールが挙げられる。
【００２３】
本明細書で使用する用語「ヘテロアリールアルキル」とは、特定の数の炭素原子を含有するアルキル基で置換された上記のヘテロアリール基をいう。「ヘテロアリールアルキル」基は、場合によってハロゲン、ヒドロキシル、−ＣＦ_３及び−Ｎ（ＣＨ_３）_２からなる群から選択される３個までの基で置換されていても良い。本明細書で使用する「ヘテロアリールアルキル」の例としては、限定するものではないが、４−ピリジニルメチルが挙げられる。
【００２４】
本明細書で使用する用語「アルコキシ」とは、基ＲａＯ−をいい、ここでＲａは場合によってハロゲン、ヒドロキシル、−ＣＦ_３及び−Ｎ（ＣＨ_３）_２からなる群から選択される３個までの基で置換されていても良いアルキルであり、特定の数の炭素原子を含有する。
【００２５】
本明細書で使用する用語「アルコキシアルキル」とは、基ＲａＯＲｂ−をいい、ここでＲｂはアルキルであり、Ｒａは場合によってハロゲン、ヒドロキシル、−ＣＦ_３及び−Ｎ（ＣＨ_３）_２からなる群から選択される３個までの基で置換されていても良い上記のアルコキシであり、Ｒａ及びＲｂのいずれもが特定の数の炭素原子を含有する。
【００２６】
本明細書で使用する用語「場合によって」とは、それ以降に記載の事象があってもなくても良く、起こる事象及び起こらない事象の双方を包含することを意味する。
【００２７】
本明細書で使用する用語「生理学的機能性誘導体」とは、本発明の化合物の薬学的に許容し得る任意の誘導体をいい、例えば、哺乳動物への投与後に本発明の化合物またはその活性を有する代謝物を（直接的または間接的に）提供し得るエステルまたはアミドが挙げられる。このような誘導体は、過度な実験なしに、またＢｕｒｇｅｒ’ｓ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ， ５ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｖｏｌ １： Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅの教示を参照することによって当業者にとっては明らかである。該文献の記載は参照によって生理学的機能性誘導体を教示する程度に本明細書に組み入れる。
【００２８】
本明細書で使用する用語「溶媒化合物」とは、溶質（本発明では式（Ｉ）の化合物またはその塩若しくは生理学的機能性誘導体）および溶媒で形成される化学量論的に可変の複合体である。本発明の目的でのそれらの溶媒は溶質の生物学的活性に干渉してはならない。好適な溶媒の例としては、限定するものではないが、水、メタノール、エタノール、及び酢酸が挙げられる。好ましくは使用する溶媒は製薬上許容し得る溶媒である。製薬上許容し得る溶媒の好適な例として、水、エタノール及び酢酸が挙げられる。最も好ましくは使用する溶媒は水である。
【００２９】
本明細書で使用する用語「置換されている」とは、挙げられた１または複数の置換体による置換をいい、特に断らない限りは複数の置換も含まれる。
【００３０】
本明細書に記載の化合物の中には、１個以上のキラル原子を含有し、あるいは２種のエナンチオマーとして存在し得るものもある。本発明の化合物には、エナンチオマーの混合物並びに精製したエナンチオマーあるいはエナンチオマーに富んだ混合物が挙げられる。また、本発明の範囲に含まれるものとして、上記式（Ｉ）で示される化合物の個々のイソ型並びにこれらの全体的または部分的に平衡化した任意の混合物がある。本発明はまた、上記の式で示される化合物の個々のイソ型並びに１個以上のキラル中心が逆になっているそのイソ型の混合物を包含する。
【００３１】
一実施形態において、Ｒ^２及びＲ^３はそれぞれＣ_１−６アルキルである。好ましい実施形態において、Ｒ^２はメチルであり、Ｒ^３はメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、イソブチル、ヒドロキシエチル、メトキシエチル、ベンジル、またはメチルピペリジニルである。
【００３２】
別の実施形態において、Ｒ^２及びＲ^３は、それらが結合している窒素と共に５または６員のヘテロサイクリック環を形成する。該環は、場合によって１もしくは２個の更なる窒素、Ｃ_１−６アルキル置換した窒素、酸素、またはＳ（Ｏ）ｍ原子を有する。好ましい実施形態において、該環はピペリジン、モルフォリンまたはピペラジン環である。別の好ましい実施形態において、Ｒ^２及びＲ^３はそれらが結合している窒素と共に、更なる窒素がメチル基によって置換されているピペラジン環を形成する。
【００３３】
別の実施形態において、Ｒ^２及びＲ^３はそれらが結合している窒素と共に５から７員のヘテロアリール環を形成する。該環は、場合によって１もしくは２個の更なる窒素、Ｃ_１−６アルキル置換した窒素、酸素、またはＳ（Ｏ）ｍ原子を有する。好ましい実施形態において、環はイミダゾール環である。
【００３４】
一実施形態において、Ｒ^４及びＲ^５は独立して水素またはメチルである。好ましい実施形態において、Ｒ^４及びＲ^５はそれぞれ水素である。
【００３５】
別の実施形態において、Ｒ^２及びＲ^３はそれぞれＣ_１−６アルキルであり、Ｒ^４及びＲ^５は独立して水素またはメチルである。好ましい実施形態において、Ｒ^２はメチルであり、Ｒ^３はエチル、プロピル、イソプロピル、イソブチル、ヒドロキシエチル、メトキシエチル、ベンジル、またはメチルピペリジニルであり、Ｒ^４及びＲ^５はそれぞれ水素である。
【００３６】
別の実施形態において、Ｒ^２及びＲ^３は、それらが結合している窒素と共に５もしくは６員のヘテロサイクリック環または５から７員のヘテロアリール環を形成し、場合によって更なる窒素またはＣ_１−６アルキル置換した窒素、酸素、またはＳ（Ｏ）ｍを有し、Ｒ^４及びＲ^５は独立して水素またはメチルである。好ましい実施形態において、該環はピペリジン、モルフォリンまたはピペラジン環であり、Ｒ^４及びＲ^５は水素である。別の好ましい実施形態において、Ｒ^２及びＲ^３はそれらが結合している窒素と共に、更なる窒素がメチル基で置換されているピペラジン環を形成し、Ｒ^４及びＲ^５はそれぞれ水素である。
【００３７】
別の実施形態において、Ｒ^２及びＲ^３はそれらが結合している窒素と共に５から７員のヘテロアリール環を形成する。該環は、場合によって１もしくは２個の更なる窒素、Ｃ_１−６アルキル置換した窒素、酸素、またはＳ（Ｏ）ｍ原子を有し、Ｒ^４及びＲ^５は独立して水素またはメチルである。好ましい実施形態において、環はイミダゾール環であり、Ｒ^４及びＲ^５はそれぞれ水素である。
【００３８】
本発明の化合物の塩は、式（Ｉ）の化合物の置換基上の窒素に由来する酸付加塩を含有し得る。用語「薬学上許容し得る塩」に含まれる塩とは、本発明の化合物の毒性のない塩をいう。代表的な塩として以下の塩が挙げられる：酢酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、炭酸水素塩、硫酸水素塩、酒石酸水素塩（ｂｉｔａｒｔｒａｔｅ）、ホウ酸塩、臭化物、エデト酸カルシウム塩、カンシル酸塩（ｃａｍｓｙｌａｔｅ）、炭酸塩、塩化物、クラブラン酸塩（ｃｌａｖｕｌａｎａｔｅ）、クエン酸塩、二塩酸塩、エデト酸塩、エディシレート（ｅｄｉｓｙｌａｔｅ）、エストレート（ｅｓｔｏｌａｔｅ）、エシレート（ｅｓｙｌａｔｅ）、フマル酸塩、グルセプテート（ｇｌｕｃｅｐｔａｔｅ）、グルコン酸塩、グルタミン酸塩、グリコリルアルサニル酸塩、ヘキシルレゾルシネート（ｈｅｘｙｌｒｅｓｏｒｃｉｎａｔｅ）、ヒドラバミン（ｈｙｄｒａｂａｍｉｎｅ）、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヒドロキシナフトエ酸塩、ヨウ化物、イセチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、ラウリン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、メチルブロマイド、メチル硝酸塩、メチル硫酸塩、マレイン酸１カリウム塩、ムチン酸塩（ｍｕｃａｔｅ）、ナプシレート、硝酸塩、Ｎ−メチルグルカミン、シュウ酸塩、パモ酸塩（ｅｍｂｏｎａｔｅ）、パルミチン酸塩、パントテン酸塩、リン酸塩／２リン酸塩、ポリガラクツロン酸塩、カリウム塩、サリチル酸塩、ナトリウム塩、ステアリン酸塩、塩基性酢酸塩、コハク酸塩、タンニン酸塩、酒石酸塩、テオクル酸塩（ｔｅｏｃｌａｔｅ）、トシレート（ｔｏｓｙｌａｔｅ）、トリエチオダイド、トリメチルアンモニウム塩、および吉草酸塩。製薬上許容されない他の塩は本発明の化合物の調製に有用でありえ、従ってこれらは本発明の更なる態様を成す。
【００３９】
本発明の化合物の特定の例として以下の物が挙げられる：
１−［（Ｚ）−（４−ジメチルアミノメチルアニリノ）メチリデン］−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，２−ｆ］キノリン−２−オン、
１−［（Ｚ）−（４−ジエチルアミノメチルアニリノ）メチリデン］−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，２−ｆ］キノリン−２−オン、
１−［（Ｚ）−（４−（Ｎ−メチル）エチルアミノメチルアニリノ）メチリデン］−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，２−ｆ］キノリン−２−オン、
１−［（Ｚ）−（４−（Ｎ−メチル）プロピルアミノメチルアニリノ）メチリデン］−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，２−ｆ］キノリン−２−オン、
１−［（Ｚ）−（４−（Ｎ−メチル）−２−プロピルアミノメチルアニリノ）メチリデン］−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，２−ｆ］キノリン−２−オン、
１−［（Ｚ）−（４−（Ｎ−メチル）−２−メチルプロピルアミノメチルアニリノ）メチリデン］−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，２−ｆ］キノリン−２−オン、
１−［（Ｚ）−（４−（Ｎ−メチル）ベンジルアミノメチルアニリノ）メチリデン］−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，２−ｆ］キノリン−２−オン、
１−［（Ｚ）−（４−（Ｎ−メチル）−２−ヒドロキシエチルアミノメチルアニリノ）メチリデン］−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，２−ｆ］キノリン−２−オン、
１−［（Ｚ）−（４−（Ｎ−メチル）−２−メトキシエチルアミノメチルアニリノ）メチリデン］−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，２−ｆ］キノリン−２−オン、
１−［（Ｚ）−（４−（４−モルホリニル）メチルアニリノ）メチリデン］−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，２−ｆ］キノリン−２−オン、
１−［（Ｚ）−（４−（１−ピペリジニル）メチルアニリノ）メチリデン］−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，２−ｆ］キノリン−２−オン、
１−［（Ｚ）−（４−（４−ヒドロキシ−１−ピペリジニル）メチルアニリノ）メチリデン］−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，２−ｆ］キノリン−２−オン、
１−［（Ｚ）−（４−（４−メチル−１−ピペラジニル）メチルアニリノ）メチリデン］−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，２−ｆ］キノリン−２−オン、
１−［（Ｚ）−（４−（１−イミダゾイル）メチルアニリノ）メチリデン］−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，２−ｆ］キノリン−２−オン、
１−［（Ｚ）−（４−（Ｎ−メチル）−（１−メチル−４−ピペリジニル）アミノメチルアニリノ）メチリデン］−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，２−ｆ］キノリン−２−オン、
及びこれらの塩、特に製薬上許容し得る塩、溶媒化合物、及び生理学的機能性誘導体。
【００４０】
本発明の化合物は、標準的な化学を含む種々の方法によって製造することができる。先に規定した記号（ｖａｒｉａｂｌｅ）は、他に示さない限り、先に規定した意味を引き続き有する。例示的な一般的合成法を以下に示し、次いで本発明の特定の化合物を実施例で調製する。
【００４１】
例えば、一般式（Ｉ）の化合物を調製する一般的な方法（Ａ）は、一般式（ＩＩ）の化合物：
【化３】

［式中、Ｌはジメチルアミノまたはエトキシ等の遊離基である。］
の、一般式（ＩＩＩ）の化合物：
【化４】

［式中、Ｒ^１は上記のものである。］
との反応を含む。
【００４２】
一般的な方法（Ａ）は、一般式（ＩＩ）の化合物を一般式（ＩＩＩ）の化合物と好適な溶媒中で混合し、酸を添加し、場合によって混合物を加熱することによって容易に実施することができる。典型的には溶媒はメタノール、エタノール、２−プロパノール等の低級アルコールであり、酸は、例えば塩酸またはメタンスルホン酸とすることができる。
【００４３】
【化５】

一般式（ＩＩ）の化合物は、式（ＩＶ）の化合物を、ジメチルホルムアミドジアルキルアセタールと反応させて、ＬがＭｅ_２Ｎである式（ＩＩ）の化合物を得、あるいはトリアルキルオルトホルメート若しくはジアルコキシメチルアセテートと反応させて、Ｌがアルコキシ基である式（ＩＩ）の化合物を得ることができる。便宜的には、ジメチルホルムアミドジアルキルアセタールはジメチルホルムアミドジメチルアセタールまたはジメチルホルムアミドジ−ｔｅｒｔ−ブチルアセタールであり、反応は一般式（ＩＶ）の化合物をジメチルホルムアミドジアルキルアセタールと混合し、場合によって反応物を加熱することによって実施する。好ましいトリアルキルオルトホルメートとしては、トリメチルオルトホルメート及びトリエチルオルトホルメートが挙げられる。同様に、ジエトキシメチルアセテートを用いて、ＬがＥｔＯ−である一般式（ＩＩ）の化合物を調製することができる。
【００４４】
【化６】

式（ＩＶ）のような化合物は、文献記載の方法を用いて調製することができる。式（ＩＶ）の化合物と類似のラクタムは、式（Ｖ）のようなカルボニル誘導体のウォルフ−キシュナー還元によって得られている。あるいはまた、式（ＩＶ）の化合物は、式（ＶＩ）のようなアミンを塩素化試薬で処理し、次にエチルメチルチオアセテート及び塩基で処理してメチルチオ誘導体を得ることを含む方法によって得ることができる。例えば活性化亜鉛を用いた脱硫によって、式（ＩＶ）のような化合物を得る。
【００４５】
【化７】

好ましい方法は、式（Ｖ）のようなケトン誘導体をエタノール等のアルコール性溶媒中でヒドラジンで処理し、混合物を加熱して式（ＶＩＩ）のようなヒドラゾンを得ることを含む。式（ＶＩＩ）のようなヒドラゾンをアルコール性溶液中の塩基で処理し、混合物を加熱することで、式（ＩＶ）のようなラクタムを得る。典型的には塩基はナトリウムエトキシド等のアルコキシドであり、溶媒はエタノールである。
【００４６】
【化８】

式（Ｖ）のようなケトンは、式（ＶＩ）のようなアミンから、アミンをクロラールで処理し、次に塩酸ヒドロキシルアミンで処理することを含む方法によって得ることができる。得られた式（ＶＩＩＩ）のヒドロキシルイミノアセトアミドを次いで硫酸中で加熱して式（Ｖ）のケトンを得る。
【００４７】
式（Ｉ）の化合物及びその塩、溶媒化合物、及び生理的機能性誘導体は、タンパク質キナーゼＣＤＫ４の阻害、及び増殖がＣＤＫ４タンパク質キナーゼ活性に依存する選択された細胞系に対する効果の結果として、抗癌活性を有すると考えられる。
【００４８】
従って本発明はまた、医療、特に不適切なＣＤＫ４活性によって仲介される障害の治療における使用のための式（Ｉ）の化合物、及びその製薬上許容される塩若しくは溶媒化合物、またはその生理的機能性誘導体を提供する。
【００４９】
本明細書において不適切なＣＤＫ４活性とは、特定の哺乳動物被検体において予測される正常なＣＤＫ４活性から外れたＣＤＫ４活性をいう。不適切なＣＤＫ４活性は、例えば、異常な活性上昇、あるいは、ＣＤＫ４活性のタイミング及び／または調節における異常の形態を取り得る。このような不適切な活性は、例えば不適切な活性化または調節されていない活性化につながるタンパク質キナーゼの過剰発現または変異から生じ得る。更に、望ましくないＣＤＫ４活性が、悪性腫瘍等の異常な供給源にあり得ることも理解される。すなわち、ＣＤＫ４活性のレベルは、不適切と考えられるために異常である必要はなく、むしろ活性が異常な源から由来する。
【００５０】
本発明は、細胞増殖性障害、代謝障害及びサイトカイン産生過剰障害を含む、調節されていないＣＤＫ４活性に関連した障害の予防及び／または治療のための、ＣＤＫ４を調節、改変、または阻害する方法に関する。本発明の化合物はまた、ある種の癌の治療にも使用することができ、ある種の既存の癌化学療法に付加的若しくは相乗的効果を提供するために使用することができ、及び／またはある種の既存の癌化学療法及び放射線療法の有効性を回復させるために使用することもできる。
【００５１】
本発明の化合物は更に、血管増殖性障害、線維症性障害、メサンギウム細胞増殖性障害及び代謝性疾患の領域における細胞増殖によって特徴付けられる、哺乳動物を苦しめる１以上の疾患の治療に有用である。血管増殖性障害としては関節炎及び再狭窄が挙げられる。線維症性障害としては肝硬変及びアテローム性動脈硬化症が挙げられる。メサンギウム細胞増殖性障害としては、糸球体腎炎、糖尿病性ネフロパシー、悪性腎硬化症、血栓性細小血管症症候群、臓器移植拒絶及び糸球体症が挙げられる。代謝性障害としては乾癬、真性糖尿病、慢性創傷治癒、炎症及び神経変性性疾患が挙げられる。
【００５２】
本発明の更なる態様において、感受性悪性腫瘍を含む、不適切なＣＤＫ４活性によって仲介される障害に罹患している哺乳動物の治療方法であって、被検体に有効量の式（Ｉ）の化合物、または製薬上許容し得るその塩若しくは溶媒化合物、またはその生理学的機能性誘導体を投与することを含む、該方法が提供される。好ましい実施形態において、障害は癌である。
【００５３】
本発明の更なる態様において、癌に罹患している哺乳動物の治療方法であって、被検体に有効量の式（Ｉ）の化合物、または製薬上許容し得るその塩若しくは溶媒化合物、またはその生理学的機能性誘導体を投与することを含む、該方法が提供される。
【００５４】
本発明の更なる態様において、不適切なＣＤＫ４活性を特徴とする障害の治療のための医薬の製造における、式（Ｉ）の化合物、または製薬上許容し得るその塩若しくは溶媒化合物、またはその生理学的機能性誘導体の使用が提供される。好ましい実施形態において、障害は癌である。
【００５５】
本発明の更なる態様において、癌及び悪性腫瘍の治療のための医薬の製造における、式（Ｉ）の化合物、または製薬上許容し得るその塩若しくは溶媒化合物、またはその生理学的機能性誘導体の使用が提供される。
【００５６】
本発明の化合物による治療を必要とする哺乳動物は、典型的にはヒトである。
【００５７】
治療で使用するためには、治療的有効量の式Ｉの化合物、並びにその塩、溶媒化合物、及び生理学的機能性誘導体を生の化学物質として投与することも可能であるが、活性成分を医薬組成物として提供することが可能である。従って、本発明は更に、治療的有効量の式Ｉの化合物及びその塩、溶媒化合物、及び生理学的機能性誘導体、及び１種以上の製薬上許容し得る担体、希釈剤、または賦形剤を含有する医薬組成物を提供する。式Ｉの化合物及びその塩、溶媒化合物、及び生理学的機能性誘導体は上記した通りである。担体、希釈剤または賦形剤は、製剤の他の成分と適合し得るという意味において許容される必要があり、そしてレシピエントに対して有害でないものでなければならない。本発明の別の態様に従って、式Ｉの化合物、またはその塩、溶媒化合物、及び生理学的機能性誘導体を１種以上の製薬上許容し得る担体、希釈剤または賦形剤と混合することを含む、医薬製剤の製造方法も提供される。
【００５８】
医薬製剤は、単位用量当たり予め決められた量の活性成分を含有する単位用量形態で提供することができる。こうした単位には、治療される状態、投与経路、及び患者の年齢、体重及び状態に応じて、例えば０．５ｍｇ〜１ｇ、好ましくは７０ｍｇ〜７００ｍｇ、より好ましくは５ｍｇ〜１００ｍｇの式（Ｉ）の化合物が含有され得る。好ましい単位用量の製剤は、活性成分の前記した日用量若しくは分割用量（ｓｕｂ−ｄｏｓｅ）、またはその適切な一部を含有するものである。更に、こうした医薬製剤は、薬学の分野で周知の任意の方法で調製しても良い。
【００５９】
医薬製剤は、任意の好適な経路、例えば経口（バッカルまたは舌下を含む）、直腸、鼻内、局所（バッカル、舌下または経皮を含む）、膣または非経口（皮下、筋肉内、静脈内、または皮内を含む）経路によって投与するのに適合させ得る。このような製剤は、薬学の分野において公知の任意の方法、例えば活性成分を担体または賦形剤と組み合わせることによって調製できる。
【００６０】
経口投与に適した医薬製剤は、カプセルまたは錠剤；粉剤または顆粒剤；水性若しくは非水性液体中の溶液または懸濁液；食用できるフォームまたはホイップ；あるいは水中油型液体エマルジョンまたは油中水型液体エマルジョン、等の個別の単位として提供することができる。
【００６１】
例えば、錠剤またはカプセルの形態での経口投与のためには、活性な医薬成分を経口で非毒性の製薬上許容し得る不活性な担体、例えばエタノール、グリセロール、水等と組み合わせることができる。粉末は、化合物を好適な微小な大きさに粉砕し、同様に粉砕した食用できる炭水化物（例えばデンプンまたはマンニトール）等の薬学的担体と混合することによって調製する。香料、保存剤、分散剤及び着色剤も存在し得る。
【００６２】
カプセルは、上記の粉末混合物を調製し、成型したゼラチンシース（ｓｈｅａｔｈｓ）に充填することによって製造する。充填操作の前に、コロイダルシリカ、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、またはポリエチレングリコール固体等の流動促進剤（ｇｌｉｄａｎｔｓ）及び滑沢剤（ｌｕｂｒｉｃａｎｔｓ）を粉末混合物に添加することができる。カプセルを服用した時の医薬のアベイラビリティーを改善するために、寒天、炭酸カルシウムまたは炭酸ナトリウム等の崩壊剤または可溶化剤を添加することもできる。
【００６３】
更に、所望または必要により、好適な結合剤、滑沢剤、崩壊剤及び着色剤を混合物中に組み入れることもできる。好適な結合剤としては、デンプン、ゼラチン、グルコース若しくはβ−ラクトース等の天然の糖、トウモロコシ甘味料（ｃｏｒｎ ｓｗｅｅｔｅｎｅｒｓ）、アカシア、トラガカント若しくはアルギン酸ナトリウム等の天然若しくは合成のガム、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコール、ワックス等が挙げられる。これらの投与形態で使用する滑沢剤としては、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム等が挙げられる。崩壊剤としては、限定するものではないが、デンプン、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、キサンタンガム等が挙げられる。錠剤は、例えば粉末混合物を調製し、顆粒化またはスラッギング（ｓｌｕｇｇｉｎｇ）を行い、滑沢剤及び崩壊剤を添加し、錠剤に圧縮することによって製剤化される。粉末混合物は、好適に細かく粉砕した化合物を上記の希釈剤またはベース、そして場合によってはカルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、若しくはポリビニルピロリドン等の結合剤、パラフィン等の溶解遅延剤、第四級塩等の吸収促進剤及び／またはベントナイト、カオリン、若しくはリン酸二カルシウム等の吸着剤と混合することによって調製する。粉末混合物はシロップ、デンプンペースト、アカディア（ａｃａｄｉａ）粘滑薬またはセルロース性若しくはポリマー性物質の溶液等の結合剤で湿潤させ、スクリーンを強制的に通すことによって顆粒化することができる。顆粒化の代替法として、粉末混合物を錠剤製造機に通し、結果として得られる不完全に形成した塊（ｓｌｕｇｓ）を粉砕して顆粒にすることができる。顆粒は、錠剤形成用の型への付着を防止するために、ステアリン酸、ステアリン酸塩、タルクまたは鉱油の添加によって滑沢化させることができる。滑沢化させた混合物を次に錠剤に圧縮する。本発明の化合物はまた、自由浮動性（ｆｒｅｅ ｆｌｏｗｉｎｇ）の不活性な担体と組み合わせて、顆粒化またはスラッギングステップを経ることなく直接錠剤に圧縮することができる。シェラックの密封性被覆、糖またはポリマー性物質の被覆、及びワックスの光沢のある被覆からなる透明または不透明な保護被覆が提供され得る。異なる単位投与物を識別するためにこれらの被覆に染料を添加することができる。
【００６４】
溶液、シロップ及びエリキシル等の経口液剤は、所与の量が予め決められた量の化合物を含有するように単位投与形態で調製することができる。シロップは、化合物を好適に味をつけた（ｆｌａｖｏｒｅｄ）水溶液に溶解することによって調製することができ、エリキシルは非毒性のアルコール性ベヒクルを使用して調製する。懸濁液は化合物を非毒性のベヒクルに分散させることによって製剤化することができる。エトキシル化したイソステアリルアルコール及びポリオキシエチレンソルビトールエーテル等の可溶化剤及び乳化剤、保存剤、ペパーミント油または天然甘味料またはサッカリンまたは他の人工甘味料等の風味添加剤等も添加することができる。
【００６５】
適切な場合には、経口投与のための単位投与製剤をマイクロカプセル化することができる。製剤はまた、例えばポリマーやワックス等を用いて粒子状物質を被覆または包埋してその放出を延長または持続するように調製することもできる。
【００６６】
式Ｉの化合物、及びその塩、溶媒化合物及び生理学的機能性誘導体はまた、スモールユニラメラベシクル、ラージユニラメラベシクル及びマルチラメラベシクル等のリポソーム送達系の形態で投与することもできる。リポソームは、コレステロール、ステアリルアミンまたはホスファチジルコリン等の種々のリン脂質から形成することができる。
【００６７】
式Ｉの化合物及びその塩、溶媒化合物及び生理学的機能性誘導体はまた、化合物分子を結合させる個々の担体としてモノクローナル抗体を使用することによって送達することもできる。化合物はまた、ターゲッティング可能な医薬担体として可溶性ポリマーと結合させることもできる。こうしたポリマーとして、ポリビニルピロリドン、ピランコポリマー、ポリヒドロキシプロピルメタクリルアミド−フェノール、ポリヒドロキシエチルアスパルタミドフェノール、またはパルミトイル残基で置換されたポリエチレンオキサイドポリリジンが挙げられる。更に、化合物は、医薬の調節性放出を達成する上で有用な生分解性ポリマーのクラス、例えばポリ乳酸、ポリイプシロン（ｐｏｌｅｐｓｉｌｏｎ）カプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリジヒドロピラン、ポリシアノアクリレート及びヒドロゲルの架橋型または両親媒性ブロックコポリマーと結合させることもできる。
【００６８】
経皮投与に適した医薬製剤は、レシピエントの表皮と近く接触して長時間とどまることを意図される個々のパッチとして提供することができる。例えば、活性成分は、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， ３（６）， ３１８（１９８６）に一般的に記載されているイオン浸透療法（ｉｏｎｔｏｐｈｏｒｅｓｉｓ）によってパッチから送達することができる。
【００６９】
局所投与に適した医薬製剤は、軟膏、クリーム、懸濁液、ローション、粉剤、溶液、ペースト、ゲル、スプレー、エアゾールまたは油として製剤化することができる。
【００７０】
眼あるいは他の外部組織、例えば口及び皮膚の治療においては、製剤は好ましくは局所軟膏またはクリームとして適用される。軟膏に製剤化する場合は、活性成分をパラフィン性または水混和性軟膏基材と共に用いることができる。あるいはまた、活性成分を水中油型クリーム基材または油中水型基材と共にクリームに製剤化することもできる。
【００７１】
眼への局所投与に適した医薬製剤としては、活性成分が好適な担体、特に水性溶媒中に溶解または懸濁している点眼剤が挙げられる。
【００７２】
口への局所投与に適した医薬製剤としては、ロゼンジ、錠剤（ｐａｓｔｉｌｌｅｓ）及び洗口剤が挙げられる。
【００７３】
直腸投与に適した医薬製剤は、坐剤として、または浣腸として提供することができる。
【００７４】
担体が固体である鼻内投与に適した医薬製剤としては、嗅ぎタバコ（ｓｎｕｆｆ）を吸う方法で、すなわち鼻の近くに保持された粉末の容器から鼻の通路を通した迅速吸入によって投与される、例えば２０〜５００ミクロンの範囲の粒子サイズを有する粗い粉末が挙げられる。担体が液体である、鼻スプレーまたは鼻ドロップとして投与するために好適な製剤としては、活性成分の水性または油性の溶液が挙げられる。
【００７５】
吸入による投与に適した医薬製剤としては、種々の型の計量した加圧エアゾール、ネブライザーまたは注入器によって生成し得る微粒子のダストまたはミストが挙げられる。
【００７６】
膣内投与に適した医薬製剤は、ペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、フォームまたはスプレー製剤として提供することができる。
【００７７】
非経口投与に適した医薬製剤としては、抗酸化剤、緩衝剤、静菌薬、及び製剤を予定されているレシピエントの血液と等張にするための溶質を含有し得る水性及び非水性の無菌の注射溶液；及び懸濁剤及び増粘剤を含有し得る水性及び非水性の無菌の懸濁液が挙げられる。製剤は、単位容量または多数回容量の容器、例えば密閉したアンプル及びバイアルで提供することができ、また使用直前に無菌の液体担体、例えば注射用の水の添加のみを必要とするフリーズドライ（凍結乾燥）状態で保存することができる。即時調合型注射溶液及び懸濁液は無菌の粉末、顆粒及び錠剤から調製することができる。
【００７８】
特に上記した成分に加えて、対象の製剤の型に関して当分野において通常用いられる他の薬剤を製剤中に含めることができることは理解されるべきである。例えば、経口投与に好適なものとして香料が挙げられる。
【００７９】
本発明の化合物の治療的有効量は、例えば、動物の年齢及び体重、治療を必要とする明確な状態及びその重篤度、製剤の性質、及び投与経路、を含む多くの因子に依存し、最終的には担当の医師または獣医の裁量で決定される。しかしながら、新生物の増殖、例えば結腸癌または乳癌に対する治療においては、式（Ｉ）の化合物の有効量は、一般に一日当たりレシピエント（哺乳動物）の体重１ｋｇに対して０．１〜１００ｍｇの範囲であり、より通常には一日あたり体重１ｋｇに対して１〜１０ｍｇの範囲である。従って、７０ｋｇの哺乳動物成体の場合、一日当たりの実際の量は通常７０〜７００ｍｇであり、この量は１日に単回投与で適用しても良く、またはより通常には総日用量が同じになるようにした１日複数回（例えば２回、３回、４回、５回または６回）の分割投与で適用しても良い。化合物の塩、溶媒化合物、若しくは生理学的機能性誘導体の有効量は、式（Ｉ）の化合物自体の有効量と比例して決定することができる。上記した他の状態の治療についても同様の投与量が適切であろうことが想定される。
【００８０】
本発明の化合物及びその塩及び溶媒化合物、及びその生理学的機能性誘導体は、単独で用いても良く、あるいは上記した状態の治療のための他の治療薬と組み合わせて用いても良い。特に、抗癌治療において、他の化学療法剤、ホルモン、または抗体医薬との組み合わせ、並びに外科的治療及び放射線療法との組み合わせが想定される。従って本発明による組み合わせ治療は、少なくとも１種の式（Ｉ）の化合物または製薬上許容し得るその塩若しくは溶媒化合物、あるいは生理学的機能性誘導体の投与、及び少なくとも１種の他の癌治療法の使用を含む。好ましくは、本発明による組み合わせ治療は、少なくとも１種の式（Ｉ）の化合物または製薬上許容し得るその塩若しくは溶媒化合物、あるいは生理学的機能性誘導体、及び少なくとも１種の他の薬学上活性な薬剤、好ましくは抗新生物剤の投与を含む。式（Ｉ）の化合物及び他の薬学上活性な薬剤は共に投与しても別々に投与しても良く、別々に投与する場合は、任意の順で同時にまたは続けて投与することができる。式（Ｉ）の化合物及び他の薬学上活性な薬剤の量、及び投与の相対的なタイミングは、所望の組み合わせ治療効果を達成するために選択される。
【００８１】
式Ｉの化合物またはその塩、溶媒化合物、若しくは生理学的機能性誘導体、及び少なくとも１種の更なる癌治療法を、そのような他の抗癌治療と治療的に適切な任意の組み合わせで同時にまたは続けて組み合わせて用いることができる。一実施形態において、他の抗癌治療は、少なくとも１種の抗新生物剤の投与を含む、少なくとも１種の更なる化学療法である。式Ｉの化合物またはその塩、溶媒化合物、若しくは生理学的機能性誘導体の他の抗新生物剤と組み合わせての投与は、本発明に従って、（１）双方の化合物を含有する単位医薬組成物、または（２）それぞれ一方の化合物を含有する別個の医薬組成物、として同時に投与することによって組み合わせて行い得る。あるいはまた、組み合わせは、一方の抗新生物剤を最初に投与し、他方を２番目に投与するかまたはその逆で投与するように、別々に続けて投与することができる。こうした続けての投与は、時間的に近くても離れていても良い。
【００８２】
抗新生物剤は、細胞周期特異的に抗新生物効果を誘導し（すなわち相特異的であり、細胞周期の特定の相において作用する）、あるいはＤＮＡに結合して細胞周期非特異的に作用し得る（すなわち細胞周期非特異的であり、他のメカニズムによって作用する）。
【００８３】
式Ｉの化合物及びその塩、溶媒化合物または生理学的機能性誘導体と組み合わせるのに有用な抗新生物剤としては、以下のものが挙げられる：
（１）細胞周期特異的抗新生物剤としては、限定するものではないが、パクリタキセル及びその類似体のドセタキセル等のジテルペノイド類；ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、及びビノレルビン等のビンカアルカロイド類；エトポシド及びテニポシド等のエピポドフィロトキシン類；５−フルオロウラシル及びフルオロデオキシウリジン等のフルオロピリミジン類；アロプリノール、フルドゥラビン、メトトレキセート、クラドラビン、シタラビン、メルカプトプリン及びチオグアニン等の代謝拮抗物質類；及び９−アミノカンプトテシン、トポテカン、イリノテカン、ＣＰＴ−１１及び７−（４−メチルピペラジノ−メチレン）−１０，１１−エチレンジオキシ−２０−カンプトテシンの種々の光学異性体等のカンプトテシン類、が挙げられる。
【００８４】
（２）細胞毒性を有する化学療法剤としては、限定するものではないが、メルファラン、クロラムブシル、シクロホスファミド、メクロレタミン、ヘキサメチルメラミン、ブスルファン、カルムスチン、ロムスチン、及びダカルバジン等のアルキル化剤；ドキソルビシン、ダウノマイシン、エピルビシン、イダルビシン、マイトマイシン−Ｃ、ダクチノマイシン及びミスラマイシン等の抗腫瘍抗生物質；シスプラチン、カルボプラチン、及びオキサリプラチン等の白金複合体（ｐｌａｔｉｎｕｍ ｃｏｏｒｄｉｎａｔｉｏｎ ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ）が挙げられる。
【００８５】
（３）他の化学療法剤としては、限定するものではないが、タモキシフェン、トレミフェン、ラロキシフェン、ドロロキシフェン及びイオドキシフェン等の抗エストロゲン；酢酸メゲストロール等のプロゲストロジェン；アナストロゾール、レトラゾール、ボラゾール、及びエキセメスタン等のアロマターゼ阻害剤；フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、及び酢酸シプロテロン等の抗男性ホルモン；酢酸ゴセレリン及びルプロリド等のＬＨＲＨアゴニスト及びアンタゴニスト；フィナステリド等のテストステロン５α−ジヒドロレダクターゼ阻害剤；マリマスタット等のメタロプロテイナーゼ阻害剤；抗プロゲストジェン；ウロキナーゼプラスミノーゲンアクチベーター受容体機能阻害剤；肝細胞増殖因子の機能の阻害剤等の増殖因子機能阻害剤；ｅｒｂ−Ｂ２、ｅｒｂ−Ｂ４、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦｒ）、血小板由来増殖因子受容体（ＰＤＧＦｒ）、血管上皮増殖因子受容体（ＶＥＧＦｒ）、及びＴＩＥ−２；及び本発明において記載のもの以外のＣＤＫ２及びＣＤＫ４阻害剤等の他のチロシンキナーゼ阻害剤、が挙げられる。
【００８６】
別の実施形態において、治療的有効量の式Ｉの化合物またはその塩、溶媒化合物若しくは生理学的機能性誘導体、及び増殖因子受容体機能を阻害する薬剤を、不適切なＣＤＫ４活性によって仲介される障害の治療、例えば癌の治療のために哺乳動物に組み合わせて投与することができる。このような増殖因子受容体としては、例えば、ＥＧＦｒ、ＰＤＧＦｒ、ｅｒｂ−Ｂ２、ＶＥＧＦｒ、またはＴＩＥ−２が挙げられる。増殖因子受容体及び増殖因子受容体機能を阻害する薬剤は、例えば、Ｋａｔｈ， Ｊｏｈｎ Ｃ．， Ｅｘｐ． Ｏｐｉｎ． Ｔｈｅｒ． Ｐａｔｅｎｔｓ （２０００） １０（６）：８０３−８１８及びＳｈａｗｖｅｒら、ＤＤＴ Ｖｏｌ ２， Ｎｏ． ２ Ｆｅｂｒｕａｒｙ １９９７に記載されている。
【００８７】
式Ｉの化合物またはその塩、溶媒化合物、若しくは生理学的機能性誘導体、及び増殖因子受容体機能を阻害する薬剤は、任意の治療上適切な組み合わせで同時にまたは続けて、組み合わせて使用することができる。組み合わせは、（１）双方の化合物を含有する単位医薬組成物、または（２）それぞれ一方の化合物を含有する別個の医薬組成物、として同時に投与することによって本発明に従った組み合わせて使用することができる。あるいはまた、組み合わせは、一方を最初に投与し、他方を２番目に投与するかまたはその逆で投与するように、別々に続けて投与することができる。こうした続けての投与は、時間的に近くても離れていても良い。
【００８８】
本発明の別の態様において、哺乳動物における不適切なサイクリン依存性キナーゼ活性によって仲介される障害を治療する方法であって、該哺乳動物に治療的有効量の式Ｉの化合物またはその塩、溶媒化合物、若しくは生理学的機能性誘導体を投与することを含む、上記方法が提供される。一実施形態において、不適切なサイクリン依存性キナーゼ活性は少なくとも不適切なＣＤＫ２またはＣＤＫ４活性のいずれか一方による。別の実施形態において、不適切なサイクリン依存性キナーゼ活性は、不適切なＣＤＫ２及びＣＤＫ４活性による。更なる実施形態において、該方法は、式Ｉの化合物、またはその塩、溶媒化合物、若しくは生理学的機能性誘導体と共に治療的有効量のＣＤＫ２阻害剤を投与することを更に含む。障害は癌、再狭窄、アテローム性動脈硬化症、炎症性疾患、神経変性性疾患、ウイルス感染及び乾癬であり得る。好ましくは障害は癌である。サイクリン依存性キナーゼ及びその阻害剤は、例えばＲｏｓａｎｉａら， Ｅｘｐ． Ｏｐｉｎ． Ｔｈｅｒ． Ｐａｔｅｎｔｓ （２０００） １０（２）：２１５−２３０に記載されている。
【００８９】
本発明の別の態様において、哺乳動物における不適切なサイクリン依存性キナーゼ活性によって仲介される障害を治療に使用するための医薬の製造における、式Ｉの化合物、またはその塩、溶媒化合物、若しくは生理学的機能性誘導体の使用が提供される。一実施形態において、不適切なサイクリン依存性キナーゼ活性は少なくとも不適切なＣＤＫ２またはＣＤＫ４活性のいずれか一方による。別の実施形態において、不適切なサイクリン依存性キナーゼ活性は、不適切なＣＤＫ２及びＣＤＫ４活性による。更なる実施形態において、該使用は該医薬を製造するためのＣＤＫ２阻害剤の使用を更に含む。
【００９０】
式Ｉの化合物またはその塩、溶媒化合物、若しくは生理学的機能性誘導体とＣＤＫ２阻害剤との組み合わせは、本発明に従って（１）双方の化合物を含有する単位医薬組成物、または（２）それぞれ化合物の一方を含む別個の医薬組成物、として同時に投与することによって組み合わせて使用することができる。
【００９１】
本発明の特定の実施形態を、以下に例示のためにのみ説明する。例示した化合物に与えられた物理的データはこれらの化合物に割り当てられた構造と合致する。
【００９２】
実施例
以下の実施例は本発明の例示的実施形態であり、いかなる意味においても本発明の範囲を制限するものではない。試薬は市販のものであるか、または文献に記載の方法に従って調製する。実施例番号は、上記の表に挙げた化合物のものをいう。^１Ｈ ＮＭＲスペクトルはＶＡＲＩＡＮ Ｕｎｉｔｙ Ｐｌｕｓ ＮＭＲスペクトロフォトメーターで３００または４００ ＭＨｚで得た。質量スペクトルは、Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ Ｌｔｄ．（Ａｌｔｒｉｎｃｈａｍ， ＵＫ）のＭｉｃｒｏｍａｓｓ Ｐｌａｔｆｏｒｍ ＩＩ質量分析計で、大気化学イオン化（Ａｔｍｏｓｐｈｅｒｉｃ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ（ＡＰＣＩ））または電気スプレーイオン化（Ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙ Ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ）を用いて得た。単離できないか、または不安定すぎて完全な性状解析ができないいくつかの中間体の純度を確かめ、反応の進行を追跡するために、分析的薄相クロマトグラフィー（ＴＬＣ）を用いた。他に記載のない限り、これはシリカゲル（Ｍｅｒｃｋ Ｓｉｌｉｃａ Ｇｅｌ ６０ Ｆ２５４）を用いて行った。他に記載のない限り、いくつかの化合物の精製のためのクロマトグラフィーではＭｅｒｃｋ Ｓｉｌｉｃａ ｇｅｌ ６０（２３０−４００メッシュ）、及び記載の溶媒系を加圧下で用いた。
【００９３】
実施例１
１−［（Ｚ）−（４− ジメチルアミノメチルアニリノ ） メチリデン ］−１，３− ジヒドロ −２Ｈ− ピロロ ［３，２−ｆ］ キノリン −２− オン
【化９】

ａ）ジメチルアミノメチリデン−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，２−ｆ］キノリン−２−オン（０．１ｍｍｏｌ）、４−ジメチルアミノメチルアニリン（０．１ｍｍｏｌ）及びエタノール（１ｍＬ）中の濃塩酸（０．０２ｍＬ）を環流下でｔｌｃ分析で測定して反応が完了するまで加熱した。反応混合物を室温まで冷却させた。溶媒を留去し、シリカゲルクロマトグラフィーで残渣を精製して橙−褐色固体の標記化合物、１５ｍｇ（４２％）を得た。
【００９４】

ｂ）ジメチルアミノメチリデン−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，２−ｆ］キノリン−２−オン
３−Ｈ−ピロロ［３，２−ｆ］キノリン−２−オン（１３ｍｍｏｌ）及びＤＭＦ中のジメチルホルムアミドジ−ｔ−ブチルアセタール（１５ｍｍｏｌ）の混合物を室温で３時間攪拌した。酢酸エチル（２５ｍＬ）を添加し、得られた個体を濾過によって回収し、風乾させた。所望の化合物が得られ（７０％）、これを直接次のステップに使用した。
【００９５】
ｃ）３−Ｈ−ピロロ［３，２−ｆ］キノリン−２−オン
２．３ｇ（１２ｍｍｏｌ）の３−Ｈ−ピロロ［３，２−ｆ］キノリン−１，２−ジオン及び２．０ｍｌ（０．０６ｍｏｌ）のヒドラジンの５０ｍｌのＤＭＦ及び５０ｍｌのエタノール中の溶液を環流下で２時間攪拌した。得られた懸濁液を室温まで冷却させ、次いで氷浴中で冷却して濾過した。固体を少量のエタノールで洗浄し、風乾して橙色固体の１−ヒドラゾノ−１，３−ジヒドロピロロ［３，２−ｆ］キノリン−２−オンを得た（１．８ｇ、７３％）。
【００９６】

１．８ｇ（８．５ｍｍｏｌ）の１−ヒドラゾノ−１，３−ジヒドロピロロ［３，２−ｆ］キノリン−２−オンの新たに調製した０．５Ｍナトリウムエトキシド溶液５０ｍｌ中の溶液を環流下で３時間攪拌した。溶液を５０ｍｌの水で希釈し、酢酸で中和し、ロータリーエバポレーターで濁るまで濃縮した。溶液を冷蔵庫で一晩保存した。固体を濾過によって除き、濾過液を各８０ｍｌのＥｔＯＡｃで３回抽出した。固体のＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ溶液を抽出液と合わせてシリカゲルの短いパッドを通過させ、ＥｔＯＡｃで溶出させた。次いで溶液をロータリーエバポレーターで少量になるまで濃縮し、得られた懸濁液を等量のエタノールで希釈し、照音波処理し、濾過して明るい緑色の固体の３−Ｈ−ピロロ［３，２−ｆ］キノリン−２−オンを得た（０．５２ｇ、３３％）。
【００９７】

ｄ）３−Ｈ−ピロロ［３，２−ｆ］キノリン−１，２−ジオン
１Ｌのフラスコに、硫酸ナトリウム（０．６ｍｏｌ）及び水（１００ｍＬ）を入れ、固体が溶解するまで混合液を攪拌した。この溶液に６−アミノキノリン（０．０３３ｍｏｌ）の１Ｎ塩酸水溶液（５０ｍＬ）及びエタノール（１０ｍＬ）中の溶液を添加した。混合液を攪拌してクロラール（０．０３６ｍｏｌ）を添加した。得られた溶液に塩酸ヒドロキシルアミン（０．１０８ｍｏｌ）の水（３０ｍＬ）溶液を添加した。次いでこの混合液を穏やかに環流しながら全ての固体が溶解するまで加熱し、更に１５分間加熱した。フラスコの加熱をやめ、溶液を攪拌しながら氷（５００ｇ）上に注いだ。得られた固体を濾過によって回収し、水で洗浄、風乾してＮ−キノリン−６−イル−２−ヒドロキシイミノアセトアミド（ｈｙｄｒｏｘｙｉｍｉｎｏａｃａｔａｍｉｄｅ）を得た（９４％）。１Ｌの三つ首フラスコに濃硫酸（１００ｍＬ）を入れた。酸を攪拌し、１００℃まで加熱した。Ｎ−キノリン−６−イル−２−ヒドロキシイミノアセトアミド（４５ｍｍｏｌ）をゆっくり添加し、得られた溶液を１時間加熱した。反応混合液を慎重に氷／水（７５０ｍＬ）上に注ぎ、約１時間攪拌した。固体を濾過によって回収し、水で洗浄、風乾して所望の化合物を得た（４６％）。
【００９８】
実施例２
１−［（Ｚ）−（４− ジエチルアミノメチルアニリノ ） メチリデン ］−１，３− ジヒドロ −２Ｈ− ピロロ ［３，２−ｆ］ キノリン −２− オン
【化１０】

４−ジエチルアミノメチルアニリンから実施例１（ａ）の記載と同様にして橙−黄色固体の標記の化合物、８．６ｍｇ（２２％）を得た。
【００９９】

実施例３
１−［（Ｚ）−（４−（Ｎ− メチル ） エチルアミノメチルアニリノ ） メチリデン ］−１，３− ジヒドロ −２Ｈ− ピロロ ［３，２−ｆ］ キノリン −２− オン
【化１１】

４−［Ｎ−（メチル）エチルアミノメチル］アニリンから実施例１（ａ）の記載と同様にして黄色固体の標記の化合物、１３ｍｇ（３５％）を得た。
【０１００】

実施例４
１−［（Ｚ）−（４−（Ｎ− メチル ） プロピルアミノメチルアニリノ ） メチリデン ］−１，３− ジヒドロ −２Ｈ− ピロロ ［３，２−ｆ］ キノリン −２− オン
【化１２】

４−［Ｎ−（メチル）プロピルアミノメチル］アニリンから実施例１（ａ）の記載と同様にして黄−褐色固体の標記の化合物、７．２ｍｇ（１９％）を得た。
【０１０１】

実施例５
１−［（Ｚ）−（４−（Ｎ− メチル ）−２− プロピルアミノメチルアニリノ ） メチリデン ］−１，３− ジヒドロ −２Ｈ− ピロロ ［３，２−ｆ］ キノリン −２− オン
【化１３】

４−［Ｎ−（メチル）イソプロピルアミノメチル］アニリンから実施例１（ａ）の記載と同様にして黄色固体の標記の化合物、１６ｍｇ（４１％）を得た。
【０１０２】

実施例６
１−［（Ｚ）−（４−（Ｎ− メチル ）−２− メチルプロピルアミノメチルアニリノ ） メチリデン ］−１，３− ジヒドロ −２Ｈ− ピロロ ［３，２−ｆ］ キノリン −２− オン
【化１４】

４−［Ｎ−（メチル）−２−メチルプロピルアミノメチル］アニリンから実施例１（ａ）の記載と同様にして黄−褐色固体の標記の化合物、１１ｍｇ（２７％）を得た。
【０１０３】

実施例７
１−［（Ｚ）−（４−（Ｎ− メチル ） ベンジルアミノメチルアニリノ ） メチリデン ］−１，３− ジヒドロ −２Ｈ− ピロロ ［３，２−ｆ］ キノリン −２− オン
【化１５】

４−［Ｎ−（メチル）ベンジルアミノメチル］アニリンから実施例１（ａ）の記載と同様にして黄色固体の標記の化合物、１８ｍｇ（４１％）を得た。
【０１０４】

実施例８
１−［（Ｚ）−（４−（Ｎ− メチル ）−２− ヒドロキシエチルアミノメチルアニリノ ） メチリデン ］−１，３− ジヒドロ −２Ｈ− ピロロ ［３，２−ｆ］ キノリン −２− オン
【化１６】

４−［Ｎ−（メチル）−２−ヒドロキシエチルアミノメチル］アニリンから実施例１（ａ）の記載と同様にして黄色固体の標記の化合物、１０ｍｇ（２６％）を得た。
【０１０５】

実施例９
１−［（Ｚ）−（４−（Ｎ− メチル ）−２− メトキシエチルアミノメチルアニリノ ） メチリデン ］−１，３− ジヒドロ −２Ｈ− ピロロ ［３，２−ｆ］ キノリン −２− オン
【化１７】

４−［Ｎ−（メチル）−２−メトキシエチルアミノメチル］アニリンから実施例１（ａ）の記載と同様にして黄色固体の標記の化合物、１８ｍｇ（４１％）を得た。
【０１０６】

実施例１０
１−［（Ｚ）−（４−（４− モルホリニル ） メチルアニリノ ） メチリデン ］−１，３− ジヒドロ −２Ｈ− ピロロ ［３，２−ｆ］ キノリン −２− オン
【化１８】

４−（４−モルホリニル）メチルアニリンから実施例１（ａ）の記載と同様にして黄−褐色固体の標記の化合物、１９ｍｇ（４７％）を得た。
【０１０７】

実施例１１
１−［（Ｚ）−（４−（１− ピペリジニル ） メチルアニリノ ） メチリデン ］−１，３− ジヒドロ −２Ｈ− ピロロ ［３，２−ｆ］ キノリン −２− オン
【化１９】

４−（１−ピペリジニル）メチルアニリンから実施例１（ａ）の記載と同様にしてカーキ色固体の標記の化合物、２４ｍｇ（６０％）を得た。
【０１０８】

実施例１２
１−［（Ｚ）−（４−（４− ヒドロキシ −１− ピペリジニル ） メチルアニリノ ） メチリデン ］−１，３− ジ ヒドロ −２Ｈ− ピロロ ［３，２−ｆ］ キノリン −２− オン
【化２０】

４−（４−ヒドロキシ−１−ピペリジニル）メチルアニリンから実施例１（ａ）の記載と同様にして黄−橙色固体の標記の化合物、２．６ｍｇ（６％）を得た。
【０１０９】

実施例１３
１−［（Ｚ）−（４−（４− メチル −１− ピペラジニル ） メチルアニリノ ） メチリデン ］−１，３− ジヒドロ −２Ｈ− ピロロ ［３，２−ｆ］ キノリン −２− オン
【化２１】

４−（４−メチル−１−ピペラジニル）メチルアニリンから実施例１（ａ）の記載と同様にして濃いくり色固体の標記の化合物、７７ｍｇ（７８％）のビス塩酸塩を得た。
【０１１０】

実施例１４
１−［（Ｚ）−（４−（１− イミダゾイル ） メチルアニリノ ） メチリデン ］−１，３− ジヒドロ −２Ｈ− ピロロ ［３，２−ｆ］ キノリン −２− オン
【化２２】

４−（１−イミダゾイル）メチルアニリンから実施例１（ａ）の記載と同様にしてさび色の固体の標記の化合物、２８ｍｇ（７３％）を得た。
【０１１１】

実施例１５
１−［（Ｚ）−（４−（Ｎ− メチル ）−（１− メチル −４− ピペリジニル ） アミノメチルアニリノ ） メチリデン ］−１，３− ジヒドロ −２Ｈ− ピロロ ［３，２−ｆ］ キノリン −２− オン
【化２３】

４−（Ｎ−メチル）−（１−メチル−４−ピペリジニル）アミノメチルアニリンから実施例１（ａ）の記載と同様にしてさび色の固体の標記の化合物、７．７ｍｇ（１７％）を得た。
【０１１２】

生物学的データ
本発明の化合物は貴重な薬理学的特性を有する。このクラスの種々の化合物は、０．０００１〜１μＭの範囲の濃度でＣＤＫ２及び／またはＣＤＫ４酵素を阻害するのに特に有効であり、更に他のキナーゼと比較して特異性を示す。代表的なデータを以下の表１に示す。基質リン酸化アッセイを以下のようにして実施した。
【０１１３】
ＣＤＫ４
サイクリンＤ１及びサイクリン依存性キナーゼ４はバキュロウイルス発現系を用いて発現させた。ＣＤＫ４タンパク質の触媒活性はＲｂタンパク質のリン酸化を測定することによってアッセイした。末端切断型Ｒｂタンパク質（天然網膜芽腫タンパク質の残基７７３−９２８、精製を容易にするためにグルタチオンＳ−トランスフェラーゼと融合したもの）をリン酸化の受容体として使用した。アッセイ条件は、最終体積が５０μＬ中に１００ｍＭ ＨＥＰＥＳ（Ｎ−［２−ヒドロキシエチル］ピペリジン−Ｎ’−［２−エタンスルホン酸］）、ｐＨ ７．５、０．５μＭ ＧＳＴ−Ｒｂタンパク質、１μＣｉ／ｍＬ［^３３Ｐ］−ＡＴＰ（１ｎＭ−２０μＭ）、５−２０ｍＭ ＭｇＣｌ_２、２．５ｍＭ ＥＤＴＡ、１ｍＭ ジチオスレイトール、０．２ｍｇ／ｍＬ ウシ血清アルブミン、２％（ｖ／ｖ） ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ＣＤＫ４酵素（５−５０ｎＭ）とした。反応液を１０−６０分間３０℃でインキュベートし、５０μＬのクエンチ液（１ｍＭ ＡＴＰ／１００ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ ７．０）の添加によって停止させた。タンパク質のリン酸化の検出はシンチレーションカウンター計測により行い、続いてグルタチオンで被覆した９６ウェルプレートにタンパク質を回収するか、またはホスホセルロースフィルター上にタンパク質を捕捉した。これらの方法で検出したカウントから適当なバックグラウンド値を差し引いたものは反応初期速度に比例すると考えられた。ＩＣ_５０値は種々の阻害剤濃度（０．１ｎＭ〜５０μＭ）の存在下で酵素活性を測定することによって決定した。ＩＣ_５０Ｓを式ＣＰＭ＝Ｖｍａｘ^★（１−（［ｌ］／（Ｋ＋［ｌ］））＋ｎｓｂ）に対する最小二乗適合（ｆｉｔ）によって決定するか、あるいはｐＩＣ５０ｓを式ＣＰＭ＝ｎｓｂ＋（Ｖｍａｘ−ｎｓｂ）／（１＋（ｘ／１０^Ｘ−ｐＩＣ５０））に対する適合によって決定した。ここでｎｓｂはバックグラウンド値である。
【０１１４】
ＣＤＫ２
サイクリン依存性タンパク質キナーゼ２のアッセイは、ホスホリル基受容体としてペプチドビオチン−アミノヘキシル−ＡＲＲＰＭＳＰＫＫＫＡ−ＮＨ_２を用いる。ＣＤＫ２はバキュロウイルス発現系を用いて発現させ、部分精製して検出可能な競合反応を存在させずに総タンパク質の２０−８０％で含有させた。典型的には、アッセイは、阻害剤、ペプチド基質（１−１０ｎＭ）、［ｇ−^３２Ｐ］ＡＴＰ（１−２０ｎＭ）、及び１０−２０ｍＭ Ｍｇ^２＋の存在下または非存在下で、一般には１０−１２０分の範囲の時間、酵素（０．２−１０ｎＭ）をインキュベートすることによって行った。反応は０．２−２倍量の２０％酢酸若しくはｐＨ７に緩衝させた５０−１００ｍＭ ＥＤＴＡで停止させた（基質消費＜２０％）。酵素アッセイで用いた緩衝液は、０．１ｍｇ／ｍＬ ＢＳＡ及び５％ ＤＭＳＯを含有する１００ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．５であった。阻害剤はアッセイに添加する前に１００％ ＤＭＳＯで希釈した。ペプチドリン酸化の検出は、ペプチドをホスホセルロースフィルター上に回収するか（酢酸で反応を停止させた場合）、ストレプトアビジンで被覆した９６ウェルプレート（Ｐｉｅｒｃｅ）のウェルにペプチドを回収するか（ＥＤＴＡで反応を停止させた場合）、あるいはアビジン被覆シンチラントを含んだ（ｉｍｐｒｅｇｎａｔｅｄ）ビーズの添加（Ａｍｅｒｓｈａｍからのシンチレーション近接（Ｐｒｏｘｉｍｉｔｙ）アッセイ、ＥＤＴＡで反応を停止した場合）の後にシンチレーションカウンター計測することによって実施した。これらの方法のいずれかで検出された計数から適切なバックグラウンド（更に４０ｍＭ ＥＤＴＡを用いるかまたはペプチド基質を用いないアッセイ）を引いたものが反応初期速度に比例するものと推定し、ＩＣ５０は式ＣＰＭ＝Ｖｍａｘ^★（１−（［ｌ］／（Ｋ＋［ｌ］）））＋ｎｓｂに対する最小二乗適合（ｆｉｔ）によって決定するか、あるいは−ｐＩＣ５０ｓを式ＣＰＭ＝ｎｓｂ＋（Ｖｍａｘ−ｎｓｂ）／（１＋（ｘ／１０^Ｘ−ｐＩＣ５０））に対する適合によって決定した。ここでｎｓｂはバックグラウンド値である。フィルターは７５ｍＭリン酸で４回洗浄した。放射活性は液体シンチレーションカウンター計測によって決定した。
【０１１５】
細胞ベースの抗増殖アッセイ
化合物の抗増殖活性は細胞ＤＮＡへのブロモデオキシウリジン（ＢｒｄＵ）の取り込みによってＤＮＡ合成速度を測定することで決定した。細胞ＤＮＡ中のＢｒｄＵ量は、迅速なスループットを可能とするためにＥＬＩＳＡフォーマットで抗−ＢｒｄＵ抗体を用いて検出した。対数増殖期にある機能性Ｒｂを含有するヒト腫瘍細胞（Ｕ２ＯＳ、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１）または機能性Ｒｂタンパク質を有さないヒト腫瘍細胞（ＳａＯｓ−２、ＭＤＡ−ＭＢ−４６８）を９６ウェルプレートの培地中にまき（１−６×１０^３細胞／１００μＬ培地／ウェル）、一晩から３０時間インキュベートさせた。化合物（濃度範囲０．０４６−１００μＭ）を培地で希釈し（最終ＤＭＳＯ（ｖ／ｖ）０．８％）、細胞を含有するウェルに添加し、３７℃で１８時間インキュベートした。ＢｒｄＵ（１００μＭ）を添加し、４時間インキュベートした。細胞をＰＢＳでゆすぎ、固定／変性溶液の添加によってＤＮＡを変性させた。１％ ＢＳＡ中のホースラディッシュペルオキシダーゼにコンジュゲートさせた抗−ＢｒｄＵ抗体を室温で２時間添加した。細胞を洗浄し、化学発光試薬を添加し、プレートをルミノメーターで読んだ。抗増殖アッセイで調べた場合、本発明の化合物の典型的なＩＣ５０値は０．０５−１０μＭの範囲であった。
【０１１６】
【表１】

Claims (45)

1. 式Ｉ：
   

   

   ［式中、Ｒ^１は（ＣＲ^４Ｒ^５）ｎＮＲ^２Ｒ^３）であり、
   ｎは１または２であり、
   Ｒ^２及びＲ^３はそれぞれ独立してＣ_１−６アルキル、Ｃ_１−６アルケニル、Ｃ_１−６アルコキシ−Ｃ_１−６アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、ベンジル、フェニル、ナフチル、ヘテロアリール、ヘテロアリール−Ｃ_１−６アルキルであるか、またはＲ^２及びＲ^３はそれらが結合している窒素原子と共に５若しくは６員のヘテロサイクリック環または５−７員のヘテロアリール環を形成し、これらの環は場合によって１個または２個の更なる酸素、硫黄、Ｓ（Ｏ）ｍ、または窒素原子を含み、該更なる窒素原子は場合によってＣ_１−６アルキルまたはアリール基によって置換されており、
   ｍは０、１、または２であり、
   Ｒ^４及びＲ^５はそれぞれ独立して水素またはＣ_１−６アルキルであり、そして
   上記Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_１−６アルケニル、Ｃ_１−６アルキル−Ｃ_１−６アルコキシ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、ベンジル、フェニル、ナフチル、ヘテロアリール及びヘテロアリール−Ｃ_１−６アルキル基は場合によって３個までのハロゲン、ヒドロキシル、ＣＦ_３及びＮ（ＣＨ_３）_２からなる群から選択される基で置換されている。］
   で示される化合物またはその塩、溶媒化合物、若しくは生理学的機能性誘導体。
2. Ｒ^２及びＲ^３がＣ_１−６アルキルである、請求項１に記載の化合物。
3. Ｒ^２がメチルであり、Ｒ^３がエチル、プロピル、イソプロピル、イソブチル、ヒドロキシエチル、メトキシエチル、ベンジル、及びメチルピペリジニルからなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
4. Ｒ^２及びＲ^３がそれらが結合する窒素と共に、窒素、Ｃ_１−６アルキル基で置換された窒素、Ｏ、またはＳ（Ｏ）ｍから選択される１または２個の更なるヘテロ原子を場合によって含有するヘテロサイクリック環を形成する、請求項１に記載の化合物。
5. 上記環がピペリジン、モルフォリンまたはピペラジン環であり、Ｒ^２及びＲ^３がピペラジン環を形成する場合にＮがメチル基で置換されている、請求項４に記載の化合物。
6. Ｒ^２及びＲ^３がそれらが結合する窒素と共に、窒素、Ｃ_１−６アルキル基で置換された窒素、Ｏ、またはＳ（Ｏ）ｍから選択される１または２個の更なるヘテロ原子を場合によって含有するヘテロアリール環を形成する、請求項１に記載の化合物。
7. 上記環がイミダゾール環である、請求項６に記載の化合物。
8. Ｒ^４及びＲ^５が独立して水素またはメチルである、請求項１に記載の化合物。
9. Ｒ^４及びＲ^５がそれぞれ水素である、請求項１に記載の化合物。
10. Ｒ^２及びＲ^３がそれぞれＣ_１−６アルキルであり、Ｒ^４及びＲ^５が独立して水素またはメチルである、請求項１に記載の化合物。
11. Ｒ^２がメチルであり、Ｒ^３がエチル、プロピル、イソプロピル、イソブチル、ヒドロキシエチル、メトキシエチル、ベンジル、またはメチルピペリジニルであり、Ｒ^４及びＲ^５がそれぞれ水素である、請求項１に記載の化合物。
12. Ｒ^２及びＲ^３がそれらが結合する窒素と共に、更なる窒素、またはＣ_１−６アルキルで置換された窒素、酸素、若しくはＳ（Ｏ）ｍを場合によって含有するヘテロサイクリック環を形成し、Ｒ^４及びＲ^５が独立して水素またはメチルである、請求項１に記載の化合物。
13. 上記環がピペリジン、モルフォリンまたはピペラジン環であり、Ｒ^４及びＲ^５が水素である、請求項１２に記載の化合物。
14. Ｒ^２及びＲ^３がそれらが結合する窒素と共にピペラジン環を形成し、更なる窒素がメチル基で置換され、Ｒ^４及びＲ^５が水素である、請求項１に記載の化合物。
15. Ｒ^２及びＲ^３がそれらが結合する窒素と共に、更なる窒素、またはＣ_１−６アルキルで置換された窒素、酸素、若しくはＳ（Ｏ）ｍを場合によって含有するヘテロアリール環を形成し、Ｒ^４及びＲ^５が独立して水素またはメチルである、請求項１に記載の化合物。
16. 上記環がイミダゾール環であり、Ｒ^４及びＲ^５が水素である、請求項１５に記載の化合物。
17. １−［（Ｚ）−（４−ジメチルアミノメチルアニリノ）メチリデン］−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，２−ｆ］キノリン−２−オン、
    １−［（Ｚ）−（４−ジエチルアミノメチルアニリノ）メチリデン］−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，２−ｆ］キノリン−２−オン、
    １−［（Ｚ）−（４−（Ｎ−メチル）エチルアミノメチルアニリノ）メチリデン］−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，２−ｆ］キノリン−２−オン、
    １−［（Ｚ）−（４−（Ｎ−メチル）プロピルアミノメチルアニリノ）メチリデン］−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，２−ｆ］キノリン−２−オン、
    １−［（Ｚ）−（４−（Ｎ−メチル）−２−プロピルアミノメチルアニリノ）メチリデン］−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，２−ｆ］キノリン−２−オン、
    １−［（Ｚ）−（４−（Ｎ−メチル）−２−メチルプロピルアミノメチルアニリノ）メチリデン］−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，２−ｆ］キノリン−２−オン、
    １−［（Ｚ）−（４−（Ｎ−メチル）ベンジルアミノメチルアニリノ）メチリデン］−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，２−ｆ］キノリン−２−オン、
    １−［（Ｚ）−（４−（Ｎ−メチル）−２−ヒドロキシエチルアミノメチルアニリノ）メチリデン］−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，２−ｆ］キノリン−２−オン、
    １−［（Ｚ）−（４−（Ｎ−メチル）−２−メトキシエチルアミノメチルアニリノ）メチリデン］−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，２−ｆ］キノリン−２−オン、
    １−［（Ｚ）−（４−（４−モルホリニル）メチルアニリノ）メチリデン］−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，２−ｆ］キノリン−２−オン、
    １−［（Ｚ）−（４−（１−ピペリジニル）メチルアニリノ）メチリデン］−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，２−ｆ］キノリン−２−オン、
    １−［（Ｚ）−（４−（４−ヒドロキシ−１−ピペリジニル）メチルアニリノ）メチリデン］−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，２−ｆ］キノリン−２−オン、
    １−［（Ｚ）−（４−（４−メチル−１−ピペラジニル）メチルアニリノ）メチリデン］−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，２−ｆ］キノリン−２−オン、
    １−［（Ｚ）−（４−（１−イミダゾイル）メチルアニリノ）メチリデン］−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，２−ｆ］キノリン−２−オン、
    １−［（Ｚ）−（４−（Ｎ−メチル）−（１−メチル−４−ピペリジニル）アミノメチルアニリノ）メチリデン］−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，２−ｆ］キノリン−２−オン、及び
    これらの塩、溶媒化合物、または生理学的機能性誘導体からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
18. 治療的有効量の請求項１〜１７のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩、溶媒化合物、若しくは生理学的機能性誘導体と、１種以上の製薬上許容し得る担体、希釈剤及び賦形剤を含有する医薬組成物。
19. 少なくとも１種の更なる抗新生物剤を更に含有する、請求項１８に記載の医薬組成物。
20. 増殖因子受容体機能を阻害する薬剤を更に含有する、請求項１８に記載の医薬組成物。
21. 哺乳動物における不適切なＣＤＫ４活性によって仲介される障害を治療する方法であって、該哺乳動物に治療的有効量の請求項１〜１７のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩、溶媒化合物、若しくは生理学的機能性誘導体を投与することを含む、上記方法。
22. 障害が癌である、請求項２１に記載の方法。
23. 治療に使用するための、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩、溶媒化合物、若しくは生理学的機能性誘導体。
24. 不適切なＣＤＫ４活性によって仲介される障害の治療に使用するための医薬の製造における、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩、溶媒化合物、若しくは生理学的機能性誘導体の使用。
25. 障害が癌である、請求項２４に記載の使用。
26. 哺乳動物における癌を治療する方法であって、治療的有効量の請求項１〜１７のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩、溶媒化合物、若しくは生理学的機能性誘導体を該哺乳動物に投与することを含む、上記方法。
27. 治療的有効量の少なくとも１種の更なる抗癌治療を行うことを更に含む、請求項２６に記載の方法。
28. 更なる抗癌治療を式Ｉの化合物、またはその塩、溶媒化合物、若しくは生理学的機能性誘導体の投与と同時に行う、請求項２７に記載の方法。
29. 更なる抗癌治療を式Ｉの化合物、またはその塩、溶媒化合物、若しくは生理学的機能性誘導体の投与の後に行う、請求項２７に記載の方法。
30. 更なる抗癌治療を式Ｉの化合物、またはその塩、溶媒化合物、若しくは生理学的機能性誘導体の投与の前に行う、請求項２７に記載の方法。
31. 哺乳動物における不適切なＣＤＫ４活性によって仲介される障害を治療する方法であって、該哺乳動物に治療的有効量の（ｉ）請求項１〜１７のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩、溶媒化合物、若しくは生理学的機能性誘導体、及び（ｉｉ）増殖因子受容体機能を阻害する薬剤、を投与することを含む、上記方法。
32. 増殖因子受容体機能を阻害する薬剤が血小板由来増殖因子受容体の機能を阻害する、請求項３１に記載の方法。
33. 増殖因子受容体機能を阻害する薬剤が上皮増殖因子受容体の機能を阻害する、請求項３１に記載の方法。
34. 増殖因子受容体機能を阻害する薬剤がｅｒｂＢ２受容体の機能を阻害する、請求項３１に記載の方法。
35. 増殖因子受容体機能を阻害する薬剤がＶＥＧＦ受容体の機能を阻害する、請求項３１に記載の方法。
36. 増殖因子受容体機能を阻害する薬剤がＴｉｅ−２受容体の機能を阻害する、請求項３１に記載の方法。
37. 増殖因子受容体機能を阻害する薬剤が上皮増殖因子受容体及びｅｒｂＢ２の機能を阻害する、請求項３１に記載の方法。
38. 増殖因子受容体機能を阻害する薬剤がＶＥＧＦ受容体及びＴＩＥ−２受容体の機能を阻害する、請求項３１に記載の方法。
39. 障害が癌である、請求項３１に記載の方法。
40. 哺乳動物における不適切なサイクリン依存性キナーゼ活性によって仲介される障害を治療する方法であって、該哺乳動物に治療的有効量の請求項１〜１７のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩、溶媒化合物、若しくは生理学的機能性誘導体を投与することを含む、上記方法。
41. 不適切なサイクリン依存性キナーゼ活性が少なくとも不適切なＣＤＫ２またはＣＤＫ４活性の何れか一方である、請求項４０に記載の方法。
42. 不適切なサイクリン依存性キナーゼ活性が不適切なＣＤＫ２及びＣＤＫ４活性である、請求項４０に記載の方法。
43. 治療的有効量のＣＤＫ２阻害剤を投与することを更に含む、請求項４０に記載の方法。
44. 障害が癌である、請求項４０に記載の方法。
45. 不適切なサイクリン依存性キナーゼ活性によって仲介される障害の治療に使用するための医薬の製造における、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩、溶媒化合物、若しくは生理学的機能性誘導体の使用。