JP2004256498A - ピロロカルバゾール誘導体 - Google Patents
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Abstract
【課題】細胞死関連タンパク質リン酸化酵素を阻害することにより、脳梗塞、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病等の細胞死を伴う疾患を予防及び／又は治療するために有用な医薬を提供する。
【解決手段】下記一般式（Ｉ）：
【化１】
（式中、Ｒ１〜Ｒ６はそれぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、ニトロ基、置換基を有していてもよい低級アルキル基、置換基を有していてもよい低級アルコキシ基、ヒドロキシ基、又は置換基を有していてもよいアミノ基を表し、Ｒ７は水素原子又は置換基を有していてもよい低級アルキル基を表し、ＸとＹは同時にカルボニル基を表すか、いずれか一方がカルボニル基で残りの一方がメチレン基を表す）で表されるピロロカルバゾール誘導体及びその塩、並びにそれらの溶媒和物及びそれらの水和物からなる群から選ばれる物質を有効成分として含む細胞死関連蛋白質リン酸化酵素の異常昂進に起因する疾患の予防及び／又は治療のための医薬。
【解決手段】下記一般式（Ｉ）：
【化１】
（式中、Ｒ１〜Ｒ６はそれぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、ニトロ基、置換基を有していてもよい低級アルキル基、置換基を有していてもよい低級アルコキシ基、ヒドロキシ基、又は置換基を有していてもよいアミノ基を表し、Ｒ７は水素原子又は置換基を有していてもよい低級アルキル基を表し、ＸとＹは同時にカルボニル基を表すか、いずれか一方がカルボニル基で残りの一方がメチレン基を表す）で表されるピロロカルバゾール誘導体及びその塩、並びにそれらの溶媒和物及びそれらの水和物からなる群から選ばれる物質を有効成分として含む細胞死関連蛋白質リン酸化酵素の異常昂進に起因する疾患の予防及び／又は治療のための医薬。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、細胞死関連蛋白質リン酸化酵素（Ｄｅａｔｈ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ、ＤＡＰキナーゼ；以下、ＤＡＰＫと略す）の異常昂進に起因する疾患の予防及び／又は治療に有用な医薬の発明に関するものである。また、本発明は、上記の医薬の有効成分として有用な新規ピロロカルバゾール誘導体に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
ＤＡＰＫはＫｉｍｃｈｉらによって見出された蛋白質リン酸化酵素（非特許文献１参照）であり、アポトーシス、ガン抑制に関連するプロテインキナーゼとして知られている（非特許文献２、非特許文献３参照）。ＤＡＰＫは、ｍＲＮＡがラットの胎児期から幼弱期にかけては広く脳内に分布しているのに対し、成熟ラットでは海馬のみに多く分布していることから、神経系のアポトーシスに関与していることが示唆されている（非特許文献４参照）。また、ＤＡＰＫをノックアウトしたマウスがグルタミン酸による神経細胞死に対して抵抗性を示すこと、ＤＡＰＫをノックアウトしたマウスの海馬の細胞がセラミドによる神経細胞死に対して抵抗性を示すこと等、神経細胞死との関連も指摘されている（非特許文献５〜７参照）。以上のことからＤＡＰＫを阻害する化合物は、細胞死を阻止する作用により、脳梗塞、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病等の細胞死を伴う疾患の進行を阻止あるいは遅らせることができる可能性がある。ＤＡＰＫを阻害する化合物としては、すでにＷａｔｔｅｒｓｏｎらによりフェニルピリダジン誘導体が報告されている（非特許文献７参照）が、その阻害能は充分なものとはいえない。
【０００３】
【非特許文献１】Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ． ｖｏｌ．９， ｐａｇｅ１５−３０（１９９５）
【非特許文献２】Ｎａｔｕｒｅ ３９０， １８０−１８４（１９９７）
【非特許文献３】Ｎａｔｕｒｅ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．３，１−７（２００１）
【非特許文献４】Ｊ． Ｎｅｕｒｏｓｃｉ． Ｒｅｓ．５８， ６７４−６８３（１９９９）
【非特許文献５】Ｅｕｒ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１６， ５５７−５６４（２００２）
【非特許文献６】Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７（３）， １９５７−１９６１（２００２）
【非特許文献７】Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ＆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ９３， ２１７−２２４（２００２）
【非特許文献８】Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ ３４（５１）， ８３６１−８３６４（１９９３）
【非特許文献９】Ｂｉｏｏｒｇ． Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ． ５（１）， ５５−６０（１９９５）
【非特許文献１０】Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１８（１２）， ２８２５−２８４２（１９９６）
【特許文献１】特開平２−１４２７９１号公報
【特許文献２】特開平８−５９６６６号公報
【特許文献３】特開平４−１７８３８７号公報
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の課題は、細胞死を伴う疾患の予防及び／又は治療に有用な医薬を提供することにある。より詳細には、脳梗塞、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病等の細胞死を伴う疾患においてＤＡＰＫ活性を阻害することにより細胞死を阻止することにより、これらの疾患に対して根本的な予防及び／又は治療を可能にする医薬を提供することにある。また、本発明の別の課題は、上記の特徴を有する医薬の有効成分として有用な新規化合物を提供することにある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは上記課題を解決すべく、ＤＡＰＫのリン酸化能に対する阻害作用を有する各種化合物をスクリーニングした。その結果、下記の一般式（Ｉ）で表される化合物が所望の作用を有しており、上記の疾患の予防及び／又は治療のための医薬の有効成分として有用であること見出した。本発明はこれらの知見を基にして完成されたものである。
【０００６】
すなわち本発明は、下記一般式（Ｉ）：
【０００７】
【化３】
【０００８】
（式中、Ｒ１〜Ｒ６はそれぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、ニトロ基、置換基を有していてもよい低級アルキル基、置換基を有していてもよい低級アルコキシ基、ヒドロキシ基、又は置換基を有していてもよいアミノ基を表し、Ｒ７は水素原子又は置換基を有していてもよい低級アルキル基を表し、ＸとＹは同時にカルボニル基を表すか、いずれか一方がカルボニル基で残りの一方がメチレン基を表す）で表されるピロロカルバゾール誘導体及びその塩、並びにそれらの溶媒和物及びそれらの水和物からなる群から選ばれる物質を有効成分として含むＤＡＰＫの異常昂進に起因する疾患の予防及び／又は治療のための医薬を提供するものである。
【０００９】
上記発明の好ましい態様によれば、細胞死を伴う疾患に対する医薬、また、該細胞死を伴う疾患が脳梗塞、アルツハイマー病、パーキンソン病またはハンチントン舞踏病である医薬が提供される。また、有効成分である上記の物質と１又は２以上の製剤用添加物とを含む医薬組成物の形態の医薬が好ましい態様として提供される。さらに、上記式（Ｉ）で表されるピロロカルバゾール誘導体及びその塩、並びにそれらの溶媒和物及びそれらの水和物からなる群から選ばれる物質を有効成分として含むＤＡＰＫ阻害剤が本発明により提供される。
【００１０】
別の観点からは、本発明により、ＤＡＰＫの異常昂進に起因する疾患の予防及び／又は治療方法であって、上記式（Ｉ）で表わされるピロロカルバゾール誘導体及び生理学的に許容されるその塩、並びにそれらの溶媒和物及びそれらの水和物からなる群から選ばれる物質の予防及び／又は治療有効量を患者に投与する工程を含む方法；及び、上記医薬の製造のための上記式（Ｉ）で表わされるピロロカルバゾール誘導体及び生理学的に許容されるその塩、並びにそれらの溶媒和物及びそれらの水和物からなる群から選ばれる物質の使用が提供される。
【００１１】
さらに別の観点からは、本発明により、上記式（Ｉ）（式中、Ｒ１〜Ｒ６はそれぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、ニトロ基、置換基を有していてもよい低級アルキル基、置換基を有していてもよい低級アルコキシ基、ヒドロキシ基、又は置換基を有していてもよいアミノ基を表し、Ｒ７は水素原子又は置換基を有していてもよい低級アルキル基を表し、ＸとＹは同時にカルボニル基を表すか、いずれか一方がカルボニル基で残りの一方がメチレン基を表す。ただし、ＸとＹが同時にカルボニル基であって、Ｒ１がエトキシ基であり、Ｒ４がベンジルオキシ基であり、かつＲ７が水素原子である場合を除く）で表されるピロロカルバゾール誘導体若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物若しくはそれらの水和物が提供される。また、これらの新規物質を含む医薬が本発明により提供される。
【００１２】
なお、上記一般式（Ｉ）の類似化合物として、ＸとＹがカルボニル基であり、Ｒ２が置換基を有していてもよいフェニル基（特許文献１参照）及びＲ２がヘテロアリール基（特許文献２参照）である化合物が知られており、これらの化合物がプロテインキナーゼＣを阻害することは公知である。また、上記一般式（Ｉ）においてＸとＹがカルボニル基である場合においてイミド部分がアルキル化された化合物、及びＲ１がエトキシ基であり、Ｒ４がベンジルオキシ基であり、かつＲ７が水素原子である化合物（特許文献３）が知られている。しかしながら、これらの化合物がＤＡＰＫに対して阻害活性を有するかどうかは従来全く知られていない。
【００１３】
【発明の実施の形態】
上記一般式（Ｉ）において、ＸとＹは同時にカルボニル基でも、一方がカルボニル基でもう一方がメチレン基であってもよい。Ｒ１〜Ｒ６は同一でも異なっていてもよく、それぞれ独立に水素原子、ハロゲン原子、ニトロ基、置換基を有していてもよい低級アルキル基、置換基を有していてもよい低級アルコキシ基、ヒドロキシ基、又は置換基を有していてもよいアミノ基を表す。Ｒ７は水素原子又は置換基を有していてもよい低級アルキル基を表す。本明細書において、ハロゲン原子という場合にはフッ素原子、塩素原子、臭素原子、又はヨウ素原子のいずれでもよい。本明細書において、アルキル基又はアルキル部分を含む置換基（例えばアルコキシ基）におけるアルキル部分は直鎖状、分枝鎖状、環状、又はそれらの組み合わせのいずれでもよく、アルキル基又はアルキル部分について低級という場合には、例えば炭素数１ないし６個、好ましくは炭素数１ないし５個、より好ましくは炭素数１ないし４個程度であることを意味する。
【００１４】
例えば、低級アルキル基としては、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｎ−ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基などを挙げることができ、低級アルコキシ基としては、メトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、イソプロポキシ基、ｎ−ブトキシ基、ｎ−ペントキシ基、イソペントキシ基、ネオペントキシ基などを挙げることができる。本明細書においてある官能基について「置換基を有していてもよい」と言う場合には、その置換基の個数又は種類は特に限定されない。
【００１５】
アルキル基又はアルコキシ基が置換基を有する場合には、置換基として、例えば、ハロゲン原子；メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、イソプロポキシ基、ブトキシ基、ｔｅｒｔ− ブトキシ基、ペンチルオキシ基、イソペンチルオキシ基、シクロペンチルオキシ基等のＣ１〜Ｃ５のアルコキシ基；メチレンジオキシ基；ヒドロキシ基；アセトキシ基、プロピオニルオキシ基、ブチリルオキシ基、バレリルオキシ基等のＣ２〜Ｃ６のアルキルカルボニルオキシ基；カルボキシル基；メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、プロポキシカルボニル基、イソプロポキシカルボニル基、ブトキシカルボニル基、イソブトキシカルボニル基、ｔｅｒｔ− ブトキシカルボニル基、ペンチルオキシカルボニル基等のＣ２〜Ｃ６のアルコキシカルボニル基；アセチル基、プロピオニル基、ブチリル基、バレリル基等のＣ２〜Ｃ６のアルキルカルボニル基；アミノ基；メチルアミノ基、エチルアミノ基、プロピルアミノ基、イソプロピルアミノ基、ブチルアミノ基、イソブチルアミノ基、ｔｅｒｔ−ブチルアミノ基、ペンチルアミノ基、イソペンチルアミノ基等のＣ１〜Ｃ５のモノアルキルアミノ基；ジメチルアミノ基、エチルメチルアミノ基、ジエチルアミノ基、メチルプロピルアミノ基、ジイソプロピルアミノ基等のＣ２〜Ｃ１０のジアルキルアミノ基；ピロリジル基；ピペリジル基；モルホリル基；アセチルアミノ基、プロピオニルアミノ基、イソプロピオニルアミノ基、ブチリルアミノ基、バレリルアミノ基等のＣ２〜Ｃ６のアルキルカルボニルアミノ基；メタンスルホニルアミノ基、エタンスルホニルアミノ基等のＣ１〜Ｃ６アルキルスルホニルアミノ基；ベンゼンスルホニルアミノ基、ｐ−トルエンスルホニルアミノ基等のアリールスルホニルアミノ基；カルバモイル基；メチルカルバモイル基、エチルカルバモイル基、プロピルカルバモイル基、ブチルカルバモイル基、ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル基、ペンチルカルバモイル基等のＣ２〜Ｃ６のアルキルカルバモイル基；ジメチルカルバモイル基、ジエチルカルバモイル基、ジプロピルカルバモイル基、ジイソプロピルカルバモイル基、ジブチルカルバモイル基、ジペンチルカルバモイル基等のＣ３〜Ｃ９のジアルキルカルバモイル基；ニトロ基；ニトリル基；フェニル基、ナフチル基などのＣ６〜Ｃ１４のアリール基；フェノキシ基、ナフチルオキシ基などのＣ６〜Ｃ１４のアリールオキシ基；ベンゾイルオキシ基、ナフトイルオキシ基などのＣ６〜Ｃ１４のアリールカルボニルオキシ基；フェニルチオ基；フェニルスルホニル基；ベンジルオキシ基、フェネチルオキシ基などのＣ６〜Ｃ１４のアラルキルオキシ基などを挙げることができる（これらの置換基を置換基群Ａと呼ぶ）。
【００１６】
上記置換基群Ａのうち、アリール基はさらにメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ− ブチル基、シクロブチル基、ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、ｔｅｒｔ− ペンチル基、シクロペンチル基などのＣ１〜Ｃ５の低級アルキル基、トリフルオロメチル基、又は上記置換基群Ａから選ばれる１以上の置換基で置換されていてもよい。置換基を有するアルキル基又は置換基を有するアルコキシ基には、これらの置換基群Ａから選ばれる１又は２以上の置換基を有していることが好ましく、２以上の置換基を有する場合には、それらは同一でも異なっていてもよい。Ｒ７で定義されるアルキル基は、上記置換基群Ａのほか、１又は２以上のアミジノチオ基で置換されていてもよい。
【００１７】
アミノ基が置換基を有する場合の例としては、メチルアミノ基、エチルアミノ基、プロピルアミノ基、イソプロピルアミノ基、ブチルアミノ基、イソブチルアミノ基、ｔｅｒｔ− ブチルアミノ基、ペンチルアミノ基、イソペンチルアミノ基等のＣ１〜Ｃ５のモノアルキルアミノ基；ジメチルアミノ基、エチルメチルアミノ基、ジエチルアミノ基、メチルプロピルアミノ基、ジイソプロピルアミノ基等のＣ２〜Ｃ１０のジアルキルアミノ基；アセチルアミノ基、プロピオニルアミノ基、イソプロピオニルアミノ基、ブチリルアミノ基、バレリルアミノ基等のＣ２〜Ｃ６のアルキルカルボニルアミノ基；メタンスルホニルアミノ基、エタンスルホニルアミノ基等のＣ１〜Ｃ６アルキルスルホニルアミノ基；ベンゼンスルホニルアミノ基、ｐ−トルエンスルホニルアミノ基等のアリールスルホニルアミノ基などを挙げることができる。
【００１８】
本発明の医薬の有効成分としては、上記一般式（Ｉ）で表される化合物のほか、生理学的に許容されるその塩を用いてもよい。塩の具体例としては、酸性基が存在する場合には、リチウム、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム等のアルカリ金属及びアルカリ土類金属塩；アンモニア、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、ジシクロヘキシルアミン、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン、Ｎ，Ｎ−ビス（ヒドロキシエチル）ピペラジン、２−アミノ−２−メチル−１−プロパノール、エタノールアミン、Ｎ−メチルグルカミン、Ｌ−グルカミン等のアミンの塩；又はリジン、δ− ヒドロキシリジン、アルギニンなどの塩基性アミノ酸との塩を形成することができる。塩基性基が存在する場合には、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等の鉱酸の塩；メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、パラトルエンスルホン酸、酢酸、プロピオン酸塩、酒石酸、フマル酸、マレイン酸、リンゴ酸、シュウ酸、コハク酸、クエン酸、安息香酸、マンデル酸、ケイ皮酸、乳酸、グリコール酸、グルクロン酸、アスコルビン酸、ニコチン酸、サリチル酸等の有機酸との塩；又はアスパラギン酸、グルタミン酸などの酸性アミノ酸との塩を形成することができる。
【００１９】
また、本発明の医薬の有効成分としては、上記一般式（Ｉ）で表されるピロロカルバゾール誘導体又は生理学的に許容されるその塩の溶媒和物又は水和物を用いてもよい。さらに、上記一般式（Ｉ）で表されるピロロカルバゾール誘導体は１個又は２個以上の不斉炭素を有する場合があるが、不斉炭素の立体化学についてはそれぞれ独立して（Ｒ）体又は（Ｓ）体のいずれかをとることができ、該ピロロカルバゾール誘導体は光学異性体又はジアステレオ異性体などの立体異性体として存在することがある。本発明の医薬の有効成分としては、純粋な形態の任意の立体異性体、立体異性体の任意の混合物、ラセミ体などを用いることが可能である。
【００２０】
本発明の医薬の有効成分として好適な化合物の例を以下の表に示す。表中、化合物１〜７０は、ＸとＹが両方ともカルボニル基であり、かつＲ１〜Ｒ６がすべて水素原子である場合；化合物７１〜１４０は、ＸとＹが両方ともカルボニル基であり、Ｒ１及びＲ３〜Ｒ６が水素原子であり、かつＲ２がメチル基である場合；化合物１４１〜２１０はＸとＹが両方ともカルボニル基であり、Ｒ１〜Ｒ３、Ｒ５及びＲ６が水素原子であり、かつＲ４が塩素原子である場合；化合物２１１〜２８０は、ＸとＹが両方ともカルボニル基であり、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６が水素原子であり、Ｒ２がメチル基であり、かつＲ４が塩素原子である場合；化合物２８１〜３５０はＸとＹが両方ともカルボニル基であり、Ｒ１〜Ｒ３、Ｒ５及びＲ６が水素原子であり、かつＲ４がメチル基である場合；化合物３５１〜４２０は、ＸとＹが両方ともカルボニル基であり、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６が水素原子であり、かつＲ２及びＲ４がメチル基である場合；化合物４２１〜４９０は、Ｘがカルボニル基であり、Ｙがメチレン基であり、かつＲ１〜Ｒ６がすべて水素原子である場合；化合物４９１〜５６０は、Ｘがメチレン基であり、Ｙがカルボニル基であり、かつＲ１〜Ｒ６がすべて水素原子である場合；化合物５６１〜６３０は、Ｘがカルボニル基であり、Ｙがメチレン基であり、Ｒ１〜Ｒ３、Ｒ５及びＲ６が水素原子であり、かつＲ４がメチル基である場合；化合物６３１から７００は、Ｘがメチレン基であり、Ｙがカルボニル基であり、Ｒ１〜Ｒ３、Ｒ５及びＲ６が水素原子であり、Ｒ４がメチル基である場合；化合物７０１〜７７０は、Ｘがカルボニル基であり、Ｙがメチレン基であり、Ｒ１及びＲ３〜Ｒ６が水素原子であり、かつＲ２がメチル基である場合；化合物７７１〜８４０は、Ｘがメチレン基であり、Ｙがカルボニル基であり、Ｒ１及びＲ３〜Ｒ６が水素原子であり、かつＲ２がメチル基である場合；化合物８４１〜９１０は、Ｘがカルボニル基であり、Ｙがメチレン基であり、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６が水素原子であり、かつＲ２及びＲ４がメチル基である場合；化合物９１１〜９８０は、Ｘがメチレン基であり、Ｙがカルボニル基であり、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６が水素原子であり、かつＲ２及びＲ４がメチル基である場合に相当する。また、表中で、Ｍｅはメチル基、Ｅｔはエチル基、Ａｃはアセチル基を表す。
【００２１】
【表１】
【００２２】
【表２】
【００２３】
【表３】
【００２４】
【表４】
【００２５】
【表５】
【００２６】
【表６】
【００２７】
【表７】
【００２８】
【表８】
【００２９】
【表９】
【００３０】
【表１０】
【００３１】
【表１１】
【００３２】
【表１２】
【００３３】
【表１３】
【００３４】
【表１４】
【００３５】
【表１５】
【００３６】
【表１６】
【００３７】
【表１７】
【００３８】
【表１８】
【００３９】
【表１９】
【００４０】
【表２０】
【００４１】
【表２１】
【００４２】
【表２２】
【００４３】
【表２３】
【００４４】
【表２４】
【００４５】
【表２５】
【００４６】
【表２６】
【００４７】
【表２７】
【００４８】
【表２８】
【００４９】
【表２９】
【００５０】
【表３０】
【００５１】
【表３１】
【００５２】
【表３２】
【００５３】
【表３３】
【００５４】
【表３４】
【００５５】
【表３５】
【００５６】
【表３６】
【００５７】
【表３７】
【００５８】
【表３８】
【００５９】
【表３９】
【００６０】
【表４０】
【００６１】
【表４１】
【００６２】
【表４２】
【００６３】
【表４３】
【００６４】
【表４４】
【００６５】
【表４５】
【００６６】
【表４６】
【００６７】
【表４７】
【００６８】
【表４８】
【００６９】
【表４９】
【００７０】
【表５０】
【００７１】
【表５１】
【００７２】
【表５２】
【００７３】
【表５３】
【００７４】
【表５４】
【００７５】
【表５５】
【００７６】
【表５６】
【００７７】
本発明の医薬の有効成分に特に好適な化合物として、
（１）ＸとＹが同時にカルボニル基であり、Ｒ１が水素原子であり、Ｒ２〜Ｒ６がそれぞれ独立に水素原子、ハロゲン原子、ニトロ基、置換基を有していてもよい低級アルキル基、置換基を有していてもよい低級アルコキシ基、ヒドロキシ基、又は置換基を有していてもよいアミノ基であり、Ｒ７が水素原子又は置換基を有していてもよい低級アルキル基である化合物；
（２）ＸとＹが同時にカルボニル基であり、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、及びＲ６が水素原子であり、Ｒ２が水素原子又は置換基を有していてもよい低級アルキル基であり、Ｒ４が水素原子、ハロゲン原子、又は置換基を有していてもよい低級アルキル基であり、Ｒ７が置換基を有するアルキル基である化合物；
（３）ＸとＹが同時にカルボニル基であり、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、及びＲ６が水素原子であり、Ｒ２が水素原子又は置換基を有していてもよい低級アルキル基であり、Ｒ４が水素原子、ハロゲン原子、又は置換基を有していてもよい低級アルキル基であり、Ｒ７が置換基を有するプロピル基又は置換基を有するブチル基である化合物；
（４）ＸとＹが同時にカルボニル基であり、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、及びＲ６が水素原子であり、Ｒ２が水素原子又はメチル基であり、Ｒ４が水素原子、塩素原子、又はメチル基であり、Ｒ７が置換基を有するプロピル基又は置換基を有するブチル基である化合物；
（５）ＸとＹのいずれか一方がカルボニル基でもう一方がメチレン基であり、Ｒ１が水素原子であり、Ｒ２〜Ｒ６がそれぞれ独立に水素原子、ハロゲン原子、ニトロ基、置換基を有していてもよい低級アルキル基、置換基を有していてもよい低級アルコキシ基、ヒドロキシ基、又は置換基を有していてもよいアミノ基であり、Ｒ７が水素原子又は置換基を有していてもよい低級アルキル基である化合物；
（６）ＸとＹのいずれか一方がカルボニル基でありもう一方がメチレン基であり、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、及びＲ６が水素原子であり、Ｒ２が水素原子又は置換基を有していてもよい低級アルキル基であり、Ｒ４が水素原子、ハロゲン原子、又は置換基を有していてもよい低級アルキル基であり、Ｒ７が置換基を有するアルキル基である化合物；
（７）ＸとＹのいずれか一方がカルボニル基でもう一方がメチレン基であり、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、及びＲ６が水素原子であり、Ｒ２が水素原子又は置換基を有していてもよい低級アルキル基であり、Ｒ４が水素原子、ハロゲン原子、又は置換基を有していてもよい低級アルキル基であり、Ｒ７が置換基を有するプロピル基又は置換基を有するブチル基である化合物；
（８）ＸとＹのいずれか一方がカルボニル基でもう一方がメチレン基であり、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、及びＲ６が水素原子であり、Ｒ２が水素原子又はメチル基であり、Ｒ４が水素原子、塩素原子、又はメチル基であり、Ｒ７が置換基を有するプロピル基又は置換基を有するブチル基である化合物；
（９）上記（１）〜（８）に記載の化合物のうち、Ｒ７の置換基が、ヒドロキシル基、アミノ基、置換基を有するアミノ基及びアミジノチオ基から選ばれる置換基である化合物
を挙げることができる。もっとも、本発明の医薬の有効成分は上記に具体的に示した化合物に限定されることはない。
【００７８】
上記一般式（Ｉ）で表されるピロロカルバゾール誘導体のうち、ＸとＹが両方カルボニル基である化合物（Ｉ−ａ）：
【００７９】
【化４】
（Ｒ１〜Ｒ７は、上記定義のとおりである）
は、例えば、下記に説明する方法に従って製造することができる。
＜工程１＞
【００８０】
【化５】
（スキーム中、Ｒ１〜Ｒ６は上記定義のとおりである。）
【００８１】
特許文献３に記載の方法と同様の方法で得られる一般式（ＩＩ）で表される化合物を溶媒存在下又は不存在下、アセチレンジカルボン酸ジメチルエステルを作用させることによって上記一般式（ＩＩＩ）の化合物を得ることができる。溶媒としては、反応に悪影響を及ぼさない限り特に限定されないが、例えば、塩化メチレン、クロロホルムなどのハロゲン化炭化水素類；トルエン、キシレンなどの芳香族炭化水素類；ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサンなどのエーテル類；アセトニトリル、プロピオニトリルなどのニトリル類；酢酸メチル、酢酸エチルなどのエステル類；Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチルピロリドンなどのアミド類、メタノール、エタノールなどのアルコール溶媒などを挙げることができ、これら溶媒を１種又は２種以上混合してもよい。反応温度及び反応時間は特に限定されないが、通常、５０℃〜２００℃で、３０分から２４時間実施すればよい。
＜工程２＞
【００８２】
【化６】
（スキーム中、Ｒ１〜Ｒ６は上記定義のとおりである。）
【００８３】
工程１で得られた化合物（ＩＩＩ）を酸化（脱水素反応）することによって上記一般式（ＩＶ）の化合物を得ることができる。この酸化反応は５％又は１０％のＰｄＣｌ２ ／Ｃ、２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−ｐ−ベンゾキノン又は２，３，５，６−テトラクロロ−ｐ−ベンゾキノンなどの脱水素化剤を用いて行うことができる。反応温度及び反応時間は特に限定されないが、５％又は１０％のＰｄＣｌ２ ／Ｃを用いる場合は、シメン、デカリン、クメン、ブチルベンゼン又はジフェニルエーテルなどの溶媒を一種又は二種以上混合して使用し、通常、１５０℃〜２６０℃で１０分〜２４時間実施することができる。また、２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−ｐ−ベンゾキノン又は２，３，５，６−テトラクロロ−ｐ−ベンゾキノンを用いる場合には、ベンゼン、トルエン、キシレン、クメン、クロロベンゼン、ｔｅｒｔ−ブチルベンゼン及びジクロロベンゼンなどの芳香族炭化水素類、塩化メチレン、クロロホルムなどのハロゲン化炭化水素類、酢酸などの有機酸又はｔｅｒｔ−ブチルアルコールなどのアルコール類などの溶媒を一種又は二種以上混合して使用し、通常０℃〜１８０℃で１０分〜２４時間実施すればよい。
＜工程３＞
【００８４】
【化７】
（スキーム中、Ｒ１〜Ｒ７は上記定義のとおりである。）
【００８５】
工程２で得られた化合物（ＩＶ）を溶媒存在下、塩基と上記一般式（Ｖ）で表されるアルキル化剤を作用させることによって上記一般式（ＶＩ）の化合物を得ることができる。溶媒としては、反応に悪影響を及ぼさない限り特に限定されないが、例えば、トルエン、キシレンなどの芳香族炭化水素類；ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサンなどのエーテル類；アセトニトリル、プロピオニトリルなどのニトリル類；Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチルピロリドンなどのアミド類などを挙げることができ、これら溶媒を１種又は２種以上混合してもよい。塩基としては、トリメチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、ジエチルイソプロピルアミン、ピリジン、２，６−ルチジン、２，４，６−コリジン、１，８−ジアザビシクロ（５．４．０）−７−ウンデセンなどの有機塩基、ナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、カリウム−ｔｅｒｔ−ブトキシドなどの金属アルコキシド、水素化ナトリウム、水素化カリウムなどの無機塩基を挙げることができる。一般式（Ｖ）で表されるアルキル化剤としては、アルキルハライド、アルキルメシレート、アルキルトシレート、アルキルトリフレートなどを挙げることができる。反応温度及び反応時間は特に限定されないが、通常、０℃〜１５０℃で、３０分から２４時間実施すればよい。
＜工程４＞
【００８６】
【化８】
（スキーム中、Ｒ１〜Ｒ７は上記定義のとおりである。）
【００８７】
工程３で得られた化合物（ＶＩ）を溶媒存在下、アルカリ加水分解又は酸加水分解することによって上記一般式（ＶＩＩ）の化合物を得ることができる。溶媒としては、反応に悪影響を及ぼさない限り特に限定されないが、例えば、トルエン、キシレンなどの芳香族炭化水素類；ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサンなどのエーテル類；メタノール、エタノールなどのアルコール類などを挙げることができ、これら溶媒を１種又は２種以上混合してもよい。アルカリとしては、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムなどを挙げることができ、この反応で使用される酸としては、塩酸、臭素酸、硫酸、リン酸などを挙げることができる。反応温度及び反応時間は特に限定されないが、通常、０℃〜１５０℃で、３０分から７２時間実施すればよい。
＜工程５＞
【００８８】
【化９】
（スキーム中、Ｒ１〜Ｒ７は上記定義のとおりである。）
【００８９】
工程４で得られた化合物（ＶＩＩ）を無水酢酸中で加熱することにより、上記一般式（ＶＩＩＩ）の化合物を得ることができる。反応温度及び反応時間は特に限定されないが、通常、５０℃〜１１０℃で、３０分から２４時間実施すればよい。
＜工程６＞
【００９０】
【化１０】
（スキーム中、Ｒ１〜Ｒ７は上記定義のとおりである。）
【００９１】
工程５で得られた化合物（ＶＩＩＩ）を溶媒存在下、１，１，１，３，３，３−ヘキサメチルジシラザンとメタノールを作用させるか、又は溶媒存在下、アンモニア、酢酸アンモニウムなどを作用させることによって、上記一般式（Ｉ−ａ）の化合物を得ることができる。溶媒は、反応に悪影響を及ぼさない限り特に限定されないが、例えば工程１で説明したものと同様の溶媒を用いることができる。反応温度及び反応時間は特に限定されないが、通常、０℃〜１５０℃で、３０分から２４時間実施すればよい。
【００９２】
上記の式（Ｉ）で表されるピロロカルバゾール誘導体のうち、ＸとＹのいずれか一方がカルボニル基でもう一方がメチレン基である化合物（Ｉ−ｂ）、（Ｉ−ｂ’）は、例えば、下記に説明する方法に従って製造することができる。
＜工程７＞
【００９３】
【化１１】
【００９４】
（スキーム中、Ｒ１〜Ｒ７は上記定義のとおりである）
製造法６で得られた化合物（Ｉ−ａ）を文献記載のイミド化合物の還元方法（例えば、非特許文献８、非特許文献９、非特許文献１０参照）で還元することによって、上記一般式（Ｉ−ｂ）、（Ｉ−ｂ’）を得ることができる。これら（Ｉ−ｂ）、（Ｉ−ｂ’）で表される化合物が混合物として得られた場合は、たとえば、再結晶やクロマトグラフィー等の方法で分離することができる。
【００９５】
本発明の医薬はＤＡＰＫに対する阻害活性を有しており、脳梗塞、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病等の細胞死を伴う疾患において、細胞死を阻止する作用を有している。従って、本発明の医薬は、脳梗塞、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病等の細胞死を伴う疾患に対して根本的な予防及び／又は治療を可能にする医薬として有用である。
【００９６】
本発明の医薬の有効成分としては、上記一般式（Ｉ）で表される化合物及び生理学的に許容されるその塩、並びにそれらの溶媒和物及びそれらの水和物からなる群から選ばれる物質を用いることができる。本発明の医薬としては、有効成分である上記の物質自体を投与してもよいが、一般的には、有効成分である上記の物質と１又は２以上の製剤用添加物とを含む医薬組成物の形態で投与することが望ましい。本発明の医薬の有効成分としては、上記の物質の２種以上を組み合わせて用いることができ、上記医薬組成物には、脳梗塞、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病等の細胞死を伴う疾患に対する他の医薬の有効成分を配合することも可能である。
【００９７】
医薬組成物の種類は特に限定されず、経口投与用又は非経口投与用の任意の製剤形態と提供される。例えば、顆粒剤、細粒剤、散剤、硬カプセル剤、軟カプセル剤、シロップ剤、乳剤、懸濁剤又は液剤等の形態の経口投与用医薬組成物、静脈内投与用、筋肉内投与用、若しくは皮下投与用などの注射剤、点滴剤、経皮吸収剤、経粘膜吸収剤、点鼻剤、吸入剤、坐剤などの形態の非経口投与用医薬組成物として調製することができる。注射剤や点滴剤などは、凍結乾燥形態などの粉末状の剤形として調製し、用時に生理食塩水などの適宜の水性媒体に溶解して用いることもできる。また、高分子などで被覆した徐放製剤を脳内に直接投与することも可能である。
【００９８】
医薬組成物の製造に用いられる製剤用添加物の種類、有効成分に対する製剤用添加物の割合、又は医薬組成物の製造方法は、組成物の形態に応じて当業者が適宜選択することが可能である。製剤用添加物としては無機又は有機物質、あるいは固体又は液体の物質を用いることができ、一般的には、有効成分重量に対して１重量％から９０重量％の間で配合することができる。
【００９９】
固体の医薬組成物を製造する際に用いられる賦形剤としては、例えば、乳糖、蔗糖、デンプン、タルク、セルロース、デキストリン、カオリン、炭酸カルシウム等を挙げることができる。経口投与のための液体組成物の製造には、一般的に用いられる不活性な希釈剤、例えば水又は植物油等を用いることができる。この液体組成物には、不活性な希釈剤以外に、補助剤、例えば湿潤剤、懸濁補助剤、甘味剤、芳香剤、着色剤又は保存剤等などを配合してもよい。液体組成物をゼラチンのような吸収されうる物質のカプセル中に含ませてもよい。非経口投与用の組成物、すなわち注射剤、座剤等の製造に用いられる溶剤又は懸濁剤としては、例えば水、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ベンジルアルコール、オレイン酸エチル、レシチン等を挙げることができる。座剤に用いられる基剤としては、例えばカカオ脂、乳化カカオ脂、ラウリン脂、ウィテップゾール等を挙げることができる。
【０１００】
本発明の医薬の投与量及び投与回数は特に限定されず、予防及び／又は治療の目的、疾患の種類、患者の体重や年齢、疾患の重篤度などの条件に応じて、適宜選択することが可能である。一般的には、経口投与における成人一日あたりの投与量は０．０１〜１０００ｍｇ（有効成分重量）程度であり、一日１回又は数回に分けて、あるいは数日ごとに投与することができる。注射剤として用いる場合には、成人に対して一日量０．００１〜１００ｍｇ（有効成分重量）を連続投与又は間欠投与することが望ましい。
【０１０１】
なお、上記式（Ｉ）（式中、ＸとＹがカルボニル基であり、Ｒ１〜Ｒ７は上記定義のとおりであり、ただし、Ｒ１がエトキシ基であり、Ｒ４がベンジルオキシ基であり、かつＲ７が水素原子である場合を除く）で表されるピロロカルバゾール誘導体若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物若しくはそれらの水和物は新規物質であり、物質発明に係る本発明の範囲に包含される。本発明により提供されるこの新規物質の用途は、医薬に限定されることはなく、いかなる用途に用いた場合にも本発明の範囲に包含されることは言うまでもない。また、上記に説明したように、この化合物は光学異性体又はジアステレオ異性体などの立体異性体として存在することがあるが、純粋な形態の任意の立体異性体、立体異性体の任意の混合物、ラセミ体などはいずれも本発明の範囲に包含される。塩の形態の物質の例としては、上記に説明した生理学的に許容される塩を挙げることができる。
【０１０２】
【実施例】
以下、本発明を実施例によりさらに具体的に説明するが、本発明の範囲は下記の実施例に限定されることはない。
【０１０３】
参考例１：ジメチル１，２−ジヒドロカルバゾール−３，４−ジカルボキシレートの製造
特許文献３等と同様の方法で得られる２−アリルインドール２．２８ｇを１００ｍｌのトルエンに溶解し、２．５ｇのアセチレンジカルボン酸ジメチルエステルを加え、２４時間加熱還流した。反応液を０℃まで冷却した後、ヘキサンを加えて濾過し、目的物２．５０ｇを得た。
収率：５５％
融点：２２０−２２２℃
ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３ ，δ）：２．８３−２．８８（ｍ，４Ｈ），３．７９（ｓ，３Ｈ），４．０３（ｓ，３Ｈ），７．０９−７．４７（ｍ，４Ｈ），８．４９（ｂｒ，１Ｈ）．
【０１０４】
参考例２：ジメチルカルバゾール−３，４−ジカルボキシレートの製造
参考例１で得られたジメチル１，２−ジヒドロカルバゾール−３，４−ジカルボキシレート１．７８ｇにブチルベンゼン１０ｍｌを加え、１６０℃にて溶解させ、１０％ＰｄＣｌ２ ／Ｃ １．７８ｇを加え１時間攪拌した。反応液をグラスフィルターにて濾過、ＴＨＦにて洗浄後、減圧濃縮した。得られた残渣を、クロロホルム／酢酸エチル＝１５／１にてカラム精製し、目的物１．６６ｇを得た。
収率９４％
融点：２１４−２１６℃
ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３ ，δ）：３．９５（ｓ，３Ｈ），４．１６（ｓ，３Ｈ），７．２４−７．４９（ｍ，４Ｈ），７．９２（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），８．１７（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），８．４４（ｂｒ，１Ｈ）．
【０１０５】
参考例３：ジメチル９−（３−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシロキシプロピル）カルバゾール−３，４−ジカルボキシレートの製造
参考例２で得られたジメチルカルバゾール−３，４−ジカルボキシレート１．５５ｇを２３ｍｌのＤＭＦに溶解し、室温で０．３３ｇの水素化ナトリウムを加え、５０℃にて３−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシロキシ−１−ブロモプロパンを加え、２時間攪拌した。反応液を水に注加し、酢酸エチルにて抽出し、水、飽和食塩水にて洗浄し、芒硝乾燥した後、減圧濃縮した。得られた残渣を、ヘキサン／酢酸エチル＝４／１にてカラム精製し、目的物１．４９ｇを得た。
収率５９％
ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３ ，δ）：０．７３（ｓ，６Ｈ），０．９７（ｓ，９Ｈ），２．０３（ｍ，２Ｈ），３．５８（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ），３．８５（ｓ，３Ｈ），４．１６（ｓ，３Ｈ），４．８６（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，２Ｈ），７．２４（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．５０−７．５６（ｍ，３Ｈ），７．９３（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），８．１４（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ）．
【０１０６】
参考例４：９−（３−ヒドロキシプロピル）カルバゾール−３，４−ジカルボン酸の製造
参考例３で得られたジメチル９−（３−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシロキシプロピル）カルバゾール−３，４−ジカルボキシレート１．１３ｇを３０ｍｌのエタノールに溶解し、１０Ｎ−水酸化カリウム水溶液２．４８ｍｌを加え、１０時間加熱還流した。反応液を減圧濃縮した。得られた残渣にメタノールを加え、２Ｎ−塩酸水で中和後、濾過し、目的物０．６３ｇを得た。
収率：８２％
融点：１８１―１８３℃
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６ ，δ）：１．９２（ｍ，２Ｈ），３．４０（ｔ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，２Ｈ），４．５２（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），４．６９（ｂｒ，１Ｈ），７．２７（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．５５（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．７０−８．０７（ｍ，４Ｈ）．
【０１０７】
参考例５：９−（３−アセトキシプロピル）カルバゾール−３，４−ジカルボン酸無水物の製造
参考例４で得られた９−（３−ヒドロキシプロピル）カルバゾール−３，４−ジカルボン酸０．５３ｇを無水酢酸２．５ｍｌに溶解し、１１０℃にて攪拌した。反応液を室温まで冷却した後、減圧濃縮し、残渣として目的物を得た。
実施例１：９−（３−アセトキシプロピル）カルバゾール−３，４−ジカルボキシイミド（表−１の化合物番号９）の製造
参考例５で残渣として得られた９−（３−アセトキシプロピル）カルバゾール−３，４−ジカルボン酸無水物を１０ｍｌのＤＭＦに溶解し、１，１，１，３，３，３−ヘキサメチルジシラザン０．８１ｇと、メタノール０．０８ｇを加え、室温にて１０時間攪拌した。反応液を水に注加し、酢酸エチルにて抽出し、水、飽和食塩水にて洗浄し、芒硝乾燥した後、減圧濃縮した。得られた固体を酢酸エチルで懸洗し、目的物０．３６ｇを得た。
収率６８％
融点：２４８−２４９℃
ＩＲ（ＫＢｒ，ｃｍ−１）：１６９９，１７１８，１７５１，３０６７，３１８１．
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６ ，δ）：１．９１ （ｓ，３Ｈ），２．１３（ｍ，２Ｈ），３．９６（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），４．６３（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），７．３８（ｄｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．６５（ｄｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），７．７７（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），７．８８（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），８．０３（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），８．８８（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），１１．２０（ｓ，１Ｈ）．
【０１０８】
実施例２：９−（３−ヒドロキシプロピル）カルバゾール−３，４−ジカルボキシイミド（表−１の化合物番号８）の製造
実施例１で得られた９−（３−アセトキシプロピル）カルバゾール−３，４−ジカルボキシイミド１８２ｍｇを２ｍｌのＤＭＦに溶解し、１Ｎ−水酸化カリウム水溶液１．６３ｍｌを加えた。反応液を水に注加し、酢酸エチルにて抽出し、水、飽和食塩水で洗浄し、芒硝乾燥した後、減圧濃縮した。得られた残渣を、クロロホルム／酢酸エチル＝１／２にてカラム精製し、目的物９６ｍｇを得た。
収率：６０％
融点：２２６−２２７℃
ＩＲ（ＫＢｒ，ｃｍ−１）：３４７２，３１７３，２９５９，１７５０，１７１７．
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６ ，δ）：１．９６（ｍ，２Ｈ），３．４３（ｍ，２Ｈ），４．５８（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），４．７０（ｔ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，１Ｈ），７．３８（ｍ，１Ｈ），７．６６（ｍ，１Ｈ）７．７８（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．８８（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），８．０１（ｄ，Ｊ＝８．４ＨＺ，１Ｈ），８．８９（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），１１．１７（ｓ，１Ｈ）．
【０１０９】
参考例１〜５、実施例１及び実施例２と同様の方法により、以下実施例３から実施例２０の化合物を製造した。以下、その物性値を記す。なお、化合物番号は前記の表中の化合物番号に対応させてある。
【０１１０】
実施例３：カルバゾール−３，４−ジカルボキシイミド（表−１の化合物番号１）の製造
融点：３００℃以上
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６ ，δ）：７．３３（ｔ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．５２−７．６４（ｍ，２Ｈ），７．８０（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．８６（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），８．８３（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），１１．１２（ｓ，１Ｈ），１２．０８（ｓ，１Ｈ）．
【０１１１】
実施例４：９−（３−ヒドロキシプロピル）−２−メチルカルバゾール−３，４−ジカルボキシイミド（表−２の化合物番号７８）の製造
融点：２５２−２５４℃
ＩＲ（ＫＢｒ，ｃｍ−１）：３４３９，３１５４，１７４６，１７０１．
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６ ，δ）：１．９４（ｍ，２Ｈ），２．７７（ｓ，３Ｈ），３．４１（ｍ，２Ｈ），４．５１（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ），４，６８（ｂｒ，１Ｈ），７．３３（ｍ，１Ｈ），７．５９（ｍ，１Ｈ），７．７１（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．７８（ｓ，１Ｈ），８．８５（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），１１．０６（ｓ，１Ｈ）．
【０１１２】
実施例５：９−（３−アセトキシプロピル）−２−メチルカルバゾール−３，４−ジカルボキシイミド（表−２の化合物番号７９）の製造
融点：２３２−２３４℃
ＩＲ（ＫＢｒ，ｃｍ−１）：３１９６，１７５０，１７１５，１６９３．
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６ ，δ）：１．９１（ｍ，２Ｈ），２．１３（ｓ，３Ｈ），２．７７（ｓ，３Ｈ），３．９５（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），４．５７（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），７．３４（ｍ，１Ｈ），７．６０（ｍ，１Ｈ），７．７９（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），８．８６（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），１１．０６（ｄｕｌｌｓ，１Ｈ）．
【０１１３】
実施例６：９−（３−アミノプロピル）−２−メチルカルバゾール−３，４−ジカルボキシイミド 塩酸塩（表−２の化合物番号８３の塩酸塩）の製造
融点：３００℃以上
ＩＲ（ＫＢｒ，ｃｍ−１）：３１３７，２９２０，１７５０，１６９８，１５２０．
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６ ，δ）：２．０８（ｍ，２Ｈ），２．７９（ｓ，３Ｈ），４．５８（ｍ，２Ｈ），７．３６（ｍ，１Ｈ），７．６２（ｍ，１Ｈ），７．６５−７．８８（ｍ，３Ｈ），７．８９（ｓ，１Ｈ），８．８７（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），１１．１１（ｓ，１Ｈ）．
【０１１４】
実施例７：９−（３−ジメチルアミノプロピル）−２−メチルカルバゾール−３，４−ジカルボキシイミド（表−２の化合物番号８５）の製造
融点：１８８−１８９℃
ＩＲ（ＫＢｒ，ｃｍ−１）：１７４６，１７１３．
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６ ，δ）：１．９２（ｍ，２Ｈ），２．１３（ｓ，６Ｈ），２．１７（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），２．７７（ｓ，３Ｈ），４．４８（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），７．３３（ｍ，１Ｈ），７．５９（ｍ，１Ｈ），７．７９（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．７９（ｓ，１Ｈ），８．８５（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），１１．０６（ｓ，１Ｈ）．
【０１１５】
実施例８：９−（３−アミジノチオプロピル）−２−メチルカルバゾール−３，４−ジカルボキシイミド メタンスルホン酸塩（表−２の化合物番号１０２）の製造
融点：２００−２０１℃
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６ ，δ）：２．１４（ｍ，２Ｈ），２．３１（ｓ，３Ｈ），２．７９（ｓ，３Ｈ），３．２０（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），４．５５（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），７．３６（ｍ，１Ｈ），７．６１（ｍ，１Ｈ），７．７４（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．８０（ｓ，１Ｈ），８．８６（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ）９．０１（ｄｕｌｌｓ，２Ｈ）．
【０１１６】
実施例９：９−（４−ヒドロキシブチル）−２−メチルカルバゾール−３，４−ジカルボキシイミド（表−２の化合物番号１０８）の製造
融点：１８６−１８８℃
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６ ，δ）：１．４５（ｍ，２Ｈ），１．８２（ｍ，２Ｈ），２．７８（ｓ，３Ｈ），３．３９（ｍ，２Ｈ），４．４１（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，２Ｈ），４．４９（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），７．３３（ｍ，１Ｈ），７．５９（ｍ，１Ｈ），７．１２（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．８１（ｓ，１Ｈ），７．８６（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），１１．０６（ｓ，１Ｈ）．
【０１１７】
実施例１０：９−（４−アセトキシブチル）−２−メチルカルバゾール−３，４−ジカルボキシイミド（表−２化合物番号１０９）の製造
融点：２０４―２０６℃
ＩＲ（ＫＢｒ，ｃｍ−１）：３２２９，２９３０，１７５９，１７１１．
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６ ，δ）：１．６２（ｍ，２Ｈ），１．８３（ｍ，２Ｈ），１．９６（ｓ，３Ｈ），２．７８（ｓ，３Ｈ），４．０１（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ）４．５０（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），７．３３（ｍ，１Ｈ），７．５９（ｍ，１Ｈ），７．７３（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．８２（ｓ，１Ｈ），８．８６（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），１１．０６（ｓ，１Ｈ）．
【０１１８】
実施例１１：９−（４−アミノブチル）−２−メチルカルバゾール−３，４−ジカルボキシイミド 塩酸塩（表−２の化合物番号１１３の塩酸塩）の製造
融点：１８３−１８５℃
ＩＲ（ＫＢｒ，ｃｍ−１）：３４２０，２９７５，１７５０，１７１５．
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，δ）：１．５６（ｍ，２Ｈ），１．８５（ｍ，２Ｈ），２．７９（ｍ，５Ｈ），４．５３（ｔ．Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），７．３４（ｍ，１Ｈ），７．６１（ｍ，１Ｈ），７．７０（ｄｕｌｌｓ，２Ｈ），７．７５（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．８４（ｓ，１Ｈ），８．８７（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），１１．１０（ｓ，１Ｈ）．
【０１１９】
実施例１２：９−（４−アミジノチオブチル）−２−メチルカルバゾール−３，４−ジカルボキシイミド メタンスルホン酸塩（表−２の化合物番号１３２のメタンスルホン酸塩）の製造
融点：２４８−２５０℃
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６ ，δ）：１．６７（ｍ，２Ｈ），１．８９（ｍ，２Ｈ），２．３０（ｓ，３Ｈ），２．７８（ｓ，３Ｈ），３．１７（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），４．５２（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），７．３４（ｍ，１Ｈ），７．６０（ｍ，１Ｈ），７．７４（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．８３（ｓ，１Ｈ），８．８７（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），８．９１（ｄｕｌｌｓ，２Ｈ），１１．０６（ｓ，１Ｈ）
【０１２０】
実施例１３：６−クロロ−９−（３−ヒドロキシプロピル）−２−メチルカルバゾール−３，４−ジカルボキシイミド（表―４の化合物番号２１８）の製造
融点：３００℃以上
ＩＲ（ＫＢｒ，ｃｍ−１）：３５５９，３１７９，３０５７，１７５２，１６９８．
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６ ，δ）：１．９４（ｍ，２Ｈ），２．７７（ｓ，３Ｈ），３．４１（ｍ，２Ｈ），４．５０（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），４．７０）ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ），７．３７（ｄｄ，Ｊ＝８．４，１．８Ｈｚ，１Ｈ），７．８１（ｓ，１Ｈ），７．８５（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），８．８０（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），１１．１４（ｓ，１Ｈ）．
【０１２１】
実施例１４：９−（３−アセトキシプロピル）−６−クロロ−２−メチルカルバゾール−３，４−ジカルボキシイミド（表−４の化合物番号２１９）の製造
融点：２３１−２３３℃
ＩＲ（ＫＢｒ，ｃｍ−１）：３２４１，１７５２，１７３６，１７０５．
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６ ，δ）：１．９２（ｓ，３Ｈ），２．１０（ｍ，２Ｈ），２．７６（ｓ，３Ｈ），３．９２（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２Ｈ），４．５４（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ），７．３６（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．７８（ｓ，１Ｈ），７．８４（ｓ，１Ｈ），８．７８（ｄ．Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），１１．１１（ｓ，１Ｈ）．
【０１２２】
実施例１５：９−（３−アミノプロピル）−６−クロロ−２−メチルカルバゾール−３，４−ジカルボキシイミド 塩酸塩（表−４の化合物番号２２３の塩酸塩）の製造
融点：２７４℃ （分解）
ＩＲ（ＫＢｒ，ｃｍ−１）：３４２２，３１００，２９２２，１７５２，１７１７，１５００．
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６ ，δ）：２．０７（ｍ，２Ｈ），２．７７（ｓ，３Ｈ），２．８９（ｍ，２Ｈ），４．５７（ｍ，２Ｈ），７．３７（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），７．９３（ｓ，１Ｈ），７．９７（ｄｕｌｌｓ，３Ｈ），８．７９（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），１１．１４（ｓ，１Ｈ）．
【０１２３】
実施例１６：２，６−ジメチル−９−（３−ヒドロキシプロピル）カルバゾール−３，４−ジカルボキシイミド（表−６の化合物番号３５８）の製造
融点：２３６−２３８℃
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６ ，δ）：１．９２（ｍ，２Ｈ），２．７６（ｓ，３Ｈ），３．４０（ｍ，２Ｈ），４．４７（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），４．６６（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ），７．４２（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．７４（ｓ，１Ｈ），８．６６（ｓ，１Ｈ），１１．０４（ｓ，１Ｈ）．
【０１２４】
実施例１７：９−（３−アセトキシプロピル）−２，６−ジメチルカルバゾール−３，４−ジカルボキシイミド（表−６の化合物番号３５９）の製造
融点：２２８−２３０℃
ＩＲ（ＫＢｒ，ｃｍ−１）：３２３９，２９６９，１７５０，１７３２，１６９０．
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６ ，δ）：１．９２（ｓ，３Ｈ），２．１０（ｍ，２Ｈ），２．７５（ｓ，３Ｈ），３．９３（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２Ｈ），４．６２（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２Ｈ），７．４２（ｄ，Ｊ＝８，４Ｈｚ，１Ｈ），７．５８（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．７３（ｓ，１Ｈ），８．６５（ｓ，１Ｈ），１１．０４（ｓ，１Ｈ）．
【０１２５】
実施例１８：９−（３−アミノプロピル）−２，６−ジメチルカルバゾール−３，４−ジカルボキシイミド 塩酸塩（表−６の化合物番号３６３の塩酸塩）の製造
融点：２９０℃
ＩＲ（ＫＢｒ，ｃｍ−１）：３５０７，３４０１，３２６０，２９２６，１７６５，１６９７，１５２６．
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６ ，δ）：２．０８（ｍ，２Ｈ），２．７７（ｓ，３Ｈ），２．８２（ｍ，２Ｈ），４．５５（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），７．４５（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．６８（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７，８６（ｄｕｌｌｓ，３Ｈ），８．６７（ｓ，１Ｈ），１１．０８（ｓ，１Ｈ）．
【０１２６】
実施例１９：Ｎ−［３−（１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−６（１Ｈ）−イル−）プロピル］メタンスルホンアミド（表−１の化合物番号１８）の製造
融点：２１１−２１６℃（分解）
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６ ，δ）：２．０１（ｍ，２Ｈ），２．８９（ｓ，３Ｈ），３．０６（ｍ，２Ｈ），４．５８（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），７．１９（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３８（ｄｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．６６（ｄｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．８１（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．８８（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），８．０７（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），８．８８（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），１１．２０（ｓ，１Ｈ）．
【０１２７】
実施例２０：Ｎ−［３−（４−メチル−１，３−ジオキソ−２、３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−６−イル−プロピル］−アセトアミド（表−６の化合物番号３６７）の製造
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，δ）：１．８１（ｓ，３Ｈ），１．９２（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２ｈ），２．７７（ｓ，３Ｈ），３．０７（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２Ｈ），４．４８（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），７．３３（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．６０（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．６８−７．９５（ｍ，３Ｈ），８．８５（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），１１．０７（ｓ，１Ｈ）．
【０１２８】
実施例２１：６−（３−ヒドロキシプロピル）−３，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−１（２Ｈ）−オン（表−７化合物番号４２８）の製造
実施例２で得られた９−（３−ヒドロキシプロピル）カルバゾール−３，４−ジカルボキシイミド７００ｍｇを１２０ｍｌのテトラヒドロフランに溶解し、９０ｍｇの水素化リチウムアルミニウムを加えて室温で１５時間攪拌した。反応液に水を加え、酢酸エチルにて抽出し、飽和食塩水で洗浄し、芒硝乾燥した後、減圧濃縮した。得られた残渣を、塩化メチレン／メタノール＝５０／１にてカラム精製し、３−ヒドロキシ−６−（３−ヒドロキシプロピル）−３，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−１（２Ｈ）−オン１４０ｍｇを得た。これをエタノール２０ｍｌに溶解し、１０％パラジウム炭素５９ｍｇを加え、水素雰囲気中７２時間攪拌した。反応終了後、触媒をろ過して除き、ろ液を濃縮して得られた残渣を塩化メチレン／メタノール＝５０／１にてカラム精製し、目的物３６ｍｇを得た。
収率：２７％
融点：１９１−１９４℃（分解）
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６ ，δ）：１．９５（ｍ，２Ｈ），３．３９（ｍ，２Ｈ），４．５２（ｍ，４Ｈ），４．６７（ｔ，Ｊ＝４．７Ｈｚ，１Ｈ），７．２３（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ）７．６０（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．６５（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），７．８８（ｄ，Ｊ＝８．３ＨＺ，１Ｈ），８．６３（ｓ，１Ｈ），９．１２（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ）．
【０１２９】
実施例２１と同様の方法により、実施例２２から実施例２４の化合物を製造した。以下、その物性値を記す。
【０１３０】
実施例２２：６−（３−ヒドロキシプロピル）−４−メチル−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−１−オン（表−１１の化合物番号７０８）の製造
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ ２９５（Ｍ＋１）＋
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，δ）：１．９３（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ），２．５０（ｓ，３Ｈ），３．３５−３．４５（ｍ，２Ｈ），４．４４（ｓ，２Ｈ），４．４９（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，２Ｈ），４．６４（ｔ，Ｊ＝４．７Ｈｚ，１Ｈ），７．１９（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．４３−７．４８（ｍ，１Ｈ），７．６１（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．６８（ｓ，１Ｈ），８．６０（ｓ，１Ｈ），９．０６（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ）．
【０１３１】
実施例２３：６−（３−ヒドロキシプロピル）−４−メチル−１，２−ジヒドロ−６Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−３−オン（表−１２の化合物番号７７８）の製造
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ ２９５（Ｍ＋１）＋
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，δ）：１．９３（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２Ｈ），２．７８（ｓ，３Ｈ），３．３８−３．４５（ｍ，２Ｈ），４．４８（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），４．６５（ｔ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，１Ｈ），４．７７（ｓ，２Ｈ），７．２６（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．４３（ｓ，１Ｈ），７．４９（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．６６（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）７．９６（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），８．３０（ｓ，１Ｈ）．
【０１３２】
実施例２４：６−（３−ヒドロキシプロピル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−１−オン（表−７の化合物番号４３３）の製造融点：１９０−２００℃（分解）
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，δ）：２．０９（ｍ，２Ｈ），２．７６（ｍ，２Ｈ），３．５６（ｍ，２Ｈ），４．５２（ｓ，２Ｈ），４．５９（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），７．２５（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．５３（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．６４（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．７３（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．７４（ｓ，２Ｈ），７．９６（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），８．６７（ｓ，１Ｈ），９．１４（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ）．
【０１３３】
試験例： ＤＡＰＫ阻害作用
本発明の医薬のＤＡＰＫ阻害作用を、ＤＫ１タンパク質（ＤＡＰキナーゼのキナーゼ領域酵素で、ＤＡＰＫのＮ末から２８０アミノ酸残基を含むタンパク質）によるミオシン軽鎖（ｍｙｏｓｉｎ ｌｉｇｈｔ ｃｈａｉｎ；以下、ＭＣＬと略す）リン酸化の阻害作用によって確認した。
【０１３４】
（１）Ｔｒｘ−２ＭＬＣの調製
ＤＫ１によるリン酸化が認められたＭＬＣ基質（ＣＯＳＭＯ ＢＩＯ社；ｃｏｄｅ＃Ｍ−４３５７）をチオレドキシンタンパク質（Ｔｒｘ）に２つ繋げた基質タンパク質（以下、Ｔｒｘ−２ＭＬＣ）を作製するため、配列表の配列番号１のアミノ酸をコードするＤＮＡ配列にＢｇｌ ＩＩやＥｃｏＲ Ｉなどの制限酵素配列を付加したＤＮＡ配列（配列番号２）をＢｇｌ ＩＩおよびＥｃｏＲ Ｉで消化したのち、Ｂｇｌ ＩＩおよびＥｃｏＲ Ｉ消化したｐＥＴ３２ａベクター（Ｎｏｖａｇｅｎ社，Ｃａｔ．＃６９０３０−１）へ挿入し、Ｔｒｘ−２ＭＬＣ発現ベクターを構築した。ｐＥＴ３２ａはチオレドキシンおよびＨｉｓタグのついた融合タンパク質を発現できることから、構築したＴｒｘ−２ＭＬＣ発現ベクターから、チオレドキシン、Ｈｉｓタグ、２つのＭＬＣキナーゼ基質が融合したタンパク質（Ｔｒｘ−２ＭＬＣ）が発現される（配列番号３）。
【０１３５】
次ぎにＴｒｘ−２ＭＬＣ発現ベクターをタンパク質発現用大腸菌ＢＬ２１（ＤＥ３）（Ｎｏｖａｇｅｎ社，Ｃａｔ．＃６９４５０−３）へ導入し、最終濃度５０ｍｇ／ｍＬアンピシリンを含むＬＢ培地中で３０℃にて数時間培養し、最終濃度０．５ｍＭになるようにイソプロピルチオガラクトシド（Ｉｓｏｐｒｏｐｙｌｔｈｉｏｇａｌａｃｔｏｓｉｄｅ；以下、ＩＰＴＧと略す）を添加したのちさらに数時間培養を行い、Ｔｒｘ−２ＭＬＣを誘導発現させた。大腸菌を遠心分離にて回収し、１ｘ Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｂｕｆｆｅｒ（２０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌｐＨ７．９， ５００ｍＭ ＮａＣｌ，５ｍＭ イミダゾール）にて懸濁し、最終濃度１ｍＭフェニルメチルスルホニル フルオリド（ｐｈｅｎｙｌｍｅｔｈａｎｅ ｓｕｌｆｏｎｙｌ ｆｌｕｏｒｉｄｅ；以下、ＰＭＳＦと略す）を添加したのち、超音波破砕機にて大腸菌を破砕し、破砕液を遠心分離した。５０ｍＭＮｉＳＯ４にてニッケルをキレートし、１ｘ Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｂｕｆｆｅｒにて平衡化したＨｉｓ・Ｂｉｎｄ Ｒｅｓｉｎ（Ｎｏｖａｇｅｎ社、Ｃａｔ．＃６９６７０−４）を充填したカラムに、遠心分離した上清を加え、１ｘ Ｗａｓｈ Ｂｕｆｆｅｒ（２０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ｐＨ７．９，５００ｍＭ ＮａＣｌ，６０ｍＭイミダゾール）にて洗浄したのち、１ｘ Ｅｌｕｔｉｏｎ Ｂｕｆｆｅｒ（２０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ｐＨ７．９， ５００ｍＭ ＮａＣｌ、５００ｍＭ イミダゾール）にてＴｒｘ−２ＭＬＣをカラムから溶出させた。溶出したＴｒｘ−２ＭＬＣは、ＹＭ−１０（Ａｍｉｃｏｎ社、ｃｏｄｅ＃１３６３２）を用い限外ろ過にて濃縮したのち、等量の１ｘＰＢＳ（−）を添加しさらに濃縮し、２倍量の１ｘＰＢＳ（−）を添加しもう一度濃縮しバッファー置換及びイミダゾール除去を行い、精製Ｔｒｘ−２ＭＬＣを得た。
【０１３６】
（２）ＤＫ１によるＭＬＣリン酸化に対する本発明医薬の阻害作用
基質として上記（１）で調製したＴｒｘ−２ＭＬＣを９６ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅに固相化し、ＰＢＳ緩衝液にて洗浄後、０．１％ ｇｅｌａｔｉｎ水溶液にてブロッキングを行った。ＰＢＳ緩衝液にて２回、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ ７．５）にて１回洗浄した。そこへ反応溶液（最終濃度５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ ７．５）、８ｍＭ ＭｇＣｌ２、０．１ｍｇ／ｍＬ ウシ血清アルブミン、０．０１μｇ／ｍＬ ＤＫ１）を加えた。さらにＤＭＳＯ（最終濃度０．５％）あるいは化合物を加えた。（被検化合物は１０％ ＤＭＳＯにて調製して添加したため、最終の反応系には０．５％ ＤＭＳＯを含む。）ＡＴＰ溶液（最終濃度８μＭ ＡＴＰ、４μＣｉ／ｍＬ γ−３２Ｐ ＡＴＰ）添加によりリン酸化反応を開始し、２５℃で２０分反応させ、２０％リン酸水溶液を添加して反応を停止した。アスピレーターで反応液を抜き取り、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０−ＰＢＳ溶液にて洗浄した。洗浄液を十分に取り除き、液体シンチレーターを加えてマイクロプレートシンチレーションカウンターにてＴｒｘ−２ＭＬＣのリン酸化を解析した。
【０１３７】
結果を下記の表に示す。被検化合物はＤＡＰＫによるリン酸化を顕著に阻害した。この結果は、本発明の医薬がＤＡＰＫ活性を阻害することによって細胞死を抑制しうることを強く示唆しており、本発明の医薬が脳梗塞、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病等の細胞死を伴う疾患の予防及び／又は治療に有効であることを示している。
【０１３８】
【表５７】
実施例番号（化合物番号） ５０％阻害濃度（μＭ）
２ （８） １．０
４ （７８） ７．０
６ （８３） ０．０８４
７ （８５） １．８
８ （１０２） ０．２３
９（１０８） ２．２
１１（１１３） ０．４２
１２（１３２） ０．７７
１５（２２３） ０．５
１６（３５８） ６．６
１８（３６３） ０．０５８
２０（３６７） １．９
２１（４２８） ４．４
２２（７０８） ３．９
【０１３９】
製剤例
（１）錠剤
下記の成分を常法に従って混合し、慣用の装置により打錠した。
実施例４の化合物 ３０ｍｇ
結晶セルロース ６０ｍｇ
コーンスターチ １００ｍｇ
乳 糖 ２００ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム ４ｍｇ
【０１４０】
（２）軟カプセル剤
下記の成分を常法に従って混合し、軟カプセルに充填した。
実施例４の化合物 ３０ｍｇ
オリーブ油 ３００ｍｇ
レシチン ２０ｍｇ
【０１４１】
【発明の効果】
本発明の医薬はＤＡＰＫ阻害活性を有しており、ＤＡＰＫの異常昂進に起因する、脳梗塞、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病等の細胞死を伴う疾患に対して根本的な予防及び／又は治療を可能にする医薬として有用である。
【０１４２】
【配列表】
【発明の属する技術分野】
本発明は、細胞死関連蛋白質リン酸化酵素（Ｄｅａｔｈ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ、ＤＡＰキナーゼ；以下、ＤＡＰＫと略す）の異常昂進に起因する疾患の予防及び／又は治療に有用な医薬の発明に関するものである。また、本発明は、上記の医薬の有効成分として有用な新規ピロロカルバゾール誘導体に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
ＤＡＰＫはＫｉｍｃｈｉらによって見出された蛋白質リン酸化酵素（非特許文献１参照）であり、アポトーシス、ガン抑制に関連するプロテインキナーゼとして知られている（非特許文献２、非特許文献３参照）。ＤＡＰＫは、ｍＲＮＡがラットの胎児期から幼弱期にかけては広く脳内に分布しているのに対し、成熟ラットでは海馬のみに多く分布していることから、神経系のアポトーシスに関与していることが示唆されている（非特許文献４参照）。また、ＤＡＰＫをノックアウトしたマウスがグルタミン酸による神経細胞死に対して抵抗性を示すこと、ＤＡＰＫをノックアウトしたマウスの海馬の細胞がセラミドによる神経細胞死に対して抵抗性を示すこと等、神経細胞死との関連も指摘されている（非特許文献５〜７参照）。以上のことからＤＡＰＫを阻害する化合物は、細胞死を阻止する作用により、脳梗塞、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病等の細胞死を伴う疾患の進行を阻止あるいは遅らせることができる可能性がある。ＤＡＰＫを阻害する化合物としては、すでにＷａｔｔｅｒｓｏｎらによりフェニルピリダジン誘導体が報告されている（非特許文献７参照）が、その阻害能は充分なものとはいえない。
【０００３】
【非特許文献１】Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ． ｖｏｌ．９， ｐａｇｅ１５−３０（１９９５）
【非特許文献２】Ｎａｔｕｒｅ ３９０， １８０−１８４（１９９７）
【非特許文献３】Ｎａｔｕｒｅ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．３，１−７（２００１）
【非特許文献４】Ｊ． Ｎｅｕｒｏｓｃｉ． Ｒｅｓ．５８， ６７４−６８３（１９９９）
【非特許文献５】Ｅｕｒ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１６， ５５７−５６４（２００２）
【非特許文献６】Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７（３）， １９５７−１９６１（２００２）
【非特許文献７】Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ＆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ９３， ２１７−２２４（２００２）
【非特許文献８】Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ ３４（５１）， ８３６１−８３６４（１９９３）
【非特許文献９】Ｂｉｏｏｒｇ． Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ． ５（１）， ５５−６０（１９９５）
【非特許文献１０】Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１８（１２）， ２８２５−２８４２（１９９６）
【特許文献１】特開平２−１４２７９１号公報
【特許文献２】特開平８−５９６６６号公報
【特許文献３】特開平４−１７８３８７号公報
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の課題は、細胞死を伴う疾患の予防及び／又は治療に有用な医薬を提供することにある。より詳細には、脳梗塞、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病等の細胞死を伴う疾患においてＤＡＰＫ活性を阻害することにより細胞死を阻止することにより、これらの疾患に対して根本的な予防及び／又は治療を可能にする医薬を提供することにある。また、本発明の別の課題は、上記の特徴を有する医薬の有効成分として有用な新規化合物を提供することにある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは上記課題を解決すべく、ＤＡＰＫのリン酸化能に対する阻害作用を有する各種化合物をスクリーニングした。その結果、下記の一般式（Ｉ）で表される化合物が所望の作用を有しており、上記の疾患の予防及び／又は治療のための医薬の有効成分として有用であること見出した。本発明はこれらの知見を基にして完成されたものである。
【０００６】
すなわち本発明は、下記一般式（Ｉ）：
【０００７】
【化３】
（式中、Ｒ１〜Ｒ６はそれぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、ニトロ基、置換基を有していてもよい低級アルキル基、置換基を有していてもよい低級アルコキシ基、ヒドロキシ基、又は置換基を有していてもよいアミノ基を表し、Ｒ７は水素原子又は置換基を有していてもよい低級アルキル基を表し、ＸとＹは同時にカルボニル基を表すか、いずれか一方がカルボニル基で残りの一方がメチレン基を表す）で表されるピロロカルバゾール誘導体及びその塩、並びにそれらの溶媒和物及びそれらの水和物からなる群から選ばれる物質を有効成分として含むＤＡＰＫの異常昂進に起因する疾患の予防及び／又は治療のための医薬を提供するものである。
【０００９】
上記発明の好ましい態様によれば、細胞死を伴う疾患に対する医薬、また、該細胞死を伴う疾患が脳梗塞、アルツハイマー病、パーキンソン病またはハンチントン舞踏病である医薬が提供される。また、有効成分である上記の物質と１又は２以上の製剤用添加物とを含む医薬組成物の形態の医薬が好ましい態様として提供される。さらに、上記式（Ｉ）で表されるピロロカルバゾール誘導体及びその塩、並びにそれらの溶媒和物及びそれらの水和物からなる群から選ばれる物質を有効成分として含むＤＡＰＫ阻害剤が本発明により提供される。
【００１０】
別の観点からは、本発明により、ＤＡＰＫの異常昂進に起因する疾患の予防及び／又は治療方法であって、上記式（Ｉ）で表わされるピロロカルバゾール誘導体及び生理学的に許容されるその塩、並びにそれらの溶媒和物及びそれらの水和物からなる群から選ばれる物質の予防及び／又は治療有効量を患者に投与する工程を含む方法；及び、上記医薬の製造のための上記式（Ｉ）で表わされるピロロカルバゾール誘導体及び生理学的に許容されるその塩、並びにそれらの溶媒和物及びそれらの水和物からなる群から選ばれる物質の使用が提供される。
【００１１】
さらに別の観点からは、本発明により、上記式（Ｉ）（式中、Ｒ１〜Ｒ６はそれぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、ニトロ基、置換基を有していてもよい低級アルキル基、置換基を有していてもよい低級アルコキシ基、ヒドロキシ基、又は置換基を有していてもよいアミノ基を表し、Ｒ７は水素原子又は置換基を有していてもよい低級アルキル基を表し、ＸとＹは同時にカルボニル基を表すか、いずれか一方がカルボニル基で残りの一方がメチレン基を表す。ただし、ＸとＹが同時にカルボニル基であって、Ｒ１がエトキシ基であり、Ｒ４がベンジルオキシ基であり、かつＲ７が水素原子である場合を除く）で表されるピロロカルバゾール誘導体若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物若しくはそれらの水和物が提供される。また、これらの新規物質を含む医薬が本発明により提供される。
【００１２】
なお、上記一般式（Ｉ）の類似化合物として、ＸとＹがカルボニル基であり、Ｒ２が置換基を有していてもよいフェニル基（特許文献１参照）及びＲ２がヘテロアリール基（特許文献２参照）である化合物が知られており、これらの化合物がプロテインキナーゼＣを阻害することは公知である。また、上記一般式（Ｉ）においてＸとＹがカルボニル基である場合においてイミド部分がアルキル化された化合物、及びＲ１がエトキシ基であり、Ｒ４がベンジルオキシ基であり、かつＲ７が水素原子である化合物（特許文献３）が知られている。しかしながら、これらの化合物がＤＡＰＫに対して阻害活性を有するかどうかは従来全く知られていない。
【００１３】
【発明の実施の形態】
上記一般式（Ｉ）において、ＸとＹは同時にカルボニル基でも、一方がカルボニル基でもう一方がメチレン基であってもよい。Ｒ１〜Ｒ６は同一でも異なっていてもよく、それぞれ独立に水素原子、ハロゲン原子、ニトロ基、置換基を有していてもよい低級アルキル基、置換基を有していてもよい低級アルコキシ基、ヒドロキシ基、又は置換基を有していてもよいアミノ基を表す。Ｒ７は水素原子又は置換基を有していてもよい低級アルキル基を表す。本明細書において、ハロゲン原子という場合にはフッ素原子、塩素原子、臭素原子、又はヨウ素原子のいずれでもよい。本明細書において、アルキル基又はアルキル部分を含む置換基（例えばアルコキシ基）におけるアルキル部分は直鎖状、分枝鎖状、環状、又はそれらの組み合わせのいずれでもよく、アルキル基又はアルキル部分について低級という場合には、例えば炭素数１ないし６個、好ましくは炭素数１ないし５個、より好ましくは炭素数１ないし４個程度であることを意味する。
【００１４】
例えば、低級アルキル基としては、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｎ−ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基などを挙げることができ、低級アルコキシ基としては、メトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、イソプロポキシ基、ｎ−ブトキシ基、ｎ−ペントキシ基、イソペントキシ基、ネオペントキシ基などを挙げることができる。本明細書においてある官能基について「置換基を有していてもよい」と言う場合には、その置換基の個数又は種類は特に限定されない。
【００１５】
アルキル基又はアルコキシ基が置換基を有する場合には、置換基として、例えば、ハロゲン原子；メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、イソプロポキシ基、ブトキシ基、ｔｅｒｔ− ブトキシ基、ペンチルオキシ基、イソペンチルオキシ基、シクロペンチルオキシ基等のＣ１〜Ｃ５のアルコキシ基；メチレンジオキシ基；ヒドロキシ基；アセトキシ基、プロピオニルオキシ基、ブチリルオキシ基、バレリルオキシ基等のＣ２〜Ｃ６のアルキルカルボニルオキシ基；カルボキシル基；メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、プロポキシカルボニル基、イソプロポキシカルボニル基、ブトキシカルボニル基、イソブトキシカルボニル基、ｔｅｒｔ− ブトキシカルボニル基、ペンチルオキシカルボニル基等のＣ２〜Ｃ６のアルコキシカルボニル基；アセチル基、プロピオニル基、ブチリル基、バレリル基等のＣ２〜Ｃ６のアルキルカルボニル基；アミノ基；メチルアミノ基、エチルアミノ基、プロピルアミノ基、イソプロピルアミノ基、ブチルアミノ基、イソブチルアミノ基、ｔｅｒｔ−ブチルアミノ基、ペンチルアミノ基、イソペンチルアミノ基等のＣ１〜Ｃ５のモノアルキルアミノ基；ジメチルアミノ基、エチルメチルアミノ基、ジエチルアミノ基、メチルプロピルアミノ基、ジイソプロピルアミノ基等のＣ２〜Ｃ１０のジアルキルアミノ基；ピロリジル基；ピペリジル基；モルホリル基；アセチルアミノ基、プロピオニルアミノ基、イソプロピオニルアミノ基、ブチリルアミノ基、バレリルアミノ基等のＣ２〜Ｃ６のアルキルカルボニルアミノ基；メタンスルホニルアミノ基、エタンスルホニルアミノ基等のＣ１〜Ｃ６アルキルスルホニルアミノ基；ベンゼンスルホニルアミノ基、ｐ−トルエンスルホニルアミノ基等のアリールスルホニルアミノ基；カルバモイル基；メチルカルバモイル基、エチルカルバモイル基、プロピルカルバモイル基、ブチルカルバモイル基、ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル基、ペンチルカルバモイル基等のＣ２〜Ｃ６のアルキルカルバモイル基；ジメチルカルバモイル基、ジエチルカルバモイル基、ジプロピルカルバモイル基、ジイソプロピルカルバモイル基、ジブチルカルバモイル基、ジペンチルカルバモイル基等のＣ３〜Ｃ９のジアルキルカルバモイル基；ニトロ基；ニトリル基；フェニル基、ナフチル基などのＣ６〜Ｃ１４のアリール基；フェノキシ基、ナフチルオキシ基などのＣ６〜Ｃ１４のアリールオキシ基；ベンゾイルオキシ基、ナフトイルオキシ基などのＣ６〜Ｃ１４のアリールカルボニルオキシ基；フェニルチオ基；フェニルスルホニル基；ベンジルオキシ基、フェネチルオキシ基などのＣ６〜Ｃ１４のアラルキルオキシ基などを挙げることができる（これらの置換基を置換基群Ａと呼ぶ）。
【００１６】
上記置換基群Ａのうち、アリール基はさらにメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ− ブチル基、シクロブチル基、ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、ｔｅｒｔ− ペンチル基、シクロペンチル基などのＣ１〜Ｃ５の低級アルキル基、トリフルオロメチル基、又は上記置換基群Ａから選ばれる１以上の置換基で置換されていてもよい。置換基を有するアルキル基又は置換基を有するアルコキシ基には、これらの置換基群Ａから選ばれる１又は２以上の置換基を有していることが好ましく、２以上の置換基を有する場合には、それらは同一でも異なっていてもよい。Ｒ７で定義されるアルキル基は、上記置換基群Ａのほか、１又は２以上のアミジノチオ基で置換されていてもよい。
【００１７】
アミノ基が置換基を有する場合の例としては、メチルアミノ基、エチルアミノ基、プロピルアミノ基、イソプロピルアミノ基、ブチルアミノ基、イソブチルアミノ基、ｔｅｒｔ− ブチルアミノ基、ペンチルアミノ基、イソペンチルアミノ基等のＣ１〜Ｃ５のモノアルキルアミノ基；ジメチルアミノ基、エチルメチルアミノ基、ジエチルアミノ基、メチルプロピルアミノ基、ジイソプロピルアミノ基等のＣ２〜Ｃ１０のジアルキルアミノ基；アセチルアミノ基、プロピオニルアミノ基、イソプロピオニルアミノ基、ブチリルアミノ基、バレリルアミノ基等のＣ２〜Ｃ６のアルキルカルボニルアミノ基；メタンスルホニルアミノ基、エタンスルホニルアミノ基等のＣ１〜Ｃ６アルキルスルホニルアミノ基；ベンゼンスルホニルアミノ基、ｐ−トルエンスルホニルアミノ基等のアリールスルホニルアミノ基などを挙げることができる。
【００１８】
本発明の医薬の有効成分としては、上記一般式（Ｉ）で表される化合物のほか、生理学的に許容されるその塩を用いてもよい。塩の具体例としては、酸性基が存在する場合には、リチウム、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム等のアルカリ金属及びアルカリ土類金属塩；アンモニア、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、ジシクロヘキシルアミン、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン、Ｎ，Ｎ−ビス（ヒドロキシエチル）ピペラジン、２−アミノ−２−メチル−１−プロパノール、エタノールアミン、Ｎ−メチルグルカミン、Ｌ−グルカミン等のアミンの塩；又はリジン、δ− ヒドロキシリジン、アルギニンなどの塩基性アミノ酸との塩を形成することができる。塩基性基が存在する場合には、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等の鉱酸の塩；メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、パラトルエンスルホン酸、酢酸、プロピオン酸塩、酒石酸、フマル酸、マレイン酸、リンゴ酸、シュウ酸、コハク酸、クエン酸、安息香酸、マンデル酸、ケイ皮酸、乳酸、グリコール酸、グルクロン酸、アスコルビン酸、ニコチン酸、サリチル酸等の有機酸との塩；又はアスパラギン酸、グルタミン酸などの酸性アミノ酸との塩を形成することができる。
【００１９】
また、本発明の医薬の有効成分としては、上記一般式（Ｉ）で表されるピロロカルバゾール誘導体又は生理学的に許容されるその塩の溶媒和物又は水和物を用いてもよい。さらに、上記一般式（Ｉ）で表されるピロロカルバゾール誘導体は１個又は２個以上の不斉炭素を有する場合があるが、不斉炭素の立体化学についてはそれぞれ独立して（Ｒ）体又は（Ｓ）体のいずれかをとることができ、該ピロロカルバゾール誘導体は光学異性体又はジアステレオ異性体などの立体異性体として存在することがある。本発明の医薬の有効成分としては、純粋な形態の任意の立体異性体、立体異性体の任意の混合物、ラセミ体などを用いることが可能である。
【００２０】
本発明の医薬の有効成分として好適な化合物の例を以下の表に示す。表中、化合物１〜７０は、ＸとＹが両方ともカルボニル基であり、かつＲ１〜Ｒ６がすべて水素原子である場合；化合物７１〜１４０は、ＸとＹが両方ともカルボニル基であり、Ｒ１及びＲ３〜Ｒ６が水素原子であり、かつＲ２がメチル基である場合；化合物１４１〜２１０はＸとＹが両方ともカルボニル基であり、Ｒ１〜Ｒ３、Ｒ５及びＲ６が水素原子であり、かつＲ４が塩素原子である場合；化合物２１１〜２８０は、ＸとＹが両方ともカルボニル基であり、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６が水素原子であり、Ｒ２がメチル基であり、かつＲ４が塩素原子である場合；化合物２８１〜３５０はＸとＹが両方ともカルボニル基であり、Ｒ１〜Ｒ３、Ｒ５及びＲ６が水素原子であり、かつＲ４がメチル基である場合；化合物３５１〜４２０は、ＸとＹが両方ともカルボニル基であり、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６が水素原子であり、かつＲ２及びＲ４がメチル基である場合；化合物４２１〜４９０は、Ｘがカルボニル基であり、Ｙがメチレン基であり、かつＲ１〜Ｒ６がすべて水素原子である場合；化合物４９１〜５６０は、Ｘがメチレン基であり、Ｙがカルボニル基であり、かつＲ１〜Ｒ６がすべて水素原子である場合；化合物５６１〜６３０は、Ｘがカルボニル基であり、Ｙがメチレン基であり、Ｒ１〜Ｒ３、Ｒ５及びＲ６が水素原子であり、かつＲ４がメチル基である場合；化合物６３１から７００は、Ｘがメチレン基であり、Ｙがカルボニル基であり、Ｒ１〜Ｒ３、Ｒ５及びＲ６が水素原子であり、Ｒ４がメチル基である場合；化合物７０１〜７７０は、Ｘがカルボニル基であり、Ｙがメチレン基であり、Ｒ１及びＲ３〜Ｒ６が水素原子であり、かつＲ２がメチル基である場合；化合物７７１〜８４０は、Ｘがメチレン基であり、Ｙがカルボニル基であり、Ｒ１及びＲ３〜Ｒ６が水素原子であり、かつＲ２がメチル基である場合；化合物８４１〜９１０は、Ｘがカルボニル基であり、Ｙがメチレン基であり、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６が水素原子であり、かつＲ２及びＲ４がメチル基である場合；化合物９１１〜９８０は、Ｘがメチレン基であり、Ｙがカルボニル基であり、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６が水素原子であり、かつＲ２及びＲ４がメチル基である場合に相当する。また、表中で、Ｍｅはメチル基、Ｅｔはエチル基、Ａｃはアセチル基を表す。
【００２１】
【表１】
【表２】
【表３】
【表４】
【表５】
【表６】
【表７】
【表８】
【表９】
【表１０】
【表１１】
【表１２】
【表１３】
【表１４】
【表１５】
【表１６】
【表１７】
【表１８】
【表１９】
【表２０】
【表２１】
【表２２】
【表２３】
【表２４】
【表２５】
【表２６】
【表２７】
【表２８】
【表２９】
【表３０】
【表３１】
【表３２】
【表３３】
【表３４】
【表３５】
【表３６】
【表３７】
【表３８】
【表３９】
【表４０】
【表４１】
【表４２】
【表４３】
【表４４】
【表４５】
【表４６】
【表４７】
【表４８】
【表４９】
【表５０】
【表５１】
【表５２】
【表５３】
【表５４】
【表５５】
【表５６】
本発明の医薬の有効成分に特に好適な化合物として、
（１）ＸとＹが同時にカルボニル基であり、Ｒ１が水素原子であり、Ｒ２〜Ｒ６がそれぞれ独立に水素原子、ハロゲン原子、ニトロ基、置換基を有していてもよい低級アルキル基、置換基を有していてもよい低級アルコキシ基、ヒドロキシ基、又は置換基を有していてもよいアミノ基であり、Ｒ７が水素原子又は置換基を有していてもよい低級アルキル基である化合物；
（２）ＸとＹが同時にカルボニル基であり、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、及びＲ６が水素原子であり、Ｒ２が水素原子又は置換基を有していてもよい低級アルキル基であり、Ｒ４が水素原子、ハロゲン原子、又は置換基を有していてもよい低級アルキル基であり、Ｒ７が置換基を有するアルキル基である化合物；
（３）ＸとＹが同時にカルボニル基であり、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、及びＲ６が水素原子であり、Ｒ２が水素原子又は置換基を有していてもよい低級アルキル基であり、Ｒ４が水素原子、ハロゲン原子、又は置換基を有していてもよい低級アルキル基であり、Ｒ７が置換基を有するプロピル基又は置換基を有するブチル基である化合物；
（４）ＸとＹが同時にカルボニル基であり、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、及びＲ６が水素原子であり、Ｒ２が水素原子又はメチル基であり、Ｒ４が水素原子、塩素原子、又はメチル基であり、Ｒ７が置換基を有するプロピル基又は置換基を有するブチル基である化合物；
（５）ＸとＹのいずれか一方がカルボニル基でもう一方がメチレン基であり、Ｒ１が水素原子であり、Ｒ２〜Ｒ６がそれぞれ独立に水素原子、ハロゲン原子、ニトロ基、置換基を有していてもよい低級アルキル基、置換基を有していてもよい低級アルコキシ基、ヒドロキシ基、又は置換基を有していてもよいアミノ基であり、Ｒ７が水素原子又は置換基を有していてもよい低級アルキル基である化合物；
（６）ＸとＹのいずれか一方がカルボニル基でありもう一方がメチレン基であり、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、及びＲ６が水素原子であり、Ｒ２が水素原子又は置換基を有していてもよい低級アルキル基であり、Ｒ４が水素原子、ハロゲン原子、又は置換基を有していてもよい低級アルキル基であり、Ｒ７が置換基を有するアルキル基である化合物；
（７）ＸとＹのいずれか一方がカルボニル基でもう一方がメチレン基であり、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、及びＲ６が水素原子であり、Ｒ２が水素原子又は置換基を有していてもよい低級アルキル基であり、Ｒ４が水素原子、ハロゲン原子、又は置換基を有していてもよい低級アルキル基であり、Ｒ７が置換基を有するプロピル基又は置換基を有するブチル基である化合物；
（８）ＸとＹのいずれか一方がカルボニル基でもう一方がメチレン基であり、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、及びＲ６が水素原子であり、Ｒ２が水素原子又はメチル基であり、Ｒ４が水素原子、塩素原子、又はメチル基であり、Ｒ７が置換基を有するプロピル基又は置換基を有するブチル基である化合物；
（９）上記（１）〜（８）に記載の化合物のうち、Ｒ７の置換基が、ヒドロキシル基、アミノ基、置換基を有するアミノ基及びアミジノチオ基から選ばれる置換基である化合物
を挙げることができる。もっとも、本発明の医薬の有効成分は上記に具体的に示した化合物に限定されることはない。
【００７８】
上記一般式（Ｉ）で表されるピロロカルバゾール誘導体のうち、ＸとＹが両方カルボニル基である化合物（Ｉ−ａ）：
【００７９】
【化４】
は、例えば、下記に説明する方法に従って製造することができる。
＜工程１＞
【００８０】
【化５】
【００８１】
特許文献３に記載の方法と同様の方法で得られる一般式（ＩＩ）で表される化合物を溶媒存在下又は不存在下、アセチレンジカルボン酸ジメチルエステルを作用させることによって上記一般式（ＩＩＩ）の化合物を得ることができる。溶媒としては、反応に悪影響を及ぼさない限り特に限定されないが、例えば、塩化メチレン、クロロホルムなどのハロゲン化炭化水素類；トルエン、キシレンなどの芳香族炭化水素類；ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサンなどのエーテル類；アセトニトリル、プロピオニトリルなどのニトリル類；酢酸メチル、酢酸エチルなどのエステル類；Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチルピロリドンなどのアミド類、メタノール、エタノールなどのアルコール溶媒などを挙げることができ、これら溶媒を１種又は２種以上混合してもよい。反応温度及び反応時間は特に限定されないが、通常、５０℃〜２００℃で、３０分から２４時間実施すればよい。
＜工程２＞
【００８２】
【化６】
【００８３】
工程１で得られた化合物（ＩＩＩ）を酸化（脱水素反応）することによって上記一般式（ＩＶ）の化合物を得ることができる。この酸化反応は５％又は１０％のＰｄＣｌ２ ／Ｃ、２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−ｐ−ベンゾキノン又は２，３，５，６−テトラクロロ−ｐ−ベンゾキノンなどの脱水素化剤を用いて行うことができる。反応温度及び反応時間は特に限定されないが、５％又は１０％のＰｄＣｌ２ ／Ｃを用いる場合は、シメン、デカリン、クメン、ブチルベンゼン又はジフェニルエーテルなどの溶媒を一種又は二種以上混合して使用し、通常、１５０℃〜２６０℃で１０分〜２４時間実施することができる。また、２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−ｐ−ベンゾキノン又は２，３，５，６−テトラクロロ−ｐ−ベンゾキノンを用いる場合には、ベンゼン、トルエン、キシレン、クメン、クロロベンゼン、ｔｅｒｔ−ブチルベンゼン及びジクロロベンゼンなどの芳香族炭化水素類、塩化メチレン、クロロホルムなどのハロゲン化炭化水素類、酢酸などの有機酸又はｔｅｒｔ−ブチルアルコールなどのアルコール類などの溶媒を一種又は二種以上混合して使用し、通常０℃〜１８０℃で１０分〜２４時間実施すればよい。
＜工程３＞
【００８４】
【化７】
【００８５】
工程２で得られた化合物（ＩＶ）を溶媒存在下、塩基と上記一般式（Ｖ）で表されるアルキル化剤を作用させることによって上記一般式（ＶＩ）の化合物を得ることができる。溶媒としては、反応に悪影響を及ぼさない限り特に限定されないが、例えば、トルエン、キシレンなどの芳香族炭化水素類；ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサンなどのエーテル類；アセトニトリル、プロピオニトリルなどのニトリル類；Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチルピロリドンなどのアミド類などを挙げることができ、これら溶媒を１種又は２種以上混合してもよい。塩基としては、トリメチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、ジエチルイソプロピルアミン、ピリジン、２，６−ルチジン、２，４，６−コリジン、１，８−ジアザビシクロ（５．４．０）−７−ウンデセンなどの有機塩基、ナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、カリウム−ｔｅｒｔ−ブトキシドなどの金属アルコキシド、水素化ナトリウム、水素化カリウムなどの無機塩基を挙げることができる。一般式（Ｖ）で表されるアルキル化剤としては、アルキルハライド、アルキルメシレート、アルキルトシレート、アルキルトリフレートなどを挙げることができる。反応温度及び反応時間は特に限定されないが、通常、０℃〜１５０℃で、３０分から２４時間実施すればよい。
＜工程４＞
【００８６】
【化８】
【００８７】
工程３で得られた化合物（ＶＩ）を溶媒存在下、アルカリ加水分解又は酸加水分解することによって上記一般式（ＶＩＩ）の化合物を得ることができる。溶媒としては、反応に悪影響を及ぼさない限り特に限定されないが、例えば、トルエン、キシレンなどの芳香族炭化水素類；ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサンなどのエーテル類；メタノール、エタノールなどのアルコール類などを挙げることができ、これら溶媒を１種又は２種以上混合してもよい。アルカリとしては、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムなどを挙げることができ、この反応で使用される酸としては、塩酸、臭素酸、硫酸、リン酸などを挙げることができる。反応温度及び反応時間は特に限定されないが、通常、０℃〜１５０℃で、３０分から７２時間実施すればよい。
＜工程５＞
【００８８】
【化９】
【００８９】
工程４で得られた化合物（ＶＩＩ）を無水酢酸中で加熱することにより、上記一般式（ＶＩＩＩ）の化合物を得ることができる。反応温度及び反応時間は特に限定されないが、通常、５０℃〜１１０℃で、３０分から２４時間実施すればよい。
＜工程６＞
【００９０】
【化１０】
【００９１】
工程５で得られた化合物（ＶＩＩＩ）を溶媒存在下、１，１，１，３，３，３−ヘキサメチルジシラザンとメタノールを作用させるか、又は溶媒存在下、アンモニア、酢酸アンモニウムなどを作用させることによって、上記一般式（Ｉ−ａ）の化合物を得ることができる。溶媒は、反応に悪影響を及ぼさない限り特に限定されないが、例えば工程１で説明したものと同様の溶媒を用いることができる。反応温度及び反応時間は特に限定されないが、通常、０℃〜１５０℃で、３０分から２４時間実施すればよい。
【００９２】
上記の式（Ｉ）で表されるピロロカルバゾール誘導体のうち、ＸとＹのいずれか一方がカルボニル基でもう一方がメチレン基である化合物（Ｉ−ｂ）、（Ｉ−ｂ’）は、例えば、下記に説明する方法に従って製造することができる。
＜工程７＞
【００９３】
【化１１】
（スキーム中、Ｒ１〜Ｒ７は上記定義のとおりである）
製造法６で得られた化合物（Ｉ−ａ）を文献記載のイミド化合物の還元方法（例えば、非特許文献８、非特許文献９、非特許文献１０参照）で還元することによって、上記一般式（Ｉ−ｂ）、（Ｉ−ｂ’）を得ることができる。これら（Ｉ−ｂ）、（Ｉ−ｂ’）で表される化合物が混合物として得られた場合は、たとえば、再結晶やクロマトグラフィー等の方法で分離することができる。
【００９５】
本発明の医薬はＤＡＰＫに対する阻害活性を有しており、脳梗塞、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病等の細胞死を伴う疾患において、細胞死を阻止する作用を有している。従って、本発明の医薬は、脳梗塞、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病等の細胞死を伴う疾患に対して根本的な予防及び／又は治療を可能にする医薬として有用である。
【００９６】
本発明の医薬の有効成分としては、上記一般式（Ｉ）で表される化合物及び生理学的に許容されるその塩、並びにそれらの溶媒和物及びそれらの水和物からなる群から選ばれる物質を用いることができる。本発明の医薬としては、有効成分である上記の物質自体を投与してもよいが、一般的には、有効成分である上記の物質と１又は２以上の製剤用添加物とを含む医薬組成物の形態で投与することが望ましい。本発明の医薬の有効成分としては、上記の物質の２種以上を組み合わせて用いることができ、上記医薬組成物には、脳梗塞、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病等の細胞死を伴う疾患に対する他の医薬の有効成分を配合することも可能である。
【００９７】
医薬組成物の種類は特に限定されず、経口投与用又は非経口投与用の任意の製剤形態と提供される。例えば、顆粒剤、細粒剤、散剤、硬カプセル剤、軟カプセル剤、シロップ剤、乳剤、懸濁剤又は液剤等の形態の経口投与用医薬組成物、静脈内投与用、筋肉内投与用、若しくは皮下投与用などの注射剤、点滴剤、経皮吸収剤、経粘膜吸収剤、点鼻剤、吸入剤、坐剤などの形態の非経口投与用医薬組成物として調製することができる。注射剤や点滴剤などは、凍結乾燥形態などの粉末状の剤形として調製し、用時に生理食塩水などの適宜の水性媒体に溶解して用いることもできる。また、高分子などで被覆した徐放製剤を脳内に直接投与することも可能である。
【００９８】
医薬組成物の製造に用いられる製剤用添加物の種類、有効成分に対する製剤用添加物の割合、又は医薬組成物の製造方法は、組成物の形態に応じて当業者が適宜選択することが可能である。製剤用添加物としては無機又は有機物質、あるいは固体又は液体の物質を用いることができ、一般的には、有効成分重量に対して１重量％から９０重量％の間で配合することができる。
【００９９】
固体の医薬組成物を製造する際に用いられる賦形剤としては、例えば、乳糖、蔗糖、デンプン、タルク、セルロース、デキストリン、カオリン、炭酸カルシウム等を挙げることができる。経口投与のための液体組成物の製造には、一般的に用いられる不活性な希釈剤、例えば水又は植物油等を用いることができる。この液体組成物には、不活性な希釈剤以外に、補助剤、例えば湿潤剤、懸濁補助剤、甘味剤、芳香剤、着色剤又は保存剤等などを配合してもよい。液体組成物をゼラチンのような吸収されうる物質のカプセル中に含ませてもよい。非経口投与用の組成物、すなわち注射剤、座剤等の製造に用いられる溶剤又は懸濁剤としては、例えば水、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ベンジルアルコール、オレイン酸エチル、レシチン等を挙げることができる。座剤に用いられる基剤としては、例えばカカオ脂、乳化カカオ脂、ラウリン脂、ウィテップゾール等を挙げることができる。
【０１００】
本発明の医薬の投与量及び投与回数は特に限定されず、予防及び／又は治療の目的、疾患の種類、患者の体重や年齢、疾患の重篤度などの条件に応じて、適宜選択することが可能である。一般的には、経口投与における成人一日あたりの投与量は０．０１〜１０００ｍｇ（有効成分重量）程度であり、一日１回又は数回に分けて、あるいは数日ごとに投与することができる。注射剤として用いる場合には、成人に対して一日量０．００１〜１００ｍｇ（有効成分重量）を連続投与又は間欠投与することが望ましい。
【０１０１】
なお、上記式（Ｉ）（式中、ＸとＹがカルボニル基であり、Ｒ１〜Ｒ７は上記定義のとおりであり、ただし、Ｒ１がエトキシ基であり、Ｒ４がベンジルオキシ基であり、かつＲ７が水素原子である場合を除く）で表されるピロロカルバゾール誘導体若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物若しくはそれらの水和物は新規物質であり、物質発明に係る本発明の範囲に包含される。本発明により提供されるこの新規物質の用途は、医薬に限定されることはなく、いかなる用途に用いた場合にも本発明の範囲に包含されることは言うまでもない。また、上記に説明したように、この化合物は光学異性体又はジアステレオ異性体などの立体異性体として存在することがあるが、純粋な形態の任意の立体異性体、立体異性体の任意の混合物、ラセミ体などはいずれも本発明の範囲に包含される。塩の形態の物質の例としては、上記に説明した生理学的に許容される塩を挙げることができる。
【０１０２】
【実施例】
以下、本発明を実施例によりさらに具体的に説明するが、本発明の範囲は下記の実施例に限定されることはない。
【０１０３】
参考例１：ジメチル１，２−ジヒドロカルバゾール−３，４−ジカルボキシレートの製造
特許文献３等と同様の方法で得られる２−アリルインドール２．２８ｇを１００ｍｌのトルエンに溶解し、２．５ｇのアセチレンジカルボン酸ジメチルエステルを加え、２４時間加熱還流した。反応液を０℃まで冷却した後、ヘキサンを加えて濾過し、目的物２．５０ｇを得た。
収率：５５％
融点：２２０−２２２℃
ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３ ，δ）：２．８３−２．８８（ｍ，４Ｈ），３．７９（ｓ，３Ｈ），４．０３（ｓ，３Ｈ），７．０９−７．４７（ｍ，４Ｈ），８．４９（ｂｒ，１Ｈ）．
【０１０４】
参考例２：ジメチルカルバゾール−３，４−ジカルボキシレートの製造
参考例１で得られたジメチル１，２−ジヒドロカルバゾール−３，４−ジカルボキシレート１．７８ｇにブチルベンゼン１０ｍｌを加え、１６０℃にて溶解させ、１０％ＰｄＣｌ２ ／Ｃ １．７８ｇを加え１時間攪拌した。反応液をグラスフィルターにて濾過、ＴＨＦにて洗浄後、減圧濃縮した。得られた残渣を、クロロホルム／酢酸エチル＝１５／１にてカラム精製し、目的物１．６６ｇを得た。
収率９４％
融点：２１４−２１６℃
ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３ ，δ）：３．９５（ｓ，３Ｈ），４．１６（ｓ，３Ｈ），７．２４−７．４９（ｍ，４Ｈ），７．９２（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），８．１７（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），８．４４（ｂｒ，１Ｈ）．
【０１０５】
参考例３：ジメチル９−（３−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシロキシプロピル）カルバゾール−３，４−ジカルボキシレートの製造
参考例２で得られたジメチルカルバゾール−３，４−ジカルボキシレート１．５５ｇを２３ｍｌのＤＭＦに溶解し、室温で０．３３ｇの水素化ナトリウムを加え、５０℃にて３−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシロキシ−１−ブロモプロパンを加え、２時間攪拌した。反応液を水に注加し、酢酸エチルにて抽出し、水、飽和食塩水にて洗浄し、芒硝乾燥した後、減圧濃縮した。得られた残渣を、ヘキサン／酢酸エチル＝４／１にてカラム精製し、目的物１．４９ｇを得た。
収率５９％
ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３ ，δ）：０．７３（ｓ，６Ｈ），０．９７（ｓ，９Ｈ），２．０３（ｍ，２Ｈ），３．５８（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ），３．８５（ｓ，３Ｈ），４．１６（ｓ，３Ｈ），４．８６（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，２Ｈ），７．２４（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．５０−７．５６（ｍ，３Ｈ），７．９３（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），８．１４（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ）．
【０１０６】
参考例４：９−（３−ヒドロキシプロピル）カルバゾール−３，４−ジカルボン酸の製造
参考例３で得られたジメチル９−（３−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシロキシプロピル）カルバゾール−３，４−ジカルボキシレート１．１３ｇを３０ｍｌのエタノールに溶解し、１０Ｎ−水酸化カリウム水溶液２．４８ｍｌを加え、１０時間加熱還流した。反応液を減圧濃縮した。得られた残渣にメタノールを加え、２Ｎ−塩酸水で中和後、濾過し、目的物０．６３ｇを得た。
収率：８２％
融点：１８１―１８３℃
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６ ，δ）：１．９２（ｍ，２Ｈ），３．４０（ｔ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，２Ｈ），４．５２（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），４．６９（ｂｒ，１Ｈ），７．２７（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．５５（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．７０−８．０７（ｍ，４Ｈ）．
【０１０７】
参考例５：９−（３−アセトキシプロピル）カルバゾール−３，４−ジカルボン酸無水物の製造
参考例４で得られた９−（３−ヒドロキシプロピル）カルバゾール−３，４−ジカルボン酸０．５３ｇを無水酢酸２．５ｍｌに溶解し、１１０℃にて攪拌した。反応液を室温まで冷却した後、減圧濃縮し、残渣として目的物を得た。
実施例１：９−（３−アセトキシプロピル）カルバゾール−３，４−ジカルボキシイミド（表−１の化合物番号９）の製造
参考例５で残渣として得られた９−（３−アセトキシプロピル）カルバゾール−３，４−ジカルボン酸無水物を１０ｍｌのＤＭＦに溶解し、１，１，１，３，３，３−ヘキサメチルジシラザン０．８１ｇと、メタノール０．０８ｇを加え、室温にて１０時間攪拌した。反応液を水に注加し、酢酸エチルにて抽出し、水、飽和食塩水にて洗浄し、芒硝乾燥した後、減圧濃縮した。得られた固体を酢酸エチルで懸洗し、目的物０．３６ｇを得た。
収率６８％
融点：２４８−２４９℃
ＩＲ（ＫＢｒ，ｃｍ−１）：１６９９，１７１８，１７５１，３０６７，３１８１．
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６ ，δ）：１．９１ （ｓ，３Ｈ），２．１３（ｍ，２Ｈ），３．９６（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），４．６３（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），７．３８（ｄｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．６５（ｄｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），７．７７（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），７．８８（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），８．０３（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），８．８８（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），１１．２０（ｓ，１Ｈ）．
【０１０８】
実施例２：９−（３−ヒドロキシプロピル）カルバゾール−３，４−ジカルボキシイミド（表−１の化合物番号８）の製造
実施例１で得られた９−（３−アセトキシプロピル）カルバゾール−３，４−ジカルボキシイミド１８２ｍｇを２ｍｌのＤＭＦに溶解し、１Ｎ−水酸化カリウム水溶液１．６３ｍｌを加えた。反応液を水に注加し、酢酸エチルにて抽出し、水、飽和食塩水で洗浄し、芒硝乾燥した後、減圧濃縮した。得られた残渣を、クロロホルム／酢酸エチル＝１／２にてカラム精製し、目的物９６ｍｇを得た。
収率：６０％
融点：２２６−２２７℃
ＩＲ（ＫＢｒ，ｃｍ−１）：３４７２，３１７３，２９５９，１７５０，１７１７．
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６ ，δ）：１．９６（ｍ，２Ｈ），３．４３（ｍ，２Ｈ），４．５８（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），４．７０（ｔ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，１Ｈ），７．３８（ｍ，１Ｈ），７．６６（ｍ，１Ｈ）７．７８（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．８８（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），８．０１（ｄ，Ｊ＝８．４ＨＺ，１Ｈ），８．８９（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），１１．１７（ｓ，１Ｈ）．
【０１０９】
参考例１〜５、実施例１及び実施例２と同様の方法により、以下実施例３から実施例２０の化合物を製造した。以下、その物性値を記す。なお、化合物番号は前記の表中の化合物番号に対応させてある。
【０１１０】
実施例３：カルバゾール−３，４−ジカルボキシイミド（表−１の化合物番号１）の製造
融点：３００℃以上
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６ ，δ）：７．３３（ｔ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．５２−７．６４（ｍ，２Ｈ），７．８０（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．８６（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），８．８３（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），１１．１２（ｓ，１Ｈ），１２．０８（ｓ，１Ｈ）．
【０１１１】
実施例４：９−（３−ヒドロキシプロピル）−２−メチルカルバゾール−３，４−ジカルボキシイミド（表−２の化合物番号７８）の製造
融点：２５２−２５４℃
ＩＲ（ＫＢｒ，ｃｍ−１）：３４３９，３１５４，１７４６，１７０１．
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６ ，δ）：１．９４（ｍ，２Ｈ），２．７７（ｓ，３Ｈ），３．４１（ｍ，２Ｈ），４．５１（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ），４，６８（ｂｒ，１Ｈ），７．３３（ｍ，１Ｈ），７．５９（ｍ，１Ｈ），７．７１（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．７８（ｓ，１Ｈ），８．８５（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），１１．０６（ｓ，１Ｈ）．
【０１１２】
実施例５：９−（３−アセトキシプロピル）−２−メチルカルバゾール−３，４−ジカルボキシイミド（表−２の化合物番号７９）の製造
融点：２３２−２３４℃
ＩＲ（ＫＢｒ，ｃｍ−１）：３１９６，１７５０，１７１５，１６９３．
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６ ，δ）：１．９１（ｍ，２Ｈ），２．１３（ｓ，３Ｈ），２．７７（ｓ，３Ｈ），３．９５（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），４．５７（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），７．３４（ｍ，１Ｈ），７．６０（ｍ，１Ｈ），７．７９（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），８．８６（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），１１．０６（ｄｕｌｌｓ，１Ｈ）．
【０１１３】
実施例６：９−（３−アミノプロピル）−２−メチルカルバゾール−３，４−ジカルボキシイミド 塩酸塩（表−２の化合物番号８３の塩酸塩）の製造
融点：３００℃以上
ＩＲ（ＫＢｒ，ｃｍ−１）：３１３７，２９２０，１７５０，１６９８，１５２０．
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６ ，δ）：２．０８（ｍ，２Ｈ），２．７９（ｓ，３Ｈ），４．５８（ｍ，２Ｈ），７．３６（ｍ，１Ｈ），７．６２（ｍ，１Ｈ），７．６５−７．８８（ｍ，３Ｈ），７．８９（ｓ，１Ｈ），８．８７（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），１１．１１（ｓ，１Ｈ）．
【０１１４】
実施例７：９−（３−ジメチルアミノプロピル）−２−メチルカルバゾール−３，４−ジカルボキシイミド（表−２の化合物番号８５）の製造
融点：１８８−１８９℃
ＩＲ（ＫＢｒ，ｃｍ−１）：１７４６，１７１３．
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６ ，δ）：１．９２（ｍ，２Ｈ），２．１３（ｓ，６Ｈ），２．１７（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），２．７７（ｓ，３Ｈ），４．４８（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），７．３３（ｍ，１Ｈ），７．５９（ｍ，１Ｈ），７．７９（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．７９（ｓ，１Ｈ），８．８５（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），１１．０６（ｓ，１Ｈ）．
【０１１５】
実施例８：９−（３−アミジノチオプロピル）−２−メチルカルバゾール−３，４−ジカルボキシイミド メタンスルホン酸塩（表−２の化合物番号１０２）の製造
融点：２００−２０１℃
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６ ，δ）：２．１４（ｍ，２Ｈ），２．３１（ｓ，３Ｈ），２．７９（ｓ，３Ｈ），３．２０（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），４．５５（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），７．３６（ｍ，１Ｈ），７．６１（ｍ，１Ｈ），７．７４（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．８０（ｓ，１Ｈ），８．８６（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ）９．０１（ｄｕｌｌｓ，２Ｈ）．
【０１１６】
実施例９：９−（４−ヒドロキシブチル）−２−メチルカルバゾール−３，４−ジカルボキシイミド（表−２の化合物番号１０８）の製造
融点：１８６−１８８℃
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６ ，δ）：１．４５（ｍ，２Ｈ），１．８２（ｍ，２Ｈ），２．７８（ｓ，３Ｈ），３．３９（ｍ，２Ｈ），４．４１（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，２Ｈ），４．４９（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），７．３３（ｍ，１Ｈ），７．５９（ｍ，１Ｈ），７．１２（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．８１（ｓ，１Ｈ），７．８６（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），１１．０６（ｓ，１Ｈ）．
【０１１７】
実施例１０：９−（４−アセトキシブチル）−２−メチルカルバゾール−３，４−ジカルボキシイミド（表−２化合物番号１０９）の製造
融点：２０４―２０６℃
ＩＲ（ＫＢｒ，ｃｍ−１）：３２２９，２９３０，１７５９，１７１１．
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６ ，δ）：１．６２（ｍ，２Ｈ），１．８３（ｍ，２Ｈ），１．９６（ｓ，３Ｈ），２．７８（ｓ，３Ｈ），４．０１（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ）４．５０（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），７．３３（ｍ，１Ｈ），７．５９（ｍ，１Ｈ），７．７３（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．８２（ｓ，１Ｈ），８．８６（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），１１．０６（ｓ，１Ｈ）．
【０１１８】
実施例１１：９−（４−アミノブチル）−２−メチルカルバゾール−３，４−ジカルボキシイミド 塩酸塩（表−２の化合物番号１１３の塩酸塩）の製造
融点：１８３−１８５℃
ＩＲ（ＫＢｒ，ｃｍ−１）：３４２０，２９７５，１７５０，１７１５．
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，δ）：１．５６（ｍ，２Ｈ），１．８５（ｍ，２Ｈ），２．７９（ｍ，５Ｈ），４．５３（ｔ．Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），７．３４（ｍ，１Ｈ），７．６１（ｍ，１Ｈ），７．７０（ｄｕｌｌｓ，２Ｈ），７．７５（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．８４（ｓ，１Ｈ），８．８７（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），１１．１０（ｓ，１Ｈ）．
【０１１９】
実施例１２：９−（４−アミジノチオブチル）−２−メチルカルバゾール−３，４−ジカルボキシイミド メタンスルホン酸塩（表−２の化合物番号１３２のメタンスルホン酸塩）の製造
融点：２４８−２５０℃
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６ ，δ）：１．６７（ｍ，２Ｈ），１．８９（ｍ，２Ｈ），２．３０（ｓ，３Ｈ），２．７８（ｓ，３Ｈ），３．１７（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），４．５２（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），７．３４（ｍ，１Ｈ），７．６０（ｍ，１Ｈ），７．７４（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．８３（ｓ，１Ｈ），８．８７（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），８．９１（ｄｕｌｌｓ，２Ｈ），１１．０６（ｓ，１Ｈ）
【０１２０】
実施例１３：６−クロロ−９−（３−ヒドロキシプロピル）−２−メチルカルバゾール−３，４−ジカルボキシイミド（表―４の化合物番号２１８）の製造
融点：３００℃以上
ＩＲ（ＫＢｒ，ｃｍ−１）：３５５９，３１７９，３０５７，１７５２，１６９８．
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６ ，δ）：１．９４（ｍ，２Ｈ），２．７７（ｓ，３Ｈ），３．４１（ｍ，２Ｈ），４．５０（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），４．７０）ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ），７．３７（ｄｄ，Ｊ＝８．４，１．８Ｈｚ，１Ｈ），７．８１（ｓ，１Ｈ），７．８５（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），８．８０（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），１１．１４（ｓ，１Ｈ）．
【０１２１】
実施例１４：９−（３−アセトキシプロピル）−６−クロロ−２−メチルカルバゾール−３，４−ジカルボキシイミド（表−４の化合物番号２１９）の製造
融点：２３１−２３３℃
ＩＲ（ＫＢｒ，ｃｍ−１）：３２４１，１７５２，１７３６，１７０５．
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６ ，δ）：１．９２（ｓ，３Ｈ），２．１０（ｍ，２Ｈ），２．７６（ｓ，３Ｈ），３．９２（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２Ｈ），４．５４（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ），７．３６（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．７８（ｓ，１Ｈ），７．８４（ｓ，１Ｈ），８．７８（ｄ．Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），１１．１１（ｓ，１Ｈ）．
【０１２２】
実施例１５：９−（３−アミノプロピル）−６−クロロ−２−メチルカルバゾール−３，４−ジカルボキシイミド 塩酸塩（表−４の化合物番号２２３の塩酸塩）の製造
融点：２７４℃ （分解）
ＩＲ（ＫＢｒ，ｃｍ−１）：３４２２，３１００，２９２２，１７５２，１７１７，１５００．
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６ ，δ）：２．０７（ｍ，２Ｈ），２．７７（ｓ，３Ｈ），２．８９（ｍ，２Ｈ），４．５７（ｍ，２Ｈ），７．３７（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），７．９３（ｓ，１Ｈ），７．９７（ｄｕｌｌｓ，３Ｈ），８．７９（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），１１．１４（ｓ，１Ｈ）．
【０１２３】
実施例１６：２，６−ジメチル−９−（３−ヒドロキシプロピル）カルバゾール−３，４−ジカルボキシイミド（表−６の化合物番号３５８）の製造
融点：２３６−２３８℃
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６ ，δ）：１．９２（ｍ，２Ｈ），２．７６（ｓ，３Ｈ），３．４０（ｍ，２Ｈ），４．４７（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），４．６６（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ），７．４２（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．７４（ｓ，１Ｈ），８．６６（ｓ，１Ｈ），１１．０４（ｓ，１Ｈ）．
【０１２４】
実施例１７：９−（３−アセトキシプロピル）−２，６−ジメチルカルバゾール−３，４−ジカルボキシイミド（表−６の化合物番号３５９）の製造
融点：２２８−２３０℃
ＩＲ（ＫＢｒ，ｃｍ−１）：３２３９，２９６９，１７５０，１７３２，１６９０．
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６ ，δ）：１．９２（ｓ，３Ｈ），２．１０（ｍ，２Ｈ），２．７５（ｓ，３Ｈ），３．９３（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２Ｈ），４．６２（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２Ｈ），７．４２（ｄ，Ｊ＝８，４Ｈｚ，１Ｈ），７．５８（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．７３（ｓ，１Ｈ），８．６５（ｓ，１Ｈ），１１．０４（ｓ，１Ｈ）．
【０１２５】
実施例１８：９−（３−アミノプロピル）−２，６−ジメチルカルバゾール−３，４−ジカルボキシイミド 塩酸塩（表−６の化合物番号３６３の塩酸塩）の製造
融点：２９０℃
ＩＲ（ＫＢｒ，ｃｍ−１）：３５０７，３４０１，３２６０，２９２６，１７６５，１６９７，１５２６．
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６ ，δ）：２．０８（ｍ，２Ｈ），２．７７（ｓ，３Ｈ），２．８２（ｍ，２Ｈ），４．５５（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），７．４５（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．６８（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７，８６（ｄｕｌｌｓ，３Ｈ），８．６７（ｓ，１Ｈ），１１．０８（ｓ，１Ｈ）．
【０１２６】
実施例１９：Ｎ−［３−（１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−６（１Ｈ）−イル−）プロピル］メタンスルホンアミド（表−１の化合物番号１８）の製造
融点：２１１−２１６℃（分解）
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６ ，δ）：２．０１（ｍ，２Ｈ），２．８９（ｓ，３Ｈ），３．０６（ｍ，２Ｈ），４．５８（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），７．１９（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３８（ｄｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．６６（ｄｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．８１（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．８８（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），８．０７（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），８．８８（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），１１．２０（ｓ，１Ｈ）．
【０１２７】
実施例２０：Ｎ−［３−（４−メチル−１，３−ジオキソ−２、３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−６−イル−プロピル］−アセトアミド（表−６の化合物番号３６７）の製造
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，δ）：１．８１（ｓ，３Ｈ），１．９２（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２ｈ），２．７７（ｓ，３Ｈ），３．０７（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２Ｈ），４．４８（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），７．３３（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．６０（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．６８−７．９５（ｍ，３Ｈ），８．８５（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），１１．０７（ｓ，１Ｈ）．
【０１２８】
実施例２１：６−（３−ヒドロキシプロピル）−３，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−１（２Ｈ）−オン（表−７化合物番号４２８）の製造
実施例２で得られた９−（３−ヒドロキシプロピル）カルバゾール−３，４−ジカルボキシイミド７００ｍｇを１２０ｍｌのテトラヒドロフランに溶解し、９０ｍｇの水素化リチウムアルミニウムを加えて室温で１５時間攪拌した。反応液に水を加え、酢酸エチルにて抽出し、飽和食塩水で洗浄し、芒硝乾燥した後、減圧濃縮した。得られた残渣を、塩化メチレン／メタノール＝５０／１にてカラム精製し、３−ヒドロキシ−６−（３−ヒドロキシプロピル）−３，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−１（２Ｈ）−オン１４０ｍｇを得た。これをエタノール２０ｍｌに溶解し、１０％パラジウム炭素５９ｍｇを加え、水素雰囲気中７２時間攪拌した。反応終了後、触媒をろ過して除き、ろ液を濃縮して得られた残渣を塩化メチレン／メタノール＝５０／１にてカラム精製し、目的物３６ｍｇを得た。
収率：２７％
融点：１９１−１９４℃（分解）
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６ ，δ）：１．９５（ｍ，２Ｈ），３．３９（ｍ，２Ｈ），４．５２（ｍ，４Ｈ），４．６７（ｔ，Ｊ＝４．７Ｈｚ，１Ｈ），７．２３（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ）７．６０（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．６５（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），７．８８（ｄ，Ｊ＝８．３ＨＺ，１Ｈ），８．６３（ｓ，１Ｈ），９．１２（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ）．
【０１２９】
実施例２１と同様の方法により、実施例２２から実施例２４の化合物を製造した。以下、その物性値を記す。
【０１３０】
実施例２２：６−（３−ヒドロキシプロピル）−４−メチル−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−１−オン（表−１１の化合物番号７０８）の製造
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ ２９５（Ｍ＋１）＋
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，δ）：１．９３（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ），２．５０（ｓ，３Ｈ），３．３５−３．４５（ｍ，２Ｈ），４．４４（ｓ，２Ｈ），４．４９（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，２Ｈ），４．６４（ｔ，Ｊ＝４．７Ｈｚ，１Ｈ），７．１９（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．４３−７．４８（ｍ，１Ｈ），７．６１（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．６８（ｓ，１Ｈ），８．６０（ｓ，１Ｈ），９．０６（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ）．
【０１３１】
実施例２３：６−（３−ヒドロキシプロピル）−４−メチル−１，２−ジヒドロ−６Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−３−オン（表−１２の化合物番号７７８）の製造
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ ２９５（Ｍ＋１）＋
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，δ）：１．９３（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２Ｈ），２．７８（ｓ，３Ｈ），３．３８−３．４５（ｍ，２Ｈ），４．４８（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），４．６５（ｔ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，１Ｈ），４．７７（ｓ，２Ｈ），７．２６（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．４３（ｓ，１Ｈ），７．４９（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．６６（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）７．９６（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），８．３０（ｓ，１Ｈ）．
【０１３２】
実施例２４：６−（３−ヒドロキシプロピル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−１−オン（表−７の化合物番号４３３）の製造融点：１９０−２００℃（分解）
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，δ）：２．０９（ｍ，２Ｈ），２．７６（ｍ，２Ｈ），３．５６（ｍ，２Ｈ），４．５２（ｓ，２Ｈ），４．５９（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），７．２５（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．５３（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．６４（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．７３（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．７４（ｓ，２Ｈ），７．９６（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），８．６７（ｓ，１Ｈ），９．１４（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ）．
【０１３３】
試験例： ＤＡＰＫ阻害作用
本発明の医薬のＤＡＰＫ阻害作用を、ＤＫ１タンパク質（ＤＡＰキナーゼのキナーゼ領域酵素で、ＤＡＰＫのＮ末から２８０アミノ酸残基を含むタンパク質）によるミオシン軽鎖（ｍｙｏｓｉｎ ｌｉｇｈｔ ｃｈａｉｎ；以下、ＭＣＬと略す）リン酸化の阻害作用によって確認した。
【０１３４】
（１）Ｔｒｘ−２ＭＬＣの調製
ＤＫ１によるリン酸化が認められたＭＬＣ基質（ＣＯＳＭＯ ＢＩＯ社；ｃｏｄｅ＃Ｍ−４３５７）をチオレドキシンタンパク質（Ｔｒｘ）に２つ繋げた基質タンパク質（以下、Ｔｒｘ−２ＭＬＣ）を作製するため、配列表の配列番号１のアミノ酸をコードするＤＮＡ配列にＢｇｌ ＩＩやＥｃｏＲ Ｉなどの制限酵素配列を付加したＤＮＡ配列（配列番号２）をＢｇｌ ＩＩおよびＥｃｏＲ Ｉで消化したのち、Ｂｇｌ ＩＩおよびＥｃｏＲ Ｉ消化したｐＥＴ３２ａベクター（Ｎｏｖａｇｅｎ社，Ｃａｔ．＃６９０３０−１）へ挿入し、Ｔｒｘ−２ＭＬＣ発現ベクターを構築した。ｐＥＴ３２ａはチオレドキシンおよびＨｉｓタグのついた融合タンパク質を発現できることから、構築したＴｒｘ−２ＭＬＣ発現ベクターから、チオレドキシン、Ｈｉｓタグ、２つのＭＬＣキナーゼ基質が融合したタンパク質（Ｔｒｘ−２ＭＬＣ）が発現される（配列番号３）。
【０１３５】
次ぎにＴｒｘ−２ＭＬＣ発現ベクターをタンパク質発現用大腸菌ＢＬ２１（ＤＥ３）（Ｎｏｖａｇｅｎ社，Ｃａｔ．＃６９４５０−３）へ導入し、最終濃度５０ｍｇ／ｍＬアンピシリンを含むＬＢ培地中で３０℃にて数時間培養し、最終濃度０．５ｍＭになるようにイソプロピルチオガラクトシド（Ｉｓｏｐｒｏｐｙｌｔｈｉｏｇａｌａｃｔｏｓｉｄｅ；以下、ＩＰＴＧと略す）を添加したのちさらに数時間培養を行い、Ｔｒｘ−２ＭＬＣを誘導発現させた。大腸菌を遠心分離にて回収し、１ｘ Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｂｕｆｆｅｒ（２０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌｐＨ７．９， ５００ｍＭ ＮａＣｌ，５ｍＭ イミダゾール）にて懸濁し、最終濃度１ｍＭフェニルメチルスルホニル フルオリド（ｐｈｅｎｙｌｍｅｔｈａｎｅ ｓｕｌｆｏｎｙｌ ｆｌｕｏｒｉｄｅ；以下、ＰＭＳＦと略す）を添加したのち、超音波破砕機にて大腸菌を破砕し、破砕液を遠心分離した。５０ｍＭＮｉＳＯ４にてニッケルをキレートし、１ｘ Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｂｕｆｆｅｒにて平衡化したＨｉｓ・Ｂｉｎｄ Ｒｅｓｉｎ（Ｎｏｖａｇｅｎ社、Ｃａｔ．＃６９６７０−４）を充填したカラムに、遠心分離した上清を加え、１ｘ Ｗａｓｈ Ｂｕｆｆｅｒ（２０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ｐＨ７．９，５００ｍＭ ＮａＣｌ，６０ｍＭイミダゾール）にて洗浄したのち、１ｘ Ｅｌｕｔｉｏｎ Ｂｕｆｆｅｒ（２０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ｐＨ７．９， ５００ｍＭ ＮａＣｌ、５００ｍＭ イミダゾール）にてＴｒｘ−２ＭＬＣをカラムから溶出させた。溶出したＴｒｘ−２ＭＬＣは、ＹＭ−１０（Ａｍｉｃｏｎ社、ｃｏｄｅ＃１３６３２）を用い限外ろ過にて濃縮したのち、等量の１ｘＰＢＳ（−）を添加しさらに濃縮し、２倍量の１ｘＰＢＳ（−）を添加しもう一度濃縮しバッファー置換及びイミダゾール除去を行い、精製Ｔｒｘ−２ＭＬＣを得た。
【０１３６】
（２）ＤＫ１によるＭＬＣリン酸化に対する本発明医薬の阻害作用
基質として上記（１）で調製したＴｒｘ−２ＭＬＣを９６ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅに固相化し、ＰＢＳ緩衝液にて洗浄後、０．１％ ｇｅｌａｔｉｎ水溶液にてブロッキングを行った。ＰＢＳ緩衝液にて２回、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ ７．５）にて１回洗浄した。そこへ反応溶液（最終濃度５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ ７．５）、８ｍＭ ＭｇＣｌ２、０．１ｍｇ／ｍＬ ウシ血清アルブミン、０．０１μｇ／ｍＬ ＤＫ１）を加えた。さらにＤＭＳＯ（最終濃度０．５％）あるいは化合物を加えた。（被検化合物は１０％ ＤＭＳＯにて調製して添加したため、最終の反応系には０．５％ ＤＭＳＯを含む。）ＡＴＰ溶液（最終濃度８μＭ ＡＴＰ、４μＣｉ／ｍＬ γ−３２Ｐ ＡＴＰ）添加によりリン酸化反応を開始し、２５℃で２０分反応させ、２０％リン酸水溶液を添加して反応を停止した。アスピレーターで反応液を抜き取り、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０−ＰＢＳ溶液にて洗浄した。洗浄液を十分に取り除き、液体シンチレーターを加えてマイクロプレートシンチレーションカウンターにてＴｒｘ−２ＭＬＣのリン酸化を解析した。
【０１３７】
結果を下記の表に示す。被検化合物はＤＡＰＫによるリン酸化を顕著に阻害した。この結果は、本発明の医薬がＤＡＰＫ活性を阻害することによって細胞死を抑制しうることを強く示唆しており、本発明の医薬が脳梗塞、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病等の細胞死を伴う疾患の予防及び／又は治療に有効であることを示している。
【０１３８】
【表５７】
実施例番号（化合物番号） ５０％阻害濃度（μＭ）
２ （８） １．０
４ （７８） ７．０
６ （８３） ０．０８４
７ （８５） １．８
８ （１０２） ０．２３
９（１０８） ２．２
１１（１１３） ０．４２
１２（１３２） ０．７７
１５（２２３） ０．５
１６（３５８） ６．６
１８（３６３） ０．０５８
２０（３６７） １．９
２１（４２８） ４．４
２２（７０８） ３．９
【０１３９】
製剤例
（１）錠剤
下記の成分を常法に従って混合し、慣用の装置により打錠した。
実施例４の化合物 ３０ｍｇ
結晶セルロース ６０ｍｇ
コーンスターチ １００ｍｇ
乳 糖 ２００ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム ４ｍｇ
【０１４０】
（２）軟カプセル剤
下記の成分を常法に従って混合し、軟カプセルに充填した。
実施例４の化合物 ３０ｍｇ
オリーブ油 ３００ｍｇ
レシチン ２０ｍｇ
【０１４１】
【発明の効果】
本発明の医薬はＤＡＰＫ阻害活性を有しており、ＤＡＰＫの異常昂進に起因する、脳梗塞、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病等の細胞死を伴う疾患に対して根本的な予防及び／又は治療を可能にする医薬として有用である。
【０１４２】
【配列表】
Claims (6)
- 下記一般式（Ｉ）：
- 該疾患が、細胞死を伴う疾患であることを特徴とする請求項１に記載の医薬。
- 該細胞死を伴う疾患が、脳梗塞、アルツハイマー病、パーキンソン病またはハンチントン舞踏病である請求項２に記載の医薬。
- 請求項１の一般式（Ｉ）で表されるピロロカルバゾール誘導体及びその塩、並びにそれらの溶媒和物及びそれらの水和物からなる群から選ばれる物質を有効成分として含む細胞死関連蛋白質リン酸化酵素の阻害剤。
- 下記一般式（Ｉ）：
- 請求項５に記載のピロロカルバゾール誘導体及びその塩、並びにそれらの溶媒和物及びそれらの水和物からなる群から選ばれる物質を含む医薬。
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| JP2003051824A JP2004256498A (ja) | 2003-02-27 | 2003-02-27 | ピロロカルバゾール誘導体 |
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|---|---|---|---|
| JP2003051824A JP2004256498A (ja) | 2003-02-27 | 2003-02-27 | ピロロカルバゾール誘導体 |
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|---|---|
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1948831A2 (en) * | 2005-10-26 | 2008-07-30 | Celera Diagnostics, LLC, . | Genetic polymorphisms associated with alzheimer's disease, methods of detection and uses thereof |
| WO2009081564A1 (ja) * | 2007-12-25 | 2009-07-02 | Pharmadesign, Inc. | ＤＡＰＫｓ阻害剤 |
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