JP2003519096A - Ｍｕｃ−１抗原に対する治療用抗体およびその使用方法 - Google Patents

Ｍｕｃ−１抗原に対する治療用抗体およびその使用方法

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Abstract

(57)【要約】 本発明は腫瘍関連ＭＵＣ−１に特異的に結合し、癌におけるそれらの効果を低下または阻止する結合剤を含む治療組成物を提供する。特に、本発明は、このような腫瘍関連ＭＵＣ−１上のペプチドと炭水化物の両方を含むエピトープに特異的に結合することができる結合剤を含む治療組成物を提供する。本発明はさらに、癌治療におけるこのような治療組成物の使用方法を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 ［発明の背景］ ［発明の分野］ 本発明は、癌治療のための治療用組成物に関する。特に、本発明は、ＭＵＣ−
１抗原を発現する癌の治療的処置に関する。
【０００２】 ［関連技術の概要］ 腫瘍関連抗原ＭＵＣ１は、多くの腺癌で発現する高分子量糖タンパク質である
。Gender, et al., Biol. Chem. 265:15286, 1990, Gender, et al., P.N.A.S.
U.S.A., 84:6060, 1987, Siddiqui, et al., P.N.A.S. U.S.A. 85:2320, 1988お
よびLigtenberg, et al., J. Biol. Chem. 265:5573 1990は、不可欠な膜糖タン
パク質の細胞外ドメインは、セリン、トレオニンおよびプロリンに富む２０個の
アミノ酸コア配列、ＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰの３０〜９０タ
ンデム型反復から主として構成されることを教示する。Burchell, et al., Canc
er Surv. 18:135, 1993 は、個体によって発現される反復数は、遺伝的に決定さ
れ、サイズ多型を生じることを教示する。
【０００３】 Price, et al., Breast 2:3, 1993は、ほとんどのＭＵＣ１反応性モノクロー
ナル抗体全ての最小配列認識は、ＡＰＤＴＲＰＡＰ内に存在し、タイプ１β-タ
ーンであると考えられることを教示する。Burchell, et al., Cancer Surv. 18:
135, 1993は、ＭＵＣ１タンデム型反復中の配列ＳＡＰＤＴＲＰは、免疫優性Ｂ
細胞エピトープであり、タンデム型反復のＴ細胞エピトープは、五量体ＰＤＴＲ
Ｐに位置付けられてきたことを開示する。隣接アミノ酸および糖残基は、自然の
分子の結合において重要な役割を果たし得る。１分子当たり３０〜９０の範囲で
、多数のタンデム型反復は、ＭＵＣ１ムチンに存在し得る。
【０００４】 腫瘍ＭＵＣ−１は、一般には低グリコシル化されていて、グリコシル化部位は
しばしば異常型糖鎖伸長を有する。Magnani, et al., Cancer Res. 43:5489, 19
83は、この異常型グリコシル化が正常な潜在的(cryptic)ペプチドエピトープの
露出および新規炭水化物エピトープの創出という結果を生じることを教示してい
る。それらの高分子量（２×１０５〜５×１０７ダルトン）ならびに広範囲なグ
リコシル化のために、細胞膜ムチンは柔軟な杆状体として存在し、細胞表面から
比較的大きな距離で突出している。したがって、ムチンは、多糖外皮の重要な成
分を形成し、おそらく抗体と免疫系の細胞との細胞接触の第１のポイントである
。
【０００５】 Rittenhouse, et al., Lab. Med. 16:556, 1985; Price, et al., Breast 2:3
, 1993; Metzgar, et al., P.N.A.S. U.S.A. 81:5242, 1984; Magnani et al.,
Cancer Res, 46:5489, 1983; Burchell, et al., Int. J. Cancer 34:763, 1984
; Linsley, et al., Cancer Res. 46:5444, 1986; and Neura, et al., in Phys
iology of the Gastrointenstinal Tract, Johnson, L.R. ed., 2 edition, Rav
en Press, New York, p 975-1009, 1987は、正常組織ムチンは、通常、上皮細胞
の頂端表面、特に粘膜表面上でのみ露呈および分泌されることを教示する。 Ho
et al., Cancer Res. 53:641, 1993は、ＭＵＣ１ムチンは、気管支、胸部、唾液
腺、膵臓、前立腺および子宮の頂端膜上で多く発現され、胃表面細胞、胆嚢、小
腸および結腸上皮上でわずかに発現することを教示する。細胞表面ＭＵＣ−１は
、タンパク質分解性の分解に対する保護を含み、微生物毒性に対するバリアをも
たらす重要な機能を果たす。Jentoff, Trends Biol. Sci. 15:29 1990; Parry,
et al., Exp. Cell Res. 188:302, 1990; Wong, et al., J. Immunol. 144:1455
, 1990; Devine and Mackenzie, BioEssays 14:619 1993は、それらは、病原体
と競合する共生株の選択のために、膜貫通シグナル変換、細胞-細胞相互作用、
細胞成長の調節、ならびに極性の維持のために、上皮表面の潤滑、それらの***
を助ける微生物のための炭水化物受容体の提示として作用することもできること
を教示する。
【０００６】 腫瘍ムチンは、体内の腫瘍生存の決定的機能を果たすと考えられる。それらは
、腫瘍内での高い代謝活性によって生じる低ｐHから腫瘍細胞を保護し得る。Ｍ
ＵＣ１は、腫瘍細胞が腫瘍組織と緊密凝集体を形成して、それによって転移潜在
性を増加させることを阻止すると考えられている。Regimbald et al., Cancer R
es. 56:4244, 1996は、ＭＵＣ１は、正常細胞上に存在するＩＣＡＭ１との分子
相互作用によって、腫瘍細胞を遠い部位へ循環するホーミングに関与しているこ
とを教示する。ムチンはまた、免疫系による認識から腫瘍細胞を保護し得る。De
vine and MacKenzie, BioEssays 14:619, 1993は、ＭＵＣ−１が循環中に流れる
と、細胞性および体液性免疫エフェクターに対する細胞表面抗原に立体障害を提
供することにより、おそらく観察される腫瘍特異的免疫抑制にてある役割を果た
すことを教示する。Codington, et al., in Biomembranes, Mansoe, L.A., ed.,
Plenum Pub. Corp, New York, pp 207-259, 1983; Miller, et al., J. Cell B
iol. 72:511, 1977; Hull, et al., Cancer Commun. 1:261, 1989は、細胞膜Ｍ
ＵＣ−１が他の細胞表面抗原を遮蔽し、免疫攻撃から癌細胞を保護することがで
きることを教示する。
【０００７】 患者の血清中の腫瘍関連ＭＵＣ−１の濃度上昇はまた、疾病の進行を示す腫瘍
負担の増加と相関してきた。Price et al., Breast 2:3, 1993 and Pihl et al.
, Pathol, 12:439, 1980は、ＭＵＣ−１の高い血清レベルは、癌患者の予後が不
十分であることと相関していることを教示する。
【０００８】 したがって、腫瘍関連ＭＵＣ−１に選択的に結合し、癌におけるその影響を低
減、逆転または予防することができる新規治療用組成物が必要とされている。米
国特許第５，５０６，３４３号(Kufe, 1996)は、完全にグリコシル化されていな
いペプチドが抗体によって認識されるときにのみ、腫瘍関連ＭＵＣ−１抗体の特
異性が達成され得ることを教示する。しかしながら、残念なことに、この抗体は
、腫瘍関連ＭＵＣ−１を発現する腫瘍に対して治療的に有効であることを示して
はいなかった。腫瘍関連ＭＵＣ−１はグリコシル化を低減および変化させられる
が、これらはなおも癌に対して特異的な炭水化物構造を保持している。したがっ
て、ペプチドおよび腫瘍特異的炭水化物の両方を含むＭＵＣ−１のエピトープに
結合することができる結合剤を含む治療用組成物が特に必要とされている。
【０００９】 ［本発明の簡単な概要］ 本発明は、腫瘍関連ＭＵＣ−１に特異的に結合し、癌においてそれらの影響を
低減、逆転または予防する結合剤を含む治療用組成物を提供する。特に、本発明
は、このような腫瘍関連ＭＵＣ−１上のペプチドおよび炭水化物の両方を含むエ
ピトープに特異的に結合することができる結合剤を含む治療用組成物を提供する
。さらに、本発明は、癌治療におけるこのような治療用組成物の使用方法を提供
する。本発明者らはおどろくべきことに、腫瘍関連ＭＵＣ−１に対する相対的特
異性は、炭水化物を含むエピトープを認識する結合剤の場合に、かならずしも犠
牲にされないことを見出した。本発明の組成物および方法は、腫瘍関連ＭＵＣ−
１抗原を産生する腫瘍の治療的処置において新しい期待を提供する。
【００１０】 第１態様では、本発明は、腫瘍関連ＭＵＣ−１に特異的に結合し、かつ、腫瘍
関連ＭＵＣ−１を発現する腫瘍を有する哺乳動物の腫瘍負担を低減するか、また
は生存を延ばすことにおいて有効である結合剤を含む治療用組成物を提供する。
ある好ましい実施態様では、ＭＵＣ−１は、ヒトＭＵＣ−１である。好ましい結
合剤は、炭水化物を含むＭＵＣ−１エピトープに対して特異的に結合する。特に
好ましい結合剤としては、抗体および抗体誘導体を含むペプチドまたはペプチド
擬似体が挙げられる。
【００１１】 第２態様では、本発明は、腫瘍関連ＭＵＣ−１抗原を含む腫瘍を保有する哺乳
動物を治療的に処置する方法を提供する。本発明のこの態様による方法は、本発
明の結合剤の有効量を哺乳動物へ投与することを含む。好ましくは、結合剤は低
投与量で静脈内または皮下投与される。
【００１２】 ［好ましい実施形態の詳しい説明］ 本発明は、癌治療のための治療用組成物に関する。特に、本発明は、ＭＵＣ−
１抗原を発現する癌の治療的処置に関する。本明細書中に記載する特許および刊
行物は、この分野の知識を反映し、その全体を参照として本明細書に援用される
。これらの参照文献のいずれかおよび本明細書の教示間に矛盾がある場合には、
後者を優先させる。
【００１３】 本発明は、腫瘍関連ＭＵＣ−１のエピトープに特異的に結合し、かつ、癌にお
けるそれらの影響を低減、逆転または予防する結合剤を含む治療用組成物を提供
する。特に、本発明は、このような腫瘍関連ＭＵＣ−１のペプチドおよび炭水化
物の両方を含むエピトープに特異的に結合することができる結合剤を含む治療用
組成物を提供する。さらに、本発明は、癌治療においてこのような治療用組成物
を使用する方法を提供する。本発明の組成物および方法は、腫瘍関連ＭＵＣ−１
を産生する腫瘍の治療的処理において新規な期待を提供する。
【００１４】 第１態様では、本発明は、腫瘍関連ＭＵＣ−１に特異的に結合し、かつ、腫瘍
関連ＭＵＣ−１を発現する腫瘍を有する哺乳動物を治療的に処置するに有効であ
る結合剤を含む治療用組成物を提供する。ある好ましい態様では、ＭＵＣ−１は
、ヒトＭＵＣ−１である。本明細書中に使用する「治療的に処置する」または「
治療的処置」との用語は、腫瘍容積において統計的に有意な低減を生じるか、あ
るいは腫瘍を保有する哺乳動物の生存を統計的に有意に延ばすことを意味する。
「結合剤」とは、生理的条件下にてＭＵＣ−１に結合し、その生物活性を阻止す
る分子または高分子である。「特異的に結合する」および「生理的条件下にて結
合する」とは、体内またはイオン強度に関して生理学的条件に近い条件で（例え
ば、１４０ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＭｇＣｌ２）、少なくとも１０６Ｍ−１、
最も好ましくは少なくとも１０９Ｍ−１の親和性を有する共有または非共有結合
を形成することを意味する。実際には、腫瘍負担の低減または延命から、体内の
このような結合が推測されるであろう。好ましい実施態様では、結合剤は、炭水
化物を含む免疫学的決定基を含むエピトープを特異的に結合する。腫瘍ＭＵＣ−
１は、一般的には低グリコシル化されていて、グリコシル化部位は異常型糖鎖伸
長で充填され、したがって、腫瘍ＭＵＣ−１と通常、区別されている。異常型グ
リコシル化は、通常、潜在的ペプチドエピトープの露出および新規炭水化物エピ
トープの創出を生じる結果となる。本発明の好ましい結合剤は、これらの新規エ
ピトープに結合することができる。「エピトープ」とは、本発明の結合剤によっ
て生理学的条件下にて結合される抗原の一部分である。「免疫学的決定基」とは
、エピトープの全体の三次元形状に寄与する三次形状である。好ましい実施態様
では、結合剤は、アミノ酸配列ＤＴＲＰＡＰを有するペプチドのアミノ酸残基か
らの免疫学的決定基を含むエピトープを結合する。「アミノ酸残基」とは、特定
のペプチドの適所にあるアミノ酸である。本明細書中で使用する「生物活性の阻
止」とは、腫瘍を保有する動物または患者において、腫瘍負担の統計的に有意な
低減か、または統計的に有意な延命を意味する。このような統計的有意な阻止は
、本明細書の例で説明される。本発明の結合剤のある好ましい実施態様は、非放
射標識性である。本発明のある結合剤は、循環性および腫瘍結合性腫瘍関連ＭＵ
Ｃ−１の両方に結合し、ここで、「腫瘍関連」とは、腫瘍へのその近接性よりも
むしろ腫瘍細胞により作製されるＭＵＣ−１の改変グリコシル化を言う。特に好
ましい結合剤は、Ａｌｔ−１(ＡＴＣＣ特許寄託番号ＰＴＡ−９７５)である。
【００１５】 治療のための好ましい腫瘍としては、乳癌、結腸癌、食道扁平上皮癌、膵臓癌
、前立腺癌および多発性骨髄腫が挙げられあるが、これらに特に制限されない。
【００１６】 好ましくは、本発明の結合剤は、ペプチドまたはペプチド擬似体である。本発
明の目的において、「ペプチド」とは、ペプチド結合によって直線配列で互いに
連結したアミノ酸残基の一次元配列を含む分子である。本発明のかかるペプチド
としては、約３〜約５００個のアミノ酸を含んでもよく、さらに、二次、三次ま
たは四次構造、ならびに他のペプチドまたは他の非ペプチド分子との分子間結合
を含んでもよい。このような分子間結合としては、共有結合（例えば、ジスルフ
ィド結合）を介して、またはキレート化、静電気相互作用、疎水性相互作用、水
素結合、イオン双極子相互作用、双極子−双極子相互作用、または上記の組合せ
を介してもよいが、これらに特に限定されない。
【００１７】 ある好ましい実施態様では、このような結合剤は、生理的条件下にて炭水化物
を含むＭＵＣ−１エピトープに結合する抗体の相補的決定領域、またはこのよう
な相補的決定領域のペプチド擬似体を含む。本発明の目的では、抗体の「相補的
決定領域」（ＣＤＲ）は、生理条件下にてエピトープに結合する抗体の一部であ
り、かかる結合に必要なフレームワーク領域を含み、好ましくはヒト重鎖Ｖ、Ｄ
およびＪ領域、ヒト軽鎖ＶおよびＪ領域、および／またはそれらの組合せにより
コードされるアミノ酸残基のサブセットからなる。ある好ましい抗体は外因性抗
体であり、すなわち、それらは抗体を投与される種とは異なる種に由来する。こ
のような抗体は、ヒト抗外因性抗体（ＨＡＸＡ）の誘発を引き起こすであろう。
好ましい抗体としては、マウス抗体が挙げられ、それはヒト抗マウス抗体（ＨＡ
ＭＡ）応答を誘発する。
【００１８】 当業者は、本明細書に開示する抗体から、当業者は様々な抗体誘導体を作製す
ることが可能であると認識するであろう。例えば、Jones et al., Nature 321:5
22-525 (1986)は、ヒト抗体のＣＤＲをマウス抗体から得られるもので置換する
ことを開示する。Marx, Science 229:445-456 (1985)は、マウス可変領域および
ヒト定常領域を有するキメラ抗体について議論している。Rodwell, Nature 342:
99-100(1989)は、抗体CDR情報から得られる低分子量認識要素について議論して
いる。Clackson, Br, J. Rheumatol. 3052:36-39 (1991)は、Ｆｖ断片誘導体、
１本鎖抗体、融合タンパク質キメラ抗体およびヒト化ゲッ歯類抗体を含む、遺伝
子的に操作したモノクローナル抗体について議論している。Reichman et al., N
ature 332:323-327 (1988)は、ラット高頻度可変領域がグラフトされているヒト
抗体について議論している。Verhoeyen, et al., Science 239:1534-1536(1988)
は、ヒト抗体上へのマウス抗原結合部位のグラフトを教示する。
【００１９】 さらに、本明細書中に開示する抗体から、当業者はこのような相補的決定領域
と同等または優れた結合特性を有するペプチド擬似体を設計および製造すること
が可能である（例えば、Horwell et al., Bioorg. Med. Chem. 4:153 (1996); L
iskamp et al., Recl. Trav. Chim. Pays-Bas 1:113 (1994); Gante et al., An
gew. Chem. Int. Ed. Engl. 33:1699 (1994); Seebach et al., Helv. Chim. Ac
ta 79:913 (1996)を参照）。したがって、かかる抗体誘導体およびこれらのペプ
チド擬似体の全てが、本発明の範囲内にあると考えられる。本発明の組成物は、
生理学的に許容可能な希釈剤、安定剤、局在化剤または緩衝剤をさらに含んでい
てもよい。
【００２０】 いくつかの好ましい実施態様では、本発明の結合剤は、好ましくは化学的また
は光力学的アプローチによって活性化される。好ましい化学的アプローチは、ホ
ルムアミジンスルホン酸などの有機還元剤、水銀（Ｉ）イオン、スズ（ＩＩ）イ
オン、シアニドイオン、水素化シアノホウ素ナトリウムおよび水素化ホウ素ナト
リウムなどの無機還元剤、ジチオトレイトール、メルカプトエタノールおよびメ
ルカプトエタノールアミンなどのチオール交換試薬、チオレドキシンなどのタン
パク還元剤を含む。これらの試薬の使用により、結合剤内のいくつかのジスフィ
ドの還元が生じ、いくつかのスルフヒドリル基を有する結合剤が生産される。か
かる基の存在は結合剤の三次構造を変化させることができる。このような構造変
化は結合剤の免疫反応性を変調することができる。このような変調は結合剤が投
与される固体の抗イディオタイプ応答および／または細胞性応答を改善すること
につながり得る。
【００２１】 ある実施態様では、活性化は、光力学的アプローチを利用する。例えば、国際
出願ＰＣＴ／ＵＳ９３／０６３８８を参照。好ましくは結合剤は、好ましくは約
１０〜約８２０ｎｍのスペクトル範囲にある紫外線を照射される。より好ましく
は、少なくとも９０％及び最も好ましくは少なくとも９９％の照射が、２５０〜
３２０ｎｍスペクトル範囲にある。このようなＵＶ照射は、水素または重水素放
出ランプ、キセノンアークランプ、または水銀ランプなどの光源から便宜的に供
給される。従来のフィルターは、最適スペクトル波長を得るために使用してもよ
い（例えば、Photochemistry, pp. 686-798 (John Wiley & Sons, N.Y., 1996を
参照)。
【００２２】 ある好ましい実施態様では、本発明の好ましい結合剤は、光力学剤と任意に結
合させてもよい。好ましくは、このような結合剤は、共有結合、またはリポソー
ム会合による。リポソーム会合は、好ましくはリポソーム形成試薬の存在下で光
力剤を結合剤と混合することにより達成させる。ある好ましい実施態様では、本
発明の結合剤は、リポソーム形成試薬に共有結合している。好ましい光力剤はハ
イポクレリン(hypocrellin)である。
【００２３】 いくつかの好ましい実施態様では、本発明の結合剤は、下記モノクローナル抗
体：ＨＭＰＶ、ＶＵ−３−Ｃ６、ＭＦ０６、ＶＵ−１１−Ｄ１、ＭＦ３０、ＢＣ
Ｐ８、ＤＦ３、ＢＣ２、Ｂ２７．２９、ＶＵ−３−Ｄ１、７５４０ＭＲ、ＭＦ１
１、Ｂｃ４Ｅ５４９、ＶＵ−１１−Ｅ２、Ｍ３８、Ｅ２９、ＧＰ１．４、２１４
Ｄ４、ＢＣ４Ｗ１５４、ＨＭＦＧ−１、ＨＭＦＧ−２、Ｃ５９５、Ｍｃ５および
Ａ７６−Ａ／Ｃ７を特に除外する。これらの各名称は、抗−ＭＵＣ−１抗体に関
する文献で使用されている。
【００２４】 理論により拘束されることを望むものではないが、本発明のある結合剤は、一
般的に抗イディオタイプネットワークを含む機構中で作用すると考えられている
。抗イディオタイプネットワークの誘発に加えて、本発明の結合剤の投与は、Ｍ
ＵＣ−１との複合体の形成につながり、これは免疫系に対するより有効な抗原提
示を誘発すると仮定される。抗原と抗体との間の複合体形成は、いくつかの効果
を有し得る。本発明の好ましい結合剤は、循環性および細胞性ＭＵＣ−１腫瘍関
連抗原の両者に結合することができる。したがって、ＭＵＣ−１抗原の可能性あ
る免疫抑制効果は、循環系から複合体を除去することによって不活性化され得る
。抗原と抗体の複合体は、Ｆｃ受容体または膜Ｉｇ受容体（マクロファージ、樹
状細胞、Ｂ細胞）を保持する抗原提示細胞に対して向けられる。特異抗原−提示
細胞による抗原の取り込みの増加は、Ｔ細胞への抗原誘導ペプチドの大きな提示
の増加をもたらすであろう。抗原と抗体との複合体形成は、抗原がどのように抗
原提示細胞内で処理されるかを変更して、新規な免疫休眠または潜在的エピトー
プに露出し、しがって、腫瘍関連抗原に対する許容範囲を克服する。本発明の結
合剤が、少なくとも部分的に炭水化物であるエピトープを結合するから、これら
はＴ細胞上のレクチン受容体の炭水化物の相互作用を阻止することによって免疫
抑制を阻止するようにも作用する。もちろん、光力学剤に結合する本発明の結合
剤の実施形態は、腫瘍細胞への直接的な細胞毒を通じても作用することができる
。
【００２５】 したがって、第２の態様では、本発明は、腫瘍関連ＭＵＣ−１抗原を含む腫瘍
を保有する哺乳動物を治療的に処置する方法を提供する。本発明のこの態様にお
ける方法は、本発明の有効量の結合剤を哺乳動物に投与することを含む。好まし
くは、結合剤はペプチド、またはペプチド疑似体であり、もっとも好ましくは抗
体または抗体誘導体、またはこれらのペプチド疑似体である。好ましくは、哺乳
動物はヒトである。結合剤は好ましくは非経口、より好ましくは静脈内または皮
下投与される。ある好ましい実施形態では、静脈内注射がアジュバントの非存在
下で実施される。ある好ましい実施形態では、結合剤は、ＲＩＢＩなどのアジュ
バントの存在下で皮下投与される。ある実施形態では、結合剤はＫＬＨまたは外
因性免疫グロブリンなどの免疫原性担体分子に共有結合されている。ある好まし
い実施形態では、本発明の方法は非放射性標識化されている結合剤を使用する。
本発明方法のある好ましい実施形態は、循環性および腫瘍結合性腫瘍関連ＭＵＣ
−１の両方に結合する結合剤を使用する。ここで、「腫瘍関連」とは、腫瘍対す
る近接性よりも、むしろ腫瘍細胞によって作成されたＭＵＣ−１の改変グリコシ
ル化をいう。
【００２６】 好ましくは、結合剤は約８ｍｇ／３０ｋｇ体重未満、好ましくは約３ｍｇ／３
０ｋｇ体重未満、より好ましくは約０．５〜約２ｍｇ／３０ｋｇ体重、なおもよ
り好ましくは約０．５〜約１．５ｍｇ／３０ｋｇ体重、およびもっとも好ましく
は約１ｍｇ／３０ｋｇ体重の投与量で投与する。ある実施態様では、投与量は抗
体媒介毒性を誘発しない結合剤の最大量であるであろう。ある実施態様では、投
与量はＡＤＣＣ ＯＲ ＣＤＣを産生しない結合剤の最大量である。これらの実
施態様では、ＡＤＣＣは本発明の結合剤とともに５１Ｃｒ−標識腫瘍細胞をイン
キュベートし、新鮮なヒトＰＢＭＣを添加し、続いて４時間、インキュベートし
て、特異的分解を測定して評価する。ＡＤＣＣは、もしも特異的分解が１５％未
満であるなら、存在しないとみなされる。「抗体媒介毒性」は、異常血清化学、
腎臓機能障害、血清病またはアナフィラキシーの徴候および症状などの臨床的毒
性を意味する。ある実施態様では、単一のかかる投与量は哺乳動物を治療的に処
置するであろう。他の実施態様では、処置は例えば１年に４回、３年以上、継続
してもよい。
【００２７】 「有効量」との用語は、哺乳動物を治療的に処置するのに十分な量を意味する
。「治療的に処置する」、「治療的処置」、「結合剤」、「ペプチド」、「ペプ
チド疑似体」、「抗体」および「抗体誘導体」との用語は、全て本発明の第１の
態様について記載したように使用される。
【００２８】 下記実施例は、本発明のある好ましい実施態様をさらに説明するよう意図され
、本発明の範囲を狭めるように解釈されるものではない。下記実施例に使用した
結合剤は、特に断りがない限り、Ａｌｔ−１である。
【００２９】 例１ 結合剤を産生するためのハイブリドーマの生成 結合剤はＭＵＣ１(Talor-Papadimitriou. Int. J. Cancer 49:1, 1990)として
知られる腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）を発現する腫瘍を有する患者の免疫療法におい
て使用するために調製された。結合剤は、活性マウスモノクローナル抗体（ＭＡ
ｂ）、ＩｇＧｌｋサブクラス免疫グロブリンである。結合剤は、多くの腫瘍上に
発現する高分子量糖タンパク質であるＭＵＣ１へ高い親和性で結合する(Ho, et
al., Cancer Res. 53:641, 1993)。結合剤は、ＭＵＣ１タンデム型反復ペプチド
配列内に配列ＤＴＲＰＡＰを特異的に認識する。この結合剤は、Ａｌｔ−１と呼
ばれる。結合剤を分泌するマウス細胞系またはハイブリドーマは、ＭＵＣ１でマ
ウスを免疫化し、抗体−分泌脾臓細胞を収集および不死化することによって生成
する。ハイブリドーマ発生に関する工程は、（ａ）いくつかの起源からのＭＵＣ
１でのＢＡＬＢ／ｃＣｒＡｌｔＢＭ雌マウスの免疫化、（ｂ）マウスからの脾臓
細胞の収集、（ｃ）ミエローマ細胞系ＳＰ２／０−ＡｇＩ４とそれらを融合する
ことによる、脾臓細胞の不死化、（ｄ）ＭＵＣ１結合能力に関して分泌抗体をア
ッセイすることによる所望のクローンのスクリーニングおよび選択、（ｅ）適当
な培地中での選択クローンの増殖、（ｆ）ＩｇＭからＩｇＧへのクローンのイソ
タイプ転換、および（ｇ）連続０．２μｍ濾過および配合緩衝液（１０ｍＭピロ
リン酸ナトリウム−ＨＣｌ、ｐＨ８．０）を用いた希釈を含んでいた。ＭＵＣ１
発現乳癌細胞およびＭＵＣ１形質転換マウス細胞に対する結合剤の特異的結合性
は、ＦＡＣＳ、蛍光顕微鏡法および他の結合アッセイ法で実証された。
【００３０】 例２ 結合剤の精製、調製物活性化および配合 成長培地は例１のハイブリドーマから収集した。結合剤は、（ａ）０．２２μ
ｍフィルターを用いた微量濾過による成長培地の清澄、（ｂ）平衡時の４０ｍＭ
から溶出時の１３０ｍへのＮａＣｌ勾配を使用する５０ｍＭトリス緩衝液、ｐＨ
８．０中のＱセファロース(登録商標)ＦＦ(Amersham Pharmacia Biotech)上の陰
イオン交換クロマトグラフィーによって、成長培地から精製した。これに続いて
、０．２２μｍ微量濾過、（ｃ）平衡用１．０Ｍグリシン、３．０Ｍ ＮａＣｌ
、ｐＨ８．８から、２００ｍＭグリシン、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ２．８を
含む溶出緩衝液への緩衝液中の変化の後に溶出させる、プロテインＡセファロー
ス(S登録商標)ＦＦ(Amersham Pharmacia Biotech)のアフィニティクロマトグラ
フィー、（ｄ）ｐＨ３．５で４０分間のインキュベーション、（ｅ）０．２２μ
ｍ微量濾過に続くＶｉｒｅｓｏｌｖｅフィルター(Millipore Corporation)上で
のナノメーター濾過、（ｅ）０．２２μｍ微量濾過に続く５０ｋＤ ＮＭＷＣＯ
Ｂｉｏｍａｘ膜(Millipore Corporation)を用いた接線フロー限外濾過による
濃縮およびダイアフィルトレーションを行った。
【００３１】 次いで、精製結合剤は、以下の様式で活性化した。精製結合剤（低モル濃度リ
ン酸塩中、５ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ５〜１０）のバルク液体を賦形剤（塩化第一スズ
）および還元剤（ピロリン酸ナトリウム）と混合して、１つのランプ当たり３〜
９ワットの８個のランプからの２００〜４００ｎｍ照射で、９０％が３００ｎｍ
＋／−２０ｎｍに曝露して、活性結合剤を得た。活性結合剤は同じ還元剤および
緩衝液複合体とともに、凍結または凍結乾燥形態の活性結合剤２ｍｇを含むバイ
アル中に供給した。最終配合物の調製は、結合剤の投与前４時間以内に無菌条件
下で行った。結合剤は、無菌方法を用いた以下の手法で調製した。本発明者は、
結合剤バイアル最上部の金属タブを折り曲げ、アルコールでゴムセプタムを消毒
した。適切なシリンジ中に、塩化ナトリウム注入ＵＳＰ２．０ｍＬを引き上げ、
バイアルに添加した。本発明者はバイアルをゆっくり回すことによりバイアル内
容物を混合して、結合剤溶液を生成させた。本発明者は泡が形成するように激し
く混合しなかった。本発明者はこの工程後、直ちに時計の時刻を記録した。バイ
アルは溶液が外来または微粒子物質を確実に含有しないために試験した。
【００３２】 例３ 正常および腫瘍組織と結合剤の反応 例２の結合剤の組織反応性を、色凍結組織を染色する、アビジン−ビオチン増
幅免疫ペルオキシダーゼ技法を用いた免疫組織化学的手法によって試験した。予
備的研究では、結合剤を用いて、正常ヒト組織およびヒト腫瘍の選択パネル中の
ＭＵＣ１抗原の発現および分布を試験し、ＭＵＣ−１発現組織の特異的染色のた
めの抗体または最終生成物の最適濃度を決定した。特異的染色は***、大腸およ
び肺の腫瘍細胞中、ならびに正常***、腎臓、大腸および肺の上皮細胞中で観察
された。第２の研究では、正常ヒト組織およびヒト腫瘍のより広いパネルへの結
合剤の結合および分布を、対照としてイソタイプ適合抗体（ＭＯＰＣ−２１）を
使用して行った。結合剤との特異的染色は、乳癌、大腸癌、食道扁平上皮癌、膵
臓癌および前立腺癌に見られた。いくつかの特異的染色もまた、黒色腫および肉
腫でも観察された。結合剤による染色は、いくつかの正常組織においても観察さ
れ、上皮細胞へ主に局在化していた。これらの結果は、正常ヒト組織およびヒト
腫瘍におけるＭＵＣ１ペプチドの発現およびＭＵＣ１ｍＲＮＡに関する文献報告
と一致し、これらの組織への本発明の結合剤の反応性を証明している。
【００３３】 例４ 抗イディオタイプ応答の生成 例２の結合剤は、イディオタイプとして知られている抗原（ＭＵＣ１）認識に
特異的な可変領域を有する。これらの可変領域は、それ自体、免疫原性であり、
Ａｂ２として知られている一連の抗イディオタイプ抗体を生成することができる
。これらのＡｂ２のいくつかは、元の抗原（ＭＵＣ１）の三次元構造またはペプ
チド配列を有効に模倣し、元の抗原によって誘発される免疫応答と類似した特異
的な免疫応答を生じるために使用することができる。したがって、結合剤の投与
は、Ａｂ２の形態で抗原疑似体または内部の像抗原を生成すると期待され、特異
的な抗ＭＵＣ１免疫応答を生じることができる。結合剤によるＡｂ２の誘発を証
明するために、ＲＡＳアジュバント(RIBI Adjuvant System)と組み合せて、ＢＡ
ＬＢ／ｃマウスをＫＬＨ(Keyhole Limpet Hemicyanin)に結合した結合剤で免疫
化した。ＫＬＨおよびアジュバントは、マウス抗体（抗原として）に対するマウ
スでの通常、弱い免疫応答を増強させるために、これらの実験に含まれていた。
イソタイプ適合抗体は対照として作用した。６回の各注射を投与した後（腹腔内
投与と皮下投与間で交互に）、血清を固相上の結合剤のＦ（ａｂ’）２断片を使
用したサンドイッチアッセイ法で分析した。結合マウス抗体は、トレーサーとし
てヤギ抗マウスＩｇＧ−（Ｆｃ−特異的）−ＨＰＲにより検出した。ＫＬＨに結
合した結合剤の注射は、イソタイプ適合対照ＭＡｂよりも大きな抗イディオタイ
プ抗体（Ａｂ２）の産生を生じる結果となった。測定可能な体液応答を誘発する
ためには、用量５０μｇ／マウス（０．８３ｍｇ／ｍ２）で、最少４回注射を必
要とした。血清中の抗結合剤（Ａｂ２）がタイプＡｂ２（β）であることを証明
するために、結合剤に対する結合性をＭＵＣ１の存在下で試験した。この結合性
はＡｂ２（β）タイプ抗体において予期されたように、ＭＵＣ１の存在によって
阻止された。Ａｂ３抗体はＭＵＣ１ ＥＬＩＳＡを使用して血清試料中で測定し
た。抗−抗イディオタイプ抗体（Ａｂ３）は対照血清に対する結合剤で免疫化さ
れたマウスの血清中にて検出された。Ａｂ２レベルと同様に、Ａｂ３レベルは、
６回の注射後にはそのピークに達した。さらに、結合剤に対して生じたマウスモ
ノクローナルＡｂ２は、次に、ラットでの抗−抗イディオタイプ（Ａｂ３）抗体
を生成するために使用された。このようにして免疫化された３匹のラット中、２
匹はマウスモノクローナル抗体Ａｂ２に対して陽性結合を示した。異なった種に
おける抗ＭＵＣ１抗体の生成が、基準抗原、すなわちＭＵＣ１によってＡｂ１お
よびＡｂ２の間の結合性を阻止する能力に加えて、Ａｂ２βの分類においても重
要な判定基準であると考えられた。
【００３４】 例５ 細胞応答の誘発 Ｔ細胞増殖は、例２の結合剤およびＭＵＣ１の注射に対する特異的応答を示し
、イディオタイプ特異的Ｔ細胞（Ｔ２）および抗イディオタイプ特異的Ｔ細胞（
Ｔ３）の存在を示した。さらに、マウスモノクローナル抗体Ａｂ２もまたＭＵＣ
１特異的Ｔ細胞によって認識される能力について評価した。Ａｂ２に対する応答
におけるこのようなＴ細胞の増殖は、３Ｈ−チミジン取り込みによってモニター
され、ＭＵＣ１と比較された。このアッセイは、３Ｈ−チミジン取り込み研究と
して行った。脾臓を、免疫化マウスの各群から取り出し、リンパ球をＨｉｓｔｏ
ｐａｑｕｅ１０７７(Sigma)上の赤血球細胞から分離した。細胞を９６ウェルＵ
字底プレート(Becton Dickinson)中へ、ＡＩＭ−Ｖ無血清培地(Gibco)１００μ
Ｌ中、２×１０５細胞／ウエルの濃度で播種した。刺激剤を３倍添加し、３日間
、細胞とともにインキュベートした。細胞を１ウエル当たり、１μＣｉ［３Ｈ−
メチル］チミジンとともに２４時間、パルスにかけた。細胞を細胞収穫器(Skatr
on)中に収集し、放射能をベータカウンター(Beckman)でアッセイした。刺激剤(s
timulator)は、ＭＵＣ−１、ＭＵＣ−１ペプチド、抗ＭＵＣ−１抗体、対照抗体
およびフィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）を含んでいた。Ａｂ２およびＭＵＣ１は
細胞性免疫応答のさらなる証拠をもたらす同様な反応性を示す。
【００３５】 例６ 用量計画の決定 ラット抗マウス抗体（ＲｔＡＭＡ）およびラット抗イディオタイプ抗体（Ａｂ
２）の発生に関する例２の結合剤の用量応答は、正常ラットにおいて検討した。
雄スプラークドーリーラットを静脈内投与によって２６μｇ〜２１３μｇの範囲
の用量、および皮下投与によって１０６μｇ１回用量にて、結合剤で免疫化した
。免疫化は２週間の間隔で５回実施した。基線および試験血清試料（注射後１週
間）を各ラットから得た。２つのＥＬＩＳＡアッセイをＲｔＡＭＡおよびＡｂ２
を測定するために行った。ＲｔＡＭＡ ＥＬＩＳＡは、マウスＩｇＧ１抗体の定
常領域に結合する抗体量を測定する。Ａｂ２ ＥＬＩＳＡは、結合剤の結合領域
に反応性を示す抗体量を測定する。５３μｇ（１．３ｍｇ／ｍ２）の用量は、静
脈内注射によりＲｔＡＭＡを誘発する際に最適であることが明らかになった。ア
ジュバントとの抗体の皮下注射は、静脈内投与された同じ用量よりも３倍高く、
かつ、最も有効な静脈内用量（１．３ｍｇ／ｍ２）よりも２倍高いという、より
強い応答を誘発した。用量１．３ｍｇ／ｍ２が持続性ＲｔＨＡＭＡ応答を誘発し
た。２．６ｍｇ／ｍ２の注射回数を増加させて応答が低下し、かつ、試験した最
も高い用量（５．２ｍｇ／ｍ２）では無反応が得られたため、より高い用量はア
ネルギーを誘発するようである。結合剤はまた、抗イディオタイプ応答を誘発し
たが、その応答は注射した用量に比例していなかった。ＲｔＡＭＡにおいて効果
的な同じ用量もまた、抗イディオタイプ抗体の誘発における最適用量であること
が観察された。静脈内用量スケジュールでは、用量１．３ｍｇ／ｍ２が強いＡｂ
２応答を誘発するのに有効な唯一の用量であった。全体として最も強いＡｂ２応
答を誘発する皮下用量２．６ｍｇ／ｍ２での抗体の皮下注射を用いて、より良い
応答を生じた。全体では、ＲｔＡＭＡとＡｂ２応答の間に相関関係が見られ、同
じ静脈内投与用量における最適応答を示す。しかしながら、Ａｂ２およびＲｔＡ
ＭＡの絶対量は直接的に比較できなかった。用量１．３ｍｇ／ｍ２（およそ２ｍ
ｇ／６０ｋｇ患者に等しい）が、結合剤の静脈投与後に体液応答を誘発するのに
最適であるようである。ＲｔＡＭＡは早くも最初の免疫化後、６週間目で検出さ
れ、Ａｂ２は４週間目（皮下免疫化）、または１０週間目（静脈内免疫化）に検
出することができた。静脈内経路は皮下経路よりも免疫応答を誘発するにはより
強い免疫化を必要とした。このより弱い免疫応答は、この関連種、ラットでのマ
ウスタンパクの低下した免疫原性によるものであろう。これらの実験から、治療
的処置において示唆される用量は、免疫応答で循環するいかなる抗原の影響を考
慮しなければ、患者当たり約２ｍｇである。
【００３６】 例７ 用量計画の確認 ラットで行った研究と同様に、ウサギにおける免疫応答を誘発するのに必要な
用量を検討するために用量増大研究を行った。ウサギは、ラットまたはマウスの
いずれかよりもマウスＭＡｂに対して、ヒト（外来として認識）において見られ
る応答に一層近接するために使用した。ウサギを種々の量の抗体で免疫化し、血
清試料をＡｂ２およびウサギ抗マウス抗体（ＲＡＭＡ）について分析した。雌ニ
ュージーランド白ウサギを、静脈内投与によって３つの用量レベル（１２５、２
５０および５００μｇ）および皮下投与によって１つの用量（１２５μｇ）にて
、例２の結合剤で免疫化した。基線および試験血清試料（およそ２週間毎に得た
）は、各ウサギから得た。２つのＥＬＩＳＡ分析を、ＲＡＭＡおよびＡｂ２を測
定するために実施した。ＲＡＭＡ ＥＬＩＳＡは、マウスＩｇＧ１抗体の定常領
域に結合する抗体量を測定する。Ａｂ２ ＥＬＩＡは結合剤の結合領域に反応性
である抗体量を測定する。ＲＡＭＡ応答は注射マウス抗体の定常領域に対する宿
主の体液応答を示す。用量０．５７５ｍｇ／ｍ２は、陽性対照として皮下注射し
た。３つの異なった用量：０．５７５、１．１５および２．３ｍｇ／ｍ２を静脈
内投与した。ＲＡＭＡ応答は２５０μｇ／ウサギのＭＡｂ−ＡＬＴ−１で静脈内
注射して、続いて、１２５μｇ／ウサギの皮下注射、５００μｇ／ウサギの静脈
内注射、および１２５μｇ／ウサギの静脈内注射したウサギにおいて最も強かっ
た。Ａｂ２およびＲＡＭＡに両方としてウサギにおいて免疫応答を誘発した結合
剤は、最初から最後の出血試料中に見出された。用量２５０μｇ／ウサギ（１．
１５ｍｇ／ｍ２、２ｍｇ／６０ｋｇ患者に等しい）は、抗体Ａｂ２およびＲＡＭ
Ａの両タイプにおいて最も高い応答を誘発した。この誘発Ａｂ２は、ＭＵＣ１で
阻止され得るが、ＭＵＣ１ペプチドまたはＣＡ１９．９によって阻止されな得な
かった。結合剤はまた、ウサギにおいて抗イディオタイプ応答を誘発したが、Ａ
ｂ２応答は注射した用量に直接に相関していなかった。用量２５０μｇ／ウサギ
が３つの静脈内投与用量のうち最も高いＡｂ２応答を生じることが観察された。
１２５μｇ／ウサギでの抗体の皮下注射は、全体として最も強いＡｂ２応答を誘
発した。誘発Ａｂ２はＭＵＣ１と競合したが、試験した濃度ではＭＵＣ１ペプチ
ドと競合しなかった。投与経路が免疫応答のタイプに影響を与えることに注目す
ることは興味深いことである。Ａｂ２応答は皮下免疫化したウサギにおいて最も
強かったが、一方、一般的なＲＡＭＡ応答は静脈注射したウサギにおいて最も優
れていた。全体として、ＲＡＭＡおよびＡｂ２応答は相関し、同じ静脈内投与用
量に関して最適応答を示す。これらの結果は、用量１．１５ｍｇ／ｍ２（２ｍｇ
／６０ｋｇ患者に等しい）がＭＡｂ−ＡＬＴ−１の静脈内注射後の体液応答を誘
発するのに最適であることを実証した。ＲＡＭＡおよびＡｂ２が早くも最初の免
疫化から２週間目に検出することができた。したがって、ウサギの免疫応答は、
ラットの抗体応答（静脈内投与の８週間目に検出）よりも優れていた。したがっ
て、これらの実験から、治療的処置に対する示唆用量は、免疫応答の循環する抗
原の影響を考慮しなければ、患者６０ｋｇ当たり約２ｍｇである。
【００３７】 例８ 初期腫瘍治療研究 動物モデルに使用した腫瘍細胞は、宿主適合性とＭＵＣ１発現の両方を有する
べきである。マウス腫瘍細胞系にトランスフェクトしたＭＵＣ１遺伝子のみがマ
ウスでのモデルとして認定された。２つにＭＵＣ１形質導入体細胞系、ＭＴおよ
び４１３ＢＣＲが評価された。これらの細胞系の両者に、マウス乳癌細胞系４１
０．４から誘導され、２０個以上のタンデム型反復エピトープを含む全長ＭＵＣ
１遺伝子を形質導入した。両細胞系はＢＡＬＢ／ｃおよびＣＢＧＦ１マウスに適
合している。これらの細胞系は、ＦＡＣＳ分析により、これらの細胞に対する例
２の結合剤の結合によって分析されたように、ＭＵＣ１抗原を多く発現する。Ｍ
Ｔ細胞はＣＢ６Ｆ１マウス中へ静脈内注射され、肺へ移植された。腫瘍病巣は注
射後、３０〜４０日目に肺に見られ、マウスは処置しないで５０〜６０日目に死
亡した。組織病理的分析からも肺中の腫瘍および腫瘍組織上のＭＵＣ１発現を確
認した。この細胞系は比較的高い濃度、マウス当たり２×１０７個の細胞を注射
した場合ですら、皮下に腫瘍を形成しない。４１３ＢＣＲ細胞をＢＡＬＢ／ｃマ
ウスに、種々の細胞濃度（マウス当たり２．５〜５×１０６個の細胞）にて脇腹
(flank)または***脂肪パッド中へ皮下注射した。腫瘍は１０〜１５日目に発症
し、腫瘍が***脂肪パッド中へ移植した場合、より低い拒絶反応速度であった。
治療的研究では、腫瘍は式：（ａ×ｂ２）／２、（式中、ａは最長直径、および
ｂは最短直径を示す。）により腫瘍容積について測定した。in vivoでの形質導
入体のＭＵＣ１発現を証明するために、ＭＴ腫瘍保有マウスを絶命させ、肺を無
菌的に取り出した。腫瘍組織を肺から除去し、小片に切断し、トリプシンで１０
分間、消化した。次いで、腫瘍細胞を３日間、培養して、ＦＡＣＳ分析を行った
。その結果はＭＴ形質導入体細胞の８０％以上がin vivoでの成長１ケ月後にＭ
ＵＣ１抗原を発現していたことを示した。ＭＵＣ１抗原に対する抗体−ＫＬＨ結
合体（ＫＬＨはマウスでのマウス抗体の免疫原性を増加させるために使用した。
）の結合能力は、２つの方法、ＥＬＩＳＡおよびＲＩＡで測定し、in vivoでそ
の標的を認識する免疫原性の能力を証明した。２つの異なったタイプのアジュバ
ント、ＲＡＳ（ＲＩＢＩ Adjuvant Systems)およびＱｕｉ Ａをこれらの研究
で使用した。ＲＡＳはフロイド完全アジュバント（ＦＣＡ）の主要な成分である
生物、ミコバクテリウム結核菌(Mycobacterium tuberculosis)から得た高度に精
製した細菌成分を含む安定な水中油乳化液である。Ｑｕｉ Ａは別なものとして
使用される表面活性剤であるが、皮下注射のみできる。両アジュバントは別な実
験で使用した。実験を通して得た血清試料は、Ａｂ２および／またはＡｂ３含量
についてはＥＬＩＳＡによって分析した。リンパ球増殖アッセイは、免疫化マウ
スの脾臓から単離したリンパ球を使用する標準的プロトコールによる３Ｈ−チミ
ジン取り込みの測定によって行った。免疫刺激剤はＭＵＣ１、ＭＵＣ１ペプチド
、抗ＭＵＣ１抗体、対照抗体およびフェトヘマグルチニン（ＰＨＡ）を含んでい
た。ＣＢ６Ｆ１マウスを使用する各実験の終了時に、動物を絶命させ、肺中の腫
瘍病巣数を直接計数法によって分析した。さらに、マウスの選択群に、１２５Ｉ
−デオキシウリジンを動物の死亡４時間前にマウスへ注射した。肺はγ線カウン
ターで放射活性をアッセイして、腫瘍負荷を計数した。免疫応答および結合剤、
結合剤−ＫＬＨ、結合剤−ｈＩｇＧおよび結合剤−ＭＵＣ１複合体の有効性は、
腫瘍保持ＢＡＬＢ／ｃおよび腫瘍保持ＣＢ６Ｆ１マウスにおいて分析した。
【００３８】 実験の最初のシリーズは、体液応答（抗マウス抗体、Ａｂ２およびＡｂ３）、
細胞応答（Ｔ細胞増殖）、ならびに腫瘍成長および／または大きさにおけるこれ
らの化合物の影響の誘発における、例２の結合剤（ＫＬＨ）の結合体(conjugate
)または複合体（結合剤−ＭＵＣ１）の効果を評価した。マウスには免疫シリー
ズの開始後、２週間目に４１３ＢＣＲ腫瘍細胞を移植した（皮下、静脈内、また
は両経路の組み合せにて）。体液応答は結合および複合した結合剤の両者で処置
したマウスで誘発されたことを見出した。結合剤に対するいわゆるＴ２細胞応答
はこれらのマウスで誘発されたが、Ｔ３集合体（ＭＵＣ１またはＭＵＣ１ペプチ
ドに対する応答）は明白ではなかった（Ｔ２はＡｂ１イディオタイプ特異的Ｔ細
胞であり、Ｔ３はＡｂ２イディオタイプ特異的Ｔ細胞である）。これらの研究で
統計的有意性は示されなかったが、結合または複合結合剤で処置したマウスの腫
瘍の容積および大きさにおける低下傾向も示された。
【００３９】 例９ 確証的腫瘍処置研究 ＢＡＬＢ／ｃマウス腫瘍モデル実験から得たシリーズ１および２は、ＣＢ６Ｆ
１腫瘍モデルで繰り返した。Ａｂ２、Ａｂ３およびＴ細胞増殖を体液および細胞
応答を決定するために再び測定した。種々の配合剤を注射した後にマウスに生じ
た腫瘍病巣数は、１つのシリーズで評価し、腫瘍大きさの評価はin vivoでの１
２５Ｉ−ウリジンの取り込みを評価しておこなった。実験のこのシリーズの最後
では、肺腫瘍モデルを移植したマウスの生存に影響を与える対照ＭＡｂおよびＰ
ＢＳに比べて例２の結合剤の能力を評価した。実験のこの確証的セットでは、Ｍ
ＵＣ１に対するＴ細胞応答は観察されなかったけれども、体液および細胞応答は
これらのマウス中に誘発されたようである。腫瘍負荷における有意な低下は観察
されなかったが、腫瘍の大きさは減少したようであった。対照ＭＡｂまたはＰＢ
Ｓを注射したものに比べて、結合剤を注射したマウスは有利にも生存していたよ
うである。図１に示されるように、ＰＢＳ処置マウス以上にＭＡｂ−ＡＬＴ−１
で処置したマウスには生存率において有意な改善があった。ＰＢＳ処置以上にＭ
Ａｂ−ＡＬＴ−１を使用した処置のスチューデントＴ検定で測定したｐ−値は、
＜０．０５であった。静脈注射によって投与した自然抗体、ＭＡｂ−ＡＬＴ−１
は、ＭＴ−ＣＢ６Ｆ１マウス腫瘍モデルで抗腫瘍効果を示した。抗体のより少量
の注射による先の実験では効果がなかったから（データは示されない）、腫瘍細
胞注射前の最小量の３回注射および続いての４回注射は、この効果を示すために
必要であった。
【００４０】 例１０ 微粒子−カプセル化結合剤 抗体のリポソーム配合剤はイディオタイプ応答を増大することができるから、
この研究はヒト乳癌腫瘍保有マウスに投与した微粒子−カプセル化結合剤の免疫
応答を検討するために行った。結合剤は二重乳化技術によってＰＬＧＡ微粒子中
に混合した。各ＢＡＬＢ／ｃマウスに研究０日に皮下から５×１０６個の４１３
ＢＣＲ腫瘍細胞の注射を行った。１週間後に、４匹の動物からなる群のマウスを
、次の処置群：ＰＢＳ、ＩｇＧ−ＫＬＨ、結合剤−ＫＬＨ、微粒子（ＭＳ）、結
合剤−モノホスホリル脂質Ａ微粒子（ＭＰＬＡ−ＭＳ）、およびＭＵＣ−１に分
けた。血清を１／１００に希釈し、Ａｂ２およびＡｂ３応答を各免疫前にＥＬＩ
ＳＡで測定した。腫瘍容積を２日毎に二次元にてカリパスで測定した。微粒子カ
プセル化結合剤は、ＫＬＨを結合した結合剤またはＭＵＣ−１との複合体中の結
合剤よりも優れたイディオタイプ免疫応答を誘発した。微粒子カプセル化結合剤
は腫瘍成長のいくらかの抑制を示したが、統計的有意性は達成されなかった。こ
れは、マウスがこの実験の抗体で前免疫化されていなかった事実によるからであ
ろう。
【００４１】 例１１ 腫瘍関連ＭＵＣ−１の特異性 ９９ｍＴｃ標識結合剤の生物学的配置もまた、培養ヒト乳癌（ＺＲ−７５−１
）細胞を移植した免疫欠損（ヌード）マウスへのその投与によって測定した。こ
れらの細胞は既に試験されて、ＭＵＣ１抗原の発現は確認されている。９９ｍＴ
ｃ標識結合剤は静脈内注射され（結合剤２０μｇ上に２０μＣｉの９９ｍＴｃ）
、動物は標準的プロトコールにより注射から、３、６および２４時間後に絶命さ
せた。目的の器官および組織を取りだし、γ線カウンターで放射活性を分析した
。同じサブクラスの第２の非ＭＵＣ１反応性抗体（９９ｍＴｃ標識ＭＯＰＣ−２
１）を注射から、６および２４時間後に動物の他の群にて同様に試験した。２つ
の抗体間における体内分布の全体的パターンは、９９ｍＴｃ標識ＭＯＰＣ−２１
については肝臓および脾臓での取り込みがより高かったことを例外として、ほと
んどの器官において同様であった。これは、多分、調剤中に存在する一層多量の ９９ｍ Ｔｃ高分子量凝集体、および腫瘍部位における９９ｍＴｃ標識結合剤の有
意により高い取り込みによるのであろう。２つの放射性標識ＭＡｂにおける平均
腫瘍取り込みの差異は、不対２尾ｔ検定を使用して分析して、注射から、６およ
び２４時間後で統計的に有意（ｐ＜０．００１）であると判断した。したがって
、９９ｍＴｃ標識結合剤の非特異的組織局在化は、他の同様に調製されたＩｇＧ １ マウスモノクローナル抗体のものを代表するようである。この取り込みは、ト
レーサー分布および抗体代謝に関連したものなど、正常な組織蓄積方法の代表例
であり、高い肝臓、血液および腎臓値にそれぞれ反映する。腫瘍取り込み値は、
注射から、２４時間後の９９ｍＴｃ標識ＭＯＰＣ−２１調製剤に比べて、９９ｍ Ｔｃ標識結合剤の標的組織蓄積において、ほとんど５倍増加を示す。この非常に
有意な差異は、腫瘍異種移植片組織を発現するＭＵＣ１内の特異的抗原結合性に
よる優先的９９ｍＴｃ標識結合剤の保持をほとんど確かに示している。この取り
込みはやがて腫瘍対血液の比率の連続上昇という結果となり、２４時間で２．１
の高さに達する。これはほとんどの他の組織では１．０未満の値である（腎臓の
１．５を除く）のに比べての値であり、トレーサーの積極的な特異的保持を意味
する。
【００４２】 例１２ グリコシル化ＭＵＣ−１の優先的結合 その表面にＭＵＣ−１糖タンパクを発現するＺＲ−７５−１細胞は、３７℃で
４８時間、４ｍＭフェニル−Ｎ−α−Ｄ−グルコサミドによる処理によって脱グ
リコシル化された。例２の結合剤の結合を、Ａｌｔ−１またはＭＵＣ−１の全て
のペプチドエピトープを結合することが知られている対照抗体（ＳＭ３）を使用
するＦＡＣＳａｎ分析による未処置および脱グリコシルＭＵＣ−１と比較した。
表１に示されるように、未処置ＭＵＣ−１の結合においてわずかな優先性が存在
した。これらの結果は、結合剤が少なくともいくつかの炭水化物を含むエピトー
プを結合することを示す。
【００４３】
【表１】
【００４４】 例１３ 外因性抗体を使用する腫瘍免疫治療 ＭＵＣ−１形質導入マウス４１３ＢＣＲ腫瘍細胞を、ＢＡＬＢ／ｃマウス中へ
接種した。次いで、マウスにＡｌｔ−１単独、またはＫＬＨまたはｈＩｇＧに結
合したＡｌｔ−１を５回（皮下）注射した。対照として、ＫＬＨまたはｈＩｇＧ
に結合したマウスＩｇＧを使用した。免疫応答は抗イディオタイプ抗体（Ａｂ２
）を測定して評価した。Ａｂ２検出には、ＥＬＩＳＡプレートを１００μｌのＡ
ｌｔ−１ Ｆ（ａｂ）２（２．５μｇ／ｍｌ）で被覆し、希釈試料とともにイン
キュベートした。結合Ａｂ２はＨＲＰおよびＡＢＴＳに結合した抗マウスＩｇＧ
（Ｆｃ特異的）を使用して検出した。これらの結果は、４０５／４９２ｎｍ＋Ｓ
Ｄでの平均吸光度として、図２に示される。これらの結果は、外因性コンテクス
ト中に現れるか、あるいはＫＬＨに結合したＡｌｔ−１が、Ａｂ２を産生する結
果となることを示すが、一方、Ａｌｔ−１または対照のいずれもはそうではなか
った。
【００４５】 Ａｌｔ−１に特異的なＴ−細胞を刺激する抗原提示細胞として作用する腫瘍細
胞の能力は、以下のように評価した。４１３ＢＣＲ細胞を、ＰＨＡ培地（陽性対
照）、Ａｌｔ−１、ｈＩｇＧ、ｈＩｇＧに結合したＡｌｔ−１、マウス抗ヒト抗
体（ＭＡＨＡ）、またはｈＩｇＧおよびマウス抗ヒト抗体（ＭＡＨＡ）に結合し
たＡｌｔ−１とともに、３７℃で２４時間インキュベートした。腫瘍細胞は、ｈ
ＩｇＧで免疫化したマウスから得た精製Ｔ細胞を刺激するために、ＡＰＣとして
使用した。Ｔ細胞増殖は、［３Ｈ］−チミジン取り込みを使用して測定した。そ
の結果を図３に示す。ｈＩｇＧおよびマウス抗ヒト抗体（ＭＡＨＡ）に結合した
Ａｌｔ−１のみが細胞を処置した。これらの結果は、腫瘍細胞がそれを内部移行
する条件下で、腫瘍細胞への異種コンテクスト中にＡｌｔ−１が提示された場合
、処置された腫瘍細胞が、Ａｌｔ−１に特異的なＴ細胞応答を生じるＡＰＣとし
て作用することができることを示す。
【００４６】 抗癌効果を、腫瘍質量を秤量して評価した。４１３ＢＣＲ腫瘍保持マウスに先
に記載したように異なる抗体配合剤を５回（皮下）注射した。マウスを２６日目
に絶命させ、腫瘍を取りだし、秤量した。その結果を、５匹のマウスから得た腫
瘍の平均＋ＳＤとして、図４に示す。統計的分析はｔ検定によって実施した。こ
れらの結果は、外因性コンテクスト中に提示されたＡｌｔ−１は腫瘍負荷におい
て統計的に有意な低下をもたらすことを示す。 まとめると、これらの結果は、本発明の結合剤が、抗イディオタイプおよび細
胞応答の両者を生じることができ、この応答が腫瘍治療に効果的であることを示
す。
【００４７】 例１４ ｈＰＢＬ−再構成腫瘍保持ＳＣＩＤマウスの処置 ＳＣＩＤ／ＢＧマウスに、８０℃に貯蔵されていた１０７個のｈＰＢＬを注射
した。血液を１２日目にマウスから採取し、マウスが再構成されているか否かを
決定するためにｈＩｇＧの存在について試験した。注射した７匹のマウスのうち
、５匹は再構成されていた。再構成マウスを０日目にＰＢＳまたは１００μｇの
Ａｌｔ−１または対照ＩｇＧ１で腹腔内処置し、７日目および１４日目に繰返し
処置した。１７日目にマウスに５×１０６個の腫瘍細胞（ＮＩＨ ＯＶＣＡＲ−
３）＋２０％マトリゲルを皮下移植した。マウスを２１日目に出血させて、２１
日目および２８日目にＰＢＳまたは１００μｇのＡｌｔ−１または対照ＩｇＧを
静脈注射して処置した。マウスを２８、３２、３５、３９および４３日目に絶命
させ、その腫瘍容積を測定した。その結果を図５に示す。これらの結果は、外因
性結合剤Ａｌｔ−１がアジュバントまたは担体タンパク質の非存在下にですら、
腫瘍容積の統計的に有意な低下をもたらすことを示す。
【００４８】 例１５ ハイポクレリンに結合した結合剤の調製 長期循環性、立体的安定化ＨＢＢＡ−Ｒ２リポソーム（ＳＬ）および免疫リポ
ソーム（ＳＩＬ）配合剤は、ＤＰＰＣ／マレイミド−ＰＥＧ２０００−ＤＳＰＥ
（９４：６モル比）およびＤＳＰＣ／コレステロール／マレイミド−ＰＥＧ２０
００−ＤＳＰＥ（６４：３０：６モル比）それぞれから構成される。対照ＨＢＢ
Ａ−Ｒ２リポソーム（ＣＬ）はＤＰＰＣ／ＤＰＰＧ（９：１モル比）から構成さ
れる。ＤＳＰＣ、ＤＰＰＣ、ＤＰＰＧおよびコレステロールはＡｖａｎｔｉ Ｐ
ｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ(Alabaster, AL, USA)から購入し、マレイミド−ＰＥＧ
２０００−ＤＳＰＥはShearwater Polymers Inc.(Huntsville, AL, USA)から購
入した。
【００４９】 ハイポクレリンの合成は、当該分野で認識されている手法を使用する（例えば
、国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ９８／００２３５号を参照）。２つの方法はリポソー
ム中へハイポクレリンを負荷するために使用した。ＨＢＢＡ−Ｒ２は溶媒注入法
によって、脂質対薬剤モル比１５：１にて予め形成されたＳＬおよびＳＩＬ中へ
負荷するか、あるいは溶媒希釈法によって、ＣＬ（脂質対薬剤１５：１）中に負
荷した。
【００５０】 溶媒希釈法では、脂質と薬剤をまず、有機溶媒のストック溶液から互いに混合
し、次いで乾燥した。メタノールを最終脂質濃度２００ｍＭになるまで添加した
。脂質／薬剤溶液を加熱緩衝液（２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ １４０ｍＭ ＮａＣｌ
、ｐＨ７．４）の５００μｌ分取量を添加して、６５℃で１０ｍＭ脂質になるま
でゆっくりと希釈する際にリポソームを形成した。得られたリポソームはセファ
デックスＧ５０を使用してゲル濾過し、上記緩衝液で溶出して精製した。
【００５１】 溶媒注入法では、（ＨＢＢＡ−Ｒ２）−ＳＬリポソーをまず、１０ｍＭ脂質、
２ｍＭ ＭＯＰＳＯ、１４０ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ６．７の最終濃度まで、乾燥
した薄フィルムを水和して調製した。ＨＢＢＡ−Ｒ２ （ＰＥＧ３００中、１０
ｍＭ）を６５℃まで加熱し、リポソームの６５℃溶液中に滴下し、１５分間、イ
ンキュベートした。得られたハイポクレリン−リポソームは、平均ベシクルサイ
ズ１００ｎｍになるＬｉｐｅｘ Ｂｉｏｍｅｍｂｒａｎｅｓ(North Vancouver,
BC)押出装置を使用して、８０ｎｍポリカーボネート膜から押し出した。
【００５２】 免疫リポソームは以下のようにして製造した。抗体をまず２０ｍＭピロリン酸
緩衝液（ｐＨ８．０）に溶解し、次いで、３０モル過剰量の２−イミノチオレー
ンとともに１時間、２２℃でインキュベートした。チオール化した抗体を精製し
、ｐＨを、２０ｍＭ ＭＯＰＳＯ、１４０ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ６．７緩衝液を
使用するゲルクロマトグラフィーによって低下させた。チオール化した抗体は、
上記マレイミド−リポソームの一部とともに、２２℃で一夜、２５〜５０μｇＭ
Ａｂ／μモル脂質濃度でインキュベートした。リポソームのセットは、結合抗体
の有無にかかわらず、双方ともセファロースＣＬ−４Ｂを使用してゲル濾過し、
かつ、２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ １４０ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ７．４緩衝液を用い
て溶出して精製した。約９０〜９５％の抗体がリポソームへ結合した。
【００５３】 ハイポクレリン−リポソーム溶液は、Sartorious AG.(Goettingen, Germany)
ＣｅｎｔｒｉｓａｒｔＩ遠心分離濃縮器（３００，０００ＭＷカットオフ）を
使用して濃縮した。全てのリポソーム調製物は、Ｍｉｌｌｅｘ−ＧＶ ０．２２
μｍ無菌フィルターユニット(Millipore Bedford, MA USA)を使用してフィルタ
ー滅菌し、脂質および薬剤濃度を分析し、次いで、滅菌緩衝（２０ｍＭ ＨＥＰ
ＥＳ １４０ｍＭ ＮａＣｌ，ｐＨ７．４）を使用して所望濃度にまで希釈した
。薬剤対最終脂質のモル比、２０：１は、通常、全ての配合剤において得られた
。
【００５４】 長期循環性、立体的安定化ＨＢＢＡ−Ｒ２およびＨＢＥＡ−Ｒ１／２リポソー
ム（ＳＬ）および免疫リポソーム（ＳＩＬ）配合剤は、それぞれＤＰＰＣ／マレ
イミド−ＰＥＧ２０００−ＤＳＰＥ（９４：６モル比）およびＤＳＰＣ／コレス
テロール／マレイミド−ＰＥＧ２０００−ＤＳＰＥ（６４：３０：６モル比）か
ら構成される。対照ＨＢＢＡ−Ｒ２リポソーム（ＣＬ）はＤＰＰＣ／ＤＰＰＧ（
９：１モル比）から構成される。ＤＳＰＣ、ＤＰＰＣ、ＤＰＰＧおよびコレステ
ロールはＡｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ(Alabaster, AL, USA)から購
入し、マレイミド−ＰＥＧ２０００−ＤＳＰＥはShearwater Polymers Inc. (Hu
ntsville, AL, USA)から購入した。
【００５５】 ハイポクレリンをリポソームへ負荷するために２つの方法を使用した。ＨＢＢ
Ａ−Ｒ２を予め形成したＳＬおよびＳＩＬ中へ、脂質対薬剤モル比１５：１にて
溶媒注入法で負荷した。ＨＢＢＡ−Ｒ２をＣＬ（脂質：薬剤１５：１）中に、お
よびＨＢＥＡ−Ｒ１／２をＳＬおよびＳＩＬ（脂質：薬剤２：１）中に溶媒希釈
法にて負荷した。
【００５６】 溶媒注入法では、リポソームはまず、ＳＬ調製には２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ １
４０ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ７．４またはＳＩＬ調製には２０ｍＭ ＭＯＰＳＯ、
１４０ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ６．７のいずれかを使用して、最終濃度１０ｍＭ脂
質になるまで、種々の脂質の乾燥薄膜を水和して調製した。溶媒に溶解した薬剤
（メタノール中、約１０〜２０ｍＭまたはＰＥＧ３００中、約５〜１０ｍＭ）を
、６５℃まで加熱し、リポソームの６５℃溶液中に滴下した。
【００５７】 溶媒希釈法では、脂質と薬剤をまず、有機溶媒中のストック溶液から互いに混
合して、次いで乾燥した。次いで、メタノールまたはＰＥＧ３００を、それぞれ
最終脂質濃度２００ｍＭまたは５０ｍＭになるように添加した。脂質と薬剤溶液
が、少量の加熱緩衝液（ＣＬおよびＳＬ調製には２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ １４０
ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ７．４またはＳＩＬ調製には２０ｍＭ ＭＯＰＳＯ、１４
０ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ６．７）を添加して、６５℃で１０ｍＭ脂質にまで希釈
されたとき、リポソームが形成された。
【００５８】 得られたハイポクレリン−リポソームは、平均気孔サイズ１００ｎｍになるよ
う、Ｌｉｐｅｘ Ｂｉｏｍｅｍｂｒａｎｅｓ(North Vancouver, BC)押出装置を
使用して、８０ｎｍポリカーボネート膜から押し出す。次いでリポソームをゲル
濾過によって精製し、脂質および薬剤濃度を分析する。最終脂質対薬剤モル比２
０：１が、通常、全ての配合剤について得られた。
【００５９】 免疫リポソームは以下のようにして作製した。抗体をまず２０ｍＭピロリン酸
緩衝液（ｐＨ８．０）に溶解し、次いで、２−イミノチオレーンの１５〜３０モ
ル過剰量とともに１時間、２２℃でインキュベートした。チオール化した抗体は
精製し、ｐＨを、２０ｍＭ ＭＯＰＳＯ、１４０ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ７．４緩
衝液を使用するゲルクロマトグラフィーによって低下させた。チオール化した抗
体を、マレイミド−リポソーム（上記した）とともに、２５〜５０μｇＭＡｂ／
μモル脂質の濃度で一夜、２２℃でインキュベートした。未結合抗体をゲル濾過
で除去し、２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ １４０ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ７．４緩衝液を
使用して溶出した。約９０〜９５％の抗体がリポソームに結合した。
【００６０】 所要に応じて、ハイポクレリン−リポソーム溶液をAmicon, Inc (Beverly, MA
USA）ＣｅｎｔｒｉｃｏｎまたはSartorious AG. (Goettingen, Germany)Ｃｅｎ
ｔｒｉｓａｒｔＩ遠心分離濃縮器（それぞれ、１００，０００または３００，０
００ＭＷカットオフ）を使用して濃縮した。
【００６１】 例１６ 腫瘍保持マウスモデルにおける光力学治療 ＢＡＬＢ／ｃマウスは右脇腹中へ２×１０６個の４１３ＢＣＲ細胞を皮下注射
した。腫瘍は７〜１０日後に出現した。腫瘍が直径約５ｍｍに達したとき、例１
５の結合体、または薬剤とともに対照リポソーム、ただし異なったＩｇＧ１を用
いて、１ｍｇ／ｋｇにて静脈内投与した。２時間後、マウスに、スライドプロジ
ェクターを使用して、＞５９０ｎｍ（赤カットオフフィルター）、４０Ｊ／ｃｍ ２ 、２０ｍｍＷ／ｃｍ２にて照射した。対照マウスには照射しなかった。その結
果を図６に示す。これらの結果は、本発明の結合体が、光の存在下で腫瘍を完全
に取り除くことを示す。
【００６２】 例１７ マウス腫瘍生存研究 ＣＢ６Ｆ１マウスを腫瘍移植前にＡｌｔ−１結合剤、ＰＢＳ、マウスＩｇＧま
たは非関連マウスモノクローナル抗体（０．２ｍｌＰＢＳ中、５０μｇ、静脈注
射）を使用して、３回免疫化した。マウスにＭＴ腫瘍細胞系４１０．４、完全長
ＭＵＣ−１ ＤＮＡをトランスフェクトしたマウス乳癌細胞系を移植した。腫瘍
細胞を２×１０５細胞／マウスにて静脈注射し、肺に転移させた。腫瘍移植後、
１週間目にマウスを再びＡｌｔ−１結合剤、マウスＩｇＧまたは非関連マウスモ
ノクローナル抗体（０．２ｍｌＰＢＳ中、５０μｇ）を使用して免疫化した。マ
ウスは体重、目および柔毛を含めた一般的な状態変化を隔日に観察した。ひどい
病状になるか、あるいは元の体重の２５％以上を損なう徴候を示すなら、マウス
を安楽死させた。 その結果を下記表に示す。
【００６３】
【表２】
【００６４】 これらの結果は、Ａｌｔ−１のみがＭＵＣ−１を発現する腫瘍細胞から統計的
に有意な保護をもたらすことを示す（ＰＢＳに対して、Ｐ＝０．０３８；非関連
抗体に対してＰ＝０．１５９）。
【００６５】 例１８ ヒト患者におけるＨＡＭＡ応答の確立 １７名の患者をＡｌｔ−１抗体で処置した。１４名が女性であって、そのうち
、１１名が乳癌を発症していた。処置した他の癌は甲状腺（１）、大腸（２）、
子宮内膜（１）、子宮（１）および唾液腺（１）であった。Ａｌｔ−１を１、３
、５、９、１３および１７週目に２０〜３０分間にわたって静脈注射によって投
与した。投薬は３つの集団に、患者当たり１、２および４ｍｇであった。１ｍｇ
の集団では、５名の患者のうち、２名がＨＡＭＡのいくらかの増加を示し、１名
は＞２００ｎｇ／ｍｌの増加を示し、１名が２０００ｎｇ／ｍｌ以上の増加を示
した。２ｍｇの集団では、５名の患者全員がＨＡＭＡのいくらかの増加を示し、
２名患者は＞２００ｎｇ／ｍｌの増加を示し、１名が＞２０００ｎｇ／ｍｌの増
加を示した。４ｍｇの集団では、２名患者がＨＡＭＡのいくらかの増加を示し、
両者は＞２００ｎｇ／ｍｌであった。ＨＡＭＡは抗原に対して発生した全体的免
疫応答の範囲を示すものとして考えられる。したがって、これらの結果は、１〜
２ｍｇＡｌｔ−１のように僅かな量が強力な免疫応答を誘発することができるこ
とを示唆する。
【００６６】 例１９ 腫瘍特異的抗原の低下 患者を例１８に記載したように処置した。腫瘍抗原ＣＡ１５．３の連続測定値
は、市販のＭＵＣ−１アッセイ法を利用して得た。ＣＡ１５．３レベルの安定化
または低下を示す患者の割合は、１ｍｇＡｌｔ−１では患者０％であり、２ｍｇ
で８０％および４ｍｇで６０％であった。最大低下は、それぞれ３７％と２５％
の滴下を経験した２ｍｇ用量群の２名の患者において観察された。
【００６７】 例２０ Ａｂ２形成 患者を例１８に記載したように処置した。Ａｂ２のレベルを本研究の最後に測
定した。２ｍｇ群の２名の患者は、Ａｂ２レベルがそれぞれ＞１２４０Ｕ／ｍｌ
および１７８４Ｕ／ｍｌを有していた。４ｍｇ投与群の１名は?１１０２Ｕ／ｍ
ｌのＡｂ２レベルを有していた。正常範囲は０〜２００Ｕ／ｍｌである。
【００６８】 例２１ 抗ＭＵＣ−１抗体の生成 患者を例１８に記載したように処置した。抗ＭＵＣ−１抗体レベルを本研究の
最後に測定した。２ｍｇ用量群では、２名の患者がそれぞれ６６７Ｕ／ｍｌおよ
び２４６４Ｕ／ｍｌで、基線値を３倍以上越えた。１ｍｇ処置群の２名の患者お
よび４ｍｇ用量群の１名の患者は、基線レベルの３倍の抗ＭＵＣ−１抗体レベル
を有していた。正常レベルは３０〜２５０Ｕ／ｍｌである。まとめると、これら
のデータは２ｍｇ用量がおそらく最適であることを示す。
【図面の簡単な説明】
【図１】 本発明の結合剤を投与したマウスと対照マウスの生存研究の結果を示す。
【図２】 本発明の結合剤を投与したマウスと対照マウスのＡｂ２産生研究の結果を示す
。
【図３】 腫瘍細胞がＡＰＣとして作用して、結合剤特異的Ｔ細胞応答を生じることを示
す研究の結果を示す。
【図４】 本発明の結合剤を投与したマウスと対照マウスの腫瘍低下研究の結果を示す。
【図５】 本発明の結合剤を投与したｈＰＢＬ−再構築ＳＣＩＤマウスの腫瘍低下研究の
結果を示す。
【図６】 光力学剤を結合した本発明の結合剤を使用した腫瘍低下研究の結果を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ， ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ， ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，Ｃ Ｎ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ， ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，Ｋ Ｒ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ， ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，Ｓ Ｉ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ Ｆターム(参考） 4C076 CC27 CC41 4C084 AA02 AA17 BA03 CA62 MA65 MA66 ZB26 4C085 AA13 BB31 EE01 EE06 GG02 GG04

Claims (39)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 本質的に、腫瘍関連ＭＵＣ−１のエピトープに特異的に結合
    し、かつ、腫瘍関連ＭＵＣ−１を発現する腫瘍を有する哺乳動物を治療的に処置
    するのに有効である非放射標識結合剤からなる治療用組成物。
  2. 【請求項２】 腫瘍関連ＭＵＣ−１のエピトープに特異的に結合し、かつ、
    腫瘍関連ＭＵＣ−１を発現する腫瘍を有する哺乳動物を治療的に処置するのに有
    効である、ＨＭＦＧ１以外の結合剤を含む治療用組成物。
  3. 【請求項３】 可溶性および腫瘍結合性腫瘍関連ＭＵＣ−１の両方に特異的
    に結合し、かつ、腫瘍関連ＭＵＣ−１を発現する腫瘍を有する哺乳動物を治療的
    に処置するのに有効である結合剤を含む治療用組成物。
  4. 【請求項４】 結合剤が、ＨＭＰＶ、ＶＵ−３−Ｃ６、ＭＦ０６、ＶＵ−１
    １−Ｄ１、ＭＦ３０、ＢＣＰ８、ＤＦ３、ＢＣ２、Ｂ２７．２９、ＶＵ−３−Ｄ
    １、７５４０ＭＲ、ＭＦ１１、Ｂｃ４Ｅ５４９、ＶＵ−１１−Ｅ２、Ｍ３８、Ｅ
    ２９、ＧＰ１．４、２１４Ｄ４、ＢＣ４Ｗ１５４、ＨＭＦＧ−２、Ｃ５９５、Ｍ
    ｃ５およびＡ７６−Ａ／Ｃ７から選択されるモノクローナル抗体ではない、請求
    項２に記載の治療用組成物。
  5. 【請求項５】 結合剤が、哺乳動物において抗イディオタイプ応答および細
    胞免疫応答を誘発する、請求項１、２または３に記載の治療用組成物。
  6. 【請求項６】 アミノ酸配列ＤＴＲＰＡＰを有するペプチドのアミノ酸残基
    からの免疫学的決定基を結合する結合剤。
  7. 【請求項７】 Ａｌｔ−１と同じエピトープを結合する結合剤。
  8. 【請求項８】 Ａｌｔ−１。
  9. 【請求項９】 請求項６に記載の結合剤、請求項７に記載の結合剤およびＡ
    ｌｔ−１からなる群から選択される結合剤を含む治療用組成物。
  10. 【請求項１０】 腫瘍関連ＭＵＣ−１のエピトープに特異的に結合し、かつ
    、腫瘍関連ＭＵＣ−１を発現する腫瘍を有する哺乳動物を治療的に処置するのに
    有効である活性結合剤を含む治療用組成物。
  11. 【請求項１１】 結合剤が、光活性化されている、請求項９に記載の治療用
    組成物。
  12. 【請求項１２】 結合剤が、光力学剤に結合している、請求項２に記載の治
    療用組成物。
  13. 【請求項１３】 光力学剤は、ハイポクレリンおよびハイポクレリン誘導体
    を包含する、請求項１２に記載の治療用組成物。
  14. 【請求項１４】 エピトープは、炭水化物を含む免疫学的決定基を含む、請
    求項１または２に記載の治療用組成物。
  15. 【請求項１５】 請求項１〜５および９〜１３のいずれか１項に記載の治療
    用組成物の有効量を哺乳動物に投与することを含む、腫瘍を保有する哺乳動物を
    治療的に処置する方法。
  16. 【請求項１６】 腫瘍関連ＭＵＣ−１のエピトープに特異的に結合し、かつ
    、腫瘍関連ＭＵＣ−１を発現する腫瘍を有する哺乳動物を治療的に処置する結合
    剤を含む治療用組成物の有効量を哺乳動物に投与することを含む、腫瘍を保有す
    る哺乳動物を治療的に処置する方法であって、有効量は、約８ｍｇ／３０ｋｇ体
    重未満の投与量である、前記方法。
  17. 【請求項１７】 腫瘍関連ＭＵＣ−１のエピトープに特異的に結合し、かつ
    、腫瘍関連ＭＵＣ−１を発現する腫瘍を有する哺乳動物を治療的に処置するに有
    効である結合剤を含む治療用組成物の有効量を哺乳動物に静脈内投与することを
    含む、腫瘍を保有する哺乳動物を治療的に処置する方法。
  18. 【請求項１８】 腫瘍関連ＭＵＣ−１のエピトープに特異的に結合し、かつ
    、腫瘍関連ＭＵＣ−１を発現する腫瘍を有する哺乳動物を治療的に処置するに有
    効である結合剤を含む治療用組成物の有効量を哺乳動物に皮下投与することを含
    む、腫瘍を保有する哺乳動物を治療的に処置する方法。
  19. 【請求項１９】 結合剤が静脈内投与される、請求項１５または１６に記載
    の方法。
  20. 【請求項２０】 結合剤が皮下投与される、請求項１５または１６に記載の
    方法。
  21. 【請求項２１】 有効量が、８ｍｇ／３０ｋｇ体重未満である、請求項１５
    〜２０のいずれか１項に記載の方法。
  22. 【請求項２２】 結合剤が、約３ｍｇ／３０ｋｇ体重未満の投与量で投与さ
    れる、請求項２１に記載の方法。
  23. 【請求項２３】 結合剤が、約２ｍｇ／患者の投与量で投与される、請求項
    ２２に記載の方法。
  24. 【請求項２４】 結合剤が、約０．５〜約２ｍｇ／３０ｋｇ体重の投与量で
    投与される、請求項２２に記載の方法。
  25. 【請求項２５】 結合剤が、約０．５〜約１．５ｍｇ／３０ｋｇ体重の投与
    量で投与される、請求項２４に記載の方法。
  26. 【請求項２６】 結合剤が、約１ｍｇ／３０ｋｇ体重の投与量で投与される
    、請求項２５に記載の方法。
  27. 【請求項２７】 結合剤が、抗体媒介毒性を誘発しない結合剤の最大量であ
    る投与量で投与される、請求項１５〜２０のいずれか１項に記載の方法。
  28. 【請求項２８】 結合剤が、ＡＤＣＣまたはＣＤＣを産生しない結合剤の最
    大量である投与量で投与される、請求項１５〜２０のいずれか１項に記載の方法
    。
  29. 【請求項２９】 結合剤が、ＨＡＸＡ応答＞２００Ｕ／ｍｌを誘発する投与
    量で投与される、請求項１５〜２０のいずれか１項に記載の方法。
  30. 【請求項３０】 結合剤が、ＨＡＸＡ応答＞２０００Ｕ／ｍｌを誘発する投
    与量で投与される、請求項２９に記載の方法。
  31. 【請求項３１】 ＨＡＸＡ応答が、ＨＡＭＡ応答である、請求項２９または
    ３０に記載の方法。
  32. 【請求項３２】 結合剤が、腫瘍抗原ＣＡ１５．３のレベルを低減させる投
    与量で投与される、請求項１５〜２０のいずれか１項に記載の方法。
  33. 【請求項３３】 結合剤が、アジュバントの非存在下にて投与される、請求
    項１７または１９に記載の方法。
  34. 【請求項３４】 結合剤が、アジュバントの存在下にて投与される、請求項
    １６または１８に記載の方法。
  35. 【請求項３５】 有効量の請求項１２または１３に記載の治療用組成物を哺
    乳動物に投与することを含む、腫瘍を保有する哺乳動物を治療的に処置する方法
    。
  36. 【請求項３６】 可視光線源で哺乳動物を照射することをさらに含む、請求
    項３０に記載の方法。
  37. 【請求項３７】 結合剤が、循環性および腫瘍結合性ＭＵＣ−１の両方に結
    合する、請求項１５に記載の方法。
  38. 【請求項３８】 有効量の請求項３に記載の結合剤を哺乳動物に投与するこ
    とを含む、腫瘍を保有する哺乳動物を治療的に処置する方法。
  39. 【請求項３９】 腫瘍を保持する哺乳動物を治療的に処置する方法であって
    、動物は、抗ＭＵＣ−１抗体の基線レベルを有し、基線レベルに比べて抗ＭＵＣ
    −１抗体において少なくとも３倍の増加を生じて、腫瘍関連ＭＵＣ−１のエピト
    ープに特異的に結合し、かつ、腫瘍関連ＭＵＣ−１を発現する腫瘍を有する哺乳
    動物を治療的に処置するのに有効である結合剤を含む治療用組成物の有効量を哺
    乳動物に皮下投与することを含む、前記方法。
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