JP2003516319A

JP2003516319A - ペプチド中間体の製造方法

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Publication number: JP2003516319A
Application number: JP2001531863A
Authority: JP
Inventors: アツシユウツド，マイケル・ステユワート; ビシヨツプ，クリストフアー・ブライアン; コトレル，イアン・フランク; エマーソン，カテイータ・モニーク; ハンズ，デイビツド; ホウ，クオ・チエ; リンチ，ジヨージフ・エドワード; シー，ヤオ・チユン; ウイルソン，ロバート・ダリン
Original assignee: Merck and Co Inc
Current assignee: Merck and Co Inc
Priority date: 1999-10-19
Filing date: 2000-10-18
Publication date: 2003-05-13
Also published as: EP1226158B1; US7262169B1; WO2001029065A1; GB9924759D0; CA2387995A1; EP1226158A1; AU7810000A; DE60003711D1; ES2200951T3; DE60003711T2; ATE244262T1

Abstract

(57)【要約】本発明は、式（Ｉ）の化合物、ＰＳＡ複合体として知られる抗癌剤の合成に有用な中間体化合物の改善された合成に関する。【化１】

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】（発明の背景）前立腺癌および関連する状態の治療に有用な組成物は、米国特許第５，５９９
，６８６号および第５，８６６，６７９号；および「前立腺癌の治療に有用な複
合体」と題する１９９７年１０月１４日出願の米国特許出願番号０８／９５０，
８０５（国際特許公開番号ＷＯ９８／１８４９３に対応する）に記載されている
。ＰＳＡ複合体と呼ぶことができる前記組成物は、既知の細胞毒剤と、遊離前立
腺特異性抗原によって選択的なタンパク質分解切断を受けるアミノ酸配列、また
出願番号０８／９５０，８０５（１９９９年９月７日発行の米国特許第５，９４
８，７５０号に対応する）に関しては、親水性置換基を有する環状アミノ酸を含
むアミノ酸配列を有するオリゴペプチドとを含む化学複合体を含む。オリゴペプ
チド部分は、遊離前立腺特異性抗原（ＰＳＡ）によって選択的に認識され、それ
らの酵素活性によってタンパク質分解切断を受けることが可能なオリゴマーから
、選択される。

【０００２】理想的には、ＰＳＡタンパク質分解切断部位を含む非損傷オリゴペプチドが直
接、または化学リンカーによって細胞毒剤に結合する時、細胞毒剤の細胞毒活性
は、大きく低下するかまたは不在である。また、理想的には、結合したオリゴペ
プチドを切断部位でタンパク質分解切断すると、細胞毒剤の細胞毒活性は、有意
に増大するかまたは完全に回復する。好ましくは、オリゴペプチドのＮ−末端は
、親水性ブロック基によって保護され、その親水性ブロック基の好ましい例は、
グルタル酸およびコハク酸である。こうした保護オリゴペプチドは、以下の構造
：保護基 − ＡＡ_１−ＡＡ_２−ＡＡ_３−ＡＡ_４−ＡＡ_５−ＡＡ_６−ＡＡ_７（式中、ＡＡ_１、ＡＡ_２、ＡＡ_３、ＡＡ_４、ＡＡ_５、ＡＡ_６およびＡＡ_７は、独
立して、天然および非天然アミノ酸から選択される）によって説明することができる。より多くまたはより少ないアミノ酸残基（５〜
１０個のアミノ酸）を有する保護オリゴペプチドが代わりにＰＳＡ複合体に組み
込まれうることが、考えられる。

【０００３】ＰＳＡ複合体に組み込まれる好ましいＮ−末端保護基には、スクシニル、グル
タリルおよびこれらに類するものなどのジカルボン酸アルカンがある。従って、
好ましい保護オリゴペプチドは、式：

【０００４】

【化１９】によって説明することができる。

【０００５】ＡＡ_７残基による細胞毒剤の選択的結合を確実にするために、保護基の遊離カ
ルボン酸基をブロックしなければならない。このために適するブロック基は、９
−フルオレニルエステル（Ｆｍ）であり、それは、これが、工程の終りに温和な
条件（２０％ピペラジン）のもとで容易に除去されるからである。従って、望ま
しいＰＳＡ複合体の合成における重要な中間体は、式Ａ：

【０００６】

【化２０】の化合物である。

【０００７】ＷＯ９８／１８４９３に開示されている特定サンプルの一部において、複合体
は、アミノ酸配列：４−ヒドロキシプロリン−アラニン−セリン−ＡＡ_４−ＡＡ_５−ＡＡ_６−ＡＡ _７を有するオリゴペプチドを含み、細胞毒剤は、Ｃ−末端に結合している（すなわ
ち、ＡＡ_７残基のカルボキシル基によって）。従って、好ましい調製法において
、望ましい細胞毒は、式Ｂ：

【０００８】

【化２１】（式中、Ｆｍは、９−フルオレニルメチルを表し、ｒは、２または３である）のペプチド類似体のＡＡ_７残基に結合する。

【０００９】上で言及した特許出願に開示されているように、こうした化合物は、固相ペプ
チド合成の通常技術を含む直鎖型戦略によって製造することができる。しかし、
こうした方法は、工場規模の製造よりむしろ実験室規模の合成に最適である。さ
らに、固相法には、無水ＨＦの使用が必要であり、これには特別な取扱い技術お
よび予防措置が必要である。

【００１０】規模拡大により適する別の戦略には、式（Ｃ）：

【００１１】

【化２２】のトリペプチド類似体、特に、式（Ｃ−１）：

【００１２】

【化２３】（式中、Ｆｍおよびｒは、前で定義したとおりである）の中間体化合物を製造し、続いて、保護トリペプチド（Ｃ）を適切なテトラペプ
チドに結合させることが含まれる。

【００１３】従って、式（Ｃ−１）の化合物は、重要な合成目標を代表する。セリンを用い
て開始する通常の溶液相戦略をこうした化合物の合成に用いることができるが、
その結果には失望させられる。特に、ペプチド鎖の組み立ておよびＦｍブロック
グルタリルまたはスクシニル基の導入中に、セリンのヒドロキシル基とカルボン
酸基の両方を（例えば、それぞれ、ベンジルエーテルおよびｐ−ニトロベンジル
エステルとして）保護することが必要である。これらの保護基を取り外す試みは
、Ｆｍブロック基の部分的切断を必ず導き、結果として、所望の生成物の収率お
よび／または純度を低下させる。

【００１４】従って、工業規模での使用に適する、ＰＳＡ複合体の合成に有用なペプチド中
間体化合物、特に、式（Ｃ）の中間体化合物および式（Ａ）の前駆体化合物の合
成のために、適便でクリーンな高収率の方法が継続的に必要とされている。

【００１５】（発明の開示）本発明は、溶液相化学を用いる式Ｂの中間体化合物を製造するための方法を提
供する。

【００１６】

【化２４】本方法は、式Ｅ：

【００１７】

【化２５】のジエステルを、トリペプチドＤ：

【００１８】

【化２６】またはその塩と反応させて、式Ｃ−１：

【００１９】

【化２７】の中間体またはその塩を提供する工程を含む。

【００２０】（発明の詳細な説明）本発明は、溶液相化学を用いる、式Ｂの中間体化合物を製造するための方法を
提供する。

【００２１】

【化２８】本方法は、式Ｅ：

【００２２】

【化２９】のジエステルを、トリペプチドＤ：

【００２３】

【化３０】またはその塩と反応させて、式Ｃ−１：

【００２４】

【化３１】の中間体またはその塩を提供する工程を含む。

【００２５】本発明は、（ｉ）非保護アラニン−セリンを、Ｎ−保護４−ヒドロキシプロリンのペン
タフルオロフェニルエステルと反応させて、Ｎ−保護４−ヒドロキシプロリン−
アラニン−セリンを提供する工程；（ｉｉ）工程（ｉ）の生成物からＮ−保護を取り外す工程；および（ｉｉｉ）工程（ｉｉ）の生成物を、式Ｅ：

【００２６】

【化３２】（式中、ｒは、２または３である）と反応させる工程を順序どおりに含む、式Ｃ−１：

【００２７】

【化３３】（式中、ｒは、２または３である）の中間体化合物を製造するための方法をさらに提供する。

【００２８】本発明の方法は、ＰＳＡ複合体の製造における中間体として有用なＮ−末端保
護オリゴペプチドの製造に適便で有効な経路を提供する。利用可能な別の方法と
比較して、本発明の方法は、必要とする工程が少なく、高収率で高純度の生成物
を提供する。容易に入手可能な出発原料を利用し、本方法におけるすべての工程
が工場規模の操作に適している。

【００２９】本発明は、オリゴペプチド中間体の合成における中間体として特に有用な化合
物も提供する。これらの中間体化合物には、式Ｃ−１：

【００３０】

【化３４】の化合物および化合物Ｈ−Ｃｈｇ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｏ−ベンジル（
配列番号１）

【００３１】

【化３５】またはその塩がある。

【００３２】本方法の重要な特徴は、適切なアミン成分を、適切な酸のペンタフルオロフェ
ニルエステル成分と反応させることによるアミド結合の生成である。該当するペ
ンタフルオロフェニルエステルは、安定な結晶質固体であり、そのため、使用前
、保管するように、容易に大量に製造される。ペンタフルオロフェニルエステル
は、温和な条件のもとでアミン化合物と円滑に反応して、高収率で所望のアミド
を生成する。所望のアミドは、副生成物、ペンタフルオロフェノールから溶離に
分離でき、この副生成物は、高収率で回収して、再利用することができる。さら
に、遊離ヒドロキシル基およびカルボン酸基は、反応条件による影響を受けず、
従って、保護の必要がない。これは、別の方法と比較して本方法を非常に単純化
する。

【００３３】本明細書中で用いる用語「天然アミノ酸」は、ｍＲＮＡのコドンによってコー
ドされるようなアミノ酸を表す。

【００３４】本明細書中で用いる用語「非天然アミノ酸」は、ｍＲＮＡのコドンによってコ
ードされないようなアミノ酸を表す。好ましくは、非アミノ酸は、α−アミノ酸
である。

【００３５】本発明の方法のための出発原料は、市販のまたは容易に合成されるアミノ酸、
ジペプチド、トリペプチドおよびテトラペプチドである。好ましい実施態様にお
いて、出発原料は、ジペプチドアラニン−セリン：

【００３６】

【化３６】であり、これは、ＢａｃｈｅｍＡＧ，Ｈａｕｐｔｓｔｒａｓｓｅ１４４，Ｃ
Ｈ−４４１６，Ｂｕｂｅｎｄｏｒｆ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄなどの供給業者か
ら大量に市販されている。

【００３７】本方法の第一工程では、ジペプチドのアミノ基を、Ｎ−保護４−ヒドロキシプ
ロリンのペンタフルオロフェニルエステルと反応させて、Ｎ−保護トリペプチド
４−Ｈｙｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒを生成する：

【００３８】

【化３７】

【００３９】自己縮合を防止するために、４−ヒドロキシプロリンのアミノ官能基の保護が
必要である。アミノ保護基のこうした使用は、ペプチド合成では日常的なことで
あり、当業者は、本発明の内容に有用でありうる保護基の例について、Ｐｒｏｔ
ｅｃｔｉｖｅＧｒｏｕｐｓｉｎＯｒｇａｎｉｃＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｍ
ｃＯｍｉｅ，ｅｄ．，ＰｌｅｎｕｍＰｒｅｓｓ，ＮＹ（１９７３）；およびＰ
ｒｏｔｅｃｔｉｖｅＧｒｏｕｐｓｉｎＯｒｇａｎｉｃＳｙｎｔｈｅｓｉ
ｓ，Ｇｒｅｅｎｅｄ．，ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９８
１）などのテキストを参照する。

【００４０】上に示したような好ましい中間化合物Ｄの合成に必要ではないが、容易に利用
できるジペプチドのカルボン酸（カルボキシ）部分、および追加として、または
代わりに、ヒドロキシプロリンおよびジペプチドのヒドロキシ部分をトリペプチ
ド生成反応の前に任意に保護して、後で脱保護することができるということは、
当業者には理解できよう。

【００４１】単に例として、有用なアミノ酸保護基には、例えば、ホルミル、アセチル、ジ
クロロアセチル、プロピニル、ヘキサノイル、３，３−ジエチルヘキサノイル、
γ−クロロブチルおよびこれらに類するものなどのＣ_１〜Ｃ_１０アルカノイル基
；ｔ−ブトキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニル、アリロキシカルボニル
、４−ニトロベンジルオキシカルボニル、フルオレニルメチルオキシカルボニル
およびシンナモイルオキシカルボニルなどのＣ_１〜Ｃ_１０アルコキシカルボニル
およびＣ_５〜Ｃ_１５アリールオキシカルボニル基；２，２，２−トリクロロエト
キシカルボニルなどのハロ−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルコキシカルボニル；および
ベンジル、フェネチル、アリル、トリチルおよびこれらに類するものなどのＣ_１〜Ｃ_１５アリールアルキルおよびアルケニル基を挙げることができる。他の通常
用いられるアミノ保護基は、アセト酢酸メチルまたはエチルなどのβ−ケトエス
テルを用いて製造したエナミンの形態のものである。

【００４２】好ましいアミノ保護基は、アルカリ性条件のもとでアミンをジ−ｔ−ブチルジ
カーボネートと反応させることによって生成し、酸加水分解によって切断するこ
とができるｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）である。

【００４３】有用なカルボキシ保護基には、例えば、メチル、ｔ−ブチル、デシルなどＣ_１〜Ｃ_１０アルキル基；２，２，２−トリクロロエチルおよび２−ヨードエチルな
どのハロ−Ｃ_１〜Ｃ_１０アルキル；ベンジル、４−メトキシベンジル、４−ニト
ロベンジル、トリフェニルメチル、ジフェニルメチルなどのＣ_５〜Ｃ_１５アリー
ルアルキル；アセトキシメチル、プロピオンオキシメチルおよびこれらに類する
ものなどのＣ_１〜Ｃ_１０アルカノイルオキシメチル；およびフェナシル、４−ハ
ロフェナシル、アリル、ジメチルアリル、トリメチルシリルなどのトリ−（Ｃ_１〜Ｃ_３アルキル）シリル、β−ｐ−トルエンスルホニルエチル、β−ｐ−ニトロ
フェニルチオ−エチル、２，４，６−トリメチルベンジル、β−メチルチオエチ
ル、フタルイミドメチル、２，４−ジニトロ−フェニルスルフェニル、２−ニト
ロベンズヒドリルおよび関連する基などの基を挙げることができる。

【００４４】同様に、有用なヒドロキシ保護基には、例えば、ホルミル基、クロロアセチル
基、ベンジル基、ベンズヒドリル基、トリチル基、４−ニトロベンジル基、トリ
メチルシリル基、フェナシル基、ｔ−ブチル基、メトキシメチル基、テトラヒド
ロピラニル基などを挙げることができる。

【００４５】本発明の方法に有用な化合物の塩には、無機または有機酸からの塩基性化合物
の通常の塩、または無機または有機塩基からの酸性化合物の塩が挙げられる。例
えば、塩基性化合物のこうした通常の塩には、塩酸、臭化水素酸、硫酸およびこ
れらに類するものなどの無機酸から誘導されるもの、およびトルエンスルホン酸
、メタンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、エタン二スルホン酸、ト
リフルオロ酢酸およびこれらに類するものなどの有機酸から製造される塩が挙げ
られる（しかし、それらに限定されない）。酸性化合物の通常の塩の例には、ナ
トリウム、カリウム、セシウム、リチウム、アンモニウム、カルシウムおよびこ
れらに類するものなどの無機塩基から誘導されるもの、およびトリエチルアンモ
ニウム、エチルジイソプロピルアンモニウム、ベンジルアミン、ビシクロヘキシ
ルアミン（ＢＣＨＡ）およびこれらに類するものなどの有機塩基から製造される
塩が挙げられる（しかし、それらに限定されない）。

【００４６】Ｎ−保護４−ヒドロキシプロリンのペンタフルオロフェニルエステルは、エス
テル生成のためのあらゆる標準的技術を用いて、Ｎ−保護アミノ酸をペンタフル
オロフェノールと反応させることによって製造することができる。好ましい方法
では、アセトニトリルまたは酢酸エチル中に過剰なジクロロヘキシルカルボジイ
ミドが存在する状態で、アミノ酸をわずかに過剰なペンタフルオロフェノールと
反応させる。

【００４７】反応式（１）に示したようなトリペプチドの生成には、ジメチルホルムアミド
（ＤＭＦ）などの不活性溶媒中で短時間（約２〜約３時間）、温和に加熱するこ
と（例えば、約５０℃に）のみが求められる。

【００４８】本発明の方法の次の工程は、トリペプチドからのＮ−保護基の除去である。好
ましいＢｏｃ保護基の場合、これは、第一工程から得られた粗生成物を酸処理す
ることによって、最も適便に達成される。典型的な方法では、溶媒を減圧下で蒸
発させ、残留物を室温で２４時間、濃塩酸とイソプロパノールの混合物とともに
攪拌する。イソプロパノールでさらに希釈した後、純粋なトリペプチドが結晶質
固体として高収率で（その塩酸塩として）得られる。

【００４９】本発明の方法における次の工程は、トリペプチドのＮ−末端にコハク酸または
グルタル酸９−フルオレニルメチルを結合させる工程である。これは、反応式（
２）：

【００５０】

【化３８】に示すように、トリペプチド（遊離アミンとして）を、式（Ｅ）：

【００５１】

【化３９】のコハク酸またはグルタル酸混合ジエステルと反応させることによって達成され
る。

【００５２】混合ジエステル（Ｅ）は、無水コハク酸（ｒ＝２）または無水グルタル酸（ｒ
＝３）から二工程で容易に製造される。第一工程では、適切な環状無水物を０．
５当量の９−フルオレニルメタノールと反応させて、コハク酸またはグルタル酸
のフルオレニルメチルモノエステルを生成する。第二工程では、標準的なエステ
ル化条件のもとでモノエステルをペンタフルオロフェノールと反応させることに
よって、混合ジエステルを与える。

【００５３】反応式（２）に示した結合反応は、反応式（１）に示した類似の反応について
上に記載したものと類似した条件のもとで発生する。しかし、トリペプチドが、
最初に塩酸塩（または他の塩）として存在する場合、第三アミンまたはその他の
ものなどの塩基を１モル当量、最初に、反応混合物に添加して、遊離アミンを遊
離させなければならない。

【００５４】中間体化合物Ｃ−１は、溶媒を蒸発させて、残留物を水とｔ−ブチルメチルエ
ーテルなどの適する有機溶媒との間で分配することによって、容易に単離し、精
製することができる。水性相を処理することによって、粗生成物を生じ、これは
、典型的には二工程で、最初にイソプロパノールから、そして次に酢酸エチルと
メタノールの５：１（ｖ／ｖ）混合物から結晶化させることによって、精製する
ことができる。

【００５５】その後、Ｎ−保護トリペプチド中間体を、標準的な溶液相化学によって別に製
造した第二ポリペプチド中間体（Ｆ）と結合させて、Ｎ−保護オリゴペプチド中
間体（Ｂ）を提供することができる。

【００５６】

【化４０】（式中、Ｐｒｏｔは、本明細書中で上に記載したようなカルボン酸保護基である
。）ペプチド結合反応のために、カルボキシル活性化剤が、通常、塩基が存在する
状態、および任意に、添加剤が存在する状態で用いられる。カルボキシル活性化
剤は、ヘキサフルオロリン酸２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１
，３，３−テトラメチルウロニウム（ＨＢＴＵとして知られている）、１−ヒド
ロキシベンゾトリアゾール水和物（ＨＯＢＴとして知られている）、ジクロロヘ
キシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、Ｎ−エチル−Ｎ−（３−ジメチルアミノプロ
ピル）−カルボジイミド（ＥＤＣ）、ジフェニルホスホリルアジド（ＤＰＰＡ）
、ヘキサフルオロリン酸ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ジメチル
アミノ）ホスホニウム（ＢＯＰ）、１，３−ジイソプロピルカルボジイミド（Ｄ
ＩＣ）などを含む（しかし、それらに限定されない）群から選択して、併用また
は単独で用いることができる。好ましくは、カルボキシル活性化剤は、ＥＤＣ、
ＤＩＣおよびＤＤＣから選択される。最も好ましくは、カルボキシル活性化剤は
、ＥＤＣである。

【００５７】ペプチド結合反応は、コリジン、ルチジン、ピリジン、トリエチルアミン、Ｈ
ｕｎｉｇ塩基（（ｉＰｒ）_２ＮＥｔ）、Ｎ−エチルモルホリンおよびこれらに類
するものなどの塩基を含むこともできる。好ましくは、塩基は、コリジン、Ｎ−
エチルモルホリンおよびルチジンから選択される。最も好ましくは、塩基は、Ｎ
−エチルモルホリンである。ペプチド結合反応は、１−ヒドロキシ−７−アザベ
ンゾトリアゾール（ＨＯＡｔ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ
）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、ピリジンＮ−オキシド、４−ヒドロキシピ
リジンＮ−オキシドおよびこれらに類するものなどのなどの添加剤を含むことも
できる。好ましくは、添加剤は、ＨＯＡｔ、４−ヒドロキシピリジンＮ−オキシ
ドおよびＨＯＢｔから選択される。最も好ましくは、添加剤は、４−ヒドロキシ
ピリジンＮ−オキシドである。ペプチド結合反応は、溶媒を含むこともできる。
こうした溶媒は、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、Ｎ，Ｎ−ジメチル
アセトアミド（ＤＭＡｃ）、Ｎ−メチルピペリドン（ＮＭＰ）、ＴＨＦ水溶液な
どから選択することができる。好ましくは、溶媒は、ＤＭＦ、ＤＭＡｃ、ＮＭＰ
およびこれらに類するものなどの極性非プロトン性有機溶媒から選択される。最
も好ましくは、溶媒は、ＤＭＦである。

【００５８】好ましくは、Ｐｒｏｔは、ベンジル基であり、これは、Ｐｄ／Ｃを用いたＨ_２での処理またはその他のものなどの触媒水素化によって除去することができる（
Ｈ．Ｐａｕｌｓｅｎ．ＡｎｄＭ．Ｓｃｈｕｌｔｚ，ＬｉｅｂｉｇｓＡｎｎ．
Ｃｈｅｍ．１９８６：１４３５−１４４７；Ｒ．Ｃ．Ｋｅｌｌｙｅｔａｌ．
，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５１：４５９０−４５９４（１９８６））。好ましく
は、水素化によるベンジル基の除去は、酸が不在の状態で行う。しかし、水素化
は、メタンスルホン酸、トルエンスルホン酸およびこれらに類するものなどの有
機酸がさらに存在する状態で遂行することができる。酸を水素化反応に添加する
場合、酸は、好ましくはメタンスルホン酸である。

【００５９】本方法の特定の例は、式ＦのＣ−末端保護テトラペプチドがＣ末端保護Ｃｈｇ
−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ（この場合、Ｃｈｇは、シクロヘキシルグリシンであ
る）であるものである。この特定の合成は、以下の反応機構で説明される：

【００６０】

【化４１】

【００６１】好ましくは、式Ｂ−１の化合物の合成に関して、上で説明した脱保護反応の粗
生成物は、メタノール、エタノールおよびこれらに類するものなどの極性溶媒中
でその粗生成物をスラリー化し、次に、酢酸エチル、酢酸イソプロピルおよびこ
れらに類するものなどの反溶媒を添加することによって精製し、その後、精製し
た化合物Ｂ−１を回収する。好ましくは、このスラリー化精製手順（「スイッシ
ュ精製」と呼ぶこともできる）を脱保護からの粗生成物に対して２回行う。

【００６２】以下の反応機構で説明されるとおり、中間体（Ｂ）を、その後、（下の反応機
構において示すようなドキソルビシンなどの）細胞毒剤と結合させて、所望のＰ
ＳＡ複合体を提供することができる。

【００６３】

【化４２】

【００６４】以下の非限定的な実施例は、本発明の方法を説明するものである：実施例１Ｆｍ−グルタリル−Ｈｙｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−ＯＨの調製のための実験手順工程１：Ｂｏｃ−ｔｒａｎｓ−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン

【００６５】

【化４３】

【００６６】１Ｍの水酸化ナトリウム水溶液（２５．２Ｌ）およびｔ−ブタノール（１２．
０Ｌ）中のｔｒａｎｓ−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン（３．０ｋｇ、２２．８
Ｍ）の溶液を、２０℃で、２０分間にわたって、ｔ−ブタノール（６．０Ｌ）中
のジ−ｔ−ブチルジカーボネート（５．０９ｋｇ）の溶液で処理した。添加が完
了し次第、得られた溶液を２０℃で２時間、攪拌した。溶液をヘキサン（２×１
５．０Ｌ）で抽出し、その後、水（１５．０Ｌ）中の硫酸水素カリウム（３．６
ｋｇ）の溶液を注意深く添加することによって、ｐＨ１に酸性化した。混合物を
酢酸エチル（３×１５．０Ｌ）で抽出した。混合酢酸エチル抽出物を水（２×１
．０Ｌ）で洗浄し、常圧での共沸蒸留によって乾燥させた。

【００６７】次に、酢酸エチル溶液を常圧蒸留によって濃縮して、１５．０Ｌの体積にし、
ヘキサン（８．０Ｌ）で希釈して、結晶種を入れ、２０℃で１時間攪拌した。ヘ
キサン（２２．５Ｌ）を２時間かけて添加し、そのスラリーを１時間、０℃に冷
却して、濾過によって固形物を回収した。生成物を２：１の冷（０℃）へキサン
／酢酸エチル（１５．０Ｌ）で洗浄し、真空下、４５℃で乾燥させて、表題化合
物を白色結晶質固体として生じた。収量：４．３０６ｋｇ、８１％。ＨＰＬＣ；
＞９９Ａ％。

【００６８】工程２Ｂｏｃ−ｔｒａｎｓ−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン・ペンタフルオ
ロフェニルエステル

【００６９】

【化４４】

【００７０】Ｂｏｃ−Ｔｒａｎｓ−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン（３．５ｋｇ）およびペ
ンタフルオロフェノール（３．０６ｋｇ）を酢酸エチル（５２Ｌ）に溶解した。
この溶液を、酢酸エチル（８Ｌ）中のジクロロヘキシルカルボジイミド（３．４
３ｋｇ）の溶液で処理し、混合物を室温で２時間攪拌した。得られたスラリーを
０℃に冷却し、濾過して、固形物を酢酸エチル（１５Ｌ）で洗浄した。濾液を常
圧で蒸発させて、１０Ｌの体積にし、これをヘキサン（１００ｍＬ）で希釈した
。得られた混合物を室温で一晩攪拌し、その後、１時間、０℃に冷却した。固形
物を濾過によって回収して、１０：１の冷（℃）へキサン／酢酸エチル（１５Ｌ
）で洗浄し、真空下、４５℃で乾燥させて、表題化合物を白色結晶質固体として
生じた。収量：５．４７８ｋｇ、９１％。ＨＰＬＣ；９９Ａ％。

【００７１】工程３：グルタル酸フルオレニルメチル

【００７２】

【化４５】

【００７３】９−フルオレニルメタノール（２．０ｋｇ）、無水グルタル酸（２．３３ｋｇ
）および炭酸水素ナトリウム（１．７１ｋｇ）を一緒に、Ｎ−メチルピロリドン
（８．０Ｌ）中、室温で、７２時間攪拌した。スラリーを濾過し、固形物は、酢
酸イソプロピル（２×１０．０Ｌ）で洗浄した。濾液は、１．０Ｍの塩酸（３×
１０．０Ｌ）で洗浄した。有機相を１．０Ｍの水酸化ナトリウム水溶液（３×８
．０Ｌ）で抽出した。混合塩基性抽出物に酢酸イソプロピル（２０．０Ｌ）をか
ぶせて、２．０Ｍの塩酸（１２．５Ｌ）でｐＨ２に酸性化した。相を分離し、水
性相を酢酸イソプロピル（１０．０Ｌ）で抽出した。

【００７４】混合有機相を水（１０．０Ｌ）で洗浄し、減圧下、６０℃未満での共沸蒸留に
よって乾燥させた（ＫＦ＜０．０５％）。その後、溶液を減圧下（＜６０℃）で
濃縮して、７．０Ｌの体積にした。溶液をヘキサン（６．０Ｌ）で希釈し、結晶
種を入れて、室温で３０分間攪拌した。得られたスラリーは、４０分かけてヘキ
サン（４２．０Ｌ）を添加することによって、希釈した。スラリーを１時間、０
℃に冷却し、濾過によって固形物を回収して、８：１の冷（０℃）へキサン／酢
酸イソプロピル（２０．０Ｌ）で洗浄した。固形物を真空下、４５℃で乾燥させ
て、表題化合物を薄いクリーム色の固体として生じた。収量：２．６７６ｋｇ、
８５％。ＨＰＬＣ；９９Ａ％。

【００７５】工程４：グルタル酸フルオレニルメチル・ペンタフルオロフェニルエステル

【００７６】

【化４６】

【００７７】グルタル酸フルオレニルメチル（２．５ｋｇ）およびペンタフルオロフェノー
ル（１．６３ｋｇ）を酢酸エチル（２５Ｌ）に溶解した。溶液を、酢酸エチル（
７．５Ｌ）中のジシクロヘキシルカルボジイミド（１．８３ｋｇ）の溶液で処理
し、混合物を２０℃で一晩攪拌した。得られたスラリーを濾過し、固形物を酢酸
エチル（１０Ｌ）で十分洗浄した。濾液を常圧で蒸発させて、７．５Ｌの体積に
し、ヘキサン（７５Ｌ）で希釈した。その後、スラリーを６０〜６５℃で濾過し
、放置して室温に冷却して、一晩攪拌した。スラリーを１時間、０℃に冷却し、
濾過によって固形物を回収して、１０：１のヘキサン／酢酸エチル（１５Ｌ）で
洗浄した。固形物を真空下、４５℃で乾燥させて、表題化合物を白色結晶質固体
として生じた。収量：３．５５３ｋｇ、９３％。ＨＰＬＣ；９９Ａ％。

【００７８】工程５：ＨＣｌ．Ｈｙｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−ＯＨ

【００７９】

【化４７】

【００８０】Ａｌａ−Ｓｅｒ−ＯＨ（１．５ｋｇ、８．５１５Ｍ）およびＢｏｃ−ｔｒａｎ
ｓ−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン（３．７２ｋｇ）をジメチルホルムアミド（
１５Ｌ）中で３時間、５０℃で加熱した。溶液を２０℃に冷却し、濃塩酸（７．
５Ｌ）で処理して、室温で２４時間攪拌した。得られたスラリーをイソプロパノ
ール（３０Ｌ）で希釈して、室温で３０分間攪拌し、その後、１時間、０℃に冷
却した。固形物を濾過によって回収し、イソプロパノール（２０Ｌ）で洗浄した
。固形物を真空下、４０℃で乾燥させて、表題化合物を白色結晶質固体として生
じた。収量：２．５０５ｋｇ、９０％。ＨＰＬＣ；９９Ａ％。

【００８１】工程６：Ｆｍ−グルタリル−Ｈｙｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−ＯＨ

【００８２】

【化４８】

【００８３】ＨＣｌ．Ｈｙｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−ＯＨ（２．３ｋｇ）をジメチルホルムアミ
ド（２２Ｌ）に懸濁させ、スラリーをＮ−エチルモルホリン（９１１ｍＬ）で処
理し、続いて、ジメチルホルムアミド（１４Ｌ）中のグルタル酸フルオレニルメ
チル・ペンタフルオロフェニルエステル（３．５ｋｇ）の溶液で処理した。混合
物を５０℃で３時間加熱し、得られた溶液を減圧下で残渣になるまで蒸発させた
。この残渣を水（８０Ｌ）とｔ−ブチルメチルエーテル（３４Ｌ）の間で分配し
た。相を分離し、水性相をｔ−ブチルメチルエーテル（３４Ｌ）で抽出した。水
溶液に結晶種を入れ、室温で一晩攪拌した。固形物を濾過（ゆっくりと）によっ
て回収し、水（２５Ｌ）で洗浄した。温めながら、湿ったフィルターケーキをイ
ソプロパノール（９０Ｌ）に溶解し、常圧での蒸留によって、溶液を半量に濃縮
した。追加分のイソプロパノール（３×４５Ｌ）を添加し、各割り当て分の添加
後に、常圧蒸留によって、バッチを約半量に濃縮した。スラリーをイソプロパノ
ール（２３Ｌ）で希釈し、２０℃で一晩攪拌して、１時間、０℃に冷却し、固形
物を濾過によって回収した。ケーキをイソプロパノール（２０Ｌ）で洗浄し、固
形物を真空下、４５℃で乾燥させて、粗生成物を白色固体として生じた。収量：
３．４４７ｋｇ、８４％。ＨＰＬＣ；９９Ａ％。

【００８４】工程７：Ｆｍ−グルタリル−Ｈｙｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−ＯＨの再結晶Ｆｍ−グルタリル−Ｈｙｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−ＯＨ（３．４ｋｇ）を還流状態
でメタノール（５１ｍＬ）に溶解した。溶液を濾過し、常圧蒸留によって濃縮し
て、１７Ｌ（５ｍＬ／ｇ）の体積にした。溶液を酢酸エチル（１０２Ｌ）で希釈
し、放置して２０℃に冷却して、一晩攪拌した。得られたスラリーを１時間、０
℃に冷却し、固形物を濾過によって回収した。ケーキを１０：１の冷（０℃）酢
酸エチル／メタノール（２０Ｌ）で洗浄し、真空下、４５℃で乾燥させて、生成
物が白色固体として生じた。回収：３．３４９ｋｇ、９８．５％、ＨＰＬＣ；９
９．３Ａ％ ^１３ＣＮＭＲ（１００．６２ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６，５０℃）：３９．９ｐｐｍにおける溶媒ＤＭＳＯの中心線に照合したｐｐｍでの化学シフト
。１７３．５、１７３．０、１７２．６、１７２．３、１７１．８、（Ｃ＝Ｏ）；
１４４．６、１４１．７、１２８．６、１２８．０、１２５．９、１２１．０、
（芳香族のＣおよびＣＨ）；６９．６、５９．３、５５．５、４９．０、４７．
３、（ＣＨ）；６６．２、５９．４、５６．０、３８．７、３３．７＊、２０．
６５、（ＣＨ_２）；１８．５、（ＣＨ_３）。

【００８５】＊同じ化学シフトで二つの異なる炭素。

【００８６】実施例２ＨＣｌ．Ｈ−Ｃｈｇ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｏ−ベンジルを調製するため
の実験手順

【００８７】

【化４９】

【００８８】工程１：ＨＣｌ．Ｈ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｏ−ベンジル

【００８９】

【化５０】

【００９０】ロイシンベンジルエステルｐ−トシレート（１０００ｇ）およびＨＯＢｔ（４
１２ｇ）を酢酸イソプロピル（１２Ｌ）中でスラリー化させた。混合物を氷浴内
で０℃に冷却し、水（１Ｌ）中の炭酸水素ナトリウム（４６９．７ｇ）、水（２
Ｌ）中のＮ−ＢＯＣ−Ｌ−セリン（５７３．６ｇ）および水（２Ｌ）中のＥＤＣ
．ＨＣｌ（５６０．２ｇ）のスラリーを添加した。混合物を放置して、３０分か
けて２０℃に温め、２０℃で２時間成熟させた。２時間後に反応が完了していな
い場合には、さらにＮａＨＣＯ_３およびＥＤＣ．ＨＣｌを添加した。相を分離し
、有機相を、飽和炭酸水素ナトリウム（２×３．７５Ｌ）、０．５Ｍの硫酸水素
ナトリウム（２×３．７５Ｌ）、そして水（２×２．５Ｌ）で順次洗浄した。

【００９１】湿潤酢酸イソプロピル溶液を減圧下で３Ｌに濃縮し、含水量をチェックした（
ＫＦ＝０．１２％。酢酸イソプロピル中の塩化水素を添加する前、この溶液が乾
燥していることは重要である）。溶液を、窒素雰囲気下で、２０Ｌの丸底フラス
コに移入して、０℃に冷却した。溶液に、酢酸イソプロピル中３．６ＭのＨＣｌ
（７Ｌ、１０ｍｏｌ当量のＨＣｌ）を添加した。５分後、生成物が結晶化し始め
た。反応混合物を０℃で１時間熟成させ、その後、放置して室温に温めた。

【００９２】スラリーを０〜５℃に冷却し、ヘプタン（２．５Ｌ）で希釈して、０℃で３０
分間熟成させた。生成物を濾過によって回収し、冷酢酸イソプロピル／ヘプタン
（４：１）（２．５Ｌ）で洗浄して、窒素を流しながら真空下、３５℃で乾燥さ
せた。収量＝８２４．６ｇ、９４％；２１０ｎｍで、ＬＣＡＰ＞９９．５Ａ％、
（融点＝１５８〜１６０℃）。

【００９３】工程２：Ｎ−Ｂｏｃ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｏ−ベンジル

【００９４】

【化５１】

【００９５】ＨＣｌ．Ｈ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−ＯＢｎ（３５０ｇ）、ＨＯＢｔ（１５７．７ｇ
）およびＮ−Ｂｏｃ−Ｌ−グルタミン（２６２．５ｇ）をＤＭＦ（２．５Ｌ）中
でスラリー化し、混合物を０℃に冷却した。Ｎ−エチルモルホリン（２４５．５
ｇ）およびＥＤＣ．ＨＣｌ（２１４ｇ）を添加し、混合物を０℃で２．５時間熟
成させた。水（１４．７Ｌ）を２０分かけて添加して、白色スラリーを０℃で１
時間熟成させた。生成物を濾過によって回収し、水（３．２Ｌ）で洗浄した。ケ
ーキをヒュームフード内で一晩乾燥させた。ＤＭＦおよびＨＯＢｔを含有する単
離Ｎ−ＢＯＣ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−ＯＢｎを、同じサイズの第二バッチと
混合し、２０℃で１時間、水（１２Ｌ）中でスイッシュした。生成物を濾過によ
って回収し、水（２．５Ｌ）で洗浄して、週末にわたってヒュームフード内で空
気乾燥させた。窒素を流しながら、バッチを真空下、４２℃で乾燥させた。混合
バッチについての収量＝１０３７．４ｇ、９３．８％、ＨＰＬＣ＞９８．７Ａ％
（融点＝１４５〜１４７℃）。

【００９６】工程３：ＨＣｌ．Ｈ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｏ−ベンジル

【００９７】

【化５２】

【００９８】Ｂｏｃ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−ＯＢｎ（７１５ｇ、１．３３Ｍ）を室温で
酢酸イソプロピル（３．５Ｌ）に懸濁させた。スラリーに、酢酸イソプロピル中
３．８ＭのＨＣｌ溶液（３．５Ｌ、１３．３Ｍ）を添加すると、すべての固形物
を溶解した。しばらくすると、生成物が結晶化した。混合物を室温で３．７５時
間攪拌し、このとき、ＨＰＬＣは、反応の完了を示した。スラリーを酢酸イソプ
ロピル（４．０Ｌ）で希釈し、１時間、室温で攪拌して、固形物を窒素下での濾
過によって回収した。過剰のＨＣｌが存在する状態で生成物は非常に吸湿性であ
り、乾燥窒素下で回収しなければならない。ケーキを酢酸イソプロピル（４．０Ｌ）で洗浄し、固形物をフィルタを用いて２
時間、窒素下で乾燥させ、その後、真空下、４５℃で乾燥させた。収率；６２２
．８ｇ、９９％。ＨＰＬＣ；９６．４Ａ％。

【００９９】工程４：Ｂｏｃ−Ｃｈｇ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｏ−ベンジル（配列番
号４）

【０１００】

【化５３】

【０１０１】ＨＣｌ．Ｈ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−ＯＢｎ（２．６ｋｇ）、Ｂｏｃ−Ｌ−
シクロヘキシルグリシン（１．４１４ｋｇ）およびＨＯＢｔ水和物（１６８ｇ）
をＤＭＦ（１３．０Ｌ）に溶解した。Ｎ−エチルモルホリン（１．２６６ｋｇ、
１１．０Ｍ）およびＥＤＣ塩酸塩（１．２６５ｋｇ）を添加し、混合物を２０℃
で３時間攪拌した。溶液を酢酸エチル（１３．０Ｌ）で希釈して、水（２６．０
Ｌ）を添加した。沈降した生成物およびスラリーを室温で１時間攪拌した。固形
物を濾過によって回収し、１：１の酢酸エチル／水（６０Ｌ）で洗浄して、フィ
ルタを用いて２４時間、窒素下で乾燥させ、真空下、４５℃で乾燥させた。表題
化合物を白色固体として得た。収量：３．４４９ｋｇ、９３％。ＨＰＬＣ；９６
．０Ａ％。

【０１０２】工程５：ＨＣｌ．Ｈ−Ｃｈｇ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｏ−ベンジル（配
列番号１）

【０１０３】

【化５４】

【０１０４】Ｎ−Ｂｏｃ−Ｃｈｇ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−ＯＢｎ（１８５０ｇ）を酢酸
イソプロピル（３．２Ｌ）中でスラリー化した。スラリーを氷浴内で０℃に冷却
し、温度を８〜１０℃の間に維持しながら、３．８ＭのＨＣｌ／酢酸イソプロピ
ル（３．７Ｌ、１１．４ｍｏｌ当量）を５分かけて添加した。１５〜２０分後、
出発原料は溶解した。溶液に結晶種を入れ、反応を８〜１０℃で２時間熟成させ
た（＜１Ａ％のＮ−ＢＯＣ−テトラペプチド−ＯＢｎが残留）。窒素ブランケッ
トのもとでバッチを濾過して、冷（１０℃）酢酸イソプロピル（４ｘ３Ｌ）で洗
浄し、その後、フィルタを用いて窒素下で乾燥させた。固形物を真空下、４０℃
で乾燥させた。収量＝７９５．９ｇ（７６％重量％アッセイ、８３．５Ａ％）
。

【０１０５】工程６：スイッシュ手順粗ＨＣｌ．Ｃｈｇ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ（２．２Ｋｇ）を室温で、メタノ
ール（２２．３Ｌ）中でスラリー化した。バッチを１時間攪拌し、その後、酢酸
エチル（４４．６Ｌ）を３０分かけて添加した。バッチを０〜５℃に冷却して、
１時間熟成させ、その後、濾過して、冷（０〜５℃）メタノール／酢酸エチル（
６Ｌ、１：２）で洗浄した。固形物をフィルタを用いて４５分間、窒素下で乾燥
させ、その後、窒素を流しながら、真空下、４０℃で乾燥させた。ＨＣｌ．テト
ラペプチド（１．４７８Ｋｇ、９５．７Ａ％（２１０ｎｍ）、９０．４％ｗ／
ｗ）を、Ｎ−Ｂｏｃ．テトラペプチド−ＯＢｎから８３．１％の回収率で得た。

【０１０６】ＨＣｌ．テトラペプチド（１．４７８Ｋｇ）を室温で、メタノール（１４．８
Ｌ）中でスラリー化し、バッチを１時間攪拌した。酢酸エチル（２９．６Ｌ）を
３０分かけて添加し、バッチを０〜５℃に冷却して、１時間熟成させた。固形物
を濾過によって回収し、冷（０〜５℃）メタノール／酢酸エチル（４．５Ｌ、１
：２）で洗浄して、フィルタを用いて４５分間、窒素下で乾燥させ、その後、真
空下、４０℃で乾燥させた。ＨＣｌ．テトラペプチド（１．３４３Ｋｇ、９７．
５Ａ％（２１０ｎｍ）、９６．３％ｗ／ｗ、融点：２５４〜２５６℃）を、Ｎ
−Ｂｏｃ．テトラペプチド−ＯＢｎから６１％の収率で得た。

【０１０７】 ^１３ＣＮＭＲ（１００．６２ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６，５０℃）：３９．５ｐｐｍにおける溶媒ＤＭＳＯの中心線に照合したｐｐｍでの化学シフト
。１７４．９、１７２．９、１７１．５、１７０．８、１６８．６、（Ｃ＝Ｏ）；
１３６．８、１２９．３、１２８．９、１２８．６、（芳香族のＣおよびＣＨ）
；５７．８、５６．１、５３．３、５１．５、３９．９、２９．２、（ＣＨ）；
６６．８、６２．５、３２．４、２９．０、２８．８、２６．４、２６．３、２
５．１、（ＣＨ_２）；２３．５、２２．４、（ＣＨ_３）。

【０１０８】実施例３Ｆｍ−グルタリル−Ｈｙｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｃｈｇ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅ
ｕ−ＯＨ（配列番号６）

【０１０９】

【化５５】

【０１１０】工程１：Ｆｍ−グルタリル−Ｈｙｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｃｈｇ−Ｇｌｎ−Ｓ
ｅｒ−Ｌｅｕ−Ｏ−ベンジル（配列番号７）ＨＣｌ．Ｈ−Ｃｈｇ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−ＯＢｎ（５００ｇ）、Ｆｍ−
グルタリル−Ｈｙｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−ＯＨ（４９０ｇ）およびＨＯＡｔ（１６
０ｇ）をＤＭＦ（８．２Ｌ）中でスラリー化し、氷浴内で２℃に冷却した。Ｎ−
エチルモルホリン（１３５ｍＬ）を添加し、続いて、ＥＤＣ．ＨＣｌ（２１０ｇ
）を添加した。混合物を０〜２℃で２時間攪拌し、サンプリングした。ＨＰＬＣ
は、０．２Ａ％のテトラペプチドの残留を示した。反応混合物を酢酸エチル（４
Ｌ）で希釈し、５μのインラインフィルタを通して３０ガロンのガラス容器に移
入した。フラスコおよびラインを酢酸エチル／ＤＭＦ（１：１、５００ｍＬ）お
よび酢酸エチル（４Ｌ）ですすいだ。水（１６．４Ｌ）を２５分かけて（温度１
１℃〜２３℃）添加し、２０℃で３０分間、混合物をゆっくりと攪拌した。生成
物を濾過によって回収し、水（３Ｌ）、酢酸エチル（１Ｌ）および水（２×３Ｌ
）で洗浄し、その後、フィルタを用いて窒素下で乾燥させて、真空下、４５℃で
乾燥させた。収量＝９００ｇ、収率９７％。ＨＰＬＣ９６．５Ａ％。

【０１１１】別工程１：Ｆｍ−グルタリル−Ｈｙｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｃｈｇ−Ｇｌｎ−
Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｏ−ベンジル（配列番号７）ＨＣｌ．Ｈ−Ｃｈｇ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−ＯＢｎ（１００ｇ）、Ｆｍ−
グルタリル−Ｈｙｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−ＯＨ（９８ｇ）および４−ヒドロキシピ
リジン−Ｎ−オキシド（ＨＯＰＯ、１８．２ｇ）をＤＭＦ（１．６Ｌ）中でスラ
リー化し、氷浴内で２℃に冷却した。Ｎ−エチルモルホリン（２７ｍＬ）を添加
し、続いて、ＥＤＣ．ＨＣｌ（４２ｇ）を添加した。混合物を２〜５℃で４時間
攪拌して、サンプリングした。ＨＰＬＣは、０．６Ａ％のテトラペプチドの残留
を示した。反応混合物を酢酸エチル（１．６４Ｌ）で希釈し、水（３．３Ｌ）を
７０分かけて添加して、混合物を２０℃で６０分間、ゆっくりと攪拌した。生成
物を濾過によって回収し、水（１．５Ｌ）、酢酸エチル（１Ｌ）および水（３×
１Ｌ）で洗浄し、その後、フィルタを用いて窒素下で乾燥させて、真空下、４５
℃で乾燥させた。収量＝１８６ｇ、収率１００．０％。ＨＰＬＣ９８．０Ａ％
。

【０１１２】工程２：Ｆｍ−グルタリル−Ｈｙｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｃｈｇ−Ｇｌｎ−Ｓ
ｅｒ−Ｌｅｕ−ＯＨ（配列番号６）Ｆｍ−グルタリル−Ｈｙｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｃｈｇ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅ
ｕ−ＯＢｎ（工程１または別工程１に記載したように調製したもの）（１．１Ｋ
ｇ）を、メタンスルホン酸（９３．５ｍＬ）を含有するジメチルアセトアミド（
７．８Ｌ）に溶解した。ＤＭＡ（１．０Ｌ）中でスラリー化した５％Ｐｄ／Ｃ（
１１０ｇ、１０重量％）を添加し、混合物を、常圧で１時間４０分間水素化した
。反応混合物をサンプリングした：ＨＰＬＣは、出発原料の残留がないことを示
した。

【０１１３】Ｈｙｆｌｏ（商標）（５００ｇ）の前湿潤（ＤＭＡ）パッドを通して反応混合
物を濾過して、触媒を除去した。ＨｙｆｌｏパッドをＤＭＡ（２．２Ｌ）で洗浄
し、その後、酢酸エチル（５．５Ｌ）で洗浄した。濾液を酢酸エチル（５．５Ｌ
）で希釈し、１５分間攪拌した。水（４４Ｌ）を４０分かけて添加し、そのバッ
チを１時間熟成させた。固形物を濾過によって回収して、水（１×１０Ｌ、３×
２０Ｌ）で洗浄し、フィルタを用いて窒素ブランケットのもとで乾燥させて、真
空下、４５℃で乾燥させた。収量＝８６２．５ｇ、収率８５％。ＨＰＬＣ８８
．３Ａ％。

【０１１４】工程３：Ｆｍ−グルタリル−Ｈｙｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｃｈｇ−Ｇｌｎ−Ｓ
ｅｒ−Ｌｅｕ−ＯＨのスイッシュ精製粗Ｆｍ−グルタリル−Ｈｙｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｃｈｇ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｌ
ｅｕ−ＯＨ（工程２に記載したように調製したもの）（２．５８ｋｇ）を９９％
の回収率（２．５６Ｋｇ）でふるいにかけた。固形物（２．５６Ｋｇ）を３時間
、酢酸エチル中でスイッシュした。固形物を濾過によって回収し、酢酸エチル（
２６Ｌ）で洗浄して、フィルタを用いて窒素下で乾燥させ、真空下、４０℃で乾
燥させた。収量＝２．４８９Ｋｇ、回収率９６．５％。［ＨＰＬＣにより、２１
０ｎｍで、９５．２Ａ％；ＫＦ＝０．７７重量％；ＴＧＡ＝１．３０重量％；Ｅ
ｔＯＡｃ＝０．５１重量％］ ^１３ＣＮＭＲ（１００．６２ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６，７０℃）：３９．５ｐｐｍにおける溶媒ＤＭＳＯの中心線に照合したｐｐｍでの化学シフト
。１７４．８、１７３．３、１７２．７、１７１．９、１７１．５、１７１．１、
１７０．６、（Ｃ＝Ｏ）；１４４．７、１４１．７、１２８．５、１２７．９、
１２５．７、１２０．８、（芳香族のＣおよびＣＨ）；５９．７、５８．７、５
６．３、５６．０、５３．７、５１．６、４９．７、４７．６、４０．６、３３
．９、（ＣＨ）；６６．７、６２．２、４０．６、３２．４、３０．０、２８．
９、２８．５、２６．６、２６．５、２６．４、２３．４、２２．６、２０．７
、（ＣＨ_２）；２３．４、（ＣＨ_３）。

【０１１５】メタンスルホン酸を添加しない別の水素化手順別工程２：Ｆｍ−グルタリル−Ｈｙｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｃｈｇ−Ｇｌｎ−
Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−ＯＨＦｍ−グルタリル−Ｈｙｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｃｈｇ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅ
ｕ−ＯＢｎ（工程１または別工程１に記載したように調製したもの）（２００ｇ
）を、４５〜５０℃でジメチルアセトアミド（１．９Ｌ）に溶解した。ＤＭＡ（
１００ｍＬ）中でスラリー化した５％Ｐｄ／Ｃ（２０ｇ、１０重量％）を添加し
、スラリーを−５〜−１０℃に冷却した。常圧で、温度を−１０〜−５℃の間で
維持しながら、５．５時間、混合物を水素化した。反応混合物をサンプリングし
、ＨＰＬＣは、反応の完了を示した。

【０１１６】混合物を、冷たい（＜０℃）ままで、Ｈｙｆｌｏ（商標）（１００ｇ）の前湿
潤（ＤＭＡ）パッドを通して濾過した。濾液を酢酸エチル（２．５Ｌ）で希釈し
、水（８．０Ｌ）を１時間１５分かけて添加した。このバッチをさらに１時間熟
成させて、固形物を濾過によって回収した。ケーキを水（８．０Ｌ）で洗浄し、
フィルタ上に落として吸わせ、その後、真空下、４５℃で、窒素を流しながら乾
燥させた。収量＝１７９．９ｇ、収率９７．５％。ＨＰＬＣ８５．６Ａ％。

【０１１７】別工程３：Ｆｍ−グルタリル−Ｈｙｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｃｈｇ−Ｇｌｎ−
Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−ＯＨのスイッシュ精製粗Ｆｍ−グルタリル−Ｈｙｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｃｈｇ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｌ
ｅｕ−ＯＨ（３６８．３ｇ）（別工程２に記載したように調製したもの）を乳鉢
および乳棒で粉砕し、室温で３時間、酢酸エチル（３．５Ｌ）中でスイッシュし
た。固形物を濾過によって回収し、酢酸エチル（１．５Ｌ）で洗浄して、フィル
タを用いて乾燥させ、真空下、４５℃で乾燥させた。収量＝３４２．９ｇ、回収
率９３．０％。［ＨＰＬＣにより２１０ｎｍで９４．９Ａ％；ＫＦ＝２．０１重
量％；ＴＧＡ＝５．３５重量％］

【手続補正書】特許協力条約第３４条補正の翻訳文提出書

【提出日】平成１３年１月１１日（２００１．１．１１）

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００６０

【補正方法】変更

【補正の内容】

【００６０】

【化１】

【手続補正２】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０１０７

【補正方法】変更

【補正の内容】

【０１０７】実施例３Ｆｍ−グルタリル−Ｈｙｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｃｈｇ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅ
ｕ−ＯＨ（配列番号５）

【手続補正３】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０１０９

【補正方法】変更

【補正の内容】

【０１０９】工程１：Ｆｍ−グルタリル−Ｈｙｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｃｈｇ−Ｇｌｎ−Ｓ
ｅｒ−Ｌｅｕ−Ｏ−ベンジル（配列番号６）ＨＣｌ．Ｈ−Ｃｈｇ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−ＯＢｎ（５００ｇ）、Ｆｍ−
グルタリル−Ｈｙｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−ＯＨ（４９０ｇ）およびＨＯＡｔ（１６
０ｇ）をＤＭＦ（８．２Ｌ）中でスラリー化し、氷浴内で２℃に冷却した。Ｎ−
エチルモルホリン（１３５ｍＬ）を添加し、続いて、ＥＤＣ．ＨＣｌ（２１０ｇ
）を添加した。混合物を０〜２℃で２時間攪拌し、サンプリングした。ＨＰＬＣ
は、０．２Ａ％のテトラペプチドの残留を示した。反応混合物を酢酸エチル（４
Ｌ）で希釈し、５μのインラインフィルタを通して３０ガロンのガラス容器に移
入した。フラスコおよびラインを酢酸エチル／ＤＭＦ（１：１、５００ｍＬ）お
よび酢酸エチル（４Ｌ）ですすいだ。水（１６．４Ｌ）を２５分かけて（温度１
１℃〜２３℃）添加し、２０℃で３０分間、混合物をゆっくりと攪拌した。生成
物を濾過によって回収し、水（３Ｌ）、酢酸エチル（１Ｌ）および水（２×３Ｌ
）で洗浄し、その後、フィルタを用いて窒素下で乾燥させて、真空下、４５℃で
乾燥させた。収量＝９００ｇ、収率９７％。ＨＰＬＣ９６．５Ａ％。

【手続補正４】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０１１０

【補正方法】変更

【補正の内容】

【０１１０】別工程１：Ｆｍ−グルタリル−Ｈｙｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｃｈｇ−Ｇｌｎ−
Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｏ−ベンジル（配列番号６）ＨＣｌ．Ｈ−Ｃｈｇ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−ＯＢｎ（１００ｇ）、Ｆｍ−
グルタリル−Ｈｙｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−ＯＨ（９８ｇ）および４−ヒドロキシピ
リジン−Ｎ−オキシド（ＨＯＰＯ、１８．２ｇ）をＤＭＦ（１．６Ｌ）中でスラ
リー化し、氷浴内で２℃に冷却した。Ｎ−エチルモルホリン（２７ｍＬ）を添加
し、続いて、ＥＤＣ．ＨＣｌ（４２ｇ）を添加した。混合物を２〜５℃で４時間
攪拌して、サンプリングした。ＨＰＬＣは、０．６Ａ％のテトラペプチドの残留
を示した。反応混合物を酢酸エチル（１．６４Ｌ）で希釈し、水（３．３Ｌ）を
７０分かけて添加して、混合物を２０℃で６０分間、ゆっくりと攪拌した。生成
物を濾過によって回収し、水（１．５Ｌ）、酢酸エチル（１Ｌ）および水（３×
１Ｌ）で洗浄し、その後、フィルタを用いて窒素下で乾燥させて、真空下、４５
℃で乾燥させた。収量＝１８６ｇ、収率１００．０％。ＨＰＬＣ９８．０Ａ％
。

【手続補正５】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０１１１

【補正方法】変更

【補正の内容】

【０１１１】工程２：Ｆｍ−グルタリル−Ｈｙｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｃｈｇ−Ｇｌｎ−Ｓ
ｅｒ−Ｌｅｕ−ＯＨ（配列番号５）Ｆｍ−グルタリル−Ｈｙｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｃｈｇ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅ
ｕ−ＯＢｎ（工程１または別工程１に記載したように調製したもの）（１．１Ｋ
ｇ）を、メタンスルホン酸（９３．５ｍＬ）を含有するジメチルアセトアミド（
７．８Ｌ）に溶解した。ＤＭＡ（１．０Ｌ）中でスラリー化した５％Ｐｄ／Ｃ（
１１０ｇ、１０重量％）を添加し、混合物を、常圧で１時間４０分間水素化した
。反応混合物をサンプリングした：ＨＰＬＣは、出発原料の残留がないことを示
した。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＢＺ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者アツシユウツド，マイケル・ステユワートイギリス国、ハートフオードシヤー・イー・エヌ・11・９・ビー・ユー、ホツデスドン、ハートフオード・ロード、エム・エス・デイー (72)発明者ビシヨツプ，クリストフアー・ブライアンイギリス国、ハートフオードシヤー・イー・エヌ・11・９・ビー・ユー、ホツデスドン、ハートフオード・ロード、エム・エス・デイー (72)発明者コトレル，イアン・フランクイギリス国、ハートフオードシヤー・イー・エヌ・11・９・ビー・ユー、ホツデスドン、ハートフオード・ロード、エム・エス・デイー (72)発明者エマーソン，カテイータ・モニークアメリカ合衆国、ニユー・ジヤージー・ 07065−0907、ローウエイ、イースト・リンカーン・アベニユー・126 (72)発明者ハンズ，デイビツドイギリス国、ハートフオードシヤー・イー・エヌ・11・９・ビー・ユー、ホツデスドン、ハートフオード・ロード、エム・エス・デイー (72)発明者ホウ，クオ・チエアメリカ合衆国、ニユー・ジヤージー・ 07065−0907、ローウエイ、イースト・リンカーン・アベニユー・126 (72)発明者リンチ，ジヨージフ・エドワードアメリカ合衆国、ニユー・ジヤージー・ 07065−0907、ローウエイ、イースト・リンカーン・アベニユー・126 (72)発明者シー，ヤオ・チユンアメリカ合衆国、ニユー・ジヤージー・ 07065−0907、ローウエイ、イースト・リンカーン・アベニユー・126 (72)発明者ウイルソン，ロバート・ダリンイギリス国、ハートフオードシヤー・イー・エヌ・11・９・ビー・ユー、ホツデスドン、ハートフオード・ロード、エム・エス・デイーＦターム(参考） 4H045 AA10 AA20 BA14 EA28 FA32

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】式Ｂ：【化１】（式中：ＡＡ_４、ＡＡ_５、ＡＡ_６およびＡＡ_７は、独立して、天然または非天然アミノ
酸から選択され、ｒは、２または３である）の化合物またはその塩の製造方法であって、式Ｅ：【化２】のジエステルを、トリペプチドＤ：【化３】またはその塩と反応させて、式Ｃ−１：【化４】の中間体またはその塩を提供する工程を含む、前記方法。
【請求項２】式Ｄのトリペプチドの酸塩を、塩基が存在する状態で式Ｅの
ジエステルと反応させる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】塩基がトリアルキルアミンである、請求項２に記載の方法。
【請求項４】塩基がトリエチルアミンである、請求項２に記載の方法。
【請求項５】式Ｃ−１の中間体を、式Ｆ：【化５】（式中、Ｐｒｏｔは、カルボン酸保護基である）のテトラペプチドと反応させて、式：【化６】の化合物を提供する追加工程をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６】式：【化７】の化合物のＣ−末端を脱保護する追加工程をさらに含む、請求項５に記載の方法
。
【請求項７】Ｐｒｏｔがベンジルである、請求項５に記載の方法。
【請求項８】式：【化８】（式中、Ｐｒｏｔは、ベンジルである）の化合物を、炭素上パラジウムが存在する状態で水素（Ｈ_２）と反応させる追加
工程をさらに含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】式：【化９】（式中、Ｐｒｏｔは、ベンジルである）の化合物を、炭素上パラジウムが存在する状態で、任意に有機酸が存在する状態
で、水素（Ｈ_２）と反応させる追加工程をさらに含む、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】酸が不在の状態で水素化を遂行する、請求項９に記載の方
法。
【請求項１１】有機酸がメタンスルホン酸である、請求項９に記載の方法
。
【請求項１２】ＡＡ_４−ＡＡ_５−ＡＡ_６−ＡＡ_７部分が、シクロヘキシル
グリシン−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕである、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】ＡＡ_４−ＡＡ_５−ＡＡ_６−ＡＡ_７部分が、シクロヘキシル
グリシン−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕである、請求項５に記載の方法。
【請求項１４】ｒが３である、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】ｒが３である、請求項５に記載の方法。
【請求項１６】式：【化１０】のジペプチドを、式：【化１１】（式中、Ｘは、アミノ保護基である）のＮ−保護プロリンと反応させる追加工程をさらに含む、請求項１に記載の方法
。
【請求項１７】式Ｃ−１ａ：【化１２】のトリペプチド化合物またはその塩を、式Ｆ−１：【化１３】のテトラペプチド化合物またはその塩と反応させる工程をさらに含む、ｒが３で
あり、ＡＡ_４−ＡＡ_５−ＡＡ_６−ＡＡ_７部分が、シクロヘキシルグリシン−Ｇｌ
ｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕである、請求項５に記載の方法。
【請求項１８】式Ｃ１ａの化合物を、カルボキシル活性化剤および塩基が
存在する状態で式Ｆ−１の化合物と反応させる、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】式Ｃ１ａの化合物を、カルボキシル活性化剤および塩基が
存在する状態で、およびさらに添加剤が存在する状態で、式Ｆ−１の化合物と反
応させる、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】添加剤が、ＨＯＡＴ、ＨＯＢＴまたは４−ヒドロキシピリ
ジンＮ−オキシドを含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】添加剤が、４−ヒドロキシピリジンＮ−オキシドである、
請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】Ｐｒｏｔがベンジルである、請求項１７に記載の方法。
【請求項２３】式：【化１４】（配列番号３）（式中、Ｐｒｏｔは、ベンジルである）の化合物を、炭素上パラジウムが存在する状態で水素（Ｈ_２）を用いて処理する
追加工程をさらに含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】式：【化１５】（配列番号３）（式中、Ｐｒｏｔは、ベンジルである）の化合物を、炭素上パラジウムおよび有機酸が存在する状態で水素（Ｈ_２）を用
いて処理する追加工程をさらに含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】有機酸がメタンスルホン酸である、請求項２４に記載の方
法。
【請求項２６】炭素上パラジウムが存在する状態での水素を用いた処理か
らの粗生成物を、極性溶媒中で粗生成物をスラリー化し、反溶媒を添加すること
によって精製する工程をさらに含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２７】炭素上パラジウムが存在する状態での水素を用いた処理か
らの粗生成物を、極性溶媒中で粗生成物をスラリー化し、反溶媒を添加すること
によって精製する工程をさらに含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】反溶媒が酢酸エチルまたは酢酸イソプロピルを含む、請求
項２６に記載の方法。
【請求項２９】反溶媒が酢酸エチルである、請求項２６に記載の方法。
【請求項３０】式Ｃ−１ａ：【化１６】の化合物またはその塩。
【請求項３１】式：【化１７】の化合物またはその塩。
【請求項３２】式Ｅ：【化１８】の化合物またはその塩。