JP2003319793A - リン脂質の塩基交換方法 - Google Patents
リン脂質の塩基交換方法Info
- Publication number
- JP2003319793A JP2003319793A JP2003052622A JP2003052622A JP2003319793A JP 2003319793 A JP2003319793 A JP 2003319793A JP 2003052622 A JP2003052622 A JP 2003052622A JP 2003052622 A JP2003052622 A JP 2003052622A JP 2003319793 A JP2003319793 A JP 2003319793A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- reaction
- pld
- acetone
- solvent
- volume ratio
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 ホスフォリパーゼＤを用いたアシルグリセロ
リン脂質のホスファチジル基転移反応において、ホスフ
ァチジルエタノールアミンを原料として用い、効率よく
ホスファチジル基転移反応を行う方法を提供すること。 【解決手段】 基質としてホスファチジルエタノールア
ミンを用い、アルコール類、含窒素アルコール類、糖
類、ポリオール類、およびヒドロキシ環状炭化水素化合
物からなる群より選ばれる受容体アルコールを、放線菌
由来のホスフォリパーゼＤを触媒として反応させ、ホス
ファチジル基転移反応を進行させること。
リン脂質のホスファチジル基転移反応において、ホスフ
ァチジルエタノールアミンを原料として用い、効率よく
ホスファチジル基転移反応を行う方法を提供すること。 【解決手段】 基質としてホスファチジルエタノールア
ミンを用い、アルコール類、含窒素アルコール類、糖
類、ポリオール類、およびヒドロキシ環状炭化水素化合
物からなる群より選ばれる受容体アルコールを、放線菌
由来のホスフォリパーゼＤを触媒として反応させ、ホス
ファチジル基転移反応を進行させること。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ホスフォリパーゼ
Ｄ（以下、ＰＬＤと略す）を用いたアシルグリセロリン
脂質のホスファチジル基転移反応方法に関する。特に、
大豆もしくは卵黄などに由来する天然ホスファチジルエ
タノールアミンあるいは人工的に合成したホスファチジ
ルエタノールアミンを基質とし、アルコール類をホスフ
ァチジル基の受容体として、ＰＬＤの存在下で反応させ
る、リン脂質の塩基交換方法に関する。
Ｄ（以下、ＰＬＤと略す）を用いたアシルグリセロリン
脂質のホスファチジル基転移反応方法に関する。特に、
大豆もしくは卵黄などに由来する天然ホスファチジルエ
タノールアミンあるいは人工的に合成したホスファチジ
ルエタノールアミンを基質とし、アルコール類をホスフ
ァチジル基の受容体として、ＰＬＤの存在下で反応させ
る、リン脂質の塩基交換方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】ＰＬＤを用いたアシルグリセロリン脂質
のホスファチジル基転移反応が知られている。このホス
ファチジル基転移反応には、ホスファチジルコリン（以
下、ＰＣと略す）が主に用いられ、ホスファチジルエタ
ノールアミン（以下、ＰＥと略す）は積極的に利用され
ていない。その理由は、アシルグリセロリン脂質にＰＬ
Ｄを作用させた時、ＰＥのホスファチジル基自体が加水
分解を受け易いこと、およびＰＣの方がＰＥよりもホス
ファチジル基の転移反応を受け易いこと（例えば、非特
許文献１参照）が挙げられる。例えば、特許文献１に
は、ＰＣを用いるホスファチジル基の転移反応が記載さ
れているが、ＰＥは利用されていない。
のホスファチジル基転移反応が知られている。このホス
ファチジル基転移反応には、ホスファチジルコリン（以
下、ＰＣと略す）が主に用いられ、ホスファチジルエタ
ノールアミン（以下、ＰＥと略す）は積極的に利用され
ていない。その理由は、アシルグリセロリン脂質にＰＬ
Ｄを作用させた時、ＰＥのホスファチジル基自体が加水
分解を受け易いこと、およびＰＣの方がＰＥよりもホス
ファチジル基の転移反応を受け易いこと（例えば、非特
許文献１参照）が挙げられる。例えば、特許文献１に
は、ＰＣを用いるホスファチジル基の転移反応が記載さ
れているが、ＰＥは利用されていない。
【０００３】ＰＣのホスファチジル基転移反応に使用さ
れる溶媒系としては、次のような種類および組成が用い
られている。例えば、酢酸エチル／２−プロパノール／
酢酸緩衝液＝４５：５：２５による透明な均一相（特許
文献２）；ジイソプロピルエーテル／酢酸緩衝液＝４
０：０．３５などによる逆ミセル形成（特許文献３）；
ヘキサン・アセトン混液（９９〜１：１）／水系緩衝液
＝１００：０．１〜２００（特許文献４）などである。
しかし、これらの溶媒系を用いた先行技術において、積
極的にＰＥを基質として利用したものはない。
れる溶媒系としては、次のような種類および組成が用い
られている。例えば、酢酸エチル／２−プロパノール／
酢酸緩衝液＝４５：５：２５による透明な均一相（特許
文献２）；ジイソプロピルエーテル／酢酸緩衝液＝４
０：０．３５などによる逆ミセル形成（特許文献３）；
ヘキサン・アセトン混液（９９〜１：１）／水系緩衝液
＝１００：０．１〜２００（特許文献４）などである。
しかし、これらの溶媒系を用いた先行技術において、積
極的にＰＥを基質として利用したものはない。
【０００４】一方、通常用いられているアシルグリセロ
リン脂質である大豆あるいは卵黄のレシチンの主成分は
ＰＣおよびＰＥである（通常、ＰＣの方が若干含有率が
高い）。これらの大豆あるいは卵黄レシチン中のＰＣ含
有率を向上させた製剤が製造されている。そして、その
製造の際、副産物としてＰＥを主成分とするレシチンが
得られるが、前記の理由により、ＰＬＤを用いたホスフ
ァチジル基転移反応の基質には使用されていない。
リン脂質である大豆あるいは卵黄のレシチンの主成分は
ＰＣおよびＰＥである（通常、ＰＣの方が若干含有率が
高い）。これらの大豆あるいは卵黄レシチン中のＰＣ含
有率を向上させた製剤が製造されている。そして、その
製造の際、副産物としてＰＥを主成分とするレシチンが
得られるが、前記の理由により、ＰＬＤを用いたホスフ
ァチジル基転移反応の基質には使用されていない。
【０００５】
【特許文献１】特公平５−４２１９７号公報
【特許文献２】特公平５−３８５９４号公報
【特許文献３】特公平７−１６４２６号公報
【特許文献４】特開２００１−１８６８９８号公報
【非特許文献１】福田ら、J. Biochem.、125巻, 263-26
9頁，1999年
9頁，1999年
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】このような実状に鑑
み、本発明は、ＰＬＤの存在下、ＰＥを基質として用
い、効率よくホスファチジル基転移反応を行う方法を提
供することを目的とするものである。
み、本発明は、ＰＬＤの存在下、ＰＥを基質として用
い、効率よくホスファチジル基転移反応を行う方法を提
供することを目的とするものである。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、前述の課
題を解決すべく鋭意検討を重ねた結果、反応時に使用す
る溶媒の種類や組成、および添加するＰＬＤの量を調節
することにより、ＰＥを基質とした場合でも、ＰＣと同
等のホスファチジル基転移反応率が得られることを見出
し、本発明を完成するに至った。
題を解決すべく鋭意検討を重ねた結果、反応時に使用す
る溶媒の種類や組成、および添加するＰＬＤの量を調節
することにより、ＰＥを基質とした場合でも、ＰＣと同
等のホスファチジル基転移反応率が得られることを見出
し、本発明を完成するに至った。
【０００８】すなわち、本発明は、ホスファチジルエタ
ノールアミンと、アルコール類、含窒素アルコール類、
糖類、ポリオール類、およびヒドロキシ環状炭化水素化
合物からなる群から選択されるアルコールとを、放線菌
由来のホスフォリパーゼＤの存在下反応させる工程を含
む、リン脂質の塩基交換方法に関する。
ノールアミンと、アルコール類、含窒素アルコール類、
糖類、ポリオール類、およびヒドロキシ環状炭化水素化
合物からなる群から選択されるアルコールとを、放線菌
由来のホスフォリパーゼＤの存在下反応させる工程を含
む、リン脂質の塩基交換方法に関する。
【０００９】好ましい実施態様においては、上記ホスフ
ォリパーゼＤは、ストレプトマイセス属、ミクロモノス
ポラ属、ノカルディア属、ノカルディオプシス属、およ
びアクチノマデューラ属からなる群より選択される放線
菌に属する少なくとも１つの菌株に由来する。
ォリパーゼＤは、ストレプトマイセス属、ミクロモノス
ポラ属、ノカルディア属、ノカルディオプシス属、およ
びアクチノマデューラ属からなる群より選択される放線
菌に属する少なくとも１つの菌株に由来する。
【００１０】また、好ましい実施態様においては、上記
反応は、ヘプタン：アセトン：水系溶媒を、それぞれ容
量比率で６０〜９０：４〜３０：２〜２０の割合で含む
溶媒中で行われる。あるいは、上記反応は、ヘキサン：
アセトン：水系溶媒を、それぞれ容量比率で６０〜９
０：４〜３０：２〜２０の割合で含む溶媒中で行われ
る。
反応は、ヘプタン：アセトン：水系溶媒を、それぞれ容
量比率で６０〜９０：４〜３０：２〜２０の割合で含む
溶媒中で行われる。あるいは、上記反応は、ヘキサン：
アセトン：水系溶媒を、それぞれ容量比率で６０〜９
０：４〜３０：２〜２０の割合で含む溶媒中で行われ
る。
【００１１】別の好ましい実施態様においては、上記ホ
スフォリパーゼＤは、ホスファチジルエタノールアミン
１ｇあたり、２０〜８０００単位添加される。
スフォリパーゼＤは、ホスファチジルエタノールアミン
１ｇあたり、２０〜８０００単位添加される。
【００１２】本発明は、さらに、上記方法により得られ
るアシルグリセロリン脂質に関する。
るアシルグリセロリン脂質に関する。
【００１３】
【発明の実施の形態】本発明の方法で基質として用いら
れるＰＥは、いかなる起源のものを用いてもよい。例え
ば、大豆、卵黄、菜種、魚油、海洋藻類などが起源とし
て挙げられる。また、合成のＰＥも基質として用いるこ
とができる。
れるＰＥは、いかなる起源のものを用いてもよい。例え
ば、大豆、卵黄、菜種、魚油、海洋藻類などが起源とし
て挙げられる。また、合成のＰＥも基質として用いるこ
とができる。
【００１４】本発明の方法において、アルコールは受容
体として用いられる。受容体アルコールは、アルコール
類、含窒素アルコール類、糖類、ポリオール類、および
ヒドロキシ環状炭化水素化合物からなる群より選択され
る。
体として用いられる。受容体アルコールは、アルコール
類、含窒素アルコール類、糖類、ポリオール類、および
ヒドロキシ環状炭化水素化合物からなる群より選択され
る。
【００１５】アルコール類としては、例えば、メタノー
ル、エタノール、プロパノール、アスコルビン酸などが
挙げられる。含窒素アルコール類としては、例えば、セ
リンなどのアミノ酸；１−アミノ−２−プロパノールな
どが挙げられる。糖類としては、例えば、アデノシン、
グアノシン、イノシン、キサントシン、デオキシアデノ
シン、デオキシグアノシンなどのヌクレオシド；グルコ
ース、トレハロース、Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン
などが挙げられる。ポリオール類としては、例えば、グ
リセロール、エチレングリコール、プロピレングリコー
ルなどが挙げられる。ヒドロキシ環状炭化水素化合物と
しては、例えば、麹酸、アルブチンなどが挙げられる。
ル、エタノール、プロパノール、アスコルビン酸などが
挙げられる。含窒素アルコール類としては、例えば、セ
リンなどのアミノ酸；１−アミノ−２−プロパノールな
どが挙げられる。糖類としては、例えば、アデノシン、
グアノシン、イノシン、キサントシン、デオキシアデノ
シン、デオキシグアノシンなどのヌクレオシド；グルコ
ース、トレハロース、Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン
などが挙げられる。ポリオール類としては、例えば、グ
リセロール、エチレングリコール、プロピレングリコー
ルなどが挙げられる。ヒドロキシ環状炭化水素化合物と
しては、例えば、麹酸、アルブチンなどが挙げられる。
【００１６】ＰＥと受容体アルコールとのモル比は、受
容体アルコールの種類により適宜選択する必要がある。
一般にＰＥ１モルに対し、０．０１〜１００倍モルの受
容体アルコールを用いるのが適当である。
容体アルコールの種類により適宜選択する必要がある。
一般にＰＥ１モルに対し、０．０１〜１００倍モルの受
容体アルコールを用いるのが適当である。
【００１７】本発明の方法で用いられる放線菌は、ＰＬ
Ｄを生成するものであれば全て用いることができる。特
に、ストレプトマイセス(Streptomyces)属、ミクロモノ
スポーラ(Micromonospora)属、ノカルディア(Nocardia)
属、ノカルディオプシス(Nocardiopsis)属、アクチノマ
デューラ(Actinomadura)属などに属する微生物が好まし
く用いられる。より具体的には、ストレプトマイセス・
シンナモネウム(Streptomyces cinnamoneum IFO 1285
2)、ミクロモノスポラ・チヤルセア(Micromonospora ch
alcea ATCC 12452)、ノカルディア・メディテラーネイ
(Nocardia mediterranei IFO 13142)、ノカルディオプ
シス・ダソンビレイ(Nocardiopsis dassonvillei IFO 1
3908)、アクチノマデューラ・リバノチカ(Actinomadura
libanoticaIFO 14095)などが挙げられる。これらの他
にも、上記の属に属する放線菌であれば、公知の微生
物、および自然界から単離された微生物が用いられる。
また、ＰＬＤの生産性を向上させた上記微生物の変異
株、および上記微生物から単離したＰＬＤ遺伝子を同種
または異種の宿主に導入してＰＬＤの生産性を向上させ
た菌株も、本発明の方法に使用することができる。
Ｄを生成するものであれば全て用いることができる。特
に、ストレプトマイセス(Streptomyces)属、ミクロモノ
スポーラ(Micromonospora)属、ノカルディア(Nocardia)
属、ノカルディオプシス(Nocardiopsis)属、アクチノマ
デューラ(Actinomadura)属などに属する微生物が好まし
く用いられる。より具体的には、ストレプトマイセス・
シンナモネウム(Streptomyces cinnamoneum IFO 1285
2)、ミクロモノスポラ・チヤルセア(Micromonospora ch
alcea ATCC 12452)、ノカルディア・メディテラーネイ
(Nocardia mediterranei IFO 13142)、ノカルディオプ
シス・ダソンビレイ(Nocardiopsis dassonvillei IFO 1
3908)、アクチノマデューラ・リバノチカ(Actinomadura
libanoticaIFO 14095)などが挙げられる。これらの他
にも、上記の属に属する放線菌であれば、公知の微生
物、および自然界から単離された微生物が用いられる。
また、ＰＬＤの生産性を向上させた上記微生物の変異
株、および上記微生物から単離したＰＬＤ遺伝子を同種
または異種の宿主に導入してＰＬＤの生産性を向上させ
た菌株も、本発明の方法に使用することができる。
【００１８】ＰＬＤは、通常、上記微生物を好気的に培
養して得られる。培養に用いる培地としては、微生物の
培養に通常用いられるものが使用され得る。炭素源とし
ては、例えば、ブドウ糖、ショ糖、乳糖、麦芽糖、デン
プン、デキストリン、糖蜜、グリセリンなどの同化可能
な炭水化物；炭化水素類などが使用される。窒素源とし
ては、利用可能な窒素化合物であれば特に限定されず、
例えば、コーンスチープリカー、大豆粉、小麦グルテ
ン、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、麦芽エキス、カ
ゼインなどが使用される。その他、リン酸塩、マグネシ
ウム、カルシウム、カリウム、鉄、マンガン、亜鉛など
の塩類が必要に応じて使用される。培養温度は、菌が生
育し、かつＰＬＤが生成される範囲内で適宜採用され得
る。通常１５〜４０℃で培養される。培養時間は条件に
よって異なるが、ＰＬＤ活性が最大となる時点で培養を
終了すればよく、通常１〜６日程度である。なお、ＰＬ
Ｄは菌体外に生成されるものでもよく、菌体内に生成さ
れるものでもよい。例えば、ＰＬＤを含有する培養液で
もよく、培養液あるいは培養菌体から精製した酵素であ
ってもよい。これらはいずれも本発明の方法に使用する
ことができる。
養して得られる。培養に用いる培地としては、微生物の
培養に通常用いられるものが使用され得る。炭素源とし
ては、例えば、ブドウ糖、ショ糖、乳糖、麦芽糖、デン
プン、デキストリン、糖蜜、グリセリンなどの同化可能
な炭水化物；炭化水素類などが使用される。窒素源とし
ては、利用可能な窒素化合物であれば特に限定されず、
例えば、コーンスチープリカー、大豆粉、小麦グルテ
ン、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、麦芽エキス、カ
ゼインなどが使用される。その他、リン酸塩、マグネシ
ウム、カルシウム、カリウム、鉄、マンガン、亜鉛など
の塩類が必要に応じて使用される。培養温度は、菌が生
育し、かつＰＬＤが生成される範囲内で適宜採用され得
る。通常１５〜４０℃で培養される。培養時間は条件に
よって異なるが、ＰＬＤ活性が最大となる時点で培養を
終了すればよく、通常１〜６日程度である。なお、ＰＬ
Ｄは菌体外に生成されるものでもよく、菌体内に生成さ
れるものでもよい。例えば、ＰＬＤを含有する培養液で
もよく、培養液あるいは培養菌体から精製した酵素であ
ってもよい。これらはいずれも本発明の方法に使用する
ことができる。
【００１９】本発明の方法で用いられる放線菌由来のＰ
ＬＤの使用量は、ＰＥ１ｇに対し、２０〜８０００単位
の範囲で選択することができる。なお、酵素活性の１単
位は、９５％卵黄製ホスファチジルコリン（和光純薬社
製 コード１６９−１２７５１）を基質とし、基質濃度
０．１６％の０．２Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ４．０、１０ｍ
ＭのＣａＣｌ２、１．３％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ−１００
を含む）を３７℃にて反応させた時、１分間に１μｍｏ
ｌのコリンを遊離する酵素量である。
ＬＤの使用量は、ＰＥ１ｇに対し、２０〜８０００単位
の範囲で選択することができる。なお、酵素活性の１単
位は、９５％卵黄製ホスファチジルコリン（和光純薬社
製 コード１６９−１２７５１）を基質とし、基質濃度
０．１６％の０．２Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ４．０、１０ｍ
ＭのＣａＣｌ２、１．３％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ−１００
を含む）を３７℃にて反応させた時、１分間に１μｍｏ
ｌのコリンを遊離する酵素量である。
【００２０】本発明の方法においてホスファチジル基転
移反応に使用する反応溶媒は、水系溶媒と有機溶媒の両
方である。有機溶媒としては、ｎ-ヘプタン、ｎ-ヘキサ
ン、石油エーテル等の脂肪族炭化水素；シクロペンタ
ン、シクロヘキサン等の環状脂肪族炭化水素；ジエチル
エーテル、テトラヒドロフラン等のエーテル類；酢酸メ
チル、酢酸エチル等のエステル類；四塩化炭素、クロロ
ホルム等のハロゲン化炭化水素類；を挙げることができ
る。水系溶媒とは、水および水性の緩衝液をいう。水と
しては、イオン交換水、精製水、または蒸留水を用いる
ことが好ましいが、水道水も使用できる。水性の緩衝液
としては、例えば、ｐＨ４〜６の酢酸緩衝液、ｐＨ７〜
８のリン酸緩衝液などが好ましく用いられる。
移反応に使用する反応溶媒は、水系溶媒と有機溶媒の両
方である。有機溶媒としては、ｎ-ヘプタン、ｎ-ヘキサ
ン、石油エーテル等の脂肪族炭化水素；シクロペンタ
ン、シクロヘキサン等の環状脂肪族炭化水素；ジエチル
エーテル、テトラヒドロフラン等のエーテル類；酢酸メ
チル、酢酸エチル等のエステル類；四塩化炭素、クロロ
ホルム等のハロゲン化炭化水素類；を挙げることができ
る。水系溶媒とは、水および水性の緩衝液をいう。水と
しては、イオン交換水、精製水、または蒸留水を用いる
ことが好ましいが、水道水も使用できる。水性の緩衝液
としては、例えば、ｐＨ４〜６の酢酸緩衝液、ｐＨ７〜
８のリン酸緩衝液などが好ましく用いられる。
【００２１】上記反応溶媒中の水系溶媒と有機溶媒との
混合比は、使用する有機溶媒の種類に応じて適宜選択す
ることができる。一般的には、水系溶媒：有機溶媒を容
量比率で１：０．６５〜１：１００の範囲で混合して用
いることができる。副反応であるＰＥのホスファチジル
基の加水分解反応を抑制し、目的のホスファチジル基転
移反応を効率的に行うためには、反応系内の水系溶媒の
含量を１０容量％以下で行うことが好ましい。また、有
機溶媒の選択および混合比は任意に選択することができ
る。反応溶媒が、ヘプタン、アセトン、および水系溶媒
である場合、それぞれ容量比率で６０〜９０：４〜３
０：２〜２０の割合で含有する混合溶媒を用いるのがよ
り好ましい。あるいは、反応溶媒としてヘキサン、アセ
トン、および水系溶媒を用いる場合、それぞれ容量比率
で６０〜９０：４〜３０：２〜２０の割合で含有する混
合溶媒とするのがより好ましい。あるいは、反応溶媒と
してジエチルエーテルおよび水系溶媒を用いる場合、容
量比率でそれぞれ８０〜９８：２〜２０の割合で含む混
合溶媒とすることがより好ましい。
混合比は、使用する有機溶媒の種類に応じて適宜選択す
ることができる。一般的には、水系溶媒：有機溶媒を容
量比率で１：０．６５〜１：１００の範囲で混合して用
いることができる。副反応であるＰＥのホスファチジル
基の加水分解反応を抑制し、目的のホスファチジル基転
移反応を効率的に行うためには、反応系内の水系溶媒の
含量を１０容量％以下で行うことが好ましい。また、有
機溶媒の選択および混合比は任意に選択することができ
る。反応溶媒が、ヘプタン、アセトン、および水系溶媒
である場合、それぞれ容量比率で６０〜９０：４〜３
０：２〜２０の割合で含有する混合溶媒を用いるのがよ
り好ましい。あるいは、反応溶媒としてヘキサン、アセ
トン、および水系溶媒を用いる場合、それぞれ容量比率
で６０〜９０：４〜３０：２〜２０の割合で含有する混
合溶媒とするのがより好ましい。あるいは、反応溶媒と
してジエチルエーテルおよび水系溶媒を用いる場合、容
量比率でそれぞれ８０〜９８：２〜２０の割合で含む混
合溶媒とすることがより好ましい。
【００２２】上記酵素反応に使用する反応溶媒中の有機
溶媒の量は、原料として用いるＰＥ重量の５〜５００容
量倍が好ましく、さらに好ましくは、１０〜１００容量
倍である。有機溶媒量が５容量倍未満では、原料基質を
溶解した溶液の粘度が高くなって反応効率の低下を招く
原因になり、逆に５００容量倍を超えるとホスファチジ
ル基転移反応効率が悪くなる。
溶媒の量は、原料として用いるＰＥ重量の５〜５００容
量倍が好ましく、さらに好ましくは、１０〜１００容量
倍である。有機溶媒量が５容量倍未満では、原料基質を
溶解した溶液の粘度が高くなって反応効率の低下を招く
原因になり、逆に５００容量倍を超えるとホスファチジ
ル基転移反応効率が悪くなる。
【００２３】本発明の方法においてホスファチジル基転
移反応の温度は、１０〜６０℃が好ましく、２５〜４５
℃がより好ましい。反応の所要時間は、酵素量や反応温
度により変動するが、概ね０．５〜４８時間である。本
発明の方法で使用する混合溶媒は２相系となるので、水
層と有機溶媒層とを十分に混合させるために、適宜撹
拌、振とうなどの処理を施すことが好ましい。
移反応の温度は、１０〜６０℃が好ましく、２５〜４５
℃がより好ましい。反応の所要時間は、酵素量や反応温
度により変動するが、概ね０．５〜４８時間である。本
発明の方法で使用する混合溶媒は２相系となるので、水
層と有機溶媒層とを十分に混合させるために、適宜撹
拌、振とうなどの処理を施すことが好ましい。
【００２４】上記反応後、例えば、加熱などの処理でＰ
ＬＤを失活させ、静置処理、遠心分離法などにより水層
を除去して有機溶媒層を得、有機溶媒を減圧下で除去す
ることによって、目的のアシルグリセロリン脂質（例え
ば、ホスファチジルセリンなど）を得ることができる。
さらに、得られたアシルグリセロリン脂質を、溶剤分
別、シリカゲル分画、高速液体クロマトグラフィーなど
の処理に供して高純度に精製することも可能である。
ＬＤを失活させ、静置処理、遠心分離法などにより水層
を除去して有機溶媒層を得、有機溶媒を減圧下で除去す
ることによって、目的のアシルグリセロリン脂質（例え
ば、ホスファチジルセリンなど）を得ることができる。
さらに、得られたアシルグリセロリン脂質を、溶剤分
別、シリカゲル分画、高速液体クロマトグラフィーなど
の処理に供して高純度に精製することも可能である。
【００２５】あるいは、上記反応後、静置処理や遠心分
離法などにより、水層と有機溶媒層とを分別し、必要に
応じて、水層にＰＬＤや各種受容体アルコールを追加
し、新たにＰＥを溶解した有機溶媒に混合することによ
って、水層を繰り返してこの反応に使用することもでき
る。反応後分別された有機溶媒層から、上記と同様に目
的のアシルグリセロリン脂質を得ることができる。
離法などにより、水層と有機溶媒層とを分別し、必要に
応じて、水層にＰＬＤや各種受容体アルコールを追加
し、新たにＰＥを溶解した有機溶媒に混合することによ
って、水層を繰り返してこの反応に使用することもでき
る。反応後分別された有機溶媒層から、上記と同様に目
的のアシルグリセロリン脂質を得ることができる。
【００２６】
【実施例】以下に、実施例を示して本発明をさらに具体
的に説明するが、本発明はこれらに限定されることはな
い。
的に説明するが、本発明はこれらに限定されることはな
い。
【００２７】（実施例１）ストレプトマイセス・シンナ
モネウム IFO12852を、Ｔｒｙｐｔｉｃ ＳｏｙＢｒｏ
ｔｈ（Ｄｉｆｃｏ社製培地：本製品の使用指示に従って
調製した）中で、２８℃にて約７２時間、好気培養し
た。培養後、ろ過により除菌して得られた上清液を硫安
分画してＰＬＤ粗酵素品を得た。
モネウム IFO12852を、Ｔｒｙｐｔｉｃ ＳｏｙＢｒｏ
ｔｈ（Ｄｉｆｃｏ社製培地：本製品の使用指示に従って
調製した）中で、２８℃にて約７２時間、好気培養し
た。培養後、ろ過により除菌して得られた上清液を硫安
分画してＰＬＤ粗酵素品を得た。
【００２８】ＰＥ０．７５ｍｇ、Ｌ−セリン６．５７ｍ
ｇ、および上記ＰＬＤ粗酵素品を、ヘプタン、アセト
ン、および０．２Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）の混合液
４５０μｌに添加し、３０℃にて攪拌しながら２時間反
応させた。なお、ヘプタン：アセトン：０．２Ｍ酢酸緩
衝液（ｐＨ４．０）の容量比率を６０〜９０：４〜３
０：２〜２０の範囲で、さらにＰＬＤの添加量を０．０
６〜３単位の範囲で、それぞれ変動させ、目的とするＰ
Ｅからホスファチジルセリンへの変換率が最良となる条
件を求めた。また、比較対照として、ＰＥの代わりにＰ
Ｃを用い、上記と同様の混合液およびＰＬＤ量の範囲内
でＰＣからホスファチジルセリンへの変換率が最良とな
る条件を求めた。全溶媒を減圧下にて留去し、乾燥物を
クロロホルム：アセトニトリル＝７：３に溶解し、ＰＬ
Ｄによるホスファチジル基転移反応の生成物であるホス
ファチジルセリンの分析を、下記の条件の高速液体クロ
マトグラフ法（ＨＰＬＣ法）にて行った。
ｇ、および上記ＰＬＤ粗酵素品を、ヘプタン、アセト
ン、および０．２Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）の混合液
４５０μｌに添加し、３０℃にて攪拌しながら２時間反
応させた。なお、ヘプタン：アセトン：０．２Ｍ酢酸緩
衝液（ｐＨ４．０）の容量比率を６０〜９０：４〜３
０：２〜２０の範囲で、さらにＰＬＤの添加量を０．０
６〜３単位の範囲で、それぞれ変動させ、目的とするＰ
Ｅからホスファチジルセリンへの変換率が最良となる条
件を求めた。また、比較対照として、ＰＥの代わりにＰ
Ｃを用い、上記と同様の混合液およびＰＬＤ量の範囲内
でＰＣからホスファチジルセリンへの変換率が最良とな
る条件を求めた。全溶媒を減圧下にて留去し、乾燥物を
クロロホルム：アセトニトリル＝７：３に溶解し、ＰＬ
Ｄによるホスファチジル基転移反応の生成物であるホス
ファチジルセリンの分析を、下記の条件の高速液体クロ
マトグラフ法（ＨＰＬＣ法）にて行った。
【００２９】使用カラム…ＴＯＳＯＨ社製 TSKgel Sil
ica-60 (4.6mmI.D.×25cm) 移動相…アセトニトリル：メタノール：リン酸＝９０
０：９５：５(V/V/V) 流速…１．１ｍｌ／ｍｉｎ． カラム温度…３７℃ 検出…ＵＶ ２１０ｎｍ。
ica-60 (4.6mmI.D.×25cm) 移動相…アセトニトリル：メタノール：リン酸＝９０
０：９５：５(V/V/V) 流速…１．１ｍｌ／ｍｉｎ． カラム温度…３７℃ 検出…ＵＶ ２１０ｎｍ。
【００３０】その結果、ＰＥにおいて、変換反応の最適
条件を検討したところ、ヘプタン：アセトン：０．２Ｍ
酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）の容量比率を７８：１４：８
とし、ＰＬＤを０．１８単位（ＰＥ１ｇあたり２４０単
位）添加した時、ＰＥからホスファチジルセリンへの変
換率は、最良値（６２．１％）となった。比較対照であ
るＰＣにおいては、ヘプタン：アセトン：０．２Ｍ酢酸
緩衝液（ｐＨ４．０）の容量比率を７４：１９：７と
し、ＰＬＤを０．１８単位（ＰＣ１ｇあたり２４０単
位）添加した時、ＰＣからホスファチジルセリンへの変
換率は、最良値（６４．３％）となった。このように最
適条件では、ＰＥを基質とした場合、ＰＣとほぼ同等の
変換率が得られた。
条件を検討したところ、ヘプタン：アセトン：０．２Ｍ
酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）の容量比率を７８：１４：８
とし、ＰＬＤを０．１８単位（ＰＥ１ｇあたり２４０単
位）添加した時、ＰＥからホスファチジルセリンへの変
換率は、最良値（６２．１％）となった。比較対照であ
るＰＣにおいては、ヘプタン：アセトン：０．２Ｍ酢酸
緩衝液（ｐＨ４．０）の容量比率を７４：１９：７と
し、ＰＬＤを０．１８単位（ＰＣ１ｇあたり２４０単
位）添加した時、ＰＣからホスファチジルセリンへの変
換率は、最良値（６４．３％）となった。このように最
適条件では、ＰＥを基質とした場合、ＰＣとほぼ同等の
変換率が得られた。
【００３１】（実施例２）Ｌ−セリンの代わりにグリセ
ロール５．８ｍｇを用いたこと以外は、実施例１と同様
に酵素反応を行った。ただし、各種リン脂質の定量分析
は、下記の条件の薄層クロマトグラフ法（ＴＬＣ法）に
て行った。
ロール５．８ｍｇを用いたこと以外は、実施例１と同様
に酵素反応を行った。ただし、各種リン脂質の定量分析
は、下記の条件の薄層クロマトグラフ法（ＴＬＣ法）に
て行った。
【００３２】
ＴＬＣプレート…Ｍｅｒｃｋ社製 Ｓｉｌｉｃａ ｇｅｌ ６０
展開溶媒…クロロホルム：石油エーテル：メタノール：酢酸：ホウ酸＝４０：
３０：２０：１０：１．８(V/V/V/V/W)
展開時間…約１．５時間
検出…展開後５０％硫酸を噴霧し、１８０〜２５０℃にて１０分間加熱して発
色させ、高速薄層スキャナＣＳ−９２０形（島津製）にて４７７ｎｍでスポット
を測定した。
【００３３】その結果、ＰＥにおいて、変換反応の最適
条件を検討したところ、ヘプタン：アセトン：０．２Ｍ
酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）の容量比率を７４：１８：８
とし、ＰＬＤを０．１２単位（ＰＥ１ｇあたり１６０単
位）添加した時、ＰＥからホスファチジルグリセロール
への変換率は、最良値（７７．５％）となった。比較対
照であるＰＣにおいては、ヘプタン：アセトン：０．２
Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）の容量比率を７３：１８：
９とし、ＰＬＤを０．１８単位（ＰＥ１ｇあたり２４０
単位）添加した時、ＰＣからホスファチジルグリセロー
ルへの変換率は、最良値（６７．３％）となった。この
ように、ＰＥでは、ＰＣを基質とした場合と同等以上の
変換率が得られた。
条件を検討したところ、ヘプタン：アセトン：０．２Ｍ
酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）の容量比率を７４：１８：８
とし、ＰＬＤを０．１２単位（ＰＥ１ｇあたり１６０単
位）添加した時、ＰＥからホスファチジルグリセロール
への変換率は、最良値（７７．５％）となった。比較対
照であるＰＣにおいては、ヘプタン：アセトン：０．２
Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）の容量比率を７３：１８：
９とし、ＰＬＤを０．１８単位（ＰＥ１ｇあたり２４０
単位）添加した時、ＰＣからホスファチジルグリセロー
ルへの変換率は、最良値（６７．３％）となった。この
ように、ＰＥでは、ＰＣを基質とした場合と同等以上の
変換率が得られた。
【００３４】（実施例３）Ｌ−セリンの代わりにＮ−ア
セチル−Ｄ−グルコサミン５．８ｍｇを用いたこと以外
は、実施例１と同様に酵素反応を行った。ただし、各種
リン脂質の定量分析は、実施例２と同条件の薄層クロマ
トグラフ法（ＴＬＣ法）にて行った。
セチル−Ｄ−グルコサミン５．８ｍｇを用いたこと以外
は、実施例１と同様に酵素反応を行った。ただし、各種
リン脂質の定量分析は、実施例２と同条件の薄層クロマ
トグラフ法（ＴＬＣ法）にて行った。
【００３５】その結果、ＰＥにおいて、変換反応の最適
条件を検討したところ、ヘプタン：アセトン：０．２Ｍ
酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）の容量比率を７６：１４：１
０とし、ＰＬＤを３．０単位（ＰＥ１ｇあたり４０００
単位）添加した時、ＰＥからホスファチジル−Ｎ−アセ
チル−Ｄ−グルコサミンへの変換率は、最良値（２４
％）となった。比較対照であるＰＣにおいては、ヘプタ
ン：アセトン：０．２Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）の容
量比率を７３：１８：９とし、ＰＬＤを３．０単位（Ｐ
Ｃ１ｇあたり４０００単位）添加した時、ＰＣからホス
ファチジルＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミンへの変換率
は、最良値（１３．９％）となった。このように、ＰＥ
を基質とした場合、最適条件においてはＰＣと同等以上
の変換率が得られた。
条件を検討したところ、ヘプタン：アセトン：０．２Ｍ
酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）の容量比率を７６：１４：１
０とし、ＰＬＤを３．０単位（ＰＥ１ｇあたり４０００
単位）添加した時、ＰＥからホスファチジル−Ｎ−アセ
チル−Ｄ−グルコサミンへの変換率は、最良値（２４
％）となった。比較対照であるＰＣにおいては、ヘプタ
ン：アセトン：０．２Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）の容
量比率を７３：１８：９とし、ＰＬＤを３．０単位（Ｐ
Ｃ１ｇあたり４０００単位）添加した時、ＰＣからホス
ファチジルＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミンへの変換率
は、最良値（１３．９％）となった。このように、ＰＥ
を基質とした場合、最適条件においてはＰＣと同等以上
の変換率が得られた。
【００３６】（実施例４）Ｌ−セリンの代わりにＬ−ア
スコルビン酸６．６ｍｇを用いたこと以外は、実施例１
と同様に酵素反応を行った。ただし、各種リン脂質の定
量分析は、下記の条件の薄層クロマトグラフ法（ＴＬＣ
法）にて行った。
スコルビン酸６．６ｍｇを用いたこと以外は、実施例１
と同様に酵素反応を行った。ただし、各種リン脂質の定
量分析は、下記の条件の薄層クロマトグラフ法（ＴＬＣ
法）にて行った。
【００３７】ＴＬＣプレート…Ｍｅｒｃｋ社製 Silica
gel 60 展開溶媒…クロロホルム：メタノール：２８％アンモニ
ア：水＝５０：２０：２：１(V/V/V/V) 展開時間…約１．５時間 検出…展開後５０％硫酸を噴霧し、１８０〜２５０℃に
て１０分間加熱して発色させ、高速薄層スキャナＣＳ−
９２０形（島津製）にて４７７ｎｍでスポットを測定し
た。
gel 60 展開溶媒…クロロホルム：メタノール：２８％アンモニ
ア：水＝５０：２０：２：１(V/V/V/V) 展開時間…約１．５時間 検出…展開後５０％硫酸を噴霧し、１８０〜２５０℃に
て１０分間加熱して発色させ、高速薄層スキャナＣＳ−
９２０形（島津製）にて４７７ｎｍでスポットを測定し
た。
【００３８】その結果、ＰＥにおいて、変換反応の最適
条件を検討したところ、ヘプタン：アセトン：０．２Ｍ
酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）の容量比率を７６：１４：１
０とし、ＰＬＤを３．０単位（ＰＥ１ｇあたり４０００
単位）添加した時、ＰＥからホスファチジル−Ｌ−アス
コルビン酸への変換率は、最良値（２２．１％）となっ
た。比較対照であるＰＣにおいては、ヘプタン：アセト
ン：０．２Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）の容量比率を７
９：１４：７とし、ＰＬＤを３．０単位（ＰＣ１ｇあた
り４０００単位）添加した時、ＰＣからホスファチジル
−Ｌ−アスコルビン酸への変換率は、最良値（２３．４
％）となった。このように、ＰＥを基質とした場合、最
適条件においてはＰＣとほぼ同等の変換率が得られた。
条件を検討したところ、ヘプタン：アセトン：０．２Ｍ
酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）の容量比率を７６：１４：１
０とし、ＰＬＤを３．０単位（ＰＥ１ｇあたり４０００
単位）添加した時、ＰＥからホスファチジル−Ｌ−アス
コルビン酸への変換率は、最良値（２２．１％）となっ
た。比較対照であるＰＣにおいては、ヘプタン：アセト
ン：０．２Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）の容量比率を７
９：１４：７とし、ＰＬＤを３．０単位（ＰＣ１ｇあた
り４０００単位）添加した時、ＰＣからホスファチジル
−Ｌ−アスコルビン酸への変換率は、最良値（２３．４
％）となった。このように、ＰＥを基質とした場合、最
適条件においてはＰＣとほぼ同等の変換率が得られた。
【００３９】（実施例５）Ｌ−セリンの代わりにＤ−グ
ルコース８．６ｍｇを用いたこと以外は、実施例１と同
様に酵素反応を行った。ただし、各種リン脂質の定量分
析は、実施例２と同条件の薄層クロマトグラフ法（ＴＬ
Ｃ法）にて行った。
ルコース８．６ｍｇを用いたこと以外は、実施例１と同
様に酵素反応を行った。ただし、各種リン脂質の定量分
析は、実施例２と同条件の薄層クロマトグラフ法（ＴＬ
Ｃ法）にて行った。
【００４０】その結果、ＰＥにおいて、変換反応の最適
条件を検討したところ、ヘプタン：アセトン：０．２Ｍ
酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）の容量比率を８１：９：１０
とし、ＰＬＤを０．９単位（ＰＥ１ｇあたり１２００単
位）添加した時、ＰＥからホスファチジル−Ｄ−グルコ
ースへの変換率は、最良値（６１．８％）となった。比
較対照であるＰＣにおいては、ヘプタン：アセトン：
０．２Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）の容量比率を７４：
１８：８とし、ＰＬＤを０．９単位（ＰＣ１ｇあたり１
２００単位）添加した時、ＰＣからホスファチジル−Ｄ
−グルコースへの変換率は、最良値（６０．０％）とな
った。このように、ＰＥを基質とした場合、最適条件に
おいてはＰＣとほぼ同等の変換率が得られた。
条件を検討したところ、ヘプタン：アセトン：０．２Ｍ
酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）の容量比率を８１：９：１０
とし、ＰＬＤを０．９単位（ＰＥ１ｇあたり１２００単
位）添加した時、ＰＥからホスファチジル−Ｄ−グルコ
ースへの変換率は、最良値（６１．８％）となった。比
較対照であるＰＣにおいては、ヘプタン：アセトン：
０．２Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）の容量比率を７４：
１８：８とし、ＰＬＤを０．９単位（ＰＣ１ｇあたり１
２００単位）添加した時、ＰＣからホスファチジル−Ｄ
−グルコースへの変換率は、最良値（６０．０％）とな
った。このように、ＰＥを基質とした場合、最適条件に
おいてはＰＣとほぼ同等の変換率が得られた。
【００４１】（実施例６）ストレプトマイセス・シンナ
モネウム IFO 12852の代わりに、ミクロモノスポラ・チ
ヤルセア ATCC 12452、ノカルディア・メディテラーネ
イ IFO 13142、ノカルディオプシス・ダソンビレイ IFO
13908、またはアクチノマデューラ・リバノチカ IFO 1
4095を使用した以外は実施例１と同様にして、各菌株由
来のＰＬＤ粗酵素を調製した。
モネウム IFO 12852の代わりに、ミクロモノスポラ・チ
ヤルセア ATCC 12452、ノカルディア・メディテラーネ
イ IFO 13142、ノカルディオプシス・ダソンビレイ IFO
13908、またはアクチノマデューラ・リバノチカ IFO 1
4095を使用した以外は実施例１と同様にして、各菌株由
来のＰＬＤ粗酵素を調製した。
【００４２】上記得られた各菌株由来のＰＬＤまたは市
販のＰＬＤを用いたこと以外は、実施例１と同様に酵素
反応を行い、それぞれ最適の条件でのＰＣおよびＰＥか
らホスファチジルセリンへの変換率を比較した。結果を
表１に示す。なお、表中の数値は、ＰＥおよびＰＣから
ホスファチジルセリンへの変換率（％）を示す。
販のＰＬＤを用いたこと以外は、実施例１と同様に酵素
反応を行い、それぞれ最適の条件でのＰＣおよびＰＥか
らホスファチジルセリンへの変換率を比較した。結果を
表１に示す。なお、表中の数値は、ＰＥおよびＰＣから
ホスファチジルセリンへの変換率（％）を示す。
【００４３】
【表１】
【００４４】表１からわかるように、ＰＥを基質とした
場合、最適条件においては、ＰＣとほぼ同様またはそれ
以上の変換率が得られた。
場合、最適条件においては、ＰＣとほぼ同様またはそれ
以上の変換率が得られた。
【００４５】（実施例７）ヘプタン、アセトン、および
０．２Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）の混合液の代わりに
ヘキサン、アセトン、および０．２Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ
４．０）の混合液を用いたこと以外は、実施例１と同様
に酵素反応を行った。なお、ヘキサン：アセトン：０．
２Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）の容量比率を６０〜９
０：４〜３０：２〜２０の範囲で、さらにＰＬＤの添加
量を０．０６〜３単位の範囲で、それぞれ変動させ、目
的とするＰＥからホスファチジルセリンへの変換率が最
良となる条件を求めた。比較対照として、ＰＥの代わり
にＰＣを用い、上記と同様の混合液およびＰＬＤ量の範
囲内でＰＣからホスファチジルセリンへの変換率が最良
となる条件を求めた。
０．２Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）の混合液の代わりに
ヘキサン、アセトン、および０．２Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ
４．０）の混合液を用いたこと以外は、実施例１と同様
に酵素反応を行った。なお、ヘキサン：アセトン：０．
２Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）の容量比率を６０〜９
０：４〜３０：２〜２０の範囲で、さらにＰＬＤの添加
量を０．０６〜３単位の範囲で、それぞれ変動させ、目
的とするＰＥからホスファチジルセリンへの変換率が最
良となる条件を求めた。比較対照として、ＰＥの代わり
にＰＣを用い、上記と同様の混合液およびＰＬＤ量の範
囲内でＰＣからホスファチジルセリンへの変換率が最良
となる条件を求めた。
【００４６】その結果、ＰＥにおいて、変換反応の最適
条件を検討したところ、ヘキサン：アセトン：０．２Ｍ
酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）の容量比率を７８：１４：８
とし、ＰＬＤを０．１８単位（ＰＥ１ｇあたり２４０単
位）添加した時、ＰＥからホスファチジルセリンへの変
換率は、最良値（５８．０％）となった。比較対照であ
るＰＣにおいては、ヘキサン：アセトン：０．２Ｍ酢酸
緩衝液（ｐＨ４．０）の容量比率を７４：１９：７と
し、ＰＬＤを０．１８単位（ＰＣ１ｇあたり２４０単
位）添加した時、ＰＣからホスファチジルセリンへの変
換率は、最良値（５５．４％）となった。このように、
ＰＥを基質とした場合、最適条件においてはＰＣとほぼ
同等の変換率が得られた。
条件を検討したところ、ヘキサン：アセトン：０．２Ｍ
酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）の容量比率を７８：１４：８
とし、ＰＬＤを０．１８単位（ＰＥ１ｇあたり２４０単
位）添加した時、ＰＥからホスファチジルセリンへの変
換率は、最良値（５８．０％）となった。比較対照であ
るＰＣにおいては、ヘキサン：アセトン：０．２Ｍ酢酸
緩衝液（ｐＨ４．０）の容量比率を７４：１９：７と
し、ＰＬＤを０．１８単位（ＰＣ１ｇあたり２４０単
位）添加した時、ＰＣからホスファチジルセリンへの変
換率は、最良値（５５．４％）となった。このように、
ＰＥを基質とした場合、最適条件においてはＰＣとほぼ
同等の変換率が得られた。
【００４７】（実施例８）ＰＥ０．７５ｍｇ、Ｌ−セリ
ン６．５７ｍｇ、および上記実施例７で用いたＰＬＤ
（旭化成社製）を、ジエチルエーテルおよび０．２Ｍ酢
酸緩衝液（ｐＨ４．０）の混合液４５０μｌに添加し、
３０℃にて攪拌しながら２時間反応させた。全溶媒を減
圧下にて留去し、乾燥物をクロロホルム：アセトニトリ
ル＝７：３に溶解し、ＰＬＤによるホスファチジル基転
移反応の生成物であるホスファチジルセリンの分析をＨ
ＰＬＣ法にて行った。なお、ジエチルエーテル：０．２
Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）の容量比率を８０〜９８：
２〜２０の範囲で、さらにＰＬＤの添加量を０．０６〜
３単位の範囲で、それぞれ変動させ、目的とするＰＥか
らホスファチジルセリンへの変換率が最良となる条件を
求めた。比較対照として、ＰＥの代わりにＰＣを用い、
上記と同様の混合液およびＰＬＤ量の範囲内でＰＣから
ホスファチジルセリンへの変換率が最良となる条件を求
めた。各種リン脂質の定量分析は、実施例１と同様の条
件で行った。
ン６．５７ｍｇ、および上記実施例７で用いたＰＬＤ
（旭化成社製）を、ジエチルエーテルおよび０．２Ｍ酢
酸緩衝液（ｐＨ４．０）の混合液４５０μｌに添加し、
３０℃にて攪拌しながら２時間反応させた。全溶媒を減
圧下にて留去し、乾燥物をクロロホルム：アセトニトリ
ル＝７：３に溶解し、ＰＬＤによるホスファチジル基転
移反応の生成物であるホスファチジルセリンの分析をＨ
ＰＬＣ法にて行った。なお、ジエチルエーテル：０．２
Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）の容量比率を８０〜９８：
２〜２０の範囲で、さらにＰＬＤの添加量を０．０６〜
３単位の範囲で、それぞれ変動させ、目的とするＰＥか
らホスファチジルセリンへの変換率が最良となる条件を
求めた。比較対照として、ＰＥの代わりにＰＣを用い、
上記と同様の混合液およびＰＬＤ量の範囲内でＰＣから
ホスファチジルセリンへの変換率が最良となる条件を求
めた。各種リン脂質の定量分析は、実施例１と同様の条
件で行った。
【００４８】その結果、ＰＥにおいて、変換反応の最適
条件を検討したところ、ジエチルエーテル：０．２Ｍ酢
酸緩衝液（ｐＨ４．０）の容量比率を９０：１０とし、
ＰＬＤを０．３単位（ＰＥ１ｇあたり４００単位）添加
した時、ＰＥからホスファチジルセリンへの変換率は、
最良値（８０．３２％）となった。比較対照であるＰＣ
においては、ジエチルエーテル：０．２Ｍ酢酸緩衝液
（ｐＨ４．０）の容量比率を９３：７とし、ＰＬＤを
０．３単位（ＰＣ１ｇあたり４００単位）添加した時、
ＰＣからホスファチジルセリンへの変換率は、最良値
（７０．３１％）となった。このように、ＰＥを基質と
した場合、最適条件においてはＰＣと同等以上の変換率
が得られた。
条件を検討したところ、ジエチルエーテル：０．２Ｍ酢
酸緩衝液（ｐＨ４．０）の容量比率を９０：１０とし、
ＰＬＤを０．３単位（ＰＥ１ｇあたり４００単位）添加
した時、ＰＥからホスファチジルセリンへの変換率は、
最良値（８０．３２％）となった。比較対照であるＰＣ
においては、ジエチルエーテル：０．２Ｍ酢酸緩衝液
（ｐＨ４．０）の容量比率を９３：７とし、ＰＬＤを
０．３単位（ＰＣ１ｇあたり４００単位）添加した時、
ＰＣからホスファチジルセリンへの変換率は、最良値
（７０．３１％）となった。このように、ＰＥを基質と
した場合、最適条件においてはＰＣと同等以上の変換率
が得られた。
【００４９】（実施例９）ＰＥ０．７５ｍｇ、Ｌ−セリ
ン６．５７ｍｇ、および上記実施例１で得られたＰＬＤ
粗酵素品を、ヘプタン、アセトン、および０．２Ｍ酢酸
緩衝液（ｐＨ４．０）の混合液４５０μｌに添加し、３
０℃にて攪拌しながら２時間反応させた。なお、ヘプタ
ン：アセトン：０．２Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）の容
量比率を表２のように変動させ、ＰＬＤの添加量を０．
１８単位（ＰＥ１ｇあたり２４０単位）として、ＰＥか
らホスファチジルセリンへの変換率を求めた。なお、生
成物であるホスファチジルセリンの分析は、上記実施例
１と同様の方法で行った。結果を、表２に示す。
ン６．５７ｍｇ、および上記実施例１で得られたＰＬＤ
粗酵素品を、ヘプタン、アセトン、および０．２Ｍ酢酸
緩衝液（ｐＨ４．０）の混合液４５０μｌに添加し、３
０℃にて攪拌しながら２時間反応させた。なお、ヘプタ
ン：アセトン：０．２Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）の容
量比率を表２のように変動させ、ＰＬＤの添加量を０．
１８単位（ＰＥ１ｇあたり２４０単位）として、ＰＥか
らホスファチジルセリンへの変換率を求めた。なお、生
成物であるホスファチジルセリンの分析は、上記実施例
１と同様の方法で行った。結果を、表２に示す。
【００５０】
【表２】
【００５１】表２からわかるように、ヘプタン：アセト
ン：０．２Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）の容量比率が６
０〜９０：４〜３０：２〜２０の範囲にある場合は、良
好な変換率が得られた。
ン：０．２Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）の容量比率が６
０〜９０：４〜３０：２〜２０の範囲にある場合は、良
好な変換率が得られた。
【００５２】ヘキサン：アセトン：０．２Ｍ酢酸緩衝液
（ｐＨ４．０）の容量比率についても同様の検討を行っ
た結果、容量比率が６０〜９０：４〜３０：２〜２０の
範囲にある場合は、良好な変換率が得られた（データを
示さず）。
（ｐＨ４．０）の容量比率についても同様の検討を行っ
た結果、容量比率が６０〜９０：４〜３０：２〜２０の
範囲にある場合は、良好な変換率が得られた（データを
示さず）。
【００５３】
【発明の効果】本発明によれば、ＰＬＤを用いたアシル
グリセロリン脂質のホスファチジル基転移反応におい
て、反応時に使用する溶媒の種類や組成、および添加す
るＰＬＤの量を調節することにより、従来利用されてい
なかったＰＥを基質として用いた場合でも、ＰＣと同等
のホスファチジル基転移反応率を得ることができる。そ
のため、効率よくホスファチジル基転移反応を行うこと
ができ、食品用途をはじめ各種産業分野において使用で
きる各種アシルグリセロリン脂質を高効率で得る生産方
法を提供できる。
グリセロリン脂質のホスファチジル基転移反応におい
て、反応時に使用する溶媒の種類や組成、および添加す
るＰＬＤの量を調節することにより、従来利用されてい
なかったＰＥを基質として用いた場合でも、ＰＣと同等
のホスファチジル基転移反応率を得ることができる。そ
のため、効率よくホスファチジル基転移反応を行うこと
ができ、食品用途をはじめ各種産業分野において使用で
きる各種アシルグリセロリン脂質を高効率で得る生産方
法を提供できる。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考）
(Ｃ１２Ｐ 9/00 Ｃ１２Ｒ 1:03
Ｃ１２Ｒ 1:365）
(Ｃ１２Ｐ 9/00
Ｃ１２Ｒ 1:01）
(Ｃ１２Ｐ 9/00
Ｃ１２Ｒ 1:03）
(72)発明者 藤原 洋子
京都府福知山市長田野町１−52 ナガセケ
ムテックス株式会社福知山工場内
Ｆターム(参考） 4B064 AE45 AE63 AF02 AF21 CA21
CB30 CC03 CD15 DA01 DA10
Claims (5)
- 【請求項１】 ホスファチジルエタノールアミンと、ア
ルコール類、含窒素アルコール類、糖類、ポリオール
類、およびヒドロキシ環状炭化水素化合物からなる群よ
り選択されるアルコールとを、放線菌由来のホスフォリ
パーゼＤの存在下で反応させる工程を含む、リン脂質の
塩基交換方法。 - 【請求項２】 前記ホスフォリパーゼＤが、ストレプト
マイセス属、ミクロモノスポラ属、ノカルディア属、ノ
カルディオプシス属、およびアクチノマデューラ属から
なる群より選択される放線菌に属する少なくとも１つの
菌株に由来する、請求項１に記載の方法。 - 【請求項３】 前記反応が、ヘプタン：アセトン：水系
溶媒を、それぞれ容量比率で６０〜９０：４〜３０：２
〜２０の割合で含む溶媒中で行われる、請求項１または
２に記載の方法。 - 【請求項４】 前記反応が、ヘキサン：アセトン：水系
溶媒を、それぞれ容量比率で６０〜９０：４〜３０：２
〜２０の割合で含む溶媒中で行われる、請求項１または
２に記載の方法。 - 【請求項５】 前記ホスフォリパーゼＤが、ホスファチ
ジルエタノールアミン１ｇあたり、２０〜８０００単位
添加される、請求項１から４のいずれかの項に記載の方
法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2003052622A JP2003319793A (ja) | 2002-02-28 | 2003-02-28 | リン脂質の塩基交換方法 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2002-54116 | 2002-02-28 | ||
| JP2002054116 | 2002-02-28 | ||
| JP2003052622A JP2003319793A (ja) | 2002-02-28 | 2003-02-28 | リン脂質の塩基交換方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2003319793A true JP2003319793A (ja) | 2003-11-11 |
Family
ID=29552138
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2003052622A Pending JP2003319793A (ja) | 2002-02-28 | 2003-02-28 | リン脂質の塩基交換方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2003319793A (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006211974A (ja) * | 2005-02-04 | 2006-08-17 | Yakult Honsha Co Ltd | ストレプトマイセス属細菌の培養方法及びこれを利用する有用物質の製造方法 |
| JP2006271217A (ja) * | 2005-03-28 | 2006-10-12 | Nagase Chemtex Corp | リン脂質の加水分解方法及び塩基交換方法 |
| WO2007063886A1 (ja) * | 2005-11-30 | 2007-06-07 | Nagase Chemtex Corporation | 多価不飽和脂肪酸含有リン脂質の製造方法及び該製造方法により得られる多価不飽和脂肪酸含有リン脂質 |
| US7709238B2 (en) | 2004-03-18 | 2010-05-04 | Nagase Chemtex Corporation | Method for removing enzyme and method of base exchange or hydrolysis of phospholipid using the same |
| CN103884813A (zh) * | 2014-04-11 | 2014-06-25 | 内蒙古伊利实业集团股份有限公司 | 一种食品中磷脂酰丝氨酸含量的检测方法 |
-
2003
- 2003-02-28 JP JP2003052622A patent/JP2003319793A/ja active Pending
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7709238B2 (en) | 2004-03-18 | 2010-05-04 | Nagase Chemtex Corporation | Method for removing enzyme and method of base exchange or hydrolysis of phospholipid using the same |
| JP2006211974A (ja) * | 2005-02-04 | 2006-08-17 | Yakult Honsha Co Ltd | ストレプトマイセス属細菌の培養方法及びこれを利用する有用物質の製造方法 |
| JP2006271217A (ja) * | 2005-03-28 | 2006-10-12 | Nagase Chemtex Corp | リン脂質の加水分解方法及び塩基交換方法 |
| JP4678488B2 (ja) * | 2005-03-28 | 2011-04-27 | ナガセケムテックス株式会社 | リン脂質の加水分解方法及び塩基交換方法 |
| WO2007063886A1 (ja) * | 2005-11-30 | 2007-06-07 | Nagase Chemtex Corporation | 多価不飽和脂肪酸含有リン脂質の製造方法及び該製造方法により得られる多価不飽和脂肪酸含有リン脂質 |
| CN103884813A (zh) * | 2014-04-11 | 2014-06-25 | 内蒙古伊利实业集团股份有限公司 | 一种食品中磷脂酰丝氨酸含量的检测方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0125039B1 (en) | Enzymatic production of phospholipid-saccharide derivatives | |
| EP0122151B1 (en) | Production of primary or secondary alcohol derivatives of phospholipids by the enzymatic technique | |
| EP1908845A1 (en) | Method for producing optically active 2-(n-substituted aminomethyl)-3-hydroxybutyric acid ester | |
| JPH11155570A (ja) | 酵素の基質特異性の改変法 | |
| US7727751B2 (en) | Method for the preparation of mycophenolate mofetil by enzyme tranesterification | |
| JPH04321680A (ja) | クロノスタキス・コンパクチウスクラから得た酵素を使用した、ロバスタチン酸の酵素加水分解による６（Ｒ）−〔２−（８（Ｓ）−ヒドロキシ−２（Ｓ），６（Ｒ）−ジメチル−１，２，６，７，８，８ａ（Ｒ）−ヘキサヒドロナフチル）−エチル〕−４（Ｒ）−ヒドロキシ−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−オン・トリオール酸の生合成的製造方法 | |
| JP2003319793A (ja) | リン脂質の塩基交換方法 | |
| Nakajima et al. | A facile transphosphatidylation reaction using a culture supernatant of actinomycetes directly as a phospholipase D catalyst with a chelating agent | |
| EP0052974B1 (en) | Improvements in enzymatic deesterification | |
| JP4678488B2 (ja) | リン脂質の加水分解方法及び塩基交換方法 | |
| US5108914A (en) | Process for the synthesis of l-alpha-amino acids | |
| EP0272064B1 (en) | A process for the preparation of ascorbic acid-2-phosphate | |
| JPH01199590A (ja) | アスコルビン酸−２−リン酸の製造法 | |
| Carrea et al. | Purification and applications of a phospholipase D from a new strain of Streptomyces | |
| JP4042454B2 (ja) | 光学活性３−メチルグルタル酸モノエステルの製造方法 | |
| IE883807L (en) | A process for the enzymatic hydrolysis of ó-aminoadipinyl-monoamino compounds | |
| FUKAGAWA et al. | STUDIES ON THE BIOSYNTHESIS OF CARBAPENEM ANTIBIOTICS I. BIOSYNTHETIC SIGNIFICANCE OF THE OA-6129 GROUP OF CARBAPENEM COMPOUNDS AS THE DIRECT PRECURSORS FOR PS-5, EPITHIENAMYCINS A AND C AND MM 17880 | |
| Jeon et al. | Enzymatic synthesis of amino acid-sugar alcohol conjugates in organic media | |
| WO2013094499A1 (ja) | 光学活性なα－置換－β－アミノ酸の製造方法 | |
| Hu et al. | Enantioselective biocatalytic resolution for the synthesis of enantiopure α-hydroxyphosphonates using Candida antarctica lipase B | |
| JPH05328972A (ja) | 新規なアミノアシラーゼおよびその製造方法 | |
| EP1067196A1 (en) | Process for producing lysosphingolipids | |
| CA1292713C (en) | Process for producing antibiotic salinomycin | |
| JP2799621B2 (ja) | ホスホリパーゼｄの製造法 | |
| JP2002253291A (ja) | ２−デオキシリボース５−リン酸の製造方法 |