JP2003284548A - Method for decomposing formaldehyde and decomposer - Google Patents

Abstract

<P>PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a method for exerting the high and stable ability to decompose formaldehyde under various conditions. <P>SOLUTION: The method for decomposing formaldehyde involves (1) using cells belonging to the genus Mycobacterium sp. and/or a culture solution of the cells, or (2) using cells belonging to the genus Fusarium oxysporum and/or a culture solution of the cells. <P>COPYRIGHT: (C)2004,JPO

Description

【発明の詳細な説明】Detailed Description of the Invention

【０００１】[0001]

【発明の属する技術分野】本発明は、微生物及び/又は
当該微生物の培養液等を用いて効率よくホルムアルデヒ
ドを分解することが可能なホルムアルデヒドの分解方法
及び分解剤に関する。TECHNICAL FIELD The present invention relates to a formaldehyde decomposing method and a decomposing agent capable of efficiently decomposing formaldehyde using a microorganism and / or a culture solution of the microorganism.

【０００２】[0002]

【従来の技術】ホルムアルデヒドは、工業的或いは実験
的に様々な分野で使用されており、その毒性から環境汚
染原因物質として指定されている。例えば、水道水に含
まれるホルムアルデヒドは、１ppm以下に規制されてい
る。また、気相中に含まれるホルムアルデヒドは、臭気
が強いだけでなくヒトを始めとする動物の目や気管支粘
膜等に極めて重大な影響を及ぼすことが知られている。BACKGROUND OF THE INVENTION Formaldehyde is used industrially or experimentally in various fields and is designated as an environmental pollutant due to its toxicity. For example, formaldehyde contained in tap water is regulated to 1 ppm or less. Further, it is known that formaldehyde contained in the gas phase not only has a strong odor but also has a very serious effect on the eyes and bronchial mucosa of animals including humans.

【０００３】高濃度のホルムアルデヒドの処理には、多
量の水で希釈した後、次亜塩素酸ソーダや過酸化水素を
加えて分解する方法や焼却炉で消却する方法がある。し
かしながら、これらの方法は、処理が煩雑で効率も悪い
といった問題がある。また、ホルムアルデヒドを除去す
るための手法及び手段としては、例えば、特願昭50-698
70号、特願昭58-87603号、特願平5-258657号、特願平9-
172509号、特願平9-172510号に開示されているように、
主として排水中に含まれるホルムアルデヒドを除去対象
としている。The treatment of high-concentration formaldehyde includes a method in which it is diluted with a large amount of water and then decomposed by adding sodium hypochlorite or hydrogen peroxide, or a method in which it is incinerated in an incinerator. However, these methods have problems that the processing is complicated and the efficiency is low. Further, as a method and means for removing formaldehyde, for example, Japanese Patent Application No. 50-698
No. 70, Japanese Patent Application No. 58-87603, Japanese Patent Application No. 5-258657, Japanese Patent Application No. 9-
As disclosed in Japanese Patent Application No. 172509 and Japanese Patent Application No. 9-172510,
Formaldehyde contained in wastewater is mainly targeted for removal.

【０００４】しかしながら、これらの手法及び手段で
は、例えば、住環境等の気相中や海域に含まれるホルム
アルデヒドを除去することは考慮されておらず、様々な
環境中に含まれるホルムアルデヒドを分解して無毒化す
ることができないといった問題がある。However, these methods and means do not take into consideration removal of formaldehyde contained in the gas phase of the living environment or in the sea area, for example, by decomposing formaldehyde contained in various environments. There is a problem that it cannot be detoxified.

【０００５】[0005]

【発明が解決しようとする課題】そこで、本発明は、上
述したような実状に鑑みて案出されたものであり、優れ
た分解能力及び様々な条件下で安定した分解能力を発揮
することができるホルムアルデヒドの分解方法及び分解
剤を提供することを目的とする。Therefore, the present invention has been devised in view of the above-mentioned circumstances, and is capable of exhibiting excellent decomposing ability and stable decomposing ability under various conditions. An object of the present invention is to provide a method for decomposing formaldehyde and a decomposing agent capable of decomposing it.

【０００６】[0006]

【課題を解決するための手段】上述した目的を達成する
ために、本発明者が鋭意検討した結果、ホルムアルデヒ
ドの分解能力に優れた微生物を単離することに成功し、
本発明を完成するに至った。すなわち、本発明は、以下
を包含する。[Means for Solving the Problems] In order to achieve the above-mentioned object, as a result of diligent studies by the present inventor, succeeded in isolating a microorganism excellent in formaldehyde decomposing ability,
The present invention has been completed. That is, the present invention includes the following.

【０００７】(1)マイコバクテリウム属（Mycobacterium
sp.）に属する菌体及び/又は当該菌体の培養液を用い
てホルムアルデヒドを分解することを特徴とするホルム
アルデヒドの分解方法。 (2)上記マイコバクテリウム属（Mycobacterium sp.）に
属する菌体が寄託番号FERM P-18690であることを特徴と
する(1)記載のホルムアルデヒドの分解方法。(1) Mycobacterium
sp.), and / or a formaldehyde-decomposing method using a culture solution of the bacteria. (2) The method for decomposing formaldehyde according to (1), wherein the bacterium belonging to the genus Mycobacterium sp. Is deposit number FERM P-18690.

【０００８】(3)上記マイコバクテリウム属に属する菌
体及び/又は当該菌体の培養液を乾燥物とすることを特
徴とする(1)記載のホルムアルデヒドの分解方法。 (4)海水中に含まれるホルムアルデヒドを分解すること
を特徴とする(1)記載のホルムアルデヒドの分解方法。 (5)気相中に含まれるホルムアルデヒドを分解すること
を特徴とする(1)記載のホルムアルデヒドの分解方法。(3) The method for decomposing formaldehyde according to (1), characterized in that the cells belonging to the genus Mycobacterium and / or the culture solution of the cells is a dried product. (4) The method for decomposing formaldehyde according to (1), which comprises decomposing formaldehyde contained in seawater. (5) The method for decomposing formaldehyde according to (1), characterized in that formaldehyde contained in the gas phase is decomposed.

【０００９】(6)上記マイコバクテリウム属に属する菌
体及び/又は当該菌体の培養液を換気手段に配し、当該
換気手段を介して気体の換気を行うことによって当該気
体中に含まれるホルムアルデヒドを分解することを特徴
とする(1)記載のホルムアルデヒドの分解方法。 (7)ホルムアルデヒド分解能を有するマイコバクテリウ
ム属（Mycobacterium sp.）に属する菌体。 (8)寄託番号FERM P-18690であることを特徴とする(7)記
載の菌体。(6) The cells belonging to the genus Mycobacterium and / or a culture solution of the cells are placed in a ventilation means, and the gas is ventilated through the ventilation means so that the cells are contained in the gas. The method for decomposing formaldehyde according to (1), which comprises decomposing formaldehyde. (7) Cells belonging to the genus Mycobacterium (Mycobacterium sp.) Having formaldehyde degrading ability. (8) The bacterial cell according to (7), characterized in that it has a deposit number of FERM P-18690.

【００１０】(9)マイコバクテリウム属（Mycobacterium
sp.）に属する菌体及び/又は当該菌体の培養液を含む
ことを特徴とするホルムアルデヒド分解剤。 (10)上記マイコバクテリウム属に属する菌体が寄託番号
FERM P-18690であることを特徴とする(9)記載のホルム
アルデヒド分解剤。 (11)上記マイコバクテリウム属に属する菌体及び/又は
当該菌体の培養液が乾燥物であることを特徴とする(9)
記載のホルムアルデヒド分解剤。(9) Mycobacterium
sp.), and / or a formaldehyde degrading agent containing a culture solution of the cell. (10) The above-mentioned mycobacterium belong to the deposit number
FERM P-18690, The formaldehyde decomposing agent according to (9). (11) characterized in that the cells belonging to the genus Mycobacterium and / or the culture solution of the cells is a dried product (9)
Formaldehyde decomposer described.

【００１１】(12)フサリウム・オキシスポラム（Fusari
um oxysporum）及び/又は当該フサリウム・オキシスポ
ラムの培養液を更に含むことを特徴とする(9)記載のホ
ルムアルデヒド分解剤。 (13)フサリウム・オキシスポラム（Fusarium oxysporu
m）及び/又は当該フサリウム・オキシスポラムの培養液
を用いてホルムアルデヒドを分解することを特徴とする
ホルムアルデヒドの分解方法。 (14)上記フサリウム・オキシスポラムがフサリウム・オ
キシスポラムFERM P-18483であることを特徴とする(13)
記載のホルムアルデヒドの分解方法。(12) Fusarium oxysporum (Fusari
um oxysporum) and / or the culture solution of the Fusarium oxysporum. (13) Fusarium oxysporu
m) and / or the method for decomposing formaldehyde, which comprises decomposing formaldehyde using the culture solution of Fusarium oxysporum. (14) The above-mentioned Fusarium oxysporum is Fusarium oxysporum FERM P-18483 (13)
The method for decomposing formaldehyde described.

【００１２】(15)上記フサリウム・オキシスポラム及び
/又は当該フサリウム・オキシスポラムの培養液を乾燥
物とすることを特徴とする(13)記載のホルムアルデヒド
の分解方法。 (16)海水中に含まれるホルムアルデヒドを分解すること
を特徴とする請求項(13)記載のホルムアルデヒドの分解
方法。 (17)気相中に含まれるホルムアルデヒドを分解すること
を特徴とする(13)記載のホルムアルデヒドの分解方法。(15) The above Fusarium oxysporum and
/ Or the method for decomposing formaldehyde according to (13), characterized in that the culture solution of the Fusarium oxysporum is a dried product. (16) The method for decomposing formaldehyde according to (13), which comprises decomposing formaldehyde contained in seawater. (17) The method for decomposing formaldehyde according to (13), which comprises decomposing formaldehyde contained in the gas phase.

【００１３】(18)上記フサリウム・オキシスポラム及び
/又は当該フサリウム・オキシスポラムの培養液を換気
手段に配し、当該換気手段を介して気体の換気を行うこ
とによって当該気体中に含まれるホルムアルデヒドを分
解することを特徴とする(13)記載のホルムアルデヒドの
分解方法。 (19)フサリウム・オキシスポラム（Fusarium oxysporu
m）及び/又は当該フサリウム・オキシスポラムの培養液
を含むことを特徴とするホルムアルデヒド分解剤。(18) The above Fusarium oxysporum and
/ Or the formaldehyde contained in the gas is decomposed by arranging the Fusarium oxysporum culture solution in a ventilation means and ventilating the gas through the ventilation means. Disassembly method. (19) Fusarium oxysporu
m) and / or a culture solution of the Fusarium oxysporum.

【００１４】(20)上記フサリウム・オキシスポラムがフ
サリウム・オキシスポラムFERM P-18483であることを特
徴とする(19)記載のホルムアルデヒド分解剤。 (21)上記フサリウム・オキシスポラム及び/又は当該フ
サリウム・オキシスポラムの培養液が乾燥物であること
を特徴とする(19)記載のホルムアルデヒド分解剤。 (22)マイコバクテリウム属（Mycobacterium sp.）に属
する菌体及び/又は当該菌体の培養液を更に含むことを
特徴とする(19)記載のホルムアルデヒド分解剤。(20) The formaldehyde decomposing agent according to (19), wherein the Fusarium oxysporum is Fusarium oxysporum FERM P-18483. (21) The formaldehyde degrading agent according to (19), wherein the Fusarium oxysporum and / or the culture solution of the Fusarium oxysporum is a dried product. (22) The formaldehyde degrading agent according to (19), which further contains cells belonging to the genus Mycobacterium sp. And / or a culture solution of the cells.

【００１５】[0015]

【発明の実施の形態】以下、本発明に係るホルムアルデ
ヒドの分解方法及び分解剤について詳細に説明する。本
方法及び分解剤は、マイコバクテリウム属（Mycobacter
ium sp.）に属する菌体及び/又は当該菌体の培養液を用
いる。本方法及び分解剤において使用するマイコバクテ
リウム属に属する菌体は、ホルムアルデヒドを分解する
能力の有無を指標として、例えば発酵液からスクリーニ
ングすることによって得ることができる。BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION The formaldehyde decomposing method and decomposing agent according to the present invention will be described in detail below. The method and the degrading agent are of the Mycobacteria genus.
um sp.) and / or a culture solution of the bacterium. The mycobacterium belonging to the genus Mycobacterium used in the present method and the degrading agent can be obtained, for example, by screening from a fermentation broth using the presence or absence of the ability to degrade formaldehyde as an index.

【００１６】発酵液としては、例えば、市販されている
「バイオ耕太」（有限会社ミツワ・コーポレーション社
製）を例示することができる。この発酵液を用いてホル
ムアルデヒドを分解する能力の有無を指標としたスクリ
ーニングによって、マイコバクテリウム属に属する所定
の菌（Mycobacterium sp.）を単離することができる。
単離したマイコバクテリウム属に属する菌体は、独立行
政法人産業技術総合研究所 特許生物寄託センターに20
02年1月28日付けで寄託番号FERM P-18690として寄託さ
れている。なお、本明細書において、ホルムアルデヒド
を分解できるマイコバクテリウム属に属する菌体を「A
菌」と称する場合もある。Examples of the fermented liquor include commercially available "Bio Kota" (manufactured by Mitsuwa Corporation). A predetermined bacterium belonging to the genus Mycobacterium (Mycobacterium sp.) Can be isolated by screening using this fermentation broth with the presence or absence of the ability to decompose formaldehyde as an index.
The isolated cells belonging to the genus Mycobacterium belong to the Patent Biological Deposit Center, National Institute of Advanced Industrial Science and Technology.
It has been deposited under the deposit number FERM P-18690 as of January 28, 2002. In the present specification, cells belonging to the genus Mycobacterium that can decompose formaldehyde are referred to as “A
It may be referred to as "bacteria".

【００１７】新規に単離されたA菌について帰属分類群
は、A菌の16S rDNAの塩基配列に基づいて検討すること
ができる。A菌の16S rDNAの塩基配列を決定する際に
は、先ず、定法に従ってA菌から抽出したゲノムDNAを鋳
型として所定のプライマーを用いてPCRに供し、16S rDN
Aをコードする領域、約500bpの断片を増幅する。次に、
増幅した約500bpの断片について、定法に従ってシーク
エンス解析に供し、塩基配列を決定する。次に、決定し
た塩基配列を用いて、いわゆるBLASTによる相同性検
索、近隣結合法を行い、A菌について帰属分類群を調査
することができる。その結果、単離されたA菌は、マイ
コバクテリウム属に属する新規な微生物であると同定で
きる。The taxon belonging to the newly isolated A bacterium can be examined based on the nucleotide sequence of 16S rDNA of the A bacterium. When determining the nucleotide sequence of 16S rDNA of A bacterium, first, using the genomic DNA extracted from A bacterium according to the standard method as a template and subjecting it to PCR using predetermined primers, 16S rDN
A region encoding A, a fragment of about 500 bp is amplified. next,
The amplified fragment of about 500 bp is subjected to sequence analysis according to a standard method to determine the nucleotide sequence. Next, by using the determined nucleotide sequence, homology search by so-called BLAST and neighbor-joining method can be performed to investigate the taxon to which A strain belongs. As a result, the isolated A bacterium can be identified as a novel microorganism belonging to the genus Mycobacterium.

【００１８】A菌の培養温度は、好ましくは20〜40℃、
より好ましくは25〜35℃である。A菌の培養pHは、好ま
しくは5.0〜9.0であり、より好ましくは5.5〜7.5であ
る。A菌の培養は、好気的に行うことが好ましい。ま
た、本方法及び分解剤は、フサリウム・オキシスポラム
（Fusarium oxysporum）及び/又は当該フサリウム・オ
キシスポラムの培養液を用いる。本方法及び分解剤にお
いて使用するフサリウム・オキシスポラムは、ホルムア
ルデヒドを分解する能力の有無を指標として、例えば発
酵液からスクリーニングすることによって得ることがで
きる。The culture temperature of bacterium A is preferably 20 to 40 ° C.,
It is more preferably 25 to 35 ° C. The culture pH of bacterium A is preferably 5.0 to 9.0, more preferably 5.5 to 7.5. It is preferable to culture the bacterium A aerobically. As the method and the decomposing agent, Fusarium oxysporum and / or a culture solution of the Fusarium oxysporum is used. The Fusarium oxysporum used in the present method and the decomposing agent can be obtained, for example, by screening from a fermentation broth using the presence or absence of the ability to decompose formaldehyde as an index.

【００１９】発酵液としては、例えば、市販されている
「バイオ耕太」（有限会社ミツワ・コーポレーション社
製）を例示することができる。この発酵液を用いてホル
ムアルデヒドを分解する能力の有無を指標としたスクリ
ーニングによって、フサリウム・オキシスポラムを単離
することができる。単離したフサリウム・オキシスポラ
ムは、独立行政法人産業技術総合研究所 特許生物寄託
センターに2001年8月24日付けで寄託番号FERM P- 18483
として寄託されている。なお、本明細書において、ホル
ムアルデヒドを分解できるフサリウム・オキシスポラム
を「B菌」と称する場合もある。As the fermentation liquid, for example, commercially available "Bio Kota" (manufactured by Mitsuwa Corporation) can be exemplified. Fusarium oxysporum can be isolated by screening using the fermentation broth with the presence or absence of the ability to decompose formaldehyde as an index. The isolated Fusarium oxysporum was deposited at the Patent Biological Depositary Center, National Institute of Advanced Industrial Science and Technology as of August 24, 2001, with the deposit number FERM P-18483.
Has been deposited as. In the present specification, the Fusarium oxysporum capable of decomposing formaldehyde may be referred to as "B bacterium".

【００２０】B菌の菌学的性質は以下の通りである。 １．形態 （１）巨視的性状 B菌は、PDA、MA、OAの各プレートにおける25℃での生育
が早く、培養開始から１週間で5.0〜6.5cmの生育を示し
た。全ての培地において、コロニーは比較的に平坦な盛
り上がりを示し、コロニーの周縁は液状であった。寒天
内への菌糸の潜り込みは浅かった。気中菌糸は綿毛状で
あった。The mycological properties of B bacterium are as follows. 1. Morphology (1) Macroscopic properties B bacterium grew rapidly at 25 ° C. on each plate of PDA, MA, and OA, and showed growth of 5.0 to 6.5 cm within one week from the start of culture. In all media, the colonies showed a relatively flat ridge, and the periphery of the colonies was liquid. The hyphae did not easily penetrate into the agar. Aerial hyphae were fluffy.

【００２１】（２）微視的性状 大型分生子及び小型分生子の両方が観察された。小型分
生子は、フィアロ型の形成様式で長円形から紡錘形で平
滑からやや粗面であった。大型分生子は、三日月形で横
軸の隔壁のみが認められ、脚胞を有し、中厚で、中程度
の長さ、表面はやや粗面であった。B菌の培養温度は、
好ましくは10〜40℃、より好ましくは25〜35℃である。
B菌の培養pHは、好ましくは5.0〜9.0であり、より好ま
しくは5.5〜7.5である。B菌の培養は、好気的に行うこ
とが好ましい。(2) Microscopic properties Both large conidia and small conidia were observed. The small conidia were oval to fusiform and smooth to slightly rough with a Fiaro-type formation. Large conidia were crescent-shaped with only a horizontal septum, vesicles, medium thickness, medium length, and a slightly rough surface. The culture temperature of bacterium B is
The temperature is preferably 10 to 40 ° C, more preferably 25 to 35 ° C.
The culture pH of B bacterium is preferably 5.0 to 9.0, and more preferably 5.5 to 7.5. It is preferable to culture the B bacterium aerobically.

【００２２】スクリーニングによって単離された菌体の
ホルムアルデヒド分解活性は、公知のいかなる手法を用
いて評価しても良い。例えば、ホルムアルデヒドを分解
する酵素活性を測定する方法や単離された菌体の培地に
含まれるホルムアルデヒドを直接定量する方法等を挙げ
ることができる。ホルムアルデヒドを直接定量する方法
としては、いわゆるアセチルアセトン法を例示すること
ができる。また、市販のキットを用いて、菌体の培地に
含まれるホルムアルデヒドを定量することもできる。市
販のキットとしては、ホルムアルデヒドテストワコー
(和光純薬工業株式会社製)を例示することができる。The formaldehyde degrading activity of the cells isolated by the screening may be evaluated by any known method. For example, a method of measuring the enzyme activity of decomposing formaldehyde, a method of directly quantifying formaldehyde contained in the isolated bacterial cell medium, and the like can be mentioned. A so-called acetylacetone method can be exemplified as a method for directly quantifying formaldehyde. Further, it is also possible to quantify the formaldehyde contained in the cell culture medium using a commercially available kit. A commercially available kit is Formaldehyde Test Wako
(Made by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) can be exemplified.

【００２３】本方法及び分解剤では、上述したA菌及びB
菌のいずれか一方のみを用いても良いし、A菌及びB菌の
両者を用いてもよい。すなわち、本方法及び分解剤は、
A菌自体を用いてホルムアルデヒドを分解するか、A菌の
培養液を用いてホルムアルデヒドを分解するか、A菌の
無細胞抽出液を用いてホルムアルデヒドを分解するか、
B菌自体を用いてホルムアルデヒドを分解するか、B菌の
培養液を用いてホルムアルデヒドを分解するか、A菌及
びB菌を用いてホルムアルデヒドを分解するか、A菌の培
養液及びB菌自体を用いてホルムアルデヒドを分解する
か、A菌自体及びB菌の培養液を用いてホルムアルデヒド
を分解するか、A菌の培養液及びB菌の培養液を用いてホ
ルムアルデヒドを分解する。In the present method and the degrading agent, the above-mentioned bacteria A and B are used.
Only one of the bacteria may be used, or both bacteria A and B may be used. That is, the method and the decomposing agent are
Decomposes formaldehyde using A bacteria themselves, decomposes formaldehyde using culture liquid of A bacteria, or decomposes formaldehyde using cell-free extract of A bacteria,
Decompose formaldehyde using B bacterium itself, decompose formaldehyde using culture medium of B bacterium, decompose formaldehyde using bacterium A and bacterium B, culture medium of bacterium A and bacterium B itself Formaldehyde is decomposed, or formaldehyde is decomposed using the culture broth of A bacterium itself and B bacterium, or formaldehyde is decomposed using the culture broth of A bacterium and the culture broth of B bacterium.

【００２４】特に、本方法では、A菌及び/又はその培養
液とB菌及び/又はその培養液とを用いることが好まし
い。A菌及び/又はその培養液とB菌及び/又はその培養液
とを用いることによって、A菌又はB菌を単独で用いた場
合と比較して、ホルムアルデヒドを迅速に分解すること
ができる。具体的に、A菌及び/又はその培養液とB菌及
び/又はその培養液とを混合して用いた場合には、それ
ぞれの菌及び/又はその培養液を単独で用いた場合と比
較して、分解速度を1.2〜2.8倍にまで向上させることが
できる。In the present method, it is particularly preferable to use the A bacterium and / or the culture solution thereof and the B bacterium and / or the culture solution thereof. By using the A bacterium and / or the culture solution thereof and the B bacterium and / or the culture solution thereof, formaldehyde can be decomposed more rapidly than in the case of using the A bacterium or the B bacterium alone. Specifically, in the case of using the A bacterium and / or the culture solution thereof and the B bacterium and / or the culture solution thereof in combination, compared with the case of using the respective bacterium and / or the culture solution thereof alone. Therefore, the decomposition rate can be improved to 1.2 to 2.8 times.

【００２５】ここで、A菌及びB菌は、所定の培地中で培
養された後、集菌され、その後、乾燥処理が施されたも
のであってもよい。すなわち、A菌及びB菌は、乾燥処理
によって乾燥物とされた後、水等の溶媒で復元すること
によって、ホルムアルデヒド分解活性を示す。乾燥処理
としては、例えば、凍結乾燥処理、減圧乾燥処理、通風
乾燥処理及び噴霧乾燥処理等を挙げることができる。た
だし、乾燥処理を施すことによって、A菌及びB菌におけ
るホルムアルデヒド分解活性に影響がある場合には、各
種条件を適宜調整して行う。Here, the bacteria A and B may be those which have been cultured in a predetermined medium, collected, and then dried. That is, bacteria A and B show formaldehyde-degrading activity by being dried by a drying treatment and then reconstituted with a solvent such as water. Examples of the drying treatment include freeze drying treatment, reduced pressure drying treatment, ventilation drying treatment and spray drying treatment. However, if the formaldehyde-degrading activity in bacteria A and B is affected by the drying treatment, various conditions are adjusted as appropriate.

【００２６】分解剤は、上述したA菌やB菌以外の他の成
分を含んでいてもよい。他の成分としては、特に限定さ
れないが、界面活性剤、pH安定剤、菌体並びに酵素安定
化剤、固定化剤及び通常ホルムアルデヒド分解剤として
使用されている各種成分を使用することができる。The degrading agent may contain components other than the above-mentioned bacteria A and bacteria B. Other components are not particularly limited, and various components that are commonly used as surfactants, pH stabilizers, bacterial cells, enzyme stabilizers, immobilizing agents, and formaldehyde decomposing agents can be used.

【００２７】本方法及び分解剤はホルムアルデヒドを分
解することができる。本方法及び分解剤は、限定されな
いが、例えば、大気中、海水中、水中、土壌中、固体表
面等に含まれるホルムアルデヒドを分解することができ
る。また、本方法及び分解剤によれば、上述したような
各種環境に含まれるアセトアルデヒドも、ホルムアルデ
ヒドとともに分解することができる。すなわち、本方法
及び分解剤によれば、ホルムアルデヒド及びアセトアル
デヒドにより汚染された環境を浄化することができる。The method and decomposer are capable of decomposing formaldehyde. The present method and decomposing agent are not limited, but can decompose formaldehyde contained in, for example, the atmosphere, seawater, water, soil, solid surface and the like. Further, according to this method and the decomposing agent, acetaldehyde contained in various environments as described above can be decomposed together with formaldehyde. That is, according to the present method and the decomposing agent, the environment contaminated with formaldehyde and acetaldehyde can be purified.

【００２８】特に、本方法及び分解剤においては、A菌
及び/又はB菌を培養しながらホルムアルデヒドを分解す
ることもできるし、一方、A菌及び/又はB菌の培養後に
ホルムアルデヒドを分解することもできる。言い換える
と、A菌及びB菌は、増殖過程においてホルムアルデヒド
の存在が必須ではなく、ホルムアルデヒドの非存在下で
増殖することができ、増殖後においてもホルムアルデヒ
ドを分解することができる。従って、培養後に得られた
A菌及び/又はB菌、或いはこれらの培養液を用いて、ホ
ルムアルデヒドを分解することができる。In particular, in the present method and decomposing agent, formaldehyde can be decomposed while culturing A bacterium and / or B bacterium, while decomposing formaldehyde after culturing A bacterium and / or B bacterium. You can also In other words, bacteria A and B do not require the presence of formaldehyde in the growth process, can grow in the absence of formaldehyde, and can decompose formaldehyde even after growth. Therefore, obtained after culturing
Formaldehyde can be decomposed using bacteria A and / or bacteria B or a culture medium thereof.

【００２９】A菌を含む分解剤を、ホルムアルデヒドを
含む液相と混合・接触させる際には、２０〜４０℃の温
度範囲であることが好ましく、２５〜３５℃の温度範囲
であることがより好ましい。A菌を含む分解剤を、ホル
ムアルデヒドを含む液相と混合・接触させる際には、pH
が５．０〜９．０であることが好ましく、pHが５．５〜
７．２であることがより好ましい。A菌を含む分解剤
を、ホルムアルデヒドを含む液相と混合・接触させる際
には、好気的条件下であっても嫌気的条件下であっても
よい。When the decomposing agent containing the bacterium A is mixed and contacted with the liquid phase containing formaldehyde, the temperature range is preferably 20 to 40 ° C., more preferably 25 to 35 ° C. preferable. When mixing and contacting the decomposing agent containing bacteria A with the liquid phase containing formaldehyde,
Is preferably 5.0 to 9.0, and the pH is 5.5 to
It is more preferably 7.2. When the decomposing agent containing bacterium A is mixed and brought into contact with the liquid phase containing formaldehyde, it may be aerobic or anaerobic.

【００３０】B菌を含む分解剤を、ホルムアルデヒドを
含む液相と混合・接触させる際には、１０〜４０℃の温
度範囲であることが好ましく、２５〜３５℃の温度範囲
であることがより好ましい。B菌を含む分解剤を、ホル
ムアルデヒドを含む液相と混合・接触させる際には、pH
が５．０〜９．０であることが好ましく、pHが５．５〜
７．５であることがより好ましい。B菌を含む分解剤
を、ホルムアルデヒドを含む液相と混合・接触させる際
には、好気的条件下であっても嫌気的条件下であっても
よい。When the decomposing agent containing the bacterium B is mixed and brought into contact with the liquid phase containing formaldehyde, the temperature range is preferably 10 to 40 ° C, more preferably 25 to 35 ° C. preferable. When mixing and contacting the decomposing agent containing bacteria B with the liquid phase containing formaldehyde,
Is preferably 5.0 to 9.0, and the pH is 5.5 to
It is more preferably 7.5. When the decomposing agent containing the bacterium B is mixed and brought into contact with the liquid phase containing formaldehyde, it may be aerobic or anaerobic.

【００３１】A菌及びB菌をともに含む分解剤を、ホルム
アルデヒドを含む液相と混合・接触させる際には、２０
〜４０℃の温度範囲であることが好ましく、２５〜３５
℃の温度範囲であることがより好ましい。A菌及びB菌を
ともに含む分解剤を、ホルムアルデヒドを含む液相と混
合・接触させる際には、pHが５．０〜９．０であること
が好ましく、pHが５．５〜７．２であることがより好ま
しい。A菌及びB菌をともに含む分解剤を、ホルムアルデ
ヒドを含む液相と混合・接触させる際には、好気的条件
下であっても嫌気的条件下であってもよい。When the decomposing agent containing both bacteria A and B is mixed and brought into contact with a liquid phase containing formaldehyde, 20
It is preferably in the temperature range of -40 ° C, preferably 25-35.
More preferably, it is in the temperature range of ° C. When the decomposer containing both bacteria A and B is mixed and brought into contact with the liquid phase containing formaldehyde, the pH is preferably 5.0 to 9.0, and the pH is 5.5 to 7.2. Is more preferable. When the decomposing agent containing both bacteria A and B is mixed and brought into contact with the liquid phase containing formaldehyde, it may be under aerobic or anaerobic conditions.

【００３２】また、本方法及び分解剤により分解可能な
ホルムアルデヒドの濃度としては、特に限定されない
が、A菌の増殖を伴って処理する場合には３０００ppm以
下であることが好ましく、１０００ppm以下であること
がより好ましい。A菌の増殖を伴わない場合には、菌体
濃度を０．１重量％以上、好ましくは０．５重量％以上
とした分解剤を用いて、ホルムアルデヒドの濃度を３０
００ppm以下とすることが好ましい。The concentration of formaldehyde that can be decomposed by this method and the decomposing agent is not particularly limited, but when treated with the growth of bacterium A, it is preferably 3000 ppm or less, and 1000 ppm or less. Is more preferable. When the bacterium A is not proliferated, the concentration of formaldehyde is 30% by using a decomposing agent having a bacterial cell concentration of 0.1% by weight or more, preferably 0.5% by weight or more.
It is preferable to set it to 00 ppm or less.

【００３３】さらに、本方法及び分解剤により分解可能
なアセトアルデヒドの濃度としては、特に限定されない
が、A菌の増殖を伴って処理する場合には２０００ppm以
下であることが好ましく、１０００ppm以下であること
がより好ましい。A菌の増殖を伴わない場合には、菌体
濃度を０．１重量％以上、好ましくは０．５重量％以上
とした分解剤を用いて、アセトアルデヒドの濃度を１０
００ppm以下とすることが好ましい。Further, the concentration of acetaldehyde decomposable by this method and the decomposing agent is not particularly limited, but when treated with the growth of bacterium A, it is preferably 2000 ppm or less, and 1000 ppm or less. Is more preferable. When the bacterium A does not grow, the acetaldehyde concentration is adjusted to 10% by using a degrading agent having a microbial cell concentration of 0.1% by weight or more, preferably 0.5% by weight or more.
It is preferable to set it to 00 ppm or less.

【００３４】一方、本方法及び分解剤により分解可能な
ホルムアルデヒドの濃度としては、特に限定されない
が、B菌の増殖を伴って処理する場合には３０００ppm以
下であることが好ましく、１０００ppm以下であること
がより好ましい。B菌の増殖を伴わない場合には、菌体
濃度を０．１重量％以上、好ましくは０．５重量％以上
とした分解剤を用いて、ホルムアルデヒドの濃度を３０
００ppm以下とすることが好ましい。On the other hand, the concentration of formaldehyde that can be decomposed by the present method and the decomposing agent is not particularly limited, but when treated with the growth of B bacterium, it is preferably 3000 ppm or less, and 1000 ppm or less. Is more preferable. In the case of not accommodating B bacteria, a formaldehyde concentration of 30% is used by using a decomposing agent having a bacterial cell concentration of 0.1% by weight or more, preferably 0.5% by weight or more.
It is preferable to set it to 00 ppm or less.

【００３５】さらに、本方法及び分解剤により分解可能
なアセトアルデヒドの濃度としては、特に限定されない
が、B菌の増殖を伴って処理する場合には２０００ppm以
下であることが好ましく、１０００ppm以下であること
がより好ましい。B菌の増殖を伴わない場合には、菌体
濃度を０．１重量％以上、好ましくは０．５重量％以上
とした分解剤を用いて、アセトアルデヒドの濃度を１０
００ppm以下とすることが好ましい。Further, the concentration of acetaldehyde decomposable by this method and the decomposing agent is not particularly limited, but when treated with the growth of B bacterium, it is preferably 2000 ppm or less, and 1000 ppm or less. Is more preferable. When the bacterium B is not proliferated, the concentration of acetaldehyde is set to 10 by using a degrading agent having a cell concentration of 0.1% by weight or more, preferably 0.5% by weight or more.
It is preferable to set it to 00 ppm or less.

【００３６】特に、大気中に含まれるホルムアルデヒド
を分解する際には、分解剤を換気手段に配し、当該換気
手段を介して大気の換気を行う。これにより、大気中に
含まれるホルムアルデヒドを分解することができる。ま
た、分解剤としては、いわゆるスプレー容器に充填して
もよい。分解剤をスプレー容器に充填した場合には、ホ
ルムアルデヒドを含む大気中或いは固体表面等に対して
スプレー容器から分解剤を噴霧することによって、当該
ホルムアルデヒドを分解することができる。In particular, when decomposing formaldehyde contained in the atmosphere, a decomposing agent is placed in the ventilation means, and the atmosphere is ventilated through the ventilation means. As a result, formaldehyde contained in the atmosphere can be decomposed. The decomposing agent may be filled in a so-called spray container. When the decomposing agent is filled in the spray container, the formaldehyde can be decomposed by spraying the decomposing agent from the spray container onto the atmosphere containing formaldehyde or a solid surface.

【００３７】[0037]

【実施例】以下、本発明に係るホルムアルデヒドの分解
方法及び分解剤について実施例を用いて詳細に説明す
る。しかしながら、本発明の技術的範囲は、以下の実施
例に限定されるものではない。EXAMPLES The method for decomposing formaldehyde and the decomposing agent according to the present invention will be described in detail below with reference to examples. However, the technical scope of the present invention is not limited to the following examples.

【００３８】実施例１<ホルムアルデヒド分解微生物の
分離> 市販製品のバイオ耕太（有限会社ミツワ・コーポレーシ
ョン社製）を含む5検体を分離源（下記に列挙する）と
してホルムアルデヒド分解菌のスクリーニングを行っ
た。 (分離源) A:バイオ耕太（消臭用）1 B:バイオ耕太（消臭用）2 C:バイオ耕太（消臭用）3 D:バイオ耕太（消臭用）4 E:バイオ耕太（消臭用）5 Example 1 <of formaldehyde-degrading microorganisms
Separation> Screening for formaldehyde-degrading bacteria was performed using 5 samples including the commercially available product Bio-Kota (manufactured by Mitsuwa Corporation) as a separation source (listed below). (Separation source) A: Bio Kota (for deodorization) 1 B: Bio Kota (for deodorization) 2 C: Bio Kota (for deodorization) 3 D: Bio Kota (for deodorization) 4 E: Bio Kota (for deodorization) (For odor) 5

【００３９】先ず、予めオートクレーブ殺菌したYPD液
体培地(DIFCO製)にホルムアルデヒドを50〜2000ppmにな
るように添加し、スクリーニング用の培地を調整した。
この培地に分離源液を10％加えて30℃で106時間振とう
しながら、集積培養を行った(一次集積培養)。次に、ホ
ルムアルデヒドの最大濃度試験区で生育したものから採
取した培養液を、同濃度のホルムアルデヒドを含むYPD
寒天培地に塗布し、32℃で静置培養を行った。YPD寒天培
地に出現したコロニーから釣菌し、100ppmのホルムアル
デヒドを加えたYPD液体培地で再度振とう培養した(二次
集積培養)。次に、同濃度のホルムアルデヒドを含むYPD
寒天培地に培養液を塗布し、32℃で静置培養を行い、出
現したコロニーから純粋分離した。５種類の分離源(A,
B,C,D,E)から一次集積培養を行い、ホルムアルデヒド分
解菌のスクリーニングを行った結果を表1に示す。First, formaldehyde was added to a YPD liquid medium (manufactured by DIFCO) that had been sterilized in advance by autoclaving so as to have a concentration of 50 to 2000 ppm to prepare a medium for screening.
An enrichment culture was carried out by adding 10% of the separated source solution to this medium and shaking at 30 ° C. for 106 hours (primary enrichment culture). Next, the culture solution collected from the one grown in the maximum formaldehyde concentration test area was added to YPD containing the same concentration of formaldehyde.
It was applied to an agar medium and statically cultured at 32 ° C. Bacteria were picked from the colonies that appeared on the YPD agar medium, and shake-cultured again in the YPD liquid medium containing 100 ppm formaldehyde (secondary enrichment culture). Next, YPD containing the same concentration of formaldehyde
The culture solution was applied to an agar medium and static culture was performed at 32 ° C., and pure colonies were separated from the appeared colonies. 5 separate sources (A,
Table 1 shows the results of screening for formaldehyde-degrading bacteria by carrying out primary enrichment culture from B, C, D, E).

【００４０】[0040]

【表１】 [Table 1]

【００４１】表１から判るように、ホルムアルデヒド濃
度50ppmの場合、全ての試験区で微生物の生育が認めら
れた。Aではバクテリア様の菌が認められたが生育は良
くなかった。一方、BとDでは250ppmまで生育した菌が認
められたが、培養液の色が異なるため互いに異なる菌で
ある可能性が考えられた。そこで、５種類の分離源で最
大生育が認められたそれぞれの試験区から5菌株分離し
た。これら5菌株についてホルムアルデヒド分解性を調
べるために50,100,250,500,1OOO,2000ppmの各濃度でホ
ルムアルデヒドを含むYPD液体培地を用いて振とう培養
を行った。その結果を図1（a）〜（f）に示す。図１
（a）は培地中に含まれるホルムアルデヒド濃度が2000p
pmの場合であり、図１（b）は培地中に含まれるホルム
アルデヒド濃度が1000ppmの場合であり、図１（c）は培
地中に含まれるホルムアルデヒド濃度が500ppmの場合で
あり、図１（d）は培地中に含まれるホルムアルデヒド
濃度が250ppmの場合であり、図１（e）は培地中に含ま
れるホルムアルデヒド濃度が100ppmの場合であり、図１
（f）は培地中に含まれるホルムアルデヒド濃度が50ppm
の場合である。As can be seen from Table 1, when the formaldehyde concentration was 50 ppm, the growth of microorganisms was observed in all the test plots. In A, bacteria-like bacteria were observed, but the growth was not good. On the other hand, in B and D, bacteria that grew up to 250 ppm were observed, but it was possible that they were different bacteria because the culture solutions had different colors. Therefore, 5 strains were isolated from each of the test plots in which the maximum growth was observed with 5 types of separation sources. These 5 strains were shake-cultured using YPD liquid medium containing formaldehyde at respective concentrations of 50, 100, 250, 500, 100, and 2000 ppm in order to investigate formaldehyde degradability. The results are shown in Figures 1 (a) to (f). Figure 1
(A) Formaldehyde concentration in the medium is 2000p
FIG. 1 (b) shows the case where the formaldehyde concentration contained in the medium is 1000 ppm, FIG. 1 (c) shows the case where the formaldehyde concentration contained in the medium is 500 ppm, and FIG. ) Is the case where the formaldehyde concentration contained in the medium is 250 ppm, and FIG. 1 (e) is the case where the formaldehyde concentration contained in the medium is 100 ppm.
(F) Formaldehyde concentration in the medium is 50ppm
Is the case.

【００４２】図１から、5菌株はいずれもホルムアルデ
ヒド耐性及び分解作用を有すると考えられるが、特に、
B,D菌についてはその能力が高いことが示唆された。ま
た、ホルムアルデヒド濃度500ppm以上では何れの菌株に
おいてもホルムアルデヒドの分解はほとんど認められな
いが、ホルムアルデヒド濃度250ppm以下ではB菌及びD菌
による分解が顕著であり、特に50ppmでは表1のデータと
同様に全ての菌株が分解することが判明した。From FIG. 1, it is considered that all of the 5 strains have formaldehyde resistance and degrading activity.
It was suggested that the ability of B and D bacteria was high. Further, almost no formaldehyde decomposition was observed in any strain at a formaldehyde concentration of 500 ppm or higher, but at a formaldehyde concentration of 250 ppm or less, decomposition by B bacteria and D bacteria was remarkable, and especially at 50 ppm, all were similar to the data in Table 1. Was found to decompose.

【００４３】これらの結果から、分解能に優れたB菌及
びD菌とタイプの異なるA菌とついて以降の試験を行っ
た。なお、A菌は、16S rDNAの塩基配列を用いた帰属分
類群試験の結果、マイコバクテリウム属に属する菌（My
cobacterium sp.）であることが判明し、独立行政法人
産業技術総合研究所 特許生物寄託センターに2002年1
月28日付けで寄託番号FERM P- 18690として寄託した。
また、B菌は、微生物同定試験の結果、フサリウム・オ
キシスポラム（Fusarium oxysporum）であることが判明
し、独立行政法人産業技術総合研究所 特許生物寄託セ
ンターに2001年8月24日付けで寄託番号FERM P- 18483と
して寄託した。なお、D菌は、微生物同定試験の結果、
ホルムアルデヒド分解活性を有することが知られている
フサリウム・ソラニ（Fusarium solani）であることが
判明した（特開平11-19686号公報を参照）。From these results, the following tests were carried out on B bacteria and D bacteria having excellent resolution and A bacteria having a different type. As a result of the belonging taxon test using the nucleotide sequence of 16S rDNA, bacterium A is a bacterium belonging to the genus Mycobacterium (Mycobacteria).
Cobacterium sp.) was founded by the National Institute of Advanced Industrial Science and Technology, Patent Biological Depository Center in 2002.
Deposited under the deposit number FERM P-18690 on the 28th of March.
As a result of a microorganism identification test, B bacterium was found to be Fusarium oxysporum, and was deposited at the Patent Organism Depositary Center, National Institute of Advanced Industrial Science and Technology, on August 24, 2001, with a deposit number of FERM. Deposited as P-18483. In addition, the D bacterium, as a result of the microorganism identification test,
It was found to be Fusarium solani, which is known to have formaldehyde-degrading activity (see JP-A-11-19686).

【００４４】なお、A菌の16S rDNAの塩基配列は以下の
ように決定した。すなわち、先ず、A菌を普通寒天培地
（日水製薬、日本）からなる培地中で、30℃で72時間培
養した。培養したA菌を遠心分離によって集菌し、ゲノ
ムDNAの抽出にはInstaGeneMatrix（BIO-RAD,Californi
a,USA）を使用した。抽出したゲノムDNA約0.1μgを鋳型
とし一対のプライマーを用いてPCRに供し、約500bpの断
片を増幅した。PCRの条件は、95℃で30秒、60℃で30秒
及び72℃で45秒からなるステップを30サイクル行い、最
後に72℃で600秒のステップとし、PCRで得られた約500b
pの断片をシークエンス解析に供した。PCR産物の精製、
サイクルシーエンスにはMicroSeq^TM500 16SrDNA Bacter
ial Sequencing Kit(Applied Biosystems, U.S.)を使用
した。ゲノムDNA抽出からサイクルシーエンスまでの操
作に関してはApplied Biosystems社のプロトコール（P/
N4308132 Rev.A）に従った。サーマルサイクラーおよび
DNAシーケンサーにはGeneAmp PCR System9600, ABI PRI
SM 377 DNA Sequencer(Applied Biosystems,Californi
a,USA)を使用した。その結果、約500bpの断片、すなわ
ちA菌の16S rDNAの塩基配列は配列番号１の塩基配列と
なっていた。配列番号１の塩基配列に基づいて、BLAST
を用いた相同性検索、近隣結合法を用いたところ、既知
の配列と一致するものはなく、A菌は全く新規な微生物
であると結論づけられた。The nucleotide sequence of 16S rDNA of bacterium A was determined as follows. That is, first, the bacterium A was cultured in a medium consisting of ordinary agar medium (Nissui Pharmaceutical, Japan) at 30 ° C. for 72 hours. The cultured A bacterium was collected by centrifugation and the genomic DNA was extracted using InstaGeneMatrix (BIO-RAD, Californi
a, USA) was used. About 0.1 μg of the extracted genomic DNA was used as a template and subjected to PCR using a pair of primers to amplify a fragment of about 500 bp. The PCR conditions were 30 cycles of 95 ° C for 30 seconds, 60 ° C for 30 seconds and 72 ° C for 45 seconds for 30 cycles, and finally a step of 72 ° C for 600 seconds.
The p fragment was subjected to sequence analysis. Purification of PCR products,
MicroSeq ^™ 500 16S rDNA Bacter for cycle sequence
ial Sequencing Kit (Applied Biosystems, US) was used. For operations from genomic DNA extraction to cycle sequence, Applied Biosystems protocol (P /
N4308132 Rev.A). Thermal cycler and
GeneAmp PCR System9600, ABI PRI for DNA sequencer
SM 377 DNA Sequencer (Applied Biosystems, Californi
a, USA) was used. As a result, the fragment of about 500 bp, that is, the base sequence of 16S rDNA of bacterium A was the base sequence of SEQ ID NO: 1. BLAST based on the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1
By using homology search and neighbor-joining method, it was concluded that bacterium A is a completely novel microorganism because there was no match with the known sequence.

【００４５】実施例２<ホルムアルデヒドの分析> 実施例１で分離した３種類のホルムアルデヒド分解菌
（A,B,D菌）によるホルムアルデヒド分解能力を評価す
るため、培地中に残存するホルムアルデヒド及び活性測
定液中のホルムアルデヒドを定量的に測定する分析法を
検討した。 Example 2 <Analysis of formaldehyde> In order to evaluate the formaldehyde degrading ability of the three types of formaldehyde degrading bacteria (A, B, D bacteria) isolated in Example 1, formaldehyde remaining in the medium and an activity measuring solution. An analytical method for quantitatively measuring formaldehyde in the water was investigated.

【００４６】市販されているホルムアルデヒドテストワ
コー(和光純薬工業株式会社製)を用い、正規の方法と1/
2スケールで行う方法とでホルムアルデヒド量の測定結
果に違いがあるか否かを検討した。なお、ホルムアルデ
ヒドテストワコーは、高感度で測定可能な酵素法であっ
て、サンプルの吸光度を測定することにより当該サンプ
ルに含まれるホルムアルデヒド量を測定することができ
る。吸光度の測定は、分光光度計V-560(日本分光工業株
式会社製)を用いて行った。結果を図2に示す。Using a commercially available formaldehyde test Wako (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.)
It was examined whether there is a difference in the measurement results of formaldehyde amount between the method using two scales. The formaldehyde test Wako is an enzyme method capable of measuring with high sensitivity, and the amount of formaldehyde contained in the sample can be measured by measuring the absorbance of the sample. The absorbance was measured with a spectrophotometer V-560 (manufactured by JASCO Corporation). The result is shown in figure 2.

【００４７】図２より、正規の方法と1/2のスケールで
行う方法とでは、測定結果に大差がないことが判明し
た。ホルムアルデヒドテストワコーを用いた場合、反応
液量を縮小しても測定可能である判断した。したがっ
て、ホルムアルデヒドテストワコーによるホルムアルデ
ヒド量の測定に際しては、試料1ml、アルカリ液1ml、発
色液1mlを加え撹絆後20〜25℃に15分放置し、その後、
酸化液1mlを加えて発色させ、上記分光光度計を用いて5
50nmの吸光度を測定することとした。これによりサンプ
ル中に含まれるホルムアルデヒド濃度がlppm前後の低濃
度であっても、ホルムアルデヒドの定量が可能となる。From FIG. 2, it was found that there is no great difference in the measurement results between the normal method and the method using the 1/2 scale. When formaldehyde test Wako was used, it was judged that measurement was possible even if the reaction liquid volume was reduced. Therefore, when measuring the amount of formaldehyde by the formaldehyde test Wako, add 1 ml of sample, 1 ml of alkaline solution, 1 ml of color-developing solution, stir at 20-25 ° C for 15 minutes after stirring, and then
Add 1 ml of the oxidizing solution to develop color, and use the spectrophotometer described above to
It was decided to measure the absorbance at 50 nm. This makes it possible to quantify formaldehyde even if the concentration of formaldehyde contained in the sample is as low as around 1 ppm.

【００４８】実施例３<培養条件とホルムアルデヒド分
解活性> 実施例１で分離した３種類のホルムアルデヒド分解菌
（A,B,D菌）の生育とホルムアルデヒド分解能力に及ぼ
す培養条件を検討した。具体的には、培養液の初発pHの
影響、培養温度の影響、培地中のホルムアルデヒド濃度
の影響及び培地組成の影響（炭素源並びに窒素源及び無
機塩類）について検討した。 Example 3 <Culture conditions and formaldehyde content
Deactivation> The culture conditions on the growth and formaldehyde degrading ability of the three types of formaldehyde degrading bacteria (A, B, D bacteria) isolated in Example 1 were examined. Specifically, the effects of the initial pH of the culture medium, the culture temperature, the formaldehyde concentration in the medium and the medium composition (carbon source, nitrogen source and inorganic salts) were examined.

【００４９】先ず、一次培養として、l00ppmのホルムア
ルデヒドを含むYPD液体培地10mlにスラントから1白金耳
の菌体を接種し、32℃で2日間振とう培養した。本培養
としては、各試験区の設定条件以外は、250ppmのホルム
アルデヒドを含むYPD液体培地100mlに一次培養液を0.5m
l接種し、32℃で振とう培養することを基本とした。ま
た、菌体を接種しないYPD液体培地をコントロールとし
て試験区と同様の条件で操作した。ホルムアルデヒドの
分解率は、コントロールのホルムアルデヒド濃度と試験
区のホルムアルデヒド濃度の差として算出した。First, as a primary culture, 10 ml of YPD liquid medium containing 100 ppm of formaldehyde was inoculated with one platinum loop of cells from a slant, and cultured at 32 ° C. for 2 days with shaking. For the main culture, except for the conditions set for each test section, 0.5 m of the primary culture solution was added to 100 ml of YPD liquid medium containing 250 ppm formaldehyde.
It was basically inoculated and cultured with shaking at 32 ° C. In addition, YPD liquid medium not inoculated with the cells was used as a control and operated under the same conditions as in the test section. The formaldehyde decomposition rate was calculated as the difference between the control formaldehyde concentration and the formaldehyde concentration in the test plot.

【００５０】<初発pHの影響>初発pHの影響を検討するた
めに、上述した本培養に際して、YPD液体培地に250ppm
のホルムアルデヒドを添加した後、1%塩酸又は0.1N水酸
化カリウム溶液で所定のpH（5.5，6.0，6.5，7.0，7.
5，8.0）に調整したものを準備した。そして、各種pHに
調整したYPD液体培地を用いて上述したように本培養を
行い、各試験区におけるホルムアルデヒドの分解率を算
出した。結果を図3（a）〜（d）に示す。なお、図３
（a）はA菌について初発pHを検討した結果を示し、図３
（b）はB菌について初発pHを検討した結果を示し、図３
（c）はD菌について初発pHを検討した結果を示し、図３
（d）はB菌について初発pHを更に高pH域まで検討した結
果を示している。<Influence of initial pH> To examine the effect of initial pH, 250 ppm was added to YPD liquid medium during the above-mentioned main culture.
After adding formaldehyde of 1% hydrochloric acid or 0.1N potassium hydroxide solution to a predetermined pH (5.5, 6.0, 6.5, 7.0, 7.
5 and 8.0) were prepared. Then, the main culture was performed as described above using the YPD liquid medium adjusted to various pHs, and the decomposition rate of formaldehyde in each test section was calculated. The results are shown in Figures 3 (a) to (d). Note that FIG.
(A) shows the result of examining the initial pH of the bacterium A, and FIG.
(B) shows the results of examining the initial pH of B bacterium, and FIG.
(C) shows the result of examining the initial pH of the D bacterium, and FIG.
(D) shows the results of studying the initial pH of B bacteria up to a higher pH range.

【００５１】図３から、A、D菌とも培地の初発pHによっ
てホルムアルデヒドの分解性は影響を受け、pHが中性付
近で高い活性を示すことが判った。一方、B菌は初発pH
が5.5〜7.5ではほとんどホルムアルデヒドの分解活性は
影響を受けないので、さらにpHの高い領域での影響を調
べた。この結果、B菌については、pHが5.5から8.5まで
の間で高い分解活性を示すことが明らかとなった。From FIG. 3, it was found that the degradability of formaldehyde was influenced by the initial pH of the medium in both A and D bacteria, and showed high activity at around neutral pH. On the other hand, B bacterium has an initial pH of
However, the decomposition activity of formaldehyde was hardly affected at 5.5 to 7.5, so the effect was investigated in the higher pH range. As a result, it was revealed that the B bacterium has a high decomposition activity at a pH of 5.5 to 8.5.

【００５２】<培養温度の影響>培養温度の影響を検討す
るために、上述した本培養の培養温度を、温度無調整の
室温(25〜30℃)、32℃、35℃の3試験区とした。そし
て、上述したように本培養を行い、各試験区におけるホ
ルムアルデヒドの分解率を算出した。結果を図4（a）〜
（c）に示す。図４（a）はA菌について培養温度の影響
を検討した結果を示し、図４（b）はB菌について培養温
度の影響を検討した結果を示し、図４（c）はD菌につい
て培養温度の影響を検討した結果を示している。<Influence of culture temperature> In order to examine the influence of the culture temperature, the culture temperature of the main culture described above was divided into three test groups of room temperature (25 to 30 ° C.), 32 ° C. and 35 ° C. without temperature adjustment. did. Then, main culture was performed as described above, and the decomposition rate of formaldehyde in each test section was calculated. The results are shown in Figure 4 (a) ~
Shown in (c). FIG. 4 (a) shows the results of examining the influence of the culture temperature on the A bacterium, FIG. 4 (b) shows the results of examining the influence of the culture temperature on the B bacterium, and FIG. 4 (c) shows the culture of the D bacterium. The result of examining the influence of temperature is shown.

【００５３】図４から、A、D菌は培養温度32℃付近にお
いて高いホルムアルデヒド分解活性を示した。また、B
菌においては、培養温度によるホルムアルデヒド分解活
性の差はほとんどみられなかった。From FIG. 4, bacteria A and D showed high formaldehyde-degrading activity at a culture temperature of around 32 ° C. Also, B
In the fungus, there was almost no difference in formaldehyde-degrading activity depending on the culture temperature.

【００５４】<ホルムアルデヒド濃度の影響>培地中のホ
ルムアルデヒド濃度の影響を検討するために、上述した
本培養においてホルムアルデヒド濃度を250ppm又は500p
pmとした試験区を準備し、上述したように本培養を行っ
た。そして、各試験区におけるpHの経時変化とホルムア
ルデヒドの分解率とを算出した結果を、図5（a）〜
（d）に示す。図５（a）は250ppmのホルムアルデヒド濃
度における培養時間とpH値との関係を示し、図５（b）
は250ppmのホルムアルデヒド濃度における培養時間と分
解率との関係を示し、図５（c）は500ppmのホルムアル
デヒド濃度における培養時間とpH値との関係を示し、図
５（d）は500ppmのホルムアルデヒド濃度における培養
時間と分解率との関係を示している。<Effect of Formaldehyde Concentration> In order to investigate the effect of formaldehyde concentration in the medium, the formaldehyde concentration in the above-mentioned main culture was 250 ppm or 500 p
A test section designated as pm was prepared, and main culture was performed as described above. Then, the results of calculating the time-dependent change in pH and the decomposition rate of formaldehyde in each test section are shown in FIG.
Shown in (d). Fig. 5 (a) shows the relationship between culture time and pH value at a formaldehyde concentration of 250ppm, and Fig. 5 (b)
Shows the relationship between the incubation time and the decomposition rate at a formaldehyde concentration of 250 ppm, FIG. 5 (c) shows the relationship between the incubation time at a formaldehyde concentration of 500 ppm and the pH value, and FIG. 5 (d) shows the relationship between the formaldehyde concentration of 500 ppm. The relationship between the culture time and the decomposition rate is shown.

【００５５】図５から、ホルムアルデヒド濃度が250ppm
の場合、B菌とD菌は培養後24時間後からpHの低下ととも
にホルムアルデヒドの分解率が上昇し、48時間以後は約
90%でほぼ一定となることが判った。一方、ホルムアル
デヒド濃度が500ppmの場合、B菌及びD菌によるホルムア
ルデヒドの分解は70時間以降に始まることが判った。ま
た、A菌については、ホルムアルデヒド濃度が250ppm、5
00ppmいずれの濃度でも分解の開始が遅いことが判っ
た。特に、ホルムアルデヒド濃度が250ppmでは、A菌に
ついて120時間後にほぼ80%の分解率を示したが、500ppm
では分解率は低い結果であった。培地のpHはホルムアル
デヒドの分解が進むにつれて低下し、以後上昇する経過
をたどり最終的にはpH8以上となった。このことは、ホル
ムアルデヒド濃度が高いと培養初期に生育阻害を受ける
ためであると考えられる。From FIG. 5, the formaldehyde concentration is 250 ppm.
In the case of bacteria B and D, the decomposition rate of formaldehyde increased with decreasing pH from 24 hours after culturing, and after 48 hours,
It was found to be almost constant at 90%. On the other hand, when the formaldehyde concentration was 500 ppm, it was found that the decomposition of formaldehyde by bacteria B and D started after 70 hours. In addition, regarding form A, the formaldehyde concentration was 250 ppm, 5
It was found that the decomposition started slowly at any concentration of 00 ppm. Particularly, when the formaldehyde concentration was 250 ppm, the decomposition rate of bacteria A was about 80% after 120 hours, but it was 500 ppm.
The decomposition rate was low. The pH of the medium decreased as the decomposition of formaldehyde proceeded, and after that, it eventually reached pH 8 or higher. It is considered that this is because when the formaldehyde concentration is high, growth inhibition occurs at the early stage of culture.

【００５６】<培地組成濃度の影響(炭素源及び窒素源)>
培地組成濃度の影響(炭素源及び窒素源)を検討するた
め、上述した本培養に使用する培地の組成を適宜変更し
た。具体的には、炭素源としてグルコース濃度を1、2又
は4%とし、窒素源としてポリペプトン濃度を1、2又は4%
とした全ての組み合わせで培地を調整し、B菌及びD菌に
ついて本培養した。グルコース濃度及びポリペプトン濃
度の組み合わせと試験区との関係を表２に示す。<Influence of medium composition concentration (carbon source and nitrogen source)>
In order to examine the influence of the medium composition concentration (carbon source and nitrogen source), the composition of the medium used for the above-mentioned main culture was appropriately changed. Specifically, the glucose concentration as a carbon source is 1, 2 or 4%, and the polypeptone concentration is 1, 2 or 4% as a nitrogen source.
The medium was adjusted with all the combinations described above, and main culture was carried out for bacteria B and D. Table 2 shows the relationship between the combination of glucose concentration and polypeptone concentration and the test plots.

【００５７】[0057]

【表２】 [Table 2]

【００５８】なお、表２において、B1〜B9はB菌につい
ての試験区を意味し、D1〜D9はD菌についての試験区を
意味している。それぞれの試験区において、培養液10ml
あたりに含まれる菌体重量を測定した結果を図６に示
す。図６から、培地中のポリペプトン含量は菌体重量と
の関連が認められB菌及びD菌ともポリペプトン含量が多
いほど菌体重量が多くなることが判った。一方、グルコ
ース濃度4%でB菌及びD菌とも生育阻害が認められたが、
1%と2%ではB菌及びD菌とも大きな差は認められなかっ
た。結果としてB菌及びD菌とも2%グルコース及び4%ポリ
ペプトンの培養組成の場合、菌体重量が最も多くなるこ
とが判った。In Table 2, B1 to B9 mean test groups for B bacterium, and D1 to D9 mean test groups for D bacterium. 10 ml of culture solution in each test area
The results of measuring the weight of the bacterial cells contained in the area are shown in FIG. From FIG. 6, it was found that the content of polypeptone in the medium was related to the cell weight, and that the bacterial cell weight increased in both B and D strains as the polypeptone content increased. On the other hand, growth inhibition was observed with both B and D bacteria at a glucose concentration of 4%,
No significant difference was observed between B and D at 1% and 2%. As a result, it was found that both bacterial strains B and D had the highest cell weight when the culture composition was 2% glucose and 4% polypeptone.

【００５９】また、それぞれの試験区において、ホルム
アルデヒドの分解率を算出した結果を、図７に示す。図
７から、B菌及びD菌ともグルコース濃度が高くなるほど
分解率は低くなる傾向があり、また、ポリペプトン濃度
は2%または4%で高い分解率を示した。結果として、1%グ
ルコース及び2%ポリペプトンの培地組成である場合、最
も高い分解率を示すことが判った。さらに、図６及び７
を比較した場合、B菌及びD菌ともにおいて、菌体重量と
ホルムアルデヒド分解率との間の相関関係が無いことが
判った。FIG. 7 shows the results of calculating the decomposition rate of formaldehyde in each test section. From FIG. 7, the decomposition rate tends to decrease as the glucose concentration increases in both B and D bacteria, and the polypeptone concentration shows a high decomposition rate at 2% or 4%. As a result, it was found that the highest decomposition rate was obtained when the medium composition was 1% glucose and 2% polypeptone. Further, FIGS.
It was found that there was no correlation between the bacterial cell weight and the formaldehyde decomposition rate in both B strains and D strains.

【００６０】<培地組成の影響(無機塩類)>培地組成の影
響(無機塩類)を検討するために、上述した本培養に際し
てカリウム(K)及びマグネシウム(Mg)濃度を適宜変更し
た培地を準備した。具体的には、カリウム(K)及びマグ
ネシウム(Mg)濃度を表３に示すように調整した試験区を
設定し、上述したように本培養を行った。<Effect of Medium Composition (Inorganic Salts)> In order to examine the effect of medium composition (inorganic salts), a medium was prepared in which the potassium (K) and magnesium (Mg) concentrations were appropriately changed during the main culture described above. . Specifically, a test plot was prepared in which the potassium (K) and magnesium (Mg) concentrations were adjusted as shown in Table 3, and main culture was performed as described above.

【００６１】[0061]

【表３】 [Table 3]

【００６２】各試験区におけるホルムアルデヒドの分解
率を算出した結果を図８（a）及び（b）に示す。図８
（a）及び（b）の横軸において、例えば、カリウム濃度
0.5%の培地でA菌を培養した場合を「AK0.5」と表記して
いる。図８（a）から、A菌はK濃度によって影響を受
け、K濃度0.5%よりK濃度1%の試験区が高い分解活性を示
すことが判った。また、A菌については、Mg濃度による
影響は認められなかった。さらに、A菌については、KとM
gを混合しても活性の上昇は認められなかった。このこ
とは、A菌については、両無機塩が相互に影響しあって
いると考えられる。一方、図８（b）に示すように、B菌
については、ホルムアルデヒド分解活性はK、Mg両塩類
の影響をほとんど受けないことがわかった。D菌につい
てはMgの影響はほとんどみられないものの、K濃度が高
くなると活性が弱くなる傾向が認められた。The results of calculating the decomposition rate of formaldehyde in each test section are shown in FIGS. 8 (a) and 8 (b). Figure 8
On the horizontal axes of (a) and (b), for example, potassium concentration
The case where the bacterium A was cultured in a 0.5% medium is described as "AK0.5". From FIG. 8 (a), it was found that the bacterium A was affected by the K concentration, and the test plots with the K concentration of 1% showed higher decomposition activity than the K concentration of 0.5%. In addition, the effect of Mg concentration was not observed for A bacteria. Furthermore, for A, K and M
No increase in activity was observed even when g was mixed. This suggests that, with regard to bacterium A, both inorganic salts influence each other. On the other hand, as shown in FIG. 8 (b), it was found that the formaldehyde-degrading activity of B bacterium was hardly affected by both K and Mg salts. Although the effect of Mg was scarcely observed on the D bacterium, the activity tended to be weakened as the K concentration increased.

【００６３】実施例４<A菌におけるホルムアルデヒド分
解特性> A菌におけるホルムアルデヒドの分解特性について、A菌
の菌体重量とホルムアルデヒド濃度との関係を以下のよ
うに検討した。先ず、ホルムアルデヒドを100ppm、500p
pm、1000ppm、2000ppm又は3000ppmの濃度で含む5種類の
YPD液体培地を準備した。なお、YPD液体培地は、ホルム
アルデヒドを除く組成として蒸留水1リットルあたり、
酵母エキス10g、ペプトン20g、グルコース20g及びリン
酸水素二カリウム1gを含むものとし、pH7.0に調整した
後、121℃で15分間蒸気殺菌を行って得ることができ
る。 Example 4 <Formaldehyde content in bacterium A
Solution characteristics> Regarding the decomposition characteristics of formaldehyde in the bacterium A, the relationship between the cell weight of the bacterium A and the formaldehyde concentration was examined as follows. First, formaldehyde is 100ppm, 500p
5 kinds of pm, 1000ppm, 2000ppm or 3000ppm concentration
A YPD liquid medium was prepared. In addition, YPD liquid medium, as a composition excluding formaldehyde per 1 liter of distilled water,
It can be obtained by containing 10 g of yeast extract, 20 g of peptone, 20 g of glucose and 1 g of dipotassium hydrogen phosphate, adjusting the pH to 7.0, and then steam sterilizing at 121 ° C. for 15 minutes.

【００６４】次に、5種類のYPD液体培地それぞれに、前
培養を行ったA菌を0.01重量％、0.05重量％、0.1重量％
又は0.5重量％となるように接種した。A菌を接種した20
種類のYPD液体培地を、30℃で2日間振とう培養した。培
養後、実施例２に記載した方法に準じて、各YPD液体培
地中に含まれるホルムアルデヒド濃度を計測し、各YPD
液体培地におけるホルムアルデヒドの分解活性を評価し
た。結果を表４に示す。Next, in each of the 5 types of YPD liquid media, the pre-cultured bacteria A were 0.01% by weight, 0.05% by weight, and 0.1% by weight.
Alternatively, it was inoculated so that the concentration would be 0.5% by weight. 20 inoculated with fungus A
The YPD liquid medium of each type was shake-cultured at 30 ° C. for 2 days. After culturing, according to the method described in Example 2, the formaldehyde concentration contained in each YPD liquid medium was measured, and each YPD liquid medium was measured.
The decomposition activity of formaldehyde in the liquid medium was evaluated. The results are shown in Table 4.

【００６５】[0065]

【表４】 [Table 4]

【００６６】なお、表４において、90％以上分解してい
た場合を「◎」とし、70％以上90％未満分解していた場
合を「○」とし、50％以上70％未満分解していた場合を
「△」とし、50％未満分解していた場合を「×」として
表現した。表４から判るように、A菌におけるホルムア
ルデヒドを分解特性について、A菌の菌体重量とホルム
アルデヒド濃度との間に相関関係があることが判った。
具体的には、A菌の菌体濃度が0.1重量％以上である場
合、濃度1000ppmのホルムアルデヒドを分解することが
できた。また、A菌の菌体濃度が0.1重量％以上である場
合、濃度500ppmのホルムアルデヒドを非常によく分解す
ることができた。さらに、A菌の菌体濃度が0.1重量％以
上である場合、濃度2000ppmのホルムアルデヒドをわず
かに分解することができた。In Table 4, when 90% or more was decomposed, "⊚" was given, and when 70% or more and less than 90% was decomposed, "○" was given, and 50% or more and less than 70% was decomposed. The case was expressed as “△”, and the case where less than 50% was decomposed was expressed as “x”. As can be seen from Table 4, there was a correlation between the bacterial cell weight of A bacterium and the formaldehyde concentration with respect to the formaldehyde degrading characteristics of A bacterium.
Specifically, formaldehyde having a concentration of 1000 ppm could be decomposed when the bacterial cell concentration of the bacterium A was 0.1% by weight or more. Further, when the bacterial cell concentration of A bacterium was 0.1% by weight or more, formaldehyde having a concentration of 500 ppm could be decomposed very well. Furthermore, formaldehyde with a concentration of 2000 ppm could be slightly decomposed when the bacterial cell concentration of the bacterium A was 0.1% by weight or more.

【００６７】実施例５<A菌及びB菌におけるホルムアル
デヒド分解特性> A菌及びB菌におけるホルムアルデヒドを分解特性につい
て、前培養の際にホルムアルデヒドを添加した場合と添
加しない場合とでホルムアルデヒド分解活性にどのよう
な影響があるのかを以下のように検討した。先ず、実施
例４に記載したYPD液体培地20mlに対して、濃度100ppm
のホルムアルデヒドを添加したものと、ホルムアルデヒ
ドを添加しないものを準備した。次に、各YPD液体培地
にA菌又はB菌を接種して、30℃で２日間振とう培養し
た。 Example 5 <Formal in bacteria A and B
Dehydration Degradation Properties> Regarding the degradation properties of formaldehyde in bacteria A and B, the effects of formaldehyde addition and non-addition during pre-culture on formaldehyde decomposition activity were examined as follows. . First, the concentration of 100 ppm was added to 20 ml of the YPD liquid medium described in Example 4.
Formaldehyde was added and those without formaldehyde were prepared. Next, each YPD liquid medium was inoculated with bacteria A or B and cultured at 30 ° C. for 2 days with shaking.

【００６８】次に、培養後のYPD液体培地を3000rpmで１
５分間遠心分離し、菌体画分と培養上清画分とを得た。
次に、菌体画分及び培養上清画分に対して、ホルムアル
デヒドを100ppmとなるようにそれぞれ添加し、30℃で２
４時間反応させた。実施例２に記載した方法に準じて、
菌体画分及び培養上清画分に含まれるホルムアルデヒド
濃度を計測し、菌体画分及び培養上清画分におけるホル
ムアルデヒドの分解活性を評価した。結果を表５に示
す。Next, the YPD liquid medium after culturing was subjected to 1 rpm at 3000 rpm.
After centrifugation for 5 minutes, a bacterial cell fraction and a culture supernatant fraction were obtained.
Next, formaldehyde was added to each of the bacterial cell fraction and the culture supernatant fraction so as to be 100 ppm, and the mixture was added at 30 ° C. for 2 hours.
The reaction was carried out for 4 hours. According to the method described in Example 2,
The formaldehyde concentration contained in the bacterial cell fraction and the culture supernatant fraction was measured to evaluate the formaldehyde degrading activity in the bacterial cell fraction and the culture supernatant fraction. The results are shown in Table 5.

【００６９】[0069]

【表５】 [Table 5]

【００７０】なお、表５において、対照とはA菌及びB菌
いずれも接種しないサンプルである。また、分解率は、
ホルムアルデヒド濃度について減少割合を次式で算出し
たものである。 （対照濃度−反応後濃度）×100／対照濃度＝分解率In Table 5, the control is a sample inoculated with neither bacteria A nor bacteria B. The decomposition rate is
The reduction ratio of formaldehyde concentration is calculated by the following formula. (Control concentration-concentration after reaction) x 100 / control concentration = decomposition rate

【００７１】表５から明らかなように、前培養における
ホルムアルデヒドの存在又は非存在に拘わらず、A菌及
びB菌いずれにおいても、菌体画分及び培養上清画分と
もに高い分解率を示していた。このことから、従来のホ
ルムアルデヒド分解菌と異なり、A菌及びB菌においては
前培養に際してホルムアルデヒドを必須としないことが
明らかとなった。As is clear from Table 5, regardless of the presence or absence of formaldehyde in the preculture, the bacterial cell fraction and the culture supernatant fraction both showed high decomposition rates in both A and B bacteria. It was From this, it was clarified that formaldehyde is not essential in the preculture in the bacteria A and B unlike the conventional formaldehyde-degrading bacteria.

【００７２】実施例６<混合培養におけるホルムアルデ
ヒド分解性> 実施例３の<ホルムアルデヒド濃度の影響>の結果を示す
図５から、A菌はB及びD菌に比べてホルムアルデヒド分
解性が弱いことが明らかになった。そこで、これらの菌
を混合培養した場合にホルムアルデヒド分解性に対して
どのような効果があるかを検討した。 Example 6 <Formalde in mixed culture
FIG. 5 showing the results of <effect of formaldehyde concentration > in Example 3 revealed that Strain A was weaker in formaldehyde degradation than Strains B and D. Therefore, it was examined what kind of effect the formaldehyde-degrading effect would have when these bacteria were mixed and cultured.

【００７３】A、B及びD菌それぞれを単独で培養又は所
定の組み合わせで混合して培養した際のホルムアルデヒ
ド分解性を算出した結果を図９に示す。図９より、B又
はD菌にA菌を混合したAB試験区及びAD試験区では、A、B
及びD菌をそれぞれ単独で培養した場合に比べて、ホル
ムアルデヒドの分解が早まる現象が認められた。同様
に、A、B及びD菌の3種を混合した場合もホルムアルデヒ
ドの分解時間が短縮化する傾向がみられた。このことか
ら、A、B及びD菌を適宜組み合わせた混合培養は、ホル
ムアルデヒド分解性を高める手段として有効であった。
また、図９に示した結果を、A菌単独で培養したときの
分解率、B菌単独で培養したときの分解率及びA菌とB菌
を混合して培養したときの分解率として、表６に示す。FIG. 9 shows the results of calculation of formaldehyde degradability when the bacteria A, B and D were cultured alone or mixed in a predetermined combination and cultured. From FIG. 9, in the AB test section and the AD test section in which the A or B bacterium was mixed with the B or D bacterium, A and B
It was confirmed that the decomposition of formaldehyde was accelerated as compared with the case where the bacteria D and D were individually cultured. Similarly, when three kinds of bacteria A, B and D were mixed, the decomposition time of formaldehyde tended to be shortened. From this, the mixed culture in which the bacteria A, B and D were appropriately combined was effective as a means for increasing the formaldehyde degradability.
In addition, the results shown in FIG. 9 are shown as a decomposition rate when the bacterium A is cultivated alone, a decomposition rate when the bacterium B is cultivated alone, and a decomposition rate when the bacterium A and the bacterium B are mixed and cultured. 6 shows.

【００７４】[0074]

【表６】 [Table 6]

【００７５】なお、表６において、対照とはA菌及びB菌
いずれも接種しないサンプルである。また、分解率は、
ホルムアルデヒド濃度について減少割合を次式で算出し
たものである。 （培養前濃度−培養後濃度）×100／培養前濃度＝分解
率 表６から明らかなように、A菌とB菌とを混合して培養し
た場合には、それぞれの菌を単独で培養した場合と比較
して、ホルムアルデヒドの分解活性が飛躍的に向上して
いる。このことから、ホルムアルデヒドを分解する際に
は、A菌及びB菌を混合したものを使用することが好まし
いことが明らかとなった。In Table 6, the control is a sample inoculated with neither bacteria A nor bacteria B. The decomposition rate is
The reduction ratio of formaldehyde concentration is calculated by the following formula. (Concentration before culturing-concentration after culturing) × 100 / concentration before culturing = decomposition rate As is clear from Table 6, when the bacterium A and the bacterium B were mixed and cultured, each bacterium was cultured alone. Compared with the case, the decomposition activity of formaldehyde is dramatically improved. From this, it was revealed that it is preferable to use a mixture of bacteria A and B when decomposing formaldehyde.

【００７６】実施例７<ホルムアルデヒドの酵素的分解
活性の確認> 単離したA、B及びD菌によるホルムアルデヒド分解が、
ホルムアルデヒドの菌体に対する物理的吸着現象なの
か、或いは酵素的な反応により行われるのかを検討し
た。具体的には、2日培養後の培養液を3000rpm 10分間
遠心分離して菌体を回収し、その後、洗浄処理を施した
後、オートクレーブ殺菌したものと未殺菌の菌体とを、
それぞれ100ppmのホルムアルデヒド液と35℃ 6時間反応
させるホルムアルデヒド分解反応に供した。 Example 7 <Enzymatic degradation of formaldehyde
Confirmation of activity> Degradation of formaldehyde by isolated A, B and D bacteria
It was examined whether it is a physical adsorption phenomenon of formaldehyde to bacterial cells or an enzymatic reaction. Specifically, the culture medium after 2 days of culturing was centrifuged at 3000 rpm for 10 minutes to collect the bacterial cells, which was then subjected to a washing treatment, followed by autoclave-sterilized and unsterilized bacterial cells,
Each was subjected to a formaldehyde decomposition reaction by reacting with a 100 ppm formaldehyde solution at 35 ° C for 6 hours.

【００７７】結果を図１０に示す。図１０において、
「生A菌体」は未殺菌のA菌を意味し、「滅菌A菌体」は
オートクレーブ殺菌したA菌を意味する。同様に、「生B
菌体」は未殺菌のB菌を意味し、「滅菌B菌体」はオート
クレーブ殺菌したB菌を意味し「生D菌体」は未殺菌のD
菌を意味し、「滅菌D菌体」はオートクレーブ殺菌したD
菌を意味する。また、「生No.13沈殿」はバイオ耕太発
酵液の沈殿菌体を意味し、「滅菌No.13」は、オートク
レーブ殺菌したバイオ耕太発酵液の沈殿菌体を意味す
る。The results are shown in FIG. In FIG.
"Live A bacterium" means unsterilized A bacterium, and "sterile A bacterium" means autoclave sterilized A bacterium. Similarly, "raw B
"Bacterium" means unsterilized B bacterium, "sterilized B bacterium" means B sterilized by autoclave, and "live D bacterium" is unsterilized D
Means bacteria, "sterile D cells" is autoclaved D
Means fungus. In addition, "raw No. 13 precipitate" means the precipitated bacterial cells of the bio-fermented fermented broth, and "sterilization No. 13" means the precipitated bacterial cells of the bio-fermented fermented sterilized by autoclave.

【００７８】図１０から、いずれの菌体も未殺菌のもの
はホルムアルデヒドの分解活性を示したが、オートクレ
ーブ殺菌したものについては、殆ど分解活性が失活して
いることが判った。このことから、ホルムアルデヒド分
解は、物理的吸着現象ではなく、酵素的な反応により行
われているものと考えられた。From FIG. 10, it was found that the unsterilized bacterial cells showed formaldehyde degrading activity, but the autoclave-sterilized cells had almost no degrading activity. From this, it was considered that the decomposition of formaldehyde was carried out by an enzymatic reaction rather than a physical adsorption phenomenon.

【００７９】実施例８<菌体及び菌体外酵素によるホル
ムアルデヒドの分解> 実施例１で分離した３種類のホルムアルデヒド分解菌
（A,B,D菌）におけるホルムアルデヒド分解活性が菌体
内に存在するのか、菌体外に存在するのかを検証した。
具体的には、B菌について培養液を3000rpm 15分間遠心
分離し、菌体と上清とに分け、ホルムアルデヒド濃度50
ppmで35℃44時間反応させ、それぞれの画分におけるホ
ルムアルデヒド分解活性を調べた。その結果を図１１に
示す。図１１より、菌体及び上清の両方にホルムアルデ
ヒド分解活性が認められることが判った。このことか
ら、ホルムアルデヒド分解が酵素的反応により行われて
いるものと結論づけることができる。 Example 8 <Form by bacterial cells and extracellular enzyme
Decomposition of Mualdehyde> It was verified whether the formaldehyde-degrading activity of the three types of formaldehyde-degrading bacteria (A, B, D bacteria) separated in Example 1 was present inside the cells or outside the cells.
Specifically, for B bacteria, the culture solution was centrifuged at 3000 rpm for 15 minutes to separate the cells and the supernatant, and the formaldehyde concentration was adjusted to 50%.
The reaction was conducted at 35 ° C for 44 hours at ppm, and the formaldehyde degrading activity in each fraction was examined. The result is shown in FIG. From FIG. 11, it was found that formaldehyde degrading activity was observed in both the bacterial cells and the supernatant. From this, it can be concluded that formaldehyde decomposition is carried out by an enzymatic reaction.

【００８０】実施例９<ホルムアルデヒド分解酵素の性
質について> 実施例１で分離した３種類のホルムアルデヒド分解菌
（A,B,D菌）において、ホルムアルデヒド分解に寄与す
る酵素がホルムアルデヒドにより誘導されるか否かを以
下のように検証した。 Example 9 <Formaldehyde degrading enzyme properties
Regarding Quality> In the three types of formaldehyde-degrading bacteria (A, B, D bacteria) isolated in Example 1, it was verified as follows whether or not the enzyme contributing to formaldehyde decomposition is induced by formaldehyde.

【００８１】B及びD菌について、250ppmのホルムアルデ
ヒド濃度で培養した添加区とホルムアルデヒドを添加し
ない無添加区とを準備し、それぞれの菌体についてホル
ムアルデヒド濃度100ppmで35℃24時間反応させ、それぞ
れの試験区におけるホルムアルデヒドの分解率を測定し
た。また、A菌については、100ppmのホルムアルデヒド
を添加した添加区と無添加区とを準備し、菌体及び培養
ろ液について、ホルムアルデヒド濃度50ppmで35℃24時
間反応させ、ホルムアルデヒド分解率を測定した。B及
びD菌についての結果を図１２(a)に示し、A菌について
の結果を図１２(b)に示す。For B and D bacteria, an addition group cultured at a formaldehyde concentration of 250 ppm and a no addition formaldehyde-containing group were prepared, and each cell was reacted at a formaldehyde concentration of 100 ppm for 24 hours at 35 ° C. The decomposition rate of formaldehyde in the plot was measured. In addition, with respect to the bacterium A, an addition group and a non-addition group to which 100 ppm of formaldehyde was added were prepared, and the cells and the culture filtrate were reacted at formaldehyde concentration of 50 ppm at 35 ° C. for 24 hours, and the formaldehyde decomposition rate was measured. The results for the B and D bacteria are shown in FIG. 12 (a), and the results for the A bacteria are shown in FIG. 12 (b).

【００８２】図１２(a)から、B及びD菌については、両
方とも無添加区が添加区よりも高いホルムアルデヒドの
分解率を示すことが判った。図１２（b）から、A菌につ
いては、培養ろ液よりも菌体が高い活性を示したが、ホ
ルムアルデヒド添加によるホルムアルデヒド分解率の差
はあまりみられないことが判った。以上のことから、ホ
ルムアルデヒド分解に寄与する酵素は、ホルムアルデヒ
ドにより誘導されるものではないことが示唆された。ま
た、ホルムアルデヒドを添加しない培地では、菌の増殖
が活発になるため、菌体数の増加に伴いホルムアルデヒ
ド分解率が高かったものと考えられる。From FIG. 12 (a), it was found that, with regard to both B and D bacteria, the non-addition group exhibited a higher decomposition rate of formaldehyde than the addition group. From FIG. 12 (b), it was found that, with regard to the bacterium A, the bacterial cells showed higher activity than the culture filtrate, but there was not much difference in the formaldehyde decomposition rate due to the addition of formaldehyde. From the above, it was suggested that the enzyme that contributes to formaldehyde decomposition is not induced by formaldehyde. In addition, it is considered that the formaldehyde decomposition rate was high as the number of bacterial cells increased because the growth of the bacteria became active in the medium containing no formaldehyde.

【００８３】実施例１０<気相中ホルムアルデヒドの吸
着・分解試験> 吸着試験法の検討 衣類などに含まれるホルムアルデヒドを測定するための
吸着試験が可能かどうかを確認するためにデシケーター
による気相ホルムアルデヒドの吸着試験を行った。すな
わち、先ず、ポリカーボネート製デシケーターの底部に
吸収液として蒸留水または「バイオ耕太」200mlを入れ、目
皿の上にろ紙(No.2. 11cm)を敷き、ろ紙上に2000ppmのホ
ルムアルデヒド溶液O.2mlを滴下し、ろ紙上でホルムア
ルデヒドを気化させた。一定時間静置した後、デシケー
ター内で気化したホルムアルデヒド蒸気のうち吸収液に
吸収された量を測定し、吸着率を算出した。吸着率は、
吸収液のホルムアルデヒド濃度を測定して、予め添加し
た理論値に対する割合で算出した。試験はそれぞれ2反
復で行った。結果を図１３に示す。図１３において、
「DW1」及び「DW2」は蒸留水を意味し、「KOTA1」及び
「KOTA2」はバイオ耕太を意味している。 Example 10 <Formaldehyde absorption in gas phase
Adsorption / decomposition test> Examination of adsorption test method In order to confirm whether or not an adsorption test for measuring formaldehyde contained in clothing is possible, a gas phase formaldehyde adsorption test with a desiccator was performed. That is, first, put 200 ml of distilled water or "Bio-Kota" as an absorbing liquid on the bottom of a polycarbonate desiccator, spread a filter paper (No. 2.11 cm) on the eye plate, and formaldehyde solution O.2 ml of 2000 ppm on the filter paper. Was dropped and formaldehyde was vaporized on the filter paper. After standing for a certain period of time, the amount of formaldehyde vapor vaporized in the desiccator absorbed by the absorbing solution was measured, and the adsorption rate was calculated. The adsorption rate is
The formaldehyde concentration of the absorption liquid was measured and calculated as a ratio to the theoretical value added in advance. The test was done in duplicate each. The results are shown in Fig. 13. In FIG.
"DW1" and "DW2" mean distilled water, and "KOTA1" and "KOTA2" mean biota.

【００８４】図１３に示すように、蒸留水と「バイオ耕
太」における、ホルムアルデヒドの吸着率はそれぞれ80%
以上の値を示していることが判った。この結果から、デ
シケーター内のホルムアルデヒドを殆どロス無く吸収液
に吸着させることができ、本方法により気相中のホルム
アルデヒドの分解試験を行いうることが確認された。As shown in FIG. 13, the adsorption rates of formaldehyde in distilled water and "Bio-Kota" were 80%, respectively.
It was found that the above values are shown. From this result, it was confirmed that the formaldehyde in the desiccator can be adsorbed to the absorbing liquid with almost no loss, and the decomposition test of formaldehyde in the gas phase can be performed by this method.

【００８５】気相中ホルムアルデヒドの吸着及び分解試
験 A、B及びD菌の培養ろ液を上記吸着試験法における吸収
液として使用した以外は、当該吸着試験法に準じて試験
を行った。上記吸着試験法において7日間放置した後、
吸収液（A、B及びD菌の培養ろ液）のホルムアルデヒド
濃度を測定した。本試験において、ホルムアルデヒドの
分解率は、培養ろ液中のホルムアルデヒド残存率として
算出した。培養ろ液中のホルムアルデヒド残存率は、蒸
留水に残留するホルムアルデヒドに対する培養ろ液中の
ホルムアルデヒドの相対値として算出した。結果を図１
４に示す。 Adsorption and decomposition test of formaldehyde in gas phase
Tests were carried out in accordance with the adsorption test method except that the culture filtrates of the test A, B, and D bacteria were used as the absorption solution in the above adsorption test method. After leaving for 7 days in the above adsorption test method,
The formaldehyde concentration of the absorption liquid (culture filtrate of bacteria A, B and D) was measured. In this test, the decomposition rate of formaldehyde was calculated as the residual rate of formaldehyde in the culture filtrate. The residual rate of formaldehyde in the culture filtrate was calculated as the relative value of formaldehyde in the culture filtrate with respect to the formaldehyde remaining in distilled water. The result is shown in Figure 1.
4 shows.

【００８６】図１４より、A、B及びD菌の全ての培養ろ
液において、気相中のホルムアルデヒドを吸着して分解
できることが明らかとなった。したがって、A、B及びD
菌の全ての培養ろ液を用いて屋内外の環境中のホルムア
ルデヒド除去することができる。また、A、B及びD菌の
培養ろ液では、ホルムアルデヒド残存率に殆ど差はない
ものの、D菌の培養ろ液が最も低いホルムアルデヒド残
存率を示していた。このことから、気相中のホルムアル
デヒドに対する分解活性は、D菌が最も高いことが判っ
た。また、図１４に示した、A菌の培養ろ液を吸収液と
したときの分解率、B菌の培養ろ液を吸収液としたとき
の分解率及び蒸留水を吸着液としたときの分解率をまと
めて表７に示す。From FIG. 14, it was clarified that formaldehyde in the gas phase can be adsorbed and decomposed in all the culture filtrates of bacteria A, B and D. Therefore, A, B and D
All bacterial culture filtrates can be used to remove formaldehyde in indoor and outdoor environments. In addition, although the formaldehyde residual ratios of the culture filtrates of the A, B and D bacteria were almost the same, the formaldehyde residual ratio of the culture filtrate of the D bacteria was the lowest. From this result, it was found that the bacterium D has the highest decomposition activity for formaldehyde in the gas phase. In addition, as shown in FIG. 14, the decomposition rate when the culture filtrate of A bacterium was used as an absorption liquid, the decomposition rate when the culture filtrate of B bacterium was used as an absorption liquid, and the decomposition rate when distilled water was used as an adsorption liquid. The rates are summarized in Table 7.

【００８７】[0087]

【表７】 [Table 7]

【００８８】なお、表７において、対照とは蒸留水を吸
収液としたサンプルである。また、分解率は、ホルムア
ルデヒド添加量に対する減少割合を次式で算出したもの
である。 （対照濃度−吸着後濃度）×100／対照濃度＝分解率 表７から明らかなように、蒸留水を吸収液とした場合に
はホルムアルデヒドをほぼ100％吸収しながらも全く分
解されずに残存しているのに対して、A菌の培養ろ液又
はB菌の培養ろ液を吸収液とした場合には、気相中のホ
ルムアルデヒドがほとんど残存していなかった。このこ
とから、A菌の培養ろ液及びB菌の培養ろ液を用いて屋内
外の環境中のホルムアルデヒド除去することができる。In Table 7, the control is a sample using distilled water as an absorbing solution. In addition, the decomposition rate is calculated by the following formula with respect to the reduction rate with respect to the added amount of formaldehyde. (Control concentration-concentration after adsorption) × 100 / control concentration = decomposition rate As is clear from Table 7, when distilled water was used as the absorption liquid, it absorbed almost 100% of formaldehyde and remained without being decomposed. On the other hand, when the culture filtrate of the A bacterium or the culture filtrate of the B bacterium was used as the absorption liquid, almost no formaldehyde in the gas phase remained. From this, it is possible to remove formaldehyde in the indoor and outdoor environments by using the culture filtrate of A bacterium and the culture filtrate of B bacterium.

【００８９】実施例１１<海水及び緩衝液中でのホルム
アルデヒド分解活性> 実施例１で分離した３種類のホルムアルデヒド分解菌
（A,B,D菌）のホルムアルデヒドの分解が海水や緩衝液
において機能するか否かを検討した。３種の菌の培養液
から遠心分離により菌体と培養ろ液とに分離し、菌体と
培養ろ液とをそれぞれ用いて海水中および緩衝液中でホ
ルムアルデヒドの分解反応を行い、ホルムアルデヒドの
分解活性を調べた。結果を図１５に示す。また、図１５
に示した、海水中に含まれるホルムアルデヒドに対する
分解率を、A菌及びB菌についてまとめて表８に示す。 Example 11 <Form in seawater and buffer
Aldehyde decomposition activity> It was examined whether or not the decomposition of formaldehyde of the three types of formaldehyde-decomposing bacteria (A, B and D bacteria) separated in Example 1 works in seawater or a buffer solution. The bacterial cells and the culture filtrate were separated from the culture solutions of the three kinds of bacteria by centrifugation, and the bacterial cells and the culture filtrate were used to perform a decomposition reaction of formaldehyde in seawater and a buffer solution to decompose formaldehyde. The activity was examined. The results are shown in Fig. 15. In addition, FIG.
Table 8 shows the decomposition rates of formaldehyde contained in seawater shown in Table 1 for bacteria A and B.

【００９０】[0090]

【表８】 [Table 8]

【００９１】なお、表８において、対照とはA菌及びB菌
いずれも接種していないサンプルである。また、分解率
は、海水中に含まれるホルムアルデヒドの減少割合を次
式で算出したものである。 （対照濃度−反応後濃度）×100／対照濃度＝分解率 図１５及び表８より、各菌とも緩衝液中よりも海水中に
おけるホルムアルデヒド分解活性が高く、また、菌体よ
りも培養ろ液におけるホルムアルデヒド分解活性が高い
ことが明らかとなった。このことから、A菌の培養ろ液
又はB菌の培養ろ液を用いて、海洋を汚染したホルムア
ルデヒドを分解することができる。なお、本試験におい
て、菌の種類による分解活性の差はあまり認められなか
った。In Table 8, the control is a sample inoculated with neither bacteria A nor bacteria B. In addition, the decomposition rate is calculated by the following formula with respect to the reduction rate of formaldehyde contained in seawater. (Control concentration-concentration after reaction) × 100 / control concentration = decomposition rate As shown in FIG. 15 and Table 8, each of the bacteria has a higher formaldehyde-degrading activity in seawater than in the buffer solution, and in the culture filtrate as compared to the bacterial cells. It was revealed that the formaldehyde decomposition activity was high. From this fact, the formaldehyde contaminating the ocean can be decomposed by using the culture filtrate of the A bacterium or the culture filtrate of the B bacterium. In this test, there was not much difference in the decomposition activity depending on the type of bacteria.

【００９２】実施例１２<乾燥処理によるホルムアルデ
ヒド分解活性の影響> 実施例１で分離した３種類のホルムアルデヒド分解菌
（A,B,D菌）を乾燥菌体としたときのホルムアルデヒド
の分解活性を検討した。A、B及びD菌について一昼夜凍
結乾燥したものと、乾燥処理を施さないものとについて
ホルムアルデヒドの分解活性を調べた。具体的には、YP
D液体培地を用いて各菌を30℃で2日間培養し、一昼夜凍
結乾燥処理を施した。そして、当該処理で得られた各乾
燥菌体に、ホルムアルデヒド濃度50ppmの水溶液を加え
て復元し、30℃で24時間反応させ、当該水溶液中のホル
ムアルデヒド濃度を測定した。結果を図１６に示す。ま
た、図１６に示した、A菌及びB菌について、乾燥前の分
解率及び乾燥・復元後の分解率をまとめて表９に示す。 Example 12 <Formaldehyde by drying treatment
Effect of Hydodegrading Activity> The formaldehyde degrading activity was examined when the three types of formaldehyde-degrading bacteria (A, B, D bacteria) isolated in Example 1 were used as dry cells. The A, B and D bacteria were freeze-dried all day and night, and the formaldehyde degrading activity was examined for those which were not dried. Specifically, YP
Each bacterium was cultured in D liquid medium at 30 ° C. for 2 days, and freeze-dried overnight. Then, an aqueous solution having a formaldehyde concentration of 50 ppm was added to each of the dried cells obtained by the treatment to restore the mixture, and the mixture was reacted at 30 ° C. for 24 hours to measure the formaldehyde concentration in the aqueous solution. The results are shown in Fig. 16. In addition, Table 9 shows the degradation rates before drying and the degradation rates after drying and reconstitution for bacteria A and B shown in FIG. 16 together.

【００９３】[0093]

【表９】 [Table 9]

【００９４】なお、表９において、対照とはA菌及びB菌
いずれも接種していないサンプルである。また、分解率
は、ホルムアルデヒド濃度について減少割合を次式で算
出したものである。 （対照濃度−反応後濃度）×100／対照濃度＝分解率 図１６及び表９より、A菌及びB菌で凍結乾燥後において
もホルムアルデヒド分解活性を有することが明らかとな
った。また、乾燥処理を施した全ての菌で乾燥前の活性
の1/4〜1/5となることが明らかとなった。このように乾
燥処理により菌のホルムアルデヒド分解活性が影響を受
けることが明らかとなった。したがって、乾燥条件を適
宜検討することによって、所望のホルムアルデヒド分解
活性に調節することができる。In Table 9, the control is a sample inoculated with neither A nor B bacteria. Further, the decomposition rate is calculated by the following formula for the reduction rate of formaldehyde concentration. (Control concentration-concentration after reaction) × 100 / control concentration = decomposition rate From FIG. 16 and Table 9, it was revealed that the bacteria A and B have formaldehyde decomposition activity even after freeze-drying. In addition, it was clarified that the activity was 1/4 to 1/5 of the activity before drying in all the dried bacteria. Thus, it was revealed that the formaldehyde-degrading activity of the bacteria was affected by the drying treatment. Therefore, it is possible to adjust the desired formaldehyde decomposition activity by appropriately examining the drying conditions.

【００９５】実施例１３<アセトアルデヒド分解活性の
検討> 実施例１で分離した３種類のホルムアルデヒド分解菌
（A,B,D菌）のホルムアルデヒドとアセトアルデヒドと
に対する同時分解活性を検討した。具体的には、ホルム
アルデヒド及びアセトアルデヒドをそれぞれ250ppmとな
るよう添加して1日培養した。これらの培養ろ液に含ま
れるホルムアルデヒド、メタノール、アセトアルデヒド
及びエタノールをガスクロマトグラフ(GC)で分析した。
なお、ガスクロマトグラフは、島津製作所社製のGC-14A
を用いた。結果を表１０に示す。 Example 13 <of acetaldehyde decomposition activity
Examination> Simultaneous degradation activity against formaldehyde and acetaldehyde of the three types of formaldehyde-degrading bacteria (A, B, D bacteria) separated in Example 1 was examined. Specifically, formaldehyde and acetaldehyde were added at 250 ppm each, and the cells were cultured for 1 day. Formaldehyde, methanol, acetaldehyde and ethanol contained in these culture filtrates were analyzed by gas chromatography (GC).
The gas chromatograph is GC-14A manufactured by Shimadzu Corporation.
Was used. The results are shown in Table 10.

【００９６】[0096]

【表１０】 [Table 10]

【００９７】表１０から明らかなように、コントロール
との比較から全ての菌において、ホルムアルデヒド分解
活性とともにアセトアルデヒド分解活性を示すことが明
らかとなった。なお、ホルムアルデヒドについては、検
出感度が低いためガスクロマトグラフでは検出されない
が、分解の結果として生ずるメタノールを検出すること
によってホルムアルデヒドの分解活性を評価することが
できる。アセトアルデヒドについては、ガスクロマトグ
ラフによって直接検出することもできるが、分解の結果
として生ずるエタノールを検出することによってアセト
アルデヒドの分解活性を評価することもできる。As is clear from Table 10, it was revealed from comparison with the control that all bacteria exhibit acetaldehyde degrading activity as well as formaldehyde degrading activity. Although formaldehyde is not detected by gas chromatography because of its low detection sensitivity, formaldehyde decomposition activity can be evaluated by detecting methanol generated as a result of decomposition. Although acetaldehyde can be directly detected by gas chromatography, acetaldehyde decomposition activity can be evaluated by detecting ethanol generated as a result of decomposition.

【００９８】実施例１４<B菌におけるアセトアルデヒド
分解特性の検討> B菌におけるホルムアルデヒドを分解特性について、B菌
の菌体重量とアセトアルデヒド濃度との関係を以下のよ
うに検討した。先ず、アセトアルデヒドを100ppm、500p
pm、1000ppm、2000ppm又は3000ppmの濃度で含む5種類の
YPD液体培地を準備した。なお、YPD培地は実施例４で使
用したものと同様にして調整した。 Example 14 <Acetaldehyde in B bacterium
Examination of Degradation Characteristics> Regarding the degradation characteristics of formaldehyde in B bacterium, the relationship between the cell weight of B bacterium and the acetaldehyde concentration was examined as follows. First, 100ppm acetaldehyde, 500p
5 kinds of pm, 1000ppm, 2000ppm or 3000ppm concentration
A YPD liquid medium was prepared. The YPD medium was prepared in the same manner as that used in Example 4.

【００９９】次に、5種類のYPD液体培地それぞれに、前
培養を行ったB菌を0.01重量％、0.05重量％、0.1重量％
又は0.5重量％となるように接種した。B菌を接種した20
種類のYPD液体培地を、30℃で2日間振とう培養した。培
養後、実施例２に記載した方法に準じて、各YPD液体培
地中に含まれるアセトアルデヒド濃度を計測し、各YPD
液体培地におけるアセトアルデヒドの分解活性を評価し
た。結果を表１１に示す。Next, in each of the 5 types of YPD liquid medium, the pre-cultured B bacterium was added in an amount of 0.01% by weight, 0.05% by weight, and 0.1% by weight.
Alternatively, it was inoculated so that the concentration would be 0.5% by weight. 20 inoculated with B bacterium
The YPD liquid medium of each type was shake-cultured at 30 ° C. for 2 days. After culturing, according to the method described in Example 2, the concentration of acetaldehyde contained in each YPD liquid medium was measured, and each YPD liquid medium was measured.
The decomposition activity of acetaldehyde in the liquid medium was evaluated. The results are shown in Table 11.

【０１００】[0100]

【表１１】 [Table 11]

【０１０１】なお、表１１において、90％以上分解して
いた場合を「◎」とし、70％以上90％未満分解していた
場合を「○」とし、50％以上70％未満分解していた場合
を「△」とし、50％未満分解していた場合を「×」とし
て表現した。表１１から判るように、B菌におけるアセ
トアルデヒドを分解特性について、B菌の菌体重量とア
セトアルデヒド濃度との間に相関関係があることが判っ
た。具体的には、B菌の菌体濃度が0.1重量％以上である
場合、濃度1000ppmのアセトアルデヒドを非常によく分
解することができた。さらに、B菌の菌体濃度が0.1重量
％以上である場合、濃度2000ppmのアセトアルデヒドを
わずかに分解することができた。In Table 11, when 90% or more was decomposed, "⊚" was given, and when 70% or more and less than 90% was decomposed, "○" was given, and 50% or more and less than 70% was decomposed. The case was expressed as “△”, and the case where less than 50% was decomposed was expressed as “x”. As can be seen from Table 11, regarding the property of degrading acetaldehyde in B bacterium, it was found that there is a correlation between the bacterial cell weight of B bacterium and the acetaldehyde concentration. Specifically, when the bacterial cell concentration of B bacterium was 0.1% by weight or more, acetaldehyde having a concentration of 1000 ppm could be decomposed very well. Further, when the bacterial cell concentration of B bacterium was 0.1% by weight or more, acetaldehyde having a concentration of 2000 ppm could be slightly decomposed.

【０１０２】実施例１５ ＜A菌における無細胞抽出液
のホルムアルデヒド分解特性＞ A菌におけるホルムアルデヒドの分解特性について、A菌
体無細胞抽出液にホルムアルデヒド分解活性を有するか
以下のように検討した。先ず、YMPG液体培地にて120時
間振盪培養した培養液50ml から得られた菌体に石英砂2
g添加し乳鉢で摩砕後、蒸留水で50mlに定量し撹拌し
た。その懸濁液を0.2μmのフィルターで濾過したものを
無細胞抽出液（細胞内酵素液）とした。次に、ホルムア
ルデヒド濃度50、100、200 ppmで35℃、24時間反応させ
ホルムアルデヒド分解率を測定した。結果を表１２に示
す。 Example 15 <Cell-free extract in fungus A
Formaldehyde Decomposition Property of A > For the decomposition property of formaldehyde in A bacterium, it was examined as follows whether the cell-free extract of A bacterium has formaldehyde decomposition activity. First, quartz sand was added to the bacterial cells obtained from 50 ml of the culture solution that had been shake-cultured in YMPG liquid medium for 120 hours.
After adding g and grinding in a mortar, the amount was adjusted to 50 ml with distilled water and stirred. The suspension was filtered through a 0.2 μm filter to obtain a cell-free extract (intracellular enzyme solution). Next, the formaldehyde decomposition rate was measured by reacting at formaldehyde concentrations of 50, 100, and 200 ppm at 35 ° C. for 24 hours. The results are shown in Table 12.

【０１０３】[0103]

【表１２】 [Table 12]

【０１０４】無細胞抽出液（細胞内酵素液）ホルムアル
デヒド分解率測定 表１２から、ホルムアルデヒド分解率はいずれの基質濃
度においても22％以上であり、基質濃度の増加にもかか
わらず分解率に大きな変化は認められなかった。しかし
ながら、実際に分解したホルムアルデヒド量はほぼ比例
的に増加していることが認められた。このことは、ホル
ムアルデヒド濃度の増加による酵素反応速度の増加を示
している。また、A菌は培養において、ホルムアルデヒ
ドを添加することなく無細胞抽出液に分解活性を有する
ことが示された。Cell-free Extract (Intracellular Enzyme Solution) Formaldehyde Decomposition Rate Measurement From Table 12, the formaldehyde decomposition rate was 22% or more at any substrate concentration, and the decomposition rate changed greatly despite the increase in substrate concentration. Was not recognized. However, it was confirmed that the amount of actually decomposed formaldehyde increased almost proportionally. This indicates an increase in enzyme reaction rate due to an increase in formaldehyde concentration. In addition, it was shown that the bacterium A had a degrading activity on the cell-free extract in culture without adding formaldehyde.

【０１０５】[0105]

【発明の効果】以上詳細に説明したように、本発明によ
れば、優れた分解能力及び様々な条件下で安定した分解
能力を発揮することができるホルムアルデヒドの分解方
法及び分解剤を提供することができる。As described in detail above, according to the present invention, there is provided a method for decomposing formaldehyde and a decomposing agent capable of exhibiting excellent decomposing ability and stable decomposing ability under various conditions. You can

【０１０６】[0106]

【配列表】 SEQUENCE LISTING <110> Kumamoto prefecture Mitsuwa Corporation Mitsuwa Bipro, Inc. <120> A method for degradation of formaldehyde and a formaldehyde decomposer <130> P01-0517 <160> 1 <170> PatentIn Ver. 2.0 <210> 1 <211> 500 <212> DNA <213> Mycobacterium sp. <400> 1 tggagagttt gatcctggct caggacgaac gctggcggcg tgcttaacac atgcaagtcg 60 aacggaaagg cccttcgggg tgctcgagtg gcgaacgggt gagtaacacg tgggtgatct 120 gccctgcact ttgggataag cctgggaaac tgggtctaat accgaatatg accgcatgct 180 tcatggtgtg tggtggaaag cttttgcggt gtgggatggg cccgcggcct atcagcttgt 240 tggtggggta atggcctacc aaggcgacga cgggtagccg gcctgagagg gtgaccggcc 300 acactgggac tgagatacgg cccagactcc tacgggaggc agcagtgggg aatattgcac 360 aatgggcgca agcctgatgc agcgacgccg cgtgggggat gacggccttc gggttgtaaa 420 cctctttcag cacagacgaa gcgtgagtga cggtatgtgc agaagaagca ccggccaact 480 acgtgccagc agccgcggta 500[Sequence list]                                SEQUENCE LISTING <110> Kumamoto prefecture       Mitsuwa Corporation       Mitsuwa Bipro, Inc. <120> A method for degradation of formaldehyde and a       formaldehyde decomposer <130> P01-0517 <160> 1 <170> PatentIn Ver. 2.0 <210> 1 <211> 500 <212> DNA <213> Mycobacterium sp. <400> 1 tggagagttt gatcctggct caggacgaac gctggcggcg tgcttaacac atgcaagtcg 60 aacggaaagg cccttcgggg tgctcgagtg gcgaacgggt gagtaacacg tgggtgatct 120 gccctgcact ttgggataag cctgggaaac tgggtctaat accgaatatg accgcatgct 180 tcatggtgtg tggtggaaag cttttgcggt gtgggatggg cccgcggcct atcagcttgt 240 tggtggggta atggcctacc aaggcgacga cgggtagccg gcctgagagg gtgaccggcc 300 acactgggac tgagatacgg cccagactcc tacgggaggc agcagtgggg aatattgcac 360 aatgggcgca agcctgatgc agcgacgccg cgtgggggat gacggccttc gggttgtaaa 420 cctctttcag cacagacgaa gcgtgagtga cggtatgtgc agaagaagca ccggccaact 480 acgtgccagc agccgcggta 500

【図面の簡単な説明】[Brief description of drawings]

【図１】培地中に含まれるホルムアルデヒド濃度を50,1
00,250,500,1OOO又は2000ppmとした場合の分離源とホル
ムアルデヒド残存濃度との関係を示す特性図である。[Figure 1] Concentration of formaldehyde contained in the medium is 50,1
It is a characteristic view which shows the relationship between a separation source and formaldehyde residual concentration when it is set to 00, 250, 500, 100OO or 2000 ppm.

【図２】ホルムアルデヒドテストワコー(和光純薬工業
株式会社製)を用いて、正規の方法と1/2スケールで行う
方法とにおける検出感度を示す特性図である。FIG. 2 is a characteristic diagram showing detection sensitivity using a formaldehyde test Wako (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) in a regular method and a method performed in 1/2 scale.

【図３】A菌、B菌及びD菌について、所定の初発pHにお
ける培養時間と分解率との関係を示す特性図である。FIG. 3 is a characteristic diagram showing the relationship between the culturing time and the decomposition rate at a predetermined initial pH for bacteria A, B, and D.

【図４】A菌、B菌及びD菌について、所定の培養温度に
おける培養時間と分解率との関係を示す特性図である。FIG. 4 is a characteristic diagram showing the relationship between the culturing time at a predetermined culturing temperature and the decomposition rate for A bacterium, B bacterium, and D bacterium.

【図５】異なるホルムアルデヒド濃度の培地における培
養時間とpHの経時変化との関係、培養時間と分解率との
関係を示す特性図である。FIG. 5 is a characteristic diagram showing the relationship between the culture time and the change with time of pH in media having different formaldehyde concentrations, and the relationship between the culture time and the decomposition rate.

【図６】表２に示した各試験区において、培養液10mlあ
たりに含まれる菌体重量を測定した結果を示す特性図で
ある。FIG. 6 is a characteristic diagram showing the results of measuring the weight of bacterial cells contained in 10 ml of the culture solution in each test group shown in Table 2.

【図７】表２に示した各試験区において、ホルムアルデ
ヒド分解活性を測定した結果を示す特性図である。FIG. 7 is a characteristic diagram showing the results of measuring formaldehyde decomposition activity in each test group shown in Table 2.

【図８】A菌、B菌及びD菌について、培地中の無機塩類
濃度と分解率との関係を示す特性図である。FIG. 8 is a characteristic diagram showing the relationship between the concentration of inorganic salts in the medium and the decomposition rate for bacteria A, B and D.

【図９】A、B及びD菌それぞれを単独で培養又は所定の
組み合わせで混合して培養した際のホルムアルデヒド分
解性を示す特性図である。FIG. 9 is a characteristic diagram showing formaldehyde decomposability when each of A, B and D bacteria is cultured alone or mixed in a predetermined combination and cultured.

【図１０】A菌、B菌及びD菌について、死滅化菌体と生
菌とにおける分解率を示す特性図である。FIG. 10 is a characteristic diagram showing the decomposition rates of killed cells and live cells of A, B, and D bacteria.

【図１１】B菌について、ホルムアルデヒド分解活性を
菌体及び培養液上清で比較した結果を示す特性図であ
る。FIG. 11 is a characteristic diagram showing the results of comparing formaldehyde-degrading activity of bacterial cells B with bacterial cells and culture supernatant.

【図１２】培地中にホルムアルデヒドを添加した場合と
添加しない場合とで分解率を比較した結果を示す特性図
である。FIG. 12 is a characteristic diagram showing the results of comparing the decomposition rates with and without the addition of formaldehyde to the medium.

【図１３】吸収液と吸収率との関係を示す特性図であ
る。FIG. 13 is a characteristic diagram showing a relationship between an absorbing liquid and an absorption rate.

【図１４】A菌、B菌及びD菌それぞれの培養ろ液を用い
た場合における気相中のホルムアルデヒドの分解率を示
す特性図である。FIG. 14 is a characteristic diagram showing the decomposition rate of formaldehyde in the gas phase when the culture filtrates of A bacterium, B bacterium, and D bacterium were used.

【図１５】A菌、B菌及びD菌について、海水又は緩衝液
に含まれるホルムアルデヒドの分解率を示す特性図であ
る。FIG. 15 is a characteristic diagram showing the decomposition rate of formaldehyde contained in seawater or a buffer solution of bacteria A, B, and D.

【図１６】A菌、B菌及びD菌について乾燥処理を施した
場合のホルムアルデヒド分解活性を示す特性図である。FIG. 16 is a characteristic diagram showing formaldehyde-decomposing activity when bacteria A, B and D are subjected to a drying treatment.

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｎ 1/14 Ｃ１２Ｎ 1/14 Ａ //(Ｃ１２Ｎ 1/14 Ｃ１２Ｒ 1:77 Ｃ１２Ｒ 1:77） Ｃ１２Ｎ 1/20 Ａ (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:32 Ｃ１２Ｒ 1:32） (72)発明者 松田 茂樹 熊本県熊本市長嶺東２丁目25−12 (72)発明者 浅野 康夫 大分県大分市松が丘39−16 (72)発明者 宮川 真人 福岡県大牟田市大字三池555−19 (72)発明者 小野 さおり 大分県臼杵市市浜桜台120 (72)発明者 松田 周作 大分県大分市大字森町1046−２ サンハイ ム森町Ａ105 (72)発明者 永山 勲 大分県大分市下郡南２丁目６−６ プロス パー21ＩＩ101号 Ｆターム(参考） 4B065 AA36X AA65X AC20 BB07 BD10 CA56 4D020 AA08 BA22 BA23 BB03 CB00 4D040 DD03 DD12 Front page continuation (51) Int.Cl. ⁷ Identification code FI theme code (reference) C12N 1/14 C12N 1/14 A // (C12N 1/14 C12R 1:77 C12R 1:77) C12N 1/20 A (C12N 1/20 C12R 1:32 C12R 1:32) (72) Inventor Shigeki Matsuda 2-25-12 Nagamine Higashi, Kumamoto City, Kumamoto Prefecture (72) Inventor Yasuo Asano 39-16 Matsugaoka, Oita City (72) Inventor Masato Miyagawa 555-19 Miike, Omuta City, Fukuoka Prefecture 72 (72) Inventor Saori Ono 120 Hamasakuradai, Usuki City, Oita Prefecture (72) Inventor Shusaku Matsuda 1046-2 Morimachi, Oita City, Oita Prefecture A105 (72), Sanheim Morimachi Inventor Isamu Nagayama 2-6-6 Minami 2-chome, Shimogori, Oita-shi, Oita Prefecture Prosper 21II 101 F term (reference) 4B065 AA36X AA65X AC20 BB07 BD10 CA56 4D020 AA08 BA22 BA23 BB03 CB00 4D040 DD03 DD12

Claims (22)

【特許請求の範囲】[Claims] 【請求項１】 マイコバクテリウム属（Mycobacterium
sp.）に属する菌体及び/又は当該菌体の培養液を用いて
ホルムアルデヒドを分解することを特徴とするホルムア
ルデヒドの分解方法。1. A genus of Mycobacterium
sp.), and / or a formaldehyde-decomposing method using a culture solution of the bacteria. 【請求項２】 上記マイコバクテリウム属（Mycobacter
ium sp.）に属する菌体が寄託番号FERM P-18690である
ことを特徴とする請求項1記載のホルムアルデヒドの分
解方法。2. The genus Mycobacteria
The method for decomposing formaldehyde according to claim 1, wherein the bacterium belonging to the group (ium sp.) is deposit number FERM P-18690. 【請求項３】 上記マイコバクテリウム属に属する菌体
及び/又は当該菌体の培養液を乾燥物とすることを特徴
とする請求項１記載のホルムアルデヒドの分解方法。3. The method for decomposing formaldehyde according to claim 1, wherein the cells belonging to the genus Mycobacterium and / or a culture solution of the cells is a dried product. 【請求項４】 海水中に含まれるホルムアルデヒドを分
解することを特徴とする請求項１記載のホルムアルデヒ
ドの分解方法。4. The method for decomposing formaldehyde according to claim 1, characterized in that formaldehyde contained in seawater is decomposed. 【請求項５】 気相中に含まれるホルムアルデヒドを分
解することを特徴とする請求項１記載のホルムアルデヒ
ドの分解方法。5. The method for decomposing formaldehyde according to claim 1, wherein formaldehyde contained in the gas phase is decomposed. 【請求項６】 上記マイコバクテリウム属に属する菌体
及び/又は当該菌体の培養液を換気手段に配し、当該換
気手段を介して気体の換気を行うことによって当該気体
中に含まれるホルムアルデヒドを分解することを特徴と
する請求項１記載のホルムアルデヒドの分解方法。6. Formaldehyde contained in the gas by arranging the bacterium belonging to the genus Mycobacterium and / or a culture solution of the bacterium in a ventilation means and ventilating the gas through the ventilation means. The method for decomposing formaldehyde according to claim 1, characterized by decomposing. 【請求項７】 ホルムアルデヒド分解能を有するマイコ
バクテリウム属（Mycobacterium sp.）に属する菌体。7. A bacterium belonging to the genus Mycobacterium sp. Having formaldehyde degrading ability. 【請求項８】 寄託番号FERM P-18690であることを特徴
とする請求項７記載の菌体。8. The fungus body according to claim 7, which has a deposit number of FERM P-18690. 【請求項９】 マイコバクテリウム属（Mycobacterium
sp.）に属する菌体及び/又は当該菌体の培養液を含むこ
とを特徴とするホルムアルデヒド分解剤。9. The genus Mycobacterium
sp.), and / or a formaldehyde degrading agent containing a culture solution of the cell. 【請求項１０】 上記マイコバクテリウム属に属する菌
体が寄託番号FERM P-18690であることを特徴とする請求
項９記載のホルムアルデヒド分解剤。10. The formaldehyde degrading agent according to claim 9, wherein the bacterium belonging to the genus Mycobacterium is deposit number FERM P-18690. 【請求項１１】 上記マイコバクテリウム属に属する菌
体及び/又は当該菌体の培養液が乾燥物であることを特
徴とする請求項９記載のホルムアルデヒド分解剤。11. The formaldehyde degrading agent according to claim 9, wherein the bacterium belonging to the genus Mycobacterium and / or the culture solution of the bacterium is a dried product. 【請求項１２】 フサリウム・オキシスポラム（Fusari
um oxysporum）及び/又は当該フサリウム・オキシスポ
ラムの培養液を更に含むことを特徴とする請求項９記載
のホルムアルデヒド分解剤。12. A Fusarium oxysporum (Fusari)
um oxysporum) and / or the culture solution of the Fusarium oxysporum. 【請求項１３】 フサリウム・オキシスポラム（Fusari
um oxysporum）及び/又は当該フサリウム・オキシスポ
ラムの培養液を用いてホルムアルデヒドを分解すること
を特徴とするホルムアルデヒドの分解方法。13. A Fusarium oxysporum (Fusari)
um oxysporum) and / or the culture solution of the Fusarium oxysporum. 【請求項１４】 上記フサリウム・オキシスポラムがフ
サリウム・オキシスポラムFERM P-18483であることを特
徴とする請求項１３記載のホルムアルデヒドの分解方
法。14. The method for decomposing formaldehyde according to claim 13, wherein the Fusarium oxysporum is Fusarium oxysporum FERM P-18483. 【請求項１５】 上記フサリウム・オキシスポラム及び
/又は当該フサリウム・オキシスポラムの培養液を乾燥
物とすることを特徴とする請求項１３記載のホルムアル
デヒドの分解方法。15. The Fusarium oxysporum and
The method for decomposing formaldehyde according to claim 13, wherein the culture solution of Fusarium oxysporum is a dried product. 【請求項１６】 海水中に含まれるホルムアルデヒドを
分解することを特徴とする請求項１３記載のホルムアル
デヒドの分解方法。16. The method for decomposing formaldehyde according to claim 13, wherein formaldehyde contained in seawater is decomposed. 【請求項１７】 気相中に含まれるホルムアルデヒドを
分解することを特徴とする請求項１３記載のホルムアル
デヒドの分解方法。17. The method for decomposing formaldehyde according to claim 13, wherein formaldehyde contained in the gas phase is decomposed. 【請求項１８】 上記フサリウム・オキシスポラム及び
/又は当該フサリウム・オキシスポラムの培養液を換気
手段に配し、当該換気手段を介して気体の換気を行うこ
とによって当該気体中に含まれるホルムアルデヒドを分
解することを特徴とする請求項１３記載のホルムアルデ
ヒドの分解方法。18. The Fusarium oxysporum and
14. Or, the formaldehyde contained in the gas is decomposed by arranging the Fusarium oxysporum culture solution in a ventilation means and ventilating the gas through the ventilation means. Disassembly method. 【請求項１９】 フサリウム・オキシスポラム（Fusari
um oxysporum）及び/又は当該フサリウム・オキシスポ
ラムの培養液を含むことを特徴とするホルムアルデヒド
分解剤。19. A Fusarium oxysporum (Fusari)
um oxysporum) and / or a culture solution of the Fusarium oxysporum. 【請求項２０】 上記フサリウム・オキシスポラムがフ
サリウム・オキシスポラムFERM P-18483であることを特
徴とする請求項１９記載のホルムアルデヒド分解剤。20. The formaldehyde decomposing agent according to claim 19, wherein the Fusarium oxysporum is Fusarium oxysporum FERM P-18483. 【請求項２１】 上記フサリウム・オキシスポラム及び
/又は当該フサリウム・オキシスポラムの培養液が乾燥
物であることを特徴とする請求項１９記載のホルムアル
デヒド分解剤。21. The Fusarium oxysporum and
20. The formaldehyde degrading agent according to claim 19, wherein the culture solution of Fusarium oxysporum is a dried product. 【請求項２２】 マイコバクテリウム属（Mycobacteriu
m sp.）に属する菌体及び/又は当該菌体の培養液を更に
含むことを特徴とする請求項１９記載のホルムアルデヒ
ド分解剤。22. Mycobacteriu
20. The formaldehyde degrading agent according to claim 19, further comprising cells belonging to M sp.) and / or a culture solution of the cells.