JP2003248174A - Laser scanning confocal microscope device, image recording method, and recording medium - Google Patents

Abstract

<P>PROBLEM TO BE SOLVED: To apply a laser scanning confocal microscope device to measurement using a plurality of lights having at least different wavelengths as excitation light. <P>SOLUTION: In an image recording method of the laser scanning confocal microscope device, each of a plurality of laser lights having at least different wavelengths is scanned on a specimen as a spot light, light from the specimen based on the spot light is detected, and obtained image information is recorded by segmenting it. <P>COPYRIGHT: (C)2003,JPO

Description

【発明の詳細な説明】Detailed Description of the Invention

【０００１】[0001]

【発明の属する技術分野】本発明は、例えば細胞のイオ
ン濃度の平面的定量測定等に好適なレーザ走査型顕共焦
点微鏡装置、その画像記録方法、及びそのプログラムを
記録した記録媒体に関する。BACKGROUND OF THE INVENTION 1. Field of the Invention The present invention relates to a laser scanning microscope confocal microscope apparatus suitable for, for example, planar quantitative measurement of cell ion concentration, an image recording method thereof, and a recording medium recording the program thereof.

【０００２】[0002]

【従来の技術】従来、走査型顕微鏡装置として、光源か
らのレーザ光を対物レンズにより微小なスポット光に絞
り、このスポット光により観察試料上を走査し、その観
察試料からの光、例えば透過光、反射光、又は蛍光等
を、フォトマルチプライヤ等の光電変換器により電気信
号に変換し、画像モニター上に観察画像を表示するレー
ザ走査型顕共焦点微鏡装置が知られている。2. Description of the Related Art Conventionally, as a scanning microscope apparatus, a laser beam from a light source is focused into a minute spot light by an objective lens, the spot light scans an observation sample, and the light from the observation sample, for example, transmitted light. There is known a laser scanning microscope confocal microscope device which converts reflected light, fluorescence, or the like into an electric signal by a photoelectric converter such as a photomultiplier and displays an observation image on an image monitor.

【０００３】一方、最近では、神経科学や細胞生物学分
野における研究手法として、イオン感受性指示薬を用い
て細胞内遊離イオン濃度を定量する方法が急速に広がっ
ている。例えば、細胞内のカルシウムイオン濃度の測定
では、サンプルである細胞にカルシウムイオン感受性指
示薬である蛍光試薬 fura-2 を用いた蛍光計測が行われ
ている。このときの蛍光計測では、細胞の特定領域を異
なる２つの波長（３４０ｎｍ、３８０ｎｍ）で励起し、
刺激物質（ Bradykinin ）を投与後、それぞれの蛍光強
度の比を求めることにより定量し、その強度変化の分光
蛍光光度計による測定や顕微鏡による観察等といったこ
とが行われている。On the other hand, recently, as a research technique in the fields of neuroscience and cell biology, a method for quantifying intracellular free ion concentration using an ion sensitive indicator has been rapidly spreading. For example, in the measurement of intracellular calcium ion concentration, fluorescence measurement using a fluorescent reagent fura-2, which is a calcium ion sensitivity indicator, is performed on a sample cell. In the fluorescence measurement at this time, a specific region of the cell is excited with two different wavelengths (340 nm and 380 nm),
After administration of the stimulant (Bradykinin), the ratio of the respective fluorescence intensities is determined to quantify, and the change in the intensity is measured by a spectrofluorimeter or observed by a microscope.

【０００４】また、特許文献１には、前述の蛍光試薬 f
ura-2 を用いたカルシウムイオン濃度の測定を行う蛍光
顕微鏡装置が提案されている。この蛍光顕微鏡装置は、
透過波長の異なる複数の干渉フィルタを任意に切り換え
ることにより、光源からの光のうち、その切り換えられ
たフィルタにより透過された波長の光のみをサンプルに
照射させ、そのサンプルからの光を撮像して画像処理す
る等して試料像を取得するようにし、蛍光試薬 fura-2
を用いた２波長励起１波長蛍光測定等のような、波長の
異なる複数の光を励起光として用いる測定を行えるよう
にしたものである。Further, in Patent Document 1, the above-mentioned fluorescent reagent f
A fluorescence microscope device for measuring calcium ion concentration using ura-2 has been proposed. This fluorescence microscope device
By arbitrarily switching a plurality of interference filters with different transmission wavelengths, of the light from the light source, only the light of the wavelength transmitted by the switched filter is irradiated to the sample, and the light from the sample is imaged. Fluorescent reagent fura-2 is used to obtain a sample image by image processing.
It is possible to perform a measurement using a plurality of lights having different wavelengths as excitation light, such as a two-wavelength excitation one-wavelength fluorescence measurement using the.

【０００５】[0005]

【特許文献１】特開平２−２８５４２号公報[Patent Document 1] JP-A-2-28542

【０００６】[0006]

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、上記提
案には、レーザ走査型顕共焦点微鏡装置を用いてその測
定を行う場合の構成については何も開示されておらず、
単に光学的に二次元像を取得する通常の光学顕微鏡装置
を用いた場合の構成が開示されているだけである。However, the above proposal does not disclose anything about the configuration in the case where the measurement is performed using the laser scanning microscope confocal microscope apparatus.
Only the configuration in the case of using a normal optical microscope device that optically acquires a two-dimensional image is disclosed.

【０００７】また、従来において、レーザ走査型顕共焦
点微鏡装置を用いて、前述の蛍光試薬 fura-2 を用いた
カルシウムイオン濃度の測定や、水素イオン濃度の測定
や、巨大分子濃度の測定等に適用される、２波長励起１
波長蛍光測定等のような、波長の異なる複数の光を励起
光として用いる測定を行う場合の構成については何も提
案されていなかった。In addition, conventionally, a laser scanning microscope confocal microscope apparatus was used to measure the calcium ion concentration, the hydrogen ion concentration, and the macromolecule concentration using the above-mentioned fluorescent reagent fura-2. 2 wavelength excitation 1 applied to etc.
No proposal has been made for a configuration for performing measurement using a plurality of lights having different wavelengths as excitation light, such as wavelength fluorescence measurement.

【０００８】本発明の課題は、上記実情に鑑み、２波長
励起１波長蛍光測定等のような、少なくとも波長の異な
る複数の光を励起光として用いる測定に適用可能なレー
ザ走査型顕共焦点微鏡装置、その画像記録方法、及びそ
のプログラムを記録した記録媒体を提供することであ
る。In view of the above situation, an object of the present invention is to provide a laser scanning microscope confocal microscope applicable to a measurement using a plurality of lights having different wavelengths as excitation light, such as a two-wavelength excitation one-wavelength fluorescence measurement. A mirror device, an image recording method thereof, and a recording medium recording the program thereof.

【０００９】[0009]

【課題を解決するための手段】本発明の第一の態様は、
少なくとも波長の異なる複数のレーザ光の各々をスポッ
ト光として試料上に走査し、前記スポット光に基づく前
記試料からの光を検出し、得られた画像情報を切り分け
て記録する、レーザ走査型共焦点顕微鏡装置の画像記録
方法である。The first aspect of the present invention comprises:
At least a plurality of laser beams having different wavelengths are scanned on a sample as spot light, the light from the sample based on the spot light is detected, and the obtained image information is divided and recorded, laser scanning confocal. It is an image recording method of a microscope apparatus.

【００１０】上記の方法によれば、励起波長毎に画像情
報を切り分けて記録することができるので、走査された
レーザ光毎に、当該レーザ光によって得られた画像情報
を切り分けて記録することができ、複数のレーザ光を励
起光として用いる測定にレーザ走査型共焦点顕微鏡装置
を適用させることができる。According to the above method, the image information can be divided and recorded for each excitation wavelength, so that the image information obtained by the laser beam can be divided and recorded for each scanned laser beam. Therefore, the laser scanning confocal microscope device can be applied to the measurement using a plurality of laser lights as excitation light.

【００１１】本発明の第二の態様は、上記第一の態様に
おいて、前記走査では、１ピクセル毎に前記複数のレー
ザ光の各々をスポット光として試料上に走査し、前記記
録では、前記画像情報を１ピクセル毎に切り分けて記録
する。この方法によれば、１ピクセル走査されたレーザ
光毎に、当該レーザ光によって得られた画像情報を切り
分けて記録することができる。According to a second aspect of the present invention, in the first aspect, in the scanning, the sample is scanned with each of the plurality of laser beams as spot light for each pixel, and in the recording, the image is recorded. The information is divided into each pixel and recorded. According to this method, the image information obtained by the laser light can be divided and recorded for each laser light scanned by one pixel.

【００１２】本発明の第三の態様は、上記第一の態様に
おいて、前記走査では、１ライン毎に前記複数のレーザ
光の各々をスポット光として試料上に走査し、前記記録
では、前記画像情報を１ライン毎に切り分けて記録す
る。この方法によれば、１ライン走査されたレーザ光毎
に、当該レーザ光によって得られた画像情報を切り分け
て記録することができる。According to a third aspect of the present invention, in the above-mentioned first aspect, in the scanning, the sample is scanned line by line with each of the plurality of laser beams as spot light, and in the recording, the image is recorded. Information is divided into lines and recorded. According to this method, the image information obtained by the laser beam can be divided and recorded for each laser beam scanned by one line.

【００１３】本発明の第四の態様は、上記第一の態様に
おいて、前記走査では、１フレーム毎に前記複数のレー
ザ光の各々をスポット光として試料上に走査し、前記記
録では、前記画像情報を１フレーム毎に切り分けて記録
する。この方法によれば、１フレーム走査されたレーザ
光毎に、当該レーザ光によって得られた画像情報を切り
分けて記録することができる。According to a fourth aspect of the present invention, in the above-mentioned first aspect, in the scanning, the sample is scanned with each of the plurality of laser beams as spot light in each frame, and in the recording, the image is recorded. Information is divided into frames and recorded. According to this method, the image information obtained by the laser light can be divided and recorded for each laser light scanned for one frame.

【００１４】本発明の第五の態様は、上記第二の態様に
おいて、更に、前記１ピクセル毎に切り分けた画像情報
を用いて演算を行い、該演算の結果を表示する。この方
法によれば、好ましくは、１ピクセル毎に、各レーザ光
により得られた画像情報の比（輝度値の比、強度比等）
の演算やユーザの所望とする演算等といった演算を行わ
せて、その演算結果を表示させることができる。In a fifth aspect of the present invention, in addition to the above second aspect, an operation is further performed using the image information divided for each pixel and the result of the operation is displayed. According to this method, preferably, for each pixel, the ratio of image information obtained by each laser light (ratio of brightness values, intensity ratio, etc.)
It is possible to perform an operation such as the above operation or an operation desired by the user, and display the operation result.

【００１５】本発明の第六の態様は、上記第三の態様に
おいて、更に、前記１ライン毎に切り分けた画像情報を
用いて演算を行い、該演算の結果を表示する。この方法
によれば、好ましくは、１ライン毎に、各レーザ光によ
り得られた画像情報の比（輝度値の比、強度比等）の演
算やユーザの所望とする演算等といった演算を行わせ
て、その演算結果を表示させることができる。In a sixth aspect of the present invention, in addition to the above third aspect, an operation is performed using the image information divided for each line, and the result of the operation is displayed. According to this method, preferably, the calculation of the ratio of the image information obtained by each laser beam (the ratio of the brightness value, the intensity ratio, etc.) or the calculation desired by the user is performed for each line. Then, the calculation result can be displayed.

【００１６】本発明の第七の態様は、レーザ走査型共焦
点顕微鏡装置の画像記録制御をコンピュータに実行させ
るためのプログラムを記録した記録媒体であって、少な
くとも波長の異なる複数のレーザ光の各々をスポット光
として試料上に走査し、前記スポット光に基づく前記試
料からの光を検出し、得られた画像情報を切り分けて記
録する、ことを前記コンピュータに実行させるためのプ
ログラムを記録した記録媒体である。A seventh aspect of the present invention is a recording medium in which a program for causing a computer to execute image recording control of a laser scanning confocal microscope apparatus is recorded, and at least each of a plurality of laser beams having different wavelengths. Is recorded on the sample as a spot light, the light from the sample based on the spot light is detected, and the obtained image information is divided and recorded. Is.

【００１７】上記によれば、本記録媒体に記録されてい
るプログラムをコンピュータに実行させることにより、
上記第一の態様と同様の作用・効果を得る。本発明の第
八の態様は、上記第七の態様において、前記走査では、
１ピクセル毎に前記複数のレーザ光の各々をスポット光
として試料上に走査し、前記記録では、前記画像情報を
１ピクセル毎に切り分けて記録する。According to the above, by causing the computer to execute the program recorded on the recording medium,
The same action and effect as those of the first aspect are obtained. An eighth aspect of the present invention is based on the seventh aspect, in the scanning,
Each of the plurality of laser beams is scanned as spot light on a sample for each pixel, and in the recording, the image information is divided and recorded for each pixel.

【００１８】これによれば、上記第二の態様と同様の作
用・効果を得る。本発明の第九の態様は、上記第七の態
様において、前記走査では、１ライン毎に前記複数のレ
ーザ光の各々をスポット光として試料上に走査し、前記
記録では、前記画像情報を１ライン毎に切り分けて記録
する。According to this, the same operation and effect as those of the second aspect can be obtained. According to a ninth aspect of the present invention, in the seventh aspect, in the scanning, a sample is scanned with each of the plurality of laser beams as spot light for each line, and in the recording, the image information is recorded as 1 Record each line separately.

【００１９】これによれば、上記第三の態様と同様の作
用・効果を得る。本発明の第十の態様は、上記第七の態
様において、前記走査では、１フレーム毎に前記複数の
レーザ光の各々をスポット光として試料上に走査し、前
記記録では、前記画像情報を１フレーム毎に切り分けて
記録する。According to this, the same action and effect as those of the third aspect can be obtained. According to a tenth aspect of the present invention, in the seventh aspect, in the scanning, the sample is scanned with each of the plurality of laser beams as spot light for each frame, and in the recording, the image information is recorded as 1 Record each frame separately.

【００２０】これによれば、上記第四の態様と同様の作
用・効果を得る。本発明の第十一の態様は、試料に照射
させるレーザ光を少なくとも波長の異なるレーザ光に切
り換える切換手段と、前記試料上に、前記切換部により
切り換えられたレーザ光であるスポット光を走査する走
査手段と、前記スポット光に基づく前記試料からの光を
アナログ電気信号に変換する光電変換手段と、前記アナ
ログ電気信号をデジタル電気信号に変換する複数のＡ／
Ｄ変換手段と、前記切換部によるレーザ光の切り換え状
態に応じて、前記アナログ電気信号の入力先を前記複数
のＡ／Ｄ変換部のうちの何れか１つに切り換える信号分
岐切換手段と、前記デジタル電気信号に応じた画像を表
示する表示手段と、を備えたレーザ走査型共焦点顕微鏡
装置である。According to this, the same operation and effect as the above-mentioned fourth aspect can be obtained. According to an eleventh aspect of the present invention, switching means for switching the laser light with which the sample is irradiated to laser light having at least different wavelengths, and the sample is scanned with spot light which is the laser light switched by the switching unit. Scanning means, photoelectric conversion means for converting the light from the sample based on the spot light into an analog electric signal, and a plurality of A / s for converting the analog electric signal into a digital electric signal
D conversion means, signal branch switching means for switching the input destination of the analog electric signal to any one of the plurality of A / D conversion sections according to the switching state of the laser light by the switching section, A laser scanning confocal microscope apparatus comprising: a display unit that displays an image according to a digital electric signal.

【００２１】上記の構成によれば、レーザ光の切り換え
状態に応じてアナログ電気信号の入力先となるＡ／Ｄ変
換手段が切り換えられるので、切り換えられたＡ／Ｄ変
換手段の出力（画像情報）を取得していくことで、照射
したレーザ光毎に、当該レーザ光によって得られた画像
情報を取得することができ、複数のレーザ光を励起光と
して用いる測定にレーザ走査型共焦点顕微鏡装置を適用
させることができる。According to the above construction, since the A / D conversion means which is the input destination of the analog electric signal is switched according to the switching state of the laser light, the output (image information) of the switched A / D conversion means. By acquiring each, it is possible to acquire the image information obtained by the laser light for each irradiated laser light, and use a laser scanning confocal microscope device for measurement using a plurality of laser lights as excitation light. Can be applied.

【００２２】本発明の第十二の態様は、１ピクセル走査
毎に、試料に照射させるレーザ光を少なくとも波長の異
なるレーザ光に切り換える切換手段と、前記試料上に、
前記切換部により切り換えられたレーザ光であるスポッ
ト光を走査する走査手段と、前記スポット光に基づく前
記試料からの光をアナログ電気信号に変換する光電変換
手段と、前記アナログ電気信号をデジタル電気信号に変
換するＡ／Ｄ変換手段と、前記切換部によるレーザ光の
切り換え状態に応じて、１ピクセル走査に対応する前記
デジタル電気信号に、何れのレーザ光が照射されたこと
により得られたものであるか及び何れのピクセルを走査
したのもであるかを示す識別情報を、付帯させて記録す
る記録手段と、該記録部に記録された前記デジタル電気
信号に応じた画像を表示する表示手段と、を備えたレー
ザ走査型共焦点顕微鏡装置である。According to a twelfth aspect of the present invention, switching means for switching a laser beam to be irradiated onto the sample to a laser beam having at least a different wavelength for each pixel scanning, and on the sample,
Scanning means for scanning spot light which is laser light switched by the switching unit, photoelectric conversion means for converting light from the sample based on the spot light into an analog electric signal, and the analog electric signal as a digital electric signal Which is obtained by irradiating the digital electric signal corresponding to one pixel scanning with any of the laser beams according to the A / D conversion means for converting into the A / D conversion unit and the switching state of the laser beam by the switching unit. Recording means for additionally recording identification information indicating whether or not and which pixel has been scanned, and display means for displaying an image corresponding to the digital electric signal recorded in the recording portion. And a laser scanning confocal microscope apparatus including.

【００２３】上記の構成によれば、１ピクセル走査に対
応する画像情報に識別情報が付帯されるので、後に、そ
の識別情報から何れのレーザ光により得られたものであ
るかを特定することができる。よって、複数のレーザ光
を励起光として用いる測定にレーザ走査型共焦点顕微鏡
装置を適用させることができる。また、その識別情報か
ら何れのピクセルを走査したものであるかを特定するこ
ともできるので、その識別情報に基づいて画像構築を行
うことが可能になる。According to the above arrangement, since the identification information is attached to the image information corresponding to one pixel scanning, it is possible to specify later by which laser beam the laser light was obtained from the identification information. it can. Therefore, the laser scanning confocal microscope device can be applied to the measurement using a plurality of laser lights as excitation light. Further, since it is possible to specify which pixel is scanned by using the identification information, it becomes possible to construct an image based on the identification information.

【００２４】本発明の第十三の態様は、１ライン走査毎
に、試料に照射させるレーザ光を少なくとも波長の異な
るレーザ光に切り換える切換手段と、前記試料上に、前
記切換部により切り換えられたレーザ光であるスポット
光を走査する走査手段と、前記スポット光に基づく前記
試料からの光をアナログ電気信号に変換する光電変換手
段と、前記アナログ電気信号をデジタル電気信号に変換
するＡ／Ｄ変換手段と、前記切換部によるレーザ光の切
り換え状態に応じて、１ライン走査に対応する前記デジ
タル電気信号に、何れのレーザ光が照射されたことによ
り得られたものであるか及び何れのラインを走査したの
もであるかを示す識別情報を、付帯させて記録する記録
手段と、該記録部に記録された前記デジタル電気信号に
応じた画像を表示する表示手段と、を備えたレーザ走査
型顕共焦点微鏡装置である。According to a thirteenth aspect of the present invention, switching means for switching the laser light with which the sample is irradiated to the laser light having at least different wavelengths for each line scanning and the switching part on the sample are switched. Scanning means for scanning spot light which is laser light, photoelectric conversion means for converting light from the sample based on the spot light into an analog electric signal, and A / D conversion for converting the analog electric signal into a digital electric signal Means, and which laser light is obtained by irradiating the digital electric signal corresponding to one-line scanning with which laser light is switched by the switching unit and which line. Recording means for additionally recording identification information indicating whether or not scanning has been performed, and an image corresponding to the digital electric signal recorded in the recording portion is displayed. A display unit that is a laser scanning Arawatomo focal microscope apparatus having a.

【００２５】上記の構成によれば、１ライン走査に対応
する画像情報に識別情報が付帯されるので、後に、その
識別情報から何れのレーザ光により得られたものである
かを特定することができる。よって、複数のレーザ光を
励起光として用いる測定にレーザ走査型共焦点顕微鏡装
置を適用させることができる。また、その識別情報から
何れのラインを走査したものであるかを特定することも
できるので、その識別情報に基づいて画像構築を行うこ
とが可能になる。According to the above arrangement, since the identification information is attached to the image information corresponding to the one-line scanning, it is possible to specify later by which laser beam the laser light was obtained from the identification information. it can. Therefore, the laser scanning confocal microscope device can be applied to the measurement using a plurality of laser lights as excitation light. Also, since it is possible to specify which line is scanned from the identification information, it is possible to construct an image based on the identification information.

【００２６】本発明の第十四の態様は、１フレーム走査
毎に、試料に照射させるレーザ光を少なくとも波長の異
なるレーザ光に切り換える切換手段と、前記試料上に、
前記切換部により切り換えられたレーザ光であるスポッ
ト光を走査する走査手段と、前記スポット光に基づく前
記試料からの光をアナログ電気信号に変換する光電変換
手段と、前記アナログ電気信号をデジタル電気信号に変
換するＡ／Ｄ変換手段と、前記切換部によるレーザ光の
切り換え状態に応じて、１フレーム走査に対応する前記
デジタル電気信号に、何れのレーザ光が照射されたこと
により得られたものであるかを示す識別情報を、付帯さ
せて記録する記録手段と、該記録部に記録された前記デ
ジタル電気信号に応じた画像を表示する表示手段と、を
備えたレーザ走査型共焦点顕微鏡装置である。According to a fourteenth aspect of the present invention, switching means for switching a laser beam to be irradiated onto the sample to a laser beam having at least a different wavelength for each frame scanning, and on the sample,
Scanning means for scanning spot light which is laser light switched by the switching unit, photoelectric conversion means for converting light from the sample based on the spot light into an analog electric signal, and the analog electric signal as a digital electric signal Which is obtained by irradiating the digital electric signal corresponding to one-frame scanning with any of the laser beams according to the A / D converting means for converting into A laser scanning confocal microscope apparatus comprising: a recording unit that additionally records identification information indicating whether or not there is displayed, and a display unit that displays an image corresponding to the digital electric signal recorded in the recording unit. is there.

【００２７】上記の構成によれば、１フレーム走査に対
応する画像情報に識別情報が付帯されるので、後に、そ
の識別情報から何れのレーザ光により得られたものであ
るかを特定することができる。よって、複数のレーザ光
を励起光として用いる測定にレーザ走査型共焦点顕微鏡
装置を適用させることができる。According to the above construction, the identification information is attached to the image information corresponding to one frame scanning, so that it is possible to specify later by which laser beam the laser light was obtained from the identification information. it can. Therefore, the laser scanning confocal microscope device can be applied to the measurement using a plurality of laser lights as excitation light.

【００２８】[0028]

【発明の実施の形態】以下、本発明の実施の形態を図面
を参照しながら説明する。図１は、本発明の第一の実施
の形態に係るレーザ走査型顕共焦点微鏡装置の構成例を
示す図である。BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION Embodiments of the present invention will be described below with reference to the drawings. FIG. 1 is a diagram showing a configuration example of a laser scanning microscope confocal microscope apparatus according to the first embodiment of the present invention.

【００２９】同図において、本実施の形態に係るレーザ
走査型顕共焦点微鏡装置は、レーザ走査型顕共焦点微鏡
本体１、コンピュータ２、操作パネル３、レーザ光源装
置４、及び画像モニター５等を含んで構成され、レーザ
走査型顕共焦点微鏡本体１、操作パネル３、及びレーザ
光源装置４は、それぞれコンピュータ２に接続されてい
る。In FIG. 1, the laser scanning microscope confocal microscope apparatus according to the present embodiment comprises a laser scanning microscope confocal microscope body 1, a computer 2, an operation panel 3, a laser light source device 4, and an image monitor. 5, the laser scanning microscope confocal microscope body 1, the operation panel 3, and the laser light source device 4 are connected to a computer 2, respectively.

【００３０】レーザ走査型顕共焦点微鏡本体１は、励起
用ダイクロックミラー１０１、走査ユニット１０２、レ
ボルバ１０３、対物レンズ１０４、ステージ１０５、ダ
イクロックミラー１０７、レンズ１０８、コンフォーカ
ルアパーチャ１０９、及び光電変換器１１０等を含んで
構成されている。この共焦点顕微鏡本体１において、レ
ーザ光源装置４から入射されたレーザ光は、励起用ダイ
クロイックミラー１０１により反射され、走査ユニット
１０２に入射される。走査ユニット１０２は、Ｘ軸方向
走査用のガルバノメータミラーとＹ軸方向走査用のガル
バノメータミラー等を有し、励起用ダイクロックミラー
１０１により反射されたレーザ光を、コンピュータ２か
ら出力される走査制御信号に従ってＸＹ走査するととも
に、Ｘ軸方向走査による１ラインの走査毎に走査制御終
了信号をコンピュータ２へ出力する。或いは、必要に応
じて、１ピクセルの走査毎に走査制御終了信号を出力す
るようにすることも可能である。この走査ユニット１０
２によりＸＹ走査されたレーザ光は、レボルバ１０３に
取り付けられた対物レンズ１０４を介して、ステージ１
０５上に載置された観察試料１０６上にスポット光とし
て照射される。このスポット光による観察試料１０６か
らの光（反射光、透過光、又は蛍光等）は、入射光路に
戻され、ダイクロイックミラー１０７により反射され
て、レンズ１０８により集光される。このレンズ１０８
による集光位置には、コンフォーカルアパーチャ１０９
が配置され、共焦点光学系を形成している。このコンフ
ォーカルアパーチャ１０９を通過した光は、フォトマル
チプライヤ等の光電変換器１１０に入力され、アナログ
電気信号に変換されて、コンピュータ２に入力される。The laser scanning microscope confocal microscope body 1 includes an excitation dichroic mirror 101, a scanning unit 102, a revolver 103, an objective lens 104, a stage 105, a dichroic mirror 107, a lens 108, a confocal aperture 109, and It is configured to include the photoelectric converter 110 and the like. In the confocal microscope main body 1, the laser light incident from the laser light source device 4 is reflected by the excitation dichroic mirror 101 and is incident on the scanning unit 102. The scanning unit 102 has a galvanometer mirror for scanning in the X-axis direction, a galvanometer mirror for scanning in the Y-axis direction, and the like, and a scanning control signal output from the computer 2 for the laser light reflected by the excitation dichroic mirror 101. In accordance with the XY scanning, the scanning control end signal is output to the computer 2 every time one line is scanned by the X-axis direction scanning. Alternatively, it is possible to output the scan control end signal for each scan of one pixel, if necessary. This scanning unit 10
The laser light scanned in XY by the stage 2 passes through the objective lens 104 attached to the revolver 103 and the stage 1
The observation sample 106 placed on the substrate 05 is irradiated with spot light. The light (reflected light, transmitted light, fluorescence, or the like) from the observation sample 106 due to this spot light is returned to the incident optical path, reflected by the dichroic mirror 107, and condensed by the lens 108. This lens 108
Confocal aperture 109
Are arranged to form a confocal optical system. The light that has passed through the confocal aperture 109 is input to a photoelectric converter 110 such as a photomultiplier, converted into an analog electric signal, and input to the computer 2.

【００３１】操作パネル３は、キーボードの他、トラッ
クボール、ジョイスティツク、若しくはマウス等のポイ
ンティングデバイス等を備え、観察者からの各種指示を
受け付け、それをコンピュータ２へ通知する。例えば、
観察者からレーザ光の走査開始指示、画像入力指示、光
電変換器１１０の感度調整指示等を受け付け、それをコ
ンピュータへ通知する。The operation panel 3 includes a keyboard, a pointing device such as a trackball, a joystick, or a mouse, and receives various instructions from an observer and notifies the computer 2 of them. For example,
It receives a laser beam scanning start instruction, an image input instruction, a sensitivity adjustment instruction for the photoelectric converter 110, and the like from an observer, and notifies the computer thereof.

【００３２】レーザ光源装置４は、少なくとも波長の異
なるレーザ光を発する複数のレーザ光源と、ＡＯＴＦ
（音響光学素子）或いはＡＯＭ／ＥＯＭ等の光学素子及
びシャッター等を含むレーザ光源切り換え装置４０１等
を備え、コンピュータ２の制御の基に、レーザ走査型顕
共焦点微鏡本体１へ入射させるレーザ光を切り換える。
例えば、そのレーザ光は、操作パネル３を介した観察者
による指示に基づいて切り換えられる。The laser light source device 4 includes a plurality of laser light sources that emit laser light having different wavelengths, and an AOTF.
A laser light source switching device 401 including an acousto-optical element or an optical element such as an AOM / EOM and a shutter, and the like, and a laser beam to be incident on the laser scanning microscope confocal microscope main body 1 under the control of the computer 2. Switch.
For example, the laser light is switched based on an instruction from an observer via the operation panel 3.

【００３３】画像モニター５は、コンピュータ２から出
力されたデジタルデータに応じた画像や走査メニュー等
を表示する。コンピュータ２は、計算・処理部２ａ、Ａ
／Ｄ入力ＣＨ２ｂ、メモリ２ｃ、及び制御プログラム２
ｄが記録されている記録媒体（不図示）等を備えてい
る。Ａ／Ｄ入力ＣＨ２ｂは、光電変換器１１０から出力
された、観察試料１０６に応じたアナログ電気信号をデ
ジタル電気信号に変換する。メモリ２ｃは、位置情報の
メモリ領域と画像メモリ領域とを有し、位置情報のメモ
リ領域には、走査最終ライン位置（或いは走査最終ピク
セル位置）等が記憶され、画像メモリ領域には、Ａ／Ｄ
入力ＣＨ２ｂによりＡ／Ｄ変換されたデジタル電気信
号、すなわち観察試料１０６に応じた画像情報が記憶さ
れる。例えば、画像メモリ領域には、１０２４画素×７
６８画素×１２ビット（４０９６階調）の画素に対応す
る画像情報が記憶される。計算・処理部２ａは、いわゆ
るＣＰＵ（中央演算処理部）であり、不図示の記録媒体
に記録されている制御プログラム２ｄに従って、このレ
ーザ走査型顕共焦点微鏡装置全体の動作を制御する。例
えば、操作パネル３を介して通知された観察者からの走
査開始指示に応じて、走査制御信号を走査ユニット１０
２へ出力し、光電変換器１１０から出力された観察試料
１０６に応じたアナログ電気信号を、Ａ／Ｄ入力ＣＨ２
ｂによりデジタル電気信号（画像情報）に変換させてメ
モリ２ｃに転送し、そのメモリ２ｃに転送された画像情
報を画像モニター５へ出力し、その画像情報に応じた画
像（観察試料像）を画像モニター５に表示させる等の処
理を行う。また、その他、操作パネル３を介して通知さ
れた観察者からの指示に応じて、走査メニュー等を画像
モニター５に表示させる処理や、Ａ／Ｄ入力ＣＨ２ｂの
ゲイン，オフセット等の設定処理や、光電変換器１１０
の印加電圧，ゲイン，オフセット等の設定処理や、走査
ユニット１０２の設定処理や、出射させるレーザ光の設
定等のレーザ光源装置４の設定処理等も行う。The image monitor 5 displays an image according to the digital data output from the computer 2, a scanning menu, and the like. The computer 2 includes a calculation / processing unit 2a, A
/ D input CH2b, memory 2c, and control program 2
A recording medium (not shown) in which d is recorded is provided. The A / D input CH2b converts an analog electric signal output from the photoelectric converter 110 according to the observation sample 106 into a digital electric signal. The memory 2c has a memory area for position information and an image memory area. The memory area for position information stores a scanning final line position (or a scanning final pixel position) and the like, and the image memory area has A / A D
A digital electric signal A / D converted by the input CH2b, that is, image information corresponding to the observation sample 106 is stored. For example, in the image memory area, 1024 pixels × 7
Image information corresponding to pixels of 68 pixels × 12 bits (4096 gradations) is stored. The calculation / processing unit 2a is a so-called CPU (central processing unit), and controls the operation of the entire laser scanning microscope confocal microscope apparatus according to a control program 2d recorded in a recording medium (not shown). For example, a scanning control signal is sent to the scanning unit 10 in response to a scanning start instruction from the observer notified via the operation panel 3.
2 and outputs an analog electric signal corresponding to the observation sample 106 output from the photoelectric converter 110 to the A / D input CH2.
It is converted into a digital electric signal (image information) by b and transferred to the memory 2c, the image information transferred to the memory 2c is output to the image monitor 5, and an image (observation sample image) corresponding to the image information is displayed. Processing such as displaying on the monitor 5 is performed. In addition, in addition, in accordance with an instruction from an observer notified via the operation panel 3, a process of displaying a scan menu or the like on the image monitor 5, a process of setting the gain and offset of the A / D input CH 2b, and the like, Photoelectric converter 110
Setting processing of the applied voltage, gain, offset and the like, setting processing of the scanning unit 102, setting processing of the laser light source device 4 such as setting of laser light to be emitted, and the like.

【００３４】続いて、前述の光電変換器１１０から出力
されたアナログ電気信号が、Ａ／Ｄ入力ＣＨ２ｂにより
デジタル電気信号に変換されてメモリ２ｃに転送される
までの構成について、更に詳しく説明する。但し、本実
施の形態において、コンピュータ２は、Ａ／Ｄ入力ＣＨ
２ｂを複数搭載可能に構成されており、本例では、２波
長励起１波長蛍光測定等に対応して、２つのＡ／Ｄ入力
ＣＨ２ｂ（２ｂ−１，２ｂ−２）が備えられているもの
とする。Next, the structure of the analog electric signal output from the above-mentioned photoelectric converter 110 is converted into a digital electric signal by the A / D input CH2b and transferred to the memory 2c in more detail. However, in the present embodiment, the computer 2 uses the A / D input CH.
It is configured such that a plurality of 2b can be mounted, and in this example, two A / D inputs CH2b (2b-1, 2b-2) are provided corresponding to two-wavelength excitation one-wavelength fluorescence measurement and the like. And

【００３５】図２は、その構成例を示した図である。同
図に示したように、前述の光電変換器１１０とＡ／Ｄ入
力ＣＨ２ｂの間には、計算・処理部２ａの制御の基に、
レーザ光源装置４によるレーザ光の切り換え状態に応じ
て、光電変換器１１０の出力先をＡ／Ｄ入力ＣＨ２ｂ−
１又は２ｂ−２の何れかへ切り換える信号分岐切り換え
装置２ｅが設けられている。このような構成により、光
電変換器１１０から出力されたアナログ電気信号は、信
号分岐切り換え装置２ｅによる切り換えに応じて、Ａ／
Ｄ入力ＣＨ２ｂ−１又は２ｂ−２の何れかに入力されて
デジタル電気信号に変換され、メモリ２ｃの画像メモリ
領域へ転送される。これにより、観察試料１０６からの
光に応じた画像情報を、例えば１フレーム毎（又は１ラ
イン毎或いは１ピクセル毎等）に切り分けてメモリ２ｃ
に格納することが可能になる。FIG. 2 is a diagram showing an example of the configuration. As shown in the figure, between the photoelectric converter 110 and the A / D input CH2b described above, under the control of the calculation / processing unit 2a,
According to the switching state of the laser light by the laser light source device 4, the output destination of the photoelectric converter 110 is A / D input CH2b-.
A signal branch switching device 2e for switching to either 1 or 2b-2 is provided. With such a configuration, the analog electric signal output from the photoelectric converter 110 is A / A according to the switching by the signal branch switching device 2e.
The D input is input to either CH2b-1 or 2b-2, converted into a digital electric signal, and transferred to the image memory area of the memory 2c. As a result, the image information according to the light from the observation sample 106 is divided into, for example, each frame (or each line or pixel), and the memory 2c.
Can be stored in.

【００３６】尚、本例では、この信号分岐切り換え装置
２ｅは、コンピュータ２の内部に備えられているもので
あるが、これがその外部に備えられるようにしても良
い。続いて、上述した構成のレーザ走査型顕共焦点微鏡
装置によって行われる制御処理について説明する。ここ
では、その制御処理の一例として、蛍光試薬 fura-2 を
用いた２波長励起１波長蛍光測定処理について説明す
る。尚、この測定処理は、計算・処理部２ａが、前述の
不図示の記録媒体に記録されている制御プログラム２ｄ
を読み込んで実行することによって実現される。In this example, the signal branch switching device 2e is provided inside the computer 2, but it may be provided outside the computer 2. Next, the control process performed by the laser scanning microscope confocal microscope apparatus having the above-described configuration will be described. Here, as an example of the control process, a dual-wavelength excitation single-wavelength fluorescence measurement process using the fluorescent reagent fura-2 will be described. In this measurement process, the calculation / processing unit 2a uses the control program 2d recorded in the recording medium (not shown).
It is realized by reading and executing.

【００３７】この測定処理では、まず、操作パネル３を
介して観察者から、レーザ光源装置４から出射させる波
長の異なる２種類のレーザ光の設定指示や、Ａ／Ｄ入力
ＣＨ２ｂ−１及び２ｂ−２のゲインやオフセットの設定
指示、等といった本測定に係る各種設定指示が受け付け
られ、各指示に応じた設定が為される。本例では、この
ときに、波長の異なる２種類のレーザ光として、波長Ａ
のレーザ光と波長Ｂのレーザ光が設定指示されたものと
する。In this measurement processing, first, an observer via the operation panel 3 issues an instruction to set two types of laser light having different wavelengths to be emitted from the laser light source device 4, and A / D input CHs 2b-1 and 2b-. Various setting instructions relating to the main measurement, such as the gain and offset setting instructions of No. 2, etc., are accepted, and the setting according to each instruction is performed. In this example, at this time, as the two types of laser light having different wavelengths, the wavelength A
It is assumed that the laser light of and the laser light of wavelength B are set and instructed.

【００３８】続いて、操作パネル３を介して走査開始指
示が受け付けられると、走査ユニット１０２が制御され
て実際に観察試料１０６上の走査が開始される。まず、
レーザ光源装置４の切り換え制御により波長Ａのレーザ
光が照射されて１フレームの走査が行われ、波長Ａのレ
ーザ光による観察試料１０６からの光に応じた１フレー
ムの画像情報が取得される。但し、このときには、レー
ザ光源装置４によるレーザ光の切り換え状態が波長Ａの
レーザ光が照射されるように切り換えられていることに
対応して、その波長Ａのレーザ光が照射されたときの観
察試料１０６からの光に対応するアナログ電気信号がＡ
／Ｄ入力ＣＨ２ｂ−１に入力されるように信号分岐切り
換え装置２ｅが切り換えられ、そのＡ／Ｄ入力ＣＨ２ｂ
−１によりＡ／Ｄ変換されたデジタル電気信号（画像情
報）は、メモリ２ｃの画像メモリ領域に格納される。こ
れにより、メモリ２ｃの画像メモリ領域には、Ａ／Ｄ入
力ＣＨ２ｂ−１から出力されたデジタル電気信号（画像
情報）に基づく１フレームの画像情報（Ｆｒａｍｅ画像
２０２−ａ）が格納される。Subsequently, when a scanning start instruction is accepted via the operation panel 3, the scanning unit 102 is controlled to actually start scanning on the observation sample 106. First,
Laser light of wavelength A is emitted by the switching control of the laser light source device 4 to scan one frame, and image information of one frame corresponding to light from the observation sample 106 by the laser light of wavelength A is acquired. However, at this time, the switching state of the laser light by the laser light source device 4 is switched so that the laser light of the wavelength A is irradiated, and the observation when the laser light of the wavelength A is irradiated is performed. The analog electric signal corresponding to the light from the sample 106 is A
The signal branch switching device 2e is switched so as to be input to the / D input CH2b-1, and the A / D input CH2b
The digital electric signal (image information) A / D converted by -1 is stored in the image memory area of the memory 2c. As a result, one frame of image information (Frame image 202-a) based on the digital electric signal (image information) output from the A / D input CH2b-1 is stored in the image memory area of the memory 2c.

【００３９】続いて、同様にして、レーザ光源装置４の
切り換え制御により波長Ｂのレーザ光が照射されて１フ
レームの走査が行われ、波長Ｂのレーザ光による観察試
料１０６からの光に応じた１フレームの画像情報が取得
される。但し、このときには、レーザ光源装置４による
レーザ光の切り換え状態が波長Ｂのレーザ光が照射され
るように切り換えられていることに対応して、その波長
Ｂのレーザ光が照射されたときの観察試料１０６からの
光に対応するアナログ電気信号がＡ／Ｄ入力ＣＨ２ｂ−
２に入力されるように信号分岐切り換え装置２ｅが切り
換えられ、そのＡ／Ｄ入力ＣＨ２ｂ−２によりＡ／Ｄ変
換されたデジタル電気信号（画像情報）は、メモリ２ｃ
の画像メモリ領域に格納される。これにより、メモリ２
ｃの画像メモリ領域には、Ａ／Ｄ入力ＣＨ２ｂ−２から
出力されたデジタル電気信号（画像情報）に基づく１フ
レームの画像情報（Ｆｒａｍｅ画像２０２−ｂ）が格納
される。Subsequently, in the same manner, laser light of wavelength B is irradiated by the switching control of the laser light source device 4 to perform one frame of scanning, and the laser light of wavelength B responds to the light from the observation sample 106. Image information for one frame is acquired. However, at this time, the switching of the laser light by the laser light source device 4 is switched so that the laser light of the wavelength B is irradiated, and the observation when the laser light of the wavelength B is irradiated is performed. The analog electric signal corresponding to the light from the sample 106 is the A / D input CH2b-
The signal branch switching device 2e is switched so as to be input to the digital signal 2 and the digital electric signal (image information) A / D converted by the A / D input CH2b-2 is stored in the memory 2c.
Stored in the image memory area. This allows the memory 2
Image information (Frame image 202-b) of one frame based on the digital electric signal (image information) output from the A / D input CH2b-2 is stored in the image memory area of c.

【００４０】続いて、メモリ２ｃの画像メモリ領域に格
納されたＦｒａｍｅ画像２０２−ａとＦｒａｍｅ画像２
０２−ｂとが画像モニター５へ出力されて、それぞれの
画像情報に対応する画像、すなわち波長Ａのレーザ光を
照射することにより得られた観察試料像と波長Ｂのレー
ザ光を照射することにより得られた観察試料像とが画像
モニター５に表示されると共に、それらの画像情報を用
いて所定の演算が行われ、その演算結果に基づく画像が
画像モニター５に表示される。Subsequently, the frame image 202-a and the frame image 2 stored in the image memory area of the memory 2c
02-b is output to the image monitor 5, and the images corresponding to the respective image information, that is, the observation sample image obtained by irradiating the laser light of the wavelength A and the laser light of the wavelength B are irradiated. The obtained observation sample image is displayed on the image monitor 5, a predetermined calculation is performed using the image information, and an image based on the calculation result is displayed on the image monitor 5.

【００４１】例えば、このときに、それらの画像情報を
用いて画像情報の比（輝度値の比、強度比等）が求めら
れ、その比に基づいてカルシウムイオン濃度が求めら
れ、その求められたカルシウムイオン濃度に基づく画像
が画像モニター５に表示される。また、その画像情報の
比を求める際に、それぞれの画像情報の輝度値を均一に
するために、必要に応じて、（波長Ａのレーザ光に係る
画像情報の輝度値−１００）／（波長Ｂのレーザ光に係
る画像情報の輝度値−１０００）等といった演算も行わ
れる。また、その他、それらの画像情報を用いてユーザ
の要求に応じた演算を行わせ、その演算結果やその演算
結果に基づく画像を画像モニター５に表示させるように
しても良い。For example, at this time, the image information ratio (luminance value ratio, intensity ratio, etc.) is obtained using the image information, the calcium ion concentration is obtained based on the ratio, and the obtained value is obtained. An image based on the calcium ion concentration is displayed on the image monitor 5. Further, when obtaining the ratio of the image information, in order to make the luminance values of the respective image information uniform, (luminance value of image information relating to laser light of wavelength A-100) / (wavelength) A calculation such as the brightness value of the image information related to the B laser beam −1000) is also performed. Alternatively, the image information may be used to perform an operation according to a user's request, and the operation result or an image based on the operation result may be displayed on the image monitor 5.

【００４２】以上、本実施の形態によれば、蛍光試薬 f
ura-2 を使用した２波長励起１波長蛍光測定を行うこと
が可能なレーザ走査型顕共焦点微鏡装置を実現すること
ができる。また、波長Ａのレーザ光による画像情報が取
得されてから、波長Ｂのレーザ光による画像情報が取得
されるまでに、１フレームの画像情報取得に要する時間
差が生じるものの、観察しながらほぼリアルタイムにカ
ルシウムイオン濃度の定量計測が可能になる。また、Ａ
／Ｄ入力ＣＨ２ｂ−１，２ｂ−２毎に、ゲイン及びオフ
セットの設定が可能であるので、Ａ／Ｄ入力ＣＨ２ｂ−
１に波長Ａのレーザ光に特化したゲイン及びオフセット
を設定し、Ａ／Ｄ入力ＣＨ２ｂ−２に波長Ｂのレーザ光
に特化したゲイン及びオフセットを設定する、といった
各波長のレーザ光に特化したゲイン及びオフセットの調
整が可能になり、よりノイズがカットされた画像の取得
が可能になり、画像比較を、より容易にすることができ
る。As described above, according to the present embodiment, the fluorescent reagent f
It is possible to realize a laser scanning microscope confocal microscope apparatus capable of performing dual wavelength excitation single wavelength fluorescence measurement using the ura-2. In addition, although there is a time lag required for acquiring one frame of image information from the acquisition of the image information of the laser beam of wavelength A to the acquisition of the image information of the laser beam of wavelength B, almost real time while observing. Quantitative measurement of calcium ion concentration becomes possible. Also, A
Since gain and offset can be set for each / D input CH2b-1 and 2b-2, A / D input CH2b-
The gain and offset specialized for the laser beam of wavelength A are set to 1, and the gain and offset specialized for the laser beam of wavelength B are set to A / D input CH2b-2. The adjusted gain and offset can be adjusted, an image with less noise can be acquired, and image comparison can be facilitated.

【００４３】尚、本実施の形態では、Ｆｒａｍｅ画像２
０２−ａとＦｒａｍｅ画像２０２−ｂの両方のＦｒａｍ
ｅ画像がメモリ２ｃに格納された後に、それらを画像モ
ニター５へ出力するようにしているが、先に格納された
Ｆｒａｍｅ画像を、先に画像モニター５へ出力するよう
にしても良い。このようにすることで、よりリアルタイ
ムに画像を表示させることが可能になる。In this embodiment, the frame image 2
Frame of both 02-a and Frame image 202-b
Although the e-images are stored in the memory 2c and then output to the image monitor 5, the Frame images stored in advance may be output to the image monitor 5 first. By doing so, the image can be displayed in more real time.

【００４４】また、本実施の形態において、波長Ａのレ
ーザ光によるアナログ電気信号をＡ／Ｄ入力ＣＨ２ｂ−
２へ、波長Ｂのレーザ光によるアナログ電気信号をＡ／
Ｄ入力ＣＨ２ｂ−１へ出力させるように、信号分岐切り
換え装置２ｅが切り換え制御されるものであっても良
い。Further, in the present embodiment, an analog electric signal generated by the laser light of wavelength A is input to the A / D input CH2b-.
2 to the analog electric signal by the laser light of wavelength B
The signal branch switching device 2e may be switch-controlled so as to output to the D input CH2b-1.

【００４５】また、本実施の形態において、図２に示し
た構成を、例えば、信号分岐切り換え装置２ｅを省い
て、光電変換器１１０の出力先を直接Ａ／Ｄ入力ＣＨ２
ｂ−１及び２ｂー２とし、そのＡ／Ｄ入力ＣＨ２ｂ−１
及び２ｂ−２に設定するサンプリングクロックにより、
対応する何れか１つのＡ／Ｄ入力ＣＨ２ｂにＡ／Ｄ変換
させるように構成しても良く、或いは何れのＡ／Ｄ入力
ＣＨ２ｂにもＡ／Ｄ変換させ、その変換されたデジタル
電気信号の相関により、使用するデジタル電気信号を取
得するように構成しても良い。Further, in the present embodiment, the configuration shown in FIG. 2 is used, for example, by omitting the signal branch switching device 2e and directly outputting the output destination of the photoelectric converter 110 to the A / D input CH2.
b-1 and 2b-2, and its A / D input CH2b-1
And the sampling clock set to 2b-2,
It may be configured such that any one of the corresponding A / D input CH2b is A / D converted, or any A / D input CH2b is A / D converted and the correlation of the converted digital electric signal is obtained. May be configured to acquire a digital electric signal to be used.

【００４６】また、本実施の形態では、コンピュータ２
が２つのＡ／Ｄ入力ＣＨ２ｂを備えて、励起波長として
波長の異なる２種類のレーザ光を用いた測定が行われる
ものであったが、３つ以上のＡ／Ｄ入力ＣＨを備えるよ
うに構成しても良く、その場合には、励起波長として波
長の異なる３種類以上のレーザ光を用いた測定が可能に
なる。Further, in the present embodiment, the computer 2
Was equipped with two A / D input CH2b, and measurement was performed using two types of laser light having different wavelengths as excitation wavelengths. However, it is configured to have three or more A / D input CHs. However, in that case, it is possible to perform measurement using three or more types of laser light having different wavelengths as the excitation wavelength.

【００４７】次に、本発明の第二の実施の形態について
説明する。本実施の形態は、光電変換器１０から出力さ
れたアナログ電気信号が、Ａ／Ｄ入力ＣＨ２ｂによりデ
ジタル電気信号に変換されてメモリ２ｃに転送されるま
での構成及び制御処理が、前述の第一の実施の形態と異
なる。そこで、ここでは、その構成及び制御処理につい
て説明する。Next, a second embodiment of the present invention will be described. In the present embodiment, the configuration and control processing until the analog electric signal output from the photoelectric converter 10 is converted into a digital electric signal by the A / D input CH2b and transferred to the memory 2c is the above-mentioned first embodiment. Different from the embodiment. Therefore, here, the configuration and the control process will be described.

【００４８】図３は、本発明の第二の実施の形態に係
る、光電変換器１１０から出力されたアナログ電気信号
が、Ａ／Ｄ入力ＣＨ２ｂによりデジタル電気信号に変換
されてメモリ２ｃに転送されるまでの構成例を示した図
である。同図に示したように、その構成は図２に示した
ものとは異なり、信号分岐切り換え装置２ｅを備えてお
らず、光電変換器１１０の出力先は１つのＡ／Ｄ入力Ｃ
Ｈ２ｂのみである。また、Ａ／Ｄ入力ＣＨ２ｂによりＡ
／Ｄ変換されたデジタル電気信号（画像情報）に基づく
１フレームの画像情報は、計算・処理部２ａの制御の基
に、レーザ光源装置４によるレーザ光の切り換え状態に
応じて、その画像情報の基となる観察試料１０６からの
光が何れの波長によるレーザ光により生じたものである
かを示す波長識別情報が付帯されて、メモリ２ｃに格納
される。これにより、観察試料１０６からの光に応じた
画像情報を、例えば１フレーム毎（又は１ライン毎或い
は１ピクセル毎等）に切り分けてメモリ２ｃに格納する
ことが可能になる。In FIG. 3, an analog electric signal output from the photoelectric converter 110 according to the second embodiment of the present invention is converted into a digital electric signal by the A / D input CH2b and transferred to the memory 2c. It is the figure which showed the structural example until it. As shown in the figure, the configuration is different from that shown in FIG. 2, and the signal branch switching device 2e is not provided, and the output destination of the photoelectric converter 110 is one A / D input C.
H2b only. In addition, A / D input CH2b
The image information of one frame based on the D / D-converted digital electric signal (image information) is based on the control of the calculation / processing unit 2a, and the image information of the image information is changed according to the switching state of the laser light by the laser light source device 4. Wavelength identification information indicating which wavelength of the laser beam the light from the observation sample 106 that is the base is generated is attached and stored in the memory 2c. This makes it possible to divide the image information corresponding to the light from the observation sample 106 into, for example, each frame (or each line or pixel) and store it in the memory 2c.

【００４９】続いて、このような構成を有するレーザ走
査型顕共焦点微鏡装置によって行われる制御処理につい
て説明する。ここでは、その制御処理の一例として、蛍
光試薬 fura-2 を用いた２波長励起１波長蛍光測定処理
について説明する。尚、この測定処理は、計算・処理部
２ａが、前述の不図示の記録媒体に記録されている制御
プログラム２ｄを読み込んで実行することによって実現
される。Next, the control processing performed by the laser scanning microscope confocal microscope apparatus having such a configuration will be described. Here, as an example of the control process, a dual-wavelength excitation single-wavelength fluorescence measurement process using the fluorescent reagent fura-2 will be described. Note that this measurement processing is realized by the calculation / processing unit 2a by reading and executing the control program 2d recorded in the recording medium (not shown).

【００５０】この測定処理では、まず、操作パネル３を
介して観察者から、レーザ光源装置４から出射させる波
長の異なる２種類のレーザ光の設定指示等の本測定に係
る各種設定指示が受け付けられ、各指示に応じた設定が
為される。尚、本例においても、波長の異なる２種類の
レーザ光として、波長Ａのレーザ光と波長Ｂのレーザ光
が設定指示されたものとする。In this measurement process, first, various setting instructions relating to the main measurement, such as setting instructions for two types of laser beams having different wavelengths emitted from the laser light source device 4, are received from the observer via the operation panel 3. , Settings are made according to each instruction. Also in this example, it is assumed that the laser light of wavelength A and the laser light of wavelength B are instructed to be set as the two types of laser light having different wavelengths.

【００５１】続いて、操作パネル３を介して走査開始指
示が受け付けられると、走査ユニット１０２が制御され
て実際に観察試料１０６上の走査が開始される。まず、
レーザ光源装置４の切り換え制御により波長Ａのレーザ
光が照射されて１フレームの走査が行われ、波長Ａのレ
ーザ光による観察試料１０６からの光に応じた１フレー
ムの画像情報が取得される。但し、このときには、レー
ザ光源装置４によるレーザ光の切り換え状態が波長Ａの
レーザ光が照射されるように切り換えられていることに
対応して、波長Ａのレーザ光による観察試料１０６から
の光に対応するデジタル電気信号（画像情報）に基づく
１フレームの画像情報（Ｆｒａｍｅ画像２０２−ａ）に
は、波長Ａのレーザ光によるものであることを示す波長
識別情報（例えばＣＨ１）が計算・処理部２ａにより付
帯されてメモリ２ｃに格納される。Then, when a scanning start instruction is accepted via the operation panel 3, the scanning unit 102 is controlled to actually start scanning on the observation sample 106. First,
Laser light of wavelength A is emitted by the switching control of the laser light source device 4 to scan one frame, and image information of one frame corresponding to light from the observation sample 106 by the laser light of wavelength A is acquired. However, at this time, since the switching state of the laser light by the laser light source device 4 is switched so that the laser light of the wavelength A is irradiated, the laser light of the wavelength A changes to the light from the observation sample 106. In the image information (Frame image 202-a) of one frame based on the corresponding digital electric signal (image information), the wavelength identification information (for example, CH1) indicating that it is due to the laser light of the wavelength A is the calculation / processing unit. It is attached by 2a and stored in the memory 2c.

【００５２】続いて、同様にして、レーザ光源装置４の
切り換え制御により波長Ｂのレーザ光が照射されて１フ
レームの走査が行われ、波長Ｂのレーザ光による観察試
料１０６からの光に応じた１フレームの画像情報が取得
される。但し、このときには、レーザ光源装置４による
レーザ光の切り換え状態が波長Ｂのレーザ光が照射され
るように切り換えられていることに対応して、波長Ｂの
レーザ光による観察試料１０６からの光に対応するデジ
タル電気信号（画像情報）に基づく１フレームの画像情
報（Ｆｒａｍｅ画像２０２−ｂ）には、波長Ｂのレーザ
光によるものであることを示す波長識別情報（例えばＣ
Ｈ２）が付帯されてメモリ２ｃに格納される。Subsequently, in the same manner, the laser light of the wavelength B is irradiated by the switching control of the laser light source device 4 to scan one frame, and the laser light of the wavelength B responds to the light from the observation sample 106. Image information for one frame is acquired. However, at this time, since the switching state of the laser light by the laser light source device 4 is switched so that the laser light of the wavelength B is irradiated, the laser light of the wavelength B is emitted from the observation sample 106. In the image information (Frame image 202-b) of one frame based on the corresponding digital electric signal (image information), the wavelength identification information (for example, C
H2) is attached and stored in the memory 2c.

【００５３】このように、波長識別情報が付帯されるこ
とによって、後に、メモリ２ｃに格納されている画像情
報が何れの波長のレーザ光によるものであるかを特定す
ることができると共に、その画像情報の分類が可能にな
る。以降の処理については、前述の第一の実施の形態と
同様であるが、本第二の実施の形態では、画像モニター
５への画像の表示や、カルシウムイオン濃度の定量計測
のための画像情報間の比（輝度値の比、強度比）の計算
（再計算含む）等といった画像情報を用いた演算は、画
像情報に付帯されている波長識別情報に基づいて行われ
る。By thus attaching the wavelength identification information, it is possible to later specify which wavelength of the laser light the image information stored in the memory 2c is, and also the image. It allows the classification of information. The subsequent processing is the same as in the first embodiment described above, but in the second embodiment, image information for displaying an image on the image monitor 5 and quantitatively measuring calcium ion concentration is used. Calculations using image information, such as calculation (including recalculation) of the ratio (brightness value ratio, intensity ratio) between them are performed based on the wavelength identification information attached to the image information.

【００５４】以上、本実施の形態によれば、より少ない
構成により、蛍光試薬 fura-2 を使用した２波長励起１
波長蛍光測定を行うことが可能なレーザ走査型顕共焦点
微鏡装置を実現することができ、その装置に係るコスト
を、より安価にすることができる。また、波長Ａのレー
ザ光による画像情報が取得されてから、波長Ｂのレーザ
光による画像情報が取得されるまでに、１フレームの画
像情報取得に要する時間差が生じるものの、観察しなが
らほぼリアルタイムにカルシウムイオン濃度の定量計測
が可能になる。また、第一の実施の形態における信号分
岐切り換え装置２ｅを持たないので、この信号分岐切り
換え装置２ｅのハード的な切り換え走査による処理時間
のロスを防ぐことができる。As described above, according to the present embodiment, the two-wavelength excitation 1 using the fluorescent reagent fura-2 is used with a smaller configuration.
A laser scanning microscope confocal microscope device capable of performing wavelength fluorescence measurement can be realized, and the cost of the device can be further reduced. In addition, although there is a time lag required for acquiring one frame of image information from the acquisition of the image information of the laser beam of wavelength A to the acquisition of the image information of the laser beam of wavelength B, almost real time while observing. Quantitative measurement of calcium ion concentration becomes possible. Further, since the signal branch switching device 2e of the first embodiment is not provided, it is possible to prevent a processing time loss due to a hardware switching scan of the signal branch switching device 2e.

【００５５】尚、本実施の形態では、２波長励起１波長
蛍光測定を例に説明したが、前述したように、メモリ２
ｃに格納される１フレームの画像情報には、何れのレー
ザ光によるものであるかを特定するための波長識別情報
が付帯されるようになるので、励起波長として波長の異
なる３種類以上のレーザ光を用いた測定にも適用可能で
あることは述べるまでもない。In the present embodiment, the two-wavelength excitation one-wavelength fluorescence measurement is described as an example, but as described above, the memory 2 is used.
Since one frame of image information stored in c is accompanied by wavelength identification information for specifying which laser light is used, three or more types of lasers having different wavelengths as excitation wavelengths are included. It goes without saying that it is also applicable to measurement using light.

【００５６】次に、本発明の第三の実施の形態について
説明する。本実施の形態は、前述の第二の実施の形態と
構成は同じであるが、制御処理が異なる。そこで、ここ
では、その制御処理の一例として、蛍光試薬 fura-2 を
使用した２波長励起１波長蛍光測定処理について説明す
る。尚、この測定処理は、コンピュータ２の計算・処理
部２ａが、前述の不図示の記録媒体に記録されている制
御プログラム２ｄを読み込んで実行することによって実
現される。Next, a third embodiment of the present invention will be described. The present embodiment has the same configuration as the second embodiment described above, but the control processing is different. Therefore, here, as an example of the control process, a dual-wavelength excitation single-wavelength fluorescence measurement process using the fluorescent reagent fura-2 will be described. The measurement process is realized by the calculation / processing unit 2a of the computer 2 by reading and executing the control program 2d recorded in the recording medium (not shown).

【００５７】図４は、本発明の第三の実施の形態に係
る、蛍光試薬 fura-2 を使用した２波長励起１波長蛍光
測定処理の処理内容を示すフローチャートである。尚、
同図に示したフローは、操作パネル３を介して観察者か
ら、レーザ光源装置４から出射させる波長の異なる２種
類のレーザ光の設定指示等の本測定に係る各種設定指示
が受け付けられた後に走査開始指示が受け付けられたと
きに開始される処理である。尚、本例においても、波長
の異なる２種類のレーザ光として、波長Ａのレーザ光と
波長Ｂのレーザ光が設定指示されたものとする。FIG. 4 is a flow chart showing the processing contents of the two-wavelength excitation one-wavelength fluorescence measurement processing using the fluorescent reagent fura-2 according to the third embodiment of the present invention. still,
The flow shown in the figure is after the observer via the operation panel 3 receives various setting instructions relating to the main measurement, such as setting instructions for two types of laser light having different wavelengths emitted from the laser light source device 4. This is a process that is started when a scan start instruction is received. Also in this example, it is assumed that the laser light of wavelength A and the laser light of wavelength B are instructed to be set as the two types of laser light having different wavelengths.

【００５８】同図において、まず、Ｓ４０１乃至Ｓ４０
４では、レーザ光源装置４の切り換え制御により、１ラ
インの走査ごとに波長Ａのレーザ光と波長Ｂのレーザ光
が交互に照射され、波長Ａのレーザ光による１ラインの
走査が行われたときの観察試料１０６からの光に対応す
るデジタル電気信号（画像情報）と、波長Ｂのレーザ光
によるレーザ光による１ラインの走査が行われたときの
観察試料１０６からの光に対応するデジタル電気信号
（画像情報）が、メモリ２ｃの画像メモリ領域に交互に
格納される。但し、この場合、同一のラインに対して、
波長Ａのレーザ光による走査と波長Ｂのレーザ光による
走査の２回の走査が行われる。すなわち、１ラインに対
しての波長Ａのレーザ光による走査が行われると、続い
てその同一ラインに対しての波長Ｂのレーザ光による走
査が行われ、それが終了すると、次の１ラインに対して
同様にして走査が行われ、１フレームの走査が終了する
まで、そのような１ライン毎の走査が繰り返される。ま
た、１ラインの走査が行われたときの観察試料１０６か
らの光に対応するデジタル電気信号（画像情報）に基づ
く１ラインの画像情報がメモリ２ｃの画像メモリ領域に
格納されるときには、その画像情報に、何れの波長のレ
ーザ光によるものであるかを特定するためのタグと何れ
のラインの画像情報であるかを特定するための位置情報
を含む識別情報が付帯されて格納される。尚、タグはレ
ーザ光源装置４によるレーザ光の切り換え状態等に応じ
て決定され、位置情報は走査ユニット１０２から送られ
る走査制御終了信号等に基づいて決定される。例えば、
波長Ａのレーザ光による１ライン目の走査に基づく画像
情報であることを示す識別情報は、ＴａｇＡ＆Ｌ１や、
ＣＨ１−Ｌ１等になる（同図参照）。この場合、Ｔａｇ
Ａ及びＣＨ１が波長Ａのレーザ光によるものであること
を示すタグであり、Ｌ１が１ライン目の画像情報である
ことを示す位置情報である。In the figure, first, S401 to S40.
In FIG. 4, when laser light of wavelength A and laser light of wavelength B are alternately irradiated every scanning of one line by switching control of the laser light source device 4, and scanning of one line by the laser light of wavelength A is performed. Digital electric signal (image information) corresponding to the light from the observation sample 106, and a digital electric signal corresponding to the light from the observation sample 106 when one line scanning is performed by the laser light of the wavelength B laser light (Image information) is alternately stored in the image memory area of the memory 2c. However, in this case, for the same line,
Two scans are performed, one with the laser light of wavelength A and the other with the laser light of wavelength B. That is, when the scanning with the laser light of the wavelength A is performed on one line, the scanning with the laser light of the wavelength B is subsequently performed on the same line. Similarly, scanning is performed in the same manner, and such scanning for each line is repeated until the scanning for one frame is completed. Further, when the image information of one line based on the digital electric signal (image information) corresponding to the light from the observation sample 106 when the scanning of one line is performed is stored in the image memory area of the memory 2c, the image is stored. The information is additionally stored with identification information including a tag for specifying which wavelength of the laser beam is used and identification information including position information for specifying which line of the image information. The tag is determined according to the switching state of the laser light by the laser light source device 4 and the like, and the position information is determined based on the scanning control end signal sent from the scanning unit 102. For example,
The identification information indicating that the image information is based on the scanning of the first line by the laser light of wavelength A is TagA & L1 or
CH1-L1 etc. (see the same figure). In this case, Tag
A and CH1 are tags indicating that the laser light having the wavelength A is used, and L1 is position information indicating that the image information is on the first line.

【００５９】Ｓ４０５では、前述のＳ４０１乃至Ｓ４０
４によりメモリ２ｃの画像メモリ領域に格納された１ラ
イン毎の画像情報に付帯されている識別情報に基づい
て、その１ライン毎の画像情報を用いて、波長Ａのレー
ザ光による１フレームの画像情報（同図の画像Ａ）と波
長Ｂのレーザ光による１フレームの画像情報（同図の画
像Ｂ）がデータ構築される。In S405, the above-mentioned S401 to S40 are performed.
Based on the identification information incidental to the image information for each line stored in the image memory area of the memory 2c by 4, the image information for each line is used to image one frame by the laser light of wavelength A. Information (image A in the figure) and image information of one frame by the laser light of the wavelength B (image B in the figure) are constructed as data.

【００６０】Ｓ４０６では、前ステップで作成された、
波長Ａのレーザ光による１フレームの画像情報と波長Ｂ
のレーザ光による１フレームの画像情報が画像モニター
５へ出力されて、それぞれの画像情報に対応する画像が
画像モニター５に表示されると共に、それらの画像情報
を用いて第一の実施の形態で述べたような所定の演算が
行われ、その演算結果に基づく画像が表示される。そし
て、本ステップの処理が終わると、本フローが終了す
る。In S406, the data created in the previous step,
Image information of one frame and wavelength B by laser light of wavelength A
The image information of one frame by the laser light of 1 is output to the image monitor 5, the image corresponding to each image information is displayed on the image monitor 5, and the image information is used in the first embodiment. The predetermined calculation as described above is performed, and the image based on the calculation result is displayed. Then, when the processing of this step ends, this flow ends.

【００６１】以上、本フローが実行されることによっ
て、蛍光試薬 fura-2 を使用した２波長励起１波長蛍光
測定が行われるようになる。続いて、前述のＳ４０５の
処理で説明した、１フレームの画像情報のデータ構築例
について更に詳しく説明する。As described above, by performing this flow, the two-wavelength excitation one-wavelength fluorescence measurement using the fluorescent reagent fura-2 is performed. Next, the data construction example of the image information of one frame described in the processing of S405 will be described in more detail.

【００６２】図５は、その１フレームの画像情報のデー
タ構築例を示した図である。同図に示したように、波長
Ａと波長Ｂのレーザ光による１ラインの走査毎に、その
１ラインの走査が行われたときの観察試料１０６からの
光が、光電変換器１１０によりアナログ電気信号に変換
され、続くＡ／Ｄ入力ＣＨ２ｂによりデジタル電気信号
（画像情報）に変換され、そのデジタル電気信号に基づ
く１ラインの画像情報が、前述の識別情報が付帯されて
メモリ２ｃの画像メモリ領域に格納される、といった処
理が繰り返される。これにより、メモリ２ｃの画像メモ
リ領域には、ＣＨ１−Ｌ１の画像情報（波長Ａのレーザ
光による１ライン目の画像情報）、ＣＨ２−Ｌ１の画像
情報（波長Ｂのレーザ光による１ライン目の画像情
報）、ＣＨ１−Ｌ２の画像情報（波長Ａのレーザ光によ
る２ライン目の画像情報）、・・・といった具合に、波
長Ａと波長Ｂのレーザ光による１ライン走査に対応する
画像情報が交互に格納され、波長Ａのレーザ光による１
フレーム分の走査と波長Ｂのレーザ光による１フレーム
分の走査が全て終了した後に、それらの識別情報に基づ
いてデータ構築が行われ、波長Ａのレーザ光によって得
られたＦｒａｍｅ画像２０２−ａと波長Ｂのレーザ光に
よって得られたＦｒａｍｅ画像２０２−ｂ、すなわち、
波長Ａのレーザ光を照射したときに得られた観察試料像
に対応する１フレームの画像情報と波長Ｂのレーザ光を
照射したときに得られた観察試料像に対応する１フレー
ムの画像情報が得られる。FIG. 5 is a diagram showing a data construction example of the image information of the one frame. As shown in the figure, every time one line is scanned by the laser light of wavelength A and wavelength B, the light from the observation sample 106 at the time when the one line is scanned is converted into analog electric power by the photoelectric converter 110. The signal is converted into a signal and then converted into a digital electric signal (image information) by the A / D input CH2b, and the image information of one line based on the digital electric signal is accompanied with the above-mentioned identification information and the image memory area of the memory 2c. Is stored in. As a result, in the image memory area of the memory 2c, the image information of CH1-L1 (the image information of the first line by the laser beam of wavelength A), the image information of CH2-L1 (the image information of the first line by the laser beam of wavelength B). Image information), image information of CH1-L2 (image information of the second line by the laser light of wavelength A), ..., Image information corresponding to 1-line scanning by the laser light of wavelength A and wavelength B. Alternately stored, 1 by wavelength A laser light
After the scanning for one frame and the scanning for one frame by the laser beam of wavelength B are all completed, data construction is performed based on the identification information, and the frame image 202-a obtained by the laser beam of wavelength A and Frame image 202-b obtained by the laser beam of wavelength B, that is,
One frame of image information corresponding to the observation sample image obtained when the laser beam of wavelength A is irradiated, and one frame of image information corresponding to the observation sample image obtained when the laser beam of wavelength B is irradiated can get.

【００６３】以上、本第三の実施の形態によれば、蛍光
試薬 fura-2 を使用した２波長励起１波長蛍光測定を行
うことが可能なレーザ走査型顕共焦点微鏡装置を実現す
ることができる。また、波長Ａのレーザ光による画像情
報が取得されてから、波長Ｂのレーザ光による画像情報
が取得されるまでの時間差は、１ラインの画像情報取得
に要する時間になるので、よりリアルタイムにカルシウ
ムイオン濃度等の定量計測が可能になる。As described above, according to the third embodiment, it is possible to realize a laser scanning microscope confocal microscope apparatus capable of performing dual wavelength excitation single wavelength fluorescence measurement using the fluorescent reagent fura-2. You can Further, the time difference from the acquisition of the image information by the laser light of the wavelength A to the acquisition of the image information by the laser light of the wavelength B is the time required to acquire the image information of one line, so that the calcium information can be obtained in more real time. Quantitative measurement of ion concentration etc. becomes possible.

【００６４】尚、本実施の形態では、２波長励起１波長
蛍光測定を例に説明したが、前述したように、メモリ２
ｃに格納される１ラインの画像情報には、何れの波長の
レーザ光によるものであるかを特定するためのタグと何
れのラインの画像情報であるかを特定するための位置情
報を含む識別情報が付帯されるようになるので、励起波
長として波長の異なる３種類以上のレーザ光を用いた測
定にも適用可能であることは述べるまでもない。In the present embodiment, the two-wavelength excitation one-wavelength fluorescence measurement has been described as an example.
The image information of one line stored in c includes a tag for specifying which wavelength of the laser light is used and an identification including position information for specifying which line of the image information. Needless to say, since information is added, it is applicable to measurement using three or more types of laser light having different wavelengths as excitation wavelengths.

【００６５】また、本実施の形態では、１ライン走査毎
にレーザ光源装置４による波長の異なるレーザ光の切り
換えが行われるものであったが、例えば、それが１ピク
セル走査毎に行われるようにしても良く、或いは所定範
囲の走査毎に行われるようにしても良い。その場合に
は、識別情報に、何れの１ピクセルであるか或いは何れ
の所定範囲であるかを特定するための位置情報を含める
ようにすれば良い。Further, in the present embodiment, the laser light source device 4 switches the laser light having different wavelengths for each line scanning, but, for example, it may be performed for each pixel scanning. Alternatively, it may be performed every scanning within a predetermined range. In that case, the identification information may include position information for specifying which one pixel or which predetermined range.

【００６６】次に、本発明の第三の実施の形態の変形例
について説明する。前述の第三の実施の形態では、メモ
リ２ｃに波長Ａのレーザ光による１フレーム分の画像情
報と波長Ｂのレーザ光による１フレーム分の画像情報と
が全て格納された後にデータ構築が行われ、構築された
それぞれの画像情報に応じたフレーム画像が画像モニタ
ー５に表示されると共に、構築されたそれぞれの画像情
報を用いた所定の演算による演算結果に基づく画像が画
像モニター５に表示されるものであったが、本変形例で
は、同一ラインに対する、波長Ａのレーザ光による１ラ
イン走査によって得られた画像情報と波長Ｂのレーザ光
による１ライン走査によって得られた画像情報とが、メ
モリ２ｃに格納される毎に、それぞれの１ライン走査に
よって得られた画像情報に応じたそれぞれのライン画像
が画像モニター５に表示されると共に、それぞれの１ラ
イン走査によって得られた画像情報を用いた所定の演算
による演算結果に基づくライン画像が表示されるもので
ある。Next, a modification of the third embodiment of the present invention will be described. In the above-described third embodiment, the data construction is performed after the memory 2c stores all the image information for one frame by the laser light of wavelength A and the image information for one frame by the laser light of wavelength B. , A frame image corresponding to each constructed image information is displayed on the image monitor 5, and an image based on a calculation result of a predetermined computation using each constructed image information is displayed on the image monitor 5. However, in the present modification, the image information obtained by one-line scanning with the laser beam of wavelength A and the image information obtained by one-line scanning with the laser beam of wavelength B for the same line are stored in the memory. Each time the image is stored in 2c, each line image corresponding to the image information obtained by each one-line scan is displayed on the image monitor 5 and In which the line image based on the calculation result of the predetermined calculation using the image information obtained by each of the one line scanning is displayed.

【００６７】図６は、そのような処理が行われる、本変
形例に係る２波長励起１波長蛍光測定処理の処理内容を
示すフローチャートであり、前述の図４に対応するフロ
ーチャートである。尚、この測定処理は、コンピュータ
２の計算・処理部２ａが、前述の不図示の記録媒体に記
録されている制御プログラム２ｄを読み込んで実行する
ことによって実現される。FIG. 6 is a flowchart showing the processing contents of the two-wavelength excitation one-wavelength fluorescence measurement processing according to the present modification, in which such processing is performed, and is a flowchart corresponding to FIG. 4 described above. The measurement process is realized by the calculation / processing unit 2a of the computer 2 by reading and executing the control program 2d recorded in the recording medium (not shown).

【００６８】図６において、まず、Ｓ６０１では、走査
対象となる１ライン（同一ライン）に対しての、波長Ａ
のレーザ光によって得られた画像情報と波長Ｂのレーザ
光によって得られた画像情報とが取得される。Ｓ６０２
では、前ステップで取得されたそれぞれの画像情報につ
いて、波長Ａのレーザ光によって得られたものであるか
否かが判定され、その判定結果がＹｅｓの場合にはＳ６
０３へ処理が進み、Ｎｏの場合にはＳ６０４へ処理が進
む。In FIG. 6, first, in S601, the wavelength A for one line (same line) to be scanned is
The image information obtained by the laser beam of No. 1 and the image information obtained by the laser beam of wavelength B are obtained. S602
Then, it is determined whether or not each of the image information acquired in the previous step is obtained by the laser light of wavelength A, and if the determination result is Yes, S6
The process proceeds to 03, and if No, the process proceeds to S604.

【００６９】Ｓ６０３では、前ステップで波長Ａのレー
ザ光によって得られた画像情報であると判定された画像
情報に、波長Ａのレーザ光によって得られたものである
ことを示すタグ（同図のタグ名Ａ）と何れのラインの画
像情報であるかを特定するための位置情報を含む識別情
報が付帯される。In step S603, a tag indicating that the image information determined to be the image information obtained by the laser beam of wavelength A in the previous step is the one obtained by the laser beam of wavelength A (see the same figure). Identification information including tag name A) and position information for identifying which line of image information is attached.

【００７０】Ｓ６０４では、Ｓ６０２で波長Ａのレーザ
光によって得られた画像情報であると判定されなかった
画像情報に、波長Ｂのレーザ光によって得られたもので
あることを示すタグ（同図のタグ名Ｂ）と何れのライン
の画像情報であるかを特定するための位置情報を含む識
別情報が付帯される。In S604, the image information not determined to be the image information obtained by the laser beam of wavelength A in S602 is a tag indicating that the image information is obtained by the laser beam of wavelength B (see the same figure). Identification information including the tag name B) and position information for specifying which line of the image information is attached.

【００７１】Ｓ６０５では、Ｓ６０３及びＳ６０４で識
別情報が付帯されたそれぞれの画像情報が、メモリ２ｃ
に格納（保存）される。Ｓ６０６では、前ステップでメ
モリ２ｃに格納されたそれぞれの画像情報を用いて前述
の所定の演算が行われる。すなわち、同一ラインに対す
る、波長Ａのレーザ光によって得られた画像情報と波長
Ｂのレーザ光によって得られた画像情報とを用いて前述
の所定の演算が行われる。In S605, the respective image information to which the identification information is added in S603 and S604 is stored in the memory 2c.
Is stored (saved) in. In S606, the above-described predetermined calculation is performed using the respective image information stored in the memory 2c in the previous step. That is, the above-mentioned predetermined calculation is performed using the image information obtained by the laser light of wavelength A and the image information obtained by the laser light of wavelength B for the same line.

【００７２】Ｓ６０７では、Ｓ６０５でメモリ２ｃに格
納されたそれぞれの画像情報に応じたそれぞれの画像
（ライン画像）と、Ｓ６０６で求められた演算結果に基
づく画像（ライン演算結果画像）とが画像モニター５に
表示される。Ｓ６０８では、前ステップで表示されたラ
イン画像が、走査対象となるラインのうちの最終ライン
に対してのものであるか否かが判定され、その判定結果
がＹｅｓの場合には本フローが終了し、Ｎｏの場合に
は、走査対象ラインを次のラインにしてＳ６０１へ処理
が戻る。In S607, the respective images (line images) corresponding to the respective image information stored in the memory 2c in S605 and the image based on the calculation result obtained in S606 (line calculation result image) are displayed on the image monitor. It is displayed in 5. In S608, it is determined whether or not the line image displayed in the previous step is for the final line of the lines to be scanned, and if the determination result is Yes, this flow ends. If No, the scan target line is changed to the next line, and the process returns to S601.

【００７３】以上、本フローが実行されることによっ
て、１ライン走査毎に、波長Ａのレーザ光によって得ら
れた画像情報に応じたライン画像と、波長Ｂのレーザ光
によって得られた画像情報に応じたライン画像と、それ
ぞれの画像情報を用いた前述の所定の演算によって得ら
れた演算結果に基づくライン演算結果画像が表示される
ようになり、よりリアルタイムに画像及び演算結果を表
示させることが可能になる。また、本フローは１フレー
ム分の画像データ取得を説明するものであるが、このフ
ローを何度も繰り返せば、リアルタイムでレシオ計測を
行うことができる。As described above, by executing this flow, the line image corresponding to the image information obtained by the laser beam of wavelength A and the image information obtained by the laser beam of wavelength B are obtained for each line scanning. The corresponding line image and the line calculation result image based on the calculation result obtained by the above-described predetermined calculation using the respective image information are displayed, and the image and the calculation result can be displayed in more real time. It will be possible. Further, this flow describes acquisition of image data for one frame, but if this flow is repeated many times, ratio measurement can be performed in real time.

【００７４】尚、本変形例では、１ライン走査毎に画像
情報が取得されるものであったが、１ピクセル走査毎に
画像情報が取得されるようにしても良い。すなわち、同
一ピクセルに対する、波長Ａのレーザ光による１ピクセ
ル走査によって得られた画像情報と波長Ｂのレーザ光に
よる１ピクセル走査によって得られた画像情報とが、メ
モリ２ｃに格納される毎に、それぞれの１ピクセル走査
によって得られた画像情報に応じたそれぞれのピクセル
画像を画像モニター５に表示させると共に、それぞれの
１ピクセル走査によって得られた画像情報を用いた前述
の所定の演算による演算結果に基づくピクセル演算結果
画像を表示させるようにしても良い。In this modification, the image information is acquired every line scanning, but the image information may be acquired every pixel scanning. That is, the image information obtained by one-pixel scanning with the laser light of wavelength A and the image information obtained by one-pixel scanning with the laser light of wavelength B for the same pixel are stored in the memory 2c, respectively. Each pixel image corresponding to the image information obtained by the 1-pixel scanning is displayed on the image monitor 5, and based on the calculation result by the predetermined calculation using the image information obtained by the 1-pixel scanning. The pixel calculation result image may be displayed.

【００７５】また、上述の第一乃至第三の実施の形態
（前述の変形例含む）において、レーザ走査型顕共焦点
微鏡装置のコンピュータ２に備えられた計算・処理部２
ａによって行われる制御処理を、例えば図７に示したコ
ンピュータに実行させることも可能である。この場合、
同図に示したように、計算・処理部２ａによって実行さ
れるプログラム２ｄを、ＣＤ−ＲＯＭ、フロッピー（登
録商標）ディスク（或いはＭＯ、ＤＶＤ、ＣＤ−Ｒ、Ｃ
Ｄ−ＲＷ、リムーバブルハードディスク等であっても良
い）等の可搬記憶媒体１１に記憶しておき、その可搬記
憶媒体１１をコンピュータ１２の媒体駆動装置１３によ
り読み取り、読み取ったプログラムをコンピュータ１２
の内部のメモリ（ＲＡＭ又はハードディスク等）１４に
格納し、そのプログラムをコンピュータ１２が実行する
ようにしても良い。或いは、そのプログラムを情報提供
者の外部の装置（サーバー等）内の記憶手段（データベ
ース等）１５に記憶しておき、通信によりコンピュータ
１２に転送して内部のメモリ１４に記憶し、そのプログ
ラムをコンピュータ１２が実行するようにしても良い。
尚、これらに記憶されるプログラムは、前述の計算・処
理部２ａによって行われる制御処理の一部の処理のみを
実行するものであっても良い。Further, in the above-described first to third embodiments (including the above-mentioned modified example), the calculation / processing unit 2 provided in the computer 2 of the laser scanning microscope confocal microscope apparatus.
It is also possible to cause the computer shown in FIG. 7, for example, to execute the control processing performed by a. in this case,
As shown in the figure, the program 2d executed by the calculation / processing unit 2a is stored in a CD-ROM, a floppy (registered trademark) disk (or MO, DVD, CD-R, C).
D-RW, removable hard disk, etc.) may be stored in a portable storage medium 11, and the portable storage medium 11 is read by the medium driving device 13 of the computer 12, and the read program is read by the computer 12.
Alternatively, the program may be stored in the internal memory (RAM, hard disk, etc.) 14 of the computer, and the program may be executed by the computer 12. Alternatively, the program is stored in a storage unit (database or the like) 15 in a device (server or the like) outside the information provider, transferred to the computer 12 by communication and stored in the internal memory 14, and the program is stored. It may be executed by the computer 12.
The programs stored in these may execute only part of the control processing performed by the calculation / processing unit 2a described above.

【００７６】また、上述の第一乃至第三の実施の形態
（前述の変形例含む）では、カルシウムイオン濃度を求
めたが、水素イオン等のイオン濃度や、巨大分子濃度等
も同様にして求められる。また、上述の第一乃至第三の
実施の形態（前述の変形例含む）では、波長の異なるレ
ーザ光を切り換えるものであったが、強度の異なるレー
ザ光を切り換えるようにしても良い。この場合、上述の
波長識別情報及びタグの代わりに、何れの強度のレーザ
光によるものであるかを特定するための強度識別情報及
びタグを用いるようにすれば良い。Further, in the above-mentioned first to third embodiments (including the above-mentioned modified example), the calcium ion concentration was obtained, but the ion concentration of hydrogen ions or the like, the macromolecule concentration, etc. are obtained in the same manner. To be Further, in the above-described first to third embodiments (including the above-described modified example), laser beams having different wavelengths are switched, but laser beams having different intensities may be switched. In this case, instead of the wavelength identification information and the tag described above, the intensity identification information and the tag for identifying the intensity of the laser light may be used.

【００７７】以上、本発明のレーザ走査型顕共焦点微鏡
装置、その画像記録方法、及びそのプログラムを記録し
た記録媒体について詳細に説明したが、本発明は上記実
施形態に限定されず、本発明の要旨を逸脱しない範囲に
おいて、各種の改良及び変更を行っても良いのはもちろ
んである。Although the laser scanning microscope confocal microscope apparatus of the present invention, the image recording method thereof, and the recording medium recording the program thereof have been described above in detail, the present invention is not limited to the above-described embodiments. It goes without saying that various improvements and changes may be made without departing from the scope of the invention.

【００７８】[0078]

【発明の効果】以上、詳細に説明したように、本発明に
よれば、細胞内のカルシウムイオン濃度や水素イオン濃
度等のイオン濃度や、巨大分子濃度等の測定に適用され
る、２波長励起１波長蛍光測定等のような、波長の異な
る複数の光を励起光として用いる測定にレーザ走査型顕
共焦点微鏡装置を適用することが可能になる。INDUSTRIAL APPLICABILITY As described above in detail, according to the present invention, two-wavelength excitation applied to the measurement of intracellular ion concentration such as calcium ion concentration and hydrogen ion concentration, macromolecule concentration, etc. The laser scanning microscope confocal microscope device can be applied to measurement such as one-wavelength fluorescence measurement using a plurality of lights having different wavelengths as excitation light.

【図面の簡単な説明】[Brief description of drawings]

【図１】本発明の第一の実施の形態に係るレーザ走査型
共焦点顕微鏡装置の構成例を示す図である。FIG. 1 is a diagram showing a configuration example of a laser scanning confocal microscope device according to a first embodiment of the present invention.

【図２】本発明の第一の実施の形態に係る、光電変換器
から出力されたアナログ電気信号が、Ａ／Ｄ入力ＣＨに
よりデジタル電気信号に変換されてメモリに転送される
までの構成例を示した図である。FIG. 2 is a configuration example in which an analog electric signal output from a photoelectric converter according to the first embodiment of the present invention is converted into a digital electric signal by an A / D input CH and transferred to a memory. It is the figure which showed.

【図３】本発明の第二の実施の形態に係る、光電変換器
から出力されたアナログ電気信号が、Ａ／Ｄ入力ＣＨに
よりデジタル電気信号に変換されてメモリに転送される
までの構成例を示した図である。FIG. 3 is a configuration example in which an analog electric signal output from a photoelectric converter according to a second embodiment of the present invention is converted into a digital electric signal by an A / D input CH and transferred to a memory. It is the figure which showed.

【図４】本発明の第三の実施の形態に係る、２波長励起
１波長蛍光測定処理の処理内容を示すフローチャートで
ある。FIG. 4 is a flowchart showing the processing content of dual wavelength excitation single wavelength fluorescence measurement processing according to the third embodiment of the present invention.

【図５】１フレームの画像情報のデータ構築例を示した
図である。FIG. 5 is a diagram showing an example of data construction of image information of one frame.

【図６】本発明の第三の実施の形態の変形例に係る、２
波長励起１波長蛍光測定処理の処理内容を示すフローチ
ャートである。FIG. 6 shows a modification of the third embodiment of the present invention, 2
It is a flow chart which shows the processing contents of wavelength excitation 1 wavelength fluorescence measurement processing.

【図７】プログラムが記録される記録媒体の例を示す図
である。FIG. 7 is a diagram showing an example of a recording medium on which a program is recorded.

【符号の説明】[Explanation of symbols]

１ レーザ走査型共焦点顕微鏡本体 ２ コンピュータ ２ａ 計算・処理部 ２ｂ，２ｂ−１，２ｂ−２ Ａ／Ｄ入力ＣＨ ２ｃ メモリ ２ｄ プログラム ３ 操作パネル ４ レーザ光源装置 ５ 画像モニター １１ 可搬記録媒体 １２ コンピュータ １３ 媒体駆動装置 １４ メモリ １５ 記憶手段 １０１ 励起用ダイクロックミラー １０２ 走査ユニット １０３ レボルバ １０４ 対物レンズ １０５ ステージ １０６ 観察試料 １０７ ダイクロックミラー １０８ レンズ １０９ コンフォーカルアパーチャ １１０ 光電変換器 ２０２−ａ，２０２−ｂ Ｆｒａｍｅ画像 ４０１ レーザ光源切り換え装置 1 Laser scanning confocal microscope body 2 computers 2a Calculation and processing unit 2b, 2b-1, 2b-2 A / D input CH 2c memory 2d program 3 Operation panel 4 Laser light source device 5 image monitor 11 Portable recording medium 12 computers 13 Medium drive 14 memory 15 storage means 101 Excitation dichroic mirror 102 scanning unit 103 Revolver 104 Objective lens 105 stage 106 observation sample 107 dichroic mirror 108 lens 109 confocal aperture 110 photoelectric converter 202-a, 202-b Frame image 401 Laser light source switching device

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き Ｆターム(参考） 2H052 AA07 AA08 AA09 AC04 AC14 AC15 AC27 AC34 AF14 AF21 AF25    ─────────────────────────────────────────────────── ─── Continued front page    F term (reference) 2H052 AA07 AA08 AA09 AC04 AC14                       AC15 AC27 AC34 AF14 AF21                       AF25

Claims (14)

【特許請求の範囲】[Claims] 【請求項１】 少なくとも波長の異なる複数のレーザ光
の各々をスポット光として試料上に走査し、 前記スポット光に基づく前記試料からの光を検出し、 得られた画像情報を切り分けて記録する、 ことを特徴とするレーザ走査型共焦点顕微鏡装置の画像
記録方法。1. A sample is scanned with each of a plurality of laser beams having at least different wavelengths as spot light, light from the sample based on the spot light is detected, and the obtained image information is divided and recorded. An image recording method for a laser scanning confocal microscope apparatus characterized by the above. 【請求項２】 前記走査では、１ピクセル毎に前記複数
のレーザ光の各々をスポット光として試料上に走査し、 前記記録では、前記画像情報を１ピクセル毎に切り分け
て記録する、 ことを特徴とする請求項１記載のレーザ走査型共焦点顕
微鏡装置の画像記録方法。2. In the scanning, each of the plurality of laser beams is scanned as spot light on a sample for each pixel, and in the recording, the image information is divided into each pixel and recorded. An image recording method for a laser scanning confocal microscope apparatus according to claim 1. 【請求項３】 前記走査では、１ライン毎に前記複数の
レーザ光の各々をスポット光として試料上に走査し、 前記記録では、前記画像情報を１ライン毎に切り分けて
記録する、 ことを特徴とする請求項１記載のレーザ走査型共焦点顕
微鏡装置の画像記録方法。3. In the scanning, each of the plurality of laser beams is scanned as spot light on a sample for each line, and in the recording, the image information is divided and recorded for each line. An image recording method for a laser scanning confocal microscope apparatus according to claim 1. 【請求項４】 前記走査では、１フレーム毎に前記複数
のレーザ光の各々をスポット光として試料上に走査し、 前記記録では、前記画像情報を１フレーム毎に切り分け
て記録する、 ことを特徴とする請求項１記載のレーザ走査型共焦点顕
微鏡装置の画像記録方法。4. In the scanning, each of the plurality of laser beams is scanned as spot light on a sample for each frame, and in the recording, the image information is divided and recorded for each frame. An image recording method for a laser scanning confocal microscope apparatus according to claim 1. 【請求項５】 更に、 前記１ピクセル毎に切り分けた画像情報を用いて演算を
行い、 該演算の結果を表示する、 ことを特徴とする請求項２記載のレーザ走査型共焦点顕
微鏡装置の画像記録方法。5. The image of the laser scanning confocal microscope apparatus according to claim 2, further comprising: performing an operation using the image information divided for each pixel and displaying a result of the operation. Recording method. 【請求項６】 更に、 前記１ライン毎に切り分けた画像情報を用いて演算を行
い、 該演算の結果を表示する、 ことを特徴とする請求項３記載のレーザ走査型共焦点顕
微鏡装置の画像記録方法。6. The image of the laser scanning confocal microscope apparatus according to claim 3, further comprising: performing an operation using the image information divided for each line and displaying a result of the operation. Recording method. 【請求項７】 レーザ走査型共焦点顕微鏡装置の画像記
録制御をコンピュータに実行させるためのプログラムを
記録した記録媒体であって、 少なくとも波長の異なる複数のレーザ光の各々をスポッ
ト光として試料上に走査し、 前記スポット光に基づく前記試料からの光を検出し、 得られた画像情報を切り分けて記録する、 ことを前記コンピュータに実行させるためのプログラム
を記録した記録媒体。7. A recording medium in which a program for causing a computer to execute image recording control of a laser scanning confocal microscope apparatus is recorded, wherein each of a plurality of laser beams having different wavelengths is spotted on a sample. A recording medium recording a program for causing the computer to scan, detect light from the sample based on the spot light, and divide and record the obtained image information. 【請求項８】 前記走査では、１ピクセル毎に前記複数
のレーザ光の各々をスポット光として試料上に走査し、 前記記録では、前記画像情報を１ピクセル毎に切り分け
て記録する、 ことを前記コンピュータに実行させるためのプログラム
を記録した請求項７記載の記録媒体。8. In the scanning, each of the plurality of laser beams is scanned as a spot light on a sample for each pixel, and in the recording, the image information is divided into each pixel and recorded. The recording medium according to claim 7, which records a program to be executed by a computer. 【請求項９】 前記走査では、１ライン毎に前記複数の
レーザ光の各々をスポット光として試料上に走査し、 前記記録では、前記画像情報を１ライン毎に切り分けて
記録する、 ことを前記コンピュータに実行させるためのプログラム
を記録した請求項７記載の記録媒体。9. In the scanning, each of the plurality of laser beams is scanned as spot light on a sample for each line, and in the recording, the image information is divided and recorded for each line. The recording medium according to claim 7, which records a program to be executed by a computer. 【請求項１０】 前記走査では、１フレーム毎に前記複
数のレーザ光の各々をスポット光として試料上に走査
し、 前記記録では、前記画像情報を１フレーム毎に切り分け
て記録する、 ことを前記コンピュータに実行させるためのプログラム
を記録した請求項７記載の記録媒体。10. In the scanning, each of the plurality of laser beams is scanned as spot light on a sample for each frame, and in the recording, the image information is divided and recorded for each frame. The recording medium according to claim 7, which records a program to be executed by a computer. 【請求項１１】 試料に照射させるレーザ光を少なくと
も波長の異なるレーザ光に切り換える切換手段と、 前記試料上に、前記切換部により切り換えられたレーザ
光であるスポット光を走査する走査手段と、 前記スポット光に基づく前記試料からの光をアナログ電
気信号に変換する光電変換手段と、 前記アナログ電気信号をデジタル電気信号に変換する複
数のＡ／Ｄ変換手段と、 前記切換部によるレーザ光の切り換え状態に応じて、前
記アナログ電気信号の入力先を前記複数のＡ／Ｄ変換部
のうちの何れか１つに切り換える信号分岐切換手段と、 前記デジタル電気信号に応じた画像を表示する表示手段
と、 を備えたことを特徴とするレーザ走査型共焦点顕微鏡装
置。11. A switching means for switching the laser light with which the sample is irradiated to a laser light having at least a different wavelength, a scanning means for scanning the sample with spot light which is the laser light switched by the switching part, A photoelectric conversion unit that converts light from the sample based on spot light into an analog electric signal, a plurality of A / D conversion units that converts the analog electric signal into a digital electric signal, and a switching state of laser light by the switching unit. A signal branch switching unit that switches an input destination of the analog electric signal to any one of the plurality of A / D conversion units, and a display unit that displays an image according to the digital electric signal. A laser scanning confocal microscope device comprising: 【請求項１２】 １ピクセル走査毎に、試料に照射させ
るレーザ光を少なくとも波長の異なるレーザ光に切り換
える切換手段と、 前記試料上に、前記切換部により切り換えられたレーザ
光であるスポット光を走査する走査手段と、 前記スポット光に基づく前記試料からの光をアナログ電
気信号に変換する光電変換手段と、 前記アナログ電気信号をデジタル電気信号に変換するＡ
／Ｄ変換手段と、 前記切換部によるレーザ光の切り換え状態に応じて、１
ピクセル走査に対応する前記デジタル電気信号に、何れ
のレーザ光が照射されたことにより得られたものである
か及び何れのピクセルを走査したのもであるかを示す識
別情報を、付帯させて記録する記録手段と、 該記録部に記録された前記デジタル電気信号に応じた画
像を表示する表示手段と、 を備えたことを特徴とするレーザ走査型共焦点顕微鏡装
置。12. A switching unit that switches a laser beam to be irradiated onto a sample to a laser beam having at least a different wavelength for each pixel scanning, and scans the sample with spot light which is the laser beam switched by the switching unit. Scanning means, photoelectric conversion means for converting light from the sample based on the spot light into an analog electric signal, and A for converting the analog electric signal into a digital electric signal.
1 depending on the switching state of the laser light by the D / D conversion unit and the switching unit.
The digital electric signal corresponding to the pixel scanning is additionally recorded with identification information indicating which laser beam is obtained by irradiating the laser and which pixel is scanned. A laser scanning confocal microscope device, comprising: a recording unit for displaying the image according to the digital electric signal recorded in the recording unit. 【請求項１３】 １ライン走査毎に、試料に照射させる
レーザ光を少なくとも波長の異なるレーザ光に切り換え
る切換手段と、 前記試料上に、前記切換部により切り換えられたレーザ
光であるスポット光を走査する走査手段と、 前記スポット光に基づく前記試料からの光をアナログ電
気信号に変換する光電変換手段と、 前記アナログ電気信号をデジタル電気信号に変換するＡ
／Ｄ変換手段と、 前記切換部によるレーザ光の切り換え状態に応じて、１
ライン走査に対応する前記デジタル電気信号に、何れの
レーザ光が照射されたことにより得られたものであるか
及び何れのラインを走査したのもであるかを示す識別情
報を、付帯させて記録する記録手段と、 該記録部に記録された前記デジタル電気信号に応じた画
像を表示する表示手段と、 を備えたことを特徴とするレーザ走査型顕共焦点微鏡装
置。13. Switching means for switching the laser light with which the sample is irradiated for each line scanning to a laser light having at least a different wavelength, and scanning the sample with spot light which is the laser light switched by the switching section. Scanning means, photoelectric conversion means for converting light from the sample based on the spot light into an analog electric signal, and A for converting the analog electric signal into a digital electric signal.
1 depending on the switching state of the laser light by the D / D conversion unit and the switching unit.
The digital electric signal corresponding to the line scanning is additionally recorded with identification information indicating which laser beam is obtained by irradiating the laser beam and which line is scanned. And a display unit for displaying an image corresponding to the digital electric signal recorded in the recording unit. 【請求項１４】 １フレーム走査毎に、試料に照射させ
るレーザ光を少なくとも波長の異なるレーザ光に切り換
える切換手段と、 前記試料上に、前記切換部により切り換えられたレーザ
光であるスポット光を走査する走査手段と、 前記スポット光に基づく前記試料からの光をアナログ電
気信号に変換する光電変換手段と、 前記アナログ電気信号をデジタル電気信号に変換するＡ
／Ｄ変換手段と、 前記切換部によるレーザ光の切り換え状態に応じて、１
フレーム走査に対応する前記デジタル電気信号に、何れ
のレーザ光が照射されたことにより得られたものである
かを示す識別情報を、付帯させて記録する記録手段と、 該記録部に記録された前記デジタル電気信号に応じた画
像を表示する表示手段と、 を備えたことを特徴とするレーザ走査型共焦点顕微鏡装
置。14. Switching means for switching the laser light with which the sample is irradiated to the laser light having at least different wavelengths for each frame scanning, and scanning the sample with spot light which is the laser light switched by the switching unit. Scanning means, photoelectric conversion means for converting light from the sample based on the spot light into an analog electric signal, and A for converting the analog electric signal into a digital electric signal.
1 depending on the switching state of the laser light by the D / D conversion unit and the switching unit.
Recording means for additionally recording identification information indicating which laser light is obtained by irradiating the digital electric signal corresponding to the frame scanning, and the recording means. A laser scanning confocal microscope apparatus comprising: a display unit that displays an image according to the digital electric signal.