JP2003227834A - 生体高分子検出用試薬及び生体高分子検出方法 - Google Patents
生体高分子検出用試薬及び生体高分子検出方法Info
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- G—PHYSICS
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- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 サンプル生体高分子を何ら修飾することなく
プローブ生体高分子との結合の有無及び結合量を検出す
る。 【解決手段】 正または負電荷をもつ官能基を露出させ
た半導体ナノ粒子からなる生体高分子検出用試薬、及び
正または負電荷をもつ官能基を露出させた半導体ナノ
粒子を、サンプル生体高分子の持つ負または正電荷に静
電的に結合させることにより、プローブ生体高分子との
結合の有無および結合量を検出する生体高分子の検出方
法。
プローブ生体高分子との結合の有無及び結合量を検出す
る。 【解決手段】 正または負電荷をもつ官能基を露出させ
た半導体ナノ粒子からなる生体高分子検出用試薬、及び
正または負電荷をもつ官能基を露出させた半導体ナノ
粒子を、サンプル生体高分子の持つ負または正電荷に静
電的に結合させることにより、プローブ生体高分子との
結合の有無および結合量を検出する生体高分子の検出方
法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、サンプル修飾を必
要としない生体高分子検出試薬及び生体高分子検出方法
に関する。
要としない生体高分子検出試薬及び生体高分子検出方法
に関する。
【０００２】
【従来の技術】生体高分子の検出においては、サンプル
側の生体高分子に光学的、電気的、および磁気的な修飾
を施し、それらから得られる信号を検知し、検出を行っ
ている。光学的な方法としては、アマシャムファルマシ
アバイオテク社から販売されているＣｙTMｄｙｅに代表
される蛍光試薬を用いた方法、および、放射性を持つ試
薬を用いるラジオアイソトープ（ＲＩ）を用いた方法な
どがある。また、電気的に修飾をする方法として、ＤＮ
Ａ二本鎖に特異的にインタカレートする試薬を用いて、
あるいはルテニウム錯体等を用いた酸化・還元サイクル
を利用した、電気化学的検出方法が挙げられる。また、
修飾を行わない方法においては、表面プラズモン共鳴現
象を利用した方法などが挙げられる。しかし、これらの
方法においては、解析の信頼性、コスト等の問題が残っ
ている。ところで、半導体ナノ粒子は、発光特性および
電気化学特性を持ち、さまざまな分野での利用が期待さ
れ、近年急速に注目されている高機能材料である。
側の生体高分子に光学的、電気的、および磁気的な修飾
を施し、それらから得られる信号を検知し、検出を行っ
ている。光学的な方法としては、アマシャムファルマシ
アバイオテク社から販売されているＣｙTMｄｙｅに代表
される蛍光試薬を用いた方法、および、放射性を持つ試
薬を用いるラジオアイソトープ（ＲＩ）を用いた方法な
どがある。また、電気的に修飾をする方法として、ＤＮ
Ａ二本鎖に特異的にインタカレートする試薬を用いて、
あるいはルテニウム錯体等を用いた酸化・還元サイクル
を利用した、電気化学的検出方法が挙げられる。また、
修飾を行わない方法においては、表面プラズモン共鳴現
象を利用した方法などが挙げられる。しかし、これらの
方法においては、解析の信頼性、コスト等の問題が残っ
ている。ところで、半導体ナノ粒子は、発光特性および
電気化学特性を持ち、さまざまな分野での利用が期待さ
れ、近年急速に注目されている高機能材料である。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、半導体ナノ
粒子の持つ物理化学的特性に注目した、生体高分子検出
における新しい利用法である。本発明においては、表面
を化学修飾した半導体ナノ粒子を検出試薬として用いる
ことで、サンプルに対する修飾を必要とせず、安価で感
度の高い、十分な信頼性が得られる検出を行うことを目
的とする。
粒子の持つ物理化学的特性に注目した、生体高分子検出
における新しい利用法である。本発明においては、表面
を化学修飾した半導体ナノ粒子を検出試薬として用いる
ことで、サンプルに対する修飾を必要とせず、安価で感
度の高い、十分な信頼性が得られる検出を行うことを目
的とする。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明では、サンプル生
体高分子のもつ電荷を利用し、その電荷量に応じて吸着
する性質を持つ試薬を用いることで、サンプル生体高分
子への修飾を必要としない生体高分子検出試薬及び生体
高分子検出方法を提供する。本発明者らは、半導体ナノ
粒子の持つ物理化学的特性に注目し、表面を化学修飾し
た半導体ナノ粒子を検出試薬として用いることにより上
記課題が解決されることを見出し本発明に至った。即
ち、本発明の生体高分子検出用試薬は、正または負電荷
をもつ官能基を露出させた半導体ナノ粒子からなる。
体高分子のもつ電荷を利用し、その電荷量に応じて吸着
する性質を持つ試薬を用いることで、サンプル生体高分
子への修飾を必要としない生体高分子検出試薬及び生体
高分子検出方法を提供する。本発明者らは、半導体ナノ
粒子の持つ物理化学的特性に注目し、表面を化学修飾し
た半導体ナノ粒子を検出試薬として用いることにより上
記課題が解決されることを見出し本発明に至った。即
ち、本発明の生体高分子検出用試薬は、正または負電荷
をもつ官能基を露出させた半導体ナノ粒子からなる。
【０００５】ここで、半導体ナノ粒子に正または負電荷
をもつ官能基を露出させる手段としては、半導体ナノ粒
子表面をチオール化合物で化学修飾することが挙げられ
る。前記正電荷の官能基を有するチオール化合物として
は、（２−メルカプトエチル）トリメチルアンモニウム
が好ましく例示される。また、前記負電荷の官能基を有
するチオール化合物としては、２−メルカプトエタンス
ルホン酸が好ましく例示される。
をもつ官能基を露出させる手段としては、半導体ナノ粒
子表面をチオール化合物で化学修飾することが挙げられ
る。前記正電荷の官能基を有するチオール化合物として
は、（２−メルカプトエチル）トリメチルアンモニウム
が好ましく例示される。また、前記負電荷の官能基を有
するチオール化合物としては、２−メルカプトエタンス
ルホン酸が好ましく例示される。
【０００６】前記半導体ナノ粒子の材質として限定され
ないが、ＺｎＯ、ＺｎＳ、ＺｎＳｅ、ＺｎＴｅ、Ｃｄ
Ｏ、ＣｄＳ、ＣｄＳｅ、ＣｄＴｅ、ＨｇＳ、ＨｇＳｅ、
ＨｇＴｅ、ＩｎＰ、ＩｎＡｓ、ＧａＮ、ＧａＰ、ＧａＡ
ｓ、ＴｉＯ2、ＷＯ3、ＰｂＳ、又はＰｂＳｅが好ましく
例示される。
ないが、ＺｎＯ、ＺｎＳ、ＺｎＳｅ、ＺｎＴｅ、Ｃｄ
Ｏ、ＣｄＳ、ＣｄＳｅ、ＣｄＴｅ、ＨｇＳ、ＨｇＳｅ、
ＨｇＴｅ、ＩｎＰ、ＩｎＡｓ、ＧａＮ、ＧａＰ、ＧａＡ
ｓ、ＴｉＯ2、ＷＯ3、ＰｂＳ、又はＰｂＳｅが好ましく
例示される。
【０００７】本発明においては、チオール化合物の−Ｓ
Ｈ基が半導体ナノ粒子の表面のＳ、Ｏ、Ｓｅ、Ｔｅ、
Ｐ、Ａｓ、Ｎ等の原子と置換することにより半導体ナノ
粒子の表面を化学修飾する。また、本発明の生体高分子
の検出方法は、正または負電荷をもつ官能基を露出させ
た半導体ナノ粒子を、サンプル生体高分子の持つ負また
は正電荷に静電的に結合させることにより、プローブ生
体高分子との結合の有無および結合量を検出するもので
ある。
Ｈ基が半導体ナノ粒子の表面のＳ、Ｏ、Ｓｅ、Ｔｅ、
Ｐ、Ａｓ、Ｎ等の原子と置換することにより半導体ナノ
粒子の表面を化学修飾する。また、本発明の生体高分子
の検出方法は、正または負電荷をもつ官能基を露出させ
た半導体ナノ粒子を、サンプル生体高分子の持つ負また
は正電荷に静電的に結合させることにより、プローブ生
体高分子との結合の有無および結合量を検出するもので
ある。
【０００８】ここで、前記プローブ生体高分子との結合
の有無および結合量の検出は、光学的、電気化学的、又
はそれらの融合により信号を検知することで行うことが
出来る。また、基板上に固定化されたプローブ生体高分
子に結合したサンプル生体高分子の有無および結合量を
検出することが出来る。
の有無および結合量の検出は、光学的、電気化学的、又
はそれらの融合により信号を検知することで行うことが
出来る。また、基板上に固定化されたプローブ生体高分
子に結合したサンプル生体高分子の有無および結合量を
検出することが出来る。
【０００９】また、光学的、電気的および磁気的に修飾
されたプローブ生体高分子に結合したサンプル生体高分
子の有無および結合量を検出することが出来る。更に、
上記の生体高分子の検出試薬及び生体高分子の検出方法
において、前記プローブ生体高分子がプローブＤＮＡで
あり、前記サンプル生体高分子がサンプルＤＮＡである
ときに、前記検出を行うことが出来る。
されたプローブ生体高分子に結合したサンプル生体高分
子の有無および結合量を検出することが出来る。更に、
上記の生体高分子の検出試薬及び生体高分子の検出方法
において、前記プローブ生体高分子がプローブＤＮＡで
あり、前記サンプル生体高分子がサンプルＤＮＡである
ときに、前記検出を行うことが出来る。
【００１０】図１を参照して、本発明の生体高分子を検
出するメカニズムを説明する。図１において、平面又は
ビーズ状を形成する表面基板１が有する正電荷とプロー
ブＤＮＡ２の燐酸側鎖の負電荷の結合により、基板１に
対してプローブＤＮＡ２が固定化されている。プローブ
ＤＮＡ２とサンプルＤＮＡ３は互いに水素結合でハイブ
リドする。これによりサンプルＤＮＡ３の燐酸側鎖の負
電荷が上昇する。このサンプルＤＮＡ３の負電荷に正電
荷を有する半導体ナノ粒子４が結合し、その結合量によ
りハイブリッド形成されたサンプルＤＮＡ３に関する情
報を信号として提供する。
出するメカニズムを説明する。図１において、平面又は
ビーズ状を形成する表面基板１が有する正電荷とプロー
ブＤＮＡ２の燐酸側鎖の負電荷の結合により、基板１に
対してプローブＤＮＡ２が固定化されている。プローブ
ＤＮＡ２とサンプルＤＮＡ３は互いに水素結合でハイブ
リドする。これによりサンプルＤＮＡ３の燐酸側鎖の負
電荷が上昇する。このサンプルＤＮＡ３の負電荷に正電
荷を有する半導体ナノ粒子４が結合し、その結合量によ
りハイブリッド形成されたサンプルＤＮＡ３に関する情
報を信号として提供する。
【００１１】図１の場合は、プローブＤＮＡ２が負電荷
で半導体ナノ粒子４が正電荷であったが、逆であっても
良い。たんぱく質等では、等電点が存在し、ＰＨの高低
によってサンプルＤＮＡ３の電荷も正負に変化する。サ
ンプルＤＮＡ３の電荷が正の場合は負電荷を有する半導
体ナノ粒子４を用いれば良い。
で半導体ナノ粒子４が正電荷であったが、逆であっても
良い。たんぱく質等では、等電点が存在し、ＰＨの高低
によってサンプルＤＮＡ３の電荷も正負に変化する。サ
ンプルＤＮＡ３の電荷が正の場合は負電荷を有する半導
体ナノ粒子４を用いれば良い。
【００１２】本発明では公知の半導体ナノ粒子を使用す
ることが出来る。粒径が１０ｎｍ以下の半導体ナノ粒子
は、バルク半導体結晶と分子の遷移領域に存在すること
から、いずれとも異なった物理化学特性を示す。このよ
うな領域においては、量子サイズ効果の発現により、粒
径の減少に伴ってエネルギーギャップが増大する。さら
にこれに伴い、バルク半導体で見られたエネルギーバン
ドの縮退が解け軌道が離散化し、伝導帯下端が負側に荷
電子帯上端が正側にシフトする。このような特性を利用
して、近年、応用化に関する研究が急速に行われるよう
になった。本発明では、この特性を利用し、生体高分子
検出試薬として応用化した。
ることが出来る。粒径が１０ｎｍ以下の半導体ナノ粒子
は、バルク半導体結晶と分子の遷移領域に存在すること
から、いずれとも異なった物理化学特性を示す。このよ
うな領域においては、量子サイズ効果の発現により、粒
径の減少に伴ってエネルギーギャップが増大する。さら
にこれに伴い、バルク半導体で見られたエネルギーバン
ドの縮退が解け軌道が離散化し、伝導帯下端が負側に荷
電子帯上端が正側にシフトする。このような特性を利用
して、近年、応用化に関する研究が急速に行われるよう
になった。本発明では、この特性を利用し、生体高分子
検出試薬として応用化した。
【００１３】半導体ナノ粒子の材質としては、ＺｎＯ、
ＺｎＳ、ＺｎＳｅ、ＺｎＴｅ、ＣｄＯ、ＣｄＳ、ＣｄＳ
ｅ、ＣｄＴｅ、ＨｇＳ、ＨｇＳｅ、ＨｇＴｅ、ＩｎＰ、
ＩｎＡｓ、ＧａＮ、ＧａＰ、ＧａＡｓ、ＴｉＯ2、Ｗ
Ｏ3、ＰｂＳ、又はＰｂＳｅ等が挙げられる。
ＺｎＳ、ＺｎＳｅ、ＺｎＴｅ、ＣｄＯ、ＣｄＳ、ＣｄＳ
ｅ、ＣｄＴｅ、ＨｇＳ、ＨｇＳｅ、ＨｇＴｅ、ＩｎＰ、
ＩｎＡｓ、ＧａＮ、ＧａＰ、ＧａＡｓ、ＴｉＯ2、Ｗ
Ｏ3、ＰｂＳ、又はＰｂＳｅ等が挙げられる。
【００１４】
【実施例】正電荷をもつ官能基が露出した半導体ナノ粒
子の製造方法を実施例として以下に説明する。なお、こ
こでは逆ミセル法を用いたＣｄＳナノ粒子の調整方法を
説明するが、ナノ粒子の調整および修飾方法について
は、光エッチングを用いた作成方法等、その方法を問わ
ない。
子の製造方法を実施例として以下に説明する。なお、こ
こでは逆ミセル法を用いたＣｄＳナノ粒子の調整方法を
説明するが、ナノ粒子の調整および修飾方法について
は、光エッチングを用いた作成方法等、その方法を問わ
ない。
【００１５】チオコリン水溶液の調製
窒素で飽和させた２ｍｏｌ・ｄｍ-3ＨＣｌ水溶液１．２
ｃｍ3にヨウ化アセチルチオコリン３５０ｍｇを溶か
し、１２時間室温で放置した。これに窒素雰囲気下２８
％アンモニア水を０．２ｃｍ3加え中和し、弱アルカリ
性の０．８６ ｍｏｌ・ｄｍ-3チオコリン（（２−メル
カプトエチル）トリメチルアンモニウム）水溶液を作成
した。これによってナノ粒子表面を修飾することによっ
て、正電荷を粒子表面に有するチオコリン修飾ＣｄＳナ
ノ粒子を調整した。
ｃｍ3にヨウ化アセチルチオコリン３５０ｍｇを溶か
し、１２時間室温で放置した。これに窒素雰囲気下２８
％アンモニア水を０．２ｃｍ3加え中和し、弱アルカリ
性の０．８６ ｍｏｌ・ｄｍ-3チオコリン（（２−メル
カプトエチル）トリメチルアンモニウム）水溶液を作成
した。これによってナノ粒子表面を修飾することによっ
て、正電荷を粒子表面に有するチオコリン修飾ＣｄＳナ
ノ粒子を調整した。
【００１６】チオコリン修飾ＣｄＳナノ粒子の調整方法
ここでは、逆ミセル法による正電荷を粒子表面に有する
チオコリン修飾ＣｄＳナノ粒子の調整方法について説明
する。逆ミセル法とは、表面活性剤に囲まれた微小な空
間の中で金属イオンを還元することによって、金属ナノ
粒子を合成する手法であり、金や銀などのナノ粒子の合
成にはよく用いられている。
チオコリン修飾ＣｄＳナノ粒子の調整方法について説明
する。逆ミセル法とは、表面活性剤に囲まれた微小な空
間の中で金属イオンを還元することによって、金属ナノ
粒子を合成する手法であり、金や銀などのナノ粒子の合
成にはよく用いられている。
【００１７】２００ｃｍ3のｎ−ヘプタンにスルホコハ
ク酸ジ−２−エチルヘキシルナトリウム（ＡＯＴ）１４
ｇと超純水４ｃｍ3を加え、40分間攪拌を行うことによ
り、ＡＯＴの逆ミセル溶液を調製した。これを１２０ｃ
ｍ3と８０ｃｍ3の二つに分けた。前者には、１．０ ｍ
ｏｌ・ｄｍ-3ＨＣｌ水溶液０．４８ｃｍ3を、後者に
は、１．０ ｍｏｌ・ｄｍ-3ＮａＳ水溶液０．３２ｃｍ3
を加え、いずれも均一になるまで攪拌を行った。その
後、両者を混合し、さらに１時間攪拌を行うことで、Ｃ
ｄＳナノ粒子の逆ミセルコロイド溶液を作製した。さら
にこれを激しく攪拌させながら０．８６ ｍｏｌ・ｄｍ
-3チオコリン水溶液０．４７ｃｍ3を添加し、さらに一
晩攪拌を行うことによって、ＣｄＳナノ粒子表面をチオ
コリンで化学修飾した。
ク酸ジ−２−エチルヘキシルナトリウム（ＡＯＴ）１４
ｇと超純水４ｃｍ3を加え、40分間攪拌を行うことによ
り、ＡＯＴの逆ミセル溶液を調製した。これを１２０ｃ
ｍ3と８０ｃｍ3の二つに分けた。前者には、１．０ ｍ
ｏｌ・ｄｍ-3ＨＣｌ水溶液０．４８ｃｍ3を、後者に
は、１．０ ｍｏｌ・ｄｍ-3ＮａＳ水溶液０．３２ｃｍ3
を加え、いずれも均一になるまで攪拌を行った。その
後、両者を混合し、さらに１時間攪拌を行うことで、Ｃ
ｄＳナノ粒子の逆ミセルコロイド溶液を作製した。さら
にこれを激しく攪拌させながら０．８６ ｍｏｌ・ｄｍ
-3チオコリン水溶液０．４７ｃｍ3を添加し、さらに一
晩攪拌を行うことによって、ＣｄＳナノ粒子表面をチオ
コリンで化学修飾した。
【００１８】チオコリン修飾ＣｄＳナノ粒子の水溶化
チオコリンで表面修飾をしたＣｄＳナノ粒子を含む逆ミ
セル溶液にメタノールを添加し、逆ミセルを崩壊させた
後、遠心分離を行ない、表面修飾したＣｄＳナノ粒子の
沈殿を得た。さらに、ヘプタンとエタノールで数回づつ
洗浄した後、６．０ｍｏｌ・ｄｍ-3のテトラメチルアン
モニウムクロライド水溶液あるいは飽和ＮａＣｌ水溶液
を加えナノ粒子表面に存在するＡＯＴを塩化物イオンで
イオン交換した。これにより、得られたＣｄＳナノ粒子
は、水溶性となる。
セル溶液にメタノールを添加し、逆ミセルを崩壊させた
後、遠心分離を行ない、表面修飾したＣｄＳナノ粒子の
沈殿を得た。さらに、ヘプタンとエタノールで数回づつ
洗浄した後、６．０ｍｏｌ・ｄｍ-3のテトラメチルアン
モニウムクロライド水溶液あるいは飽和ＮａＣｌ水溶液
を加えナノ粒子表面に存在するＡＯＴを塩化物イオンで
イオン交換した。これにより、得られたＣｄＳナノ粒子
は、水溶性となる。
【００１９】チオコリン修飾ＣｄＳナノ粒子の精製
ＣｄＳナノ粒子の精製は、非水溶媒の添加による沈降分
離によって行った。まず、得られた粗なＣｄＳナノ粒子
水溶液にエタノールを加え、ＣｄＳナノ粒子を再沈殿さ
せた。沈殿のみを回収し、これに超純水を加え再び水に
溶かした後、エタノールで沈殿させるという操作を、さ
らに2回繰り返した。その後、２−プロパノールと超純
水を用いて同様の操作を行ない、ＡＯＴを完全に除去し
た。その後、限外濾過を行ない、共存するテトラメチル
アンモニウムクロライドなどの塩および粒径の小さなＣ
ｄＳを取り除き、より単分散化したＣｄＳナノ粒子を精
製した。
離によって行った。まず、得られた粗なＣｄＳナノ粒子
水溶液にエタノールを加え、ＣｄＳナノ粒子を再沈殿さ
せた。沈殿のみを回収し、これに超純水を加え再び水に
溶かした後、エタノールで沈殿させるという操作を、さ
らに2回繰り返した。その後、２−プロパノールと超純
水を用いて同様の操作を行ない、ＡＯＴを完全に除去し
た。その後、限外濾過を行ない、共存するテトラメチル
アンモニウムクロライドなどの塩および粒径の小さなＣ
ｄＳを取り除き、より単分散化したＣｄＳナノ粒子を精
製した。
【００２０】修飾方法
ここではＤＮＡマイクロアレイに適用した応用例につい
て説明する。ＤＮＡマイクロアレイとは、基板上に化学
的に固定された多数の既知のプローブＤＮＡに対し、検
定を行いたいサンプルＤＮＡをプローブ上に展開させ、
プローブＤＮＡとサンプルＤＮＡの結合の有無および結
合量により、サンプルの配列特性を知る方法である。今
まで、ＤＮＡの結合の有無および結合量については、サ
ンプルに対して蛍光物質あるいは放射性物質を修飾し、
それらを光学的に検出することによって、結合の有無お
よび結合量の測定を行う方法が一般的であった。本発明
によれば、前もってサンプルに対して修飾する必要がな
いため、ＲＮＡ逆転写反応やＰＣＲ反応によるサンプル
の前処理が不要であるという特徴をもつ。
て説明する。ＤＮＡマイクロアレイとは、基板上に化学
的に固定された多数の既知のプローブＤＮＡに対し、検
定を行いたいサンプルＤＮＡをプローブ上に展開させ、
プローブＤＮＡとサンプルＤＮＡの結合の有無および結
合量により、サンプルの配列特性を知る方法である。今
まで、ＤＮＡの結合の有無および結合量については、サ
ンプルに対して蛍光物質あるいは放射性物質を修飾し、
それらを光学的に検出することによって、結合の有無お
よび結合量の測定を行う方法が一般的であった。本発明
によれば、前もってサンプルに対して修飾する必要がな
いため、ＲＮＡ逆転写反応やＰＣＲ反応によるサンプル
の前処理が不要であるという特徴をもつ。
【００２１】ＤＮＡマイクロアレイ上にサンプルＤＮＡ
溶液を滴下し、カバーグラスを静置した後、ＣＨＢＩＯ
（日立ソフトウェアエンジニアリング株式会社製）を用
いて、密閉環境下で６５℃において１６時間反応させ
た。反応後、スライドガラスを取り出し、２×ＳＳＣ
０．１％ＳＤＳ溶液中にスライドガラスを浸漬してカバ
ーグラスを取り除いた後、ＣｄＳ半導体ナノ粒子濃度
１．２×１０17個ｍｏｌ・ｄｍ-3を含む２×ＳＳＣ０．
１％ＳＤＳ溶液中に二時間浸漬した。ＣｄＳ半導体ナノ
粒子は、サンプル調製時に、サンプルＤＮＡと混合させ
ても構わない。この場合、前記浸漬は不要となる。その
後、２×ＳＳＣ０．１％ＳＤＳ溶液中で室温にて２０分
間振とうし、０．２×ＳＳＣ０．１％ＳＤＳ溶液中で室
温にて２０分間振とうをおこなった。さらに非特異吸着
サンプルを除去するために、０．２×ＳＳＣ０．１％Ｓ
ＤＳ溶液中で55℃にて２０分間振とうし、同様な操作を
再度繰り返した。その後０．２×ＳＳＣ０．１％ＳＤＳ
溶液中で室温にて数回振とうを行ない、０．２×ＳＳ
Ｃ、０．０５×ＳＳＣのそれぞれの溶液中で室温にて数
回振とうさせた。以上の浸漬および洗浄工程は、いずれ
も染色壷を用いて行った。その後、スライドガラスは、
蛍光顕微鏡を用いて解析を行った。
溶液を滴下し、カバーグラスを静置した後、ＣＨＢＩＯ
（日立ソフトウェアエンジニアリング株式会社製）を用
いて、密閉環境下で６５℃において１６時間反応させ
た。反応後、スライドガラスを取り出し、２×ＳＳＣ
０．１％ＳＤＳ溶液中にスライドガラスを浸漬してカバ
ーグラスを取り除いた後、ＣｄＳ半導体ナノ粒子濃度
１．２×１０17個ｍｏｌ・ｄｍ-3を含む２×ＳＳＣ０．
１％ＳＤＳ溶液中に二時間浸漬した。ＣｄＳ半導体ナノ
粒子は、サンプル調製時に、サンプルＤＮＡと混合させ
ても構わない。この場合、前記浸漬は不要となる。その
後、２×ＳＳＣ０．１％ＳＤＳ溶液中で室温にて２０分
間振とうし、０．２×ＳＳＣ０．１％ＳＤＳ溶液中で室
温にて２０分間振とうをおこなった。さらに非特異吸着
サンプルを除去するために、０．２×ＳＳＣ０．１％Ｓ
ＤＳ溶液中で55℃にて２０分間振とうし、同様な操作を
再度繰り返した。その後０．２×ＳＳＣ０．１％ＳＤＳ
溶液中で室温にて数回振とうを行ない、０．２×ＳＳ
Ｃ、０．０５×ＳＳＣのそれぞれの溶液中で室温にて数
回振とうさせた。以上の浸漬および洗浄工程は、いずれ
も染色壷を用いて行った。その後、スライドガラスは、
蛍光顕微鏡を用いて解析を行った。
【００２２】検出方法
検出方法については、既存の方法に準じて行うことがで
きる。すなわち光学的検出方法、電気化学的検出方法な
どである。ただし、半導体ナノ微粒子は、光学的特性と
電気化学的特性の両方を持っているため、電気化学的に
励起し光学的に検出を行う方法、もしくは、光学的に励
起し電気化学的に検出を行う方法等の融合した検出シス
テムに適用できることが大きな特徴である。
きる。すなわち光学的検出方法、電気化学的検出方法な
どである。ただし、半導体ナノ微粒子は、光学的特性と
電気化学的特性の両方を持っているため、電気化学的に
励起し光学的に検出を行う方法、もしくは、光学的に励
起し電気化学的に検出を行う方法等の融合した検出シス
テムに適用できることが大きな特徴である。
【００２３】以上の方法に関しては、プローブの形態は
問わない。ここでは、ＤＮＡマイクロアレイについて説
明をしたが、近年注目を集めているビーズを用いた方法
にも利用できる。ルミネックス１００（ルミネックス社
製）は、蛍光物質によって染色されたビーズにプローブ
を固定化し、マイクロチューブ等の溶液中にて蛍光物質
等で修飾されたサンプルとの反応を行ない、ビーズの蛍
光信号とサンプルの蛍光信号を対照させ、解析を行う方
法である。ここでは、ＤＮＡマイクロアレイ同様、サン
プルの修飾に適用することが可能である。
問わない。ここでは、ＤＮＡマイクロアレイについて説
明をしたが、近年注目を集めているビーズを用いた方法
にも利用できる。ルミネックス１００（ルミネックス社
製）は、蛍光物質によって染色されたビーズにプローブ
を固定化し、マイクロチューブ等の溶液中にて蛍光物質
等で修飾されたサンプルとの反応を行ない、ビーズの蛍
光信号とサンプルの蛍光信号を対照させ、解析を行う方
法である。ここでは、ＤＮＡマイクロアレイ同様、サン
プルの修飾に適用することが可能である。
【００２４】また、ＤＮＡに限らず、さまざまな生体高
分子について適用可能である。例えば、タンパク解析に
おいては、タンパクの種類により正電荷あるいは負電荷
をもつため、これらの性質を利用し、本発明による方法
によりナノ粒子をタンパクサンプルに結合させることに
より、修飾を行うことが可能である。さらに今後、ペプ
チド核酸（ＰＮＡ），ロックド核酸（ＬＮＡ）等の人工
的に合成されたプローブを用いる場合には、さらに感度
の高い検出を行うことができる。
分子について適用可能である。例えば、タンパク解析に
おいては、タンパクの種類により正電荷あるいは負電荷
をもつため、これらの性質を利用し、本発明による方法
によりナノ粒子をタンパクサンプルに結合させることに
より、修飾を行うことが可能である。さらに今後、ペプ
チド核酸（ＰＮＡ），ロックド核酸（ＬＮＡ）等の人工
的に合成されたプローブを用いる場合には、さらに感度
の高い検出を行うことができる。
【００２５】
【発明の効果】正電荷又は負電荷をもった半導体ナノ粒
子を生体高分子検出法に応用することで、従来のよう
に、ＲＴ逆転写反応やＰＣＲ反応等のサンプル生体高分
子を修飾することを必要としない反応および解析を行う
ことが可能となった。さらに、本発明は、今まで一般的
に用いられてきた系に適用可能である。
子を生体高分子検出法に応用することで、従来のよう
に、ＲＴ逆転写反応やＰＣＲ反応等のサンプル生体高分
子を修飾することを必要としない反応および解析を行う
ことが可能となった。さらに、本発明は、今まで一般的
に用いられてきた系に適用可能である。
【図１】本発明によるＤＮＡ検出を説明する模式図
１：基板、２：プローブＤＮＡ、３：サンプルＤＮＡ、
４：正電荷を持った半導体ナノ粒子。
４：正電荷を持った半導体ナノ粒子。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考）
Ｇ０１Ｎ 33/543 ５９３ Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｍ
// Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｃ１２Ｎ 15/00 Ａ
(72)発明者 桑畑 進
大阪府吹田市山田丘２−１ 大阪大学大学
院工学研究科内
Ｆターム(参考） 2G045 DA12 DA13 DA36 FB02 FB12
GC15
4B024 AA11 AA20 CA01 CA09 HA14
4B063 QA01 QQ42 QR32 QR50 QR56
QR82 QS03 QS34 QS36 QX02
QX04
Claims (13)
- 【請求項１】正または負電荷をもつ官能基を露出させた
半導体ナノ粒子からなる生体高分子検出用試薬。 - 【請求項２】半導体ナノ粒子表面をチオール化合物で化
学修飾することにより正または負電荷を持つ官能基を半
導体ナノ粒子表面上に露出させたことを特徴とする請求
項１に記載の生体高分子検出用試薬。 - 【請求項３】半導体ナノ粒子表面を、（２−メルカプト
エチル）トリメチルアンモニウムで化学修飾することに
より正電荷を持つ官能基を半導体ナノ粒子表面上に露出
させたことを特徴とする請求項２に記載の生体高分子検
出用試薬。 - 【請求項４】半導体ナノ粒子表面を、２−メルカプトエ
タンスルホン酸で化学修飾することにより負電荷を持つ
官能基を半導体ナノ粒子表面上に露出させたことを特徴
とする請求項２に記載の生体高分子検出用試薬。 - 【請求項５】前記半導体ナノ粒子の材質が、ＺｎＯ、Ｚ
ｎＳ、ＺｎＳｅ、ＺｎＴｅ、ＣｄＯ、ＣｄＳ、ＣｄＳ
ｅ、ＣｄＴｅ、ＨｇＳ、ＨｇＳｅ、ＨｇＴｅ、ＩｎＰ、
ＩｎＡｓ、ＧａＮ、ＧａＰ、ＧａＡｓ、ＴｉＯ2、Ｗ
Ｏ3、ＰｂＳ、又はＰｂＳｅであることを特徴とする請
求項１〜４のいずれかに記載の生体高分子検出用試薬。 - 【請求項６】前記生体高分子がＤＮＡであることを特徴
とする請求項１〜５のいずれかに記載の生体高分子検出
用試薬。 - 【請求項７】前記生体高分子がたんぱく質であることを
特徴とする請求項１〜５のいずれかに記載の生体高分子
検出用試薬。 - 【請求項８】正または負電荷をもつ官能基を露出させた
半導体ナノ粒子を、サンプル生体高分子の持つ負または
正電荷に静電的に結合させることにより、プローブ生体
高分子との結合の有無および結合量を検出する生体高分
子の検出方法。 - 【請求項９】前記プローブ生体高分子との結合の有無お
よび結合量の検出が、光学的、電気化学的、又はそれら
の融合により信号を検知することを特徴とする請求項８
に記載の生体高分子の検出方法。 - 【請求項１０】基板上に固定化されたプローブ生体高分
子に結合したサンプル生体高分子の有無および結合量を
検出することを特徴とする請求項８又は９に記載の生体
高分子の検出方法。 - 【請求項１１】光学的、電気的および磁気的に修飾され
たプローブ生体高分子に結合したサンプル生体高分子の
有無および結合量を検出することを特徴とする請求項８
〜１０のいずれかに記載の生体高分子の検出方法。 - 【請求項１２】前記プローブ生体高分子がプローブＤＮ
Ａであり、前記サンプル生体高分子がサンプルＤＮＡで
あることを特徴とする請求項８〜１１のいずれかに記載
の生体高分子の検出方法。 - 【請求項１３】前記サンプル生体高分子がサンプルたん
ぱく質であることを特徴とする請求項８〜１２のいずれ
かに記載の生体高分子の検出方法。
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|---|---|---|---|
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| US10/347,311 US20030148361A1 (en) | 2002-02-05 | 2003-01-21 | Reagent for detecting biopolymer and method for detecting biopolymer |
| DE60301283T DE60301283T2 (de) | 2002-02-05 | 2003-01-23 | Verfahren zur Bestimmung von Biopolymeren |
| EP03001532A EP1333280B1 (en) | 2002-02-05 | 2003-01-23 | Method for detecting biopolymers |
| US11/446,142 US20070059734A1 (en) | 2002-02-05 | 2006-06-05 | Reagent for detecting biopolymer and method for detecting biopolymer |
| US12/458,894 US20100004138A1 (en) | 2002-02-05 | 2009-07-27 | Reagent for detecting biopolymer and method for detecting biopolymer |
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
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|---|---|
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Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006137875A (ja) * | 2004-11-12 | 2006-06-01 | Hitachi Software Eng Co Ltd | 高発光特性を有する半導体ナノ粒子 |
| JP2006213592A (ja) * | 2005-01-06 | 2006-08-17 | Hitachi Software Eng Co Ltd | 半導体ナノ粒子表面修飾方法 |
| JP2009092647A (ja) * | 2007-09-19 | 2009-04-30 | Hitachi High-Technologies Corp | 陰イオン濃度測定装置及び陰イオン濃度測定素子 |
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|---|---|---|---|---|
| JP4953519B2 (ja) * | 2000-10-11 | 2012-06-13 | 名古屋油化株式会社 | 塗装用マスキング材 |
| JP2004243507A (ja) * | 2002-12-19 | 2004-09-02 | Hitachi Software Eng Co Ltd | 半導体ナノ粒子及びその製造方法 |
| EP1664777A1 (en) * | 2003-09-09 | 2006-06-07 | Koninklijke Philips Electronics N.V. | Nanoparticles for detecting analytes |
| US20050221473A1 (en) * | 2004-03-30 | 2005-10-06 | Intel Corporation | Sensor array integrated circuits |
| EP1679359B1 (en) * | 2005-01-06 | 2010-05-26 | Hitachi Software Engineering Co., Ltd. | Semiconductor nanoparticle surface modification method |
| EP1795573B1 (en) * | 2005-12-06 | 2009-08-05 | Hitachi Software Engineering Co., Ltd. | Semiconductor nanoparticle surface modification method |
| US8787177B2 (en) * | 2008-11-03 | 2014-07-22 | Apple Inc. | Techniques for radio link problem and recovery detection in a wireless communication system |
| JP5579343B1 (ja) | 2012-11-28 | 2014-08-27 | 古河電気工業株式会社 | イムノクロマトグラフィー、これに用いられる検出装置および試薬 |
| KR102489353B1 (ko) | 2015-06-01 | 2023-01-17 | 캘리포니아 인스티튜트 오브 테크놀로지 | 특정 집단에 대한 항원으로 t 세포를 스크리닝하기 위한 조성물 및 방법 |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6117631A (en) * | 1996-10-29 | 2000-09-12 | Polyprobe, Inc. | Detection of antigens via oligonucleotide antibody conjugates |
| US6426513B1 (en) * | 1998-09-18 | 2002-07-30 | Massachusetts Institute Of Technology | Water-soluble thiol-capped nanocrystals |
| DE69938353T2 (de) * | 1998-09-24 | 2009-03-05 | Indiana University Research and Technology Corp., Indianapolis | Wasserlösliche lumineszente quantum-dots sowie deren biokonjugate |
| AU4324900A (en) * | 1999-02-05 | 2000-08-25 | University Of Maryland At Baltimore | Luminescence spectral properties of cds nanoparticles |
| US20010055764A1 (en) * | 1999-05-07 | 2001-12-27 | Empedocles Stephen A. | Microarray methods utilizing semiconductor nanocrystals |
| JP4951184B2 (ja) * | 2000-03-20 | 2012-06-13 | マサチューセッツ インスティテュート オブ テクノロジー | 無機粒子結合体 |
| AU2001249459A1 (en) * | 2000-03-24 | 2001-10-08 | The State Of Oregon, Acting By And Through The State Board Of Higher Education On Behalf Of The University Of Oregon | Scaffold-organized clusters and electronic devices made using such clusters |
-
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-
2009
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Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006137875A (ja) * | 2004-11-12 | 2006-06-01 | Hitachi Software Eng Co Ltd | 高発光特性を有する半導体ナノ粒子 |
| JP4555055B2 (ja) * | 2004-11-12 | 2010-09-29 | 日立ソフトウエアエンジニアリング株式会社 | 高発光特性を有する半導体ナノ粒子 |
| JP2006213592A (ja) * | 2005-01-06 | 2006-08-17 | Hitachi Software Eng Co Ltd | 半導体ナノ粒子表面修飾方法 |
| JP2009092647A (ja) * | 2007-09-19 | 2009-04-30 | Hitachi High-Technologies Corp | 陰イオン濃度測定装置及び陰イオン濃度測定素子 |
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