JP2003026598A - New rheumatism-preventing and treating medicine - Google Patents

Abstract

PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a new rheumatism-preventing and treating medicine, and to provide a method for judging rheumatism diagnosis. SOLUTION: This new rheumatism-preventing and treating medicine contains selenoprotein P or the C-terminal peptide or peptide group of the protein as a main active ingredient. And the method for judging the diagnosis of chronic articular rheumatism comprises assaying the content of the selenoprotein P in a biological specimen. Thereby, the preferable rheumatism-preventing and treating medicine and the method for judging the diagnosis of chronic articular rheumatism are provided.

Description

【発明の詳細な説明】Detailed Description of the Invention

【０００１】[0001]

【産業上の利用分野】本願発明は、医療用医薬品の分野
に属し、詳細には新規な免疫異常性疾患の診断及び予防
・治療用薬剤に関する。さらに詳細には、血漿蛋白質の
一種であるセレノプロテインＰを、好適には当該セレノ
プロテインＰのＣ末端側ペプチドもしくは当該ペプチド
群を有効成分として含有するリウマチの予防・治療用薬
剤に関する。BACKGROUND OF THE INVENTION 1. Field of the Invention The present invention belongs to the field of medical drugs, and more particularly to a novel drug for diagnosing and preventing / treating immunological disorders. More specifically, the present invention relates to a preventive / therapeutic agent for rheumatism, which comprises selenoprotein P, which is one of plasma proteins, and preferably contains the C-terminal side peptide of selenoprotein P or the peptide group as an active ingredient.

【０００２】[0002]

【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】慢性関
節リウマチ(Rheumatoid arthritis；以下、ＲＡと呼称
することがある)等の臓器非特異的自己免疫疾患及び潰
瘍性大腸炎のような臓器特異的自己免疫疾患は、通常は
免疫学的寛容の状態にある自己の抗原に対して応答する
Ｔ細胞が、何らかの原因で自己の組織内で活性化され自
己の抗原と応答するようになり、これが持続的な炎症反
応となって組織に障害を与えることに起因する。この場
合、抗原は自己の関節の成分であるII型コラーゲンや消
化管粘膜の主成分である。Organ non-specific autoimmune diseases such as rheumatoid arthritis (hereinafter sometimes referred to as RA) and organ-specific such as ulcerative colitis An autoimmune disease is one in which T cells, which are normally immunologically tolerant to their own antigens, become activated in their own tissues for some reason and respond to their own antigens, which persists. It is caused by causing a general inflammatory reaction and damaging the tissue. In this case, the antigen is the type II collagen, which is a component of its own joint, or the main component of the gastrointestinal mucosa.

【０００３】なかでも、ＲＡは原因不明の慢性関節炎を
特徴とする疾患で、男女比は１：４、好発年齢は３０〜
５０歳であってわが国の罹病率は全人口の０.３〜０.５
％と推定されている。発病原因は不明であるが、多因子
性の遺伝的素因、とくにＨＬＡ−Ｄ４との関連、および
ウイルス感染が注目されている。関節炎はすべての滑膜
関節に起こり、多発性、対称性の傾向を示す。初期には
滑膜の炎症のみであるが、進行すると軟骨、骨の破壊が
起こり、関節は変形、脱臼し、また骨性強直により可動
性を失う。特に手指、足趾は変形しやすく、中手指節間
関節部での尺側変位、指のスワンネック変形、ボタン穴
変形、趾では外反母趾などが特徴的である。朝起床時に
関節が動きにくいとか、こわばった感じは、「朝のこわ
ばり」といって診断上も、治療効果をみる上でも重要な
症状である。関節以外では、血管炎、心(外)膜炎、皮下
結節、肺線維症などを伴うものがあり、血管炎を伴う型
には結節性多発動脈炎様の予後不良例があって、悪性関
節リウマチといわれる。リウマチ因子が７０〜８０％の
高率に検出されるほか、赤沈値亢進、ＣＲＰ陽性、軽度
の貧血、血小板増加、血清補体高値などが認められる。
滑膜組織所見は、非特異的慢性滑膜炎である。診断はア
メリカリウマチ学会の診断基準が広く使用されている。
１９８７年改訂基準は、朝のこわばり、多発性対称性関
節炎、皮下結節、手の関節Ｘ線所見など７項目からなり
４項目以上あればＲＡとする。Among them, RA is a disease characterized by chronic arthritis of unknown cause, the ratio of male and female is 1: 4, and the age of prevalence is 30 to 30.
At the age of 50, the morbidity in Japan is 0.3-0.5 of the total population.
It is estimated to be%. Although the etiology is unknown, multifactorial genetic predisposition, particularly the association with HLA-D4, and viral infection have attracted attention. Arthritis occurs in all synovial joints and presents with a tendency of multiple, symmetry. Initially, only synovial inflammation occurs, but as it progresses, cartilage and bone are destroyed, joints deform, dislocate, and lose mobility due to bony ankylosis. In particular, the fingers and toes are liable to be deformed, and ulnar side displacement at the metacarpophalangeal joint, swan neck deformation of the fingers, buttonhole deformation, and hallux valgus on the toes are characteristic. Stiff joints and stiff feeling when waking up in the morning are called "stiffness in the morning" and are important symptoms both in terms of diagnosis and in terms of therapeutic effects. Other than joints, there are those with vasculitis, pericarditis, subcutaneous nodules, pulmonary fibrosis, etc., and there are cases of poor prognosis such as polyarteritis nodosa associated with vasculitis. It is called rheumatism. Rheumatoid factor is detected at a high rate of 70 to 80%, and increased erythrocyte sedimentation level, CRP positive, mild anemia, thrombocytosis, high serum complement level, etc. are observed.
Synovial tissue findings are non-specific chronic synovitis. The diagnostic criteria of the American College of Rheumatology are widely used for diagnosis.
The 1987 revised standard consists of seven items including morning stiffness, multiple symmetrical arthritis, subcutaneous nodules, and X-ray findings of joints of the hands. RA is defined if there are four or more items.

【０００４】これら疾患の患者数は毎年、僅かながら増
加しているにも拘わらず、今なお有効な治療薬や予防方
法は見出されていない(山村雄一、岸本忠三、ロバート
・Ａ・グッド編：薬剤による免疫不全、「免疫科学」、
９巻、ｐ.２８５−２８９、(１９８４))。現在、これら
の疾患の治療には、ステロイド、非ステロイド系抗炎症
薬と金剤、Ｄ−ペニシラミン、サラゾピリン、５−アミ
ノサリチル酸、アザチオプリン、６−ＭＰ、胸腺摘出
術、トラニラスト、メトトレキシサート、７Ｓ−免疫グ
ロブリン大量投与療法、成分栄養、並びにシクロスポリ
ンＡ及びメトロダニゾール等の寛解導入薬や免疫抑制剤
の薬物療法が対症療法的に行われている(市川陽一ら：
慢性関節リウマチにおけるメトトレキサートおよびサラ
ゾスルファピリジン長期投与例の検討、リウマチ、３５
巻、ｐ.６６３−６７０、(１９９５)；柏崎禎夫：慢性
関節リウマチに対するオーラノフィンとメトトレキシサ
ートによる併用療法の検討、リウマチ、３６巻、ｐ.５
２８−５４４、(１９９６)；古谷武文ら：慢性関節リウ
マチにおける低用量メトトレキシレート療法の有害事
象、リウマチ、３６巻、ｐ.７４６−７５２、(１９９
６)；渡辺言夫：若年性関節リウマチの薬物療法、リウ
マチ、３６巻、ｐ.６７０−６７５、(１９９６)；八倉
隆保：免疫抑制療法・自己免疫疾患の治療 総合臨床、
３０巻、ｐ.３３５８、(１９８１)；都外川新ら：慢性
関節リウマチにおけるメトトレキシサート療法の検討−
有効性のより高い投与法を求めて−、リウマチ、３７
巻、ｐ.６８１−６８７(１９９７))。さらには、滑膜切
除術、関節形成術、関節置換術などの整形外科的治療、
温熱、運動、装具、補助具などによるリハビリテーショ
ン治療を病状、病期によりうまく組み合わせて行う。し
かしながら、これらは根治的な療法とは言えず、むしろ
長期服用による重篤な副作用の原因ともなり、より有効
な予防・治療薬、治療法の開発が望まれている。Although the number of patients with these diseases has been slightly increasing every year, effective therapeutic agents and preventive methods have not yet been found (Yuichi Yamamura, Tadamitsu Kishimoto, Robert A. Good). : Drug-induced immunodeficiency, "immunology",
Volume 9, pp. 285-289, (1984)). Currently, for the treatment of these diseases, steroids, non-steroidal anti-inflammatory drugs and gold drugs, D-penicillamine, salazopyrine, 5-aminosalicylic acid, azathioprine, 6-MP, thymectomy, tranilast, methotrexate, 7S -Immunoglobulin high dose therapy, component nutrition, and pharmacotherapy of remission inducing agents such as cyclosporin A and metrodanizole and immunosuppressive agents are symptomatically performed (Yoichi Ichikawa et al .:
Long-term administration of methotrexate and salazosulfapyridine in rheumatoid arthritis, rheumatism, 35
Vol., P. 663-670, (1995); Sadao Kashiwazaki: Examination of combination therapy with auranofin and methotrexate for rheumatoid arthritis, rheumatism, vol. 36, p.
28-544, (1996); Takefumi Furuya et al .: Adverse events of low-dose methotrexylate therapy in rheumatoid arthritis, rheumatism, 36, p.746-752, (199).
6); Norio Watanabe: Pharmacotherapy for juvenile rheumatoid arthritis, rheumatism, 36, p.670-675, (1996); Takakura Yakura: Immunosuppressive therapy / treatment of autoimmune disease.
30, p.3358, (1981); Shin Togakawa et al .: Study of methotrexate therapy for rheumatoid arthritis-
In search of a more effective administration method-, rheumatism, 37
Vol. 681-687 (1997)). In addition, orthopedic treatments such as synovectomy, arthroplasty and joint replacement,
Rehabilitation treatment with heat, exercise, orthosis, assistive devices, etc. will be performed according to the condition and stage. However, these are not radical cures, but rather cause serious side effects due to long-term administration, and development of more effective preventive / therapeutic agents and therapeutic methods is desired.

【０００５】セレノプロテインＰは１９７７年にグルタ
チオンペロキシダーゼ(gulutathion-peroxidase)とは異
なるセレン含有タンパク質として確認され、１９８２年
にセレンがセレノシステイン(selenocysteine)の形態で
取り込まれていることが明らかにされた。さらに、１９
９１年にセレノプロテインＰのｃＤＮＡのクローニング
により全長のアミノ酸配列が明らかにされ、その結果、
当該蛋白質は最大１０個のセレノシステインを含む可能
性が示された(Ｈｉｌｌ Ｋ.Ｅ. ａｎｄ Ｂｕｒｋ Ｒ.
Ｆ., Ｂｉｏｍｅｄ Ｅｎｖｉｒｏｎ Ｓｃｉ., １０,
ｐ.１９８−２０８,(１９９７))。セレノプロテインＰ
の機能はほとんど不明であったが、最近、invitroの系
でphospholipid hydroperoxideやperoxynitriteの還元
活性、神経細胞のsurvival promoting factorとしての
作用が見出された。しかし、セレノプロテインＰのin v
ivoでの作用については全く知られておらず、前出のin
vitroでの作用が生体内で生理的な意味を持つかどうか
は不明のままであった。ましてや、本願発明に係るリウ
マチとの関連や、その症状を改善するような作用につい
ては、全く知られていなかった。Selenoprotein P was confirmed in 1977 as a selenium-containing protein different from glulutathion-peroxidase, and in 1982 it was revealed that selenium was incorporated in the form of selenocysteine. It was In addition, 19
In 1991, the cloning of the selenoprotein P cDNA revealed the full-length amino acid sequence.
The protein was shown to contain up to 10 selenocysteines (Hill K. E. and Burk R.).
F., Biomed Environ Sci., 10,
198-208, (1997)). Selenoprotein P
Although its function was largely unknown, recently, in vitro system, its reducing activity of phospholipid hydroperoxide and peroxynitrite, and its action as a survival promoting factor of nerve cells were found. However, in v of selenoprotein P
Nothing is known about the action in ivo, and in
It remains unclear whether in vitro effects have physiological significance in vivo. Furthermore, the relation with rheumatism according to the present invention and the action of improving its symptoms have not been known at all.

【０００６】[0006]

【課題を解決するための手段】上述の状況の下、本願発
明者等は先に、血液成分由来の蛋白質であるセレノプロ
テインＰに、そしてより好適な態様として当該セレノプ
ロテインＰのＣ末端側ペプチドに、従来報告されていな
かった細胞死抑制活性が認められることを見出し、この
知見を基に特許出願した(ＰＣＴ/ＪＰ９９/０６３２
２)。さらに、本願発明者は、新たなリウマチの診断
薬、予防及び治療薬を供するべく鋭意研究した結果、驚
くべきことに従来試みられることのなかった前記セレノ
プロテインＰ、好適にはそのＣ末端側ペプチドもしくは
当該ペプチド群が、免疫異常性疾患患者に特異的に低下
していることを見出し、さらにモデル動物での実際の生
体内投与によって、症状改善剤として人間その他の動物
に充分に適応できる事実を見出し、この知見に基づいて
本願発明を完成するに至った。Under the above-mentioned circumstances, the present inventors have previously proposed selenoprotein P, which is a protein derived from blood components, and, as a more preferred embodiment, the C-terminal peptide of selenoprotein P. In addition, it was found that a cell death inhibitory activity that had not been reported previously was recognized, and a patent application was made based on this finding (PCT / JP99 / 0632).
2). Further, as a result of earnest research to provide a new diagnostic agent for rheumatism, a prophylactic and therapeutic agent for the rheumatism, the inventors of the present invention have surprisingly never tried the above-mentioned selenoprotein P, preferably its C-terminal side peptide. Alternatively, it was found that the peptide group is specifically reduced in patients with immunological disorders, and the fact that it can be adequately applied to humans and other animals as a symptom improving agent by actual in vivo administration in model animals. The present invention has been completed based on the findings and this finding.

【０００７】さらに詳述すれば、慢性関節リウマチ患者
の関節液のセレノプロテインＰ含量は変形性関節炎患者
の関節液に比べて有意に低いことが示され、免疫異常性
疾患の診断に役立つことが判った。また、慢性関節リウ
マチモデルであるマウスコラーゲン誘導関節炎(ＣＩＡ)
系を用いたセレノプロテインＰの腹腔内投与実験におい
て、セレノプロテインＰ投与群に関節炎の増悪を抑制す
ることが判明し、免疫異常性疾患に対する症状改善作用
があることが判った。本願発明はこのセレノプロテイン
Ｐの新たな薬効に関するものであり、本願発明のリウマ
チの予防及び治療薬の本態はセレノプロテインＰであ
る。さらに詳細には、セレノプロテインＰの中のセレン
を含むセレノシステインに特徴があり、このアミノ酸が
リウマチの症状改善作用の中心アミノ酸であると思われ
る。細胞死抑制活性に係る先の特許出願(ＰＣＴ/ＪＰ９
９/０６３２２)の記載から、当該細胞死抑制活性にも、
含有されるセレノシステインが関与していることが判明
している。従って、セレノシステインを含み細胞死抑制
活性を持つ蛋白質及びペプチド群は、リウマチの症状改
善剤の候補となりうる。More specifically, the selenoprotein P content of the synovial fluid of patients with rheumatoid arthritis was shown to be significantly lower than that of the synovial fluid of patients with osteoarthritis, which is useful for the diagnosis of immunological disorders. understood. In addition, mouse collagen-induced arthritis (CIA), which is a model of rheumatoid arthritis,
In an intraperitoneal administration experiment of selenoprotein P using a system, it was found that the selenoprotein P administration group suppressed the exacerbation of arthritis, and it was found that the selenoprotein P administration has a symptom-improving effect on immunological disorders. The present invention relates to a new medicinal effect of selenoprotein P, and the present embodiment of the preventive and therapeutic agent for rheumatism of the present invention is selenoprotein P. More specifically, selenocysteine, which contains selenium in selenoprotein P, is characteristic, and this amino acid seems to be the central amino acid for the rheumatoid symptom improving action. Previous patent application relating to cell death suppression activity (PCT / JP9
From the description of 9/06322),
It has been found that the contained selenocysteine is involved. Therefore, proteins and peptides containing selenocysteine and having cell death suppressing activity can be candidates for rheumatoid symptom improving agents.

【０００８】そもそも、本願発明の薬剤に関係するセレ
ンは、微量必須元素の一つであり、それが欠乏した場合
には心筋症などを伴う重篤な欠乏症を惹起することが知
られている。また、無血清培養の培地に亜セレン酸ナト
リウムの添加が必須であることから、セレンが細胞レベ
ルでの生存維持・増殖に必須であることが示されてい
る。しかし、セレン化合物が毒物指定されていることか
ら理解されるように、有効量と危険量の幅、つまり安全
域の濃度幅が狭く、適量以上のセレン化合物は一般的に
は細胞にとって毒性を示し、逆に細胞死を誘導する。例
えば、セレンの急性中毒症状として、顔面蒼白、神経症
状、神経障害、皮膚炎、胃腸障害などが知られている。
また、細胞培養にセレノシステインの２量体であるセレ
ノシスチンを添加すると、単独ではかなり強い毒性を示
す。これに対して、本願発明の好適な態様であるセレノ
プロテインＰ、セレノプロテインＰのＣ末端側断片は、
その構造中に９〜１０個のセレノシステインを含むにも
拘わらず、強い毒性は観察されなかった。このことか
ら、本発明の薬効作用を示すセレノプロテインＰの特徴
として、セレノシステインを含み、なおかつ毒性が減弱
していることが重要と思われる。本願発明のペプチドま
たは当該ペプチド群は、毒性の低減というセレン化合物
に対する命題を克服するのみならず、予期し得ないリウ
マチの症状改善作用をもたらすことを可能とするもので
ある。In the first place, selenium, which is related to the drug of the present invention, is one of trace essential elements, and when it is deficient, it is known to cause serious deficiency accompanied by cardiomyopathy and the like. Further, since the addition of sodium selenite to the medium for serum-free culture is essential, it has been shown that selenium is essential for the survival maintenance / proliferation at the cell level. However, as can be understood from the fact that selenium compounds are designated as toxic substances, the effective dose range and the dangerous dose range, that is, the concentration range of the safety margin is narrow, and an appropriate amount or more of the selenium compound is generally toxic to cells. , On the contrary, induces cell death. For example, facial pallor, neurological symptoms, neuropathy, dermatitis, gastrointestinal disorders, etc. are known as selenium acute poisoning symptoms.
In addition, when selenocystine, which is a dimer of selenocysteine, is added to cell culture, it shows considerably strong toxicity by itself. On the other hand, selenoprotein P, which is a preferred embodiment of the present invention, and the C-terminal side fragment of selenoprotein P are
No strong toxicity was observed despite the inclusion of 9-10 selenocysteines in its structure. From this, it is considered important that selenoprotein P showing a medicinal effect of the present invention contains selenocysteine and has reduced toxicity. The peptide of the present invention or the peptide group can not only overcome the proposition of selenium compounds for reducing toxicity, but also provide an unexpected effect of improving symptoms of rheumatism.

【０００９】ここで用いられるセレノプロテインＰに特
段の制約はなく、所望の症状改善活性を有するものであ
れば如何なる分子形態のものを包含する。すなわち、完
全分子型セレノプロテインＰをはじめ種々の分子形態の
ものが対象となり得る。この中で、好適な態様はセレノ
プロテインＰのＣ末端側ペプチドもしくは当該ペプチド
群であり、中でもＣ末端側１０３個（２６０位から３６
２位まで： 260ＫＲＣＩＮＱＬＬＣＫＬＰＴＤＳＥＬＡ
ＰＲＳＵＣＣＨＣＲＨＬＩＦＥＫＴＧＳＡＩＴＵＱＣＫ
ＥＮＬＰＳＬＣＳＵＱＧＬＲＡＥＥＮＩＴＥＳＣＱＵＲ
ＬＰＰＡＡＵＱＩＳＱＱＬＩＰＴＥＡＳＡＳＵＲＵＫＮ
ＱＡＫＫＵＥＵＰＳＮ362）のアミノ酸配列または当該
アミノ酸配列のうち１もしくは数個のアミノ酸が欠失、
置換もしくは付加されたアミノ酸配列または、前記いず
れかのアミノ酸配列の部分配列または前記アミノ酸配列
を含有するアミノ酸配列を有するペプチドまたは当該ペ
プチド群は、好適な態様として推奨され得る。とりわけ
好適なＣ末端側ペプチドもしくは当該Ｃ末端側ペプチド
より構成されるペプチド群として、ＫＲＣＩＮＱＬＬＣ
ＫＬＰＴＤＳＥＬＡＰＲＳＵＣＣＨＣＲＨＬＩおよび／
またはＴＧＳＡＩＴＵＱＣＫＥＮＬＰＳＬＣＳＵＱＧＬ
ＲＡＥＥＮＩで表されるアミノ酸配列、または、前記い
ずれかのアミノ酸配列の部分配列または前記アミノ酸配
列を含有するアミノ酸配列を有するペプチドまたは当該
ペプチド群が例示される。なお、本願明細書で用いる
「当該ペプチド群」とはセレノプロテインＰのアミノ酸
配列に由来し、少なくとも１個のセレノシステインを含
むペプチドで、当該アミノ酸配列のうち１もしくは数個
のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸配
列を含み、糖鎖の有無、荷電の相違、断片化の多様性等
に起因する微細構造の異なるペプチドの集合体を意味す
る。すなわち、本願発明のセレノプロテインＰ及びペプ
チド群とはセレノプロテインＰのアミノ酸配列に由来
し、細胞障害抑制活性を有するものであればその分子形
態に特段の制約はなく、これらには完全分子型のセレノ
プロテインＰをはじめこれに起因するＣ末端側ペプチド
等が含まれる。The selenoprotein P used herein is not particularly limited and includes any molecular form as long as it has a desired symptom improving activity. That is, various molecular forms such as complete molecular selenoprotein P can be targeted. Among these, the preferred embodiment is the C-terminal side peptide of selenoprotein P or the peptide group, and among them, 103 C-terminal side peptides (from position 260 to 36).
Up to 2nd place: 260KRCINQLLCKLPTDSELA
PRSUCCHCRHLIFEKTGSAITUQCK
ENLPSLSUQGLRAEENITESCQUR
LPPAAUQISQQLIPTEASASURUKN
QAKKUUPSN362) or one or several amino acids in the amino acid sequence deleted,
A peptide or a peptide group having a substituted or added amino acid sequence, a partial sequence of any of the above amino acid sequences, or an amino acid sequence containing the above amino acid sequence, or a group of such peptides can be recommended as a preferred embodiment. As a particularly preferred C-terminal side peptide or a peptide group composed of the C-terminal side peptide, KRCINQLLC
KLPTDSELAPRSUCCHCRHLI and /
Or TGSAITUQCKENLPSLCSUQGL
Examples include a peptide having the amino acid sequence represented by RAEENI, a partial sequence of any of the amino acid sequences described above, or an amino acid sequence containing the amino acid sequence, or the peptide group. As used herein, the “group of peptides” is a peptide derived from the amino acid sequence of selenoprotein P and containing at least one selenocysteine, and one or several amino acids in the amino acid sequence are deleted. It means an aggregate of peptides including a substituted or added amino acid sequence and having different fine structures due to the presence or absence of sugar chains, the difference in charge, the diversity of fragmentation and the like. That is, the selenoprotein P and the peptide group of the present invention are derived from the amino acid sequence of selenoprotein P and have no particular restriction on the molecular form as long as they have cytotoxicity-inhibiting activity. In addition to selenoprotein P, C-terminal peptides derived therefrom are included.

【００１０】本願発明に使用されるセレノプロテインＰ
または当該蛋白質に由来するペプチドもしくはペプチド
群を製造する方法は特に限定されるものではないが、例
えばヒト血液より分離する方法、または遺伝子組換え技
術により製造することができる。このような本願発明の
ペプチドは、ペプチド合成機を用いて常法に従って調製
することもできるし、また、本願発明のペプチドをリー
ド物質として、化学合成物をデザインすることも可能で
ある。本願発明に使用されるリウマチの予防・治療用薬
剤の主要構成成分となるセレノプロテインＰまたは当該
蛋白質に由来するペプチドもしくはペプチド群は、一般
的な酵素類よりも熱、変性剤、幅広いｐＨ、血中のプロ
テアーゼに対して安定であるため、これを精製同定する
に際しては、一つの態様として、血漿を出発原料とし種
々のクロマトグラフィー工程、例えば、ヘパリンクロマ
トグラフィー、陽イオン交換クロマトグラフィー、陰イ
オン交換クロマトグラフィー、疎水クロマトグラフィ
ー、ゲル濾過クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフ
ィー、ハイドロキシアパタイトクロマトグラフィー、抗
体カラム等の各種アフィニティーカラムクロマトグラフ
ィー等、適用可能な種々の担体を用いた分画方法の他、
硫酸アンモニウム沈殿分画、分子量膜分画、等電点分
画、電気泳動分画等、種々の分画法が利用可能である。
これらの分画法を組み合わせることにより、所望のセレ
ノプロテインＰまたはペプチドもしくはペプチド群を分
画することが可能である。その望ましい組み合わせの精
製方法の一例を調製例に示す。The selenoprotein P used in the present invention
The method for producing the peptide or peptides derived from the protein is not particularly limited, but it can be produced by, for example, a method of separating from human blood, or a gene recombination technique. Such a peptide of the present invention can be prepared by a conventional method using a peptide synthesizer, and a chemically synthesized product can be designed using the peptide of the present invention as a lead substance. The selenoprotein P or a peptide or peptides derived from the protein, which is a main component of the agent for preventing or treating rheumatoid arthritis used in the present invention, contains heat, a denaturant, a wide pH range, blood Since it is stable to the protease in the medium, one aspect of purification and identification is to use plasma as a starting material for various chromatographic steps such as heparin chromatography, cation exchange chromatography, and anion exchange. Chromatography, hydrophobic chromatography, gel filtration chromatography, reverse phase chromatography, hydroxyapatite chromatography, various affinity column chromatography such as antibody column, and other fractionation methods using various applicable carriers,
Various fractionation methods such as ammonium sulfate precipitation fractionation, molecular weight membrane fractionation, isoelectric focusing fractionation, and electrophoretic fractionation are available.
By combining these fractionation methods, it is possible to fractionate the desired selenoprotein P or peptide or peptides. An example of the purification method of the desirable combination is shown in the preparation example.

【００１１】本願発明では、有効成分としての当該蛋白
質またはペプチドもしくはペプチド群と公知の適当な賦
形剤を組み合わせ、公知の方法で本願発明のリウマチの
予防・治療用薬剤とすることができる。本願発明の予防
・治療用薬剤の有効投与量は、投与対象者の年齢、症状
及び重症度などにより変動し、最終的には医師の意図に
より変動する。薬効は投与方法には依存しないが、皮
下、皮内、腹腔への投与、血管内への単回(ボーラス)投
与あるいは点滴投与などが最適である。また、分子量の
小さなペプチド群の場合は、経口投与や経皮投与なども
可能である。In the present invention, the protein or peptide or peptide group as an active ingredient may be combined with a known appropriate excipient to provide the preventive / therapeutic agent for rheumatism according to the present invention by a known method. The effective dose of the prophylactic / therapeutic drug of the present invention varies depending on the age, symptoms and severity of the administration subject, and finally varies according to the intention of the doctor. The drug efficacy does not depend on the administration method, but subcutaneous, intradermal, intraperitoneal administration, single intravascular (bolus) administration, or drip administration is most suitable. Further, in the case of a peptide group having a small molecular weight, oral administration or transdermal administration is also possible.

【００１２】さらに、本願発明の緒となった慢性関節リ
ウマチ患者の生物学的試料中のセレノプロテインＰ含量
と病態の相関に関する知見により、当該セレノプロテイ
ンＰを診断マーカーとする慢性関節リウマチの診断・判
定方法が提供される。患者の生物学的試料、好適には関
節液を被検試料として、セレノプロテインＰの含量を測
定する。この測定には、酵素免疫測定法、放射免疫測定
法、ウェスタンブロット法、凝集法、免疫比濁法及び免
疫拡散法等の測定方法が採用される。慢性関節リウマチ
患者の関節液中のセレノプロテインＰ含量は正常人の関
節液中の含量に比して有意に低下しており、慢性関節リ
ウマチの診断・判定の一つの指標となり得る。Further, based on the knowledge on the correlation between the selenoprotein P content in the biological sample of the rheumatoid arthritis patient and the pathological condition, which is the starting point of the present invention, the diagnosis and diagnosis of rheumatoid arthritis using the selenoprotein P as a diagnostic marker can be carried out. A determination method is provided. The content of selenoprotein P is measured using a biological sample of a patient, preferably a joint fluid as a test sample. For this measurement, an enzyme immunoassay, a radioimmunoassay, a Western blot method, an agglutination method, an immunoturbidimetric method, an immunodiffusion method and the like are adopted. The content of selenoprotein P in the synovial fluid of patients with rheumatoid arthritis is significantly lower than that in the synovial fluid of normal humans, and can be one index for diagnosis and determination of rheumatoid arthritis.

【００１３】以下に、実施例を挙げて本願発明を具体的
に説明するが、本願発明はこれらの例に何ら限定される
ものではない。なお、以下に示す調製例及び実施例で
は、特に断りのない限り、ファルマシア、バイオラド、
和光純薬、宝酒造、東洋紡およびＮｅｗ Ｅｎｇｌａｎ
ｄ ＢｉｏＬａｂｓ社製の試薬を使用した。Hereinafter, the present invention will be specifically described with reference to examples, but the present invention is not limited to these examples. In the following Preparation Examples and Examples, unless otherwise specified, Pharmacia, Bio-Rad,
Wako Pure Medicine, Takara Shuzo, Toyobo and New England
d Reagents from BioLabs were used.

【実施例】【Example】

【００１４】実施例１ (慢性関節リウマチ患者の関節液中のセレノプロテイン
Ｐ含量)免疫異常性疾患の一種である慢性関節リウマチ
とセレノプロテインＰの関係を調べるために、慢性関節
リウマチ(ＲＡ)患者における血中及び関節液中のセレノ
プロテインＰ含量を測定した。慢性関節リウマチ患者の
関節液を８検体、血清を８検体、変形性関節炎(ＯＡ)患
者の関節液を１４検体、血清を４検体、健常人の関節液
を２検体、血清を５検体使用した。それぞれの検体は、
以下に述べる３種のＥＩＡ系完全長のセレノプロテイン
Ｐ検出ＥＩＡ(Ｎ-Ｃ系)、セレノプロテインＰのＮ末検
出ＥＩＡ(Ｎ-Ｎ系)、及びセレノプロテインＰのＣ末検
出ＥＩＡ(Ｃ-Ｃ系)で測定した。 Example 1 (Content of selenoprotein P in synovial fluid of patients with rheumatoid arthritis) In order to examine the relationship between rheumatoid arthritis and selenoprotein P, which is a type of immunological disorder, patients with rheumatoid arthritis (RA) The content of selenoprotein P in blood and synovial fluid was measured. 8 specimens of synovial fluid from rheumatoid arthritis patients, 8 specimens of serum, 14 specimens of synovial fluid from patients with osteoarthritis (OA), 4 specimens of serum, 2 specimens of synovial fluid of healthy subjects, 5 specimens of serum were used. . Each specimen is
The following three types of EIA full-length selenoprotein P detection EIA (NC system), N-terminal detection EIA of selenoprotein P (NN system), and C-terminal detection EIA of selenoprotein P (C-C) (C system).

【００１５】完全長セレノプロテインＰのＥＩＡ(Ｎ-Ｃ
系)：固相化抗体としてＢＤ１抗体(ＳｅＰ Ｎ末認識抗
体)２μｇ/ｍｌ ＰＢＳ１００μｌ/ｗｅｌｌでＥＩＡプ
レートに４℃で一晩固相化し、ＰＢＳＴ(０.０５％Ｔｗ
ｅｅｎ２０含ＰＢＳ)で４回洗浄した。４倍希釈のブロ
ックエース(ＰＢＳ希釈)を３５０〜４００μｌ添加し、
室温で１時間放置し、試料希釈液(１０×ブロックエー
ス/ＰＢＳＴ(０.０８％Ｔｗｅｅｎ)希釈)により段階希
釈した試料を５０μｌ/ｗｅｌｌで添加し、３７℃で１.
５時間インキュベーションした。ＰＢＳＴで５回洗浄
後、二次抗体として試料希釈液により０.２５μｇ/ｍｌ
に調製したビオチン化Ａ２７抗体を各ｗｅｌｌに５０μ
ｌ添加し、３７℃で３０分間インキュベーションした。
この後は、ＡＢＣキット(VECTOR LAB社)を用い添付のプ
ロトコールに従って、発色基質としてＴＭＢＺを用い、
１Ｎ硫酸を添加することにより発色反応を停止させ、Ｏ
Ｄ４５０を測定した。EIA of full-length selenoprotein P (NC
System): BD1 antibody (SeP N-terminal recognizing antibody) 2 μg / ml PBS 100 μl / well as an immobilized antibody was immobilized on an EIA plate at 4 ° C. overnight and PBST (0.05% Tw).
It was washed 4 times with een20-containing PBS). Add 350-400 μl of 4-fold diluted Block Ace (PBS dilution),
The sample was left standing at room temperature for 1 hour, and the sample serially diluted with a sample diluent (10 × Block Ace / PBST (0.08% Tween) diluted) was added at 50 μl / well, and the mixture was incubated at 37 ° C. for 1.
Incubated for 5 hours. After washing 5 times with PBST, 0.25 μg / ml as a secondary antibody with a sample diluent
50μ of the biotinylated A27 antibody prepared in
1 was added and incubated at 37 ° C. for 30 minutes.
After that, TMBZ was used as a chromogenic substrate according to the attached protocol using ABC kit (VECTOR LAB),
The color reaction was stopped by adding 1N sulfuric acid,
D450 was measured.

【００１６】セレノプロテインＰのＮ末検出ＥＩＡ(Ｎ-
Ｎ系)：固相化抗体としてＢＤ１抗体(ＳｅＰ Ｎ末認識
抗体、２μｇ/ｍｌ)、二次抗体としてＨＲＰ修飾ＡＨ５
抗体(２μｇ/ｍｌ)を使用した。発色基質としてＴＭＢ
Ｚを用い、１Ｎ硫酸を添加し、反応を停止させ、ＯＤ４
５０を測定した。N-terminal detection of selenoprotein P EIA (N-
N system): BD1 antibody (SeP N-terminal recognizing antibody, 2 μg / ml) as a solid phase antibody, HRP-modified AH5 as a secondary antibody
Antibody (2 μg / ml) was used. TMB as chromogenic substrate
Using Z, 1N sulfuric acid was added to stop the reaction, and OD4
50 was measured.

【００１７】セレノプロテインＰのＣ末検出ＥＩＡ(Ｃ-
Ｃ系)：固相化抗体としてＡＡ３抗体(ＳｅＰ Ｃ末認識
抗体、１μｇ/ｍｌ)、二次抗体としてビオチン化Ａ２７
抗体(０.５μｇ/ｍｌ)を使用した。ＡＢＣキットを使
い、発色基質としてＴＭＢＺを用い、１Ｎ硫酸を添加
し、反応を停止させ、ＯＤ４５０を測定した。ここで使
用した抗体に関して、ＢＤ１抗体、ＡＨ５抗体、ＡＡ３
抗体は、Ｙ.Ｗａｔａｎａｂｅ ｅｔ ａｌ., ７ｔｈ Ｉ
ｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ ｏｎ
Ｓｅｌｅｎｉｕｍ ｉｎ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄＭｅｄ
ｉｃｉｎｅ(Ｖｅｎｅｚｉａ Ｏｃｔ.１−５, ２０００)
の要旨集に記載され、Ａ２７抗体については、本願発明
者らが先に出願したＰＣＴ/ＪＰ９９/０６３２２の明細
書中で述べている方法に従って調製したものである。CIA detection of selenoprotein P EIA (C-
C system): AA3 antibody (SeP C-terminal recognizing antibody, 1 μg / ml) as immobilized antibody, biotinylated A27 as secondary antibody
Antibody (0.5 μg / ml) was used. Using an ABC kit, TMBZ was used as a chromogenic substrate, 1N sulfuric acid was added to stop the reaction, and OD450 was measured. Regarding the antibodies used here, BD1 antibody, AH5 antibody, AA3
The antibody is Y. Watanabe et al., 7th I.
international Symposium on
Selenium in Biology and Med
icine (Venezia Oct. 1-5, 2000)
The A27 antibody is prepared according to the method described in the specification of PCT / JP99 / 06322 previously filed by the present inventors.

【００１８】図１に測定結果を健常人のプール血漿に対
する相対値として示す。各血清中のセレノプロテインＰ
含量では、各検体とも差は認められなかったが、関節液
中のセレノプロテインＰ含量については、関節炎患者の
含量が健常人より低く、さらに、変形性関節炎患者より
慢性関節リウマチ患者の方が有意に低い結果となった。
このことより、慢性関節リウマチとセレノプロテインＰ
が特異的に関係していることが示され、診断の指標とな
りうることが示された。FIG. 1 shows the measurement results as a relative value with respect to pool plasma of a healthy person. Serenoprotein P in each serum
The content of selenoprotein P in the synovial fluid was lower in healthy subjects than in healthy subjects, and the content of selenoprotein P in synovial fluid was significantly higher in patients with rheumatoid arthritis than in patients with osteoarthritis. It was a very low result.
From this, rheumatoid arthritis and selenoprotein P
Was shown to be specifically related, indicating that it could be an index for diagnosis.

【００１９】調製例 (セレノプロテインＰ断片に対する抗体結合担体(抗Ｓｅ
Ｐ抗体カラム)を用いたセレノプロテインＰ断片の精製)
血漿中のヘパリンセファロース結合画分を２Ｍ硫酸アン
モニウムにより沈殿させ、その沈殿画分に対して５倍以
上の２０ｍＭＴｒｉｓ(ｐＨ８.０)により沈殿を溶解さ
せた。この溶液に存在するセレノプロテインＰを抗Ｓｅ
Ｐ抗体カラムに結合させ、ＰＢＳで洗浄した。その後４
Ｍ尿素を含有する２０ｍＭクエン酸バッファーによりセ
レノプロテインＰを溶出し、２０ｍＭクエン酸バッファ
ーで平衡化した陽イオン交換体(Ｍａｃｒｏｐｒｅｐ Ｈ
ｉｇｈ Ｓ:ＢｉｏＲａｄ)に結合させた。これを塩化ナ
トリウムによる塩濃度勾配溶出を行ない、細胞死抑制活
性を示す画分を回収した。この時、全長のセレノプロテ
インＰを得ることが可能であるが、蛋白あたりの細胞死
抑制活性は明らかに弱い値を示した。本方法では、短時
間の精製が可能であるため、蛋白あたりの細胞死抑制活
性の強いセレノプロテインＰ断片を得ることができた。
ここで得られた断片もまた、糖鎖の有無、分子間結合の
有無、内部切断の有無などにより種々のサイズの分子種
を含む混合画分であり、非還元電気泳動で１０−３０ｋ
Ｄａのサイズを示すセレノプロテインＰ断片群であっ
た。 Preparation Example (Antibody binding carrier for selenoprotein P fragment (anti-Se
Purification of selenoprotein P fragment using P antibody column)
The heparin-sepharose-binding fraction in plasma was precipitated with 2M ammonium sulfate, and the precipitate was dissolved with 5 mM or more of 20 mM Tris (pH 8.0). The selenoprotein P present in this solution is treated with anti-Se
It was bound to a P antibody column and washed with PBS. Then 4
Selenoprotein P was eluted with 20 mM citrate buffer containing M urea, and the cation exchanger (Macroprep H
IG S: BioRad). This was subjected to elution with a salt concentration gradient using sodium chloride to collect a fraction showing a cell death suppressing activity. At this time, it was possible to obtain full-length selenoprotein P, but the cell death inhibitory activity per protein showed a clearly weak value. Since this method enables purification in a short time, it was possible to obtain a selenoprotein P fragment having a strong cell death suppressing activity per protein.
The fragment obtained here is also a mixed fraction containing molecular species of various sizes depending on the presence or absence of sugar chains, the presence or absence of intermolecular bonds, the presence or absence of internal cleavage, etc.
It was a group of selenoprotein P fragments showing the size of Da.

【００２０】実施例２ (コラーゲン誘導関節炎でのセレノプロテインＰの評価)
セレノプロテインＰの慢性関節リウマチに対する治療効
果を調べるために、コラーゲン誘導関節炎(collagen-in
duced arthritis; 以下、ＣＩＡと呼称する)で薬効評価
した。ＣＩＡは、ＤＢＡ/１マウスにウシII型コラーゲ
ンをフロイント完全アジュバントとともに２００μｇ/
マウスで尾部皮内投与し、さらに３週間後にウシII型コ
ラーゲンをフロイント不完全アジュバントとともに２０
０μｇ/マウスでマウス腹腔内投与(ブースター)する方
法で行なった。調製例で調製したセレノプロテインＰを
ブースター直後から２００μg/マウス/３〜４日で腹腔
内に投与した。ブースター後５日目から関節炎の発症と
その重症度を経時的に観察し、コントロールとして免疫
+ブースターのみのマウスと比較した。その結果、図２
に示すように、発症の遅延と重症度の軽減効果が認めら
れた。 Example 2 (Evaluation of selenoprotein P in collagen-induced arthritis)
To investigate the therapeutic effect of selenoprotein P on rheumatoid arthritis, collagen-induced arthritis (collagen-in
duced arthritis; hereinafter referred to as CIA). CIA was applied to DBA / 1 mice at 200 μg / bovine type II collagen with Freund's complete adjuvant.
Intraperitoneally administered to mice, and after 3 weeks, bovine type II collagen was added to Freund's incomplete adjuvant for 20 days.
It was performed by a method of intraperitoneal administration (booster) at 0 μg / mouse. The selenoprotein P prepared in Preparation Example was intraperitoneally administered immediately after the booster at 200 μg / mouse / 3-4 days. From the 5th day after the booster, the onset of arthritis and its severity were observed over time and immunized as a control.
+ Compared to booster-only mice. As a result,
As shown in, the effects of delaying the onset and reducing the severity were observed.

【００２１】[0021]

【発明の効果】本願発明により、これまでより強く望ま
れていた慢性関節リウマチを代表例とするリウマチに対
する新規な診断薬及び、予防・治療用薬剤を提供するこ
とが可能となる。 SEQUENCE LISTING <110> JURIDICAL FOUNDATION THE CHEMO-SERO-THERAPEUTIC RESEARCH INSTITUTE <120> NOVEL MEDICAMENT FOR TREATING RHEUMATOID ARTHRITIS <130> JP407YS <160> 3 <210> 1 <211> 103 <212> PRT <213> Human plasma <220> <223> Fragment of selenoprotein P <223> Xaa represents selenocysteine <400> 1 Lys Arg Cys Ile Asn Gln Leu Leu Cys Lys Leu Pro Thr Asp Ser Glu 260 264 269 274 Leu Ala Pro Arg Ser Xaa Cys Cys His Cys Arg His Leu Ile Phe Glu 279 284 289 Lys Thr Gly Ser Ala Ile Thr Xaa Gln Cys Lys Glu Asn Leu Pro Ser 294 299 304 Leu Cys Ser Xaa Gln Gly Leu Arg Ala Glu Glu Asn Ile Thr Glu Ser 309 314 319 Cys Gln Xaa Arg Leu Pro Pro Ala Ala Xaa Gln Ile Ser Gln Gln Leu 324 329 334 339 Ile Pro Thr Glu Ala Ser Ala Ser Xaa Arg Xaa Lys Asn Gln Ala Lys 344 349 354 Lys Xaa Glu Xaa Pro Ser Asn 359 <210> 2 <211> 30 <212> PRT <213> Human plasma <220> <223> Xaa represents selenocysteine <400> 2 Lys Arg Cys Ile Asn Gln Leu Leu Cys Lys Leu Pro Thr Asp Ser Glu 1 5 10 15 Leu Ala Pro Arg Ser Xaa Cys Cys His Cys Arg His Leu Ile 20 25 30 <210> 3 <211> 28 <212> PRT <213> Human plasma <400> 3 Thr Gly Ser Ala Ile Thr Xaa Gln Cys Lys Glu Asn Leu Pro Ser Leu 1 5 10 15 Cys Ser Xaa Gln Gly Leu Arg Ala Glu Glu Asn Ile 20 25Industrial Applicability According to the present invention, it is possible to provide a novel diagnostic agent for rheumatoid, which is typified by rheumatoid arthritis, which has been strongly desired until now, and a prophylactic / therapeutic agent. SEQUENCE LISTING <110> JURIDICAL FOUNDATION THE CHEMO-SERO-THERAPEUTIC RESEARCH INSTITUTE <120> NOVEL MEDICAMENT FOR TREATING RHEUMATOID ARTHRITIS <130> JP407YS <160> 3 <210> 1 <211> 103 <212> PRT <213> Human plasma <220><223> Fragment of selenoprotein P <223> Xaa represents selenocysteine <400> 1 Lys Arg Cys Ile Asn Gln Leu Leu Cys Lys Leu Pro Thr Asp Ser Glu 260 264 269 274 Leu Ala Pro Arg Ser Xaa Cys Cys His Cys Arg His Leu Ile Phe Glu 279 284 289 Lys Thr Gly Ser Ala Ile Thr Xaa Gln Cys Lys Glu Asn Leu Pro Ser 294 299 304 Leu Cys Ser Xaa Gln Gly Leu Arg Ala Glu Glu Asn Ile Thr Glu Ser 309 314 319 Cys Gln Xaa Arg Leu Pro Pro Ala Ala Xaa Gln Ile Ser Gln Gln Leu 324 329 334 339 Ile Pro Thr Glu Ala Ser Ala Ser Xaa Arg Xaa Lys Asn Gln Ala Lys 344 349 354 Lys Xaa Glu Xaa Pro Ser Asn 359 <210> 2 <211> 30 <212> PRT <213> Human plasma <220><223> Xaa represents selenocysteine <400> 2 Lys Arg Cys Ile Asn Gln Leu Leu Cys Lys Leu Pro Thr Asp Ser Glu 1 5 10 15 Leu Ala Pro Arg Ser Xaa Cys Cys Hi s Cys Arg His Leu Ile 20 25 30 <210> 3 <211> 28 <212> PRT <213> Human plasma <400> 3 Thr Gly Ser Ala Ile Thr Xaa Gln Cys Lys Glu Asn Leu Pro Ser Leu 1 5 10 15 Cys Ser Xaa Gln Gly Leu Arg Ala Glu Glu Asn Ile 20 25

【図面の簡単な説明】[Brief description of drawings]

【図１】 慢性関節リウマチ患者、変形性関節炎患者及
び健常人の血清、関節液中のセレノプロテインＰ含量を
相対的に示したものである。FIG. 1 shows the relative contents of selenoprotein P in serum and joint fluid of rheumatoid arthritis patients, osteoarthritis patients and healthy subjects.

【図２】 コラーゲン誘導関節炎に対するセレノプロテ
インＰ投与による治療効果を示した図である。縦軸は被
験マウスの重症度、横軸はブースターからの経過日数を
示す。FIG. 2 is a graph showing the therapeutic effect of administration of selenoprotein P on collagen-induced arthritis. The vertical axis represents the severity of the test mouse, and the horizontal axis represents the number of days elapsed since the booster.

フロントページの続き (72)発明者 前田 浩明 熊本県菊池郡旭志村川辺四の西沖1314−１ 財団法人化学及血清療法研究所 菊池研 究所内 (72)発明者 野崎 周英 熊本県菊池郡旭志村川辺四の西沖1314−１ 財団法人化学及血清療法研究所 菊池研 究所内 (72)発明者 丸山 征郎 鹿児島県鹿児島市桜ヶ丘６−45−10 (72)発明者 高橋 和彦 札幌市北区北37条西８丁目２番30−409 Ｆターム(参考） 4C084 AA02 BA02 BA19 BA21 BA22 BA33 BA44 CA26 CA53 CA59 NA14 ZB152 Continued front page    (72) Inventor Hiroaki Maeda             Kumamoto Prefecture Kikuchi-gun Asahishi village Kawabe four west offshore 1314-1               Institute of Chemistry and Serum Therapy Kikuchi Lab             Inside the laboratory (72) Inventor Shuei Nozaki             Kumamoto Prefecture Kikuchi-gun Asahishi village Kawabe four west offshore 1314-1               Institute of Chemistry and Serum Therapy Kikuchi Lab             Inside the laboratory (72) Inventor Seiro Maruyama             6-45-10 Sakuragaoka, Kagoshima City, Kagoshima Prefecture (72) Inventor Kazuhiko Takahashi             Sapporo City Kita-ku Kita-ku Kita-37 Nishi 8-chome 2-30-409 F-term (reference) 4C084 AA02 BA02 BA19 BA21 BA22                       BA33 BA44 CA26 CA53 CA59                       NA14 ZB152

Claims (6)

【特許請求の範囲】[Claims] 【請求項１】 セレノシステイン含有蛋白質(以下、セ
レノプロテインＰと称することがある)及び／または当
該蛋白質のＣ末端側ペプチドもしくは当該ペプチドより
構成されるペプチド群を主要構成成分とするリウマチ予
防・治療用薬剤。1. Rheumatoid prophylaxis and treatment comprising a selenocysteine-containing protein (hereinafter sometimes referred to as selenoprotein P) and / or a C-terminal peptide of the protein or a peptide group composed of the peptide as a main component Medication. 【請求項２】 前記蛋白質のＣ末端側ペプチドもしくは
当該ペプチドより構成されるペプチド群が、セレノプロ
テインＰのＣ末端側２６０位アミノ酸から３６２位アミ
ノ酸までのアミノ酸配列に由来し、うち１もしくは数個
のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸配
列または前記いずれかのアミノ酸配列の部分配列または
前記アミノ酸配列を含有するアミノ酸配列を有する細胞
障害抑制活性を示すペプチドまたは当該ペプチド群であ
る、請求項１記載のリウマチ予防・治療用薬剤。2. The C-terminal peptide of the protein or a group of peptides composed of the peptide is derived from the amino acid sequence of amino acid from the 260th amino acid to the 362nd amino acid of C-terminal side of selenoprotein P. A peptide having a cytotoxicity-inhibiting activity or a peptide group having an amino acid sequence in which the amino acid of is deleted, substituted or added, a partial sequence of any of the amino acid sequences, or an amino acid sequence containing the amino acid sequence, The drug for prevention and treatment of rheumatism according to 1. 【請求項３】 前記蛋白質のＣ末端側ペプチドもしくは
当該ペプチドより構成されるペプチド群が、次式、 (Ｉ)：Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｃｙｓ Ｉｌｅ Ａｓｎ Ｇｌｎ Ｌ
ｅｕ Ｌｅｕ ＣｙｓＬｙｓ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ｔｈｒ Ａｓ
ｐ Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｐｒｏ Ａｒｇ Ｓｅ
ｒ Ｓｅｃ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｈｉｓ Ｃｙｓ Ａｒｇ Ｈｉ
ｓ Ｌｅｕ および／または (ＩＩ)：Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｉｌｅ Ｔｈｒ
Ｓｅｃ Ｇｌｎ ＣｙｓＬｙｓ Ｇｌｕ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ｐ
ｒｏ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｃｙｓ Ｓｅｒ Ｓｅｃ Ｇｌｎ Ｇ
ｌｙ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ａｌａ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｓｎ Ｉ
ｌｅ (式中Ａｌａはアラニン、Ａｒｇはアルギニン、Ａｓｎ
はアスパラギン、Ａｓｐはアスパラギン酸、Ｃｙｓはシ
ステイン、Ｇｌｎはグルタミン、Ｇｌｕはグルタミン
酸、Ｇｌｙはグリシン、Ｈｉｓはヒスチジン、Ｉｌｅは
イソロイシン、Ｌｙｓはリジン、Ｌｅｕはロイシン、Ｍ
ｅｔはメチオニン、Ｐｈｅはフェニルアラニン、Ｐｒｏ
はプロリン、Ｓｅｒはセリン、Ｔｈｒはトレオニン、Ｔ
ｒｐはトリプトファン、Ｔｙｒはチロシン、Ｖａｌはバ
リン及びＳｅｃはセレノシステインの各残基をそれぞれ
表す)で表されるアミノ酸配列もしくは当該アミノ酸配
列の部分配列を有し、うち１もしくは数個のアミノ酸が
欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸配列または前記
いずれかのアミノ酸配列の部分配列または前記アミノ酸
配列を含有するアミノ酸配列を有するペプチドまたは当
該ペプチド群である請求項１または請求項２記載のリウ
マチ予防・治療用薬剤。3. The C-terminal peptide of the protein or a peptide group composed of the peptide has the following formula (I): Lys Arg Cys Ile Asn Gln L
eu Leu CysLys Leu Pro Thr As
p Ser Glu Leu Ala Pro Arg Se
r Sec Cys Cys His Cys Arg Hi
s Leu and / or (II): Thr Gly Ser Ala Ile Thr
Sec Gln CysLys Glu Asn Leu P
ro Ser Leu Cys Ser Sec Gln G
ly Leu Arg Ala Glu Glu Asn I
le (where Ala is alanine, Arg is arginine, Asn
Is asparagine, Asp is aspartic acid, Cys is cysteine, Gln is glutamine, Glu is glutamic acid, Gly is glycine, His is histidine, Ile is isoleucine, Lys is lysine, Leu is leucine and M.
et is methionine, Phe is phenylalanine, Pro
Is proline, Ser is serine, Thr is threonine, T
rp represents tryptophan, Tyr represents tyrosine, Val represents valine, and Sec represents each residue of selenocysteine, or a partial sequence of the amino acid sequence, of which one or several amino acids are missing. The rheumatoid disease prevention / treatment according to claim 1 or 2, which is a peptide having a deleted, substituted or added amino acid sequence, a partial sequence of any one of the amino acid sequences, or an amino acid sequence containing the amino acid sequence, or the peptide group. Medication. 【請求項４】 セレノプロテインＰを本態とする慢性関
節リウマチ診断用マーカー。4. A marker for diagnosing rheumatoid arthritis, which has selenoprotein P as an essential component. 【請求項５】 生物学的試料中のセレノプロテインＰの
含量を測定することからなる慢性関節リウマチ診断の判
定方法。5. A method for determining rheumatoid arthritis diagnosis, which comprises measuring the content of selenoprotein P in a biological sample. 【請求項６】 生物学的試料中のセレノプロテインＰの
含量を測定するに際し、酵素免疫測定法、放射免疫測定
法、ウェスタンブロット法、凝集法、免疫比濁法及び免
疫拡散法より選択される測定方法を採用する請求項５記
載の判定方法。6. The method for measuring the content of selenoprotein P in a biological sample is selected from enzyme immunoassay, radioimmunoassay, Western blotting, agglutination, immunoturbidimetric method and immunodiffusion method. The determination method according to claim 5, wherein a measurement method is adopted.