JP2002522778A - Ｔｃ−９９ｍ標識化されたフィブリン−α−鎖ペプチドを用いるイメージング - Google Patents
Ｔｃ−９９ｍ標識化されたフィブリン−α−鎖ペプチドを用いるイメージングInfo
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Abstract
(57)【要約】
本発明は哺乳動物の組織または細胞をイメージングするための放射性標識された物質の組成物、哺乳動物の組織または細胞に結合する放射性標識物質についての組成物、フィブリンに結合する放射性標識物質についての組成物、および該組成物を用いる方法に関する。
【化１】
Description
【０００１】 （技術分野） 本発明は、一般に、核医学の分野に、より詳しくは、哺乳動物の組織または細
胞をイメージングするための放射性標識された物質についての組成物、哺乳動物
の組織または細胞に結合する放射性標識物質についての組成物、フィブリンに結
合する放射性標識物質についての組成物、および該組成物を用いる方法に関する
。
胞をイメージングするための放射性標識された物質についての組成物、哺乳動物
の組織または細胞に結合する放射性標識物質についての組成物、フィブリンに結
合する放射性標識物質についての組成物、および該組成物を用いる方法に関する
。
【０００２】 （背景技術） 深部静脈血栓（ＤＶＴ）および肺塞栓（ＰＥ）を「ホットスポット」イメージ
ングするための放射活性物質を開発することが、２０年以上にわたり、多くの研
究の対象であった（Thakur ML、Coleman RE、Hoist JH、Welch M.、インジウム
−１１１標識化された血小板：調製およびインビボおよびインビトロ機能に関す
る研究、Thrombosis Research ９：３４５−３５４、１９７６；Knight LC.、血
栓の検出のための放射性医薬、Seminars in Nucl.Med. XX：５２−６７、１９９
０；Koblik PD、DeNardo GL、Berger KJ.、血栓および血栓塞栓の検出における
イムノシンチグラフィーの現状、Seminars in Nucl.Med. XIX：２２１−２３２
、１９８９；Thakur ML、放射性標識された抗血小板抗体の血栓の検出における
可能性、S.C.Srivastava編、Radiolabeled monoclonal antibodies for imaging
and therapy、Plenum Publishing Co.、NATO ASI、シリーズ１５２、１９８８
；Thakur ML.、静脈血栓のシンチグラフィーイメージング：A state of the art
Thrombotic and Hematologic Disorders ５：２９−３６，１９９２）。「ホッ
トスポット」イメージングの１つの方法は、血小板を放射性標識化し、生化学的
に活性な成分の血栓を形成させるものであった。放射性標識された血小板がオカ
ルト血栓をアクリード（acreed）し、外部シンチグラフィーによる検出が容易に
なるという仮定に基づき、血小板を標的とするであろう非常に多くの物質が評価
された。血小板細胞質成分を吸収して結合するＩｎ−１１１−オキシンなどの物
質を用いて血小板がインビトロにて標識化された（Thakur MLら、１９７６）。
また、血小板表面糖蛋白複合体ＩＩｂ−ＩＩＩａに特異的な放射性標識された蛋
白またはペプチドを用いて血小板がインビボにて標識化された（Knight LC、１
９９０；Koblik PDら、１９８９；Thakur ML、１９８８；Thakur ML、１９９２
；Knight LC、Radcliffe R、Maurer AH、Rodwell JD、Alvarez VL、モノクロー
ナル抗体の結合ドメインが活性化された血小板に結合することに基づくＴｃ−９
９ｍ合成ペプチドを用いる血栓イメージング、J Nucl Med ３５：２８２−２８
８、１９９４；Knight LC、Maurer AH、Romano JE、イヌ実験での血栓および塞
栓をイメージングするためのヨウ素−１２３−ジスインテグリンの比較、J Nucl
Med ３７：４７６−４８２、１９９６；Pearson DA、Lister-James J、McBride
WJ、Wilson DM、Martel LJ、Civitello ER、Dean RT、Tc-99m標識された能力の
高いGPIIb/IIIa受容体アンタゴニストを用いる血栓イメージング、化学および初
期の生物学的実験、J Med Chem ３９：１３７２−１３８２、１９９６；Lister
−James J、Vallabhajosula S、Moyer BR、Pearson DA、McBride BJ、DeRosch M
A、Bush LR、Mahcac J、Dean RT、テクネチウム-99m血小板受容体−結合血小板
の臨床前評価、J Nucl Med ３８：１０５−１１１、１９９７；Line BR、Crane
P、Lazewatsky J、Barrett JA、Cloutier D、Kagan M、Lukasiewicz R、Holmes
RA、DMP444のＩ期実験、新規な血栓イメージング物質、J Nucl Med ３７：１１
７Ｐ、１９９６；Barrett JA、Crocker AC、Damphousse DJ、Heminway SJ、Liu
S、Edwards DS、Lazewatsky JL、Kagan M、Mazaika TJ、Carroll TR、イヌ動静
脈シャントおよび深部静脈血栓実験における９９ｍＴｃ環状糖蛋白ＩＩｂ／ＩＩ
Ｉａ受容体アンタゴニストの生物学的評価：（９９ｍＴｃ）キレーター−ペプチ
ド接合体の生物学的特性に対するキレーターの効果、Bioconjugate Chem ７：２
０３−２０８、１９９６）。これらの物質が実験動物および限られたヒトを対象
として成功しているにも拘わらず、最近、わずか１つの物質、ＡｃｕＴｅｃｔ、
Ｔｃ−９９ｍ標識化されたペプチドＰ−２８０が臨床的使用に認証されたにすぎ
ない。ＡｃｕＴｅｃｔは慢性でなく急性の静脈血栓（ＡｃｕＴｅｃｔ、Diatide
Inc.、J Nucl Med ３９（１０）：１９Ｎ、１９９８）を検出し、または謙遜し
ているだけで活性化された血小板を留める可能性のある、肺塞栓を検出すると考
えられる。
ングするための放射活性物質を開発することが、２０年以上にわたり、多くの研
究の対象であった（Thakur ML、Coleman RE、Hoist JH、Welch M.、インジウム
−１１１標識化された血小板：調製およびインビボおよびインビトロ機能に関す
る研究、Thrombosis Research ９：３４５−３５４、１９７６；Knight LC.、血
栓の検出のための放射性医薬、Seminars in Nucl.Med. XX：５２−６７、１９９
０；Koblik PD、DeNardo GL、Berger KJ.、血栓および血栓塞栓の検出における
イムノシンチグラフィーの現状、Seminars in Nucl.Med. XIX：２２１−２３２
、１９８９；Thakur ML、放射性標識された抗血小板抗体の血栓の検出における
可能性、S.C.Srivastava編、Radiolabeled monoclonal antibodies for imaging
and therapy、Plenum Publishing Co.、NATO ASI、シリーズ１５２、１９８８
；Thakur ML.、静脈血栓のシンチグラフィーイメージング：A state of the art
Thrombotic and Hematologic Disorders ５：２９−３６，１９９２）。「ホッ
トスポット」イメージングの１つの方法は、血小板を放射性標識化し、生化学的
に活性な成分の血栓を形成させるものであった。放射性標識された血小板がオカ
ルト血栓をアクリード（acreed）し、外部シンチグラフィーによる検出が容易に
なるという仮定に基づき、血小板を標的とするであろう非常に多くの物質が評価
された。血小板細胞質成分を吸収して結合するＩｎ−１１１−オキシンなどの物
質を用いて血小板がインビトロにて標識化された（Thakur MLら、１９７６）。
また、血小板表面糖蛋白複合体ＩＩｂ−ＩＩＩａに特異的な放射性標識された蛋
白またはペプチドを用いて血小板がインビボにて標識化された（Knight LC、１
９９０；Koblik PDら、１９８９；Thakur ML、１９８８；Thakur ML、１９９２
；Knight LC、Radcliffe R、Maurer AH、Rodwell JD、Alvarez VL、モノクロー
ナル抗体の結合ドメインが活性化された血小板に結合することに基づくＴｃ−９
９ｍ合成ペプチドを用いる血栓イメージング、J Nucl Med ３５：２８２−２８
８、１９９４；Knight LC、Maurer AH、Romano JE、イヌ実験での血栓および塞
栓をイメージングするためのヨウ素−１２３−ジスインテグリンの比較、J Nucl
Med ３７：４７６−４８２、１９９６；Pearson DA、Lister-James J、McBride
WJ、Wilson DM、Martel LJ、Civitello ER、Dean RT、Tc-99m標識された能力の
高いGPIIb/IIIa受容体アンタゴニストを用いる血栓イメージング、化学および初
期の生物学的実験、J Med Chem ３９：１３７２−１３８２、１９９６；Lister
−James J、Vallabhajosula S、Moyer BR、Pearson DA、McBride BJ、DeRosch M
A、Bush LR、Mahcac J、Dean RT、テクネチウム-99m血小板受容体−結合血小板
の臨床前評価、J Nucl Med ３８：１０５−１１１、１９９７；Line BR、Crane
P、Lazewatsky J、Barrett JA、Cloutier D、Kagan M、Lukasiewicz R、Holmes
RA、DMP444のＩ期実験、新規な血栓イメージング物質、J Nucl Med ３７：１１
７Ｐ、１９９６；Barrett JA、Crocker AC、Damphousse DJ、Heminway SJ、Liu
S、Edwards DS、Lazewatsky JL、Kagan M、Mazaika TJ、Carroll TR、イヌ動静
脈シャントおよび深部静脈血栓実験における９９ｍＴｃ環状糖蛋白ＩＩｂ／ＩＩ
Ｉａ受容体アンタゴニストの生物学的評価：（９９ｍＴｃ）キレーター−ペプチ
ド接合体の生物学的特性に対するキレーターの効果、Bioconjugate Chem ７：２
０３−２０８、１９９６）。これらの物質が実験動物および限られたヒトを対象
として成功しているにも拘わらず、最近、わずか１つの物質、ＡｃｕＴｅｃｔ、
Ｔｃ−９９ｍ標識化されたペプチドＰ−２８０が臨床的使用に認証されたにすぎ
ない。ＡｃｕＴｅｃｔは慢性でなく急性の静脈血栓（ＡｃｕＴｅｃｔ、Diatide
Inc.、J Nucl Med ３９（１０）：１９Ｎ、１９９８）を検出し、または謙遜し
ているだけで活性化された血小板を留める可能性のある、肺塞栓を検出すると考
えられる。
【０００３】 「ホットスポット」イメージングに関する第２の方法は、クロット形成に関与
する蛋白を放射性標識化することにある。血管壁が損傷している間、凝固蛋白は
次から次へと活性化され、トロンビン酵素を産出する。トロンビンは血漿フィブ
リノーゲンをフィブリンモノマーに切断し、そのモノマーが血小板の近くで重合
し、それがクロットとして適当な位置を占めることとなる。したがって、フィブ
リンは、新しいものであってもそうでなくても、ＤＶＴの不可欠な部分を占め、
肺または体内の他の部分を塞栓させる。これがＩ−１２５−フィブリノーゲンが
ＤＶＴを外部検出するのに長期にわたって人気を享受した主な理由である（Knig
ht LC、１９９０；Koblik PDら、１９８９；Thakur ML、１９９２）。しかし、
その物質はもはや市販されていない。ヨウ素−１２３−フィブリノーゲンおよび
多くの放射性核種で標識されたアンチフィブリンモノクローナル抗体もまた評価
された（Koblik PDら、１９８９）。しかし、循環時間が長い、あるいはイメー
ジ度が乏しいなどの理由から、Ｉ−１２５−フィブリノーゲン以外の物質が通常
の核医学の実施に用いられることはなかった。
する蛋白を放射性標識化することにある。血管壁が損傷している間、凝固蛋白は
次から次へと活性化され、トロンビン酵素を産出する。トロンビンは血漿フィブ
リノーゲンをフィブリンモノマーに切断し、そのモノマーが血小板の近くで重合
し、それがクロットとして適当な位置を占めることとなる。したがって、フィブ
リンは、新しいものであってもそうでなくても、ＤＶＴの不可欠な部分を占め、
肺または体内の他の部分を塞栓させる。これがＩ−１２５−フィブリノーゲンが
ＤＶＴを外部検出するのに長期にわたって人気を享受した主な理由である（Knig
ht LC、１９９０；Koblik PDら、１９８９；Thakur ML、１９９２）。しかし、
その物質はもはや市販されていない。ヨウ素−１２３−フィブリノーゲンおよび
多くの放射性核種で標識されたアンチフィブリンモノクローナル抗体もまた評価
された（Koblik PDら、１９８９）。しかし、循環時間が長い、あるいはイメー
ジ度が乏しいなどの理由から、Ｉ−１２５−フィブリノーゲン以外の物質が通常
の核医学の実施に用いられることはなかった。
【０００４】 ＤＶＴおよびＰＥの「ホットスポット」イメージングに関する第３の方法は、
アンチフィブリンペプチドを放射性標識化することである。この方法の実行可能
性は以前には研究されなかった。問題となる１つのペプチドが、LaudanoおよびD
oolittleによりフィブリノーゲン／トロンビンのクロット化の阻害物質であると
報告されている、フィブリン−α−鎖のＮ−末端トリペプチド、Ｈ−Ｇｌｙ−Ｐ
ｒｏ−Ａｒｇ−ＯＨである（Laudano AP、Doolittle RF、フィブリノーゲンに結
合し、フィブリンモノマーの重合化を防止する合成ペプチド誘導体、Proc Natl
Acad Sci ７５：３０８５−３０８９、１９７８）。研究者らはそのトリペプチ
ドのＨ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＯＨアナログがフィブリンのγ−鎖
のＣ−末端部に結合し、フィブリン重合を防止することによりフィブリノーゲン
／トロンビンのクロットのより一層強力な阻害剤であることを観察した。最近に
なって、Kawasakiらは、いくつかのアナログを調製し、ペンタペプチド、Ｈ−Ｇ
ｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−ＯＨが最も大きなフィブリノーゲン／
トロンビンのクロット形成阻害活性を有することを見出した（Kawasaki K、Miya
no M、Hirase K、Iwamoto M、アミノ酸およびペプチド XVIII、フィブリンα−
鎖のＮ−末端部分に関連する合成ペプチドおよびフィブリノーゲン／トロンビン
のクロット形成に対するその阻害効果、Chem Pharm Bull ４１：９７５−９７７
、１９９３）。
アンチフィブリンペプチドを放射性標識化することである。この方法の実行可能
性は以前には研究されなかった。問題となる１つのペプチドが、LaudanoおよびD
oolittleによりフィブリノーゲン／トロンビンのクロット化の阻害物質であると
報告されている、フィブリン−α−鎖のＮ−末端トリペプチド、Ｈ−Ｇｌｙ−Ｐ
ｒｏ−Ａｒｇ−ＯＨである（Laudano AP、Doolittle RF、フィブリノーゲンに結
合し、フィブリンモノマーの重合化を防止する合成ペプチド誘導体、Proc Natl
Acad Sci ７５：３０８５−３０８９、１９７８）。研究者らはそのトリペプチ
ドのＨ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＯＨアナログがフィブリンのγ−鎖
のＣ−末端部に結合し、フィブリン重合を防止することによりフィブリノーゲン
／トロンビンのクロットのより一層強力な阻害剤であることを観察した。最近に
なって、Kawasakiらは、いくつかのアナログを調製し、ペンタペプチド、Ｈ−Ｇ
ｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−ＯＨが最も大きなフィブリノーゲン／
トロンビンのクロット形成阻害活性を有することを見出した（Kawasaki K、Miya
no M、Hirase K、Iwamoto M、アミノ酸およびペプチド XVIII、フィブリンα−
鎖のＮ−末端部分に関連する合成ペプチドおよびフィブリノーゲン／トロンビン
のクロット形成に対するその阻害効果、Chem Pharm Bull ４１：９７５−９７７
、１９９３）。
【０００５】 本発明は哺乳動物の細胞および組織を診断学的にイメージングするための組成
物を含む。その組成物は放射性核種とキレート形成する基に結合するリンカーに
結合したアミノ酸を含む。本発明の一の具体例は、ＤＶＴおよびＰＥのイメージ
ングを容易にする、Ｔｃ−９９ｍで標識されたペンタペプチドである。
物を含む。その組成物は放射性核種とキレート形成する基に結合するリンカーに
結合したアミノ酸を含む。本発明の一の具体例は、ＤＶＴおよびＰＥのイメージ
ングを容易にする、Ｔｃ−９９ｍで標識されたペンタペプチドである。
【０００６】 定義 「ＴＰ８５０」は、デカペプチド、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ
−Ａｎａ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−（Ｄ）−Ａｌａ−Ｇｌｙ（配列番号１）を意味する
。
−Ａｎａ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−（Ｄ）−Ａｌａ−Ｇｌｙ（配列番号１）を意味する
。
【０００７】 （発明の開示） 本発明は哺乳動物の細胞および組織をイメージングするための組成物ならびに
その組成物を用いる方法を含む。
その組成物を用いる方法を含む。
【０００８】 （図面の簡単な記載） 図１：Ｔｃ−９９ｍ−ＴＰ８５０のアミノ酸配列および提案されている構造で
ある。 図２：溶媒組成、流量およびカラムを同じ条件で得られた２種のＨＰＬＣ溶出
スペクトルを合成したものである。両方のパネルのｘ軸は時間（分）を示し、ｙ
軸は放射活性体のピーク高（μＶ）を示す。斜線は溶媒組成（％）である。上の
パネルはウサギに注射したＴｃ−９９ｍ−ＴＰ８５０の溶出プロファイルを示し
、下のパネルは３時間経過後にウサギから収集した尿試料のプロファイルである
。尿に溶出される大部分の放射活性体は注射した試料中にあるのと同じような保
持時間（Ｒｔ）を有することに注意する。Ｒｔ４の放射活性体は結合していない
Ｔｃ−９９ｍのものである。Ｒｔ６.２および９.０８の放射活性体の小さなピー
クは試料中にある不純物のものと考えられる。注射したペプチドの量は僅かで、
２８０ｎｍで検出されなかった。 図３：注射した３時間後に得られるウサギの腹側のイメージである。右腕の電
極を刺激することで誘発された小さな血栓（矢の先端）ならびに両肺の上葉にあ
るＰＥ（長い矢印）を検出することができる。首の右側にも見られるように（短
い矢印）、切開部に放射活性体が蓄積している。心臓および副鼻腔において放射
活性体を確認することができる。
ある。 図２：溶媒組成、流量およびカラムを同じ条件で得られた２種のＨＰＬＣ溶出
スペクトルを合成したものである。両方のパネルのｘ軸は時間（分）を示し、ｙ
軸は放射活性体のピーク高（μＶ）を示す。斜線は溶媒組成（％）である。上の
パネルはウサギに注射したＴｃ−９９ｍ−ＴＰ８５０の溶出プロファイルを示し
、下のパネルは３時間経過後にウサギから収集した尿試料のプロファイルである
。尿に溶出される大部分の放射活性体は注射した試料中にあるのと同じような保
持時間（Ｒｔ）を有することに注意する。Ｒｔ４の放射活性体は結合していない
Ｔｃ−９９ｍのものである。Ｒｔ６.２および９.０８の放射活性体の小さなピー
クは試料中にある不純物のものと考えられる。注射したペプチドの量は僅かで、
２８０ｎｍで検出されなかった。 図３：注射した３時間後に得られるウサギの腹側のイメージである。右腕の電
極を刺激することで誘発された小さな血栓（矢の先端）ならびに両肺の上葉にあ
るＰＥ（長い矢印）を検出することができる。首の右側にも見られるように（短
い矢印）、切開部に放射活性体が蓄積している。心臓および副鼻腔において放射
活性体を確認することができる。
【０００９】 図４：注射した１時間２０分後に得られるウサギの腹側のイメージである。電
極を刺激することにより誘発されたクロット（クロット／血液中の放射活性体＝
６.５）およびトロンビン浸透縫糸によるクロット（クロット／血液の放射活性
体＝３.７）を検出することができる。加えて、心臓、甲状腺および副鼻腔にお
いて放射活性体を確認することができる。調製物中にＴｃ−９９ｍが遊離してい
るのは約３％であった。 図５：２ｍＣｉのＴｃ−９９ｍ−ＴＰ８５０を２時間３０分前に注射したウサ
ギの腹側のガンマ線カメラでのイメージである。右頚静脈（矢印）にトロンビン
浸透縫糸によるクロットが検出でき、左頚静脈（矢印）に電極刺激によるクロッ
トが検出できる。甲状腺においてはＴｃ−９９ｍの遊離した活性体も観察できる
。明細書中に記載されているように、電極でのクロットは等量の血液中に７.１
倍のＴｃ−９９ｍを含み、トロンビンでのクロットは血液中に３.６倍のＴｃ−
９９ｍを含んだ。心臓には放射活性体が少ない。
極を刺激することにより誘発されたクロット（クロット／血液中の放射活性体＝
６.５）およびトロンビン浸透縫糸によるクロット（クロット／血液の放射活性
体＝３.７）を検出することができる。加えて、心臓、甲状腺および副鼻腔にお
いて放射活性体を確認することができる。調製物中にＴｃ−９９ｍが遊離してい
るのは約３％であった。 図５：２ｍＣｉのＴｃ−９９ｍ−ＴＰ８５０を２時間３０分前に注射したウサ
ギの腹側のガンマ線カメラでのイメージである。右頚静脈（矢印）にトロンビン
浸透縫糸によるクロットが検出でき、左頚静脈（矢印）に電極刺激によるクロッ
トが検出できる。甲状腺においてはＴｃ−９９ｍの遊離した活性体も観察できる
。明細書中に記載されているように、電極でのクロットは等量の血液中に７.１
倍のＴｃ−９９ｍを含み、トロンビンでのクロットは血液中に３.６倍のＴｃ−
９９ｍを含んだ。心臓には放射活性体が少ない。
【００１０】 図６：２.４ｍＣｉのＴｃ−９９ｍ−ＴＰ８５０を静脈内投与する２４時間前
にＰＥを誘発させた、１匹のラビットからの３種のイメージである。図の左パネ
ルのシンチレーション写真は腹部に注射した１５分後に得たものである。その写
真は両肺に放射活性体の異常な蓄積（矢印）があったことを示す。ＰＥのイント
ロデューサーシースを確保するための切開術を行った左首において自発的に形成
されたクロットが、図の左パネルのシンチレーション写真で認められる。インビ
ボでのシンチグラフィーを終える時に、心臓および肺を切開し、分析するために
広げ、ついでガンマ線カメラならびにＸ−線カメラでイメージ処理した。Ｘ−線
イメージング（中央パネル）は左肺にてタンタルの混合したクロットを示し、そ
れは左肺にて観察されるクロットの形状（図の左パネルの腹側シンチレーション
写真）、ならびに図の右パネルに示される切開した肺および心臓のガンマ線カメ
ライメージに見られる左肺クロットの形状に相当する。インビボ（左パネル、矢
印）およびイクスビボ（右パネル、矢印）イメージの両方の、右肺に見られるク
ロットは、タンタルが無いため、Ｘ−線（中央パネル）では認められない。この
ことはクロットのこの部分がタンタル無しでそこで形成され、右肺に留まってい
ることを示す。両肺のクロットを分離し、秤量し、放射活性体について計数した
。左肺中のクロットは単位重量中の血液中にあるよりも３倍大きな活性体を有し
、右肺中のクロットは６.１倍大きな活性体を有した。首でのクロットは単位重
量の血液中あるよりも３.２倍大きな活性体を有した。さらに、心臓（Ｈ）にお
ける残留血液の放射活性体を図の右パネルに示す。
にＰＥを誘発させた、１匹のラビットからの３種のイメージである。図の左パネ
ルのシンチレーション写真は腹部に注射した１５分後に得たものである。その写
真は両肺に放射活性体の異常な蓄積（矢印）があったことを示す。ＰＥのイント
ロデューサーシースを確保するための切開術を行った左首において自発的に形成
されたクロットが、図の左パネルのシンチレーション写真で認められる。インビ
ボでのシンチグラフィーを終える時に、心臓および肺を切開し、分析するために
広げ、ついでガンマ線カメラならびにＸ−線カメラでイメージ処理した。Ｘ−線
イメージング（中央パネル）は左肺にてタンタルの混合したクロットを示し、そ
れは左肺にて観察されるクロットの形状（図の左パネルの腹側シンチレーション
写真）、ならびに図の右パネルに示される切開した肺および心臓のガンマ線カメ
ライメージに見られる左肺クロットの形状に相当する。インビボ（左パネル、矢
印）およびイクスビボ（右パネル、矢印）イメージの両方の、右肺に見られるク
ロットは、タンタルが無いため、Ｘ−線（中央パネル）では認められない。この
ことはクロットのこの部分がタンタル無しでそこで形成され、右肺に留まってい
ることを示す。両肺のクロットを分離し、秤量し、放射活性体について計数した
。左肺中のクロットは単位重量中の血液中にあるよりも３倍大きな活性体を有し
、右肺中のクロットは６.１倍大きな活性体を有した。首でのクロットは単位重
量の血液中あるよりも３.２倍大きな活性体を有した。さらに、心臓（Ｈ）にお
ける残留血液の放射活性体を図の右パネルに示す。
【００１１】 （発明を実施するための最良の形態） 材料および方法 ｉ）ペプチドの調製 この実験のために、４個のアミノ酸の基、Ｇｌｙ−（Ｄ）−Ａｌａ−Ｇｌｙ−
Ｇｌｙ（ＧＡＧＧ）をキレート形成基として選択した。その４個のＮＨ２基を介
して、これらのペプチドはＴｃ−９９ｍと強固にキレート形成するためのＮ４配
置を提供する。テトラペプチドキレート形成基は、従来の合成後に結合させるの
ではなく、合成の間のＣ末端での一次ペプチドの修飾を可能とした。さらには、
付加的なアミノ酸、Ａｂａ（４−アミノブチル酸）を、合成の間に、キレート形
成基と一次ペプチドの間にスペーサーとして挿入した。スペーサーとしてＡｂａ
を挿入するのはＴｃ−９９ｍ複合体より生じる立体障害の可能性を最小限とする
ためであった。この修飾ペプチドの合成は、多段階で、長く、かつ効率的でない
ことが多い、結合操作を排除し、さらにはＴｃ−９９ｍの強固なキレート形成の
ためのキレート形成基を付与する、１つのハイブリッド方法であった。得られた
デカペプチド、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ａｂａ−Ｇｌｙ−Ｇ
ｌｙ−（Ｄ）−Ａｌａ−Ｇｌｙは、予想される分子量が８５０であり、以下、Ｔ
Ｐ８５０と称する。
Ｇｌｙ（ＧＡＧＧ）をキレート形成基として選択した。その４個のＮＨ２基を介
して、これらのペプチドはＴｃ−９９ｍと強固にキレート形成するためのＮ４配
置を提供する。テトラペプチドキレート形成基は、従来の合成後に結合させるの
ではなく、合成の間のＣ末端での一次ペプチドの修飾を可能とした。さらには、
付加的なアミノ酸、Ａｂａ（４−アミノブチル酸）を、合成の間に、キレート形
成基と一次ペプチドの間にスペーサーとして挿入した。スペーサーとしてＡｂａ
を挿入するのはＴｃ−９９ｍ複合体より生じる立体障害の可能性を最小限とする
ためであった。この修飾ペプチドの合成は、多段階で、長く、かつ効率的でない
ことが多い、結合操作を排除し、さらにはＴｃ−９９ｍの強固なキレート形成の
ためのキレート形成基を付与する、１つのハイブリッド方法であった。得られた
デカペプチド、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ａｂａ−Ｇｌｙ−Ｇ
ｌｙ−（Ｄ）−Ａｌａ−Ｇｌｙは、予想される分子量が８５０であり、以下、Ｔ
Ｐ８５０と称する。
【００１２】 このペプチドは島津製固相シンセサイザー（Shimadzu、コロンビア、ＭＤ）を
用いて特別に合成し（PeptidoGenic Research Co.Inc.、リバーモアー、ＣＡ）
、ＨＦＩｓｉｌ、Ｃ−１８、５ミクロンの分取ＨＰＬＣカラムを用いて分離した
。イオン噴射分子量分析をPerkin Elmer's Sciex APZ I質量分光計（Norwalk、
ＣＴ）を用いて行った。このキレート形成基および装置を用いて、以前に、我々
の研究室で数種類のペプチドを調製し、それをＴｃ−９９ｍで標識した（Thakur
ML、Pallela VR、Consigny PM、血栓塞栓をイメージングするためのＴｃ−９９
ｍ−ＴＰ１２０１、Radiology ２０５：２６７Ｐ、１９９７；Pallela VR、Cons
igny PM、Shi R、Thakur ML、トロンボスポンジンの活性部位から由来のＴｃ−
９９ｍ−ＴＰ１３００ペプチドを用いる血栓のイメージング、J Nucl Med ３９
：６４Ｐ、１９９８；Pallela VR、Consigny PM、Shi R、Thakur ML、血栓をイ
メージングするためのＴｃ−９９ｍ標識されたフィブリン−α−鎖ペプチドアナ
ログ、Eur J Nucl Med ２５：８７８、１９９８；Pallela VR、Thakur ML、Cons
igny PM、Rao PS、Vassileva-Belnikolovska D、Shi R、Ｔｃ−９９ｍ標識され
たトロンボスポンジン受容体アナログＴＰ−１２０１およびＴＰ−１３００を用
いる血栓塞栓のイメージング、Thrombosis Research ９３：１９１−２０２、１
９９９；Pallela VR、Thakur ML、Chakder SおよびRattan S、９９ｍＴｃ標識さ
れた血管活性腸管ペプチド受容体アゴニスト：機能性実験、J Nucl Med ４０：
３５２−３６０、１９９９）。
用いて特別に合成し（PeptidoGenic Research Co.Inc.、リバーモアー、ＣＡ）
、ＨＦＩｓｉｌ、Ｃ−１８、５ミクロンの分取ＨＰＬＣカラムを用いて分離した
。イオン噴射分子量分析をPerkin Elmer's Sciex APZ I質量分光計（Norwalk、
ＣＴ）を用いて行った。このキレート形成基および装置を用いて、以前に、我々
の研究室で数種類のペプチドを調製し、それをＴｃ−９９ｍで標識した（Thakur
ML、Pallela VR、Consigny PM、血栓塞栓をイメージングするためのＴｃ−９９
ｍ−ＴＰ１２０１、Radiology ２０５：２６７Ｐ、１９９７；Pallela VR、Cons
igny PM、Shi R、Thakur ML、トロンボスポンジンの活性部位から由来のＴｃ−
９９ｍ−ＴＰ１３００ペプチドを用いる血栓のイメージング、J Nucl Med ３９
：６４Ｐ、１９９８；Pallela VR、Consigny PM、Shi R、Thakur ML、血栓をイ
メージングするためのＴｃ−９９ｍ標識されたフィブリン−α−鎖ペプチドアナ
ログ、Eur J Nucl Med ２５：８７８、１９９８；Pallela VR、Thakur ML、Cons
igny PM、Rao PS、Vassileva-Belnikolovska D、Shi R、Ｔｃ−９９ｍ標識され
たトロンボスポンジン受容体アナログＴＰ−１２０１およびＴＰ−１３００を用
いる血栓塞栓のイメージング、Thrombosis Research ９３：１９１−２０２、１
９９９；Pallela VR、Thakur ML、Chakder SおよびRattan S、９９ｍＴｃ標識さ
れた血管活性腸管ペプチド受容体アゴニスト：機能性実験、J Nucl Med ４０：
３５２−３６０、１９９９）。
【００１３】 ｉｉ）放射性標識および質管理 ５０μｇのＴＰ８５０を１０μｌの水中１０％アセトニトリルに溶かし、つい
で２００μｌの０.１Ｍ Ｎａ３ＰＯ４を加え、つづいて１０μｌの０.０５Ｍ Ｈ
Ｃｌ中１００μｇのＳｎＣｌ２で予め還元した２００μｌの等張食塩水中の１０
−３０ｍＣｉのＴｃ−９９ｍを加えた。最近、本発明者らは、新しいバッチの高
純度のＳｎＣｌ２（Sigma Chemicals、セントルイス、ＭＯ）を用い、そのＳｎ
Ｃｌ２を１０μｇに還元することができた。ついで、反応混合物を煮沸水浴中で
３０分間インキュベートした。逆相Ｃ−１８カラムおよび水中０.１％ＴＦＡ（
Ａ）およびアセトニトリル中０.１％ＴＦＡ（Ｂ）のグラジエント溶媒を用いる
ＨＰＬＣ（Rainin、エメリービル、ＣＡ）により生成物を試験した。グラジエン
トは、最初、溶媒Ａが９０％であり、３０分で溶媒Ｂが１００％となるものであ
った。流速は１ｍｌ／分であった。ＨＰＬＣには２７８ｎｍにセットしたＵＶ検
出器、２”ＮａＩ（ＴＩ）ガンマカウンターおよび速度メーターが設けてあった
。
で２００μｌの０.１Ｍ Ｎａ３ＰＯ４を加え、つづいて１０μｌの０.０５Ｍ Ｈ
Ｃｌ中１００μｇのＳｎＣｌ２で予め還元した２００μｌの等張食塩水中の１０
−３０ｍＣｉのＴｃ−９９ｍを加えた。最近、本発明者らは、新しいバッチの高
純度のＳｎＣｌ２（Sigma Chemicals、セントルイス、ＭＯ）を用い、そのＳｎ
Ｃｌ２を１０μｇに還元することができた。ついで、反応混合物を煮沸水浴中で
３０分間インキュベートした。逆相Ｃ−１８カラムおよび水中０.１％ＴＦＡ（
Ａ）およびアセトニトリル中０.１％ＴＦＡ（Ｂ）のグラジエント溶媒を用いる
ＨＰＬＣ（Rainin、エメリービル、ＣＡ）により生成物を試験した。グラジエン
トは、最初、溶媒Ａが９０％であり、３０分で溶媒Ｂが１００％となるものであ
った。流速は１ｍｌ／分であった。ＨＰＬＣには２７８ｎｍにセットしたＵＶ検
出器、２”ＮａＩ（ＴＩ）ガンマカウンターおよび速度メーターが設けてあった
。
【００１４】 ｉｉｉ）Ｔｃ−９９ｍ−ＴＰ８５０の安定性： ２２℃での放射性標識されたペプチドの安定性を、放射活性体のピークの特徴
的な保持時間を測定しながら、ＨＰＬＣで２４時間まで試験した。インビボでの
安定性は、略２ｍＣｉのＴｃ−９９ｍ−ＴＰ８５０調製物を注射し、３時間後に
集め、２０μｌ部の尿をＨＰＬＣで分析することで試験した。
的な保持時間を測定しながら、ＨＰＬＣで２４時間まで試験した。インビボでの
安定性は、略２ｍＣｉのＴｃ−９９ｍ−ＴＰ８５０調製物を注射し、３時間後に
集め、２０μｌ部の尿をＨＰＬＣで分析することで試験した。
【００１５】 ｉｖ）フィブリン結合 Ｔｃ−９９ｍ−ＴＰ８５０の、ウサギ、イヌおよびヒトのフィブリンに結合す
る能力をインビトロにて試験した。制度上必要な認可を得、ヒト血液を集め、す
べての動物実験を行った。約１０ｍｌの静脈血を健康なヒトボランティアより、
および正常な成体のイヌおよびウサギより得た。その血液に抗凝固剤を添加しな
かった。血液が凝固した後、各血液試料から、１ｍｌの血清試料を４本の別個の
試験管に分配し、約２５μＣｉのＴｃ−９９ｍ−ＴＰ８５０（比活性：約３４０
Ｃｉ／ミリモル）を各試験管に加え、試薬を穏やかに混合した。ついで、トロン
ビン（６ｉ.ｕ.）を最初の２本の試験管に加え、等容量の食塩水を他の２本の試
験管に加えた。その内容物を穏やかに混合し、３７℃で１０分間インキュベート
した。試験管を遠心分離（２０００ｇｘ１０分）に付し、上澄を注意して取り出
し、最初の２本の試験管中にあるフィブリンクロットを２ｍｌの０.９％ＮａＣ
ｌで２回洗浄した。遠心分離に付した後、洗浄液を上澄と合した。クロットおよ
び上澄と結合した放射活性体を測定し、コンパクトなフィブリンクロット中に認
められる活性体全体のパーセントとして計算した。 １７ｍｌのウサギおよびイヌからの静脈血を３ｍｌのアシッド・シトラート・
デキストロースＡ（ＡＣＤ Ａ）中に集め、１８０ｇで１０分間遠心分離に付し
、血小板に富む血漿（ＰＲＰ）を分離した（Thakur ML、Coleman RE、Hoist JH
、Welch M、インジウム−１１１標識された血小板：調製およびインビボとイン
ビトロ機能に関する研究、Thrombosis Research ９：３４５−３５４、１９７６
）。凝集実験はChronolog（ハーバータウン、ＰＡ）アグレゴメーターを用いて
行った。各実験では、増大する量のＴＰ８５０および４μＭのＡＤＰを、３７℃
で攪拌しながら、約１.５ｘ１０８血小板を含有する、５００μｌのＰＲＰに加
えた。ＴＰ８５０の不在下での凝集を１００％とし、凝集を５０％まで阻害する
量のＴＰ８５０を用いてＩＣ５０値を測定した。
る能力をインビトロにて試験した。制度上必要な認可を得、ヒト血液を集め、す
べての動物実験を行った。約１０ｍｌの静脈血を健康なヒトボランティアより、
および正常な成体のイヌおよびウサギより得た。その血液に抗凝固剤を添加しな
かった。血液が凝固した後、各血液試料から、１ｍｌの血清試料を４本の別個の
試験管に分配し、約２５μＣｉのＴｃ−９９ｍ−ＴＰ８５０（比活性：約３４０
Ｃｉ／ミリモル）を各試験管に加え、試薬を穏やかに混合した。ついで、トロン
ビン（６ｉ.ｕ.）を最初の２本の試験管に加え、等容量の食塩水を他の２本の試
験管に加えた。その内容物を穏やかに混合し、３７℃で１０分間インキュベート
した。試験管を遠心分離（２０００ｇｘ１０分）に付し、上澄を注意して取り出
し、最初の２本の試験管中にあるフィブリンクロットを２ｍｌの０.９％ＮａＣ
ｌで２回洗浄した。遠心分離に付した後、洗浄液を上澄と合した。クロットおよ
び上澄と結合した放射活性体を測定し、コンパクトなフィブリンクロット中に認
められる活性体全体のパーセントとして計算した。 １７ｍｌのウサギおよびイヌからの静脈血を３ｍｌのアシッド・シトラート・
デキストロースＡ（ＡＣＤ Ａ）中に集め、１８０ｇで１０分間遠心分離に付し
、血小板に富む血漿（ＰＲＰ）を分離した（Thakur ML、Coleman RE、Hoist JH
、Welch M、インジウム−１１１標識された血小板：調製およびインビボとイン
ビトロ機能に関する研究、Thrombosis Research ９：３４５−３５４、１９７６
）。凝集実験はChronolog（ハーバータウン、ＰＡ）アグレゴメーターを用いて
行った。各実験では、増大する量のＴＰ８５０および４μＭのＡＤＰを、３７℃
で攪拌しながら、約１.５ｘ１０８血小板を含有する、５００μｌのＰＲＰに加
えた。ＴＰ８５０の不在下での凝集を１００％とし、凝集を５０％まで阻害する
量のＴＰ８５０を用いてＩＣ５０値を測定した。
【００１６】 ｖｉ）血液クリアランス すべての動物のプロトコルは動物保護団体の認可を受けており、そのとおりに
行った。薬剤の血液クリアランスを成体ニュージランド白ウサギ（体重：３ない
し３.５ｋｇ）で試験した。各ウサギをケタミン（ketamine）（３０ｍｇ／ｋｇ
）およびザイラキシン（zylaxine）（５ｍｇ／ｋｇ）を筋肉内注射することで麻
酔した。その後、２３ゲージのカテーテルを右耳動脈に挿入し、ルアーロック（
leuer lock）（Burron Med.Inc.、ベツレヘム、ＰＡ）に接続した。ルアーロッ
クを介して１ｍｌの０.９％滅菌ＮａＣｌに付き６ｉ.ｕ.のヘパリンを投与する
ことでカテーテルの開放性を維持した。このカテーテルを１、５、１０、１５お
よび３０分に、そして放射性核種を注射した１、２および３時間後に、０.５ｍ
ｌの血液試料を２回ずつ採血するのに使用した。各試料を集める前に、十分な血
液を採集し、食塩水と置換し、採集した各血液試料が希釈されないようにした。 放射活性な物質を注射するのに対側耳の末端静脈を用いた。注射する前後でシ
リンジ中の放射活性体の数を測定し、注射用量を決定し、適当なＴｃ−９９ｍ標
準溶液を調製した。次に血液試料を秤量し、放射活性体を計数し、結果を血液１
ｇ当たりの％注射用量（％Ｉ.Ｄ.／ｇ）として表し、時間の関数としてプロット
した。
行った。薬剤の血液クリアランスを成体ニュージランド白ウサギ（体重：３ない
し３.５ｋｇ）で試験した。各ウサギをケタミン（ketamine）（３０ｍｇ／ｋｇ
）およびザイラキシン（zylaxine）（５ｍｇ／ｋｇ）を筋肉内注射することで麻
酔した。その後、２３ゲージのカテーテルを右耳動脈に挿入し、ルアーロック（
leuer lock）（Burron Med.Inc.、ベツレヘム、ＰＡ）に接続した。ルアーロッ
クを介して１ｍｌの０.９％滅菌ＮａＣｌに付き６ｉ.ｕ.のヘパリンを投与する
ことでカテーテルの開放性を維持した。このカテーテルを１、５、１０、１５お
よび３０分に、そして放射性核種を注射した１、２および３時間後に、０.５ｍ
ｌの血液試料を２回ずつ採血するのに使用した。各試料を集める前に、十分な血
液を採集し、食塩水と置換し、採集した各血液試料が希釈されないようにした。 放射活性な物質を注射するのに対側耳の末端静脈を用いた。注射する前後でシ
リンジ中の放射活性体の数を測定し、注射用量を決定し、適当なＴｃ−９９ｍ標
準溶液を調製した。次に血液試料を秤量し、放射活性体を計数し、結果を血液１
ｇ当たりの％注射用量（％Ｉ.Ｄ.／ｇ）として表し、時間の関数としてプロット
した。
【００１７】 ｖｉｉ）組織分布実験 Ｔｃ−９９ｍ−ＴＰ８５０を投与した３時間後の３匹のウサギから組織試料を
収穫した。組織を秤量し、各組織と、注射する時に調製したＴｃ−９９ｍの対照
標準溶液と結合した放射活性体を測定した。放射活性体を組織１ｇの％注射用量
（％Ｉ.Ｄ.／ｇ）として表した。結果は平均値として表し、標準偏差を決定した
。
収穫した。組織を秤量し、各組織と、注射する時に調製したＴｃ−９９ｍの対照
標準溶液と結合した放射活性体を測定した。放射活性体を組織１ｇの％注射用量
（％Ｉ.Ｄ.／ｇ）として表した。結果は平均値として表し、標準偏差を決定した
。
【００１８】 ｖｉｉｉ）ＤＶＴ誘発 体重が３−３.５ｋｇである、８匹の成体（雄または雌）のニュージランド白
ウサギを、各々、上記のように麻酔処理に付し、右肘静脈および／または頚静脈
を暴露させ、刺激用電極を挿入した（Leadley RJ、Humphrey LA、Shebuski RJ、
イヌにおける動脈血栓実験におけるエンドセリン−１による血栓形成の阻害、Th
rombosis and Haemostasis ７４：１５８３−１５９０、１９９５）。その電極
は９０°の角度に曲げられた２６−ゲージのステンレススチール製皮下注射用針
からなっており、３０ゲージのテフロン（登録商標）で絶縁された銀被覆の銅線 に接続した。針を血管に挿入し、ついでその針が血管のエンドセリンラインと接 触し、銅線に挿入したフレア状のスリーブで適当な位置に固定されるようにゆっ くりと引っ張った。第２電極をウサギの舌に用いた。その刺激用電極を電力供給 源のアノードに接続し、他方の電極をカソードに接続した。４５０μＡの電流を 流し、１０分後に０.９％溶液の２ｍＣｉのＴｃ−９９ｍＴＰ８５０（比活性が 約５１０Ｃｉ／ミリモル）（２ｍｌ）を耳末端静脈を介して注入した。各投与に おける放射活性体を投与の前後で測定して記録した。さらに、既知量のＴｃ−９ ９ｍを含む適当な対照溶液を調製した。Ｔｃ−９９ｍ−ＴＰ８５０を投与する１ ０分前にトロンビン浸透縫糸を頚静脈に挿入することにより、さらに２匹のウサ ギにて、血栓を誘発させた。低出力の平行なホールを有するコリメーターに接続 したＧＥスターカムガンマ線カメラ（ＧＥ、ミルウォーキー、ＷＩ）を用い、４ 時間までの、仰向けの位置にあるウサギの連続的なガンマ線カメラのイメージを 得た。各イメージについて、合計３５００００を集計した。
ウサギを、各々、上記のように麻酔処理に付し、右肘静脈および／または頚静脈
を暴露させ、刺激用電極を挿入した（Leadley RJ、Humphrey LA、Shebuski RJ、
イヌにおける動脈血栓実験におけるエンドセリン−１による血栓形成の阻害、Th
rombosis and Haemostasis ７４：１５８３−１５９０、１９９５）。その電極
は９０°の角度に曲げられた２６−ゲージのステンレススチール製皮下注射用針
からなっており、３０ゲージのテフロン（登録商標）で絶縁された銀被覆の銅線 に接続した。針を血管に挿入し、ついでその針が血管のエンドセリンラインと接 触し、銅線に挿入したフレア状のスリーブで適当な位置に固定されるようにゆっ くりと引っ張った。第２電極をウサギの舌に用いた。その刺激用電極を電力供給 源のアノードに接続し、他方の電極をカソードに接続した。４５０μＡの電流を 流し、１０分後に０.９％溶液の２ｍＣｉのＴｃ−９９ｍＴＰ８５０（比活性が 約５１０Ｃｉ／ミリモル）（２ｍｌ）を耳末端静脈を介して注入した。各投与に おける放射活性体を投与の前後で測定して記録した。さらに、既知量のＴｃ−９ ９ｍを含む適当な対照溶液を調製した。Ｔｃ−９９ｍ−ＴＰ８５０を投与する１ ０分前にトロンビン浸透縫糸を頚静脈に挿入することにより、さらに２匹のウサ ギにて、血栓を誘発させた。低出力の平行なホールを有するコリメーターに接続 したＧＥスターカムガンマ線カメラ（ＧＥ、ミルウォーキー、ＷＩ）を用い、４ 時間までの、仰向けの位置にあるウサギの連続的なガンマ線カメラのイメージを 得た。各イメージについて、合計３５００００を集計した。
【００１９】 ｉｘ）肺塞栓の誘発 さらに６匹のウサギで肺塞栓を誘発させた。０.５ないし０.７５ｍｌの血液を
耳末端静脈に挿入した２３Ｇバタフライ針を介して１５ｍｇのタンタル粉末およ
び６ｉ.ｕ.のトロンビンを含有する１ｍｌシリンジに吸い出すことにより、放射
性の不透明な肺塞栓を調製した。ついで、シリンジの内容物を穏やかに混合し、
クロットを形成させて２０分間凝固させた。シリンジからクロットを取り出し、
１ｃｍ長のクロットをイントロデューサーシース（６Ｆｒ、Pinnacle、MediTech
、ウォータータウン、ＭＡ）に取り、ついでそれを前以って単離した頚静脈に挿
入し、右心房に入れた。ついで、そのクロットを等張食塩水を用いてシースから
フラッシュさせた。Ｔｃ−９９ｍ−ＴＰ８５０を投与する前の動物の胸部Ｘ−線
を記録し、殺した後の切開した肺のＸ−線を記録することにより、タンタル含有
のクロットの位置を確認した。クロットを投与し、Ｘ−線でその位置を確認した
後、Ｔｃ−９９ｍ−ＴＰ８５０を注射し、上記するようにウサギをイメージング
した。ＰＥの４匹の動物を手術より回復させた。２匹のウサギに２４時間後にＴ
ｃ−９９ｍ−ＴＰ８５０を注射し、他の２匹のウサギには４８時間後に注射した
。 ＰＥまたはＤＶＴについてイメージングを終えるにあたって、ヘパリン（１０
００ｉ.ｕ.）を各ウサギに静脈内注射し、ついでナトリウムペントバルビトール
（１００ｍｇ／ｋｇ）を用いて殺した。血液試料を吸い出し、ついで肺および心
臓を切開し、放射線写真を撮り、クロットを収穫した。クロットおよび血液を秤
量し、それらと結合した放射活性体を計数し、クロット／血液の割合を決定した
。
耳末端静脈に挿入した２３Ｇバタフライ針を介して１５ｍｇのタンタル粉末およ
び６ｉ.ｕ.のトロンビンを含有する１ｍｌシリンジに吸い出すことにより、放射
性の不透明な肺塞栓を調製した。ついで、シリンジの内容物を穏やかに混合し、
クロットを形成させて２０分間凝固させた。シリンジからクロットを取り出し、
１ｃｍ長のクロットをイントロデューサーシース（６Ｆｒ、Pinnacle、MediTech
、ウォータータウン、ＭＡ）に取り、ついでそれを前以って単離した頚静脈に挿
入し、右心房に入れた。ついで、そのクロットを等張食塩水を用いてシースから
フラッシュさせた。Ｔｃ−９９ｍ−ＴＰ８５０を投与する前の動物の胸部Ｘ−線
を記録し、殺した後の切開した肺のＸ−線を記録することにより、タンタル含有
のクロットの位置を確認した。クロットを投与し、Ｘ−線でその位置を確認した
後、Ｔｃ−９９ｍ−ＴＰ８５０を注射し、上記するようにウサギをイメージング
した。ＰＥの４匹の動物を手術より回復させた。２匹のウサギに２４時間後にＴ
ｃ−９９ｍ−ＴＰ８５０を注射し、他の２匹のウサギには４８時間後に注射した
。 ＰＥまたはＤＶＴについてイメージングを終えるにあたって、ヘパリン（１０
００ｉ.ｕ.）を各ウサギに静脈内注射し、ついでナトリウムペントバルビトール
（１００ｍｇ／ｋｇ）を用いて殺した。血液試料を吸い出し、ついで肺および心
臓を切開し、放射線写真を撮り、クロットを収穫した。クロットおよび血液を秤
量し、それらと結合した放射活性体を計数し、クロット／血液の割合を決定した
。
【００２０】 結果 ｉ）ペプチドの放射性標識化、質管理および安定性： ＨＰＬＣで測定したペプチドの純度は＞９０％であった。そのペプチドの予想
される分子量は８５０であり、質量分析により観察された分子量は８４９.４で
あった。Ｔｃ−９９ｍで標識されるＴＰ８５０の提案される構造を図１に示し、
そこではＴｃ−９９ｍがＮ４配置でキレート形成基に結合している。Ｔｃ−９９
ｍ標識化は、一貫して、＞９５％の収率を生成した。ＨＰＬＣ分析はその活性体
の＞９０％が７分の保持時間（Ｒｔ）で単一のピークにて溶出されることを示し
た。少量（＜５％）の放射活性体が６.２分のＲｔで溶出され、３.５分のＲｔで
結合していないＴｃ−９９ｍが溶出された。溶出プロファイルを図２に示す。 Ｔｃ−９９ｍ−ＴＰ８５０の調製物は２２℃に２４時間あっても安定していた
。Ｔｃ−９９ｍ−ＴＰ８５０を注射した３時間後に収集した尿試料のＨＰＬＣ分
析（図２）から、放射活性体の溶出プロファイルが注射した調製物のプロファイ
ルと類似しており、尿試料中の放射活性体のピークの保持時間が注射した放射活
性体試料の保持時間と類似していることがわかった。これは小型ペプチドが迅速
なインビボ蛋白分解の影響を受けにくいことを示す。
される分子量は８５０であり、質量分析により観察された分子量は８４９.４で
あった。Ｔｃ−９９ｍで標識されるＴＰ８５０の提案される構造を図１に示し、
そこではＴｃ−９９ｍがＮ４配置でキレート形成基に結合している。Ｔｃ−９９
ｍ標識化は、一貫して、＞９５％の収率を生成した。ＨＰＬＣ分析はその活性体
の＞９０％が７分の保持時間（Ｒｔ）で単一のピークにて溶出されることを示し
た。少量（＜５％）の放射活性体が６.２分のＲｔで溶出され、３.５分のＲｔで
結合していないＴｃ−９９ｍが溶出された。溶出プロファイルを図２に示す。 Ｔｃ−９９ｍ−ＴＰ８５０の調製物は２２℃に２４時間あっても安定していた
。Ｔｃ−９９ｍ−ＴＰ８５０を注射した３時間後に収集した尿試料のＨＰＬＣ分
析（図２）から、放射活性体の溶出プロファイルが注射した調製物のプロファイ
ルと類似しており、尿試料中の放射活性体のピークの保持時間が注射した放射活
性体試料の保持時間と類似していることがわかった。これは小型ペプチドが迅速
なインビボ蛋白分解の影響を受けにくいことを示す。
【００２１】 ｉｉ）血液クリアランスおよび組織分布： 血液クリアランスは、ｔ１／２−αが約４分（２０％）であり、ｔ１／２−β
が約１３分（８０％）である、二段階構成であった。Ｔｃ−９９ｍ−ＴＰ８５０
の３時間に及ぶ組織分布の試験は、最も多くの放射活性体が腎臓にあり（０.１
０±０.０８６％Ｉ.Ｄ.／ｇ）、これは腎臓が主たる***経路であることを示唆
した。肝臓の摂取量は０.０１６±０.０１４％Ｉ.Ｄ.／ｇであり、腸では０.０
１±０.００４％Ｉ.Ｄ.／ｇであった。この時点での血液中の摂取量はわずか０.
００７±０.００４％Ｉ.Ｄ.／ｇであった。循環血液中の放射活性体の割合が少
ないことは、血栓のイメージングを容易にした。他のすべての組織中の放射活性
体は取るに足りないものであった。
が約１３分（８０％）である、二段階構成であった。Ｔｃ−９９ｍ−ＴＰ８５０
の３時間に及ぶ組織分布の試験は、最も多くの放射活性体が腎臓にあり（０.１
０±０.０８６％Ｉ.Ｄ.／ｇ）、これは腎臓が主たる***経路であることを示唆
した。肝臓の摂取量は０.０１６±０.０１４％Ｉ.Ｄ.／ｇであり、腸では０.０
１±０.００４％Ｉ.Ｄ.／ｇであった。この時点での血液中の摂取量はわずか０.
００７±０.００４％Ｉ.Ｄ.／ｇであった。循環血液中の放射活性体の割合が少
ないことは、血栓のイメージングを容易にした。他のすべての組織中の放射活性
体は取るに足りないものであった。
【００２２】 ｉｉ）フィブリン結合および血小板凝集の阻害 ヒト、イヌおよびウサギのフィブリンに結合するＴＰ８５０放射活性体は、各
々、４２±２％、６０±３.９％および５６±２.５％であった。イヌおよびウサ
ギの血小板凝集を阻害するＩＣ５０は、各々、２３６μｍおよび１６７μｍであ
った。これらのデータはＴｃ−９９ｍ−ＴＰ８５０の実験モデルとしてウサギを
用いることの正当性を裏付けるものである。
々、４２±２％、６０±３.９％および５６±２.５％であった。イヌおよびウサ
ギの血小板凝集を阻害するＩＣ５０は、各々、２３６μｍおよび１６７μｍであ
った。これらのデータはＴｃ−９９ｍ−ＴＰ８５０の実験モデルとしてウサギを
用いることの正当性を裏付けるものである。
【００２３】 ｉｉｉ）ＤＶＴおよびＰＥのイメージング Ｔｃ−９９ｍ−ＴＰ８５０は血液を速やかにきれいにしたが、すべての動物で
イメージング期間中、心臓の血液プール活性体が検出可能であった。副鼻腔中の
放射活性体もまた実験したすべての動物で検出可能であった。これは、以前に我
々の研究室で実験した、トロンボスポンジンアナログに特異的な活性化された血
小板受容体、Ｔｃ−９９ｍ−ＴＰ１２０１およびＴｃ−９９ｍ−ＴＰ１３００の
結果と矛盾するものではなかった（Pallela VR、Thakur ML、Consigny PM、Rao
PS、Vassileiva-Belnikolovska D、Shi R、Ｔｃ−９９ｍ標識されたトロンボス
ポリン受容体アナログＴＰ−１２０１およびＴＰ−１３００を用いる血栓塞栓の
イメージング、Thrombosis Research ９３：１９１−２０２、１９９９）。しか
し、Ｔｃ−９９ｍ−ＴＰ８５０放射活性体は、これらの２種の物質と異なり、骨
または軟骨のいずれにも見られなかった。新たなＤＶＴおよびＰＥはすべて、注
射してから通常９０−１２０分以内に検出することができた。外科的切開術また
は血管縫合にて自発的に形成されるクロットもまた検出可能であった。同様に、
右心房に注射されたクロットを破壊したまたはそれから分離されたクロットの一
片により形成されたＰＥもイメージングすることができた。一例を図３に示し、
そこでは右前腕の電極誘発のクロット、肺の各上葉の２つのＰＥ、および切開部
に蓄積した放射活性体が示されている。この動物において、前腕におけるクロッ
ト中放射活性体の血液中放射活性体に対する割合は１２であり、ＰＥの血液に対
する割合は１.３（Ｌ）および２.１（Ｒ）であった。クロットに結合した放射活
性体は、各々、０.０８７％Ｉ.Ｄ.／ｇ、０.００６％Ｉ.Ｄ.／ｇおよび０.００
７％Ｉ.Ｄ.／ｇであった。
イメージング期間中、心臓の血液プール活性体が検出可能であった。副鼻腔中の
放射活性体もまた実験したすべての動物で検出可能であった。これは、以前に我
々の研究室で実験した、トロンボスポンジンアナログに特異的な活性化された血
小板受容体、Ｔｃ−９９ｍ−ＴＰ１２０１およびＴｃ−９９ｍ−ＴＰ１３００の
結果と矛盾するものではなかった（Pallela VR、Thakur ML、Consigny PM、Rao
PS、Vassileiva-Belnikolovska D、Shi R、Ｔｃ−９９ｍ標識されたトロンボス
ポリン受容体アナログＴＰ−１２０１およびＴＰ−１３００を用いる血栓塞栓の
イメージング、Thrombosis Research ９３：１９１−２０２、１９９９）。しか
し、Ｔｃ−９９ｍ−ＴＰ８５０放射活性体は、これらの２種の物質と異なり、骨
または軟骨のいずれにも見られなかった。新たなＤＶＴおよびＰＥはすべて、注
射してから通常９０−１２０分以内に検出することができた。外科的切開術また
は血管縫合にて自発的に形成されるクロットもまた検出可能であった。同様に、
右心房に注射されたクロットを破壊したまたはそれから分離されたクロットの一
片により形成されたＰＥもイメージングすることができた。一例を図３に示し、
そこでは右前腕の電極誘発のクロット、肺の各上葉の２つのＰＥ、および切開部
に蓄積した放射活性体が示されている。この動物において、前腕におけるクロッ
ト中放射活性体の血液中放射活性体に対する割合は１２であり、ＰＥの血液に対
する割合は１.３（Ｌ）および２.１（Ｒ）であった。クロットに結合した放射活
性体は、各々、０.０８７％Ｉ.Ｄ.／ｇ、０.００６％Ｉ.Ｄ.／ｇおよび０.００
７％Ｉ.Ｄ.／ｇであった。
【００２４】 実験したウサギのクロット／血液の割合は１.２から１２の範囲にあった。こ
れらのクロットは非常に小さく、血管壁または付着している脂肪組織なしでは容
易に分離することができなかった。同様に、タンタルも多くのＰＥに付着した。
結果として、組織またはタンタルが付着した重量は、クロット、ＰＥおよびＤＶ
Ｔの単位重量当たりの放射活性を低くかつ可変的なものとした。
れらのクロットは非常に小さく、血管壁または付着している脂肪組織なしでは容
易に分離することができなかった。同様に、タンタルも多くのＰＥに付着した。
結果として、組織またはタンタルが付着した重量は、クロット、ＰＥおよびＤＶ
Ｔの単位重量当たりの放射活性を低くかつ可変的なものとした。
【００２５】 図４はＴｃ−９９ｍ−ＴＰ８５０を投与する１時間２０分前のウサギの腹側イ
メージを示す。刺激電極により誘発される右頚静脈中のクロットおよびトロンビ
ン浸透縫糸により誘発される左頚静脈中のクロットを検出することができた。ク
ロットの血液に対する割合は、各々、６.５および３.７であった。クロット放射
活性は０.０３５％Ｉ.Ｄ.／ｇおよび０.０２％Ｉ.Ｄ.／ｇであった。この動物に
おいて、注射したＴｃ−９９ｍのうち３.５％が結合せず遊離しているため、放
射活性体は甲状腺においても認められた。
メージを示す。刺激電極により誘発される右頚静脈中のクロットおよびトロンビ
ン浸透縫糸により誘発される左頚静脈中のクロットを検出することができた。ク
ロットの血液に対する割合は、各々、６.５および３.７であった。クロット放射
活性は０.０３５％Ｉ.Ｄ.／ｇおよび０.０２％Ｉ.Ｄ.／ｇであった。この動物に
おいて、注射したＴｃ−９９ｍのうち３.５％が結合せず遊離しているため、放
射活性体は甲状腺においても認められた。
【００２６】 図５は、トロンビン浸透縫糸が右頚静脈にあり、左頚静脈に刺激電極クロット
が形成されたウサギ中に、Ｔｃ−９９ｍ−ＴＰ８５０の注射から１５０分後に得
られた腹側のイメージを示す。両方のクロットは、電極クロットの血液に対する
割合は７.１で、トロンビンに浸透した縫糸のクロット／血液の割合は３.６で検
出することができた。クロット／血液の放射活性体の割合を人為的に減少させる
、縫糸それ自体の重量が各縫糸クロットには含まれている。これらのクロットに
組み込まれた放射活性体は、クロットの重量１ｇ当たり０.０４６％Ｉ.Ｄ.およ
び０.０２４％Ｉ.Ｄ.で測定された。
が形成されたウサギ中に、Ｔｃ−９９ｍ−ＴＰ８５０の注射から１５０分後に得
られた腹側のイメージを示す。両方のクロットは、電極クロットの血液に対する
割合は７.１で、トロンビンに浸透した縫糸のクロット／血液の割合は３.６で検
出することができた。クロット／血液の放射活性体の割合を人為的に減少させる
、縫糸それ自体の重量が各縫糸クロットには含まれている。これらのクロットに
組み込まれた放射活性体は、クロットの重量１ｇ当たり０.０４６％Ｉ.Ｄ.およ
び０.０２４％Ｉ.Ｄ.で測定された。
【００２７】 図６は両方の肺に２４時間前に誘発されたＰＥを有するウサギの腹側イメージ
を示す。そのイメージはＴｃ−９９ｍ−ＴＰ８５０を注射した１時間１５分後で
陽性であった。肺を切開し、イメージングし、Ｘ−線を照射した。クロットの位
置を確実にした。ついでクロットを取り出し、秤量し、結合した放射活性体を測
定した。クロットの血液に対する割合は右クロットで６.１であり、左クロット
では３.０であった。クロット中の放射活性体は、０.０２１％Ｉ.Ｄ.／ｇおよび
０.０１％Ｉ.Ｄ.／ｇであった。
を示す。そのイメージはＴｃ−９９ｍ−ＴＰ８５０を注射した１時間１５分後で
陽性であった。肺を切開し、イメージングし、Ｘ−線を照射した。クロットの位
置を確実にした。ついでクロットを取り出し、秤量し、結合した放射活性体を測
定した。クロットの血液に対する割合は右クロットで６.１であり、左クロット
では３.０であった。クロット中の放射活性体は、０.０２１％Ｉ.Ｄ.／ｇおよび
０.０１％Ｉ.Ｄ.／ｇであった。
【００２８】 反対に、４８時間経過したクロットは、シンチグラフィーでもまたＸ−線のい
ずれでも検出できなかった。このことは、それらのクロットが溶解し、消滅して
いることを示唆した。このことはウサギにおける高フィブリン溶解活性と矛盾す
るものではない（Didisheim P、血栓および抗血栓剤の研究に有用な動物実験、P
rog in Hemostasis and Thrombosis、Spaet TH編、グルーンアンドストラルトン
：ニューヨーク、１６５−１９７頁、１９７６；Doolittle RF、Omcley JL、お
よびSurgenor DM、トロンビンおよびフィブリノーゲンの相互作用における種の
相違、J Biol Chem ２３７：３１２３、１９６２；Gallimore MJ、Nulkar MVお
よびShaw JTB、ヒト、イヌおよびウサギの血液中のフィブリン溶解作用阻害剤の
比較実験、Thromb Diath Haemonth １４：１４５−１５８、１９６５；Hawkey C
M、動物におけるフィブリン溶解作用、The Haemotstatic Mechanism in Man and
Other Animals、MacFarlane RG編、アカデミックプレス：ロンドン、１４３−
１５０頁、１９７９；Mason RGおよびRead MS、フィブリン溶解性血液凝固にお
ける種の相違、J Biomed Mater Res ５：１２１−１２８、１９７１；Craig IH
、Bell FPおよびSchwartz CJ、血栓およびアテローム性動脈硬化：ブタにおける
肺血栓塞栓の組成、Exper Mol Path １８：２９０−３０１、１９７３）。治療
に抗凝固剤を介入させる影響については未だ実験されたことがない。
ずれでも検出できなかった。このことは、それらのクロットが溶解し、消滅して
いることを示唆した。このことはウサギにおける高フィブリン溶解活性と矛盾す
るものではない（Didisheim P、血栓および抗血栓剤の研究に有用な動物実験、P
rog in Hemostasis and Thrombosis、Spaet TH編、グルーンアンドストラルトン
：ニューヨーク、１６５−１９７頁、１９７６；Doolittle RF、Omcley JL、お
よびSurgenor DM、トロンビンおよびフィブリノーゲンの相互作用における種の
相違、J Biol Chem ２３７：３１２３、１９６２；Gallimore MJ、Nulkar MVお
よびShaw JTB、ヒト、イヌおよびウサギの血液中のフィブリン溶解作用阻害剤の
比較実験、Thromb Diath Haemonth １４：１４５−１５８、１９６５；Hawkey C
M、動物におけるフィブリン溶解作用、The Haemotstatic Mechanism in Man and
Other Animals、MacFarlane RG編、アカデミックプレス：ロンドン、１４３−
１５０頁、１９７９；Mason RGおよびRead MS、フィブリン溶解性血液凝固にお
ける種の相違、J Biomed Mater Res ５：１２１−１２８、１９７１；Craig IH
、Bell FPおよびSchwartz CJ、血栓およびアテローム性動脈硬化：ブタにおける
肺血栓塞栓の組成、Exper Mol Path １８：２９０−３０１、１９７３）。治療
に抗凝固剤を介入させる影響については未だ実験されたことがない。
【００２９】 考察 アメリカ合衆国において、年間３７８，０００人以上の患者がＤＶＴで、１０
３，０００人以上がＰＥで入院している（Vital and Health Statistics. Serie
s 13: Data from National Health Survey Ditts Publication No. (PHS)95-178
3, 1993）。これらの病気は、現代の技術にもかかわらず、毎年２００，０００
人以上の死に寄与する。ＤＶＴおよびＰＥの臨床診断は信用できず（Burke B, S
ostman D, Carroll BおよびWitty LA, 深部静脈血栓の診断アプローチ（The dia
gnostic approach to deep venous thrombosis） Clinics in Chest Medicine 1
6: 253-1568, 1995; Worsley DF, Alavi A, Palevsky, HI. 肺塞栓患者における
放射性核種イメージングの役割（Role of radionuclide imaging in patients w
ith suspected pulmonary ebolism） Radiologic Clinics of North America 31
: 849-859, 1993）、ＰＥはしばしば、過小評価され、過小診断され、過小治療
される病気である（Janata-Schwatzek K. Weiss K, Riezinger I, Bankier A. D
omanovits H, Seidler, D. Pulmonary Embolism: Diagnosis and treatment. Se
minars in Thrombosis and Hemostasis 22: 33-52, 1996）。
３，０００人以上がＰＥで入院している（Vital and Health Statistics. Serie
s 13: Data from National Health Survey Ditts Publication No. (PHS)95-178
3, 1993）。これらの病気は、現代の技術にもかかわらず、毎年２００，０００
人以上の死に寄与する。ＤＶＴおよびＰＥの臨床診断は信用できず（Burke B, S
ostman D, Carroll BおよびWitty LA, 深部静脈血栓の診断アプローチ（The dia
gnostic approach to deep venous thrombosis） Clinics in Chest Medicine 1
6: 253-1568, 1995; Worsley DF, Alavi A, Palevsky, HI. 肺塞栓患者における
放射性核種イメージングの役割（Role of radionuclide imaging in patients w
ith suspected pulmonary ebolism） Radiologic Clinics of North America 31
: 849-859, 1993）、ＰＥはしばしば、過小評価され、過小診断され、過小治療
される病気である（Janata-Schwatzek K. Weiss K, Riezinger I, Bankier A. D
omanovits H, Seidler, D. Pulmonary Embolism: Diagnosis and treatment. Se
minars in Thrombosis and Hemostasis 22: 33-52, 1996）。
【００３０】 静脈造影法は侵襲性であり、他の物理療法には限界がある。らせん形ＣＴ、Ｍ
ＲＩおよび換気−血流（ＶＱ）スキャンが、結局、その診断のための主な診断的
手段である。らせん形ＣＴにおいて、ＰＥの画像の評価においていくつかの解釈
的落とし穴が存在し、ＭＲＩはおそらくＣＴの代わりにはならない。ＣＴは肺中
の人工産物に対して解像度がよりよく、感度がより小さいが、その落とし穴およ
びしばしばアレルギー性の造影剤の使用が研究者をＶＱスキャニングに依存させ
た。ＶＱスキャニング自体は、コールドスポットイメージング技術であり、単に
ＰＥの低いまたは高い可能性を予測することができるにすぎない。多くの臨床医
にとって、この種類の診断は不十分である。
ＲＩおよび換気−血流（ＶＱ）スキャンが、結局、その診断のための主な診断的
手段である。らせん形ＣＴにおいて、ＰＥの画像の評価においていくつかの解釈
的落とし穴が存在し、ＭＲＩはおそらくＣＴの代わりにはならない。ＣＴは肺中
の人工産物に対して解像度がよりよく、感度がより小さいが、その落とし穴およ
びしばしばアレルギー性の造影剤の使用が研究者をＶＱスキャニングに依存させ
た。ＶＱスキャニング自体は、コールドスポットイメージング技術であり、単に
ＰＥの低いまたは高い可能性を予測することができるにすぎない。多くの臨床医
にとって、この種類の診断は不十分である。
【００３１】 原則として、適当な放射性医薬品の使用によって補助された外部シンチグラフ
ィー技術は、ホットスポットイメージを提供でき、シンチグラフィー技術は非侵
襲性であるのでその要望を満たすことができ、過度の不便さまたは患者に病的状
態を与えることなく、患者の全身をスキャンすることができる。
ィー技術は、ホットスポットイメージを提供でき、シンチグラフィー技術は非侵
襲性であるのでその要望を満たすことができ、過度の不便さまたは患者に病的状
態を与えることなく、患者の全身をスキャンすることができる。
【００３２】 過去２、３年間に、多数の放射性医薬品がＤＶＴまたはＰＥを位置決定する可
能性のある物質として研究されてきた。血栓は主としてフィブリン、血小板およ
びフィブリン網に捕捉された細胞からなるので、放射性ヨウ素標識されたフィブ
リノーゲンおよびＩｎ−１１１標識された血小板の使用に多くの注意が寄せられ
た。
能性のある物質として研究されてきた。血栓は主としてフィブリン、血小板およ
びフィブリン網に捕捉された細胞からなるので、放射性ヨウ素標識されたフィブ
リノーゲンおよびＩｎ−１１１標識された血小板の使用に多くの注意が寄せられ
た。
【００３３】 血小板は血栓の主要かつ最も生物学的に活性な成分を形成するので、多くの点
において、放射能標識した血小板は単純かつ理想的な物質であるはずである。し
かしながら、放射能標識した血小板は、寿命が長く（８日）、投与後数日間、バ
ックグラウンド放射能を上昇させたので、あまり魅力的ではなかった。放射能の
ゆっくりとしたクリアランスは、バックグラウンド放射能に対する病変の比率が
最適下限であるために、診断の遅延をもたらす。また、血小板はイン・ビトロで
標識されなければならず、熟練した人員を必要とする。さらに、抗凝血治療、ヘ
パリンの存在下、特に新鮮な血小板の癒着が妨害される場合に、Ｉｎ−１１１血
小板シンチグラフィーはあまり成功しない。その大部分が血小板表面上のＩＩｂ
およびＩＩＩａ糖蛋白複合体に特異的な抗体のアレイもまた、研究された。特異
性の欠損、望ましくない薬物動力学または該物質の煩わしい調製を包含する種々
の理由のため、これらを用いる成功には限界があった。これらの物質および他の
物質の賛否両論はKnight, TharkurおよびKoblikらによって記載されている。
において、放射能標識した血小板は単純かつ理想的な物質であるはずである。し
かしながら、放射能標識した血小板は、寿命が長く（８日）、投与後数日間、バ
ックグラウンド放射能を上昇させたので、あまり魅力的ではなかった。放射能の
ゆっくりとしたクリアランスは、バックグラウンド放射能に対する病変の比率が
最適下限であるために、診断の遅延をもたらす。また、血小板はイン・ビトロで
標識されなければならず、熟練した人員を必要とする。さらに、抗凝血治療、ヘ
パリンの存在下、特に新鮮な血小板の癒着が妨害される場合に、Ｉｎ−１１１血
小板シンチグラフィーはあまり成功しない。その大部分が血小板表面上のＩＩｂ
およびＩＩＩａ糖蛋白複合体に特異的な抗体のアレイもまた、研究された。特異
性の欠損、望ましくない薬物動力学または該物質の煩わしい調製を包含する種々
の理由のため、これらを用いる成功には限界があった。これらの物質および他の
物質の賛否両論はKnight, TharkurおよびKoblikらによって記載されている。
【００３４】 科学および分子生物学の技術における進歩に促されて、血栓塞栓症の非侵襲性
診断用放射能物質の近年の開発は、休止または活性化血小板に特異的なＴｃ−９
９ｍ標識ペプチドの使用に集中している。ペプチドは、モノクローナル抗体より
もサイズが小さく、容易に生産できる。それらは、放射能標識蛋白よりも迅速に
循環から除去され、おそらくいずれの免疫学的反応も誘導しないと予想され、さ
らに、多くの場合、それらはモノクローナル抗体と同様に高い受容体特異性およ
び結合定数を有すると予想される。Ｔｃ−９９ｍの物理的特性のため、Ｔｃ−９
９ｍ標識ペプチドは、Ｉｎ−１１１で標識された抗体より一層魅力的な診断的イ
メージング用生物分子になった。テクネチウム−９９ｍは、世界中で容易に入手
でき、安価で、かつ、ガンマ線エネルギー（１４０ＫｅＶ、９０％）で崩壊し、
ガンマ線カメラ、二次元または断層撮影法によって有効に検出できる。それは、
過剰の放射能崩壊が起こる前に検査を行うのに十分な長さであり、また、検査が
行われた後、長く体内に残存し、対象に過剰の放射を与えるほど長くはない半減
期（６時間）を有する。
診断用放射能物質の近年の開発は、休止または活性化血小板に特異的なＴｃ−９
９ｍ標識ペプチドの使用に集中している。ペプチドは、モノクローナル抗体より
もサイズが小さく、容易に生産できる。それらは、放射能標識蛋白よりも迅速に
循環から除去され、おそらくいずれの免疫学的反応も誘導しないと予想され、さ
らに、多くの場合、それらはモノクローナル抗体と同様に高い受容体特異性およ
び結合定数を有すると予想される。Ｔｃ−９９ｍの物理的特性のため、Ｔｃ−９
９ｍ標識ペプチドは、Ｉｎ−１１１で標識された抗体より一層魅力的な診断的イ
メージング用生物分子になった。テクネチウム−９９ｍは、世界中で容易に入手
でき、安価で、かつ、ガンマ線エネルギー（１４０ＫｅＶ、９０％）で崩壊し、
ガンマ線カメラ、二次元または断層撮影法によって有効に検出できる。それは、
過剰の放射能崩壊が起こる前に検査を行うのに十分な長さであり、また、検査が
行われた後、長く体内に残存し、対象に過剰の放射を与えるほど長くはない半減
期（６時間）を有する。
【００３５】 今まで評価されたペプチドの全ては、血小板糖蛋白受容体複合体ＩＩｂ ＩＩ
Ｉａに特異的である。そのなかでも、１のペプチド、Ｔｃ−９９ｍ−Ｐ２８０が
近年、商品名ＡｃｕＴｅｃｔとしてＦＤＡによって認可された。製造元の記載に
よれば、該ペプチドは、古いクロットまたはＰＥではなく、急性の血栓のみを検
出することが予測される。この主な理由は、ＡｃｕＴｅｃｔがイン・ビボで結合
しうる新鮮な血小板は慢性のクロットまたはＰＥにおいて稀にしか蓄積しないと
いう生理学的理由である。したがって、ＤＶＴならびにＰＥのイメージングを可
能にする該問題への異なるアプローチが必要である。
Ｉａに特異的である。そのなかでも、１のペプチド、Ｔｃ−９９ｍ−Ｐ２８０が
近年、商品名ＡｃｕＴｅｃｔとしてＦＤＡによって認可された。製造元の記載に
よれば、該ペプチドは、古いクロットまたはＰＥではなく、急性の血栓のみを検
出することが予測される。この主な理由は、ＡｃｕＴｅｃｔがイン・ビボで結合
しうる新鮮な血小板は慢性のクロットまたはＰＥにおいて稀にしか蓄積しないと
いう生理学的理由である。したがって、ＤＶＴならびにＰＥのイメージングを可
能にする該問題への異なるアプローチが必要である。
【００３６】 より初期に記載された凝固過程は、クロットの実質的部分を形成するフィブリ
ンモノマーを生じる。フィブリン含量の実際量は、クロットによって変動しうる
が、一般に、それは、ほとんどの成人において血漿蛋白１００ｇあたり５ｇほど
の高さである血中フィブリノーゲンと同じであると予想される。フィブリンは形
成または溶解しているクロットの表面および内部に存在するので、フィブリンに
特異的なＴｃ−９９ｍ標識ペプチドの開発は興味をそそる。原則として、かかる
物質は、クロットのいずれの段階または状態のフィブリンをも標的とすることが
でき、それを確実にイメージできる。この目的のため、特に目的の１のペプチド
は、Ｎ末端フィブリンα−鎖ペプチド、Ｈ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＯＨであ
り、それは、LaudanoおよびDoolittleによってフィブリノーゲン／トロンビンの
クロット化阻害物質であると報告された（１３）。フィブリンのα−鎖は、多く
の動物種ならびにヒトにおいて同じトリペプチド配列で開始する。これらの研究
者らは、トリペプチドのＨ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＯＨアナログが
フィブリンのγ−鎖のＣ末端部分にも結合し、フィブリン重合化を防止したので
、それがそのトリペプチド自体よりもフィブリノーゲン／トロンビンのクロット
化の一層強力な阻害物質であることを観察した。より近年には、Kawasakiらが数
個以上のアナログを調製し、ペンタペプチド、Ｈ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐ
ｒｏ−Ｐｒｏ−ＯＨが最も高いフィブリノーゲン／トロンビンのクロット阻害活
性を有することを見出した。
ンモノマーを生じる。フィブリン含量の実際量は、クロットによって変動しうる
が、一般に、それは、ほとんどの成人において血漿蛋白１００ｇあたり５ｇほど
の高さである血中フィブリノーゲンと同じであると予想される。フィブリンは形
成または溶解しているクロットの表面および内部に存在するので、フィブリンに
特異的なＴｃ−９９ｍ標識ペプチドの開発は興味をそそる。原則として、かかる
物質は、クロットのいずれの段階または状態のフィブリンをも標的とすることが
でき、それを確実にイメージできる。この目的のため、特に目的の１のペプチド
は、Ｎ末端フィブリンα−鎖ペプチド、Ｈ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＯＨであ
り、それは、LaudanoおよびDoolittleによってフィブリノーゲン／トロンビンの
クロット化阻害物質であると報告された（１３）。フィブリンのα−鎖は、多く
の動物種ならびにヒトにおいて同じトリペプチド配列で開始する。これらの研究
者らは、トリペプチドのＨ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＯＨアナログが
フィブリンのγ−鎖のＣ末端部分にも結合し、フィブリン重合化を防止したので
、それがそのトリペプチド自体よりもフィブリノーゲン／トロンビンのクロット
化の一層強力な阻害物質であることを観察した。より近年には、Kawasakiらが数
個以上のアナログを調製し、ペンタペプチド、Ｈ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐ
ｒｏ−Ｐｒｏ−ＯＨが最も高いフィブリノーゲン／トロンビンのクロット阻害活
性を有することを見出した。
【００３７】 シンチグラフィーイメージングのために選択されたペプチドは、それらを選択
の放射性核種で標識する前に修飾される。有効な放射能標識を達成するために、
最も一般的には、予め合成したペプチドを金属キレート剤と結合させる。これは
、ペプチド官能基を第一に遮断し、キレート剤を結合し、過剰の試薬を除去する
多段工程である。次いで、得られた生産物由来の官能基の遮断を解き、分取ＨＰ
ＬＣを用いて生産物を分離し、質量分光分析によって所望の生産物を同定する。
該手法は時間がかかるだけでなく、しばしば効率が悪くもある。
の放射性核種で標識する前に修飾される。有効な放射能標識を達成するために、
最も一般的には、予め合成したペプチドを金属キレート剤と結合させる。これは
、ペプチド官能基を第一に遮断し、キレート剤を結合し、過剰の試薬を除去する
多段工程である。次いで、得られた生産物由来の官能基の遮断を解き、分取ＨＰ
ＬＣを用いて生産物を分離し、質量分光分析によって所望の生産物を同定する。
該手法は時間がかかるだけでなく、しばしば効率が悪くもある。
【００３８】 Ｔｃ−９９ｍでペプチドを標識するために発明者らが開発したハイブリッドペ
プチド技術は、単純で、有効であり、上記の欠点を取り除く。発明者らのフィブ
リンクロット結合および血小板凝集阻害研究の結果は、これらの修飾がペプチド
の生物学的活性を傷つけなかったという意見を支持する。これらの結果は、生物
学的に活性なペプチドを用いる以前の知見と一致する。
プチド技術は、単純で、有効であり、上記の欠点を取り除く。発明者らのフィブ
リンクロット結合および血小板凝集阻害研究の結果は、これらの修飾がペプチド
の生物学的活性を傷つけなかったという意見を支持する。これらの結果は、生物
学的に活性なペプチドを用いる以前の知見と一致する。
【００３９】 該研究で観察されたＴｃ−９９ｍ−ＴＰ ８５０のウサギフィブリンへの結合
およびウサギ血小板凝集の阻害に関するそのＩＣ５０値は、実験的クロットおよ
びＰＥのイメージングモデルとしてのウサギの使用を正当化するのに十分に高か
った。血管壁損傷によって、刺激性電極によって、または頚動脈に移植されたト
ロンビン浸漬構造によって形成された全クロットは、ガンマ線シンチグラフィー
によって検出可能であった。一般に、クロットは小さく、放射能は０．０１％
Ｉ．Ｄ．／ｇから０．０８７％ Ｉ．Ｄ．／ｇの間を変動してそれらに取り込ま
れた。この変動は、おそらく、分離されないがクロットの重量に寄与する非放射
性組織またはタンタルの存在が原因であった。しかしながら、クロット中に取り
込まれた放射能の割合またはこの割合の変化のいずれも、かかる動物実験におい
て珍しくはない。比較的小さい割合の放射のにもかかわらず、クロットは、注入
後約９０分で検出可能であった。
およびウサギ血小板凝集の阻害に関するそのＩＣ５０値は、実験的クロットおよ
びＰＥのイメージングモデルとしてのウサギの使用を正当化するのに十分に高か
った。血管壁損傷によって、刺激性電極によって、または頚動脈に移植されたト
ロンビン浸漬構造によって形成された全クロットは、ガンマ線シンチグラフィー
によって検出可能であった。一般に、クロットは小さく、放射能は０．０１％
Ｉ．Ｄ．／ｇから０．０８７％ Ｉ．Ｄ．／ｇの間を変動してそれらに取り込ま
れた。この変動は、おそらく、分離されないがクロットの重量に寄与する非放射
性組織またはタンタルの存在が原因であった。しかしながら、クロット中に取り
込まれた放射能の割合またはこの割合の変化のいずれも、かかる動物実験におい
て珍しくはない。比較的小さい割合の放射のにもかかわらず、クロットは、注入
後約９０分で検出可能であった。
【００４０】 実験において、Ｔｃ−９９ｍ−ＴＰ ８５０は、発明者らが以前に評価した少
なくとも２つの活性化血小板特異的Ｔｃ−９９ｍ標識ペプチドよりも相当に高い
ＰＥにおける放射能取り込みを有した。Ｔｃ−９９ｍ−ＴＰ ８５０を用いると
、配置後４８時間で自発的に溶解したものを除き、全ＰＥが検出可能であった。
４８時間の古いクロットの消失は、調製時にタンタルで浸漬されたこれらのクロ
ットのＸ線不透過度の喪失によって確認された。ウサギをモデルとして使用する
選択は、以前に記載された発明者らの支持的なイン・ビトロでのデータに基づい
た。しかしながら、ウサギ中のプラスミノーゲン濃度はヒトの２倍以上の高さで
ある。したがって、ウサギにおけるフィブリン溶解活性は非常に高く、これらの
クロットの迅速な溶解を導く。
なくとも２つの活性化血小板特異的Ｔｃ−９９ｍ標識ペプチドよりも相当に高い
ＰＥにおける放射能取り込みを有した。Ｔｃ−９９ｍ−ＴＰ ８５０を用いると
、配置後４８時間で自発的に溶解したものを除き、全ＰＥが検出可能であった。
４８時間の古いクロットの消失は、調製時にタンタルで浸漬されたこれらのクロ
ットのＸ線不透過度の喪失によって確認された。ウサギをモデルとして使用する
選択は、以前に記載された発明者らの支持的なイン・ビトロでのデータに基づい
た。しかしながら、ウサギ中のプラスミノーゲン濃度はヒトの２倍以上の高さで
ある。したがって、ウサギにおけるフィブリン溶解活性は非常に高く、これらの
クロットの迅速な溶解を導く。
【００４１】 原則として、抗フィブリン剤は、年数の経った血栓のイメージングにより好結
果であるはずであり、かかる環境において、より多くのフィブリンがクロット表
面に露出され、クロット周辺の血流がより多くなりうるので、抗凝血治療による
干渉にあまり影響されないであろう。
果であるはずであり、かかる環境において、より多くのフィブリンがクロット表
面に露出され、クロット周辺の血流がより多くなりうるので、抗凝血治療による
干渉にあまり影響されないであろう。
【図１】 Ｔｃ−９９ｍ−ＴＰ８５０のアミノ酸配列および構造を示す。
【図２】 溶媒組成、流量およびカラムの同じ条件で得られた２種のＨＰＬ
Ｃ溶出スペクトルの合成したものを示す。
Ｃ溶出スペクトルの合成したものを示す。
【図３】 注射した３時間後に得られるウサギの腹側のイメージを示す。
【図４】 注射した１時間２０分後に得られるウサギの腹側のイメージを示
す。
す。
【図５】 ２ｍＣｉのＴｃ−９９ｍ−ＴＰ８５０を２時間３０分前に注射し
たウサギの腹側のガンマ線カメラでのイメージを示す。
たウサギの腹側のガンマ線カメラでのイメージを示す。
【図６】 ２.４ｍＣｉのＴｃ−９９ｍ−ＴＰ８５０を静脈内投与する２４
時間前にＰＥを誘発させた、１匹のラビットからの３種のイメージを示す。
時間前にＰＥを誘発させた、１匹のラビットからの３種のイメージを示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き Ｆターム(参考） 2G045 AA25 AA29 CB01 CB17 DA36 FB10 4C085 HH03 JJ01 KA29 KB09 KB82 LL07
Claims (9)
- 【請求項１】 式（Ｉ）または（ＩＩ）： Ｘ１−Ｐ−Ｘ２−Ｚ−Ｍ （Ｉ） Ｍ−Ｚ−Ｘ２−Ｐ−Ｘ１ （ＩＩ） ［式中： Ｘ１は０ないし２０個の天然または合成アミノ酸であり； ＰはＧｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇを含むペプチド（配列番号２）またはそのアナロ
グもしくはフラグメントであり； Ｘ２は０ないし２０個の天然または合成アミノ酸であり； Ｚは１またはそれ以上の天然または合成アミノ酸を含むリンカーであり；およ
び Ｍは選択された放射性核種との複合体形成能を有するキレート形成基を含む放
射性標識基である］ で示される組成物。 - 【請求項２】 配列番号１のペプチドを含む、請求項１記載の組成物。
- 【請求項３】 放射性標識基が放射性核種と複合体を形成している、請求項
１記載の組成物。 - 【請求項４】 放射性核種がテクネチウム−９９ｍである、請求項３記載の
組成物。 - 【請求項５】 式： 【化１】 で示される、請求項３記載の組成物。
- 【請求項６】 Ｍが放射性核種についてのキレート形成基としてＧｌｙ−（
Ｄ）−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ（配列番号３）を含む、請求項１記載の組成物。 - 【請求項７】 診断学上有効量の請求項１に記載の組成物を哺乳動物に標的
部位で投与し、該標的部位にある組成物を検出することを特徴とする、哺乳動物
細胞または組織のイメージング方法。 - 【請求項８】 標的部位が哺乳動物の血栓である、請求項６記載の方法。
- 【請求項９】 フィブリンに結合し、放射性標識基を有する、診断学上有効
量の組成物を投与し；および その組成物を血栓の部位で検出することを特徴とする、哺乳動物における血栓
のイメージング方法。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US9680398P | 1998-08-17 | 1998-08-17 | |
| US60/096,803 | 1998-08-17 | ||
| PCT/US1999/019011 WO2000009076A2 (en) | 1998-08-17 | 1999-08-17 | Imaging with tc-99m labeled fibrin-alpha-chain peptide |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2002522778A true JP2002522778A (ja) | 2002-07-23 |
Family
ID=22259142
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2000564580A Pending JP2002522778A (ja) | 1998-08-17 | 1999-08-17 | Ｔｃ−９９ｍ標識化されたフィブリン−α−鎖ペプチドを用いるイメージング |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP1105164A4 (ja) |
| JP (1) | JP2002522778A (ja) |
| CA (1) | CA2348617A1 (ja) |
| WO (1) | WO2000009076A2 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108976284B (zh) * | 2017-05-31 | 2021-11-30 | 首都医科大学 | 含Gly-Pro-Arg-Pro的五肽修饰的华法林,其合成,活性和应用 |
| CN108976285B (zh) * | 2017-05-31 | 2021-11-30 | 首都医科大学 | Gly-Pro-Arg-Pro-AA修饰的华法林,其合成,活性和应用 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5968476A (en) * | 1992-05-21 | 1999-10-19 | Diatide, Inc. | Technetium-99m labeled peptides for thrombus imaging |
| US5886142A (en) * | 1997-05-20 | 1999-03-23 | Thomas Jefferson University | Radiolabeled thrombus imaging agents |
-
1999
- 1999-08-17 CA CA002348617A patent/CA2348617A1/en not_active Abandoned
- 1999-08-17 WO PCT/US1999/019011 patent/WO2000009076A2/en not_active Application Discontinuation
- 1999-08-17 JP JP2000564580A patent/JP2002522778A/ja active Pending
- 1999-08-17 EP EP99966745A patent/EP1105164A4/en not_active Withdrawn
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2000009076A8 (en) | 2000-06-29 |
| WO2000009076A2 (en) | 2000-02-24 |
| WO2000009076A3 (en) | 2000-05-11 |
| CA2348617A1 (en) | 2000-02-24 |
| WO2000009076A9 (en) | 2000-08-03 |
| EP1105164A2 (en) | 2001-06-13 |
| EP1105164A4 (en) | 2004-09-29 |
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