JP2002506351A

JP2002506351A - インスリン受容体チロシンキナーゼ基質

Info

Publication number: JP2002506351A
Application number: JP50491599A
Authority: JP
Inventors: ヒルマン、ジェニファー・エル; ラル、プリーティ; シャー、パルビ
Original assignee: Incyte Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Incyte Corp
Priority date: 1997-06-19
Filing date: 1998-06-19
Publication date: 2002-02-26
Also published as: US5891674A; WO1998057987A3; EP0996630A2; US20030180810A1; AU8375198A; US6589935B1; WO1998057987A2; CA2293998A1; US6265550B1

Abstract

(57)【要約】本発明はヒトインスリン受容体チロシンキナーゼ基質（ＩＲＳ−ｐ５３ｈ）及びＩＲＳ−ｐ５３ｈを同定かつコードするポリヌクレオチド配列を提供する。また本発明は発現ベクタ、宿主細胞、アゴニスト、抗体及びアンタゴニストも提供する。また本発明はＩＲＳ−ｐ５３ｈの発現に関連する疾患を治療するための方法も提供する。

Description

【発明の詳細な説明】インスリン受容体チロシンキナーゼ基質技術分野本発明はヒトインスリン受容体チロシンキナーゼ基質の核酸配列及びアミノ酸配列に関連し、癌、炎症及びインスリン反応に関連する疾患の診断、予防及び治療におけるこれらの配列の使用法に関連する。背景技術インスリンは筋肉内のグルコース流入及び代謝を刺激することにより、また肝臓内のグリコーゲン新生を抑制することにより血糖値を調節する。またインスリンは概ね全細胞において種々の酵素及び輸送系の発現或いは活性を調節する。インスリン作用はインスリン受容体（ＩＲ）、プロテインチロシンキナーゼ（ＰＴＫ）活性を通して媒介される。インスリン結合は、ＰＴＫ活性を活性化する受容体自己リン酸化を引き起こす。インスリンに対する細胞反応は、ＩＲシグナル伝達における第２のメッセンジャとして作用するサイトゾルポリペプチド基質のチロシンリン酸化を通して媒介される。一度リン酸化されれば、基質は種々のシグナル伝達タンパク質に結合し、それを活性化する。シグナル伝達タンパク質は、ホスホチロシン含有ペプチドモチーフを結合するＳｒｃ−相同性−２（ＳＨ２） −ドメインを含む。いくつかのＩＲ−ＰＴＫ基質が記載されている。最も広範に特徴付けられている基質は１８５ｋｄａｌインスリン受容体基質−１（ＩＲＳ−１）である。ＩＲＳ−１は種々のインスリン反応性細胞及び組織において見い出される。それは内因性酵素活性を示さないが、一度リン酸化されれば、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）３’−キナーゼ及びＧＲＢ−２、Ｒａｓ経路の制御因子を含むＳＨ２−含有シグナル伝達タンパク質に結合し、それを活性化する（White,M.F.等(1994)J.Biol.Chem.269:1-4）。ＩＲＳ −１遺伝子の突然変異はインスリンにより刺激されるシグナル伝達を損ない、正常及び糖尿病性個体群におけるインスリン耐性に寄与するようになる（Almind， K.等(1996)J．Clin．Invest.97:2569-2575）。ＩＲ−ＰＴＫの２つの６０ｋｄａｌタンパク質基質が記載されている。その１つはＲａｓのＧＴＰａｓｅ活性因子（ＧＡＰと呼ばれる）に関連し、もう１つはＰＩ３’−キナーゼに関連する(Yeh,T.等(1996)J.Biol.Chem 271:2921-2928)。分子量５３及び５８ｋｄａｌを有するＩＲ−ＰＴＫに対する２つのさらに別の基質がげっ歯類において最近同定された。これらのタンパク質、ｐ５３及びｐ５８は密接に関連し、選択的ｍＲＮＡスプライシング或いは示差的な翻訳後修飾から生じるようになる。ｐ５３及びｐ５８はＧＡＰ或いはＰＩ３’−キナーゼには関連せず、６０ｋＤａＧＡＰ−関連タンパク質及び６０ｋＤａＰＩ３’−キナーゼ関連タンパク質とは免疫学的に異なる（Yeh等、上記）。インスリン信号伝達経路におけるポスト受容体欠陥はタイプ２（非インスリン依存性）糖尿病の共通の特徴である（Stoffel M.等(1993)Diabetologia 36:335- 337）。インスリン反応の障害に関連する他の疾患或いは状態は高血糖症、筋緊張性筋ジストロフィ、黒色表皮腫、網膜症、神経障害、アテローム性冠状及び末梢動脈疾患並びに末梢及び自立神経障害を含む。新規のヒトインスリン受容体チロシンキナーゼ基質及びそれをコードするポリヌクレオチドの発見は、癌、炎症及びインスリン反応に関連する疾患の診断、予防及び治療において有用な新規の組成物を提供することができ、当分野における必要性を満足するものである。発明の開示本発明は配列番号：１に示されるアミノ酸配列有する実質的に精製されたポリペプチド、ヒトインスリン受容体チロシン基質（ＩＲＳ−ｐ５３ｈ）或いはそのフラグメントを特徴とする。さらに本発明は配列番号：１のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする単離され、実質的に精製されたポリヌクレオチド配列或いはそのフラグメント及びそのポリヌクレオチド配列を含む組成物を提供する。また本発明はアミノ酸配列、配列番号：１をコードするポリヌクレオチド配列或いはそのポリヌクレオチド配列のフラグメントに厳密性条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチド配列を提供する。また本発明は配列番号：１のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド配列の相補配列を含むポリヌクレオチド配列或いはそのポリヌクレオチド配列のフラグメント又は変異配列を提供する。また本発明は配列番号：２を含む単離され、精製された配列或いはその変異配列をを提供する。さらに本発明は配列番号：２のポリヌクレオチド配列に厳密性条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチド配列を提供する。別の態様では、本発明は配列番号：２の相補配列を含む単離され、精製されたポリヌクレオチド配列或いはそのフラグメント又は変異配列含む組成物を提供する。また本発明は配列番号：２の相補配列を含むポリヌクレオチド配列も提供する。さらに本発明は少なくとも任意の請求されたポリヌクレオチド配列のフラグメントを含む発現ベクタを提供する。さらに別の態様では、ポリヌクレオチド配列を含む発現ベクタは宿主細胞内に含まれる。また本発明は配列番号：１のアミノ酸配列含むポリペプチド或いはそのフラグメントを生成するための方法を提供する。その方法はａ）ポリペプチドの発現に適した条件下で、少なくともＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードするポリヌクレオチド配列のフラグメントを含む発現ベクタを含む宿主細胞を培養する過程と、ｂ）その宿主細胞培養株からポリペプチドを回収する過程とを有する。また本発明は適当な医薬品担体と共に配列番号：１のアミノ酸配列を有する実質的に精製されたＩＲＳ−ｐ５３ｈを含む医薬品組成物を提供する。また本発明は配列番号：１のポリペプチドの作用を減少させる精製されたアンタゴニストを提供する。一態様では、本発明は少なくとも配列番号：１のアミノ酸配列のフラグメントを含むポリペプチドに結合する精製された抗体を提供する。またさらに本発明は配列番号：１のポリペプチドの活性を調節する精製されたアゴニストを提供する。また本発明は精製されたＩＲＳ−ｐ５３ｈを含む医薬品組成物の有効量を治療を要する被検者に投与する過程を含むインスリン反応に関連する疾患を治療或いは予防するための方法を提供する。また本発明はＩＲＳ−ｐ５３ｈに対するアンタゴニストの有効量を治療を要する被検者に投与する過程を含む癌を治療或いは予防するための方法も提供する。また本発明はＩＲＳ−ｐ５３ｈに対するアンタゴニストの有効量を治療を要する被検者に投与する過程を含む炎症を治療或いは予防するための方法も提供する。また本発明は生検サンプルにおいてＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードするポリヌクレオチドを検出するための方法であって、ａ）生検サンプルの核酸材料にＩＲＳ− ｐ５３ｈ（配列番号：１）に相補的なポリヌクレオチド配列をハイブリダイズし、ハイブリダイゼーション複合体を形成する過程と、ｂ）そのハイブリダイゼーション複合体を検出する過程とを有し、その複合体の存在が生検サンプルにおいてＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードするポリヌクレオチドの存在と相関をなすことを特徴とする方法を提供する。好適な実施例では、ハイブリダイズする前に、生検サンプルの核酸材料はポリメラーゼ連鎖反応により増幅される。図面の簡単な説明第１Ａ図、第１Ｂ図、第１Ｃ図、第１Ｄ図、第１Ｅ図及び第１Ｆ図は、ＩＲＳ −ｐ５３ｈのアミノ酸配列（配列番号：１）及び核酸配列（配列番号：２）を示す。そのアライメントはMacDNASIS PRO^TM software(Hitachi Software Engineer ing Co.Ltd.San Bruno，CA)を用いて生成された。第２Ａ図、第２Ｂ図及び第２Ｃ図は、DNASTAR^TM software(DNASTAR Inc，Madi son WI)のマルチシーケンスアライメントプログラムを用いて生成された、ＩＲＳ−ｐ５３ｈ（配列番号：１）、ハムスターからのＩＲＳｐ５３（ＧＩ１２０３８２０、配列番号：３）との間のアミノ酸配列アライメントを示す。発明を実施するための形態本タンパク質、ヌクレオチド配列及び方法を記載する前に、本発明は記載される特定の方法、プロトコル、細胞株、ベクタ並びに薬剤に限定されず、変更される場合もあることを理解されたい。また本明細書で用いられる専門用語は、特定の実施例を記載することのみを目的としており、本発明の範囲を制限することを意図するわけではなく、本発明は添付の請求の範囲によってのみ限定されることを理解されたい。本明細書で用いられるように、添付の請求の範囲では、単数形の冠詞並びに「その（前記）」は、文脈において異なるように明確に規定されない限り、複数の指示物を含むことに注意されたい。従って例えば、「ある宿主細胞」が示すものは、複数のそのような宿主細胞を含んでおり、「その抗体」は当業者には既知の１つ或いはそれ以上の抗体及びその等価物を示しており、他も同様である。異なるように規定されなければ、本明細書で用いられる科学技術用語は、本発明が属する分野の当業者に通常理解されているのと同じ意味である。本明細書で記載される内容と類似或いは等価な任意の方法、装置並びに材料が本発明の検証に際して用いられてもよいが、好適な方法、装置並びに材料は本明細書中に記載される。本明細書に記載される全ての発行物は、本発明に関連して用いられる場合がある発行物において報告される細胞株、ベクタ、方法論を記載及び開示するために、参照して本明細書の一部としている。本明細書に記載される内容は、本発明が、先行発明によるそのような開示に先行して権利を与えられないことを容認するものと解釈されるべきではない。定義ここで用いるＩＲＳ−ｐ５３ｈは自然、合成、半合成或いは組換え体の何れかの任意のソースからの任意の種、特にウシ、ヒツジ、ブタ、ネズミ、ウマ及び好適にはヒトを含む哺乳類から得られる実質的に精製されたＩＲＳ−ｐ５３ｈのアミノ酸配列である。ここで用いる用語「アゴニスト」は、ＩＲＳ−ｐ５３ｈに結合される際に、ＩＲＳ−ｐ５３ｈの量を増加するか、或いは活性の期間を延長する分子のことである。アゴニストはタンパク質、核酸、炭水化物或いはＩＲＳ−ｐ５３ｈに結合し、その作用を調節する任意の他の分子を含む場合がある。ここで用いる「アレル」或いは「アレル配列」はＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードする遺伝子の代替形である。アレルは、核酸配列における少なくとも１つの突然変異から生じ、変化したｍＲＮＡ或いはポリペプチドを生じ、その構造或いは機能は変化する場合もあれば、変化しない場合もある。任意の所与の遺伝子は、１つ或いは多くのアレル形を有する場合もあれば、全く有さない場合もある。アレルを引き起こす通常の突然変異は一般に、ヌクレオチドの自然の欠失、付加或いは置換に起因する。これらの種類の変化はそれぞれ単独で、或いは他との組み合わせにおいて、所与の配列において１回或いは２回以上生じる場合がある。ここで用いるＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードする「変化した」核酸配列は、同一或いは機能的に等価なＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードするポリヌクレオチドをもたらす種々のヌクレオチドの欠失、挿入或いは置換を含む。本定義には、ＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードするポリヌクレオチドのある特定のオリゴヌクレオチドプローブを用いて容易に検出することができる場合、できない場合がある多形性及びＩＲＳ− ｐ５３ｈをコードするポリヌクレオチド配列に対する通常の染色***置とは異なる位置を有する、アレルへの不適当な或いは予想外のハイブリダイゼーションが含まれる。またコードされたタンパク質は「変更され」て、サイレント変化を生成し、機能的に等価なＩＲＳ−ｐ５３ｈをもたらすアミノ酸残基の欠失、挿入或いは置換も含む場合もある。故意のアミノ酸置換は、ＩＲＳ−ｐ５３ｈの生物活性が保持される限り、残基の極性、電荷、可溶性、疎水性、親水性並びにまた両親媒性における類似性に基づいて行うことができる。例えば、負に帯電したアミノ酸はアスパラギン酸及びグルタミン酸を含み、正に帯電したアミノ酸はリジン及びアルギニンを含み、同様の親水値を有する帯電していない極性頭基（polar head group）有するアミノ酸はロイシン、イソロイシン及びバリン、グリシン及びアラニン、アスパラギン及びグルタミン、セリン及びスレオニン、フェニルアラニン及びチロシンを含む。ここで用いる「アミノ酸配列」は、オリゴペプチド、ペプチド、ポリペプチド或いはタンパク質配列及びそのフラグメント、並びに自然発生或いは合成分子のことである。ＩＲＳ−ｐ５３ｈのフラグメントは長さが約５〜約１５アミノ酸であり、ＩＲＳ−ｐ５３ｈの生物学的活性或いは免疫学的活性を保持していることが好ましい。「アミノ酸配列」は自然発生タンパク質分子のアミノ酸配列を示すものとして表されるが、アミノ酸配列等の用語は、示されるタンパク質分子に関連する完全な自然アミノ酸配列にそのアミノ酸配列を限定することを意味しない。ここで用いる「増幅」は、核酸配列の付加的な複製の生成のことであり、一般に当分野において周知のポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）技術を用いて実行される(Dieffenbach,C.W.及びG.S.Dveksler(1995)PCR Primer,a Laboratgry Manual ，Cold Spring Harbor Press,Plainview,NY）。ここで用いる「アンタゴニスト」は、ＩＲＳ−ｐ５３ｈに結合される際にＩＲＳ−ｐ５３ｈの生物学的或いは免疫学的活性を減少させる分子のことである。アンタゴニストはタンパク質、核酸、炭水化物或いはＩＲＳ−ｐ５３ｈに結合し、その作用を減少させる任意の他の分子を含む場合がある。ここで用いる用語「抗体」は、エピトープ決定基を結合することができる、Ｆａ、Ｆ（ａｂ’）₂及びＦｖのような無傷の分子及びそのフラグメントのことである。ＩＲＳ−ｐ５３ｈポリペプチドを結合する抗体は、ポリペプチド或いは免疫性抗原としてを対象の小さなペプチドを含む無傷のフラグメントを用いて生成されることができる。動物を免疫するために用いられるポリペプチド或いはオリゴペプチドは、ＲＮＡの翻訳に由来するか、或いは化学的に合成され、所望に応じて担体タンパク質に抱合されることができる。ペプチドに化学的に結合される通常用いられる担体は、ウシ血清アルブミン及びサイログロブリン、キーホールリンペットヘモシアニンを含む。その後結合されたペプチドを用いて動物（例えばマウス、ラット或いはウサギ）を免疫する。ここで用いる用語「抗原決定基」は、分子の特定の抗体と接触する部分（すなわちエピトープ）のことである。タンパク質或いはそのフラグメントを用いて宿主動物を免疫する際、タンパク質の多くの領域が、タンパク質上の所与の領域或いは三次元構造体に特異に結合する抗体の生成を誘発する場合がある。これらの領域或いは構造体は抗原決定基と呼ばれる。抗原決定基は、抗体に結合するために、無傷の抗原（すなわち免疫反応を誘発するために用いられるイムノゲン）と競合する場合がある。ここで用いる用語「アンチセンス」は、特異なＤＮＡ或いはＲＮＡ配列に相補性をなすヌクレオチド配列を含む任意の組成物である。用語「アンチセンス鎖」は、「センス」鎖に相補性をなす核酸鎖を示すために用いられる。アンチセンス分子はペプチド核酸を含み、合成或いは転写を含む任意の方法により生成されることができる。一度細胞内に導入されれば、相補ヌクレオチドは細胞により生成される自然配列と結合し、二重鎖を形成し、転写或いは翻訳のいずれかを遮断する。記号「負」はアンチセンス鎖を示す際に用いられる場合があり、「正」はセンス鎖を示す場合に用いられることがある。ここで用いる用語「生物学的活性」は、自然発生分子の構造的、調節的或いは生化学的機能を有するタンパク質のことである。同様に「免疫学的活性」は自然、組換え体或いは合成ＩＲＳ−ｐ５３ｈ、又はその任意のオリゴペプチドが、適当な動物或いは細胞において特異な免疫反応を誘発し、かつ特異な抗体と結合する能力のことである。ここで用いる「相補的」或いは「相補性」は、塩基対による許容塩類及び温度条件下でのポリヌクレオチドの自然結合のことである。例えば、配列「Ａ−Ｇ− Ｔ」の場合、相補配列「Ｔ−Ｃ−Ａ」に結合する。２つの一本鎖分子間の相補性は、核酸のあるものだけが結合する「部分的」であるか、或いは全相補性が一本鎖分子間に存在する場合には完全である場合もある。核酸鎖間の相補性の度合いは、核酸鎖間のハイブリダイゼーションの効率及び強度に著しく影響する。これは核酸鎖間の結合に及びＰＮＡ分子の設計及び使用に依存する増幅反応において特に重要である。ここで用いる「所与のポリヌクレオチド配列を含む組成物」は、所与のポリヌクレオチド配列を含む任意の組成物に幅広く用いられる。その組成物は乾燥状態或いは水溶液状態を含む。ＩＲＳ−ｐ５３ｈ（配列番号：１）をコードするポリヌクレオチド配列或いはそのフラグメント（例えば配列番号：２及びそのフラグメント）を含む組成物はハイブリダイゼーションプローブとして用いられる場合がある。そのプローブは凍結乾燥状態で保管され、炭水化物のような安定化剤と付随することができる。ハイブリダイゼーションでは、そのプローブは塩類（例えばＮａＣｌ）、界面活性剤（例えばＳＤＳ）及び他の組成物（例えばデンハート液、粉乳、サケ***ＤＮＡ等）を含む水溶液に分散される場合がある。ここで用いる「コンセンサス」は、核酸配列のうち、不要な塩基を分解するために再配列されているもの、或いは５’或いは３’方向にXL-PCR(Perkin Elmer, Norwalk,CT)を用いて伸展され、再配列されているもの、或いはフラグメント構築用コンピュータプログラム(GELVIEW Fragment Assembly System、GCG,Madison WI)を用いて２つ以上のインサイト社クローンの重複配列から構築されているもののことである。ある配列は伸展及び構築のいずれもが施され、コンセンサス配列を生成している。ここで用いる用語「ポリヌクレオチドの発現と相関がある」は、ノーザン分析による配列番号：２に類似のリボ核酸の存在の検出が、サンプル内のＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードするｍＲＮＡの存在を示しており、それによりそのタンパク質をコードするポリヌクレオチドからの転写物の発現と相関があることを示す。ここで用いる「欠失」は、アミノ酸配列或いはヌクレオチド配列いずれかにおいて変化し、１つ或いはそれ以上のアミノ酸残基或いはヌクレオチドが欠如することである。ここで用いる用語「誘導体」は、ＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードする核酸配列或いはＩＲＳ−ｐ５３ｈの相補配列又はコードされたＩＲＳ−ｐ５３ｈの化学修飾体のことである。そのような修飾の例示は、水素をアルキル基、アシル基或いはアミノ基に置換することである。核酸誘導体は、自然分子の生物学的及び免疫学的機能を保持するポリペプチドをコードする。誘導体ポリペプチドは、グリコシレーション、ポリエチレングリコール形成（pegylation）或いは由来したポリペプチドの生物学的或いは免疫学的機能を保持する任意の類似のプロセスにより修飾されるポリペプチドである。ここで用いられる用語「相同性」は相補性の度合いのことである。部分的相同性或いは完全相同性（すなわち同一）がある。部分的相同性配列は、同一配列が標的核酸にハイブリダイズするのを少なくとも部分的に抑制する配列であり、実用的な用語「実質的に相同性の」を用いることが好ましい。完全に相補性の配列の標的配列へのハイブリダイゼーションの抑制は、低い厳密性の条件下でハイブリダイゼーション検定法を用いて検査されることができる（サザンブロット或いはノーザンブロット、溶液ハイブリダイゼーション等）。実質的に相同性の配列或いはプローブは、低い厳密性の条件下で完全に相同性の配列及びプローブの標的配列への結合と競合し、それを抑制するであろう。低い厳密性の条件は非特異な結合が許容されるような条件であることは言うまでもない。低い厳密性条件は、２つの配列の互いへの結合が特異な（すなわち選択的な）相互作用であることを必要とする。非特異な結合の欠如は、部分的な度合いの相補性さえ存在しない（例えば約３０％同一性より小さい）第２の標的配列の使用により検査される場合もある。非特異な結合が存在しない場合、そのプローブは第２の非相補性標的配列にハイブリダイズしないであろう。ヒト人工染色体（ＨＡＣ）は、大きさが１０Ｋから１０ＭのＤＮＡ配列を含み、安定した有糸***染色体の分離及び保持に必要とされる全ての要素を含む（Ha rrington等(1997)Nat Genet.15:345-355）。ここで用いる用語「ヒト化抗体」は、ヒト抗体により似せるためにアミノ酸が非抗原結合領域内において置換されているが、その一方で元の結合能力を保持している抗体分子のことである。ここで用いる用語「ハイブリダイゼーション」は、核酸の鎖が塩基対を介して相補鎖と結合する任意のプロセスのことである。ここで用いる用語「ハイブリダイゼーション複合体」は、相補性のＧとＣ塩基との間に、並びに相補性のＡとＴ塩基との間に水素結合を形成することにより２つの核酸配列間に形成される複合体のことである。これらの水素結合は、塩基スタッキング相互作用によりさらに安定化する場合もある。２つの相補性核酸配列は、逆平行形状において水素結合する。ハイブリダイゼーション複合体は、溶液（例えばＣ₀ｔ或いはＲ₀ｔ分析）内に、又は溶液中に存在する核酸配列と固形支持体（例えば紙、膜、フィルタ、チップ、ピン、或いはスライドガラス、又は細胞或いはその核酸が固定されている任意の他の適切な支持体）上に固定化される別の核酸配列との間に形成されることもできる。ここで用いる「挿入」或いは「付加」は、自然発生分子に比べて、１つ或いはそれ以上のアミノ酸残基或いはヌクレオチドがそれぞれ加わるアミノ酸配列或いはヌクレオチド配列における変化のことである。ここで用いる「マイクロアレイ」は、紙、ナイロン或いは他の種類の膜、フィルタ、チップ、スライドガラス或いは任意の他の適当な固形支持体のような支持体上で合成される個別のポリヌクレオチド或いはオリゴヌクレオチドからなるアレイのことである。ここで用いる用語「調節」は、ＩＲＳ−ｐ５３ｈの生物学的活性の変化ことである。例えば調節により、ＩＲＳ−ｐ５３ｈのタンパク質活性、結合特性或いは生物学的、機能的或いは免疫学的特性が増減するようになる。ここで用いる「核酸配列」はオリゴヌクレオチド、ヌクレオチド或いはポリヌクレオチド並びにそのフラグメント、さらには一本鎖或いは二本鎖の場合があるゲノム或いは合成起源のＤＮＡ或いはＲＮＡのことであり、センス鎖或いはアンチセンス鎖を表す。「フラグメント」は、長さが６０ヌクレオチドより長い核酸配列であり、長さが少なくとも１００ヌクレオチド或いは少なくとも１０００ヌクレオチド、さらに少なくとも１０，０００ヌクレオチドであるフラグメントを含むことが最も好ましい。ここで用いる「オリゴヌクレオチド」は、少なくとも約６ヌクレオチドから６０ヌクレオチドの核酸配列、好ましくは約１５−３０ヌクレオチドの核酸配列、より好ましくは２０−２５ヌクレオチドの核酸配列であり、ＰＣＲ増幅或いはハイブリダイゼーション検定法において用いることができる。ここで用いる場合、オリゴヌクレオチドは、一般に当分野において定義されているような用語「アンプライマ」、「プライマ」、「オリゴマ」及び「プローブ」と実質的に等価である。ここで用いる「ペプチド核酸」、すなわちＰＮＡは、リジンにおいて終端するアミノ酸残基のペプチドバックボーンに結合する、長さが少なくとも５ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドを含むアンチセンス分子或いは抗遺伝因子（an ti-gene agent）ことである。ＰＮＡはポリエチレングリコール化され、細胞の寿命を延長し、その中で相補一本鎖ＤＮＡ及びＲＮＡを優先的に結合し、転写延長を停止する(Nielsen PE等(1993)Anticancer Drug Des 8:53-63)。ここで用いる用語「部分」は、タンパク質に関して（「所与のタンパク質の一部」をなすような）そのタンパク質のフラグメントを示す。そのフラグメントは長さ５アミノ酸残基から、全アミノ酸配列から１アミノ酸を引いたものにまで及ぶ場合がある。こうして「配列番号：１のアミノ酸配列の少なくとも一部を含む」タンパク質は、完全長ＩＲＳ−ｐ５３ｈ及びそのフラグメントを含む。ここで用いる用語「サンプル」は幅広い意味に用いられる。ＩＲＳ−ｐ５３ｈ或いはそのフラグメントをコードする核酸、又はＩＲＳ−ｐ５３ｈ自体を含むと予想される生検サンプルは体液、細胞からの抽出物、染色体、細胞器官或いは細胞から分離された膜、細胞、ゲノムＤＮＡ、ＲＮＡ或いはｃＤＮＡ（溶液中に存在するか、或いは固形支持体、組織、組織転写物（tissueprint）等に結合されている）を含む。ここで用いる用語「特異な結合」或いは「特異に結合する」は、タンパク質或いはペプチドとアゴニスト、抗体及びアンタゴニストとの間の相互作用のことである。その相互作用は、結合分子により識別されるタンパク質の特定の構造（すなわち抗原決定基或いはエピトープ）の存在に依存する。例えば、抗体がエピトープ「Ａ」に対して特異である場合に、標識された「Ａ」及びその抗体を含む反応におけるエピトープＡ（或いは遊離し、標識されないＡ）を含むタンパク質の存在が、その抗体に結合される標識されたＡの量を低減するであろう。ここで用いる「厳密性条件」或いは「厳密性」は、核酸、塩類及び温度により定義されるようなハイブリダイゼーションのための条件である。これらの条件は当分野において周知であり、その条件を変更して、同一或いは関連するポリヌクレオチド配列を同定或いは検出することができる。低い或いは高い厳密性のいずれかを含む多くの等価な条件は、配列（ＤＮＡ、ＲＮＡ、塩基組成物）の長さ及び性質、標的（ＤＮＡ、ＲＮＡ、塩基組成物）の性質、環境（溶液中或いは固形基質上に固定）、塩類或いは他の成分（例えばホルムアミド、硫酸デキストラン並びに又ポリエチレングリコール）及び反応の温度（プローブの融解温度より５ ℃低い温度から溶融温度より約２０〜２５℃低い温度までの範囲にある）のような要因に依存する。１つ或いはそれ以上の要因を変更して、上記条件とは異なるが、等価である低或いは高厳密性のいずれかの条件を発生させることもできる。ここで用いる用語「実質的に精製された」は、自然環境から除去されるか、単離されるか或いは分離された核酸配列或いはアミノ酸配列のことであり、それらは自然に関連する他の成分から少なくとも６０％、好適には７５％、最も好適には９０％遊離したものである。ここで用いる「置換」は、１つ或いはそれ以上のヌクレオチド或いはアミノ酸が、それぞれ異なるヌクレオチド或いはアミノ酸に置き換えられることである。ここで用いる「形質転換」は、外来ＤＮＡが侵入し、受容体細胞を変化させるプロセスを意味する。それは当分野において周知の種々の方法を用いて自然或いは人工的条件下で生じさせることができる。形質転換は、外来核酸配列を原核或いは真核宿主細胞に挿入するための任意の既知の方法に基づく場合がある。その方法は形質転換される宿主細胞に基づいて選択され、限定はしないが、ウイルス感染、電気穿孔法、熱ショック、リポフェクション並びに粒子照射を含む場合がある。そのように「形質転換された」細胞は、安定に形質転換された細胞を含んでおり、その細胞では挿入されたＤＮＡが自動的に複製するプラスミド或いはその宿主染色体の一部の何れかとして複製されることができる。またその細胞は、限られた期間だけ挿入されたＤＮＡ或いはＲＮＡを一時的に発現する細胞も含む。ここで用いるＩＲＳ−ｐ５３ｈの「変異配列」は、１つ或いはそれ以上のアミノ酸により変更されるアミノ酸配列のことである。変異配列は「保存的に」変化する場合があり、その場合置換されたアミノ酸は、例えばロイシンをイソロイシンに置き換える場合のように、類似の構造的及び化学的特性を有する。さらにまれにではあるが、変異配列は、グリシンをトリプトファンに置き換える場合のように「非保存的に」変化する場合がある。また類似の少数変異配列は、アミノ酸欠失或いは挿入、又はその両方を含む場合もある。生物学的及び免疫学的活性を無くすことなくアミノ酸残基が置換、挿入或いは欠失されるかを確定する際の指標は、当業者に周知のコンピュータプログラム、例えばDNASTAR softwareを用いて見出すことができる。発明本発明は新規のヒトインスリン受容体チロシンキナーゼ基質（これ以降「ＩＲＳ−ｐ５３ｈ」と呼ぶ）、ＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードするポリヌクレオチド及び癌、炎症及びインスリン反応に関連する疾患の診断、予防或いは治療のためのこれらの組成物の使用法の発見に基づくものである。本発明のＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードする核酸は、アミノ酸配列アライメントに対するコンピュータ検索を用いて癌関連***組織ｃＤＮＡライブラリ（ＢＲＳＴＮＯＴ０４）からのインサイト社クローン９１８１５８において最初に同定された。コンセンサス配列、配列番号：２は重複並びにまた伸展核酸配列、インサイト社クローン９１８１５８（ＢＲＳＴＮＯＴ０４）、１３４２７１９（ＣＯＬＮＴＵＴ０３）及び１５２２２８１（ＢＬＡＤＴＵＴ０４）に由来した。一実施例では、本発明は第１Ａ図、第１Ｂ図、第１Ｃ図、第１Ｄ図、第１Ｅ図及び第１Ｆ図に示されるような配列番号：１のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。ＩＲＳ−ｐ５３ｈは長さが５３４アミノ酸であり、残基Ｙ１７、Ｙ１１５及びＹ１７８においてチロシンキナーゼ部位、残基Ｓ１４８においてｃＡＭＰ／ｃＧＭＰ−依存性タンパク質キナーゼ部位、Ｓ４、Ｔ１９、Ｔ１０３、Ｓ１２９、Ｓ１５８、Ｓ２９１、Ｔ３０３及びＳ３９５においてカゼインキナーゼＩＩ部位並びにＳ２７、Ｓ１５８、Ｓ１６９、Ｔ３４８、Ｓ３９５、Ｓ４１８及びＳ４４０においてタンパク質キナーゼＣ部位を含む多数の潜在的なリン酸化部位を含む。第２Ａ図、第２Ｂ図及び第２Ｃ図に示されるように、ＩＲＳ−ｐ５３ｈはハムスターからのＩＲＳｐ５３（ＧＩ１２０３８２０、配列番号：３）に化学的及び構造的相同性を有する。詳細にはＩＲＳ−ｐ５３ｈ及びハムスターＩＲＳｐ５３は９１％アミノ酸配列同一性を共有する。ノーザン分析は種々の組織におけるＩＲＳ−ｐ５３ｈの発現を示しており、この大部分は不死化或いは癌性である。詳細には副腎、膀胱、脳、***、結腸、食道、胆嚢、腎臓、肺、膵臓、陰茎、傍神経節、前立腺及び子宮からの癌及び癌関連組織、並びに結腸及び小腸（潰瘍性大腸炎）、胆嚢（胆嚢炎）、皮膚（結節性紅斑）、滑膜（リウマチ様関節炎）、リンパ球及び単核細胞を含む炎症関連組織及び細胞株におけるＩＲＳ−ｐ５３ｈの発現が知られる。また本発明はＩＲＳ−ｐ５３ｈ変異配列を含む。好適なＩＲＳ−ｐ５３ｈ変異配列は、ＩＲＳ−ｐ５３ｈアミノ酸配列（配列番号：１）に少なくとも８０％、より好ましくは９０％アミノ酸配列同一性を有し、ＩＲＳ−ｐ５３ｈの活性の生物学的、免疫学的或いは他の機能的特性を保持する変異配列である。最も好ましいＩＲＳ−ｐ５３ｈ変異配列は、配列番号：１に少なくとも９５％アミノ酸同一性を有する変異配列である。また本発明はＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードするポリヌクレオチドを含む。従ってＩＲＳ−ｐ５３ｈのアミノ酸配列をコードする任意の核酸配列を用いて、ＩＲＳ −ｐ５３ｈを発現する組換え分子を生成することができる。ある特定の実施例では、本発明は第１Ａ図、第１Ｂ図、第１Ｃ図、第１Ｄ図、第１Ｅ図及び第１Ｆ図に示されるような配列番号：２の核酸配列を有するポリヌクレオチドを含む。遺伝子コードの縮重の結果として、ＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードする多数のヌクレオチド配列が生成され、その中には任意の既知の自然発生遺伝子のヌクレオチド配列に最低限の相同性を示すものもあることは当業者には明らかであろう。このように本発明は、可能なコドン選択に基いて組み合わせを選択することにより形成されるようになるヌクレオチド配列のあらゆる可能な変異配列を考慮する。これらの組み合わせは、自然発生ＩＲＳ−ｐ５３ｈのヌクレオチド配列に適用されるような標準的なトリプレット遺伝子コードに従って形成され、全てのそのような変形例が明確に開示されているものと考慮されたい。ＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードするヌクレオチド配列及びその変異配列は、適当に選択された厳密性条件下で、自然発生ＩＲＳ−ｐ５３ｈのヌクレオチド配列にハイブリダイズできることが好ましいが、実質的に異なるコドン使用法を有するＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードするヌクレオチド配列或いはその誘導体を生成することが有利な場合もある。コドンを選択して、特定のコドンが宿主によって利用される頻度に応じて、ペプチドの発現が特定の原核或いは真核発現宿主において生じる割合を増加してもよい。コードされたアミノ酸配列を変更することなくＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードするヌクレオチド配列及びその誘導体を実質的に変更する他の理由は、より長い半減期といった、自然発生配列から生成された転写物より望ましい特性を有するＲＮＡ転写物を生成することを含む。また本発明は、合成化学的に完全に、ＩＲＳ−ｐ５３ｈ及びその誘導体をコードするＤＮＡ配列或いはそのフラグメントを生成することを含む。生成後、本特許出願の出願時点で当分野において周知の薬剤を用いて、合成配列を、任意の多くの入手可能な発現ベクタ及び細胞系に挿入することができる。さらに合成化学的に、ＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードする配列或いは任意のそのフラグメントに突然変異を導入することもできる。また本発明には、Wahl,G.M及びS.L.Berger(1987;Methods Enzymol.Voll52:399 -407)及びKimmel,A.R.(1987;Methods Enzymol.Vol 152:507-511)に教示されるような種々の厳密性の条件下で請求されるヌクレオチド配列、詳細には配列番号：２に示されるヌクレオチド配列にハイブリダイズすることができるポリヌクレオチド配列が含まれる。当分野において周知で、一般に入手可能なＤＮＡ配列決定のための方法が本発明の任意の実施例を実行するために用いられる。これらの方法はDNA polymerase I,Sequenase（登録商標）(US Biochemical Corp,Cleveland OH))のKlenow frag ment、Taqpolymerase(Perkin Elmer)、耐熱性T7 polymerase(Amersham,Chicago IL)或いはGibco BRL(Gaithersburg MD）により市販されているELONGASE Ampllfi cation Systemのような組換えポリメラーゼとプルーフリーディングエキソヌクレアーゼの組み合わせのような酵素を利用する。このプロセスはHamilton Micro Lab 220 0(Hamilton,Reno NV),Peltier Thermal Cycler(PTC200;MJ Research,Watertown MA)及びABI Catalyst並びに373及び377DNA sequencers(Perkin Elmer)のような機器を用いて自動化することが好ましい。ＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードする核酸配列は、部分ヌクレオチド配列を利用して、かつプロモータ及び調節エレメントのような上流配列を検出するための当分野において既知の種々の方法を用いて伸展させることができる。例えば、用いられる場合がある１つの方法、「制限部位」ＰＣＲは、汎用プライマを用いて既知の位置に隣接する未知の配列を回収する（Sarkar.G(1993)PCR Methods Applic 2:3 18-322）。詳細には、ゲノムＤＮＡはリンカー配列に対するプライマ及び既知の領域に特異なプライマの存在時に最初に増幅される。その後増幅された配列は、同じリンカープライマ及び第１のプライマに内在する別の特異なプライマを用いて第２巡目のＰＣＲにかけられる。各回のＰＣＲの生成物は、適当なＲＮＡポリメラーゼを用いて転写され、逆転写酵素を用いて配列決定される。また逆ＰＣＲを利用して、既知領域に基づく多岐プライマを用いて配列を増幅或いは伸展することもできる(Triglia T等(1988)Nucleic Acids Res 16:8186)。プライマはOLIGO4.06 Primer Analysis Software(National Biosciences Inc,Pl ymouth MN)或いは別の適当なプログラムを用いて設計され、長さが２２−３０ヌクレオチドになり、５０％以上のＧＣ含量を有し、さらに約６８−７２℃の温度で標的配列にアニールすることができる。その方法はいくつかの制限酵素を用いて、遺伝子の既知の領域内に適当なフラグメントを生成する。その際そのフラグメントは、分子内連結反応により環状にされ、ＰＣＲテンプレートとして用いられる。用いられる場合がある別の方法は、ヒト及び酵母菌人工染色体ＤＮＡの既知の配列に隣接するＤＮＡフラグメントをＰＣＲ増幅することを伴う捕獲ＰＣＲ(Lag erstrom M等(1991)PCR Methods Applic 1:111-19)である。この方法では、多数の制限酵素消化及び連結を用いて、ＰＣＲを実行する前に遺伝子操作された二本鎖配列をＤＮＡ分子の未知の部分に配置することができる。未知の配列を回収するために用いられることがある別の方法は、Parker JD等( 1991;Nucleic Acids Res 19:3055-3060)による方法である。さらにある方法はＰＣＲ、入れ子状プライマ及びPromoterFinder（登録商標）ライブラリを用いて、ゲノムＤＮＡに歩行することができる（Clontech,Palo Alto CA）。このプロセスによりライブラリをスクリーニングする必要がなくなり、イントロン／エクソン接合部を見つける際に有用である。完全長ｃＤＮＡに対してスクリーニングする際に、より長いｃＤＮＡを含むように大きさを選択されたライブラリを用いることが好ましい。またランダムに初回抗原刺激を受けたライブラリも、それらが遺伝子の５’及び上流領域を含むより大きな配列を含むという点で好ましい。ランダムに初回抗原刺激を受けたライブラリの使用は、オリゴｄ（Ｔ）ライブラリが完全長ｃＤＮＡを産生しない状況では特に好ましい。ゲノムライブラリは５’ 及び３’非転写制御領域に伸展するために有用な場合がある。市販の毛細管電気泳動系を用いて、配列決定或いはＰＣＲ生成物の大きさを解析したり、或いはヌクレオチド配列を確認することもできる。詳細には毛細管配列決定は、電気泳動分離のための流動性ポリマ、レーザにより活性化される（各ヌクレオチドに対して１種類の）４つの異なる蛍光性染料及びＣＣＤカメラによる放射波長の検出を用いる場合がある。出力／光強度が適当なソフトウエア（例えばGenotyper^TM及びSequence Navigator^TM 、Perkin Elmer）を用いて電気信号に変換され、サンプルの装填からコンピュータ解析及び電子データ表示までの全プロセスがコンピュータ制御される。毛細管電気泳動法は、特定のサンプルの限定された量内に存在する場合があるＤＮＡの小片の配列決定に特に好ましい。本発明の別の実施例では、ＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードするポリヌクレオチド配列或いはそのフラグメントが、適当な宿主細胞においてＩＲＳ−ｐ５３ｈ、そのフラグメント或いはその機能的等価物の発現をもたらすために組換えＤＮＡ分子に用いられる場合がある。ゲノムコードの固有の縮重により、概ね同一か或いは機能的に等価なアミノ酸配列をコードする他のＤＮＡ配列が生成され、この配列を用いてＩＲＳ−ｐ５３ｈをクローニングし、発現することもできる。非自然発生コドンを有するＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードするヌクレオチド配列を生成することが有利な場合もあることは当業者には理解されよう。例えば、特定の原核或いは真核宿主により選択されたコドンを選択して、タンパク質発現の割合の増大したり、或いは自然発生配列から生成される転写物より長い半減期のような所望の特性を有するＲＮＡ転写物を生成することもできる。本発明のヌクレオチド配列は、限定はしないが、遺伝子生成物のクローニング、プロセッシング並びにまた発現を修飾する変更を含む種々の理由によりＩＲＳ −ｐ５３ｈをコードする配列を変更するために、当分野において周知の方法を用いて遺伝子操作されることができる。遺伝子フラグメント及び合成オリゴヌクレオチドのランダムなフラグメント化及びＰＣＲ再構築によるＤＮＡ混合を用いて、ヌクレオチド配列を遺伝子操作することができる。例えば、位置指定突然変異誘発を用いて、新しい制限部位の挿入、グリコシレーションパターンの変更、コドン優先度の変更、スプライシング変異配列の生成或いは突然変異の導入等を行うこともできる。本発明の別の実施例では、ＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードする自然、修飾或いは組換えポリヌクレオチドは、融合タンパク質をコードするために異種配列に結合されることもできる。例えば、ＩＲＳ−ｐ５３ｈ活性のインヒビタ用のペプチドライブラリをスクリーニングするために、市販されている抗体により識別されるキメラＩＲＳ−ｐ５３ｈタンパク質をコードすることが有用な場合もある。また融合タンパク質は、ＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードする配列と異種タンパク質配列との間に位置する切断部位を含むように遺伝子操作されることもでき、それによりＩＲＳ−ｐ５３ｈは切断され、概ね異種部分から離れて精製されるようになる。別の実施例では、当分野で周知の化学的方法を用いて、ＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードする配列が、全体的に或いは部分的に合成されることができる（Caruthers MH等(1980)Nuc Acids Res Symp Ser 215-23,Horn T等(1980)Nuc Acids Res Symp Ser225-32参照）。別法では、タンパク質自体が、ＩＲＳ−ｐ５３ｈのアミノ酸配列或いは一部を合成するために化学的方法を用いて生成される場合がある。例えばペプチド合成は種々の固相技術（Roberge JY等(1995)Science 269:202-204 ）を用いて実行されることができ、自動合成は、例えばABI 431A Peptide Synth esizer(Perkin Elmer)を用いることにより実現することができる。新たに合成されたペプチドは、調製用高速液体クロマトグラフィにより実質的に精製されることができる(例えばCreighton(1983)Proteins，Structures and M olecular Principles,WH Freeman and Co,New York NY)。合成ペプチドの組成物は、アミノ酸分析及び配列決定により確認することができる(例えばEdman degradation procedure;Creighton、上記)。さらにＩＲＳ−ｐ５３ｈのアミノ酸配列或いはその任意の一部は、直接合成中に変更されるか、並びにまた他のタンパク質或いはその任意の一部からの配列を用いる化学的方法により結合され、変異配列ポリペプチドを生成することもできる。生物学的に有効なＩＲＳ−ｐ５３ｈを発現するために、ＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードするヌクレオチド配列或いはその機能的等価物が、適当な発現ベクタ、すなわち挿入されたコード化配列の転写及び翻訳のために必要なエレメントを含むベクタ内に挿入されてもよい。当業者に周知の方法を用いて、ＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードする配列及び適当な転写或いは翻訳制御エレメントを含む発現ベクタを構成することができる。これらの方法は、ｉｎｖｉｔｒｏ組換えＤＮＡ技術、合成技術並びにｉｎｖｉｖｏゲノム再組換えを含む。そのような技術はSambrook等(1989)Molecular Clonin g ，A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Press，Plainview NY及びAusube l FM等（1989）Current Protocols in Molecular Biology，John Wiley & Sons ，New York NYに記載されている。種々の発現ベクタ／宿主系を利用して、ＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードする配列を含有し、発現する場合もある。これらは、限定はしないが、組換え体バクテリオファージ、プラスミド或いはコスミドＤＮＡ発現ベクタと形質転換されたバクテリア、酵母菌発現ベクタと形質転換された酵母菌、ウイルス発現ベクタで感染した昆虫細胞系（例えばバキュロウイルス）、ウイルス発現ベクタと形質転換された植物細胞系（例えば、カリフラワーモザイクウイルスＣａＭＶ、タバコモザイクウイルスＴＭＶ）或いはバクテリア発現ベクタと形質転換された植物細胞系（例えば、Ｔｉ或いはｐＢＲ３２２プラスミド）又は動物細胞系のような微生物を含む。本発明は用いられる宿主細胞により制限されない。「制御エレメント」或いは「調節配列」はベクタの非翻訳領域、すなわちエンハンサ、プロモータ並びに５’及び３’非翻訳領域であり、転写及び翻訳を実行するために宿主細胞タンパク質と相互作用する。そのようなエレメントは強度及び特異性において異なる場合がある。用いられるベクタ系及び宿主により、構成的及び誘導性プロモータを含む、任意の数の適当な転写及び翻訳エレメントを用いることができる。例えばバクテリア系においてクローニングする際に、Bluesc ript（登録商標）ファージミド(Stratagene,LaJolla CA)のハイブリッドｌａｃＺプロモータ或いはpSport１プラスミド(Gibco BRL)等の誘導性プロモータを用いることができる。バキュロウイルスポリヘドリン（polyhedrin）プロモータは昆虫細胞に用いられる。植物細胞のゲノムに由来するプロモータ或いはエンハンサ（例えば熱ショック、ＲＵＢＩＳＣＯ及び貯蔵タンパク質遺伝子）或いは植物ウイルスに由来するプロモータ或いはエンハンサ（例えばウイルス性プロモータ或いはリーダ配列）が、ベクタにクローニングされる場合もある。哺乳動物細胞系では、哺乳動物遺伝子或いは哺乳動物ウイルスに由来するプロモータが好ましい。ＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードする配列の多数の複製を含む細胞株を発生させる必要がある場合には、ＳＶ４０或いはＥＢＶ系のベクタを適当な選択可能マーカと共に用いることができる。バクテリア系では、いくつかの発現ベクタが、ＩＲＳ−ｐ５３ｈのための使用に応じて選択されてもよい。例えば大量のＩＲＳ−ｐ５３ｈが抗体を誘導するために必要とされるとき、容易に精製される融合タンパク質を高レベルで発現させるベクタを用いることができる。そのようなベクタは、限定するわけではないが、ＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードする配列が、アミノ末端Ｍｅｔ及び後続のβ−ガラクトシダーゼの７残基に対する配列の枠内のベクタに結合されることができ、ハイブリッドタンパク質が生成される、多機能Ｅ．ｃｏｌｉクローニング及びBluescript(登録商標)(Stratag ene)のような発現ベクタ、並びにｐＩＮベクタ（Van Heeke & Schuster（1989） J Biol Chem 264:5503-5509）等を含む。またｐＧＥＸベクタ（Promega,Madison WI）を用いて、外来のポリペプチドをグルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）を有する融合タンパク質として発現してもよい。一般にそのような融合タンパク質は可溶性であり、グルタチオン−アガロースビードへの吸収及びそれに後続する遊離グルタチオンの存在時の溶出により分離した細胞から容易に精製することができる。そのような系内で形成されるタンパク質はヘパリン、トロンビン或いは第ＸＡ因子プロテアーゼ切断部位を含むように設計され、対象のクローニングされたポリペプチドが自由にＧＳＴ成分から遊離されるようにする。酵母菌、サッカロミセス‐セレビジエでは、α因子、アルコールオキシダーゼ及びＰＧＨのような構成的及び誘導性プロモータを含むいくつかのベクタを用いることができる。再確認する場合には、Ausubel等(上記)及びGrant等(1987)Meth ods in Enzymology 153:516-544を参照されたい。植物発現ベクタが用いられる場合には、ＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードする配列の発現は、いくつかのプロモータの任意のものにより行われる。例えばＣａＭＶの３５Ｓ及び１９Ｓプロモータのようなウイルス性プロモータは単独で、或いはＴＭＶからのω−リーダ配列と共に用いることができる（Takamatsu等(1987)EMBO J 6:307-311）。別法では、ＲＵＢＩＳＣＯの小サブユニットのような植物プロモータ或いは熱ショックプロモータ（Coruzzi等（1984）EMBO J 3:1671-1680;Br oglie等（1984）Science 224:838-843及びWinter J and Sinibaldi RM（1991） Results Probl Cell Differ 17:85-105）を用いる場合もある。これらの構成体は、直接ＤＮＡ形質転換或いは病原体媒介形質移入により植物細胞内に導入されることができる。その技術は一般に入手できるいくつかの概説に記載される（例えば、Hobbs S or Murry LE in McGraw Hill Yearbook of Science and Technol ogy (1992)McGraw Hill New York NY,pp.191-196を参照されたい）。また昆虫系もＩＲＳ−ｐ５３ｈを発現するために用いることができる。例えばある系では、Autographa californica核多角体病ウイルス（ＡｃＮＰＶ）をベクタとして用いて、ヨトウガ(Spodoptera frugiperda)細胞或いはイクラサキンウワバ幼虫（Trichoplusia larvae）において外来遺伝子を発現する。ＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードする配列は、ポリヘドリン（polyhedrin）遺伝子のようなウイルスの非必須領域にクローニングし、ポリヘドリンプロモータの制御下に置かれる。ＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードする配列を有効に挿入することにより、ポリヘドリン遺伝子は非活性になり、コートタンパク質を欠如する組換え体ウイルスが生成される。その後組換え体ウイルスを用いて、ＩＲＳ−ｐ５３ｈが発現される、例えばヨトウガ細胞或いはイクラサキンウワバ幼虫を感染させる（Engelhard EK等 (1994),Proc Nat Acad Sci91:3224-3227）。哺乳類宿主細胞では、いくつかのウイルス性発現系が利用される場合がある。アデノウイルスが発現ベクタとして用いられる場合には、ＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードする配列は、後期プロモータ及び３連のリーダ配列からなるアデノウイルス転写／翻訳複合体に結合される場合がある。ウイルスゲノムの非必須Ｅ１或いはＥ３領域内の挿入により、感染した宿主細胞においてＩＲＳ−ｐ５３ｈを発現することができる生ウイルスを得ることができる（Logan and Shenk（1984）Proc Natl Acad Sci 81:3655-59）。さらにラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）エンハンサのような転写エンハンサを用いて、哺乳動物宿主細胞内の発現を増加させることができる。またヒト人工染色体（ＨＡＣ）を用いて、プラスミドに含まれ、発現させることができるＤＮＡのより大きなフラグメントを送達することもできる。治療のため、６−１０ＭのＨＡＣが構成され、従来の送達方法（リポソーム、ポリカチオンアミノポリマ或いはベシクル）を用いて送達される。また特異な開始シグナルを用いて、ＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードする配列のより効率的な転写を達成することもできる。そのシグナルはＡＴＧ開始コドン及び隣接配列を含む。ＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードする配列、その開始コドン及び上流配列が適当な発現ベクタ内に挿入される場合には、追加の転写或いは翻訳制御シグナルは不要である。しかしながらコードする配列或いはその一部のみが挿入される場合には、ＡＴＧ開始コドンを含む外来の翻訳制御シグナルが与えられるべきである。さらに開始コドンは、全挿入物を確実に転写するために、正確な読み枠内に置かれなければならない。外来転写エレメント及び開始コドンは、自然及び合成両方の種々の起源からなることができる。発現の効率は、論文に記載されるように、使用される特定の細胞系に適したエンハンサを含有することにより高められる場合がある(Scharf D等(1994)Results Probl Cell Differ 20:125.162)。さらに宿主細胞株は、挿入した配列の発現を調節できるように、或いは所望のように発現したタンパク質を処理できるように選択されることができる。そのようなポリペプチドの調節は、限定はしないが、アセチル化、カルボキシル化、グリコシル化、リン酸化、脂質化或いはアシル化を含む。またタンパク質の「プレプロ」形態を切断する翻訳後プロセッシングを用いて、正確な挿入、折りたたみ並びにまた機能を促進することができる。翻訳後活性のために特異な細胞機構及び特性機構を有する種々の宿主細胞(例えばＣＨＯ、ＨｅＬａ、ＭＤＣＫ、ＨＥＫ２９３及びＷＩ３８)がAm erican Type Culture Collection(ATTC;Bethesda,MD)から市販されており、外来タンパク質の正確な調節及びプロセッシングを確実にするように選択することができる。長期間組換え体タンパク質を歩留まり高く生産する場合、安定した発現が望ましい。例えば、ＩＲＳ−ｐ５３ｈを安定して発現する細胞株は、複製或いは内性発現エレメントのウイルス起源及び同じ或いは別のベクタにおける選択可能マーカ遺伝子を含む発現ベクタを用いて形質転換されことができる。ベクタの導入に続いて、細胞を強化培地内で１〜２日間成長させ、その後選択培地に切り替えるようにする。選択可能マーカの目的は、選択への耐性を与えることであり、その存在により、導入された配列を有効に発現する細胞が成長し、回収されるようになる。安定して形質転換された細胞の耐性クローンは、細胞タイプに適した組織培養技術を用いて増殖させることができる。任意の数の選択系を用いて、形質転換された細胞株を回収することができる。これらは、限定はしないが、それぞれｔｋ−細胞或いはａｐｒｔ−細胞において用いることができる単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（Wigler,M等(1977) Cell 11:223-32）及びアデニンフォスフォリボシール転換酵素遺伝子（Lowy I等 (1980)Cell 22:817-23）含む。また代謝拮抗物質、抗生物質或いは除草剤耐性を選択のための基準として用いることができる。例えば、ｄｈｆｒはメトトレキセートへの耐性を与え（Wigler M等(1980)Proc Natl Acad Sci 77:3567-70）、ｎｐｔはアミノグリコシッドネオマイシン及びＧ−４１８への耐性を与え（Colber e-Garapin F等(1981)J Mol Biol 150:1-14）、ａｌｓ或いはｐａｔはそれぞれクロルスルフロン及びホスフィノトリシン（phosphinotricin）アセチル基転移酵素への耐性を与える（Murry、上記）。さらに選択可能遺伝子が記載されており、例えば、ｔｒｐＢにより細胞がトリプトファンの代わりにインドールを利用できるようになり、ｈｉｓＤにより細胞がヒスチジンの代わりにヒスチノール（histinol）を利用できるようになる（Hartman S.C及びR.C Mulligan( 1988)Proc Natl Acad Sci 85:8047-51）。最近では、アントシアニン、β−グルクロニダーゼ及びその基質ＧＵＳ並びにルシフェラーゼ及びその基質ルシフェリンのようなマーカと共に可視マーカを使用することが普及しており、転換体を同定するのみならず、特異なベクタ系に起因する一過性或いは安定したタンパク質発現の量を定量するために幅広く用いられる（Rhodes CA等(1995)Methods Mol B iol 55:121-131）。マーカ遺伝子発現の存否は、対象の遺伝子が存在することを示唆するが、その存在及び発現は確認される必要がある。例えば、ＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードする配列がマーカ遺伝子配列内に挿入される場合には、ＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードする配列を含む組換え体細胞は、マーカ遺伝子機能の欠如により同定されることができる。別法では、マーカ遺伝子は、単一のプロモータの制御下でＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードする配列と直列に配置される。誘導及び選択に応じたマーカ遺伝子の発現は通常、同様に直列の遺伝子の発現を示す。別法では、ＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードする核酸配列を含み、ＩＲＳ−ｐ５３ｈを発現する宿主細胞は、当業者に知られる種々の手順により同定されることができる。この手順は、限定はしないが、核酸或いはタンパク質の検出並びにまた定量化のための膜、溶液或いはチップ系技術を含むＤＮＡ−ＤＮＡ或いはＤＮＡ− ＲＮＡハイブリダイゼーション及びタンパク質バイオアッセイ或いはイムノアッセイ技術を含む。ＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードするポリヌクレオチド配列の存在は、ＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードするポリヌクレオチドのプローブ或いはフラグメントを用いるＤＮＡ−ＤＮＡ或いはＤＮＡ−ＲＮＡハイブリダイゼーション或いは増幅により検出されることができる。核酸増幅系アッセイは、ＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードするＤＮＡ或いはＲＮＡを含む形質転換体を検出するために、ＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードする配列に基づくオリゴヌクレオチド或いはオリゴマを使用することを伴う。ＩＲＳ−ｐ５３ｈの発現を検出し、測定するための種々のプロトコルは、そのタンパク質に対して特異なポリクローナル抗体或いはモノクローナル抗体のいずれかを用いており、当業者には周知である。例えば酵素結合免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、蛍光標示式細胞分取（ＦＡＣＥ）などである。ＩＲＳ−ｐ５３ｈにおける２つの非干渉性エピトープに反応するモノクローナル抗体を用いる２部位のモノクローナル系イムノアッセイ（monoclonal -based immunoassay）が好ましいが、結合タンパク競合測定法が用いられてもよい。ここで記載した検定法及び他の検定法は、Hampton R等(1990,Serological M ethods ,a Laboratory Manual,APS Press，St.Paul MN)及びMaddox DE等(1983,J Exp'Med 158:1211-1216)に記載される。幅広い標識及び接合技術が当業者には知られており、種々の核酸及びアミノ酸検定法において用いることができる。ＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードするポリヌクレオチドに関連する配列を検出するための標識化ハイブリダイゼーション或いはＰＣＲプローブを生成するための手段は、オリゴ標識化、ニックトランスレーション、末端標識化或いは標識化ヌクレオチドを用いるＰＣＲ増幅を含む。別法では、ＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードする配列或いはその任意の一部が、ｍＲＮＡプローブの生成のためにベクタ内にクローニングされる場合もある。そのようなベクタが当分野において知られ、市販されており、Ｔ７、Ｔ３或いはＳＰ６のような適当なＲＮＡポリメラーゼ及び標識されたヌクレオチドを加えることによりｉｎｖｉｔｒｏでＲＮＡプローブを合成するために用いることができる。これらの手順は種々の市販のキット（Pharmacia&upjohn(Kalamazoo,MI)、Promega(Madison WI)及びUS Biochemical Corp(Cleveland OH)）を用いて行われる。適当なリポータ分子或いは標識が用いられる場合もあり、放射性核種、酵素、蛍光剤、化学発光剤或いは色素生産剤並びに基質、コファクタ、インヒビタ、磁気粒子等を含む。ＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードするヌクレオチド配列と形質転換された宿主細胞は、細胞培養からのタンパク質の発現及び回収のために適した条件下で培養されることができる。組換え体細胞により生成されるタンパク質は、用いられる配列並びにまたベクタにより、分泌されるか或いは細胞内に含有される。ＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクタは、原核細胞膜或いは真核細胞膜を介してＩＲＳ−ｐ５３ｈの分泌を促すシグナル配列を含むように設計することができることは当業者には理解されよう。他の組換え体構造を用いて、可溶性タンパク質の精製を容易にするポリペプチド領域をコードするヌクレオチド配列にＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードする配列を結合する場合もある。そのような精製を容易にする領域は、限定はしないが、固定化金属上で精製できるようにするヒスチジン−トリプトファンモジュールのような金属キレート化ペプチド、固定化免疫グロブリン上で精製できるようにするタンパク質Ａドメイン及びＦＬＡＧＳ伸展／親和性精製系（Immunex Corp.,Seatile,WA）において用いられるドメインを含む。精製ドメインとＩＲＳ−ｐ５３ｈとの間に第ＸＡ因子或いはエンテロキナーゼ（Invitrogen,San Diego,CA）に対して特異な配列のような分割可能リンカー配列を含有することにより、精製が容易になる場合もある。１つのそのような発現ベクタが、ＩＲＳ−ｐ５３ｈ及びチオレドキシン或いはエンテロキナーゼ切断部位に先行する６ヒスチジン残基をコードする核酸を含む融合タンパク質の発現をもたらす。ヒスチジン残基は、ＩＭＩＡＣ（Porath,J ．等(1992,Prot.Exp.Purlf.3:263-281)に記載されるような固定化金属イオン親和性クロマトクグラフィ）において精製を容易にし、一方エンテロキナーゼ切断部位は融合タンパク質からのＩＲＳ−ｐ５３ｈを精製するための手段を提供する。融合タンパク質を含むベクタの議論はKroll,D.J.等(1993;DNA Cell Biol.12:4 41-453)に与えられる。組換え生成物に加えて、ＩＲＳ−ｐ５３ｈのフラグメントは、固相技術（Merr ifield J(1963)J Am Chem Soc 85:2149-2154）を用いる直接ペプチド合成により生成される場合もある。タンパク質合成は手動技術を用いて或いは自動化により実行されることができる。例えば、Applied Biosystems 431A Peptide Synthesi zer(Perkin Elmer)を製造者により提供される取扱説明書に従って用いることにより自動合成を実現してもよい。ＩＲＳ−ｐ５３ｈの種々のフラグメントは化学的に個別に合成されるか、或いは化学的方法を用いて結合され、完全長分子を生成することができる。治療ＩＲＳ−ｐ５３ｈとハムスターからのＩＲＳｐ５３（ＧＩ１２０３８２０）との間には化学的及び構造的相同性がある。さらにＩＲＳ−ｐ５３ｈは、癌及び炎症に関連する組織において発現する。それゆえＩＲＳ−ｐ５３ｈは癌、炎症及びインスリン反応に関連する疾患においてある役割を有するように現れる。詳細にはＩＲＳ−ｐ５３ｈの発現及び活性の増加は、癌或いは炎症に関連し、ＩＲＳ −ｐ５３ｈの発現及び活性の減少はインスリン反応に関連する疾患において役割を果たす。それゆえ一実施例では、ＩＲＳ−ｐ５３ｈ或いはそのフラグメント又は誘導体が被検者に投与され、インスリン反応に関連する疾患を治療することができる。そのような疾患は限定はしないが、タイプ２（非インスリン依存性）糖尿病、高血糖症、筋緊張性筋ジストロフィー、黒色表皮腫、網膜症、神経障害、アテローム性冠状及び末梢動脈疾患並びに末梢及び自立神経障害を含む。別の実施例では、ＩＲＳ−ｐ５３ｈを発現することができるベクタ或いはそのフラグメント又は誘導体を被検者に投与して、限定はしないが、上記疾患を含むインスリン反応に関連する疾患を治療することができる。さらに別の実施例では、ＩＲＳ−ｐ５３ｈのアゴニストが被検者に投与され、限定はしないが、上記疾患を含むインスリン反応に関連する疾患を治療することができる。一実施例では、ＩＲＳ−ｐ５３ｈのアンタゴニストが被検者に投与され、癌を予防或いは治療することができる。そのような疾患は、限定はしないが、腺癌、白血病、リンパ腫、黒色腫、骨髄腫、肉腫及び奇形腫、並びに詳細には副腎、膀胱、骨、骨髄、脳、***、子宮頚、胆嚢、神経節、消化管、心臓、腎臓、肝臓、肺、筋肉、卵巣、膵臓、副甲状腺、陰茎、前立腺、唾液腺、皮膚、脾臓、精巣、胸腺、甲状腺及び子宮の癌を含む種々の種類の癌を含む。一態様では、ＩＲＳ− ｐ５３ｈに特異な抗体をアンタゴニストとして直接或いは標的又は送達機構として間接的に、ＩＲＳ−ｐ５３ｈを発現する細胞又は組織に医薬品因子を運ぶために用いることができる。別の実施例では、ＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードするポリヌクレオチドの相補配列を発現するベクタが被検者に投与され、限定はしないが上記癌を含む癌を治療或いは予防することができる。一実施例では、ＩＲＳ−ｐ５３ｈのアンタゴニストを被検者に投与して、任意のタイプの炎症、詳細にはある特定の疾患から生じる炎症を予防或いは治療することができる。炎症を伴うそのような疾患は、限定はしないが、ＡＩＤＳ、アジソン病、成人呼吸窮迫症候群、アレルギー、貧血症、喘息、アテローム性硬化症、気管支炎、胆嚢炎、クローン病、潰瘍性大腸炎、アトピー性皮膚炎、皮膚筋炎、糖尿病、肺気腫、結節性紅斑、萎縮性胃炎、糸球体腎炎、痛風、グレーブス病、過好酸球増加症、過敏性腸症候群、紅斑性狼瘡、多発性硬化症、重症筋無力症、心筋或いは心膜炎症、変形性関節炎、骨粗鬆症、膵臓炎、多発性筋炎、リウマチ様関節炎、強皮症、シェーングレーン症候群及び自己免疫性甲状腺炎、さらに癌、血液透析、体外循環の合併症、ウイルス性、細菌性、真菌性、寄生性、原生動物性及び寄生虫様性感染及び外傷を含む。一態様では、ＩＲＳ−ｐ５３ｈに特異な抗体をアンタゴニストとして直接或いは標的又は送達機構として間接的に、ＩＲＳ−ｐ５３ｈを発現する細胞又は組織に医薬品因子を運ぶために用いることができる。別の実施例では、ＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードするポリヌクレオチドの相補配列を発現するベクタが被検者に投与され、限定はしないが、上記炎症を含む任意の種類の炎症を治療或いは予防することができる。他の実施例では、本発明のタンパク質、アンタゴニスト、抗体、アゴニスト、相補配列或いはベクタの任意のものが、他の適当な治療薬剤と組み合わせて投与される場合もある。併用療法において用いるのに適した薬剤の選択は、従来の製薬原理に基づいて当業者により行われることができる。治療薬剤の組み合わせは相互依存的に作用し、上記種々の疾患の治療及び予防に影響を与えるようになる。このアプローチを用いて、少ない投与量の薬剤で治療有効度を達成し、それにより有害な副作用に対する危険性を低減することができる。ＩＲＳ−ｐ５３ｈのアンタゴニスト或いはインヒビタは当業者に広く知られた方法を用いて生成されることができる。詳細には、精製されたＩＲＳ− ｐ５３ｈを用いて抗体を生成するか、或いは医薬品因子のライブラリをスクリーニングし、ＩＲＳ−ｐ５３ｈと特異に結合するものを同定することができる。ＩＲＳ−ｐ５３ｈに対する抗体は当業者に周知の方法を用いて生成することができる。そのような抗体は、限定はしないが、ポリクローナル、モノクローナル、キメラ、一本鎖、Ｆａｂフラグメント及びＦａｂ発現ライブラリにより生成されるフラグメントを含む場合がある。中和性抗体（ダイマ形成を抑制する抗体）が特に治療上の使用に適している。抗体を生成する場合、ヤギ、ウサギ、ラット、マウス、ヒト等を含む種々の宿主を、ＩＲＳ−ｐ５３ｈ或いはその任意のフラグメント又は免疫原特性を有するオリゴペプチドを注射することにより免疫することができる。宿主種に応じて、種々のアジュバントを用いて免疫学的反応を高めることができる。そのようなアジュバントは、限定はしないが、フロイントアジュバント、水酸化アルミニウムのようなミネラルゲル、及びリゾレシチン、プルロニックポリオル、ポリアニオン、ペプチド、油乳剤、キーホールリンペットヘモシアニン及びジニトロフェノールのような表面活性物質を含む。ヒトに用いられるアジュバントの中では、ＢＣＧ（カルメット−ゲラン杆菌）及びコリネバクテリウム‐パルヴムが特に好ましい。ＩＲＳ−ｐ５３ｈに対する抗体を誘発するために用いられるオリゴペプチド、ペプチド、或いはフラグメントは、少なくとも５アミノ酸からなるアミノ酸配列を有し、より好ましくは少なくとも１０アミノ酸からなるアミノ酸配列を有する。それらは自然タンパク質のアミノ酸配列の一部と同一であり、小さな自然発生分子からなる完全なアミノ酸配列を含むことが好ましい。ＩＲＳ−ｐ５３ｈアミノ酸の短い伸展部はキーホールリンペットヘモシアニン及びキメラ分子に対して生成される抗体のような別のタンパク質の伸展部と融合されるようになる。ＩＲＳ−ｐ５３ｈに対するモノクローナル抗体は、培養中の持続細胞株による抗体分子の生成を実現する任意の技術を用いて調製されることができる。これらの技術は、限定はしないが、ハイブリドーマ技術、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術及びＥＢＶ−ハイブリドーマ技術を含む（Koehler等(1975)Nature 256:495-49 7、Kozbor等(1985)J.Immunol Methods 81:31-42、Cote等(1983)Proc Natl Acad Sci 80:2026-2030、Cole,S.P等(1984)Mol.Cell Biol.62:109-120）。さらに「キメラ抗体」を生成するために開発された技術、適当な抗原特異性及び生物活性を有する分子を得るためのマウス抗体遺伝子のヒト抗体遺伝子へのスプライシングを用いることができる（Morrison等(1984)Proc Natl Acad Sci 81: 6851-6855:Neuberger等(1984)Nature 312:604-608;Takeda等(1985)Nature 314:4 52-454）。別法では、一本鎖抗体の生成のために記載される技術が、ＩＲＳ−ｐ５３ｈ特異性一本鎖抗体を生成するように、当分野で知られた方法を用いて適合されてもよい。関連する特異性を有するが、個別のイディオタイプ組成物からなる抗体が、ランダムに組み合わせた免疫グロビンライブラリからの鎖混合により生成されることもできる(Burton D.R.(1991)Proc Natl Acad Sci 88:11120-3)。また抗体は、リンパ球集団においてｉｎｖｉｖｏで生成を誘発することにより、或いは組換え免疫グロブリンライブラリ又は論文(Orlandi等(1989,Proc Nat l Acad Sci 86:3833-3837、Winter G and Milstein C(1991;Nature 349:293-299 )に開示されるような非常に特異性の結合剤のパネルをスクリーニングすることにより生成することもできる。またＩＲＳ−ｐ５３ｈに対する特異な結合部位を含む抗体フラグメントを発生させることもできる。例えば、そのようなフラグメントは、限定はしないが、抗体分子のペプシン消化により生成することができるＦ（ａｂ’）２フラグメント及びＦ（ａｂ’）２フラグメントのジスルフィド架橋を還元することにより生成することができるＦａｂフラグメントを含む。別法では、Ｆａｂ発現ライブラリを構成して、所望の特異性を有するモノクローナルＦａｂフラグメントを迅速にしかも容易に同定できるようにする（Huse WD等(1989)Science 256:127 5-1281）。種々のイムノアッセイを用いて、所望の特異性を有する抗体を同定するためにスクリーニングすることができる。確立された特異性を有するポリクローナル抗体或いはモノクローナル抗体のいずれかを用いる結合タンパク競合測定法或いは免疫放射測定法用の種々のプロトコルが、当分野では周知である。そのようなイムノアッセイは典型的には、ＩＲＳ−ｐ５３ｈとその特異的抗体との間の複合形成体を測定することを含む。２つの非干渉性ＩＲＳ−ｐ５３ｈエピトープに反応するモノクローナル抗体を利用する２部位モノクローナル系イムノアッセイが好ましいが、結合タンパク質競合測定法を用いることもできる(Maddox上記)。本発明の別の実施例では、ＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードするポリヌクレオチド或いはその任意のフラグメント、又は相補配列が治療のために用いられる場合がある。一態様では、ＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードするポリヌクレオチドに対する相補配列が、ｍＲＮＡの転写を遮断することが望ましい状況において用いられる。詳細には、細胞は、ＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードするポリヌクレオチドに相補的な配列と形質転換されることができる。このように相補分子或いはフラグメントを用いて、ＩＲＳ−ｐ５３ｈ活性を調節するか、或いは遺伝子機能の調節を実現することができる。そのような技術は当分野では周知であり、センス或いはアンチセンスオリゴヌクレオチド又はより大きなフラグメントが、ＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードする配列のコード化或いは調節領域に沿った種々の位置から設計されることができる。レトロウイルス、アデノウイルス、ヘルペスウイルス或いはワクシニアウイルスに、また種々の細菌性プラスミドに由来する発現ベクタが、標的となる器官、組織或いは細胞集団にヌクレオチド配列を送達するために用いられる場合がある。当業者には周知の方法を用いて、ＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードする遺伝子のポリヌクレオチドに相補的な核酸配列を発現する組換えベクタを構成することができる。これらの技術は、Sambrook等(上記)及びAusubel等(上記)の両方に記載される。ＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードする遺伝子は、細胞或いは組織を、ＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードする高レベルのポリヌクレオチド或いはそのフラグメントを発現する発現ベクタと形質転換することにより遮断されるようになる。そのような構成体は、翻訳できないセンス或いはアンチセンス配列を細胞内に導入するために用いられる。ＤＮＡ内に統合されない場合であっても、そのようなベクタは、内因性ヌクレアーゼにより無能にされるまで、ＲＮＡ分子を転写し続けることができる。一過性の発現は、非複製ベクタを用いて一ヶ月或いはそれ以上の間持続し、適当な複製エレメントがベクタ系の一部であるならさらに長く持続するようになる。上記のように遺伝子発現の調節は、ＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードする遺伝子の制御、５’或いは調節領域（シグナル配列、プロモータ、エンハンサ及びイントロン）に対する相補配列或いはアンチセンス分子（ＤＮＡ、ＲＮＡ或いはＰＮＡ）を設計することにより得られるようになる。転写開始部位、例えば開始部位からの位置−１０と＋１０との間に由来するオリゴヌクレオチドが好ましい。同様に三重らせん塩基対技術を用いて抑制を実現することができる。二重らせんの能力の抑制がポリメラーゼ、転写因子或いは調節分子を結合するのに十分に開放されるようになるため、三重らせん対は有用である。三重ＤＮＡを用いる最近の治療の進歩は、論文(Gee JE等(1994)In:Huber BE and BI Carr,Molecular and Immunologic A pproaches ,Futura Publishing Co.Mt Kisco NY)に記載されている。また相補配列或いはアンチセンス分子は、転写物がリボソームに結合するのを防ぐことによりｍＲＮＡの翻訳を遮断するように設計することができる。リボザイム、すなわち酵素ＲＮＡ分子が、ＲＮＡの特異な切断を触媒するために用いられる場合がある。リボザイム作用の機構は、相補的標的ＲＮＡへのリボザイム分子の配列特異性ハイブリダイゼーションを伴い、それにヌクレオチド鎖切断分割が伴う。用いられる例は、ＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードする配列のヌクレオチド鎖切断分割に特異にしかも有効に触媒作用することができる遺伝子操作されたハンマヘッドモチーフリボザイムを含む。任意の潜在的なＲＮＡ標的内の特異なリボザイム切断部位は、配列を含むリボザイム切断部位ＧＵＡ、ＧＵＵ及びＧＵＣに対して標的分子を走査することにより最初に同定される。一度同定されれば、切断部位を含む標的遺伝子の領域に対応する１５〜２０の間のリボヌクレオチドの短いＲＮＡ配列は、オリゴヌクレオチドを無能にする副構造的な特徴に対して評価されることができる。また候補標的の適合性も、リボヌクレアーゼ保護アッセイを用いて相補的なオリゴヌクレオチドとのハイブリダイゼーションに対する容易性を検査することにより評価することができる。本発明の相補性リボ核酸分子及びリボザイムは、核酸分子の合成に関して当分野で知られた任意の方法により調製することができる。これらは、固相ホスホラミダイト化学合成のようなオリゴヌクレオチドを化学的に合成するための方法を含む。別法では、ＲＮＡ分子は、ＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードするＤＮＡ配列のｉｎｖｉｔｒｏ及びｉｎｖｉｖｏ転写により生成することができる。そのようなＤＮＡ配列は、Ｔ７或いはＳＰ６のような適当なＲＮＡポリメラーゼプロモータを用いて種々のベクタ内に組み込むことができる。別法では、これらのｃＤＮＡ構成体は、相補ＲＮＡを合成し、細胞株、細胞或いは組織内に構成的に或いは誘導的に導入することができる。ＲＮＡ分子を修飾して細胞内安定性及び半減期を改善することもできる。可能な修飾は、限定はしないが、分子の５’並びにまた３’末端でのフランキング配列の付加、或いは分子のバックボーンにおけるホスホジエステラーゼ連鎖ではなくホスホロチオネート或いは２’Ｏ−メチルの使用を含む。この概念はＰＮＡの生成に固有のものであり、イノシン、キュエオシン及びワイブトシン並びにアセチル−、メチル−、チオ−、及び内因性エンドヌクレアーゼにより容易に識別されないアデニン、シチジン、グアニン、チミン及びウリジンの同様に修飾された形成体のような従来にはない塩基を含有することにより、これら分子の全体に拡張されることができる。細胞或いは組織内にベクタを導入するために多くの方法が利用可能であり、ｉｎｖｉｖｏ、ｉｎｖｉｔｒｏ及びｅｘｖｉｖｏで使用するのに同様に適している。ｅｘｖｉｖｏ治療の場合、ベクタは、患者から取り出された基幹細胞内に導入され、同じ患者に戻される自家移植物に対してクローンのように繁殖することができる。形質移入、リポソーム注射或いはポリカチオンアミノポリマによる送達(Goldman,C.K.等(1997)Nature Biotechnology 15:462-66、参照して本明細書の一部としている)は、当分野で周知の方法を用いて実現することができる。上記治療方法の任意の方法は、例えばイヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ウサギ、サル、そして最も好ましくはヒトのような哺乳類を含む、治療を要する被検者に適用されることができる。本発明のさらに別の実施例は、上記任意の治療効果のために、製薬的に許容可能な担体と共に用いられる医薬品組成物の投与に関連する。そのような医薬品組成物は、ＩＲＳ−ｐ５３ｈ、ＩＲＳ−ｐ５３ｈに対する抗体、擬態、アゴニスト、アンタゴニスト或いはＩＲＳ−ｐ５３ｈのインヒビタからなることができる。組成物は単独で、或いは限定はしないが、食塩水、緩衝食塩水、デキストロース及び水を含む任意の無菌の生体適合性医薬品担体において投与されることがある、安定化化合物のような少なくとも１つの他の薬剤との組み合わせて投与されることができる。これらの組成物は単独で、或いは他の薬剤、薬物或いはホルモンと組み合わせて患者に投与してもよい。本発明に用いられる医薬品組成物は、限定はしないが、経口、静脈内、筋肉内、動脈内、骨髄内、クモ膜下、心室内、経皮、皮下、腹膜内、鼻腔内、腸内、局所、舌下、直腸手段を含む任意の経路により投与されることができる。活性処方成分に加えて、これらの医薬品組成物は、製薬的に用いることができるプレパラートへの活性化合物の処理を容易にする医薬品添加物及び補助剤を含む適当な製薬的に許容可能な担体を含む場合もある。さらに製剤及び投与に関する技術についての詳細は、Remington's Pharmaceutical Sciences(Maack Publis hing Co.Easton PA)の最新版に見出される。経口投与の場合の医薬品組成物は、経口投与に適した投与量の当分野で周知の製薬的に許容可能な担体を用いて調剤することができる。そのような担体により、医薬品組成物は、患者が経口摂取するための錠剤、丸剤、糖衣剤、カプセル剤、液剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー、懸濁剤等として調剤されることができる。経口投与するための医薬品調剤は、活性化合物と固形の医薬品添加物とを混合して、選択的にはその混合物を細かく砕いて、さらに所望に応じて、錠剤或いは糖衣剤コアを得るために適当な補助剤を加えた後、顆粒剤の混合物を処理して得られるようになる。適当な医薬品添加物は、ラクトース、スクロース、マンニトール或いはソルビトールを含む糖、トウモロコシ、小麦、米、じゃがいも或いは他の植物からのデンプン、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース或いはカルボキシルメチルセルロースナトリウムのようなセルロース、及びアラビアゴム及びトラガカントゴムを含むゴム、並びにゼラチン及びコラーゲンのようなタンパク質を含む炭水化物或いはタンパク質賦形剤である。必要なら、架橋結合されたポリビニルピロリドン、寒天、アルギン酸或いはアルギン酸ナトリウムのようなその塩を含む、崩壊剤或いは可溶化剤が加えられてもよい。糖衣剤コアは濃縮糖液のような適当なコーティングと共に用いられ、その濃縮糖液はアラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポルゲル（carbop ol gel）、ポリエチレングリコール並びにまた二酸化チタン、ラッカー溶液及び適当な有機溶剤或いは溶剤混合物を含む場合もある。染料或いは色素が製品識別、或いは活性化合物の量、すなわち投与量を特徴付けるために、錠剤或いは糖衣錠コーティングに加えられる場合もある。経口投与される医薬品製剤は、ゼラチンからなる押込嵌合式のプッシュフィットカプセル剤、並びにゼラチン及びグリコール或いはソルビトールのようなコーティングからなる軟らかく封止されたソフトシールカプセル剤を含む。プッシュフィットカプセル剤は、ラクトース或いはデンプンのような賦形剤或いは結合剤、タルク或いはステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤、さらに選択的に安定化剤と混合された活性処方成分を含むことができる。ソフトカプセル剤では、活性化合物は、脂肪油、パラフィン油、或いは安定化剤を用いる場合、用いない場合があるが液体ポリエチレングリコールのような適当な溶液内に溶解或いは懸濁される場合がある。非経口投与のための医薬品製剤は、活性化合物の水溶液を含む。注射するために、本発明の医薬品組成物は、水溶液内で、好ましくはハンクス溶液、リンガー溶液或いは生理緩衝食塩水のような生体適合性緩衝液内で調製される。水性の注入懸濁液は、カルボキシルメチルセルロースナトリウム、ソルビトール或いはデキストランのように、懸濁液を増粘する物質を含む場合がある。さらに活性化合物の懸濁液は、適当な油性の注射懸濁液として調製される場合もある。適当な親油性溶剤或いは溶媒は、ゴマ油のような脂肪油、或いはオレイン酸エチル又はトリグリセリドのような合成脂肪酸エステル、或いはリポソームを含む。選択に応じて懸濁液は、高濃縮の溶液の調製を可能とするために化合物の可溶性を増加させる適当な安定化剤或いは薬剤を含む場合もある。局所或いは鼻腔投与の場合、特定の障壁を浸透させるのに適した浸透剤が調製において用いられる。そのような浸透剤は当分野で一般に知られている。本発明の医薬品組成物は、当分野において知られた、例えば、従来の混合、溶解、顆粒化、糖衣形成、微粒子化、乳状化、カプセル化、包括（entrapping）或いは凍結乾燥処理による方法で製造される。医薬品組成物は塩類として提供され、限定はしないが、塩酸、硫酸、酢酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、琥珀酸等の多くの酸を用いて形成することができる。塩類は、対応する遊離塩基形の場合より、水性或いはプロトン性溶剤において可溶性を有する傾向がある。他の場合に好ましい製剤は、使用前に緩衝剤と結合されたｐＨ範囲４．５−５．５の１ｍＭ −５０ｍＭヒスチジン、０．１％−２％スクロース、２％−７％マンニトールの任意のもの或いは全てを含む凍結乾燥粉末である。医薬品組成物が調製された後、それらは適当な容器に入れられ、指示された条件の治療のためにラベルを貼付される。ＩＲＳ−ｐ５３ｈの投与の場合、そのようなラベル貼付は、投与の量、頻度並びに方法を含むであろう。本発明に用いるために適した医薬品組成物は、活性処方成分が目的を果たすための有効な量だけ含まれる組成物を含む。有効な量を投与することは、当業者の能力内で果たすことができる。任意の化合物の場合、製薬的に有効な量は、例えば腫瘍性細胞の細胞培養アッセイ、或いは通常マウス、ウサギ、イヌ或いはブタの動物標本のいずれかにおいて最初に見積もられる。また動物標本を用いて、所望の濃縮範囲及び投与の経路が確定される。その後その情報を用いて、ヒトに投与するための有効な量及び経路を確定することができる。製薬的に有効な量は、症状或いは状態を改善する、例えばＩＲＳ−ｐ５３ｈ或いはそのフラグメント、ＩＲＳ−ｐ５３ｈの抗体、アゴニスト、アンタゴニスト、或いはＩＲＳ−ｐ５３ｈのインヒビタの主成分の量である。そのような化合物の治療に対する有効度及び毒性は、細胞培養或いは実験動物における標準的な製薬的手順、例えばＥＤ５０（集団の５０％において製薬的に有効な量）及びＬＤ５０（集団の５０％が致死する量）により確定することができる。治療効果と毒性効果の投与量比が治療指数であり、比ＬＤ５０／ＥＤ５０として表すことができる。大きな治療指数を示す医薬品組成物が望ましい。細胞培養アッセイ及び動物実験から得られるデータは、ヒトに投与するための量の範囲を処方する際に用いられる。そのような化合物の投与量は、毒性が非常に少ないか或いは全くなくＥＤ５０を含む血中濃度の範囲内にあることが好ましい。投与量は、用いられる投与形態、患者の感度及び投与経路によりこの範囲内で変化する。厳密な投与量は、治療を要する患者に関連する要因により医師によって確定されるであろう。量及び投与を調整して、十分なレベルの活性成分を与えたり、或いは所望の効果を維持することもある。考慮される場合がある要因は疾患状態の重症度、被検者の健康状態、患者の年齢、体重及び性別、食事、投与の時間及び頻度、薬物の組み合わせ、反応への敏感度、並びに治療に対する耐性／反応を含む。特定の製剤の半減期及びクリアランス率に応じて、３〜４日毎、毎週或いは２週間毎に一度、長時間作用性の医薬品組成物が投与される場合もある。通常の投与量は０．１μｇ〜１００，０００μｇまで変化し、投与の経路にもよるが、全投与量は約１ｇまでである。詳細な投与量及び送達の方法に関する手引きは文献に与えられており、一般に当分野の開業医が利用できる。当業者は、タンパク質或いはそのインヒビタの場合とは異なる製剤を、ヌクレオチドの場合に用いるであろう。同様にポリヌクレオチド或いはポリペプチドの送達は特定の細胞、状態、位置等に対して特異であろう。診断別の実施例では、ＩＲＳ−ｐ５３ｈを特異に結合する抗体が、ＩＲＳ−ｐ５３ｈの発現により特徴付けられる状態或いは疾患の診断のために、又はＩＲＳ−ｐ５３ｈ、アゴニスト、アンタゴニスト或いはインヒビタを用いて治療中の患者をモニタするための検定法において用いることができる。診断のために有用な抗体は、治療の場合に上記した方法と同様の方法で調製することができる。ＩＲＳ− ｐ５３ｈに対する診断検定法は、抗体及び標識を用いて、ヒト体液或いは細胞又は組織の抽出物においてＩＲＳ−ｐ５３ｈを検出する方法を含む。抗体は、修飾と共に、或いは修飾を用いずに用いられる場合があり、リポータ分子と共有結合で、或いは非共有結合での何れかで結合することにより標識化されることができる。当分野において知られる種々のリポータ分子を用いることができ、そのいくつかが上記される。ＩＲＳ−ｐ５３ｈを測定するためのＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ及びＦＡＣＳを含む種々のプロトコルが当分野において知られており、ＩＲＳ−ｐ５３ｈ発現の変更されたレベル或いは異常なレベルを診断するための方法を提供する。ＩＲＳ−ｐ５３ｈ発現のための正常或いは標準的な値は、正常な哺乳動物被検者、好ましくはヒトから取り出された体液或いは細胞抽出物を複合体形成に適した条件下でＩＲＳ−ｐ５３ｈに対する抗体と結合することにより確立される。標準的な複合体形成量は種々の方法により定量することができるが、光計測による手段が好ましい。被検者において発現したＩＲＳ−ｐ５３ｈの量、制御及び疾患、生検組織からのサンプルが標準値と比較される。標準値と被検者値との間の偏差が疾患を診断するためのパラメータを確立する。本発明の別の実施例では、ＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードするポリヌクレオチドを診断のために用いることができる。用いられるポリヌクレオチドはオリゴヌクレオチド配列、アンチセンスＲＮＡ及びＤＮＡ分子及びＰＮＡを含む。ポリヌクレオチドを用いて、ＩＲＳ−ｐ５３ｈの発現が疾患と相関をなす可能性がある生検組織の遺伝子発現を検出かつ定量することができる。診断検定法を用いて、ＩＲＳ−ｐ５３ｈの存否及び過剰発現を識別することができ、さらに治療処置中のＩＲＳ−ｐ５３ｈレベルの調節をモニタすることができる。一態様では、ＩＲＳ−ｐ５３ｈ或いは密接に関連する分子をコードするゲノム配列を含むポリヌクレオチド配列を検出することができるＰＣＲプローブを用いるハイブリダイゼーションにより、ＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードする核酸配列を同定することができる。非常に特異な領域、例えば５’調節領域内の１０個の特有のヌクレオチド、或いは特異性の低い領域、例えば特に３’コード化領域の何れかからなるプローブの特異性及びそのハイブリダイゼーション或いは増幅の厳密性（最大、高、中間或いは低）が、そのプローブがＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードする自然発生配列のみを同定するか、或いは関連する配列を同定するかを確定するであろう。またプローブは関連する配列の検出に用いることもでき、ＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードする配列の任意のものからのヌクレオチドの少なくとも５０％を含むことが好ましい。本発明のハイブリダイゼーションプローブはＤＮＡ或いはＲＮＡであり、配列番号：２のヌクレオチド配列に、或いはプロモータ、エンハンサエレメント及び自然発生ＩＲＳ−ｐ５３ｈのイントロンを含むゲノム配列に由来する。ＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードするＤＮＡのための特異なハイブリダイゼーションプローブを生成するための手段は、ＩＲＳ−ｐ５３ｈ或いはＩＲＳ−ｐ５３ｈ誘導体をコードする核酸配列を、ｍＲＮＡプローブの生成のためにベクタにクローニングする過程を含む。そのようなベクタは当分野では周知で、市販されており、適当なＲＮＡポリメラーゼ及び適当な標識化ヌクレオチドを加えることによりｉｎｖｉｔｒｏでＲＮＡプローブを合成するために用いることができる。ハイブリダイゼーションプローブは、種々のリポータ群、例えば３２Ｐ或いは３５Ｓのような放射性核種、又はアビジン／ビオチン結合系等を介してプローブに結合されるアルカリ性フォスファターゼのような酵素標識により標識されることができる。ＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードするポリヌクレオチド配列はＩＲＳ−ｐ５３ｈの発現に関連する疾患の診断のために用いることができる。そのような疾患の例は、タイプ２（非インスリン依存性）糖尿病、高血糖症、筋緊張性筋ジストロフィー、黒色表皮腫、網膜症、神経障害、アテローム性冠状及び末梢動脈疾患並びに末梢及び自立神経障害、ＡＩＤＳ、アジソン病、成人呼吸窮迫症候群、アレルギー、貧血症、喘息、アテローム性硬化症、気管支炎、胆嚢炎、クローン病、潰瘍性大腸炎、アトピー性皮膚炎、皮膚筋炎、糖尿病、肺気腫、結節性紅斑、萎縮性胃炎、糸球体腎炎、痛風、グレーブス病、過好酸球増加症、過敏性腸症候群、紅斑性狼瘡、多発性硬化症、重症筋無力症、心筋或いは心膜炎症、変形性関節炎、骨粗鬆症、膵臓炎、多発性筋炎、リウマチ様関節炎、強皮症、シェーングレーン症候群及び自己免疫性甲状腺炎、さらに癌、血液透析、体外循環の合併症、ウイルス性、細菌性、真菌性、寄生性、原生動物性及び寄生虫様性感染及び外傷、腺癌、白血病、リンパ腫、黒色腫、骨髄腫、肉腫及び奇形腫、並びに詳細には副腎、膀胱、骨、骨髄、脳、***、子宮頚、胆嚢、神経節、消化管、心臓、腎臓、肝臓、肺、筋肉、卵巣、膵臓、副甲状腺、陰茎、前立腺、唾液腺、皮膚、脾臓、精巣、胸腺、甲状腺及び子宮の癌を含む。ＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードするポリヌクレオチド配列は、サザン分析或いはノーザン分析、ドットブロット、又は他の膜系技術において、又はＰＣＲ技術において、又は変更されたＩＲＳ−ｐ５３ｈ発現を検出するために患者生検からの体液或いは組織を利用するディップスティック、ｐｉｎ、ＥＬＩＳＡ検定法或いはマイクロアレイにおいて用いることができる。そのような定性的或いは定量的方法は当分野において周知である。特定の態様では、ＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードするヌクレオチド配列は、種々の癌、特に上記したような癌の活性化或いは誘発を検出する検定法において有用である。ＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードするヌクレオチド配列は標準的な方法において標識され、ハイブリダイゼーション複合体の形成に適した条件下で患者からの体液或いは組織サンプルに加えられることができる。適当な時間インキュベートした後、サンプルは洗浄され、そのシグナルが定量され、標準値と比較される。生検された或いは抽出されたサンプルのシグナルの量が比較制御サンプルのシグナルの量から著しく変更されている場合には、そのヌクレオチド配列はサンプル内のヌクレオチド配列とハイブリダイズされており、サンプル内のＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードするヌクレオチド配列の変更レベルの存在が関連する疾患の存在を示す。またそのような検定法を用いて、動物実験、臨床試験或いは個々の患者の治療をモニタする際に特定の治療措置の有効度を評価することができる。ＩＲＳ−ｐ５３ｈの発現に関連する疾患を診断する基準を与えるために、発現に対する正常或いは標準値が確立される。これは、動物或いはヒトいずれかの正常な被検者から取り出された体液或いは細胞抽出物を、当分野で周知の複合体形成に適した条件下でＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードする配列或いはそのフラグメントと結合することにより与えられる。標準的なハイブリダイゼーションは、正常な被検者から得られた値を、既知の量の実質的に精製されたポリヌクレオチドが用いられる実験から得られた値と比較することにより定量することができる。正常サンプルから得られた標準値が、疾患の症状がある被検者のサンプルから得られた値と比較される。標準値と被検者値との間の偏差を用いて、疾患状態の存在を立証する。一度疾患が確定され、治療プロトコルが開始されれば、その患者の発現のレベルが正常な患者において観測されるレベルに接近し始めるか否かを評価するために、ハイブリダイゼーション検定法が規則的に繰り返される。継続的な検定法から得られる結果を用いて、数日から数ヶ月の期間に渡る治療の有効度を示すことができる。癌の場合、個々の患者からの生検組織内の異常な量の転写物の存在が、疾患の発生に対する素因を示すか、或いは実際の臨床的な症状が発生する前に疾患を検出するための手段を提供する。この種のより決定的な診断により、専門医は、予防措置或いは初期段階での積極的な治療を行うことができ、それにより癌の発生を予防したり、或いは進行するのを防ぐこともできる。ＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードする配列から設計されるオリゴヌクレオチドに対するさらなる診断的な使用は、ＰＣＲの使用を含む場合がある。そのようなオリゴマは化学的に合成されるか、酵素的に生成されるか、或いはｉｎｖｉｔｒｏで生成されてもよい。オリゴマは、２つのヌクレオチド配列、すなわち１つがセンス方向（５’−＞３’）を有し、もう１つがアンチセンス方向（３’＜−５’）を有するヌクレオチド配列からなり、特異な遺伝子或いは条件の同定のために最適化された条件下で用いられることが好ましい。同一の２つのオリゴマ、入れ子状の組のオリゴマ、或いはオリゴマの縮重プールであっても、密接に関連するＤＮＡ或いはＲＮＡ配列を検出並びにまた定量するために低い厳密性条件下で用いることができる。またＩＲＳ−ｐ５３ｈの発現を定量するために用いることができる方法は、ヌクレオチドの放射標識化或いはビオチン標識化、或いは制御核酸の相互増幅並びに実験結果が書き込まれる標準曲線を含む（Melby,P.C.等(1993)J.Immunol.Meth ods,159:235-244;Duplaa,C.等(1993)Anal.Blochem.229-236）。多数サンプルを定量する速度は、ＥＬＩＳＡフォーマットの検定法を実行することにより加速することができ、その際対象のオリゴマは種々の希釈法において表され、スペクトル光計測反応或いは色計測反応が迅速な定量化をもたらすようになる。さらに別の実施例では、ここで記載されたポリヌクレオチド配列の任意のものに由来するオリゴヌクレオチドをマイクロアレイの標的として用いることもできる。マイクロアレイを用いて、多数の遺伝子の発現レベルを同時にモニタし（転写画像を生成するために）、遺伝子変異配列、突然変異及び多形性を同定することができる。この情報は、遺伝子機能を確定し、疾患の遺伝的基礎を理解し、かつ疾患を診断する際に有用であり、また治療薬剤の活性を発生及びモニタする際に有用であろう。一実施例では、全て参照してその全体を本明細書の一部としているＰＣＴ出願ＷＯ９５／１１９９５(chee等)、Lockhart,D.J.等(1996;Nat.Biotech.14:1675-1 680)及びSchena,M等(1996;Proc.Natl.Acad.Sci.93:10614-10619)に記載される方法に従ってマイクロアレイが準備及び使用される。マイクロアレイは、多数の固有の一本鎖核酸配列、通常固形支持体に固定されるｃＤＮＡの合成アンチセンスオリゴヌクレオチド或いはフラグメントのいずれがからなることが好ましい。マイクロアレイは、既知の５’或いは３’配列に渡る連続的なオリゴヌクレオチドを含むか、或いは完全長配列又はその配列の長さに沿った特定の領域から選択される固有のオリゴヌクレオチドを含む場合がある。ある状況では、マイクロアレイにおいてオリゴヌクレオチドの対を用いることが適切である場合がある。その「対」は、好ましくは中央に位置する１つのヌクレオチドを除いて同一である２つの鎖からなるであろう。オリゴヌクレオチド対の数は、所与の配列に対して１０−５００の範囲にある。マイクロアレイに用いられるポリヌクレオチドは、少なくともその配列のフラグメントが既知である対象の遺伝子に特異であるか、或いは特定の細胞タイプ、発生的或いは疾患状態に共通の１つ或いはそれ以上の未同定のｃＤＮＡに特異であるオリゴヌクレオチドであることができる。あるマイクロアレイ用に既知の配列に対するオリゴヌクレオチドを生成するために、対象の遺伝子が、ヌクレオチド配列の５’或いはより好ましくは３’末端で開始するコンピュータアルゴリズムを用いて試験される。そのアルゴリズムは、その遺伝子に対して固有で、ハイブリダイゼーションに適した範囲内にＧＣ含有物を有し、ハイブリダイゼーションに干渉することがある予測される副構造体のない所定の長さのオリゴマを同定する。そのオリゴマは、光配向化学処理（li ght-directed chemical process）を用いて支持体上の指定された領域で合成される。支持体は紙、ナイロン或いは他の種類の膜、フィルタ、チップ、スライドガラス或いは任意の他の適切な固定支持体である。別の態様ではオリゴマは、参照してその全体を本明細書の一部としているＰＣＴ出願ＷＯ９５／２５１１１６（Baldeschweiler等）に記載されるような、化学的結合手順及びインクジェット吐着装置を用いることにより支持体の表面上で合成されることができる。別の態様では、ドット（或いはスロット）ブロットに類似の「グリッド（gridded）」アレイを用いて、真空系、熱、紫外線（ＵＶ）、機械的或いは化学的結合手順を利用して、支持体の表面にｃＤＮＡフラグメント或いはオリゴヌクレオチドを配列及び結合することができる。アレイは手動で或いは市販の開発された（スロットブロット或いはドットブロット装置）機器及び装置（ロボット式機器を含む）を用いて生成され、８ドット、２４ドット、９６ドット、３８４ドット、１５３６ドット或いは６１４４ドット、又は市販の機器を有効に使用するのに適した任意の他の数量のグリッドを含む。マイクロアレイを用いてサンプルの分析を行うために、生検サンプルからのＲＮＡ或いはＤＮＡがハイブリダイゼーションプローブに加工される。ｍＲＮＡが単離され、ｃＤＮＡがアンチセンスＲＮＡ（ａＲＮＡ）を形成するためのテンプレートとして生成及び使用される。ａＲＮＡは、蛍光性ヌクレオチドの存在下で増幅され、標識されたプローブはマイクロアレイでインキュベートされ、プローブ配列がマイクロアレイの相補的オリゴヌクレオチドにハイブリダイズするようにする。インキュベーションの条件は、ハイブリダイゼーションが正確な相補的一致或いは種々の低い相補性の度合で生じるように調整される。ハイブリダイズされなかったプローブを除去した後、スキャナを用いて蛍光のレベル及びパターンを確定する。スキャナで読取られた画像は検査され、マイクロアレイ上の各オリゴヌクレオチド配列の相補性の度合及び相対的な存在比を確定する。生検サンプルは任意の体液（例えば血液、尿、唾液、粘液、胃液等）、培養された細胞、バイオプシ或いは他の組織標本から得ることができる。同時に、個々の配列の全てに対して、検出系を用いて、ハイブリダイゼーションの存否或いは量を測定することができる。このデータは、サンプル内の配列、突然変異、変異配列或いは多形性についての大規模な相関調査の場合に用いることができる。本発明の別の実施例では、ＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードする核酸配列を用いて、自然発生ゲノム配列をマッピングするために有用なハイブリダイゼーションプローブを生成することもできる。その配列は特定の染色体に或いは染色体の特異領域に、又はPrice CM(1993;Blood Rev 7:127-34)及びTrask BJ(1991;Trends Gene t 7:149-154)に記載されるような、例えばヒト人工染色体（ＨＡＣ）、酵母菌人工染色体（ＹＡＣ）、細菌性人工染色体（ＢＡＣ）、細菌性Ｐ１構造体或いは単一染色体ｃＤＮＡライブラリのような人工染色体構造に遺伝子座が決定されるようになる。蛍光ｉｎｓｉｔｕハイブリダイゼーション（Verma等(1988)Human Chromosom es :A Manual of Basic Techniques，Pergamon Press,New York NYに記載されるＦＩＳＨ）は、他の物理的な染色体マッピング技術及び遺伝マップデータと相関をなす。遺伝子マップデータの例は種々の科学雑誌或いはOnline Mendelian Inheritance in Man（ＯＭＩＭ）に見出すことができる。物理的染色体マップ上のＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードする遺伝子の位置と特定の疾患或いは特定の疾患に対する素因との間の相関は、その遺伝的疾患に関連するＤＮＡの領域の境界を定めることを可能にする。本発明のヌクレオチド配列を用いて、正常者と保菌者、すなわち感染した個体との間の遺伝子配列の差を検出することができる。染色体標本のｉｎｓｉｔｕハイブリダイゼーション及び確立された染色体マーカを用いる連鎖分析のような物理的マッピング技術が、遺伝子マップを拡張するために用いることができる。マウスのような別の哺乳動物種の染色体上の遺伝子の配置が、特定のヒト染色体の数或いは腕が未知であっても、関連するマーカを明らかにできる場合もある。新規の配列は、物理的なマッピングにより染色体腕或いはその一部に割り当てることができる。これは、位置クローニング或いは他の遺伝子発見技術を用いる疾患遺伝子を検索する研究者に貴重な情報を与える。一度疾患或いは症候群が、特定のゲノム領域、例えばＡＴから１１ｑ２２−２３まで(Gatti等(1998)Nature 336:577-580)への遺伝子連鎖により自然のまま局在されていれば、その領域に対する任意の配列マッピングが、さらなる研究のための関連或いは調節遺伝子を表すことができる。また本発明のヌクレオチド配列を用いて、正常個体と保菌者、すなわち感染個体との間における転座、逆位等により染色***置内の差を検出することができる。本発明の別の実施例では、ＩＲＳ−ｐ５３ｈ、その触媒作用或いは免疫原性フラグメント又はオリゴペプチドを用いて、種々の薬物スクリーニング技術の任意のものにおいて化合物のライブラリをスクリーニングすることができる。そのようなスクリーニングにおいて用いられるフラグメントは溶液中に遊離するか、固形支持体に付着するか、細胞表面上に支持されるか、或いは細胞内に配置されてもよい。ＩＲＳ−ｐ５３ｈと被試験薬剤との間に形成される結合複合体が測定される場合もある。薬物スクリーニングに用いる場合がある別の技術は、ＰＣＴ出願ＷＯ８４／０３５６４に記載されるような、対象のタンパク質への適当な結合親和性を有する化合物の高スループットスクリーニングを実現する。この方法では、ＩＲＳ−ｐ５３ｈに適用されるような、多数の異なる小さな検査化合物がプラスチックピン或いはある他の表面のような固体支持体上で合成される。検査化合物はＩＲＳ− ｐ５３ｈ或いはそのフラグメントと反応し、洗浄される。その後結合されたＩＲＳ−ｐ５３ｈが当分野で周知の方法により検出される。また精製されたＩＲＳ− ｐ５３ｈは、上記の薬物スクリーニング技術において用いるためのプレート上に直接コーティングされることもできる。別法では、非中和性抗体を用いて、ペプチドを捕捉し、それを固体支持体上に固定化することもできる。別の実施例では、ＩＲＳ−ｐ５３ｈを特異に結合することができる中和性抗体がＩＲＳ−ｐ５３ｈを結合するための検査化合物と競合する、競合薬物スクリーニングアッセイを使用する。この方法では、抗体を用いて、ＩＲＳ−ｐ５３ｈと１つ或いはそれ以上の抗原決定基を共有するあらゆるペプチドの存在を検出することができる。さらに別の実施例では、その新規の技術が、限定はしないがトリプレット遺伝子コード及び特異な塩基対相互作用のような特性を含む現在知られているヌクレオチド配列の特性に依存する場合には、ＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードするヌクレオチド配列を、将来開発されるあらゆる分子生物学技術において用いることができる。以下の例は、本発明を例示するために与えるものであり、本発明を制限するものではない。実施例ＩＢＲＳＴＮＯＴ０４ｃＤＮＡライブラリ構成ＢＲＳＴＮＯＴ０４ｃＤＮＡライブラリは、浸潤３段階（４段階中）、核２段階（３段階中）乳管癌の診断後に、一側性拡張の簡単な***切除中の６２歳女性から切除された微視的に正常な***組織から構成された。手術周辺部は腫瘍に対して陰性を示した。またin-situ癌の０．４ｃｍ病巣が***の下側４分円において同定された。手術前に、その患者は良性高血圧症、脳欠陥障害、動脈硬化症、高脂血症及び血尿と診断された。患者家族病歴は兄弟において肝臓癌があった。凍結組織はBrinkmann Homogenizer Polytron PT-3000(Brinkmann Instruments ，Westbury NJ)を用いてグアニジニウムイソチオシアネート溶液中に均質化かつ溶解された。溶解生成物は５．７ＭＣｓＣｌクッション上で、周囲温度において毎分２５，０００回転で１８時間Beckman L8-70M Ultracentrifuge(Beckman I nstruments)においてBeckman SW28ロータを用いて遠心分離された。ＲＮＡは、酸性フェノールｐＨ４．０を用いて抽出され、０．３Ｍ酢酸ナトリウム及び２．５倍量のエタノールを用いて沈殿され、リボヌクレアーゼ遊離水内に再懸濁され、３７℃でデオキシリボヌクレアーゼ処理された。ＲＮＡ抽出及び沈殿は上記のように繰り返された。その後ＲＮＡはQiagen Oligotex kit(QIAGEN Inc.;Chatsw orth,CA)を用いて単離され、ｃＤＮＡライブラリを構成するために用いられた。ｍＲＮＡは、Super Script Plasmid System(Cat.No.18248-013:Gibco/BRL)の推奨プロトコルに従って処理された。ＢＲＳＴＮＯＴ０４ｃＤＮＡはSepharose CL4B column(Cat.No.275105-01 Pharmacia Upjohn)上で分画され、４００ｂｐを超えるそのｃＤＮＡがｐＳｐｏｒｔＩに結合された。その後プラスミドｐＳｐｏｒｔＩはDH5a（登録商標）コンピテント細胞(Cat.No. 18258-012 Gibco/BRL)に形質転換された。ＩＩｃＤＮＡクローンの単離及び配列決定プラスミドＤＮＡは細胞から遊離され、REAL Prep 96 Plasmid Kit(Catalog N o.26173,QIAGEN)を用いて精製された。推奨プロトコルを用いたが以下の点を変更した。１）細菌は、２５ｍｇ／Ｌのカルベニシリン及び０．４％のグリセロールで１ｍｌの無菌のTerrific Broth(Catalog No.22711.Gibco/BRL)において培養された。２）接種後、培養株は１９時間インキュベートされ、インキュベーション終了時に細胞は０．３ｍｌの溶解緩衝液で溶解された。３）イソプロパノール沈殿に続いて、プラスミドＤＮＡペレットが０．１ｍｌの蒸留水に再懸濁された。プロトコルの最後のステップを終了した後、サンプルは４℃で保管するために９６ウエルブロックに移された。ｃＤＮＡは、Peltier Thermal Cyclers(PTC200 from MJ Research,Watertown MA)及びApplied Biosystems 377 DNA Sequencing Systemsと共にHamilton Micro Lab 2200(Hamilton,Reno NV)を用いて、Sanger F等(1975;J Mol Biol 94:441f) の方法により配列決定された。ＩＩＩｃＤＮＡクローン及び推定されたタンパク質の相同性検索配列表のヌクレオチド配列及びそれに由来するアミノ酸配列は、GenBank、Swi ssProt,BLOCKS及びPima IIのようなデータベースへの問合せ配列として用いられた。そのデータベースは以前に同定され、注釈を付けた配列を含んでおり、ＢＬＡＳＴを用いて相同性（類似性）の領域の検索が行われた。ＢＬＡＳＴはBasic Local Alignment Search Tool（Altschul. S.F.(1993)J.Mol.Evol.36:290-300,Altschul等(1990)J.Mol.Biol.215:403-410）を表している。ＢＬＡＳＴはヌクレオチド及びアミノ酸配列の両方のアライメントを生成し、配列類似性を確定した。そのアライメントの局部的な性質のため、ＢＬＡＳＴは厳密な一致を判定する際に、或いは原核（細菌）又は真核（動物、真菌或いは植物）起源からなる相同体を同定する際に特に有用であった。ここで他のアルゴリズム、例えば参照して本明細書の一部としているSmith T.等(1992,Protein Engi neering 5:35-51)に記載されるアルゴリズムが、主要配列パターン及び副次的な構造間隙の問題を取り扱う際に用いられる。本出願において開示される配列は少なくとも４９ヌクレオチドの長さを有し、不要な塩基は１２％未満である（この場合Ａ、Ｃ、Ｇ或いはＴではなくＮが記録される）。ＢＬＡＳＴアプローチはKarlin.S.及びS.F.Atschul(1993;Proc.Nat.Acad.Sci. 90:5873-7)に詳述され、参照して本明細書において用いられており、問合せ配列とデータベース配列との間の一致を検索し、見い出されたあらゆる一致の統計的有意性を評価し、ユーザにより選択された有意な閾値を満足する一致のみを報告した。この応用例では、閾値はヌクレオチドの場合１０^-25、ペプチドの場合１０^-14に設定された。インサイト社ヌクレオチド配列が霊長類（pri）、齧歯類（rod）及び哺乳類配列（mam）の場合にGenBankデータベースに対して検索され、その後同じクローンから推定されたアミノ酸配列が、GenBank機能タンパク質データベース、哺乳動物（mamp）、脊椎動物（vrtp）及び真核生物（eukp）に対して相同体を検索された。ある特定の一致に対して関連したデータベースがGixxx±pとして報告された (ここでxxxはpri、 rod等であり、存在する場合にはｐはペプチドである)。ＩＶノーザン分析ノーザン分析は、遺伝子の転写物の存在を検出するために用いられる実験用技術であり、特定の細胞種或いは組織からのＲＮＡが結合されている膜への標識されたヌクレオチド配列のハイブリダイゼーションを伴う（Sambrook等、上記）。ＢＬＡＳＴ（Altschul SF 1993及び1990上記）を用いる類似のコンピュータ技術を用いて、ＧｅｎＢａｎｋ或いはLIFESEQ^TM database（インサイト社）のようなヌクレオチドデータベース内の同一或いは関連する分子を検索する。この分析は多くの膜系ハイブリダイゼーションより非常に速度が速い。さらにコンピュータ検索の感度を変更して、任意の特定の一致が、厳密な一致或いは相同的一致の何れとして分類されるかを確定することができる。検索の基準は、（％配列同一性×％最大ＢＬＡＳＴスコア）／１００として定義される積スコアである。積スコアは、２つの配列間の類似度及び配列一致の長さの両方を考慮する。例えば、積スコア４０の場合、その一致は１−２％誤差の範囲内で正確であり、７０ではその一致は正確であろう。相同性分子は通常、１５−４０間の積スコアを示す分子を選択することにより同定されるが、それより低いスコアでも関連した分子が同定される場合もある。ノーザン分析の結果は、ＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードする転写物が発生するライブラリのリストとして報告される。また存在量及び存在比も報告される。存在量は、特定の転写物がｃＤＮＡライブラリ内に現れる回数を直接表し、存在率は、存在量をｃＤＮＡライブラリ内で試験された配列の全数で割った値である。ＶＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードするポリヌクレオチドの伸展インサイト社クローン９１８１５８の核酸配列を用いて、部分ヌクレオチド配列を完全長まで伸展するためにオリゴヌクレオチドプライマを設計した。１つのプライマを合成してアンチセンス方向の伸展を開始し、他のプライマを合成してセンス方向の配列を伸展した。プライマを用いて、対象の領域に対する新規で未知のヌクレオチド配列を含むアンプリコンを「外側に」発生させる既知の配列の伸展を容易にした。初期プライマは、OLIGO4.06(National Biosciences)或いは他の適当なプログラムを用いてｃＤＮＡから設計され、長さが約２２−３０のヌクレオチドになり、５０％以上のＧＣ含有物を有し、約６８−７２℃の温度で標的配列にアニーリングするようにした。ヘアピン構造及びプライマ−プライマ２量体化をもたらすことになるヌクレオチドの伸展は避けられた。選択されたヒトｃＤＮＡライブラリ（Gibco/BRL）を用いて配列を伸展した。２つ以上の伸展が必要或いは望まれる場合には、既知領域をさらに伸展させるために、追加のプライマの組が設計される。 XL-PCR kit(Perkin Elmer)の取扱説明書に従って、酵素及び反応混合物を完全に混合することにより、高い忠実度の増幅が得られた。各プライマを４０ｐｍｏｌかつキット全ての他の成分を推奨された濃度で開始する場合、ＰＣＲがPeltie r Thermal Cycler(PTC200;MJ Research,Watertown MA)及び以下のパラメータを用いて実行された。ステップ１１分間９４℃（初期変性）ステップ２１分間６５℃ ステップ３６分間６８℃ ステップ４１５秒間９４℃ ステップ５１分間６５℃ ステップ６７分間６８℃ ステップ７さらに１５サイクル間ステップ４−６の繰返しステップ８１５秒間９４℃ ステップ９１分間６５℃ ステップ１０７分１５秒間６８℃ ステップ１１１２サイクル間ステップ８−１０の繰返しステップ１２８分間７２℃ ステップ１３４℃（保持）反応混合物の５−１０μｌ部分標本が低濃度（約０．６−０．８％）アガロースミニゲル上で電気泳動法により分析され、どの反応物が配列の伸展に成功したかを判定した。最も大きな生成物を含むと考えられる帯がゲルから切除され、QI A Quick^TM(QIAGEN Inc.Chatsworth,CA)を用いて精製され、再結合及びクローニングを容易にするためにクレノウ酵素を用いて、オーバーハングから切除された。エタノール沈殿後、その生成物は１３μｌの連結緩衝液中に再溶解され、１μ ｌＴ４−ＤＮＡリガーゼ（１５ユニット）及び１μｌＴ４ポリヌクレオチドキナーゼが加えられ、その混合物は２〜３時間室温で、或いは１６℃で一晩の間インキュベートされた。コンピテントＥ．ｃｏｌｉ細胞（４０μｌの適当な媒質内にある）が３μｌの連結混合物と形質転換され、８０μｌのＳＯＣ媒質内で培養された（Sambrook J等、上記）。３７℃で１時間インキュベートした後、Ｅ．ｃｏｌｉ混合物が、２ｘＣａｒｂを含むLuria Bertani(LB)-agar（Sambrook J等、上記）上に蒔かれた。翌日、いくつかのコロニーが各プレートから無作為に選び取られ、適当な市販の無菌９６ウエル微量定量プレートの個々のウエル内に置かれた１５０μｌの液体ＬＢ／２ｘＣａｒｂ媒質内で培養された。その翌日、各５μｌの一晩おいた培養株が有菌の９６ウエルプレートに移され、水で１：１０に希釈された後、５μｌの各サンプルがＰＣＲアレイ内に移された。ＰＣＲ増幅の場合、４ユニットのｒＴｔｈＤＮＡポリメラーゼ、ベクタプライマ及び伸展反応のために用いられる１つ或いは両方の遺伝子特異性プライマを含む１８μｌの濃縮ＰＣＲ反応混合物（３．３ｘ）が各ウエルに加えられた。増幅は以下の条件で実行された。ステップ１６０秒間９４℃ ステップ２２０秒間９４℃ ステップ３３０秒間５５℃ ステップ４９０秒間７２℃ ステップ５さらに２９サイクルの間ステップ２−４の繰返しステップ６１８０秒間７２℃ ステップ７４℃（保持）ＰＣＲ反応物の部分標本が、分子重量マーカと共にアガロースゲル上で処理された。ＰＣＲ生成物の大きさが、元の部分ｃＤＮＡと比較され、適当なクローンが選択され、プラスミドに結合され、そして配列決定された。同様にして、配列番号：２のヌクレオチド配列を用いて、上記手順、５’伸展用に設計されたオリゴヌクレオチド及び適当なゲノムライブラリを用いて５’調節配列を得る。ＶＩ個々のハイブリダイゼーションプローブの標識化及び使用配列番号：２に由来するハイブリダイゼーションプローブが、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ或いはｍＲＮＡをスクリーニングするために用いられる。約２０塩基対からなるオリゴヌクレオチドの標識化が特に記載されるが、より大きなヌクレオチドフラグメントにも概ね同じ手順が用いられる。オリゴヌクレオチドは、OLIGO4.06(National Biosciences)のような最新のソフトウエアを用いて設計され、５０ｐｍｏｌの各オリゴマと２５０μＣｉの[γ-³²Ｐ ]アデノシン三リン酸(Amersham)及びＴ４ポリヌクレオチドキナーゼ(DuPont NEN ，Boston MA)とを組み合わせることにより標識される。標識されたオリゴヌクレオチドは、Sephadex G-25 super fine resin column(Pharmacia&Upjohn)を用いて実質的に精製される。センス及びアンチセンスオリゴヌクレオチドそれぞれの毎分１０⁷カウント含む部分標本は、エンドヌクレアーゼ(Ase I，Bgl II,Eco RI ,Pst I,Xba 1.或いはPvu II、DuPont NEN(登録商標))の１つで消化されるヒトゲノムＤＮＡの典型的な膜系ハイブリダイゼーション分析において用いられる。各消化物からのＤＮＡは、０．７％アガロースゲルに上で分画され、ナイロン膜(Nytran Plus,Schleicher & Schuell,Durham NH)に転写される。ハイブリダイゼーションは４０℃で１６時間実行される。非特異性シグナルを除去するために、ブロットは、０．１×クエン酸ナトリウム食塩水及び０．５％ドデシル硫酸ナトリウムまでの徐々に厳密性を増す条件下で室温にて連続して洗浄される。XOMA T AR^TM film(Kodak,Rochester NY)が数時間Phosphoimager cassette(Molecular Dynamics,Synnyvale CA)内でブロットに露光された後、ハイブリダイゼーションパターンが視覚的に比較される。ＶＩＩマイクロアレイマイクロアレイ用のオリゴヌクレオチドを生成するために、上記ヌクレオチド配列が、そのヌクレオチド配列の３’末端で開始するコンピュータアルゴリズムを用いて検査される。そのアルゴリズムは、その遺伝子に固有で、ハイブリダイゼーションに適した範囲内のＧＣ含有物を有し、ハイブリダイゼーションに干渉すると考えられる予測された副構造体がない所定の長さのオリゴマを同定する。そのアルゴリズムは、長さが２０ヌクレオチドからなる２０の特異な配列のオリゴヌクレオチド（２０量体）を同定する。各配列の中央の１つのヌクレオチドが変化している、一致したオリゴヌクレオチドの組みが形成される。このプロセスはマイクロアレイ内の各遺伝子に対して繰り返され、２０個の２０量体からなる二重の組みが、光配向化学処理（Chee,M.等、PCT/WO9 5/11995、参照して本明細書の一部としている）を用いてシリコンチップの表面上で合成及び配列される。別法では、化学的結合手順及びインクジェット吐着装置を用いることにより支持体の表面上でオリゴマを合成する（Baldeschweiler等、PCT出願WO95/251116、参照してその全体を本明細書の一部としている）。別の方法では、ドット（或いはスロット）ブロットに類似の「グリッド（gridded）」アレイを用いて、真空系、熱、紫外線（ＵＶ）、機械的或いは化学的結合手順を利用して、支持体の表面にｃＤＮＡフラグメント或いはオリゴヌクレオチドを配列及び結合することができる。アレイは手動で或いは市販の機器及び装置を用いて生成され、８ドット、２４ドット、９６ドット、３８４ドット、１５３６ドット或いは６１４４ドットのグリッドを含む。ハイブリダイゼーション後、ハイブリダイズされなかったプローブを除去するためにマイクロアレイは洗浄され、スキャナを用いて蛍光のレベル及びパターンを確定する。スキャナで読取られた画像は検査され、マイクロアレイ上の各オリゴヌクレオチド配列の相補性の度合及び相対的な存在量を確定する。ＶＩＩＩ相補ポリヌクレオチドＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードする配列に相補的な配列或いはその任意の一部用いて、自然発生ＩＲＳ−ｐ５３ｈの発現を減少或いは抑制する。約１５−約３０塩基対を含むオリゴヌクレオチドの使用が特に記載されるが、より小さな或いはより大きなｃＤＮＡフラグメントにも概ね同じ方法が用いられる。適当なオリゴヌクレオチドはOligo4.06ソフトウエア及びＩＲＳ−ｐ５３ｈ、配列番号：１のコード配列を用いて設計される。転写を抑制するために、相補オリゴヌクレオチドは最も固有の５’配列から設計され、コード配列へのプロモータ結合を防ぐために用いられる。翻訳を抑制するために、相補オリゴヌクレオチドは、ＩＲＳ−ｐ５３ｈをコードする転写物へのリボソーム結合を防ぐように設計される。ＩＸＩＲＳ−ｐ５３ｈの発現ＩＲＳ−ｐ５３ｈの発現は、ｃＤＮＡを適当なベクタにサブクローニングし、ベクタを宿主細胞に形質転換することにより達成される。この場合には、クローニングベクタを用いて、Ｅ．ｃｏｌｉ内でＩＲＳ−ｐ５３ｈを発現する。クローニング部位の上流では、このベクタはβ−ガラクトシダーゼのためのプロモータを含み、それにアミノ末端Ｍｅｔ及びそれに後続するβ−ガラクトシダーゼの７残基を含む配列が続く。これらの８残基の直後は、転写のために有用なバクテリオファージプロモータ及びいくつかの特有の制限部位を含むリンカーである。単離され、標準的な方法を用いてＩＰＴＧと形質転換された細菌株の誘発は、 β−ガラクトシダーゼの最初の８残基、リンカーの約５〜１５残基及び完全長タンパク質からなる融合タンパク質を生成する。シグナル残基は、活性に対する後続の検定法において直接用いることができるバクテリア成長媒質内へのＩＲＳ− ｐ５３ｈの分泌を促す。ＸＩＲＳ−ｐ５３ｈ活性の例示ヒトＩＲは、Yeh等（上記）に示されるようなチャイニーズハムスター卵巣細胞或いはラット肝臓癌細胞において発現され、部分的に精製される。ＩＲＳ−ｐ５３ｈは２５℃で２０分間、１μｍインスリン，５ｍＭＭｇＣｌ₂、５ｍＭＭｎＣｌ₂、２０ｍＭＨＥＰＥＳｐＨ７．５における０．５ｍＭＡＴＰ、０．１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００中で部分的に生成されたヒトＩＲを用いてインキュベートされた。その培養物はＳＤＳ−ＰＡＧＥ電気泳動にかけられる（ Sambrook、上記）。チロシン−リン酸化ＩＲＳ−ｐ５３ｈは、ＲＣ２０(Transdu ction Laboratories:Lexington.KY)及びECL detection system(Amersham)のような、セイヨウワサビペルオキシダーゼ抱合抗ホスホチロシン抗体を用いてウエスタンブロット（Sambrook、上記）により検出される。ＸＩＩＲＳ−ｐ５３ｈ特異的抗体の生成ＰＡＧＥ電気泳動法(Sambrook、上記)、或いは他の精製技術を用いて実質的に精製されるＩＲＳ−ｐ５３ｈを用いて、ウサギを免疫し、標準的なプロトコルを用いて抗体を生成する。配列番号：２から推定されるアミノ酸配列は、DNAStar software(DNASTAR Inc)を用いて分析され、免疫原性の高い領域を確定し、対応するオリゴポリペプチドを合成かつ使用して、当業者に知られた手段により抗体を産生させる。Ｃ−末端付近、或いは親水性領域内のエピトープのような適当なエピトープの選択は、Ausubel等（上記）などに記載される。典型的にはオリゴペプチドは長さ１５残基で、ｆｍｏｃ（フルオレニルメトキシカルボニル）化学作用を用いるApplied Biosystems Peptide Synthesizer Mod el 431Aを用いて合成され、M-maleimidobenzoyl-N-hydroxysuccinimide ester（ MBS:Ausubel等、上記）と反応することによりキーホールリンペットヘモシアニン(KLH,Sigma,St.Louis,ＭＯ)に結合される。ウサギは、完全なフロイントアジュバント内でオリゴペプチド−ＫＬＨ複合体で免疫される。その結果生じる抗血清は、例えば、プラスチックにペプチドを結合し、１％ＢＳＡで遮断し、ウサギ抗血清と反応させ、洗浄し、さらに放射ヨウ素標識されたヤギ抗ウサギＩｇＧと反応させることにより、抗ペプチド活性に対して検査される。ＸＩＩ特異的抗体を用いる自然発生ＩＲＳ−ｐ５３ｈの精製自然発生或いは組換えＩＲＳ−ｐ５３ｈは、ＩＲＳ−ｐ５３ｈに対して特異な抗体を用いる免疫親和性クロマトグラフィにより実質的に精製される。免疫親和性カラムが、ＩＲＳ−ｐ５３ｈ抗体を、CnBr-activated Sepharose(Pharmacia & Upjohn)のような活性化されたクロマトグラフ樹脂に共有結合させることにより構成される。結合後、製造者の取扱説明書に従って樹脂は遮断及び洗浄される。ＩＲＳ−ｐ５３ｈを含む培地を免疫親和性カラム上を通過させ、カラムは、ＩＲＳ−ｐ５３ｈを選択吸収させる条件下（例えば洗浄剤中に高イオン強度緩衝剤を入れたもの）で洗浄される。カラムは、抗体／ＩＲＳ−ｐ５３ｈ結合を***させる条件下（ｐＨ２−３の緩衝剤或いは尿素或いはチオシアネートイオンのような高濃度のカオトロープ）で溶出され、ＩＲＳ−ｐ５３ｈが回収される。ＸＩＩＩＩＲＳ−ｐ５３ｈと相互作用する分子の同定ＩＲＳ−ｐ５３ｈ或いはその生物学的活性フラグメントが、¹²⁵I Bolton-Hunt er試薬(Bolton AE等(1973)Biochem J 133:529)を用いて標識される。多数のウエルプレートのウエル内に以前に配列された候補分子が、標識されたＩＲＳ−ｐ５３ｈでインキュベートされ、洗浄され、標識されたＩＲＳ−ｐ５３ｈ複合体を有する任意のウエルが検定される。種々のＩＲＳ−ｐ５３ｈ濃度から得られたデータを用いて、数、親和性及びＩＲＳ−ｐ５３ｈと候補分子との関係を示す値を計算する。上記明細書中に記載された全ての特許出願及び特許は参照して本明細書の一部としている。記載された本発明の方法及びシステムの種々の変更例及び変形例は、本発明の範囲及び精神から逸脱することなく当業者には明らかとなろう。本発明は特定の好適な実施例に関連して記載されてきたが、請求される本発明はそのような特定の実施例に不当に制限されるべきでないことを理解されたい。実際に、本発明を実施するために記載された形態の種々の変更例は、分子生物学或いは関連する分野の当業者には明らかであり、以下の請求の範囲内に入るものである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 29/00 Ｃ０７Ｋ 16/18 35/00 Ｃ１２Ｎ 1/15 Ｃ０７Ｋ 14/47 1/19 16/18 1/21 Ｃ１２Ｎ 1/15 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 1/19 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ 1/21 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 5/10 5/00 ＡＣ１２Ｐ 21/02 Ａ６１Ｋ 37/52 Ｃ１２Ｑ 1/68 37/02 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＴ，ＡＵ，ＢＲ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＩＬ，ＪＰ，ＫＲ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＲＵ，ＳＥ，ＳＧ，ＵＳ (72)発明者シャー、パルビアメリカ合衆国カリフォルニア州94086・サニーベイル・＃５・クイーンシャルロットドライブ 1608

Claims

【特許請求の範囲】１．配列番号：１のアミノ酸配列を含む実質的に精製されたヒトインスリン受容体チロシンキナーゼ基質或いはそのフラグメント。２．請求項１のヒトインスリン受容体チロシンキナーゼ基質をコードする単離され、精製されたポリヌクレオチド配列或いは前記ポリヌクレオチド配列のフラグメント又は変異配列。３．請求項２のポリヌクレオチド配列を含む組成物。４．請求項２のポリヌクレオチド配列に厳密性条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチド配列。５．請求項２のポリヌクレオチド配列に相補的なポリヌクレオチド配列或いはそのフラグメント又は変異配列。６．配列番号：２を含む単離され、精製されたポリヌクレオチド配列或いはそのフラグメント又は変異配列。７．請求項６のポリヌクレオチド配列を含む組成物。８．請求項６のポリヌクレオチド配列に相補的なポリヌクレオチド配列。９．少なくとも請求項２のポリヌクレオチド配列のフラグメントを含む発現ベクタ。１０．請求項９のベクタを含む宿主細胞。１１．配列番号：１のアミノ酸配列を含むポリペプチド或いはそのフラグメントを生成するための方法であって、前記方法が、ａ）ポリヌクレオチド配列の発現に適した条件下で請求項１０の宿主細胞を培養する過程と、ｂ）前記宿主細胞培養株からポリペプチドを回収する過程とを有することを特徴とする方法。１２．適当な医薬品担体と共に配列番号：１のアミノ酸配列を有する実質的に精製されたヒトインスリン受容体チロシンキナーゼ基質を含む医薬品組成物。１３．請求項１のポリペプチドに特異に結合する精製された抗体。１４．請求項１のポリペプチドの精製されたアゴニスト。１５．請求項１のポリペプチドの精製されたアンタゴニスト。１６．請求項１２の医薬品組成物の有効量を治療を要する被検者に投与する過程を含むインスリン反応に関連する疾患を治療するための方法。１７．請求項１５のアンタゴニストの有効量を治療を要する被検者に投与する過程を含む癌を治療するための方法。１８．請求項１５のアンタゴニストの有効量を治療を要する被検者に投与する過程を含む炎症を治療するための方法。１９．生検サンプルにおいてヒトインスリン受容体チロシンキナーゼ基質をコードするポリヌクレオチドを検出するための方法であって、ａ）生検サンプルの核酸材料に請求項５のポリヌクレオチドをハイブリダイズし、ハイブリダイゼーション複合体を形成する過程と、ｂ）前記ハイブリダイゼーション複合体を検出する過程とを有し、前記複合体の存在が前記生検サンプルにおけるヒトインスリン受容体チロシンキナーゼ基質をコードするポリヌクレオチドの存在と相関をなすことを特徴とする方法。２０．前記核酸材料がポリメラーゼ連鎖反応により増幅されることを特徴とする請求項１９に記載の方法。