JP2002506028A

JP2002506028A - 糖尿病性網膜症または眼炎症の処置におけるゲニステインのようなタンパク質チロシンインヒビターの使用

Info

Publication number: JP2002506028A
Application number: JP2000535335A
Authority: JP
Inventors: フアン、ユージーンデ
Original assignee: ジョンズホプキンズユニヴァーシティスクールオヴメディシン
Priority date: 1998-03-13
Filing date: 1999-03-12
Publication date: 2002-02-26
Also published as: WO1999045920A2; EP1061913B1; ATE365550T1; JP2010168389A; AU756515B2; DE69936381D1; EP1061913A2; DE69936381T2; CA2321560C; EP1806135A2; WO1999045920A3; AU3001999A; CA2321560A1; EP1806135A3

Abstract

(57)【要約】本発明は、糖尿病性網膜症の予防的および治療的処置のための方法、および眼炎症の予防的および治療的処置のための方法に関する。本方法は、糖尿病性網膜症または眼炎症をそれぞれ予防的または治療的に処置するのに十分な量のタンパク質チロシンキナーゼ経路のインヒビターを、動物（例えば、哺乳動物、特にヒト）へ投与することを含む。タンパク質チロシンキナーゼ経路のインヒビターは、好ましくはゲニステインあるいはそのアナログまたはプロドラッグ、あるいは前述のもののいずれかの薬学的に受容可能な塩である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】（発明の技術分野）本発明は、糖尿病性網膜症の予防的および治療的処置のための方法、および眼
炎症の予防的および治療的処置のための方法に関する。

【０００２】（発明の背景）米国において１４００万を超える人々が糖尿病に罹患している。糖尿病に罹患
している全ての人々は、網膜合併症の危険がある。しかし、Ｉ型、すなわちイン
スリン依存性糖尿病の人々は、ＩＩ型、すなわち非インスリン依存性糖尿病の人
々に比べて、重い視力低下(vision loss)のより高い危険に直面している。

【０００３】最初に、糖尿病の人々における高い血液グルコースレベルは、彼らの眼におい
て成長因子の増加を引き起こす。この状態は、「糖尿病前症性網膜症期」として
知られ、予防的に処置されなければ網膜症に至ることがある。

【０００４】網膜症は、大部分の糖尿病の人々に、生涯にわたってかなりの程度悪影響を与
える（Ａｎｏｎｙｍｏｕｓ，ＭＭＷＲ４２（１０）：１９１−１９５（１９９
３））。それは、現在２０〜７４歳の米国人における失明の主要な原因であり、
米国における糖尿病の人々の約３分の１において視力を悪化させると予想されて
いる。米国において各年、４０，０００ほどの新規な失明のケースが、糖尿病の
人々の間で生じている（ＣＤＣ、未発表データ、１９９３）。糖尿病の人々は、
一般人口よりも２５倍網膜症によって失明しやすい。

【０００５】糖尿病性網膜症は、２期、すなわち、非増殖性期（これは、典型的には最初に
生じる）および増殖性期を有する。非増殖性期、これは「背景糖尿病性網膜症」
とも呼ばれ、基底膜の肥厚、網膜周細胞の損失、微小血管異常、網膜内毛細血管
瘤、網膜出血（「ドットブロット(dot blot)」出血としても知られている）、網
膜浮腫（特に糖尿病性黄斑浮腫）、網膜虚血または網膜灌流の低下に関連した毛
細血管閉鎖（すなわち、血管発達の不全）ならびに軟性白斑および硬性白斑によ
って特徴付けられる。増殖性期、これは概算で７００，０００の米国人に悪影響
を与えており（Ｃｈｅｎら、Ｊ．Ｍｉｓｓ．ＳｔａｔｅＭｅｄ．Ａｓｓｏｃ．
３６（７）：２０１−２０８（１９９５））、網膜または網膜もしくは乳頭の内
表面上の視神経から、あるいは硝子体腔内への新血管形成および線維血管(fibro
vascular)成長（すなわち、神経膠要素および線維要素を含む瘢痕）によって特徴付けられる。

【０００６】増殖性期は、ルベオーシス(rubeotic)緑内障または新血管形成緑内障へと至る
ことがある。黄斑浮腫は、いずれの期でも起こり得、網膜新血管形成からの合併
症と共に、糖尿病に関連する視力低下を引き起こす２つの主要な網膜の問題であ
る。

【０００７】糖尿病性網膜症の病理学期は十分に説明されているが、糖尿病性網膜症に内在
する分子現象は、あまり理解されていない。これは、一部には、この疾患が個人
間で差はあるが１０〜３０年に渡って進行するという事実による。

【０００８】血糖および高血圧の厳重な制御ならびに糖尿病の眼科スクリーニングは、この
疾患を予防するのに有益のようである。現在の処置は、眼科医による定期的な観
察、レーザー光凝固および硝子体切除からなる。

【０００９】眼炎症（例えば、黄斑浮腫）は、疾患、細菌感染またはウイルス感染、眼手術
（これは白内障手術、網膜手術、屈折矯正手術、および角膜手術（例えば、角膜
移植）を含む）などの結果として起こり得る。眼炎症はまた、角膜移植片拒絶反
応の結果として起こり得る。

【００１０】眼炎症は、現在コルチコステロイドによって処置される。このような処置の不
利な点は、白内障、眼内圧の増加、角膜溶融、全身性合併症、高血圧、大腿骨先
端部の無菌壊死、心臓血管疾患、顔面の毛および多くのその他のものである。非
ステロイド抗炎症性化合物もまた、投与される。このような化合物の不利な点と
しては、特定の血液疾患、消化性潰瘍、胃痛(gastric distress)、および出血を
伴う血小板機能不全、ならびにその他のものが挙げられる。黄斑中心に脅威を与
えるかまたはそれを含む黄斑浮腫は、病巣黄斑光凝固を用いて処置される。小さ
な（直径５０μｍ）中強度のレーザーバーンは、黄斑の漏出領域を標的とする（
Ｍｕｒｐｈｙ，Ａｍｅｒ．ＦａｍｉｌｙＰｈｙｓｉｃｉａｎ５１（４）：７
８５−７９６（１９９５））。黄斑浮腫が残存する場合、再処置が必要なときも
ある。

【００１１】重いか非常に重い非増殖性網膜症に罹患している患者、および増殖性網膜症の
危険性が高いか、あるいは初期のまたは進行した増殖性網膜症に既に罹患してい
る患者は、散乱または汎網膜光凝固を用いて処置される。汎網膜光凝固は、網膜
の中央周辺部および周辺部に１，５００〜２，０００のレーザーバーン（これは
直径５００μｍである）を含む（Ｍｕｒｐｈｙ（１９９５）、前出）。

【００１２】糖尿病の微小血管合併症の発症に関する最もよく実証された生化学的機構は、
ソルビトール経路である。ソルビトール経路では、酵素であるアルドースレダク
ターゼは、グルコースのソルビトールへの変換およびガラクトースのガラクチト
ールへの変換を触媒する。アルドースレダクターゼは、グルコースに対して低い
基質親和性を有する。従って、グルコース濃度が正常である場合、この経路は不
活性である。高血糖症の間、ソルビトール経路は活性になる。ソルビトール経路
の活性化は、網膜周細胞にとって重要であり、例えば、これはグルコース浸透の
ためにインスリンを必要としない。同様に、網膜毛細血管細胞は、十分な量のア
ルドースレダクターゼを含むようである（Ｆｅｒｒｉｓ，ＨｏｓｐｉｔａｌＰ
ｒａｃｔｉｃｅ：７９−８９（１９９３））。

【００１３】糖尿病性網膜症および眼炎症の高い罹患率を考慮すると、糖尿病性網膜症およ
び眼炎症の有効な予防的および治療的処置の必要性が依然としてある。従って、
本発明の主要な目的は、糖尿病性網膜症を予防的および治療的に処置するための
方法（糖尿病前症性網膜症期、非増殖性糖尿病性網膜症期、および増殖性糖尿病
性網膜症期での処置を含む）を提供することである。本発明の別の主要な目的は
、眼炎症（例えば、黄斑浮腫（例えば、疾患、細菌感染またはウイルス感染、あ
るいは眼手術（例えば、白内障手術、網膜手術、屈折矯正手術、および角膜手術
（例えば、角膜移植）など、とりわけ角膜移植片拒絶反応）に関連するもの））
を予防的および治療的に処置するための方法を提供することである。本発明のこ
れらおよび他の目的は、本明細書中で提供する詳細な説明から明らかとなる。

【００１４】（発明の簡単な要旨）本発明は、糖尿病性網膜症の予防的および治療的処置のための方法（糖尿病前
症性網膜症期、非増殖性糖尿病性網膜症期、および増殖性糖尿病性網膜症期での
処置を含む）に関する。本発明はまた、眼炎症の予防的および治療的処置のため
の方法に関する。本方法は、タンパク質チロシンキナーゼ経路のインヒビターの
投与を含む。好ましくは、タンパク質チロシンキナーゼ経路のインヒビターは、
以下の式の化合物である：

【００１５】

【化２】

【００１６】ここでＶ、ＷおよびＸは、ヒドロ、ヒドロキシル、アルコキシ、ハロ、エステル
、エーテル、カルボン酸基、カルボン酸基の薬学的に許容し得る塩、および−Ｓ
Ｒ（ここでＲは水素またはアルキル基である）からなる群より選択され、Ｙは、
酸素、硫黄、Ｃ（ＯＨ）、およびＣ＝Ｏからなる群より選択され、Ｚは、ヒドロ
およびＣ（Ｏ）ＯＲ₁（ここでＲ₁はアルキルである）からなる群より選択される
。好ましくは、アルコキシはＣ₁−Ｃ₆アルコキシである。好ましくは、ハロは、
フッ素、塩素または臭素である。好ましくは、エステルはＣ₁−Ｃ₆エステルであ
る。好ましくは、エーテルはＣ₁−Ｃ₆エーテルである。好ましいカルボン酸基の
薬学的に許容し得る塩としては、ナトリウム塩およびカリウム塩が挙げられる。
好ましくは、アルキル基はＣ₁−Ｃ₆アルキル基である。望ましくは、タンパク質
チロシンキナーゼ経路のインヒビターはゲニステイン(genistein)である。

【００１７】（発明の詳細な説明）本発明は、チロシンリン酸化が非虚血性微小血管糖尿病性網膜症の初期におい
て増加すること、およびタンパク質チロシンキナーゼ経路のインヒビター、特に
ゲニステインが糖尿病性網膜症の予防に有効であるという知見を根拠とする。従
って、本発明は、糖尿病性網膜症の予防的および治療的処置のための方法（糖尿
病前症性網膜症期、非増殖性糖尿病性網膜症期、および増殖性糖尿病性網膜症期
での処置を含む）を提供する。さらに、本発明は、眼炎症の予防的および治療的
処置のための方法を提供する。「予防的」とは、糖尿病性網膜症（特に、糖尿病
性黄斑浮腫）または眼炎症に対する全体的または部分的保護を意味する。「治療
的」とは、糖尿病性網膜症または眼炎症自体の改善、およびさらなる糖尿病性網
膜症または眼炎症に対する全体的または部分的保護を意味する。眼炎症の予防的
および治療的処置のための本発明の方法は、疾患、細菌感染またはウイルス感染
、あるいは眼手術（例えば、白内障手術、網膜手術、屈折矯正手術、および角膜
手術（例えば、角膜移植）など、とりわけ角膜移植片拒絶反応）による眼炎症（
例えば、黄斑浮腫）の処置に特に有用である。この点に関して、本発明の方法は
また、例えば、白内障後またはレーザー嚢切開術に関連した網膜浮腫（Ｉｒｖｉ
ｎｅ−Ｇａｓｓ症候群）、ぶどう膜炎、分岐または中央静脈の閉塞、局所的なエ
ピネフリンの使用、重症高血圧、放射線網膜症、周中心窩末梢血管拡張症(telan
gectasia)および網膜色素変性の処置に有用である。

【００１８】本方法は、眼炎症または網膜症の網膜を予防的または治療的に処置するのに十
分な量の、タンパク質チロシンキナーゼ経路のインヒビターを投与することを含
む。タンパク質チロシンキナーゼ経路のインヒビターは、それが安全かつ有効で
ある限り、本発明の方法において使用することができる。ここで、「ＰＴＫイン
ヒビター」は、このような化合物を言及するために使用され、タンパク質チロシ
ンキナーゼ経路の任意の点および全ての点でこの経路に影響を与える全ての化合
物を包含することが意図される。

【００１９】好ましくは、ＰＴＫインヒビターは、ゲニステイン（５，７−ジヒドロキシ−
３−（４−ヒドロキシフェニル）−４Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン）または
薬学的に許容し得る、タンパク質チロシンキナーゼ経路を阻害するそのアナログ
またはプロドラッグ、あるいは前述のもののいずれかの薬学的に許容し得る塩で
ある。従って、ＰＴＫインヒビターは、以下の式の化合物であり得る：

【００２０】

【化３】

【００２１】ここでＶ、ＷおよびＸは、ヒドロ、ヒドロキシル、アルコキシ、ハロ、エステル
、エーテル、カルボン酸基、カルボン酸基の薬学的に許容し得る塩、および−Ｓ
Ｒ（ここでＲは水素またはアルキル基である）からなる群より選択され、Ｙは、
酸素、硫黄、Ｃ（ＯＨ）、およびＣ＝Ｏからなる群より選択され、Ｚは、ヒドロ
およびＣ（Ｏ）ＯＲ₁（ここでＲ₁はアルキルである）からなる群より選択される
。好ましくは、アルコキシはＣ₁−Ｃ₆アルコキシである。好ましくは、ハロは、
フッ素、塩素または臭素である。好ましくは、エステルはＣ₁−Ｃ₆エステルであ
る。好ましくは、エーテルはＣ₁−Ｃ₆エーテルである。好ましいカルボン酸基の
薬学的に許容し得る塩としては、ナトリウム塩およびカリウム塩が挙げられる。
好ましくは、アルキル基はＣ₁−Ｃ₆アルキル基である。望ましくは、タンパク質
チロシンキナーゼ経路のインヒビターはゲニステインである。

【００２２】プロドラッグは、ゲニステインの薬学的に許容し得る任意のプロドラッグ、ゲ
ニステインのタンパク質チロシンキナーゼ経路を阻害するアナログ、または前述
のいずれかの薬学的に許容し得る塩であり得る。しかし、当業者は、使用される
プロドラッグが、網膜内またはその周囲で活性なＰＴＫインヒビターに変換され
得るものでなければならないことを理解する。好ましいプロドラッグは、ゲニス
テイン、ゲニステインのタンパク質チロシンキナーゼ経路を阻害するアナログ、
または前述のいずれかの薬学的に許容し得る塩の脂質溶解性を増加させるプロド
ラッグである。好ましいプロドラッグは、Ｖ、ＷおよびＸの１つ以上が、独立し
て、エステル（例えばピバル酸）で誘導体化されたものである。

【００２３】上式の化合物は、広く市販入手可能である。例えば、ゲニステインは、ＬＣ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｏｂｕｒｎ，ＭＡ）から入手可能である。市販入
手可能でない化合物は、当該分野で公知の有機合成法を用いて容易に調製するこ
とができる。

【００２４】本発明による化合物の特定のアナログ、プロドラッグまたは薬学的に許容し得
る塩が、予防的または治療的に網膜症を処置できるかどうかは、実施例１で使用
したラットモデルにおけるその効果によって決定することができる。あるいは、
タンパク質チロシンキナーゼ経路のインヒビターのアナログ、プロドラッグおよ
び薬学的に許容し得る塩は、内皮細胞増殖のインビトロ研究によって、および糖
尿病性網膜症の他のモデル（例えば、ストレプトゾトシン）において試験するこ
とができる。タンパク質チロシンキナーゼ経路のインヒビターのアナログ、プロ
ドラッグおよび薬学的に許容し得る塩は、臨床試験によって（例えば、炎症の細
胞性および体液性メディエーターの定量によって）、または眼炎症の予防的およ
び治療的処置における効能のための実施例２に示す方法を用いて試験することが
できる。

【００２５】さらに、カラードップラー画像診断(color Doppler imaging)は、眼の病理における薬物の作用を評価するために使用することができる（Ｖａｌｌｉら、Ｏｐ
ｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｉｃａ２０９（１３）：１１５−１２１（１９９５））
。カラードップラー画像診断は、最近の超音波診断の進歩であり、構造の同時２
次元画像診断および血流の評価を可能にする。従って、網膜症および眼炎症は、
このような技術を用いて分析することができる。

【００２６】ＰＴＫインヒビターは、本発明の方法で使用するために、所望であれば、適切
なマトリクス、例えば、ポリマー性マトリクスに結合させることができる。ポリ
マー結合化合物がインビボで使用される場合、ポリマーが生物学的に許容し得る
ならば、任意の広範囲のポリマーを本発明の文脈において使用することができる
（例えば、米国特許第５，３８４，３３３号および同第５，１６４，１８８号を
参照のこと）。

【００２７】ゲニステインの利点は、非常に安全かつ有効であることである。例えば、ゲニ
ステインを糖尿病の脂肪過多のＺｕｃｋｅｒラットに経口投与した場合、ゲニス
テインは、エレクトロレティノグラフィーによって測定して、６ヶ月の期間にわ
たって７５ｍｇ／ｋｇ／日〜３００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲の投薬量で、網膜に対
して無毒であったことが見出された。さらに、ゲニステインの経口投与は、雄ラ
ットおよび雌ラットについて、食物摂取および体重に対する影響がなかったこと
が見出された。また、経口投与したゲニステインは、雌ラットにおいて卵巣およ
び子宮の重量に対して影響がなかったことが見出された。

【００２８】ＰＴＫインヒビター（好ましくは、ゲニステイン、ゲニステインのタンパク質
チロシンキナーゼ経路を阻害するアナログ、ゲニステインのタンパク質チロシン
キナーゼ経路を阻害するプロドラッグ、または前述のいずれかの薬学的に許容し
得る塩である）は、任意の適切な経路によって、本発明の方法に従って投与する
ことができる。適切な投与経路としては、全身的（例えば経口または注射によっ
て）、局所的、眼内、眼周辺（例えば、テノン膜下(subTenon's)）、結膜下、網
膜下、脈絡膜上および眼球後方が挙げられる。ＰＴＫインヒビターを投与する様
式は、網膜症または眼炎症の処置が予防的または治療的であるかに一部依存する
。ＰＴＫインヒビターを網膜症または眼炎症の治療的処置のために投与する様式
は、それぞれ網膜症または眼炎症の原因に一部依存する。

【００２９】例えば、糖尿病が網膜症の主要な原因であれば、ＰＴＫインヒビターは、糖尿
病前症性網膜症の状態が検出されるとすぐに予防的に投与することができる。糖
尿病に起因し得る網膜症の予防的処置のために、ＰＴＫインヒビターは、好まし
くは全身的に（例えば、経口または注射によって）投与される。非増殖性糖尿病
性網膜症の治療的処置のために、ＰＴＫインヒビターは、全身的に（例えば、経
口または注射によって）、または眼内に投与することができる。増殖性糖尿病性
網膜症は、ＰＴＫインヒビターを眼内、局所的、結膜下または眼周辺（例えば、
テノン膜下）に投与することによって、治療的に処置することができる。ＰＴＫ
インヒビターは、増殖性糖尿病期の間の新血管形成の間に発生した瘢痕組織を眼
から外科的に除去する前、その間またはその後の網膜症の予防的または治療的処
置のために、好ましくは眼内、局所的、結膜下または眼周辺（例えば、テノン膜
下）に投与される。

【００３０】同様に、疾患、細菌感染またはウイルス感染、眼手術（例えば、白内障手術、
網膜手術、屈折矯正手術、および角膜手術（例えば、角膜移植）など、およびと
りわけ角膜移植片拒絶反応）が、眼炎症（例えば、黄斑浮腫）の主要な原因であ
るので、ＰＴＫインヒビターは、疾患または感染が検出されるかあるいは眼手術
が完了するとすぐに治療的に投与することができる。ＰＴＫインヒビターは、疾
患または感染が検出される前、あるいは眼手術の前、その間またはその後に予防
的に投与することができる。眼炎症の予防的処置について、ＰＴＫインヒビター
は、好ましくは眼内または網膜下に投与される。この点に関して、生体分解性で
かつ生体吸収性である眼内デバイス／インプラント（例えば、Ｖｉｔｒａｓｅｒ
ｔ^TM）の使用は、ＰＴＫインヒビターの徐放を達成するために使用することがで
きる。

【００３１】ＰＴＫインヒビターは、好ましくは、動物（例えば、哺乳動物、特にヒト）が
網膜症または眼炎症の危険にある（予防的処置）か、または網膜症または眼炎症
を発症し始めた（治療的処置）ことを確定した後、できるだけ早く投与される。
処置は、使用される特定のＰＴＫインヒビター、投与されるＰＴＫインヒビター
の量、投与経路、ならびにもし網膜症または眼炎症が実際に発症している時はそ
の原因および程度に一部依存する。

【００３２】当業者は、ＰＴＫインヒビターの適切な投与方法（本発明の方法に有用である
）が利用可能であることを理解する。特定のＰＴＫインヒビターを投与するため
に１より多い経路を使用することができるが、特定の経路は、別の経路よりも、
より即時かつより効果的な反応を提供することができる。従って、記載した投与
経路は、単なる例示であり、決して限定するものではない。

【００３３】本発明に従って動物（特に、ヒト）に投与される用量は、合理的な時間枠にわ
たって動物に所望の応答をもたらすのに十分な量とすべきである。当業者は、投
薬量が、種々の因子（使用される特定のＰＴＫインヒビターの強さ、動物の年齢
、種、病気または疾患の状態、および体重、ならびに、網膜症によってまさに影
響を受けようとしているまたは実際に影響を受けた網膜の量、または眼炎症の量
および位置を含む）に依存することを理解する。用量のサイズはまた、投与の経
路、時期および頻度、ならびに特定のＰＴＫインヒビターの投与に伴うかもしれ
ない任意の悪い副作用の存在、性質および程度、および所望の生理学的効果によ
って決定される。当業者は、種々の病気または疾患の状態（特に、慢性の病気ま
たは疾患の状態）が、複数回投与を含む延長した処置を必要とするかもしれない
ことを理解する。

【００３４】適切な用量および投薬量計画は、当業者に公知の従来の範囲決定技術によって
決定することができる。一般に、処置は、化合物の最適用量よりも少量の投薬量
で開始される。その後、投薬量は、その状況下で最適の効果に達するまで、少量
ずつ増加される。本発明の方法は、典型的には、全身的に投与する場合、約１ｍ
ｇ／ｋｇ／日〜約１００ｍｇ／ｋｇ／日、好ましくは約１５ｍｇ／ｋｇ／日〜約
５０ｍｇ／ｋｇ／日の投与を含む。眼内投与は、典型的には、合計約０．１ｍｇ
〜合計約５ｍｇ、好ましくは合計約０．５ｍｇ〜合計約１ｍｇの投与を含む。局
所投与の好ましい濃度は、１００μＭである。

【００３５】本発明の方法において使用するための組成物は、好ましくは、薬学的に許容し
得る担体と、網膜症または眼炎症を予防的または治療的に処置するのに十分な量
のＰＴＫインヒビターとを含有する。担体は、従来使用されているいずれのもの
でもよく、物理化学的考慮（例えば、溶解性および化合物との反応性の欠如）お
よび投与経路によってのみ制限される。当業者は、以下に記載した医薬組成物に
加えて、ＰＴＫインヒビターが、ポリマー性組成物、包接錯体（例えば、シクロ
デキストリン包接錯体）、リポソーム、ミクロスフェア、マイクロカプセルなど
として処方することができることを理解する（例えば、米国特許第４，９９７，
６５２号、同第５，１８５，１５２号および同第５，７１８，９２２号を参照の
こと）。

【００３６】ＰＴＫインヒビターは、薬学的に許容し得る酸付加塩として処方することがで
きる。医薬組成物に使用するための薬学的に許容し得る酸付加塩の例としては、
鉱酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、リン酸、メタリン酸、硝酸および硫酸）、お
よび有機酸（例えば、酒石酸、酢酸、クエン酸、リンゴ酸、乳酸、フマル酸、安
息香酸、グリコール酸、グルコン酸、コハク酸、およびアリールスルホン酸（例
えば、ｐ−トルエンスルホン酸））が挙げられる。

【００３７】本明細書中に記載する薬学的に許容し得る賦形剤、例えば、ビヒクル、アジュ
バント、担体または希釈剤は、当業者に周知であり、一般の人々が容易に入手可
能である。薬学的に許容し得る担体は、ＰＴＫインヒビターに対して化学的に不
活性であるもの、および使用状況下で有害な副作用または毒性を有しないもので
あることが好ましい。

【００３８】賦形剤の選択は、一部、特定のＰＴＫインヒビターによって、ならびに組成物
を投与するために使用する特定の方法によって、決定される。従って、広範な種
々の本発明の医薬組成物の適切な処方物が存在する。以下の処方物は、単なる例
示であり、決して限定するものではない。

【００３９】注射可能な処方物は、本発明の方法によれば好ましいものである。注射可能な
組成物用の有効な薬学的担体の要件は、当業者に周知である（ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓａｎｄＰｈａｒｍａｃｙＰｒａｃｔｉｃｅ，Ｊ．Ｂ．Ｌｉｐｐ
ｉｎｃｏｔｔＣｏ．，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ，Ｂａｎｋｅｒおよび
Ｃｈａｌｍｅｒｓ編、２３８−２５０頁（１９８２）、およびＡＳＨＰＨａｎｄｂｏｏｋｏｎＩｎｊｅｃｔａｂｌｅＤｒｕｇｓ，Ｔｏｉｓｓｅｌ、第４
版、６２２−６３０頁（１９８６）を参照のこと）。このような注射可能な組成
物は、筋肉内、静脈内、または腹腔内に投与されるのが好ましい。

【００４０】局所処方物は、当業者に周知である。このような処方物は、本発明の文脈にお
いて、皮膚への適用に適している。パッチ、角膜シールド（例えば、米国特許第
５，１８５，１５２号を参照のこと）、および眼用溶液（例えば、米国特許第５
，７１０，１８２号を参照のこと）ならびに軟膏（例えば、点眼薬）の使用もま
た、当業者の範囲内である。

【００４１】経口投与に適切な処方物は、以下のものからなり得る：（ａ）液体溶液、例え
ば、有効量の化合物が希釈剤（例えば、水、生理食塩水、またはオレンジジュー
ス）に溶解したもの；（ｂ）カプセル剤、小袋剤(sachet)、錠剤、ロゼンジ剤、
およびトローチ剤、これらはそれぞれ所定量の活性成分を、固体または顆粒とし
て含む；（ｃ）粉末剤；（ｄ）適切な液体中の懸濁液；および（ｅ）適切な乳濁
液。液体処方物は、薬学的に許容し得る界面活性剤、懸濁化剤、または乳化剤を
添加して、または添加しないで、希釈剤（例えば、水およびアルコール（例えば
、エタノール、ベンジルアルコール、およびポリエチレンアルコール））を含ん
でもよい。カプセル剤形態は、通常の硬質または軟質シェル型(hard- or soft-s
helled)ゼラチンタイプのものであり得、例えば、界面活性剤、滑沢剤、および不活性充填剤（例えば、ラクトース、スクロース、リン酸カルシウムおよびコー
ンスターチ）を含む。錠剤形態は、ラクトース、スクロース、マンニトール、コ
ーンスターチ、ポテトスターチ、アルギン酸、微結晶性セルロース、アラビアゴ
ム、ゼラチン、グアルガム、コロイド状二酸化ケイ素、クロスカルメロース(cro
scarmellose)ナトリウム、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カ
ルシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸、および他の賦形剤、着色剤、希釈
剤、緩衝化剤、崩壊剤、湿潤剤、保存剤、香味剤、および薬理学的に適合性の賦
形剤のうちの１種以上を含むことができる。ロゼンジ剤形態は、香味料（通常、
スクロースおよびアラビアゴムまたはトラガカントゴム）中に活性成分を含有す
ることができ、ならびにパステル剤は、不活性基剤（例えば、ゼラチンおよびグ
リセリン、またはスクロースおよびアラビアゴム）中に活性成分を含有し、乳濁
液、ゲルなどは、活性成分に加えて、当該分野で公知の賦形剤を含有する。

【００４２】非経口投与に適切な処方物としては、水性および非水性の、等張性の無菌注射
溶液が挙げられ、これは、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、および処方物を意図する
レシピエントの血液と等張にする溶質を含むことができ、ならびに水性および非
水性の無菌懸濁液が挙げられ、この無菌懸濁液は、懸濁化剤、可溶化剤、粘稠化
剤、安定化剤、および保存剤を含むことができる。インヒビターは、薬学的に許
容し得る界面活性剤（例えば、石鹸または洗剤）、懸濁化剤（例えば、ペクチン
、カーボマー、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、また
はカルボキシメチルセルロース）、または乳化剤および他の薬学的アジュバント
を添加してまたは添加しないで、薬学的担体（例えば、無菌液体または液体混合
物）中の生理学的に許容し得る希釈剤中で投与することができ、この希釈剤とし
ては、水、生理食塩水、水性デキストロースおよび関連する糖溶液、アルコール
（例えば、エタノール、イソプロパノール、またはヘキサデシルアルコール）、
グリコール（例えば、プロピレングリコールまたはポリエチレングリコール）、
ジメチルスルホキシド、グリセロールケタール（例えば、２，２−ジメチル−１
，３−ジオキソラン−４−メタノール）、エーテル（例えば、ポリ（エチレング
リコール）４００）、オイル、脂肪酸、脂肪酸エステルまたはグリセライド、ま
たはアセチル化脂肪酸グリセライドが挙げられる。非経口処方物に使用すること
ができるオイルとしては、石油、動物油、植物油または合成油が挙げられる。オ
イルの特定の例としては、ピーナッツ油、大豆油、ゴマ油、綿実油、コーン油、
オリーブ油、ペトロラタム、および鉱物油が挙げられる。

【００４３】非経口処方物に使用するのに適した脂肪酸としては、オレイン酸、ステアリン
酸、およびイソステアリン酸が挙げられる。オレイン酸エチルおよびミリスチン
酸イソプロピルは適切な脂肪酸エステルの例である。

【００４４】非経口処方物に使用するのに適した石鹸としては、脂肪酸アルカリ金属塩、ア
ンモニウム塩、およびトリエタノールアミン塩が挙げられ、適切な界面活性剤と
しては、（ａ）カチオン性界面活性剤、例えば、ジメチルジアルキルアンモニウ
ムハライド、およびアルキルピリジニウムハライド、（ｂ）アニオン性界面活性
剤、例えば、スルホン酸アルキル、アリール、およびオレフィン、硫酸アルキル
、オレフィン、エーテル、およびモノグリセライド、およびスルホスクシネート
、（ｃ）非イオン性界面活性剤、例えば、脂肪酸アミンオキシド、脂肪酸アルカ
ノールアミド、およびポリオキシエチレンポリプロピレンコポリマー、（ｄ）両
性界面活性剤、例えば、アルキル−ｐ−アミノプロピオネート、および２−アル
キル−イミダゾリン４級アンモニウム塩、および（ｅ）それらの混合物が挙げら
れる。

【００４５】非経口処方物は、典型的には、溶液中に約０．５〜約２５重量％の活性成分を
含む。保存剤および緩衝剤を使用してもよい。注射部位での刺激を最小限にする
かまたは除去するために、このような組成物は、約１２〜約１７の親水親油バラ
ンス（ＨＬＢ）を有する１種以上の非イオン性界面活性剤を含んでもよい。

【００４６】このような処方物中の界面活性剤の量は、典型的には、約５〜約１５重量％の
範囲である。適切な界面活性剤としては、ポリエチレンソルビタン脂肪酸エステ
ル（例えば、モノオレイン酸ソルビタン）およびエチレンオキシドと疎水性基剤
との高分子量付加体が挙げられ、この付加体は、プロピレンオキシドとプロピレ
ングリコールとの縮合によって形成される。非経口処方物は、単回用量または多
回用量のシールされた容器（例えば、アンプルおよびバイアル）中に存在するこ
とができ、使用直前に注射用の無菌液体賦形剤（例えば、水）の添加のみを必要
とするフリーズドライ（凍結乾燥）状態で保存することができる。即時調合注射
溶液および懸濁液は、前述した種類の無菌粉末剤、顆粒剤、および錠剤から調製
することができる。

【００４７】このような組成物は、眼内処方物、徐放処方物またはデバイスとして処方する
ことができる（例えば、米国特許第５，３７８，４７５号を参照のこと）。例え
ば、ゼラチン、硫酸コンドロイチン、ポリリン酸エステル、例えば、ビス−２−
ヒドロキシエチル−テレフタレート（ＢＨＥＴ）、またはポリ乳酸−グリコール
酸（種々の割合で）を、徐放処方物を処方するために使用することができる。イ
ンプラント（例えば、米国特許第５，４４３，５０５号、同第４，８５３，２２
４号および同第４，９９７，６５２号を参照のこと）、デバイス（例えば、米国
特許第５，５５４，１８７号、同第４，８６３，４５７号、同第５，０９８，４
４３号および同第５，７２５，４９３号を参照のこと）、例えば移植可能デバイ
ス（例えば、機械式レザバー、眼内デバイスまたは眼内導管（例えば、直径１０
０μ〜１ｍｍ）を有する眼外デバイス）、あるいは上記ポリマー性組成物からな
るインプラントまたはデバイスを使用することができる。

【００４８】本発明の方法はまた、他の薬学的に活性な化合物の併用投与を含むことができ
る。「併用投与」とは、上記のＰＴＫインヒビターの投与の前、それと同時（例
えば、同じ処方物中または別の処方物中のＰＴＫインヒビターと組み合わせて）
、またはその後の投与を意味する。例えば、コルチコステロイド（例えば、プレ
ドニゾン、メチルプレドニゾロン、デキサメタゾン、またはトリアムシノロン(t
riamcinalone)アセトニド）、または非コルチコステロイド抗炎症性化合物（例えば、イブプロフェンまたはフルビプロベン(flubiproben)）を併用投与することができる。同様に、ビタミンおよびミネラル（例えば、亜鉛）、抗酸化剤（例
えば、カロチノイド（例えば、キサントフィルカロチノイド様ゼアキサンチンま
たはルテイン））、および微量栄養素を併用投与することができる。さらに、他
のタイプのタンパク質チロシンキナーゼ経路のインヒビターとしては、天然タン
パク質チロシンキナーゼインヒビター（例えば、ケルセチン、ラベンダスチンＡ
(lavendustin A)、エルブスタチン(erbstatin)およびへルビマイシンＡ(herbimy
cin A)）および合成タンパク質チロシンキナーゼインヒビター（例えば、チロホ
スチン(tyrphostin)（例えば、ＡＧ４９０、ＡＧ１７、ＡＧ２１３（ＲＧ５０８
６４）、ＡＧ１８、ＡＧ８２、ＡＧ４９４、ＡＧ８２５、ＡＧ８７９、ＡＧ１１
１２、ＡＧ１２９６、ＡＧ１４７８、ＡＧ１２６、ＲＧ１３０２２、ＲＧ１４６
２０およびＡＧ５５５）、ジヒドロキシ−およびジメトキシベンジリデンマロノ
ニトリル、ラベンダスチンＡのアナログ（例えば、ＡＧ８１４およびＡＧ９５７
）、キナゾリン（例えば、ＡＧ１４７８）、４，５−ジアニリノフタルイミド、
およびチアゾリジンジオン）が挙げられ、これらを、ゲニステインまたはそのア
ナログ、プロドラッグまたは薬学的に許容し得る塩と併用投与することができる
（Ｌｅｖｉｔｚｋｉら、Ｓｃｉｅｎｃｅ２６７：１７８２−１７８８（１９９
５）；およびＣｕｎｎｉｎｇｈａｍら、Ａｎｔｉ−ＣａｎｃｅｒＤｒｕｇＤ
ｅｓｉｇｎ７：３６５−３８４（１９９２）を参照のこと）。この点に関して
、ゲニステインの潜在的に有用な誘導体としては、Ｍａｚｕｒｅｋら、米国特許
第５，６３７，７０３号に記載のものが挙げられる。成長因子に対する中和タン
パク質（例えば、所定の成長因子（例えば、ＶＥＧＦ（例えば、Ａｉｅｌｌｏら
、ＰＮＡＳＵＳＡ９２：１０４５７−１０４６１（１９９５）を参照のこと
）、またはホスホチロシン（Ｄｈａｒら、Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３７：
５１９−５２５（１９９０））に対して特異的であるモノクローナル抗体）を併
用投与することができる。併用投与することができる他の種々の化合物としては
、タンパク質キナーゼＣのインヒビター（例えば、米国特許第５，７１９，１７
５号および同第５，７１０，１４５号を参照のこと）、サイトカインモジュレー
ター、増殖の内皮細胞特異的インヒビター（例えば、トロンボスポンジン(throm
bospondin)）、内皮細胞特異的阻害性成長因子（例えば、ＴＮＦα）、抗増殖性
ペプチド（例えば、ＳＰＡＲＣおよびプロルフェリン(prolferin)様ペプチド）、グルタメートレセプターアンタゴニスト、アミノグアニジン、アンギオテンシ
ン変換酵素インヒビター（例えば、アンギオテンシンＩＩ）、カルシウムチャネ
ル遮断薬、Ψ−テクトリゲニン(tectorigenin)、ＳＴ６３８、ソマトスタチンア
ナログ（例えば、ＳＭＳ２０１−９９５）、モノシアロガングリオシド(monos
ialoganglioside)ＧＭ１、チクロピジン、神経栄養性成長因子、メチル−２，５
−ジヒドロキシシンナメート、血管形成インヒビター（例えば、組換えＥＰＯ、
スルホニル尿素経口血糖減少剤（例えば、グリクラジド(gliclazide)（非インス
リン依存性糖尿病））、ＳＴ６３８（Ａｓａｈｉら、ＦＥＢＳＬｅｔｔｅｒ
３０９：１０−１４（１９９２））、サリドマイド、ニカルジピン(nicardipine
)塩酸塩、アスピリン、ピセアタノール(piceatannol)、スタウロスポリン(staur
osporine)、アドリアマイシン、エピダースタチン(epiderstatin)、（+）−アエ
ロプリシニン(aeroplysinin)−１、フェナゾシン、ハロメチルケトン、抗脂肪血
症剤（例えば、エトフィブレート(etofibrate)）、クロルプロマジンおよびスピ
ングホシン(spinghosines)、アルドースレダクターゼインヒビター（例えば、ト
ルレスタット(tolrestat)）、ＳＰＲ−２１０、ソルビニル(sorbinil)または酸素、ならびにレチノイン酸およびそのアナログ（Ｂｕｒｋｅら、Ｄｒｕｇｓｏ
ｆｔｈｅＦｕｔｕｒｅ１７（２）：１１９−１３１（１９９２）；および
Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎら、Ｐｈａｒｍａｃ．Ｔｈｅｒ．５４：１５１−１９４（１
９９２））が挙げられる。セレノインドール（２−チオインドール）および関連
するジスルフィドセレニド（例えば、Ｄｏｂｒｕｓｉｎら、米国特許第５，４６
４，９６１号に記載のもの）は、有用なタンパク質チロシンキナーゼインヒビタ
ーである。全身性体液鬱滞（例えば、心臓血管疾患または腎臓疾患および重篤な
全身性高血圧による）を示す患者は、利尿薬物、透析薬物、心臓薬物および抗高
血圧剤でさらに処置することができる。

【００４９】

【実施例】以下の実施例は、本発明をさらに説明するが、もちろんその範囲をいかように
も限定しないと解釈されるべきである。

【００５０】（実施例１）本実施例は、チロシンリン酸化が非虚血性微小血管糖尿病性網膜症の初期にお
いて増加し、そしてゲニステインがこのようなチロシンリン酸化を阻害すること
を示す。

【００５１】６対の同腹仔のＺｕｃｋｅｒラット（すなわち、６匹の引退した糖尿病の脂肪
過多の繁殖雄Ｚｕｃｋｅｒ（ＺＤＦ、ｆａ／ｆａ）ラットおよび６匹の引退した
脂肪の少ない繁殖雌Ｚｕｃｋｅｒ（ｆａ／+）ラット）を得た（ＧｅｎｅｔｉｃＭｏｄｅｌｓ，Ｉｎｃ．，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）。糖尿病の脂肪
過多のＺｕｃｋｅｒラットは、網膜毛細血管の基底膜肥厚、周細胞の損失、毛細
血管の細胞過多、および内皮細胞間接合の増加を含む微小血管網膜症を発症する
（Ｄａｎｉｓら、Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．３４
：２３６７−２３７１（１９９３）；およびＤｏｓｓｏら、Ｄｉａｂｅｔｏｌｏ
ｇｉａ３３：１３７−１４４（１９９０））。糖尿病の脂肪過多のＺｕｃｋｅ
ｒラットにおいて起こることが知られている微小血管の変化は、ＶＥＧＦおよび
血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）のレベルの上昇、ならびにＰＴＫ経路、特にホ
スファチジルイノシトール−３−キナーゼ（ＰＩ３−Ｋ）およびミトゲン活性化
タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）を含む経路の活性化に関連する。同腹仔の各対
は、６ヶ月齢〜７ヶ月齢であった。ラットには、Ｐｕｒｉｎａ５００８ラット食
の食餌を与えた。この動物を、ＵｓｅｏｆＡｎｉｍａｌｓｉｎＯｐｈｔ
ｈａｌｍｉｃａｎｄＶｉｓｉｏｎＲｅｓｅａｒｃｈについて、ＴｈｅＡ
ｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｆｏｒＲｅｓｅａｒｃｈｉｎＶｉｓｉｏｎａｎ
ｄＯｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ（ＡＲＶＯ）Ｓｔａｔｅｍｅｎｔに従って処
置した。平均血中グルコース値は、死亡時にグルコースオキシダーゼアッセイに
よって測定して、糖尿病の脂肪過多のＺｕｃｋｅｒラットについて５００ｍｇ／
ｄｌよりも大きく、コントロールの脂肪の少ないラットについて１２０ｍｇ／ｄ
ｌであった（Ｄａｎｉｓら（１９９３）、前出）。

【００５２】ケタミン（４０ｍｇ／ｋｇ）およびキシラジン（４ｍｇ／ｋｇ）の腹腔内注射
後、ゲニステイン（ＬＣＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｗｏｂｕｒｎ，ＭＡ）を
１０ｍｇ／ｍｌの濃度でＤＭＳＯに溶解し、これを、５０ｍｇ／ｋｇ体重の用量
で、糖尿病の脂肪過多のＺｕｃｋｅｒラットおよび脂肪の少ないラット（非処置
群）に腹腔内注射した。２時間後、注射を繰り返した。

【００５３】２４時間後、心臓内ペントバルビタールの注射によって、動物を屠殺した。次
いで、１ｍＭのオルトバナジン酸ナトリウムをラットの眼に注射して、ホスファ
ターゼ活性を阻害し、眼を摘出し、そして前上葉区を切除した。ピンセットを用
いて硝子体を除去し、網膜を網膜色素性上皮／脈絡膜から剥離し、そして視神経
から切断した。網膜組織を、１２５μｌの氷***解緩衝液（１５０ｍＭＮａＣ
ｌ、１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００、０．５％デオキシコール酸ナトリウム
、０．１％ＳＤＳ、５０ｍＭＴｒｉｓ、１００μｇ／ｍｌフェニルメチル
スルホニルフルオライド（ＰＭＳＦ）、０．３μｇ／ｍｌＥＤＴＡ、０．７μ
ｇ／ｍｌぺプスタチンＡ、０．５μｇ／ｍｌロイペプチン、１ｍＭオルト
バナジン酸ナトリウム、および５０μＭフッ化ナトリウム）を有するチューブ
に置いた。網膜組織をガラスホモジナイザーで均質化し、次いで、等量の２Ｘ
ＳＤＳサンプル緩衝液（１６０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ６．８、４％Ｓ
ＤＳ、３０％グリセロール、５Ｂβ−メルカプトエタノール(mcercaptoethano
l)、１０ｍＭジチオスレイトール、０．０１％ブロモフェノールブルー）を
加えた。網膜ホモジネートを、９５℃で５分間煮沸し、そして１３，０００ｒｐ
ｍで１０分間遠心分離した。上澄みを集め、そして−８０℃で保存した。これら
の全部の網膜サンプルを、ゲル電気泳動およびウェスタン免疫ブロット分析のた
めに使用した。

【００５４】タンパク質濃度を、ＰｉｅｒｃｅＢＣＡ法によって測定した。合計のタンパ
ク質プロフィールは、糖尿病の脂肪過多のＺｕｃｋｅｒラットの網膜が、脂肪の
少ないコントロールと比較して、６７ｋＤａでより強く染色したバンドを有した
ことを明らかにした。ゲニステインでの処置は、糖尿病の脂肪過多のＺｕｃｋｅ
ｒラットにおいて６７ｋＤａのバンドの染色の量を減少させた。合計のタンパク
質プロフィールにおける他のバンドは、ゲニステインでの処置にかかわりなく、
変化していないようであった。

【００５５】抗ホスホチロシン抗体（ＰＹ２０；１：５００希釈；Ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏ
ｎＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｌｅｘｉｎｇｔｏｎ，ＫＹ）、抗ＰＣＮＡ抗体
（１：２００希釈）、抗ミトゲン活性化タンパク質キナーゼ抗体（１：１００希
釈；ＳａｎｔａＣｒｕｚＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎｔ
ａＣｒｕｚ，ＣＡ）、抗ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ抗体（１：
５００希釈；ＵｐｓｔａｔｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．，Ｌａｋ
ｅＰｌａｃｉｄ，ＮＹ）を、ウェスタン免疫ブロット分析の第１の抗体として
使用した。西洋わさびぺルオキシダーゼ（ＨＲＰ）結合ヤギ抗マウスＩｇＧ抗体
または抗ウサギＩｇＧ抗体（Ｂｉｏ−ＲａｄＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎ
ｃ．，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）を、第２の抗体として使用した。アビジン−Ｈ
ＲＰ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）を使用して、ビオチン化された分子マーカーを検出した
。

【００５６】網膜組織サンプルを、免疫沈降緩衝液（１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００、１
５０ｍＭＮａＣｌ、１０ｍＭＴｒｉｓ、ｐＨ７．４、１ｍＭＥＧＴＡ、０
．２ｍＭバナジン酸ナトリウム、０．２ｍＭＰＭＳＦ、０．５％ＮＰ−４
０）に加え、そして均質化した。８，０００ｒｐｍ、４℃で１０分間の遠心分離
後、上澄みを得た。タンパク質濃度を、ＰｉｅｒｃｅＢＣＡ法によって測定し
た。次いで、２０μｇのアガロース結合ホスホチロシン抗体（ＰＹ２０；Ｔｒａ
ｎｓｄｕｃｔｉｏｎＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を、各ミリグラムの網膜ホモ
ジネートに加えた。網膜ホモジネートを、４℃で一晩振とうしながら、アガロー
ス結合ホスホチロシン抗体とインキュベートした。遠心分離（８，０００ｒｐｍ
で１０分間）によってペレットを集め、そして細胞溶解緩衝液で３回リンスした
。網膜ホモジネート１ミリグラムあたり１５０μｌの１ＸＳＤＳサンプル緩衝
液中にペレットを再懸濁し、そして９５℃で５分間煮沸した。これらの免疫沈降
したサンプルを、ゲル電気泳動のために使用した。

【００５７】タンパク質の量が等量の網膜サンプルを、Ｂｉｏ−ＲａｄＰｒｏｔｅａｎ
ＩＩ装置を用いて、４〜２０％勾配のミニゲル（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）上で、一定の
２００Ｖで３５分間電気泳動した。ブロードレンジのビオチン化した（６．５〜
２００ｋＤａ）分子量タンパク質マーカーおよび予備染色した（１８．５〜１０
６ｋＤａ）分子量タンパク質マーカー（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）を、サンプルと同時に
電気泳動にかけた。電気泳動後、クマシーブリリアントブルー染料での全タンパ
ク質染色のため、またはウェスタン免疫ブロット分析のために、ゲルを処理した
。

【００５８】ゲル電気泳動後、ゲルを４５％メタノールと１０％酢酸の水性溶液中に３０分
間固定した。次いで、それらを飽和ピクリン酸溶液に短時間含浸し、そして０．
２５％水性クマシーブリリアントブルー（Ｒ−２５０）で最低２時間染色した。
ゲルを１０％酢酸溶液中で脱染色した。この手順を３回繰り返した。

【００５９】ウェスタン免疫ブロット分析のために、トランスブロットＳＤ装置（Ｂｉｏ−
Ｒａｄ）を用いて、ゲルをニトロセルロース膜（ＣｏｓｔｅｒＳｃｉｅｎｔｉ
ｆｉｃＣｏｒｐ．Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）上に電気ブロットした。チロシ
ンリン酸化タンパク質の検出のための膜を、室温で１時間、Ｔｒｉｓ緩衝化生理
食塩水（ＴＢＳ；２０ｍＭＴｒｉｓおよび１５０ＭｍＮａＣｌ、ｐＨ７．５
）中の３％ウシ血清アルブミンとインキュベートした。他のタンパク質の検出の
ための膜を、室温で１時間、ＴＢＳ中の２％無脂ドライミルク（Ｂｉｏ−Ｒａｄ
）とインキュベートした。次いで、各膜を、４℃で一晩、第１の抗体溶液とイン
キュベートした。次いで、膜をＴＢＳでリンスし、そして室温で２時間、ＨＲＰ
結合ラット抗マウスＩｇＧ（ＪａｃｋｓｏｎＩｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，ＷｅｓｔＧｒｏｖｅ，ＰＡ）または抗
ウサギＩｇＧ抗体（Ｂｉｏ−Ｒａｄ；１：１，０００希釈）およびアビジン−Ｈ
ＲＰ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ；１：１０，０００希釈）とインキュベートした。０．２
％Ｔｗｅｅｎ−２０を含むＴＢＳおよびＴＢＳのみを用いた最終リンスシリー
ズの後、膜を、増強された化学ルミネセンス（ＥＣＬ）免疫検出試薬（Ａｍｅｒ
ｓｈａｍＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅＩｎｃ．，ＡｒｌｉｎｇｔｏｎＨｅｉ
ｇｈｔｓ，ＩＬ）と反応させ、そしてＸ線フィルムに曝露した。各ウェスタン免
疫ブロット分析を、少なくとも３回繰り返した。

【００６０】総合的に、糖尿病の網膜におけるチロシンリン酸化タンパク質は、脂肪の少な
いコントロールと比較して、５０、６６、９７および１１６ｋＤａで増加した。
ゲニステイン処置した糖尿病のラットは、非処置群と比較して、各分子量で染色
の減少を示した。

【００６１】免疫沈降したチロシンリン酸化タンパク質のウェスタン免疫ブロット分析は、
脂肪の少ないコントロールと比較して、糖尿病のラットにおいて、８５ｋＤａで
ＰＩ３−Ｋのチロシンリン酸化の増加を示した。チロシンリン酸化ＰＩ３−Ｋ染
色バンドは、ゲニステインでの処置後、特に糖尿病のラットにおいて減少した。

【００６２】４４ｋＤａでのチロシンリン酸化ＭＡＰＫは、脂肪の少ないコントロールと比
較して、糖尿病のラットにおいて増加した。ＰＩ３−Ｋと同様に、処置群におけ
るＭＡＰＫのレベルもまた、非処置動物群と比較して減少した。

【００６３】２対のラットを、網膜中のＰＣＮＡの免疫組織化学的分析のために使用した。
ケタミンおよびキシラジンを用いた深い麻酔下で、４匹のラットを、１ｍＭのオ
ルトバナジン酸塩を含む０．１Ｍリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ；ｐＨ７．４
）で心臓を通して(transcardially)灌流し、続いて固定のために０．１ＭＰＢ
Ｓ中の２％パラホルムアルデヒドで灌流した。次いで、眼を取り出し、同じ固定
液中に３０分間浸漬した。前上葉区を除去し、後上葉区を５％から１５％までの
段階的スクロース溶液に２時間移し、そして２０％スクロース溶液中、４℃で一
晩インキュベートした。凍結保護後、眼をＯ．Ｃ．Ｔ．化合物（Ｍｉｌｅｓ，Ｉ
ｎｃ．，Ｅｌｋｈａｒｔ，ＩＮ）中で成型し、そしてイソペンタン中、ドライア
イスで凍結させた。後上葉区を８μｍの切片に切断した。

【００６４】切片を３％過酸化物で処理して、内在するぺルオキシダーゼを遮断し、そして
２％正常ウマ血清と２０分間インキュベートした。０．１ＭＰＢＳ中で３回リ
ンスした後、切片を、抗ＰＣＮＡ抗体（１：１，０００希釈）と４℃で一晩イン
キュベートした。インキュベーション後、切片を０．１ＭＰＢＳ中でリンスし
、そしてビオチン化抗マウスＩｇＧ抗体（ＶｅｃｔｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｉ
ｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ；１：５００希釈）と室温で３０
分間インキュベートし、次いで過酸化物標識化ストレプトアビジン（Ｋｉｒｋｅ
ｇａａｄ＆ＰｅｒｒｙＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｇａｉｔｈ
ｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ；１：５００希釈）とインキュベートした。スライドを３
−アミノ−９−エチルカルバゾール（ＡＥＣ）溶液（ＳｉｇｍａＣｈｅｍｉｃ
ａｌＣｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）で処理して、可視化した。各スライド
セットを同時に試験し、３つの異なるセットを研究した。グリセリンゼリー（７
％ゼラチン、５４％グリセリン、０．７％フェノール）と共にマウントした後、
Ｎｏｍａｒｓｋｉ光学（ＣａｒｌＺｅｉｓｓ，Ｔｈｏｒｎｗｏｏｄ，ＮＹ）を
用いて顕微鏡写真を撮った。

【００６５】糖尿病の脂肪過多のＺｕｃｋｅｒラットの網膜において、３６ｋＤａでのＰＣ
ＮＡのレベルは、脂肪の少ないラットと比較して増加した。ゲニステインは、非
処置群と比較してこの増加を減少させたが、脂肪の少ないコントロールのレベル
までは低下させなかった。

【００６６】脂肪の少ないコントロールと比較した場合、神経線維ならびに内核層および外
核層中の細胞の核における強い陽性免疫反応を、糖尿病の脂肪過多のＺｕｃｋｅ
ｒラットにおいて観察した。しかし、ゲニステイン処置した糖尿病のラットにお
いては、より少ない免疫陽性細胞を検出した。糖尿病のラットの網膜を、抗ＰＣ
ＮＡ抗体の代わりに非免疫マウスＩｇＧとインキュベートすると、免疫反応を示
さなかった。

【００６７】上記の結果は、ゲニステインが、糖尿病のラットの網膜において、ホスホチロ
シンの増加したレベルを全体として減少させ、かつリン酸化ＰＩ３−Ｋ、ＭＡＰ
ＫおよびＰＣＮＡの増加したレベル（これは、細胞が、複製のための用意ができ
ていることを示す）を減少させたことを示す。これらの結果は、ゲニステインが
、視覚変化前の糖尿病の動物の網膜においてＰＴＫ経路の活性化を阻害すること
ができ、その結果、糖尿病性網膜症を予防することができることを示唆する。

【００６８】（実施例２）本実施例は、タンパク質チロシンキナーゼ経路のインヒビターの、眼炎症を予
防的および治療的に処置する能力を示す。

【００６９】ヘルビマイシンＡ（ＨＡ）は、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｈｙｇｒｏｓｃｏ
ｐｉｃｕｓ株によって産生されるベンゼノイドアンサマイシン(ansamycin)抗生物質である。それは、チロシンキナーゼレセプターの触媒部分にしっかりと結合
し、かつそれはタンパク質チロシンリン酸化の強力かつ特異的なインヒビターで
あり、タンパク質メッセンジャーのリン酸化および続く細胞の活性化を防止し、
かつ細胞増殖を阻害する。

【００７０】実験室での動物のケアの原則（ＮＩＨ刊行Ｎｏ．８６−２３、１９８５年改訂
）に従った。全ての研究について、色素性ウサギ、体重２．５〜３ｋｇを使用し
た。動物を、ケタミン（２５ｍｇ／ｋｇ）とキシラジン（５ｍｇ／ｋｇ）とのカ
クテルを用いて麻酔し、瞳孔を局所１％トロピカミドおよび０．５％フェニレフ
リンを用いて拡張させた。

【００７１】ＳＦ６ガスの注入によって硝子体の液状化を行った。前眼房の穿刺（０．１ｍ
ｌ）後、純粋なＳＦ６ガス（０．３ｍｌ）を注入した。硝子体の液状化を最大に
するために、３０ゲージのニードルを下位に挿入した。本発明者らは、冷凍固定
を行わず、ガス−液体交換も行わなかった。従って、関連する合併症を回避した
。

【００７２】ウサギ真皮線維芽細胞を、無菌条件下で調製したウサギ臀部バイオプシー材料
から得た。初期培養物を、空気中５％二酸化炭素の湿潤雰囲気下で７２時間、３
０％ウシ胎児血清、抗生物質（ペニシリンＧナトリウム、硫酸ストレプトマイシ
ン）および抗真菌剤（アンホテリシンＢ）を有するダルベッコの改変イーグル培
地（ＤＭＥＭ）中でインキュベートした。次いで、培地を、１０％ウシ胎児血清
、上記抗生物質および抗真菌剤を有するＤＭＥＭに替えた。培養物を１週間継代
培養した。それらを３．５ｍｌの０．０４％トリプシンと４分間インキュベート
し、停止培地中の細胞を集めることによって、細胞を採取した。分散した細胞を
１，０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、そして１ｍｌのリン酸緩衝化生理食塩水
中に再懸濁させた。０．０５ｍｌのアリコートの細胞計数後、０．１ｍｌのリン
酸緩衝化生理食塩水中２．５×１０⁴細胞の最終濃度に達するように懸濁液を希釈した。

【００７３】ＳＦ６ガスの注入から１４日後、顕微鏡制御下で、鼻上(superonasal)四半部における角膜強膜縁の後方３ｍｍに３０ゲージのニードルを挿入した。ニードル
のべベルを上方に向けて、０．１ｍｌの無菌リン酸緩衝化生理食塩水中に懸濁し
た２．５×１０⁴個の同一源のウサギ真皮線維芽細胞を、視神経の先端のちょうど前方に注入した。これを全てのウサギの両眼に行った。ウサギを即座に１時間
あおむけにして、細胞を硝子体表面上に固定させた。

【００７４】群１では、ＨＡの最終眼内濃度を約２０μｇとするために、線維芽細胞の注入
から１時間後（予防的）、各ウサギ（ｎ＝１８）の一方の眼に、０．１ｍｌのリ
ン酸緩衝化生理食塩水中の２３μｇのＨＡを注入した。コントロール眼として、
各ウサギのもう片方の眼に、０．１ｍｌのリン酸緩衝化生理食塩水を注入した。
群２では、線維芽細胞の注入から２日後（治療的）、各ウサギ（ｎ＝１０）の一
方の眼に、０．１ｍｌのリン酸緩衝化生理食塩水中の２３μｇのＨＡを注入し、
他方、もう片方の眼に、０．１ｍｌのリン酸緩衝化生理食塩水を注入し、コント
ロールとした。群３では、線維芽細胞の注入から１時間後および再び２日後、各
ウサギ（ｎ＝９）の一方の眼に、１１．５μｇのＨＡ（眼中１０μｇ）を注入し
、他方、もう片方の眼に、０．１ｍｌのリン酸緩衝化生理食塩水を注入した。

【００７５】線維芽細胞注入から３日後、各眼を間接検眼鏡検査によって試験し、眼底写真
を撮った。硝子体腔の曇りによって判定される炎症は、眼底写真によって軽いま
たは重いに類別した。重い炎症は、写真において、視神経先端付近の延髄翼の有
髄の「刷子縁」の可視化を妨害するのに十分な曇りを生じた。

【００７６】線維芽細胞注入から３日後、炎症の重篤度（硝子体の曇りによって判定した）
は、コントロール眼と処置眼との間で有意に異なっていた。群１では、重い炎症
は、コントロール眼では４７．１％に対し、処置眼では０％（ｐ＜０．０１）存
在した。群３では、重い炎症は、コントロール眼では７７．８％に対し、処置眼
では２２．２％（ｐ＜０．０５）存在した。群２では、重い炎症は、コントロー
ル眼では５０％に対し、処置眼では１０％（ｐ＞０．０５）存在した。

【００７７】要約すると、炎症の指標である硝子体の曇りは、ＨＡで処置した眼では減少し
た。本実施例は、タンパク質チロシンキナーゼ経路のインヒビターの、眼炎症を
予防的および治療的に処置する能力を示す。

【００７８】特許、特許出願、文献刊行物などを含む、本明細書で引用した全ての参考文献
は、それらの全体を本明細書中で参考として援用する。

【００７９】本発明を好ましい実施態様を強調して記載したが、好ましい化合物および方法
のバリエーションを使用してもよいこと、および本明細書に明確に記載されてい
るのとは別の方法で本発明を実施してもよいことが意図されることは、当業者に
は明らかである。従って、本発明は、上記請求の範囲によって規定される本発明
の精神および範囲内に含まれる全ての変更を含む。

【手続補正書】

【提出日】平成１２年１１月２４日（２０００．１１．２４）

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】特許請求の範囲

【補正方法】変更

【補正内容】

【特許請求の範囲】

【化１】〔ここでＶ、ＷおよびＸは、ヒドロ、アルコキシ、ヒドロキシル、ハロ、エステル、エーテル、カルボン酸基、カルボン酸基の薬学的に許容し得る塩、および− ＳＲ（ここでＲは水素またはアルキル基である）からなる群より選択され、Ｙは、酸素、硫黄、Ｃ（ＯＨ）、およびＣ＝Ｏからなる群より選択され、Ｚは、ヒドロおよびＣ（Ｏ）ＯＲ₁（ここでＲ₁はアルキルである）からなる群より選択される。〕の化合物、あるいはそのタンパク質チロシンキナーゼを阻害するプロドラッグまたは薬学的に許容し得る塩である、医薬。

【化２】〔ここでＶ、ＷおよびＸは、ヒドロ、アルコキシ、ヒドロキシル、ハロ、エステル、エーテル、カルボン酸基、カルボン酸基の薬学的に許容し得る塩、および− ＳＲ（ここでＲは水素またはアルキル基である）からなる群より選択され、Ｙは、酸素、硫黄、Ｃ（ＯＨ）、およびＣ＝Ｏからなる群より選択され、Ｚは、ヒドロおよびＣ（Ｏ）ＯＲ₁（ここでＲ₁はアルキルである）からなる群より選択される。〕の化合物、あるいはそのタンパク質チロシンキナーゼを阻害するプロドラッグまたは薬学的に許容し得る塩である、医薬。

【請求項３】ハロ基が、フッ素、塩素および臭素からなる群より選択され
る、請求項１または２に記載の医薬。

【請求項４】エステルがＣ₁−Ｃ₆エステルである、請求項１または２に記
載の医薬。

【請求項５】エーテルがＣ₁−Ｃ₆エーテルである、請求項１または２に記
載の医薬。

【請求項６】カルボン酸基の薬学的に許容し得る塩がナトリウム塩または
カリウム塩である、請求項１または２に記載の医薬。

【請求項７】アルキル基がＣ₁−Ｃ₆アルキル基であり、アルコキシ基がＣ ₁ −Ｃ₆アルコキシ基である、請求項１または２に記載の医薬。

【請求項８】タンパク質チロシンキナーゼ経路のインヒビターがゲニステ
インである、請求項１または２に記載の医薬。

【請求項９】ゲニステインが全身投与される、請求項１〜８のいずれかに
記載の医薬。

【請求項１０】ゲニステインが約１ｍｇ／ｋｇ／日〜約１００ｍｇ／ｋｇ
／日の量で投与されるものである、請求項９に記載の医薬。

【請求項１１】ゲニステインが約１５ｍｇ／ｋｇ／日〜約５０ｍｇ／ｋｇ
／日の量で投与されるものである、請求項１０に記載の医薬。

【請求項１２】ゲニステインが経口または注射によって投与されるものである、請求項９に記載の医薬。

【請求項１３】ゲニステインが糖尿病前症性網膜症期に投与されるものである、請求項９に記載の医薬。

【請求項１４】ゲニステインが非増殖性糖尿病性網膜症期に投与されるものである、請求項９に記載の医薬。

【請求項１５】ゲニステインの投与が糖尿病性黄斑浮腫を予防するものである、請求項１４に記載の医薬。

【請求項１６】ゲニステインの投与が糖尿病性黄斑浮腫を処置するものである、請求項１４に記載の医薬。

【請求項１７】ゲニステインが増殖性糖尿病期に投与されるものである、
請求項９に記載の医薬。

【請求項１８】増殖性糖尿病期の間の新血管形成の間に発生した瘢痕組織
を眼から外科的に除去する前、その間またはその後に、ゲニステインが投与され
るものである、請求項１７に記載の医薬。

【請求項１９】眼炎症が疾患由来のものである、請求項２〜８のいずれか
に記載の医薬。

【請求項２０】眼炎症が細菌感染またはウイルス感染由来のものである、
請求項２〜８のいずれかに記載の医薬。

【請求項２１】眼炎症が眼手術由来のものである、請求項２〜８のいずれ
かに記載の医薬。

【請求項２２】眼手術が、白内障手術、網膜手術、屈折矯正手術、または
角膜手術である、請求項２１に記載の医薬。

【請求項２３】角膜手術が角膜移植である、請求項２２に記載の医薬。

【請求項２４】角膜移植が角膜移植片拒絶反応を生じる、請求項２３に記
載の医薬。

【請求項２５】眼炎症が非糖尿病性黄斑浮腫である、請求項２〜８のいず
れかに記載の医薬。

【請求項２６】ゲニステインが、局所的、結膜下、眼球後方、眼周辺、網
膜下、脈絡膜上または眼内に投与されるものである、請求項１〜２５のいずれか
に記載の医薬。

【請求項２７】ゲニステインが、合計約０．１ｍｇ〜合計約５ｍｇの量で
眼内投与されるものである、請求項２〜８および１９〜２６のいずれかに記載の医薬。

【請求項２８】ゲニステインが、合計約０．５ｍｇ〜合計約１ｍｇの量で
眼内投与されるものである、請求項２７に記載の医薬。

【手続補正２】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００１５

【補正方法】変更

【補正内容】

【００１５】

【化３】

【手続補正３】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００２０

【補正方法】変更

【補正内容】

【００２０】

【化４】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷＦターム(参考） 4C084 AA17 NA14 ZA332 ZA891 ZB081 ZB311 ZB331 ZC351 4C086 AA01 AA02 BA08 BB01 MA01 MA04 NA14 ZA33 ZA89 ZB08 ZB31 ZB33 ZC35 4C206 AA01 AA02 CB28 MA01 MA04 NA14 ZA33 ZA89 ZB08 ZB31 ZB33 ZC35

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】糖尿病性網膜症の動物を予防的または治療的に処置する方法
であって、該糖尿病性網膜症の動物を予防的または治療的に処置するのに十分な
量のタンパク質チロシンキナーゼ経路のインヒビターを、該動物へ投与すること
を含む、方法。
【請求項２】眼炎症の動物を予防的または治療的に処置する方法であって
、該眼炎症の動物を予防的または治療的に処置するのに十分な量のタンパク質チ
ロシンキナーゼ経路のインヒビターを、該動物へ投与することを含む、方法。
【請求項３】タンパク質チロシンキナーゼ経路のインヒビターが、式【化１】〔ここでＶ、ＷおよびＸは、ヒドロ、アルコキシ、ヒドロキシル、ハロ、エステ
ル、エーテル、カルボン酸基、カルボン酸基の薬学的に許容し得る塩、および−
ＳＲ（ここでＲは水素またはアルキル基である）からなる群より選択され、Ｙは
、酸素、硫黄、Ｃ（ＯＨ）、およびＣ＝Ｏからなる群より選択され、Ｚは、ヒド
ロおよびＣ（Ｏ）ＯＲ₁（ここでＲ₁はアルキルである）からなる群より選択され
る。〕の化合物、あるいはそのタンパク質チロシンキナーゼを阻害するプロドラ
ッグまたは薬学的に許容し得る塩である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】ハロ基が、フッ素、塩素および臭素からなる群より選択され
る、請求項３に記載の方法。
【請求項５】エステルがＣ₁−Ｃ₆エステルである、請求項３に記載の方法
。
【請求項６】エーテルがＣ₁−Ｃ₆エーテルである、請求項３に記載の方法
。
【請求項７】カルボン酸基の薬学的に許容し得る塩がナトリウム塩または
カリウム塩である、請求項３に記載の方法。
【請求項８】アルキル基がＣ₁−Ｃ₆アルキル基であり、アルコキシ基がＣ ₁ −Ｃ₆アルコキシ基である、請求項３に記載の方法。
【請求項９】タンパク質チロシンキナーゼ経路のインヒビターがゲニステ
インである、請求項３に記載の方法。
【請求項１０】ゲニステインが全身投与される、請求項１および３〜９の
いずれかに記載の方法。
【請求項１１】ゲニステインが約１ｍｇ／ｋｇ／日〜約１００ｍｇ／ｋｇ
／日の量で投与される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】ゲニステインが約１５ｍｇ／ｋｇ／日〜約５０ｍｇ／ｋｇ
／日の量で投与される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】ゲニステインが経口または注射によって投与される、請求
項１０に記載の方法。
【請求項１４】ゲニステインが糖尿病前症性網膜症期に投与される、請求
項１０に記載の方法。
【請求項１５】ゲニステインが非増殖性糖尿病性網膜症期に投与される、
請求項１０に記載の方法。
【請求項１６】ゲニステインの投与が糖尿病性黄斑浮腫を予防する、請求
項１５に記載の方法。
【請求項１７】ゲニステインの投与が糖尿病性黄斑浮腫を処置する、請求
項１５に記載の方法。
【請求項１８】ゲニステインが増殖性糖尿病期に投与される、請求項１０
に記載の方法。
【請求項１９】増殖性糖尿病期の間の新血管形成の間に発生した瘢痕組織
を眼から外科的に除去する前、その間またはその後に、ゲニステインが投与され
る、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】眼炎症が疾患由来のものである、請求項２〜９のいずれか
に記載の方法。
【請求項２１】眼炎症が細菌感染またはウイルス感染由来のものである、
請求項２〜９のいずれかに記載の方法。
【請求項２２】眼炎症が眼手術由来のものである、請求項２〜９のいずれ
かに記載の方法。
【請求項２３】眼手術が、白内障手術、網膜手術、屈折矯正手術、または
角膜手術である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】角膜手術が角膜移植である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】角膜移植が角膜移植片拒絶反応を生じる、請求項２４に記
載の方法。
【請求項２６】眼炎症が非糖尿病性黄斑浮腫である、請求項２〜９のいず
れかに記載の方法。
【請求項２７】ゲニステインが、局所的、結膜下、眼球後方、眼周辺、網
膜下、脈絡膜上または眼内に投与される、請求項１〜２６のいずれかに記載の方
法。
【請求項２８】ゲニステインが、合計約０．１ｍｇ〜合計約５ｍｇの量で
眼内投与される、請求項３〜９および２０〜２７のいずれかに記載の方法。
【請求項２９】ゲニステインが、合計約０．５ｍｇ〜合計約１ｍｇの量で
眼内投与される、請求項２８に記載の方法。