JP2002338474A - Caspase inhibitor - Google Patents

Abstract

PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a caspase inhibitor which brings about therapeutic effect in regions of ischemic diseases and neurodegenerative diseases by suppressing proliferation potency of a brain cell without accompanying cell death of the brain cell and promoting differentiated induction and a pharmaceutical composition and an edible composition utilizing the caspase inhibitor. SOLUTION: This caspase inhibitor is characterized by comprising a sulfoquinovosyldiacylglycerol represented by the formula (I) (wherein R1 and R2 are each >=14C and <=22C aliphatic acid alkyl residue or alkenyl residue having >=0 and <=6 double bonds) as an active ingredient.

Description

【発明の詳細な説明】DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION

【０００１】[0001]

【発明の属する技術分野】本発明は、虚血性疾患および
神経変性疾患の治療剤およびその利用に関する。より詳
しくは、神経芽腫細胞（Ｎｅｕｒｏ２ａ）のカスパーゼ
阻害作用を有し、アポトーシス抑制作用を有する虚血性
疾患および神経変性疾患治療剤を配合してなる医薬用組
成物および食用組成物に関するものである。[0001] The present invention relates to a therapeutic agent for ischemic disease and neurodegenerative disease and its use. More specifically, the present invention relates to a pharmaceutical composition and an edible composition comprising a therapeutic agent for ischemic disease and neurodegenerative disease, which has a caspase inhibitory effect on neuroblastoma cells (Neuro2a) and an apoptosis inhibitory effect. .

【０００２】[0002]

【従来の技術】従来より、虚血性疾患例えば脳梗塞、心
筋梗塞など、さらには神経変性疾患、例えばアルツハイ
マー病、パーキンソン病などは、アポトーシスの亢進が
病態と関連していることが知られている。細胞のアポト
ーシスをともなう疾病に対し、直接その細胞のアポトー
シスを抑制することにより前記疾病を予防あるいは治療
する薬剤は広く探索されているが、実用上有効な薬剤は
未だ見い出されていない。このため、虚血性疾患および
神経変性疾患治療薬及び予防効果のある機能性食品の開
発が切望されている。2. Description of the Related Art It has been known that, in ischemic diseases such as cerebral infarction and myocardial infarction, and in neurodegenerative diseases such as Alzheimer's disease and Parkinson's disease, an increase in apoptosis is associated with the pathological condition. . Drugs that prevent or treat diseases associated with apoptosis of cells by directly suppressing apoptosis of the cells have been widely searched, but no practically effective drugs have been found yet. For this reason, development of a therapeutic drug for ischemic disease and neurodegenerative disease and a functional food having a preventive effect is eagerly desired.

【０００３】わが国における虚血性疾患および脳神経疾
患は人口の高齢化に伴い増えつつある、とりわけ脳梗塞
やアルツハイマー型痴呆等の脳神経疾患が急増してい
る。これら神経疾患においては、神経細胞のアポトーシ
スの亢進すなわちカスパーゼの活性化が要因の一つとし
て深く関わっていることが示唆されている（実験医学Ｖ
ｏｌ．１８，ｐ１７７４，２０００）。神経疾患以外の
病態として心筋梗塞、エイズ、アルコール性肝炎などに
おいても細胞のアポトーシス亢進が病態の発現につなが
っていると考えられている（Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ．
２６７，１４５６，２０００）。アポトーシスを制御す
るカスパーゼの阻害剤の開発は上記疾患の治療薬として
も有用であると考えられる。[0003] In Japan, ischemic diseases and cranial nerve diseases are increasing with the aging of the population. In particular, cranial nerve diseases such as cerebral infarction and Alzheimer's dementia are increasing rapidly. In these neurological diseases, it is suggested that enhancement of apoptosis of nerve cells, that is, activation of caspase is deeply involved as one of the factors (Experimental Medicine V
ol. 18, p 1774, 2000). In pathologies other than neurological diseases, such as myocardial infarction, AIDS, and alcoholic hepatitis, it is considered that increased cell apoptosis leads to the development of the pathology (Science, Vol.
267, 1456, 2000). The development of a caspase inhibitor that controls apoptosis is considered to be useful as a therapeutic agent for the above diseases.

【０００４】これに関連して、β−アミロイド蛋白や抗
ガン剤により惹起される神経細胞のカスパーゼファミリ
ーを阻害する作用をもつものとして合成ペプチド阻害薬
が知られている。一方、高等植物や藻類の組織に存在す
る糖脂質については、その生理活性面では解明されてい
ない部分が多く、報告類も少ないのが実情である。[0004] In this connection, synthetic peptide inhibitors are known to have the action of inhibiting the caspase family of nerve cells induced by β-amyloid protein and anticancer drugs. On the other hand, glycolipids present in tissues of higher plants and algae have not been elucidated in many aspects in terms of their physiological activities, and there are few reports.

【０００５】[0005]

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、脳神
経細胞の細胞死を伴うことなく該細胞の増殖能を抑制
し、かつ分化誘導を促進させることより虚血性疾患およ
び神経変性疾患の領域において治療効果をもたらすカス
パーゼ阻害剤、及び、このカスパーゼ阻害剤を利用した
医薬用組成物ならびに食用組成物を提供することにあ
る。SUMMARY OF THE INVENTION An object of the present invention is to suppress the proliferation ability of brain nerve cells without cell death and to promote the induction of differentiation. To provide a caspase inhibitor having a therapeutic effect, and a pharmaceutical composition and an edible composition using the caspase inhibitor.

【０００６】[0006]

【課題を解決するための手段】本発明者等は、前記課題
を解決するために、種々の海苔、藻類や陸生緑植物に存
在する糖脂質についてマウス神経細胞腫由来の神経系樹
立細胞であるＮｅｕｒｏ２ａ細胞に細胞死誘導剤である
各種抗ガン剤を添加しカスパーゼを活性化させ、その阻
害効果を検討したところ、スルホキノボシルジアシルグ
リセロール（以下、「ＳＱＤＧ」とも云う）、モノガラ
クトシルグリセロール（以下、「ＭＧＤＧ」とも云う）
およびジガラクトシルグリセロール（以下、「ＤＧＤ
Ｇ」とも云う）にカスパーゼ阻害活性を見い出し、本発
明を完成するに至った。Means for Solving the Problems In order to solve the above-mentioned problems, the present inventors have studied the establishment of nervous system cells derived from mouse neurocytomas for glycolipids present in various laver, algae and terrestrial green plants. Various anticancer agents, which are cell death inducers, were added to Neuro2a cells to activate caspases, and their inhibitory effects were examined. Sulfoquinovosyldiacylglycerol (hereinafter, also referred to as “SQDG”), monogalactosylglycerol ( (Hereinafter, also referred to as “MGDG”)
And digalactosyl glycerol (hereinafter referred to as “DGD
G ") was found, and the present invention was completed.

【０００７】すなわち、本発明によれば、次に示す式
（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）で表されるＳＱＤＧ、Ｍ
ＧＤＧ、ＤＧＤＧを有効成分としてなるカスパーゼ阻害
剤によって前記課題を解決できる。That is, according to the present invention, SQDG, M represented by the following formulas (I), (II) and (III)
The above problem can be solved by a caspase inhibitor comprising GDG and DGDG as active ingredients.

【０００８】[0008]

【化７】 Embedded image

【０００９】[0009]

【化８】 Embedded image

【００１０】[0010]

【化９】 Embedded image

【００１１】（ただし、式（Ｉ）、（ＩＩ）および（Ｉ
ＩＩ）においてＲ₁およびＲ₂は炭素数が１４以上２２以
下であり、二重結合の数が０以上６以下の脂肪酸のアル
キル残基またはアルケニル残基である。）(Wherein formulas (I), (II) and (I)
In II), R ₁ and R ₂ are an alkyl residue or an alkenyl residue of a fatty acid having 14 to 22 carbon atoms and having 0 to 6 double bonds. )

【００１２】上記ＳＱＤＧ、ＭＧＤＧ及びＤＧＤＧにお
いて、これらを構成する脂肪酸残基（上記の式（Ｉ）、
（ＩＩ）、（ＩＩＩ）のなかのＲ₁およびＲ₂がミリスチ
ン酸、パルミチン酸（以上、飽和脂肪酸）、オレイン
酸、リノール酸、リノレン酸、ジホモガンマリノレン
酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサペン
タエン酸およびドコサヘキサエン酸（以上、一価あるい
は多価の不飽和脂肪酸）からなる群から選ばれる脂肪酸
のアルキル残基またはアルケニル残基であることが望ま
しく、それぞれの式中のＲ₁およびＲ₂が同じものであっ
ても異なるものであっても良い。In the above-mentioned SQDG, MGDG and DGDG, the fatty acid residues constituting them (the above-mentioned formula (I),
R ₁ and R _{2 in} (II) and (III) are myristic acid, palmitic acid (saturated fatty acid), oleic acid, linoleic acid, linolenic acid, dihomogamma linolenic acid, arachidonic acid, eicosapentaenoic acid, docosa pentaenoic acid and docosahexaenoic acid (or, mono- or unsaturated fatty acid polyvalent) is desirably an alkyl residue or alkenyl residue of a fatty acid selected from the group consisting of, R ₁ and R ₂ in each formula May be the same or different.

【００１３】また、本発明におけるＳＱＤＧ、ＭＧＤＧ
およびＤＧＤＧは天然物由来のものでも化学合成したも
のでもさしつかえないが、例えば、藍藻類、紅藻類、褐
藻類または緑藻類に属する藻類もしくはホウレン草など
の陸生緑植物を原料として、これから有機溶剤を用いて
抽出して得られるものを適宜に精製処理を施して用いる
ことが好ましい。Further, the SQDG, MGDG of the present invention
And DGDG may be derived from natural products or chemically synthesized.For example, terrestrial green plants such as algae belonging to blue-green algae, red algae, brown algae or green algae or spinach are used as raw materials, and an organic solvent is then used. It is preferable that the product obtained by extraction is appropriately subjected to purification treatment before use.

【００１４】本発明のカスパーゼ阻害剤において、脳神
経細胞に関する賦活作用が脳神経細胞の外傷および変性
要因による障害、代謝性要因による障害、β−アミロイ
ド蛋白質による障害または脳虚血性要因による障害を予
防する作用あるいは治癒する作用であるものを対象にす
るのがよい。さらに、本発明によれば、前記のカスパー
ゼ阻害剤を有効成分として配合してなる医薬用組成物ま
たは食用組成物によって前記課題を解決できる。[0014] In the caspase inhibitor of the present invention, the activating action on brain nerve cells is an action of preventing damage due to trauma and degenerative factors of brain nerve cells, damage due to metabolic factors, damage due to β-amyloid protein or damage due to cerebral ischemic factors. Alternatively, it is better to target those that have a healing action. Further, according to the present invention, the above-mentioned problems can be solved by a pharmaceutical composition or an edible composition containing the above-mentioned caspase inhibitor as an active ingredient.

【００１５】[0015]

【発明の実施の形態】本発明において、ＳＱＤＧ、ＭＧ
ＤＧ、ＤＧＤＧはそのナトリウム塩やカリウム塩等の薬
学的に許容され得る塩を対象に含むものとする。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION In the present invention, SQDG, MG
DG and DGDG are intended to include pharmaceutically acceptable salts such as sodium salts and potassium salts thereof.

【００１６】本発明に用いられる糖脂質はグリセロール
骨格の１位もしくは２位に炭素数１４以上２２以下の飽
和脂肪酸ならびに不飽和脂肪酸を構成脂肪酸として有す
る。飽和脂肪酸の主なものはミリスチン酸、パルミチン
酸、ステアリン酸等であり、不飽和脂肪酸の主たるもの
として、パルミトオレイン酸、オレイン酸、リノール
酸、リノレン酸（ω３）、オクタデカテトラエン酸、ア
ラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサペンタエン
酸、ドコサヘキサエン酸等を例示できる。グリセロール
骨格の１位および２位の構成脂肪酸の種類はとくに限定
されるものではないが、前記の式（Ｉ）、（ＩＩ）、
（ＩＩＩ）において、それぞれのＲ₁およびＲ₂はミリス
チン酸、パルミチン酸、オレイン酸、リノール酸、リノ
レン酸、ジホモガンマリノレン酸、アラキドン酸、エイ
コサペンタエン酸、ドコサペンタエン酸およびドコサヘ
キサエン酸からなる群から選ばれる脂肪酸のアルキル残
基またはアルケニル残基であるものが望ましく、Ｒ₁お
よびＲ₂は同じものであっても、異なるものであっても
良い。The glycolipid used in the present invention has, as constituent fatty acids, a saturated fatty acid having 14 to 22 carbon atoms and an unsaturated fatty acid at position 1 or 2 of the glycerol skeleton. The main saturated fatty acids are myristic acid, palmitic acid, stearic acid and the like, and the main unsaturated fatty acids are palmitooleic acid, oleic acid, linoleic acid, linolenic acid (ω3), octadecatetraenoic acid, Arachidonic acid, eicosapentaenoic acid, docosapentaenoic acid, docosahexaenoic acid and the like can be exemplified. Although the kind of the constituent fatty acids at the 1-position and the 2-position of the glycerol skeleton is not particularly limited, the above-mentioned formulas (I), (II),
In (III), each of R ₁ and R ₂ is a group consisting of myristic acid, palmitic acid, oleic acid, linoleic acid, linolenic acid, dihomogammalinolenic acid, arachidonic acid, eicosapentaenoic acid, docosapentaenoic acid and docosahexaenoic acid. It is desirable that the fatty acid is an alkyl residue or an alkenyl residue selected from R ₁ and R ₂ and R ₃ may be the same or different.

【００１７】なお、本発明に用いる糖脂質を天然物から
採取するには、原料として藍藻類（Ａｎａｂａｅｎａ
ｖａｒｉａｂｉｌｉｓ、Ａｎａｃｙｓｔｉｓ ｎｉｄｕ
ｌａｎｓ、Ｓｐｉｒｕｌｉｎａ ｐｌａｔｅｎｓｉｓ：
スピルリナ等）、紅藻類（Ｐｏｒｐｈｙｒａ ｙｅｚ
ｏｅｎｓｉｓ：スサビノリ、Ｇｅｌｉｄｉｕｍ ａｍａ
ｎｓｉｉ：マクサ、Ｇｉｇａｒｔｉｎａ ｔｅｎｅｌｌ
ａ：スギノリ、Ｇｒａｃｉｌａｒｉａ ｖｅｒｒｕｃｏ
ｓａ：オゴノリ等）、褐藻類（Ｕｎｄａｒｉａｐｉｎｎ
ａｔｉｆｉｄａ：ワカメ、Ｈｉｚｉｋｉａ ｆｕｓｉｆ
ｏｒｍｉｓ：ヒジキ、Ｌａｍｉｎａｒｉａ ｊａｐｏｎ
ｉｃａ：マコンブ、Ｓａｒｇａｓｓｕｍｈｏｒｎｅｒ
ｉ：アカモク等）または緑藻類（Ｃｈｌａｍｉｄｏｍｏ
ｎａｓｓｐ．：クラミドモナスの一種、Ｅｎｔｅｒｏｍ
ｏｒｐｈａ ｓｐ．：アオサの一種、Ｃｈｌｏｒｅｌｌ
ａ ｓｐ．：クロレラ等）に属する藻の藻体を用いるの
が好適である。また、ホウレンソウや大麦の葉等の陸生
植物を原料とすることもできる。In order to collect the glycolipid used in the present invention from a natural product, a cyanobacterium (Anabaena) is used as a raw material.
variabilis, Anacystis nidu
lans, Spirulina platensis:
Spirulina, etc.), red algae (Porphyra yez)
oensis: Susabinori, Gelidium ama
nsii: Maxa, Gigartina tenell
a: Suginori, Gracilaria verruco
sa: Ogonori, etc.), brown algae (Undariapinn)
atifida: seaweed, Hizikia fusif
ormis: Hijiki, Laminaria japon
ica: Macomb, Sargassumhorner
i: Akamoku etc.) or green algae (Chlamidomo)
nassp. : Enterom, a kind of Chlamydomonas
orpha sp. : Chlorell, a kind of Aosa
a sp. : Chlorella etc.) are preferably used. Terrestrial plants such as spinach and barley leaves can also be used as raw materials.

【００１８】これらの藻類から得られる糖脂質の構成脂
肪酸は、脂質の１位及び２位に飽和脂肪酸もしくは多価
不飽和脂肪酸を有するするものが多い。本発明ではこの
ようなタイプのものが好ましい。例えば、紅藻類のアマ
ノリ属スサビノリの場合、その構成脂肪酸は１位にエイ
コサペンタエン酸、２位にパルミチン酸がそれぞれ多く
存在する（Ｊａｐ．Ｊ．Ｐｈｙｃｏｌ．，Ｖｏｌ．３
４，ｐ９４，１９８６）。紅藻類のオゴノリ属オゴノリ
の場合は、１位にアラキドン酸、ミリスチン酸およびパ
ルミチン酸が主として存在し、２位にパルミチン酸が多
く存在する（Ｈｙｄｒｏｂｉｏｌ．，Ｖｏｌ．２０４／
２０５，ｐ５１３，１９９０）。紅藻類のツノマタ属ツ
ノマタでは、１位にミリスチン酸、パルミチン酸、アラ
キドン酸、エイコサペンタエン酸を、２位にパルミチン
酸を主成分として含む。ヒジキ、ワカメなどの褐藻類で
は、パルミチン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン
酸が多く、また、エイコサペンタエン酸やアラキドン酸
も存在する（Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ，
Ｖｏｌ．３２，ｐ６２３，１９９１）。The constituent fatty acids of glycolipids obtained from these algae often have a saturated fatty acid or polyunsaturated fatty acid at the first and second positions of the lipid. In the present invention, such a type is preferable. For example, in the case of the red algae Amanori susabinori, the constituent fatty acids have a large amount of eicosapentaenoic acid at the first position and a large amount of palmitic acid at the second position (Jap. J. Phycol., Vol. 3).
4, p94, 1986). In the case of the red alga Ogonori, the arachidonic acid, myristic acid and palmitic acid are mainly present in the first position, and a large amount of palmitic acid is present in the second position (Hydrobiol., Vol. 204 /).
205, p513, 1990). The red algae, genus Tunumata, contains myristic acid, palmitic acid, arachidonic acid, and eicosapentaenoic acid at the first position and palmitic acid at the second position. Brown algae such as hijiki and wakame are rich in palmitic acid, oleic acid, linoleic acid, and linolenic acid, and also include eicosapentaenoic acid and arachidonic acid (Plant Cell Physiol,
Vol. 32, p623, 1991).

【００１９】本発明に用いられるＳＱＤＧ、ＭＧＤＧ、
ＤＧＤＧは、以下のようにして調製することができる。
すなわち、前記原料を適宜に細断ないしは粉砕し、ヘキ
サン、クロロホルム、アセトン、メタノール、エタノー
ル等の脂質成分抽出用有機溶媒を用いて抽出処理し、該
抽出液から溶媒を除去して全脂質を得る。ついで、シリ
カゲル、アルミナ、セファデックス、逆相吸着剤（オク
タデシルシリル化シリカゲル等）、イオン交換樹脂等を
用いたカラムクロマトグラフィーで分画処理して濃縮画
分を採取し、さらに必要に応じて濃縮精製し、最終的に
は薄層クロマトグラフィーにより精製処理して目的物で
ある糖脂質を調製することができる。SQDG, MGDG used in the present invention,
DGDG can be prepared as follows.
That is, the raw material is appropriately shredded or pulverized, extracted with an organic solvent for extracting lipid components such as hexane, chloroform, acetone, methanol, and ethanol, and the solvent is removed from the extract to obtain total lipids. . Then, fractionation treatment is performed by column chromatography using silica gel, alumina, Sephadex, a reversed-phase adsorbent (octadecylsilylated silica gel, etc.), ion exchange resin, etc., and a concentrated fraction is collected, and further concentrated if necessary. Purification and finally purification treatment by thin-layer chromatography can prepare the glycolipid as the target substance.

【００２０】本発明では、このようにして得られる糖脂
質含有物中のＳＱＤＧ、ＭＧＤＧ及びＤＧＤＧは充分に
高い純度であるため、そのままカスパーゼ阻害剤として
使用できる。あるいは、デンプン、デキストリン、セル
ロース等の公知の賦形剤を混合、形成して本発明の阻害
剤となすことも可能である。In the present invention, SQDG, MGDG and DGDG in the thus obtained glycolipid-containing substance have sufficiently high purity, and thus can be used as they are as caspase inhibitors. Alternatively, known excipients such as starch, dextrin and cellulose can be mixed and formed to form the inhibitor of the present invention.

【００２１】前述のＳＱＤＧ、ＭＧＤＧ、ＤＧＤＧを有
効成分としてなる本発明のカスパーゼ阻害剤は、脳神経
細胞を賦活し、細胞死を誘発することなくその増殖を抑
制して分化を促進する。すなわち、神経細胞賦活因子と
して代表的なレチノイン酸は、Ｎｅｕｒｏ２ａ細胞を刺
激して神経細胞様に分化せしめ、神経突起を伸展させる
作用を有するが、本発明のカスパーゼ阻害剤は単独作用
においてＮｅｕｒｏ２ａ細胞を神経細胞様に分化せし
め、神経突起を伸展させる作用が顕著である。The caspase inhibitor of the present invention comprising SQDG, MGDG and DGDG as described above as an active ingredient activates brain nerve cells and suppresses proliferation without promoting cell death to promote differentiation. That is, retinoic acid, which is a typical neuronal activator, has the effect of stimulating Neuro2a cells to differentiate into neurons and extending neurites. However, the caspase inhibitor of the present invention alone causes Neuro2a cells to act. The effect of differentiation into nerve cells and extension of neurites is remarkable.

【００２２】また、ＳＱＤＧ、ＭＧＤＧ、ＤＧＤＧを有
効成分としてなる本発明の阻害剤は脳神経細胞の外傷性
または変性要因、代謝性要因、β−アミロイド蛋白質、
脳虚血性要因等の種々の要因による障害に対して予防作
用あるいは治癒作用を有する。この一例として、β−ア
ミロイド蛋白質の活性部位を抜き出したモデルペプチド
であるβ２５−３５が惹起する神経細胞への細胞死およ
び抗ガン剤エトポシド惹起の細胞死を濃度依存的に軽減
する。なお、β−アミロイド蛋白質は、アルツハイマー
病患者の脳に沈着するアミロイドを構成する蛋白質であ
り、アルツハイマー病の原因の一つであると考えられて
いる（「医学のあゆみ」、Ｖｏｌ．１７４，ｐ６１４−
６１８，１９９５）。このことから、本発明の糖脂質含
有賦形剤は、β−アミロイド蛋白質の毒性に起因する脳
神経細胞の障害に対しても保護作用を有することが明ら
かとなった。Further, the inhibitor of the present invention comprising SQDG, MGDG, DGDG as an active ingredient can be used for traumatic or degenerative factors of brain nerve cells, metabolic factors, β-amyloid protein,
It has a preventive or curative effect on disorders caused by various factors such as cerebral ischemic factors. As an example of this, cell death to nerve cells induced by β25-35, which is a model peptide extracted from the active site of β-amyloid protein, and cell death induced by the anticancer agent etoposide are reduced in a concentration-dependent manner. In addition, β-amyloid protein is a protein constituting amyloid deposited on the brain of a patient with Alzheimer's disease and is considered to be one of the causes of Alzheimer's disease (“Ayumi of Medicine”, Vol. 174, p614). −
618, 1995). From this, it was revealed that the glycolipid-containing excipient of the present invention also has a protective effect against brain nerve cell damage due to the toxicity of β-amyloid protein.

【００２３】次に、本発明のカスパーゼ阻害剤を配合し
てなる医薬用組成物および食用組成物について説明す
る。ＳＱＤＧ、ＭＧＤＧ、ＤＧＤＧを有効成分としてな
る本発明の前記阻害剤は、これをそのまま、あるいは慣
用の医薬製剤担体とともに医薬用組成物となし、動物お
よびヒトに投与することができる。医薬用組成物の剤形
としては特に制限されるものではなく、必要に応じて適
宜に選択すればよいが、例えば、錠剤、カプセル剤、顆
粒剤、細粒剤、散剤等の経口剤、注射剤、坐剤等の非経
口剤があげられる。投与量は、通常、成人で糖脂質（Ｓ
ＱＤＧ、ＭＧＤＧ及びＤＧＤＧの合計量）の重量として
１日あたり２０ｍｇ以上６００ｍｇ以下を数回に分けて
服用するのが適当である。Next, a pharmaceutical composition and an edible composition containing the caspase inhibitor of the present invention will be described. The inhibitor of the present invention comprising SQDG, MGDG and DGDG as an active ingredient can be administered to animals and humans as such or as a pharmaceutical composition together with a conventional pharmaceutical preparation carrier. The dosage form of the pharmaceutical composition is not particularly limited and may be appropriately selected as needed. For example, tablets, capsules, granules, fine granules, oral preparations such as powders, injections, etc. Preparations, suppositories and the like. The dosage is usually the amount of glycolipid (S
It is appropriate to take 20 mg or more and 600 mg or less per day in terms of the weight of QDG, MGDG and DGDG) in several divided doses.

【００２４】本発明において錠剤、カプセル剤、顆粒
剤、細粒剤、散剤としての経口剤は、例えば、デンプ
ン、乳糖、白糖、マンニット、カルボキシメチルセルロ
ース、コーンスターチ、無機塩類等を用いて常法に従っ
て製造される。これらの製剤中の糖脂質の配合量は特に
限定されるものではなく適宜設計できる。この種の製剤
には本発明の阻害剤の他に、結合剤、崩壊剤、界面活性
剤、滑沢剤、流動性促進剤、矯味剤、着色剤、香料等を
適宜に使用することができる。In the present invention, oral preparations as tablets, capsules, granules, fine granules, and powders are prepared by using, for example, starch, lactose, sucrose, mannitol, carboxymethylcellulose, corn starch, inorganic salts, and the like in a conventional manner. Manufactured. The amount of glycolipid in these preparations is not particularly limited and can be appropriately designed. In this type of preparation, in addition to the inhibitor of the present invention, a binder, a disintegrant, a surfactant, a lubricant, a fluidity promoter, a flavoring agent, a coloring agent, a flavor, and the like can be appropriately used. .

【００２５】ここに、結合剤としてデンプン、デキスト
リン、アラビアゴム末、ゼラチン、ヒドロキシプロピル
スターチ、メチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプ
ロピルセルロース、結晶セルロース、エチルセルロー
ス、ポリビニルピロリドン、マクロゴール等を例示でき
る。崩壊剤としてはデンプン、ヒドロキシプロピルスタ
ーチ、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボ
キシメチルセルロースカルシウム、カルボキシメチルセ
ルロース、低置換ヒドロキシプロピルセルロース等を例
としてあげることができる。界面活性剤の例としてラウ
リル硫酸ナトリウム、大豆レシチン、蔗糖脂肪酸エステ
ル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル等を
あげることができる。滑沢剤では、タルク、ロウ類、水
素添加植物油、蔗糖脂肪酸エステル、ステアリン酸マグ
ネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸アル
ミニウム、ポリエチレングリコール等を例示できる。流
動性促進剤では、軽質無水ケイ酸、乾燥水酸化アルミニ
ウムゲル、合成ケイ酸アルミニウム、ケイ酸マグネシウ
ム等を例としてあげることができる。また、糖脂質は懸
濁液、エマルション剤、シロップ剤、エリキシル剤とし
ても投与することができ、これらの各種剤形には、矯味
矯臭剤、着色剤を含有させてもよい。Examples of the binder include starch, dextrin, gum arabic, gelatin, hydroxypropyl starch, sodium methylcellulose, hydroxypropylcellulose, crystalline cellulose, ethylcellulose, polyvinylpyrrolidone, macrogol and the like. Examples of the disintegrant include starch, hydroxypropyl starch, sodium carboxymethylcellulose, calcium carboxymethylcellulose, carboxymethylcellulose, low-substituted hydroxypropylcellulose and the like. Examples of the surfactant include sodium lauryl sulfate, soybean lecithin, sucrose fatty acid ester, polyoxyethylene sorbitan fatty acid ester and the like. Examples of the lubricant include talc, waxes, hydrogenated vegetable oil, sucrose fatty acid ester, magnesium stearate, calcium stearate, aluminum stearate, polyethylene glycol and the like. Examples of the fluidity promoter include light anhydrous silicic acid, dried aluminum hydroxide gel, synthetic aluminum silicate, magnesium silicate and the like. Glycolipids can also be administered as suspensions, emulsions, syrups and elixirs, and these various dosage forms may contain flavoring and coloring agents.

【００２６】非経口剤として本発明の所望の効果を発現
せしめるには、患者の年齢、体重、疾患の程度により異
なるが、通常、成人で糖脂質の重量として１日あたり１
〜６０ｍｇの静注、点滴静注、皮下注射、筋肉注射が適
当である。この非経口投与剤は常法に従って製造され、
希釈剤として一般に注射用蒸留水、生理食塩水、ブドウ
糖水溶液、注射用植物油、ゴマ油、ラッカセイ油、大豆
油、トウモロコシ油、プロピレングリコール等を用いる
ことができる。さらに必要に応じて、殺菌剤、防腐剤、
安定剤を加えてもよい。また、この非経口剤は安定性の
点から、バイアル等に充填後冷凍し、通常の凍結乾燥処
理により水分を除き、使用直前に凍結乾燥物から液剤を
再調製することもできる。さらに必要に応じて、等張化
剤、安定剤、防腐剤、無痛化剤を加えてもよい。これら
製剤中の糖脂質の配合量は特に限定されるものではなく
任意に設定できる。その他の非経口剤の例として、外用
液剤、軟膏等の塗布剤、直腸内投与のための坐剤等があ
げられ、これらも常法に従って製造される。In order to exhibit the desired effects of the present invention as a parenteral preparation, it depends on the age, weight and degree of disease of the patient, but usually, the weight of glycolipid is 1 per day for adults.
Intravenous, intravenous, intravenous, subcutaneous and intramuscular injections of up to 60 mg are appropriate. This parenteral administration is manufactured according to a conventional method,
As the diluent, distilled water for injection, physiological saline, aqueous glucose solution, vegetable oil for injection, sesame oil, peanut oil, soybean oil, corn oil, propylene glycol and the like can be generally used. If necessary, disinfectants, preservatives,
Stabilizers may be added. In addition, from the viewpoint of stability, the parenteral preparation can be frozen after filling into a vial or the like, and water can be removed by a usual lyophilization treatment to prepare a liquid preparation from the lyophilized product immediately before use. Further, if necessary, an isotonic agent, a stabilizer, a preservative, and a soothing agent may be added. The amount of glycolipid in these preparations is not particularly limited and can be set arbitrarily. Examples of other parenteral preparations include liquid preparations for external use, ointments and other suppositories, suppositories for rectal administration, and the like, which are also produced according to conventional methods.

【００２７】本発明の他の組成物の好適な態様は食用組
成物である。すなわち、前述のようにして得られるＳＱ
ＤＧ、ＭＧＤＧ、ＤＧＤＧを有効成分としてなるカスパ
ーゼ阻害剤は、これをそのまま液状、ゲル状あるいは固
形状の食品、例えばジュース、清涼飲料、茶、スープ、
豆乳、サラダ油、ドレッシング、ヨーグルト、ゼリー、
プリン、ふりかけ、育児用粉乳、ケーキミックス、粉末
状または液状の乳製品、パン、クッキー等に添加した
り、必要に応じてデキストリン、乳糖、澱粉等の賦形剤
や香料、色素等とともにペレット、錠剤、顆粒等に加工
したり、またゼラチン等で被覆してカプセルに成形加工
して健康食品や栄養補助食品等として利用できる。A preferred embodiment of another composition of the present invention is an edible composition. That is, the SQ obtained as described above
DG, MGDG, caspase inhibitor comprising DGDG as an active ingredient can be used as it is as a liquid, gel or solid food such as juice, soft drink, tea, soup,
Soy milk, salad oil, dressing, yogurt, jelly,
Pudding, sprinkle, powdered milk for childcare, cake mix, powdered or liquid dairy products, bread, cookies, etc., or, if necessary, dextrin, lactose, pellets with excipients such as starch, flavors, pigments, etc. It can be processed into tablets, granules, or the like, or coated with gelatin or the like and formed into capsules to be used as health foods, dietary supplements, and the like.

【００２８】これらの食品類あるいは食用組成物におけ
る本発明のカスパーゼ阻害剤の配合量は、当該食品や組
成物の種類や状態等により一律に規定しがたいが、約
０．０１〜５０重量％、より好ましくは０．１〜３０重
量％である。配合量が０．０１重量％未満では経口摂取
による所望の効果が小さく、５０重量％を超えると食品
の種類によっては風味を損なったり当該食品を調製でき
なくなる場合がある。なお、本発明のカスパーゼ阻害剤
は、これをそのまま食用に供してもさしつかえない。Although the amount of the caspase inhibitor of the present invention in these foods or edible compositions cannot be uniformly defined depending on the type and condition of the food or composition, it is about 0.01 to 50% by weight. , More preferably 0.1 to 30% by weight. If the amount is less than 0.01% by weight, the desired effect by oral ingestion is small, and if it exceeds 50% by weight, depending on the type of food, the flavor may be impaired or the food may not be prepared. The caspase inhibitor of the present invention may be used for food as it is.

【００２９】本発明の医薬用組成物および食用組成物
は、脳神経細胞の障害を予防あるいは治癒をねらいとし
て利用するものであれば、それを使用する上で何ら制限
を受けることなく適用されるが、とりわけ外傷性、変性
による脳神経細胞障害、代謝性の要因による脳神経細胞
障害、脳虚血性脳神経細胞障害、パーキンソン病または
ダウン症による脳神経細胞障害等の治癒に対して有効で
ある。また、これらの疾患の予防措置の手段としても使
用することが可能である。The pharmaceutical composition and the edible composition of the present invention can be applied without any limitation in their use as long as they are used to prevent or cure brain nerve cell damage. In particular, it is effective for curing cerebral nerve cell damage due to traumatic or degeneration, cerebral nerve cell damage due to metabolic factors, cerebral ischemic cerebral nerve cell damage, cerebral nerve cell damage due to Parkinson's disease or Down's syndrome, and the like. It can also be used as a means of preventive measures for these diseases.

【００３０】[0030]

【実施例】以下に本発明のカスパーゼ阻害剤について具
体的に説明する。 ［粗抽出 （粗抽出液Ａ）］スサビノリの乾燥物（約３
ｇ）を細断し、クロロホルム／メタノール（１：１，ｖ
／ｖ、以下とくに断らないかぎり同様。）１００ｍｌを
加え、ホモジナイザー中で室温下１５分間抽出処理を行
った。同様の操作をさらに２回繰り返し、抽出液を集
め、細かい抽出残渣を濾過して除去した後、分液漏斗に
移し、Ｂｌｉｇｈ−Ｄｙｅｒ法に従ってクロロホルム層
と水−メタノール層とに分離した。クロロホルム層を採
り、減圧下で濃縮、乾固して乾固物を得た（抽出量５４
ｍｇ、収率１．８％）。この乾固物を少量のクロロホル
ム／メタノール（１：４）に溶解させ、これを脂質の粗
抽出液Ａとした。The caspase inhibitor of the present invention will be specifically described below. [Crude extraction (crude extract A)] Dried susabinori (about 3
g) was cut into pieces, and chloroform / methanol (1: 1, v
/ V, the same unless otherwise noted. ) 100 ml was added, and the mixture was extracted in a homogenizer at room temperature for 15 minutes. The same operation was further repeated twice, and the extract was collected, fine extraction residues were removed by filtration, then transferred to a separatory funnel, and separated into a chloroform layer and a water-methanol layer according to the Bright-Dyer method. The chloroform layer was collected, concentrated under reduced pressure and dried to obtain a dried product (extraction amount: 54
mg, 1.8% yield). This dried product was dissolved in a small amount of chloroform / methanol (1: 4), and this was used as crude lipid extract A.

【００３１】［粗抽出 （粗抽出液Ｂ）］上記粗抽出液
Ａの粗抽出において、クロロホルム／メタノール（１：
１）１００ｍｌに代えてヘキサン／エタノール（１：
１）６０ｍｌを用い、５０℃にて２時間抽出処理した以
外は同様に処理し、抽出乾固物（抽出量３５ｍｇ、収率
１．２％）を得た。この乾固物を少量のクロロホルム／
メタノール（１：４）に溶解させ、脂質の粗抽出液Ｂと
した。[Crude extraction (crude extract B)] In the crude extraction of the crude extract A, chloroform / methanol (1:
1) Hexane / ethanol (1:
1) The same treatment was carried out except that extraction was carried out at 50 ° C. for 2 hours using 60 ml to obtain an extracted and dried product (amount of extraction: 35 mg, yield: 1.2%). This dried product is added to a small amount of chloroform /
The crude lipid B was dissolved in methanol (1: 4) to obtain a crude lipid extract B.

【００３２】［粗抽出液Ａからの精製］１ｍｏｌ／Ｌ酢
酸ナトリウム水溶液で酢酸型としてメタノールに懸濁さ
せたＤＥＡＥ−Ｔｏｙｏｐｅａｌ（東ソー社製）を内径
１０ｍｍのガラスカラムに約５０ｍｍの高さに充填し、
クロロホルム／メタノール（１：４）１００ｍｌで前記
カラムを洗浄した。これに上記に記載の方法で２バッチ
処理して得た粗抽出液Ａを添加し、クロロホルム／メタ
ノール（１：４）１００ｍｌで溶出させフラクション１
を得た。次に、５ｍｏｌ／Ｌ酢酸アンモニウム水溶液
０．５ｍｌを添加したクロロホルム／メタノール（１：
４）１００ｍｌで溶出させフラクション２を得た。[Purification from Crude Extract A] A DEAE-Toyopeal (manufactured by Tosoh Corporation) suspended in methanol as an acetic acid form with a 1 mol / L aqueous sodium acetate solution was filled into a glass column having an inner diameter of 10 mm to a height of about 50 mm. And
The column was washed with 100 ml of chloroform / methanol (1: 4). The crude extract A obtained by performing two batch treatments as described above was added thereto, and eluted with 100 ml of chloroform / methanol (1: 4).
I got Next, chloroform / methanol (1: 1) to which 0.5 ml of a 5 mol / L ammonium acetate aqueous solution was added.
4) Elution was performed with 100 ml to obtain fraction 2.

【００３３】イアトロビーズ（Ｉａｔｒｏｎ Ｌａｂ．
社製）をメタノール懸濁させ内径１０ｍｍのガラスカラ
ムに約５０ｍｍの高さに充填し、５０ｍｌのメタノール
と５０ｍｌのクロロホルムで順次カラムを洗浄した。濃
縮・乾固したフラクション１の濃縮乾固物をクロロホル
ムに溶解させ、前記イアトロビーズカラムに添加した。
まず、クロロホルム／アセトン（２０：５）５０ｍｌで
溶出させフラクション３を得た。ついで、アセトン１０
０ｍｌさらにメタノール５０ｍｌを流し、順次カラム内
に残留する脂質を溶出させ、アセトン溶出画分（フラク
ション４）およびメタノール溶出画分（フラクション
５）を得た。Iatrobeads (Iatron Lab.
Was suspended in methanol and filled in a glass column having an inner diameter of 10 mm to a height of about 50 mm, and the column was washed with 50 ml of methanol and 50 ml of chloroform in order. The concentrated and dried product of the concentrated and dried fraction 1 was dissolved in chloroform and added to the Iatrobeads column.
First, fraction 3 was obtained by elution with 50 ml of chloroform / acetone (20: 5). Then, acetone 10
0 ml and then 50 ml of methanol were flowed, and the lipid remaining in the column was sequentially eluted to obtain a fraction eluted with acetone (fraction 4) and a fraction eluted with methanol (fraction 5).

【００３４】上記で得たフラクション２〜５の各画分を
減圧下で濃縮し、少量のクロロホルム／メタノール
（１：１）に溶解させ、これを脂質類の分析用試料とし
た。各分析用試料を薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）
に供して同定を行った。なお、ＴＬＣの展開溶媒の組成
は、それぞれフラクション２ではクロロホルム／アセト
ン／メタノール／酢酸／水＝５０：２０：１０：１５：
５、フラクション３ではヘキサン／ジエチルエーテル／
酢酸＝８０：２０：０．５、フラクション４および５で
はともにクロロホルム／メタノール／水＝７０：２１：
３である。各フラクションに含まれる脂質の組成を表１
に示す。Each of the fractions 2 to 5 obtained above was concentrated under reduced pressure, dissolved in a small amount of chloroform / methanol (1: 1), and used as a sample for analyzing lipids. Each analytical sample was analyzed by thin layer chromatography (TLC)
For identification. The composition of the developing solvent for TLC was as follows: in fraction 2, chloroform / acetone / methanol / acetic acid / water = 50: 20: 10: 15:
5. In fraction 3, hexane / diethyl ether /
Acetic acid = 80: 20: 0.5, and in fractions 4 and 5, both chloroform / methanol / water = 70: 21:
3. Table 1 shows the composition of lipids contained in each fraction.
Shown in

【００３５】[0035]

【表１】 [Table 1]

【００３６】以上の実験を定量化して行い、その結果か
ら、原料（スサビノリ乾燥物）中の脂質成分の組成を求
めたところ、ＳＱＤＧ：１７．０％、ＭＤＧＤ：１０．
５％、ＤＧＤＧ：２５．４％、ＰＧ：２１．５％、Ｐ
Ｃ：１５．７％、ＰＥ：微量、ＴＧ：３．０％、その
他：６．８％であった。The above experiments were quantified and the composition of the lipid component in the raw material (dried susabinori) was determined from the results. SQDG: 17.0%, MDGD: 10.
5%, DGDG: 25.4%, PG: 21.5%, P
C: 15.7%, PE: trace, TG: 3.0%, and others: 6.8%.

【００３７】上記で得たフラクション２および４のＴＬ
ＣプレートからＳＱＤＧ、ＭＧＤＧ、ＤＧＤＧそれぞれ
に相当するスポットをかきとり、クロロホルム／メタノ
ール（１：１）に溶解させ、濾過および溶媒除去してほ
ぼ純品の３種の糖脂質を得た。ついで、これらを常法に
より塩酸加水分解処理、またはリゾプス デレマー（Ｒ
ｈｉｚｏｐｕｓ ｄｅｌｅｍａｒ）由来のリパーゼ（シ
グマ社製試薬）を用いて酵素加水分解処理して、前者か
らＳＱＤＧの１位および２位の構成脂肪酸、後者から１
位の構成脂肪酸を遊離せしめた。各々のメチルエステル
化処理を経てガスクロマトグラフィー（ＧＣ）分析に供
した。The TL of fractions 2 and 4 obtained above
Spots corresponding to SQDG, MGDG, and DGDG were scraped off from the C plate, dissolved in chloroform / methanol (1: 1), filtered and the solvent was removed to obtain three types of almost pure glycolipids. Then, these are hydrolyzed with hydrochloric acid by a conventional method, or Rhizopus delemer (R
The enzyme is subjected to an enzymatic hydrolysis treatment using a lipase (hizopus delemar) -derived lipase (a reagent manufactured by Sigma), and the constituent fatty acids at positions 1 and 2 of SQDG are obtained from the former and 1 from the latter.
The constituent fatty acids of the second position were released. After each methyl esterification treatment, it was subjected to gas chromatography (GC) analysis.

【００３８】この結果、ＳＱＤＧの１位を構成する主な
脂肪酸はエイコサペンタエン酸：９１．０％、アラキド
ン酸：１．８％、パルミチン酸：４．６％であり、２位
の主な構成脂肪酸はパルミチン酸：９２．５％、オレイ
ン酸：２．８％であった。ＭＧＤＧの１位を構成する主
な脂肪酸はエイコサペンタエン酸：８５．０％、パルミ
チン酸：８．６％であり、２位の主な構成脂肪酸はエイ
コサペンタエン酸：６０．０％、パルミチン酸：２０．
０％であった。一方、ＤＧＤＧの１位を構成する主な脂
肪酸はエイコサペンタエン酸：８６．４％、パルミチン
酸：９．０％であり、２位の主な構成脂肪酸はパルミチ
ン酸：７６．０％、オレイン酸：９．２％、リノール酸
８．６％であった。As a result, the main fatty acids constituting the first position of SQDG are eicosapentaenoic acid: 91.0%, arachidonic acid: 1.8%, and palmitic acid: 4.6%. The fatty acids were palmitic acid: 92.5% and oleic acid: 2.8%. The main fatty acids constituting position 1 of MGDG are eicosapentaenoic acid: 85.0% and palmitic acid: 8.6%, and the main constituent fatty acids at position 2 are eicosapentaenoic acid: 60.0% and palmitic acid: 20.
It was 0%. On the other hand, the main fatty acids constituting the first position of DGDG are eicosapentaenoic acid: 86.4% and palmitic acid: 9.0%, and the main constituent fatty acids at the second position are palmitic acid: 76.0% and oleic acid. : 9.2% and linoleic acid 8.6%.

【００３９】［カスパーゼ−阻害活性の検証］神経芽腫
細胞のモデル細胞であるＮｅｕｒｏ２ａ細胞は、マウス
神経芽細胞腫より樹立された細胞株であり、レチノイン
酸に応答して神経突起を伸展し、神経細胞様に分化す
る。そこで、このＮｅｕｒｏ２ａ細胞（理化学研究所か
ら分譲）をＴ−２５培養フラスコ中で静置培養し、ＳＱ
ＤＧ、ＭＧＤＧ、ＤＧＤＧの神経突起伸展作用、すなわ
ち分化誘導能を検討した。培養液はＤＭＥＭ培地（ダル
ベッコ社）に１０％（ｖ／ｖ）馬血清を含み、３７℃、
５％二酸化炭素混有空気中でｐＨ７．２〜７．４に保っ
た。上記で調整したＭＧＤＧ、ＤＧＤＧ及びＳＱＤＧ
は、ジメチルスルホキシドにそれぞれ溶解し、ミリポア
フィルター（０．２μｍ）にて濾過滅菌後、Ｎｅｕｒｏ
２ａ（ニューロツーエー）細胞培養液に最終的な濃度
（最終濃度）が１、１０μｍｏｌ／Ｌとなるように添加
した。また、同時にエトポシド（最終濃度５０μｍｏｌ
／Ｌ）も添加した。[Verification of caspase-inhibiting activity] Neuro2a cells, a model cell of neuroblastoma cells, are a cell line established from mouse neuroblastoma, and extend neurites in response to retinoic acid. Differentiates like nerve cells. Then, the Neuro2a cells (available from RIKEN) were statically cultured in a T-25 culture flask, and SQ
The neurite outgrowth action of DG, MGDG, and DGDG, that is, the ability to induce differentiation was examined. The culture solution contained 10% (v / v) horse serum in DMEM medium (Dulbecco) at 37 ° C.
The pH was maintained at 7.2 to 7.4 in air containing 5% carbon dioxide. MGDG, DGDG and SQDG adjusted above
Are dissolved in dimethyl sulfoxide, and sterilized by filtration through a Millipore filter (0.2 μm).
2a (Neuro 2A) was added to the cell culture solution so that the final concentration (final concentration) was 1, 10 μmol / L. At the same time, etoposide (final concentration 50 μmol)
/ L) was also added.

【００４０】２４時間培養後、Ｔｒｉｐｓｉｎ−ＥＤＴ
Ａ処理し遠心分離により細胞を回収した。細胞は抽出用
の緩衝液（２５ｍｍｏｌ／Ｌ−Ｈｅｐｅｓ、５ｍｍｏｌ
／Ｌ−ＥＤＴＡ、５ｍｍｏｌ／Ｌ−ＥＧＴＡ、１ｍｍｏ
ｌ／Ｌ−ＭｇＣｌ₂、１００ｍｍｏｌ／Ｌ−ＤＴＴ、１
０μｇ／ｍｌ−ＰｅｐｓｔａｔｉｎＡ、１０μｇ／ｍｌ
Ｌｅｕｐｅｐｔｉｎ、１ｍｍｏｌ／Ｌ−ＰＭＳＦ、ｐＨ
７．５）に懸濁し、ボルテックスミキサーによって撹拌
後、さらに超音波破砕を行い、上清をカスパーゼ粗酵素
液とした。酵素活性は、粗酵素液を２５ｍｍｏｌ／ＬＨ
ｅｐｅｓ、１０％Ｓｕｃｒｏｓｅ、０．１％ＣＨＡＰ
Ｓ、１００ｍｍｏｌ／ＬＤＴＴの存在下、１０分平衡化
させた後、基質１０μｍｏｌ／ＬのＤＥＶＤ−ＭＣＡ
（ペプチド研）を加え、蛍光光度計（励起波長３８０ｎ
ｍ、蛍光波長４６０ｎｍ）で５分間反応させた。なお、
酵素活性はＡＭＣ（ペプチド研）の蛍光強度による検量
線より算出された。得られたエトポシド誘導カスパーゼ
−３阻害活性の結果を表２に示す。After culturing for 24 hours, Tripsin-EDT
A treatment and cell collection by centrifugation. Cells were extracted with a buffer for extraction (25 mmol / L-Hepes, 5 mmol
/ L-EDTA, 5 mmol / L-EGTA, 1 mmol
1 / L-MgCl ₂ , 100 mmol / L-DTT, 1
0 μg / ml-Pepstatin A, 10 μg / ml
Leupeptin, 1 mmol / L-PMSF, pH
7.5), the mixture was stirred by a vortex mixer, and further subjected to ultrasonic crushing, and the supernatant was used as a crude caspase enzyme solution. The enzyme activity was determined by using the crude enzyme solution at 25 mmol / LH
epes, 10% Sucrose, 0.1% CHAP
S, after equilibration for 10 minutes in the presence of 100 mmol / LDTT, DEVD-MCA with 10 μmol / L substrate
(Peptide Lab) and a fluorometer (excitation wavelength 380n)
m, fluorescence wavelength 460 nm) for 5 minutes. In addition,
The enzyme activity was calculated from a calibration curve based on the fluorescence intensity of AMC (Peptide Institute). Table 2 shows the results of the obtained etoposide-induced caspase-3 inhibitory activity.

【００４１】[0041]

【表２】 [Table 2]

【００４２】表２により、ＳＱＤＧ、ＭＧＤＧ、ＤＧＤ
Ｇにエトポシド誘導カスパーゼ−３阻害活性が見られる
ことが確認された。その中で特にＳＱＤＧに強力な阻害
作用があることが判る。According to Table 2, SQDG, MGDG, DGD
It was confirmed that G exhibited etoposide-induced caspase-3 inhibitory activity. Among them, it can be seen that SQDG has a particularly strong inhibitory effect.

【００４３】［脳虚血性病変を伴う疾患の予防および治
療効果の確認］実験動物として１７８−２１０ｇ（９週
齢）のＦ３４４／ＮＳｌｃ雄性ラットを用いた。被験物
質（ＳＱＤＧ、ＭＧＤＧ、ＤＧＤＧ）は、それぞれ２．
０ｍｌの２％アラビアゴム溶液に体重１ｋｇ当たり１０
ｍｇとなるようと懸濁し、ガス通気の３０分前に経口投
与した。また対象群は２％アラビアゴム溶液を２．０ｍ
ｌ／ｋｇを経口投与した。[Confirmation of Preventive and Therapeutic Effects of Disease Associated with Cerebral Ischemic Lesions] As experimental animals, 178-210 g (9 weeks old) F344 / NSlc male rats were used. The test substances (SQDG, MGDG, DGDG) were 2.
Add 10 ml / kg body weight to 0 ml of 2% gum arabic solution.
mg and suspended orally 30 minutes before gas insufflation. The target group was 2.0 m 2% gum arabic solution.
1 / kg was administered orally.

【００４４】投与後４０分後、これらラットを常圧の容
器に入れ、９７ｖｏｌ％窒素と３ｖｏｌ％酸素とからな
る混合ガスを２Ｌ／分で通気した。通気開始から呼吸停
止に至るまでの時間（生存時間・秒）を生存時間として
測定した。結果を表３に示す。Forty minutes after the administration, the rats were placed in a container under normal pressure, and a mixed gas consisting of 97 vol% nitrogen and 3 vol% oxygen was aerated at 2 L / min. The time from the start of ventilation to the stop of breathing (survival time / second) was measured as the survival time. Table 3 shows the results.

【００４５】[0045]

【表３】 [Table 3]

【００４６】表３から、ＳＱＤＧ、ＭＧＤＧあるいはＤ
ＧＤＧの投与は低酸素負荷時においてラットの生存期間
を増加することがわかる。このことにより脳虚血性病変
を伴う疾患の予防および治療効果を有することが確認さ
れた。From Table 3, SQDG, MGDG or D
It can be seen that administration of GDG increases the survival time of rats during hypoxic load. This has been confirmed to have a preventive and therapeutic effect on diseases associated with cerebral ischemic lesions.

【００４７】［医薬用組成物、あるいは、食用組成物の
試作］上記記載の方法により調製したほぼ純品のＳＱＤ
Ｇ、ＭＧＤＧ、ＤＧＤＧ各々１５０ｍｇ、精製大豆油１
２５ｍｇ、ミツロウ１５ｍｇおよびビタミンＥ１０ｍｇ
を窒素ガス雰囲気下で約４０℃に加温し、充分に混合し
て均質な液状物とした。これをカプセル充填機に供給し
て１粒内容量３００ｍｇのゼラチン被覆カプセル製剤を
試作した。この製剤は医薬用組成物または食用組成物と
して利用できるものである。[Trial Production of Pharmaceutical Composition or Edible Composition] An almost pure SQD prepared by the method described above.
G, MGDG, DGDG 150 mg each, refined soybean oil 1
25mg, beeswax 15mg and vitamin E 10mg
Was heated to about 40 ° C. in a nitrogen gas atmosphere and mixed well to obtain a homogeneous liquid. This was supplied to a capsule filling machine to prepare a gelatin-coated capsule formulation having a capacity of 300 mg per grain. This preparation can be used as a pharmaceutical composition or an edible composition.

【００４８】［食品である味付け焼き海苔への適用］海
苔を原料として食用味付け焼き海苔を製造する方法にお
いて、採取したアサクサノリおよびスサビノリを篩付き
木製型枠に流し込んですき、乾燥機中で約５０℃にて２
時間乾燥し、さらにトンネル型ヒーターで１５０〜１８
０℃にて６〜７秒間加熱処理して焼き海苔をつくった。
別に、味付け用タレとして塩５．０ｋｇ、調味料２．０
ｋｇ、砂糖８．６ｋｇ、唐辛子０．３ｋｇ、醤油２．０
リットル、みりん１．８リットル、水６．０リットルの
混合液に加えて粗抽出液Ｂから溶媒を除去してなる抽出
乾固物２５０ｇを配合して均質化したものを作成し、こ
のタレを前記焼き海苔に塗布し乾燥して本発明の味付け
焼き海苔を試作した。このものは、市販の味付け焼き海
苔と比較して外観、風味および食感のいずれにおいても
遜色なく、健康の維持増進を訴求する食品として利用で
きるものであった。なお、粗抽出液Ｂには粗抽出液Ａと
同じレベルの充分高いレベルのＳＱＤＧ、ＭＧＤＧ、Ｄ
ＧＤＧがそれぞれ含まれていることが[Application to seasoned grilled laver as food] In a method for producing edible seasoned laver using seaweed as a raw material, the collected asakusanori and susabinori are poured into a wooden form with a sieve, and dried in a dryer for about 50 hours. 2 at ℃
After drying for 150 hours, use a tunnel heater for 150-18
A heat treatment was performed at 0 ° C. for 6 to 7 seconds to make grilled laver.
Separately, as a sauce for seasoning, 5.0 kg of salt, 2.0 seasonings
kg, sugar 8.6 kg, pepper 0.3 kg, soy sauce 2.0
Liter, 1.8 liters of mirin and 6.0 liters of water, mixed with 250 g of an extracted dry product obtained by removing the solvent from the crude extract B to prepare a homogenized mixture. The flavored grilled laver of the present invention was produced as a trial by applying it to the grilled laver and drying. This product was comparable to commercially available seasoned grilled laver in both appearance, flavor and texture, and could be used as a food product that promotes maintenance and promotion of health. The crude extract B has a sufficiently high level of SQDG, MGDG, D of the same level as the crude extract A.
That GDG is included in each

【００４９】[0049]

【発明の効果】本発明によれば、脳神経細胞に対して賦
活作用および保護作用を示し、外傷、代謝性の要因、脳
虚血、β−アミロイド蛋白質、パーキンソン病およびダ
ウン症等による脳神経細胞障害に対する予防および治癒
に極めて有用なＳＱＤＧ、ＭＧＤＧあるいはＤＧＤＧを
有効成分としてなるカスパーゼ阻害剤が提供される。該
阻害剤は単独作用により、神経細胞のアポトーシスを抑
制する機能を有する。また、本発明によれば、前記機能
を有するカスパーゼ剤を配合してなる医薬用組成物およ
び食用組成物が提供され、これらの組成物は脳神経細胞
の障害に対する予防あるいは治療のための手段として活
用され得る。Industrial Applicability According to the present invention, the compound has an activating and protective effect on cerebral nerve cells and is effective against cerebral nerve cell damage due to trauma, metabolic factors, cerebral ischemia, β-amyloid protein, Parkinson's disease and Down's syndrome. A caspase inhibitor comprising SQDG, MGDG or DGDG as an active ingredient, which is extremely useful for prevention and cure, is provided. The inhibitor has a function of suppressing apoptosis of nerve cells by acting alone. Further, according to the present invention, there are provided a pharmaceutical composition and an edible composition comprising a caspase agent having the above function, and these compositions are used as a means for preventing or treating cerebral nerve cell disorders. Can be done.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 25/16 Ａ６１Ｐ 25/16 25/28 25/28 43/00 １１１ 43/00 １１１ // Ａ２３Ｌ 1/337 １０３ Ａ２３Ｌ 1/337 １０３Ａ Ｃ０７Ｈ 15/06 Ｃ０７Ｈ 15/06 Ｃ１２Ｎ 9/99 Ｃ１２Ｎ 9/99 Ｆターム(参考） 4B018 LB05 MD27 ME04 ME14 4B019 LC05 LE01 LK02 LP17 4C057 BB02 BB03 CC05 DD01 JJ07 4C086 AA01 AA02 EA05 MA01 MA04 ZA02 ZA16 ZA54 ZA75 ZC20 ZC55 4C088 AA12 AA13 AA14 AA15 AB12 BA32 BA34 CA03 ZA02 ZA16 ZA54 ZA75 ZC20 ZC55 ──────────────────────────────────────────────────続 き Continued on the front page (51) Int.Cl. ⁷ Identification symbol FI Theme coat ゛ (Reference) A61P 25/16 A61P 25/16 25/28 25/28 43/00 111 43/00 111 // A23L 1 / 337 103 A23L 1/337 103A C07H 15/06 C07H 15/06 C12N 9/99 C12N 9/99 F term (reference) 4B018 LB05 MD27 ME04 ME14 4B019 LC05 LE01 LK02 LP17 4C057 BB02 BB03 CC05 DD01 JJ07 4C02 AA01 MA01A ZA02 ZA16 ZA54 ZA75 ZC20 ZC55 4C088 AA12 AA13 AA14 AA15 AB12 BA32 BA34 CA03 ZA02 ZA16 ZA54 ZA75 ZC20 ZC55

Claims (9)

【特許請求の範囲】[Claims] 【請求項１】 次に示す式（Ｉ）（ただし、式中Ｒ₁お
よびＲ₂はそれぞれ炭素数が１４以上２２以下で、二重
結合の数が０以上６以下の脂肪酸のアルキル残基または
アルケニル残基である）で表されるスルホキノボシルジ
アシルグリセロールを有効成分としてなることを特徴と
するカスパーゼ阻害剤。 【化１】 1. An alkyl residue of a fatty acid having the following formula (I) wherein R ₁ and R ₂ each have 14 to 22 carbon atoms and 0 to 6 double bonds: A caspase inhibitor comprising a sulfoquinovosyldiacylglycerol represented by the formula: Embedded image 【請求項２】 次に示す式（ＩＩ）（ただし、式中Ｒ₁
およびＲ₂はそれぞれ炭素数が１４以上２２以下で、二
重結合の数が０以上６以下の脂肪酸のアルキル残基また
はアルケニル残基である）で表されるモノガラクトシル
グリセロールを有効成分としてなることを特徴とするカ
スパーゼ阻害剤。 【化２】 2. A following formula (II) (provided that wherein R ₁
And R ₂ are each an alkyl or alkenyl residue of a fatty acid having 14 to 22 carbon atoms and having 0 to 6 double bonds), which contains monogalactosylglycerol as an active ingredient. A caspase inhibitor characterized by the following. Embedded image 【請求項３】 次に示す式（ＩＩＩ）（ただし、式中Ｒ
₁およびＲ₂は炭素数が１４以上２２以下で、二重結合の
数が０以上６以下の脂肪酸のアルキル残基またはアルケ
ニル残基である。）で表されるジガラクトシルグリセロ
ールを有効成分としてなることを特徴とするカスパーゼ
阻害剤。 【化３】 3. A compound represented by the following formula (III):
₁ and R ₂ are an alkyl residue or an alkenyl residue of a fatty acid having 14 to 22 carbon atoms and having 0 to 6 double bonds. Caspase inhibitor characterized by comprising digalactosylglycerol represented by the formula (1) as an active ingredient. Embedded image 【請求項４】 上記の式（Ｉ）において、Ｒ₁およびＲ₂
が、ミリスチン酸、パルミチン酸、オレイン酸、リノー
ル酸、リノレン酸、ジホモガンマリノレン酸、アラキド
ン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサペンタエン酸およ
びドコサヘキサエン酸からなる群から選ばれる多価脂肪
酸のアルキル残基またはアルケニル残基であることを特
徴とする請求項１ないし請求項３のいずれかに記載のカ
スパーゼ阻害剤。4. In the above formula (I), R ₁ and R ₂
Is, myristic acid, palmitic acid, oleic acid, linoleic acid, linolenic acid, dihomogamma linolenic acid, arachidonic acid, eicosapentaenoic acid, alkyl residue of a polyvalent fatty acid selected from the group consisting of docosahexaenoic acid or The caspase inhibitor according to any one of claims 1 to 3, which is an alkenyl residue. 【請求項５】 上記の式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）
で表されるスルホキノボシルジアシルグリセロール、モ
ノガラクトシルグリセロールおよびジガラクトシルグリ
セロールが藍藻類、紅藻類、褐藻類または緑藻類に属す
る藻類もしくはホウレン草などの陸生緑色物原料とし、
これから溶剤抽出されたものであることを特徴とする請
求項１ないし請求項４のいずれかに記載のカスパーゼ阻
害剤。5. The compound of the above formula (I), (II) or (III)
Sulfoquinovosyldiacylglycerol, monogalactosylglycerol and digalactosylglycerol represented by blue-green algae, red algae, brown algae or green algae belonging to terrestrial green materials such as algae or spinach,
The caspase inhibitor according to any one of claims 1 to 4, wherein the caspase inhibitor is extracted from the solvent. 【請求項６】 上記カスパーゼ阻害剤のカスパーゼ阻害
が、神経芽腫細胞（Ｎｅｕｒｏ２ａ）におけるカスパー
ゼ阻害であることを特徴とする請求項１ないし請求項６
のいずれか１項に記載のカスパーゼ阻害剤。6. The caspase inhibitor of the caspase inhibitor is caspase inhibition in neuroblastoma cells (Neuro2a).
The caspase inhibitor according to any one of the above. 【請求項７】 請求項１ないし請求項６のいずれか１項
に記載のカスパーゼ阻害剤を配合してなる医薬用組成
物。7. A pharmaceutical composition comprising the caspase inhibitor according to any one of claims 1 to 6. 【請求項８】 請求項１ないし請求項６のいずれか１項
に記載のカスパーゼ阻害剤を配合してなることを特徴と
する食用組成物。8. An edible composition comprising the caspase inhibitor according to any one of claims 1 to 6. 【請求項９】 次に示す式（Ｉ）、式（ＩＩ）及び式
（ＩＩＩ）（ただし、式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）中Ｒ₁およ
びＲ₂はそれぞれ炭素数が１４以上２２以下で、二重結
合の数が０以上６以下の脂肪酸のアルキル残基またはア
ルケニル残基である）で表される化合物のうち少なくと
も１種を有効成分として有する虚血性疾患、アルツハイ
マー病、パーキンソン病、エイズ及びアルコール性肝炎
の予防・治癒剤。 【化４】 【化５】 【化６】 9. The following formulas (I), (II) and (III) (wherein R ₁ and R ₂ in formulas (I) to (III) each have 14 to 22 carbon atoms, Is an alkyl or alkenyl residue of a fatty acid having 0 to 6 double bonds) as an active ingredient, ischemic disease, Alzheimer's disease, Parkinson's disease, AIDS and Prevention and cure for alcoholic hepatitis. Embedded image Embedded image Embedded image