JP2002226499A - 抗生物質ｇｅ２３０７７、その医薬上許容される塩および組成物ならびにそれらの用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【課題】抗生物質ＧＥ２３０７７複合体及びそれを構成
する因子の混合物及びそれの製造方法の提供。 【解決手段】次式で示される環状ペプチド。該ペプチド
はアクチノマデュラ（Ａｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ ｓ
ｐ．）ＤＳＭＺ１３４９１又はＧＥ２３０７７産生変異
体もしくは突然変異体を培養し、その培地から該抗生物
質を単離、精製することによって得られる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本発明は、ＧＥ２３０７７複合体と随意に
命名された微生物由来の抗生物質、およびそれを構成す
る個々の因子、すなわち、ＧＥ２３０７７因子Ａ１、Ｇ
Ｅ２３０７７因子Ａ２、ＧＥ２３０７７因子Ｂ１および
ＧＥ２３０７７因子Ｂ２、任意の比率の前記因子の混合
物、それらの医薬上許容される塩および組成物、ならび
に大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＲＮＡポリメラーゼに対する
選択的阻害活性を有する抗細菌剤としてのそれらの用途
に関する。

【０００２】本発明のもう１つの目的は、ＧＥ２３０７
７複合体、すなわち、ＧＥ２３０７７因子Ａ１、ＧＥ２
３０７７因子Ａ２、ＧＥ２３０７７因子Ｂ１およびＧＥ
２３０７７因子Ｂ２、任意の比率の前記因子の混合物
（以下、ＧＥ２３０７７化合物として記載される）の製
造方法である。

【０００３】株および発酵 アクチノマデュラ種（Ａｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ ｓ
ｐ．）ＤＳＭＺ １３４９１は、土壌サンプルから単離
され、ブダペスト条約の条項に基づき２０００年5月２
２日にＤＳＭＺ（Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ
ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ
Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ，Ｍａｓｃｈｅｒ
ｏｄｅｒ Ｗｅｂ ｌｂ，Ｄ−３８１２４ Ｂｒａｕｎ
ｓｃｈｗｅｉｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）に寄託されている。
該株には受託番号ＤＳＭＺ １３４９１が付与されてい
る。

【０００４】化合物ＧＥ２３０７７因子Ａ１、Ａ２、Ｂ
１およびＢ２の製造は、それらを産生しうるアクチノマ
デュラ（Ａｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ）株、すなわち、ア
クチノマデュラ種（Ａｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ ｓ
ｐ．）ＤＳＭＺ １３４９１またはその変異体もしくは
突然変異体を培養し、得られた抗生物質を該菌糸または
該培養ブロスから単離し、単離された抗生物質を精製
し、４つの抗生物質因子Ａ１、Ａ２、Ｂ１およびＢ２を
クロマトグラフィー手段により分離することにより達成
される。ＧＥ２３０７７複合体を製造したい場合には、
該分離工程が不要なことは明らかである。いずれの場合
にも、同化されうる炭素源、窒素源および無機塩を含有
する水性栄養培地内の好気性条件下で化合物ＧＥ２３０
７７を産生させ、得られた化合物をクロマトグラフィー
技術により精製することが好ましい。該発酵分野で通常
使用される栄養培地の多くが使用されうるが、ある種の
培地が好ましい。

【０００５】好ましい炭素源としては、グルコース、キ
シロース、セロビオース、セルロース、デンプン、トウ
モロコシ粉などが挙げられる。好ましい窒素源として
は、アンモニア、硝酸塩、大豆粉、ペプトン、肉エキ
ス、酵母エキス、トリプトン、アミノ酸、水解カゼイン
などが挙げられる。該培地中に含まれうる無機塩として
は、ナトリウム、カリウム、鉄、亜鉛、コバルト、マグ
ネシウム、カルシウム、アンモニウム、塩化物、炭酸、
硫酸、リン酸、硝酸などのイオンを与えうる通常の可溶
性塩が挙げられる。

【０００６】好ましくは、化合物ＧＥ２３０７７を産生
する株を、発酵管内または振とうフラスコ内で予備培養
し、ついで該培養を使用してジャーファーメンターに接
種して、相当量の物質を製造する。該予備培養に使用す
る培地は、より大きな発酵に使用するものと同じであっ
てもよいが、他の培地を使用することも可能である。化
合物ＧＥ２３０７７を産生する株を、２０℃〜４０℃の
温度、好ましくは２８℃〜３７℃の温度で培養すること
ができる。

【０００７】該発酵中、感受性微生物に対するバイオア
ッセイにより及び／又は処理されたブロスサンプルを大
腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＲＮＡポリメラーゼに対して試験
することにより及び／又はＨＰＬＣ分析により、該ＧＥ
２３０７７因子をモニターすることができる。ＧＥ２３
０７７化合物の最大産生は、一般には、発酵の第４日〜
第７日に生じる。

【０００８】化合物ＧＥ２３０７７は、化合物ＧＥ２３
０７７を産生するアクチノマデュラ種（Ａｃｔｉｎｏｍ
ａｄｕｒａ ｓｐ．）ＤＳＭＺ １３４９１またはその
変異体もしくは突然変異体を培養することにより製造さ
れ、培養ブロス内および／または菌糸中に見出される。

【０００９】アクチノマデュラ種ＤＳＭＺ １３４９１
の形態学的特徴 アクチノマデュラ種（Ａｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ ｓ
ｐ．）ＤＳＭＺ １３４９１は、多数の標準的固形培地
上で良く増殖する。顕微鏡検査および細胞寸法の測定
は、１／１０の強度のフミン酸培地上で増殖させた培養
を使用して行なった（Ｈ．Ｎｏｎｏｍｕｒａ，１９８４
−Ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ ａ ｎｅｗ ｍｅｄｉｕｍ ｆ
ｏｒ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｏｉｌ ａｃｔｉ
ｎｏｍｙｃｅｔｅｓ．Ｔｈｅ Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔ
ｅｓ １８，２０６−２０９）。

【００１０】２８℃で７日間のインキュベーションの
後、該株は、著しく枝分かれした栄養菌糸（直径０．５
μｍ）を示した。断片化（ｆｒａｇｍｅｎｔａｔｉｏ
ｎ）は観察されなかった。該気中菌糸は、大きな胞子
（直径１．２〜１．４μｍ）の若干ねじれた鎖を含有し
ていた。擬似胞子嚢は観察されなかった。胞子の寸法は
該菌糸の寸法より大きく、該胞子鎖の「分節化した（ｓ
ｅｇｍｅｎｔｅｄ）」外観が認められた。

【００１１】アクチノマデュラ種ＤＳＭＺ １３４９１
の培養特性 アクチノマデュラ種（Ａｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ ｓ
ｐ．ＤＳＭＺ １３４９１）を、ＡＦ−ＭＳ液体培地内
で７日間培養した（培地組成に関しては、実施例１を参
照されたい）。該菌糸を遠心分離により収穫し、１／４
の強度の無菌リンガー液（ＯＸＯＩＤ）中で２回洗浄し
た。ついで十分なリンガー液を該菌糸に加えて、適当な
接種物を得た。該懸濁液のアリコートを、Ｓｈｉｒｌｉ
ｎｇおよびＧｏｔｔｌｉｅｂ（Ｅ．Ｂ．Ｓｈｉｒｌｉｎ
ｇおよびＤ．Ｇｏｔｔｌｉｅｂ，１９６６−Ｍｅｔｈｏ
ｄ ｆｏｒ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ
Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐｅｃｉｅｓ−Ｉｎ
ｔ．Ｊ．Ｓｙｓｔ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．，１６，３１
３−３４０）により推奨されている種々の培地およびＷ
ａｋｓｍａｎ（Ｗａｋｓｍａｎ Ｓ．Ａ．，１９６１−
Ｔｈｅ Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｔｈｅ Ｗｉｌ
ｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ Ｃｏ．，Ｂａｌ
ｔｉｍｏｒｅ．Ｖｏｌ ２，ｐｐ ３２８−３３４）に
より推奨されているいくつかの培地上に、網状線を描く
ようにストリークした。

【００１２】炭素源およびエネルギー源として種々の炭
水化物を利用する能力は、該炭素源を２％（ｗ／ｖ）の
最終濃度で含有するＩＳＰ８培地（Ｓｈｉｒｌｉｎｇお
よびＧｏｔｔｌｉｅｂ，前掲）において確認された。す
べての培地を２８℃で２１日間インキュベートした。Ｃ
ｏｌｏｒ Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｍａｅｒｚ ａｎｄＰａ
ｕｌ（Ａ．ＭａｅｒｚおよびＭ．Ｒ．Ｐａｕｌ，１９５
０−Ａ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｏｌｏｕｒ，
第２版．ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ ＢｏｏｋＣｏ．Ｉｎ
ｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）を使用して、自然昼光中で色
を評価した。

【００１３】株ＧＥ２３０７７に関する集落の外観、基
質および気中菌糸の色ならびに色素産生を表Ｉに示す。
該株の生理学的特徴を表ＩＩに示す。成長のために種々
の炭水化物を利用する能力を表ＩＩＩに示す。

【００１４】

【表１】

【００１５】

【表２】

【００１６】

【表３】

【００１７】アクチノマデュラ種ＤＳＭＺ １３４９１
の化学分類特性 アクチノマデュラ種（Ａｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ ｓ
ｐ．）ＤＳＭＺ １３４９１を、Ｓａｕｔｏｎ培地内で
４週間培養し、該菌糸を収穫し、無菌蒸留水で３回洗浄
し、ついで凍結乾燥した。該ジアミノピメリン酸（ＤＡ
Ｐ）の立体異性体は、ＳｔａｎｅｃｋおよびＲｏｂｅｒ
ｔｓ（Ｊ．Ｌ．ＳｔａｎｅｃｋおよびＧ．Ｄ．Ｒｏｂｅ
ｒｔｓ，Ｓｉｍｐｌｉｆｉｅｄ ａｐｐｒｏａｃｈ ｔ
ｏ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａｅｒｏｂ
ｉｃ ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓｂｙ ｔｈｉｎ−ｌ
ａｙｅｒ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，Ａｐｐｌ．
Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２８，２２６−２３１，１９７
４）の方法に従い確認した。

【００１８】該全細胞糖パターンは、Ｓａｄｄｌｅｒら
（Ｓａｄｄｌｅｒ Ｇ．Ｓ．，Ｐ．Ｔｒａｖｅｃｃｈｉ
ａ，Ｓ．Ｌｏｃｉｕｒｏ，Ｍ．Ｚａｎｏｌ，Ｌ Ｃｏｌ
ｏｍｂｏおよびＥ．Ｓｅｌｖａ．Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏ
ｆ ｍａｄｕｒｏｓｅ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ａｃｔｉ
ｎｏｍｙｃｅｔｅ ｗｈｏｌｅ ｃｅｌｌ ｓｕｇａｒ
ｓ ｂｙ ｇａｓ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ．
Ｊ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｍｅｔｈ．，１４，１８５−
１９１，１９９１）に従い確認した。

【００１９】イソプレノイドキノンは、Ｍｉｎｎｉｋｉ
ｎら（Ｄ．Ｅ．Ｍｉｎｎｉｋｉｎ，Ａ．Ｇ．Ｏ’Ｄｏｎ
ｎｅｌｌ，Ｍ．Ｇｏｏｄｆｅｌｌｏｗ．，Ｇ．Ａｌｄｅ
ｒｓｏｎ，Ｍ．Ａｔｈａｌｙｅ，Ａ．Ｓｃｈａａｌおよ
びＪ．Ｈ．Ｐａｒｌｅｔｔ．Ａｎ ｉｎｔｅｇｒａｔｅ
ｄ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ ｏｆ ｉｓｏｐｒｅｎｏｉｄ
ｑｕｉｎｏｎｅｓ ａｎｄ ｐｏｌａｒ ｌｉｐｉｄ
ｓ．Ｊ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｍｅｔｈ．２，２３３−
２４１，１９８４）の小規模組織化法を用いて、抽出し
精製した。

【００２０】該メナキノンは、Ｋｒｏｐｐｅｎｓｔｅｄ
ｔ（Ｒ．Ｍ．Ｋｒｏｐｐｅｎｓｔｅｄｔ，Ｓｅｐａｒａ
ｔｉｏｎ ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉｏｌ ｍｅｎａｑｕｉ
ｎｏｎｅｓ ｂｙ ＨＰＬＣ ｕｓｉｎｇ ｒｅｖｅｒ
ｓｅ ｐｈａｓｅ ＲＰ１８ａｎｄ ａ ｓｉｌｖｅｒ
ｌｏａｄｅｄ ｉｏｎ ｅｘｃｈａｎｇｅｒ ａｓ
ｓｔａｔｉｏｎａｒｙ ｐｈａｓｅ．Ｊ．Ｌｉｑｕｉ
ｄ．Ｃｈｒｏｍａｔ．５：２３５９−２３６７，１９８
２）により記載されているとおりに、ＨＰＬＣにより分
離し、それらのイソプレニル鎖長と飽和度とに応じたそ
れらの保持挙動により同定した。

【００２１】極性脂質を抽出し、二次元薄層クロマトグ
ラフィーにより検査し、公開されている方法（Ｄ．Ｅ．
Ｍｉｎｎｉｋｉｎ，Ａ．Ｇ．Ｏ’Ｄｏｎｎｅｌｌ，Ｍ．
Ｇｏｏｄｆｅｌｌｏｗ，Ｇ．Ａｌｄｅｒｓｏｎ，Ｍ．Ａ
ｔｈａｌｙｅ，Ｈ．ＳｃｈａａｌおよびＪ．Ｈ．Ｐａｒ
ｌｅｔｔ．Ａｎ ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ｐｒｏｃｅｄ
ｕｒｅ ｏｆ ｉｓｏｐｒｅｎｏｉｄ ｑｕｉｎｏｎｅ
ｓ ａｎｄ ｐｏｌａｒ ｌｉｐｉｄｓ．Ｊ．Ｍｉｃｒ
ｏｂｉｏｌ．Ｍｅｔｈ．２，２３３−２４１，１９８
４）を用いて同定した。

【００２２】脂肪酸の抽出のために、Ｍｉｌｌｅｒ
（Ｌ．Ｔ．Ｍｉｌｌｅｒ，Ａ ｓｉｎｇｌｅ ｄｅｒｉ
ｖａｔｉｚａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｂａｃ
ｔｅｒｉａｌ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｍｅｔｈｙｌ
ｅｓｔｅｒｓ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｈｙｄｒｏｘｙ
ａｃｉｄｓ，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１
６，５８４−５８６，１９８２）の方法を若干改変した
方法（Ｌ．Ｄ．Ｋｕｙｋｅｎｄａｌｌ，Ｍ．Ａ．Ｒｏ
ｙ，Ｊ．Ｊ．Ｏ’ＮｅｉｌｌおよびＴ．Ｅ．Ｄｅｖｉｎ
ｅ，Ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ，ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ ｒ
ｅｓｉｓｔａｎｃｅ，ａｎｄ ｄｅｏｘｙｒｉｂｏｎｕ
ｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ ｈｏｍｏｌｏｇｙ ｇｒｏｕｐ
ｓ ｏｆ Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎ
ｉｃｉｕｍ，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｓｙｓｔｅｍ．Ｂａｃｔ．３
８，３５１−３６１，１９８８）を用いて、該湿潤（ｗ
ｅｔ）バイオマスを抽出した。Ｋｒｏｐｐｅｎｓｔｅｄ
ｔ（Ｒ．Ｍ．Ｋｒｏｐｐｅｎｓｔｅｄｔ，Ｅ．Ｓｔａｃ
ｋｅｂｒａｎｄｔおよびＭ．Ｇｏｏｄｆｅｌｌｏｗ，Ｔ
ａｘｏｎｏｍｉｃ ｒｅｖｉｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ
ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅ ｇｅｎｅｒａ Ａｃｔｉｎ
ｏｍａｄｕｒａ ａｎｄ Ｍｉｃｒｏｔｅｔｒａｓｐｏ
ｒａ，Ｓｙｓｔｅｍ．Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．
１３，１４８−１６０，１９９０）に記載されていると
おりに分析を行ない、Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｉｄｅｎｔ
ｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｌ．Ｔ．Ｍｉｌｌ
ｅｒ，前掲）を用いてデータを調べた。

【００２３】株ＤＳＭＺ １３４９１は、メソ−２，６
−ジアミノピメリン酸を含有する。該全細胞加水分解物
中にはマデュロースが存在する。図１に示すとおり、よ
り豊富に存在するメナキノンはＭＫ−９（Ｈ_６）であ
り、より少量のＭＫ−９（Ｈ_４）およびＭＫ−９
（Ｈ_８）がそれに続く。極性脂質のうち、ホスファチジ
ルイノシトール、ホスファチジルイノシトールマノシ
ド、ホスファチジルグリセロールおよびジホスファチジ
ルグリセロールが該クロロホルムメタノール抽出物中で
同定される。以下の分枝飽和および不飽和脂肪酸＋ツベ
ルクロステアリン酸が検出された。

【００２４】

【表４】

【００２５】株ＧＥ２３０７７の同一性 ＧＥ２３０７７を産生する株は、以下の形態学的および
化学的特徴に基づき、アクチノマデュラ（Ａｃｔｉｎｏ
ｍａｄｕｒａ）属に帰属されている。

【００２６】・枝分かれしており分節化していない栄養
菌糸および短い分節型胞子鎖の形成。

【００２７】・細胞壁中のメソ−２，６−ジアミノピメ
リン酸の存在、および全細胞加水分解物中のマデュロー
スの存在。これは、ＬｅｃｈｅｖａｌｉｅｒおよびＬｅ
ｃｈｅｖａｌｉｅｒ（Ｈ．Ａ．Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅｒ
およびＭ．Ｐ．Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅｒ，Ａ ｃｒｉｔ
ｉｃａｌ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｇｅ
ｎｅｒａ ｏｆ ａｅｒｏｂｉｃ ａｃｔｉｎｏｍｙｃ
ｅｔｅｓ，ｐｐ．３９３−４０５；Ｔｈｅ Ａｃｔｉｎ
ｏｍｙｃｅｔａｌｅｓ，Ｈ．Ｐｒａｕｓｅｒｓ編，Ｊｅ
ｎａ，Ｇｕｓｔａｖ Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｖｅｒｌａｇ
１９７０）によれば、化学型ＩＩＩＢに特徴的なもので
ある。

【００２８】・リン脂質１型ｓｅｎｓｕ、Ｌｅｃｈｅｖ
ａｌｉｅｒら（Ｈ．Ａ．Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅｒ，Ｃ．
Ｄｅ ＢｒｉｅｖｅおよびＭ．Ｐ．Ｌｅｃｈｅｖａｌｉ
ｅｒ，Ｃｈｅｍｏｔａｘｏｎｏｍｙ ｏｆ ａｅｒｏｂ
ｉｃ ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ：ｐｈｏｓｐｈｏｌ
ｉｐｉｄ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．
Ｓｙｓｔ．Ｅｃｏｌ，５：２４６−２６０，１９７７）
による極性脂質の組成、およびＫｒｏｐｐｅｎｓｄｅｄ
ｔ（Ｒ．Ｍ．Ｋｒｏｐｐｅｎｓｔｅｄｔ，Ｓｅｐａｒａ
ｔｉｏｎ ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｍｅｎａｑｕｉ
ｎｏｎｅｓ ｂｙ ＨＰＬＣ ｕｓｉｎｇ ｒｅｖｅｒ
ｓｅ ｐｈａｓｅ ＲＰ１８ ａｎｄａ ｓｉｌｖｅｒ
ｌｏａｄｅｄ ｉｏｎ ｅｘｃｈａｎｇｅｒ ａｓ
ｓｔａｔｉｏｎａｒｙ ｐｈａｓｅ，Ｊ．Ｌｉｑｕｉｄ
Ｃｈｒｏｍａｔ．５：２３５９−２３６７，１９８
２；Ｒ．Ｍ．Ｋｒｏｐｐｅｎｓｔｅｄｔ，Ｅ．Ｓｔａｃ
ｋｅｂｒａｎｔおよびＭ．Ｇｏｏｄｆｅｌｌｏｗ，Ｔａ
ｘｏｎｏｍｉｃ ｒｅｖｉｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ａ
ｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅ ｇｅｎｅｒａ Ａｃｔｉｎｏ
ｍａｄｕｒａ ａｎｄ Ｍｉｃｒｏｔｅｔｒａｓｐｏｒ
ａ，Ｓｙｓｔｅｍ．Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１
３，１４８−１６０，１９９０）によるメナキノン型４
Ｂ２の組成。

【００２９】・ＫｒｏｐｐｅｎｓｔｅｄｔおよびＧｏｏ
ｄｆｅｌｌｏｗ（Ｒ．Ｍ．Ｋｒｏｐｐｅｎｓｔｅｄｔお
よびＭ．Ｇｏｏｄｆｅｌｌｏｗ；Ｔｈｅ ｆａｍｉｌｙ
Ｔｈｅｒｍｏｍｏｎｏｓｐｏｒａｃｅａｅ，ｐｐ．１
０８５−１１１４，ＴｈｅＰｒｏｋａｒｉｏｔｅｓ，Ｖ
ｏｌ ＩＩ，Ａ．Ｂａｌｏｗｓ，Ｈ．Ｔｒｕｐｅｒ，
Ｍ．Ｄｗｏｒｋｉｎ，Ｗ．ＨａｒｄｅｒおよびＫ．Ｈ．
Ｓｃｈｌｅｉｆｅｒ編；Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｓｐｒｉｎ
ｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，１９９１）による３ａ型の脂肪
酸プロフィール。

【００３０】他の微生物の場合と同様に、化合物ＧＥ２
３０７７を産生する株の特徴は変異を受ける。例えば、
種々の公知突然変異原、例えばＵＶ線、および化学物
質、例えば亜硝酸、Ｎ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニ
トロソグアニジンなどでの処理により、該株の人工的変
異体および突然変異体を得ることができる。株アクチノ
マデュラ種（Ａｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ ｓｐ．）ＤＳ
ＭＺ １３４９１のすべての自然および人工的変異体お
よび突然変異体は、本発明の目的においてはそれと同等
とみなされ、したがって本発明の範囲内である。

【００３１】該抗生物質は、該発酵ブロス、該菌糸およ
び該上清の両方の画分から回収されうる。

【００３２】ＧＥ２３０７７化合物の抽出および精製 該産生微生物の発酵ブロスからのＧＥ２３０７７複合体
の回収は、自体公知の技術、例えば、溶媒での抽出、非
溶媒を加えることによる又は該溶液のｐＨを変化させる
ことによる沈殿、分配クロマトグラフィー、逆相分配ク
ロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、分
子排除クロマトグラフィーなどに従い行なう。

【００３３】該発酵ブロスから本発明の抗生物質を回収
するための方法には、水非混和性有機溶媒でのＧＥ２３
０７７複合体またはその塩の抽出、およびそれに続く該
濃縮抽出物からの沈殿（これは、おそらく、沈殿剤の添
加によるものとなろう）が含まれる。

【００３４】本出願で用いる「水非混和性溶媒」なる語
は、当技術分野においてそれに与えられている意義を有
すると意図され、使用条件において、意図される用途に
適した合理的に広い濃度範囲において水と若干混和する
又は事実上混和しない溶媒を意味する。

【００３５】該発酵ブロスからの本発明の化合物の抽出
において使用しうる水非混和性有機溶媒の具体例として
は、直鎖状、分枝状または環状でありうる少なくとも４
個の炭素原子のアルカノール、例えば、ｎ−ブタノー
ル、１−ペンタノール、２−ペンタノール、３−ペンタ
ノール、１−ヘキサノール、２−ヘキサノール、３−ヘ
キサノール、３，３−ジメチル−１−ブタノール、４−
メチル−１−ペンタノール、３−メチル−１−ペンタノ
ール、２，２−ジメチル−３−ペンタノール、２，４−
ジメチル−３−ペンタノール、４，４−ジメチル−２−
ペンタノール、５−メチル−２−ヘキサノール、１−ヘ
プタノール、２−ヘプタノール、５−メチル−１−ヘキ
サノール、２−エチル−１−ヘキサノール、２−メチル
−３−ヘキサノール、１−オクタノール、２−オクタノ
ール、シクロペンタノール、２−シクロペンチルエタノ
ール、３−シクロペンチル−１−プロパノール、シクロ
ヘキサノール、シクロヘプタノール、シクロオクタノー
ル、２，３−ジメチルシクロヘキサノール、４−エチル
シクロヘキサノール、シクロオクチルメタノール、６−
メチル−５−ヘプテン−２−オール、１−ノナノール、
２−ノナノール、１−デカノール、２−デカノールおよ
び３−デカノール；少なくとも５個の炭素原子のケト
ン、例えば、メチルイソプロピルケトン、メチルイソブ
チルケトン、メチル−ｎ−アミルケトン、メチルイソア
ミルケトンおよびそれらの混合物が挙げられる。

【００３６】当技術分野において公知のとおり、生成物
の抽出は、ｐＨを適当な値に調節することにより、およ
び／または加塩により、および／または該抽出溶媒に可
溶性である抗生物質とイオン対を形成する適当な有機塩
を加えることにより改善されうる。当技術分野において
公知のとおり、相分離は加塩により改善されうる。抽出
後に、相当量の水を含有する有機相を回収する場合に
は、それから水を共沸により蒸留することが簡便かもし
れない。一般に、このためには、水と最小共沸混合物を
形成しうる溶媒を加え、ついで所望により、沈殿剤を加
えて所望の生成物を沈殿させることが必要である。水と
の最小共沸混合物を形成しうる有機溶媒の代表例として
は、ｎ−ブタノール、ベンゼン、トルエン、ブチルエー
テル、四塩化炭素、クロロホルム、シクロヘキサン、
２，５−ジメチルフラン、ヘキサンおよびｍ−キシレン
が挙げられ、好ましい溶媒はｎ−ブタノールである。沈
殿剤の具体例としては、石油エーテル、低級アルキルエ
ーテル、例えばエチルエーテル、プロピルエーテルおよ
びブチルエーテル、ならびに低級アルキルケトン、例え
ばアセトンが挙げられる。

【００３７】ＧＥ２３０７７複合体を回収するための好
ましい方法では、濾過した発酵ブロスを吸着マトリック
スと接触させ、ついで極性水混和性溶媒またはその混合
物で溶出し、減圧下で水残渣にまで濃縮し、水非混和性
溶媒で抽出し、前記で既に挙げたタイプの沈殿剤で沈殿
させることができる。

【００３８】本発明化合物の回収において簡便に使用し
うる吸着マトリックスの具体例としては、ポリスチレン
または混合ポリスチレン−ジビニルベンゼン樹脂（例え
ば、Ｍ１１２またはＳ１１２，Ｄｏｗ Ｃｈｅｍｉｃａ
ｌ Ｃｏ．；Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ ＸＡＤ２またはＸＡ
Ｄ４，Ｒｏｈｍ ＆ Ｈａａｓ；Ｄｉａｉｏｎ ＨＰ２
０，Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）、ア
クリル樹脂（例えば、ＸＡＤ７またはＸＡＤ８，Ｒｏｈ
ｍ ＆ Ｈａａｓ）、ポリアミド樹脂、例えばポリカプ
ロラクタム、ナイロンおよび架橋ポリビニルピロリドン
（例えば、Ｐｏｌｙａｍｉｄｅ−ＣＣ ６、Ｐｏｌｙａ
ｍｉｄｅ−ＳＣ ６、Ｐｏｌｙａｍｉｄｅ−ＣＣ ６．
６、Ｐｏｌｙａｍｉｄｅ−ＣＣ ６ＡＣおよびＰｏｌｙ
ａｍｉｄｅ−ＳＣ ６ＡＣ、Ｍａｃｈｅｒｅｙ−Ｎａｇ
ｅｌ ＆ ＣＯ．，ｗｅｓｔ Ｇｅｒｍａｎｙ；ＰＡ
４００，Ｍ．Ｗｏｅｌｍ ＡＧ，Ｗｅｓｔ Ｇｅｒｍａ
ｎｙ；およびポリビニルピロリドン樹脂ＰＶＰ−ＣＬ，
Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｅ ＧｍｂＨ ＆ Ｃ
ｏ．，ＫＧ，Ｗｅｓｔ Ｇｅｒｍａｎｙ）、制御細孔
（ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｐｏｒｅ）架橋デキストラン
（例えば、Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０，Ｐｈａｒｍ
ａｃｉａ Ｆｉｎｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，ＡＢ）およ
び木炭が挙げられる。

【００３９】好ましくは、ポリスチレン樹脂を使用す
る。特に好ましいのは、Ｓ１１２（Ｄｏｗ Ｃｈｅｍｉ
ｃａｌ Ｃｏ．）である。

【００４０】該吸着マトリックスからＧＥ２３０７７複
合体を溶出するための好ましい溶媒は、具体的な固定相
に左右される。ポリスチレン樹脂、ポリスチレン−ジビ
ニルベンゼン樹脂、アクリル樹脂またはポリアミド樹脂
の場合、好ましい溶離剤は水混和性溶媒またはその水性
混合物であり、木炭の場合、好ましい溶離剤は低級ケト
ン、例えばアセトン、または低級アルコール、例えばメ
タノールである。該水性混合物は、適当なｐＨ値のバッ
ファーを含有しうる。

【００４１】本出願で用いる「水混和性溶媒」なる語
は、この用語の分野において与えられている意義を有す
ると意図され、使用条件において、合理的に広い濃度範
囲において水と混和する溶媒を意味する。本発明化合物
の溶出に使用しうる水混和性有機溶媒の具体例として
は、低級アルカノール、例えば（Ｃ_１−Ｃ_３）アルカノ
ール、例えばメタノール、エタノールおよびプロパノー
ル；フェニル（Ｃ_１−Ｃ_３）アルカノール、例えばベン
ジルアルコール；低級ケトン、例えば（Ｃ_３−Ｃ_４）ケ
トン、例えばアセトンおよびエチルメチルケトン；環状
エーテル、例えばジオキサンおよびテトラヒドロフラ
ン；グリコールおよびそれらの部分エーテル化生成物、
例えばエチレングリコール、プロピレングリコールおよ
びエチレングリコールモノメチルエーテル、低級アミ
ド、例えばジメチルホルムアミドおよびジエチルホルム
アミド；酢酸、ジメチルスルホキシドおよびアセトニト
リルが挙げられる。

【００４２】粗ＧＥ２３０７７化合物の精製は、自体公
知の技術のいずれかにより行なうことができるが、好ま
しくは、クロマトグラフィー法により行なう。

【００４３】これらのクロマトグラフィー法の具体例と
しては、該回収工程に関して報告されているものが挙げ
られ、それらには、ハロゲン化炭化水素、低級アルカノ
ール、エーテル、高級ケトンおよびそれらの混合物を含
む有機溶媒から構成される有機溶出相を用いるシリカゲ
ル、アルミナ、活性化ケイ酸マグネシウムなどの固相上
のクロマトグラフィー、または種々の機能的誘導体化が
施され前記の種類の水混和性溶媒の水性混合物で溶出す
るシラン化シリカゲル上の逆相クロマトグラフィーが含
まれる。

【００４４】もう１つの精製方法は、イオン交換樹脂カ
ラム上のクロマトグラフィーである。該溶出は、ｐＨま
たはイオン強度の変化により行なうことができる。

【００４５】また、いわゆる立体排除クロマトグラフィ
ー技術が、良好な精製結果で簡便に用いられうる。特
に、ほとんどのヒドロキシル基がアルキル化された制御
細孔架橋デキストラン、例えばＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ
−２０（ＰｈａｒｍａｃｉａＦｉｎｅ Ｃｈｅｍｉｃａ
ｌｓ，ＡＢ）が、この技術において通常用いられる。

【００４６】例えば、ＲＰ−８またはＲＰ−１８官能基
化シリカゲルを使用し硫酸ナトリウムバッファーで溶出
する逆相クロマトグラフィーを用いる中圧液体クロマト
グラフィー分離系を使用することができる。

【００４７】この分野において通常行われるとおり、該
製造ならびに該回収および精製工程は、ＨＰＬＣおよび
／または感受性微生物でのバイオアッセイおよび／また
は大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＲＮＡポリメラーゼの阻害ア
ッセイを含む種々の分析方法によりモニターされうる。

【００４８】個々の因子Ａ１、Ａ２、Ｂ１およびＢ２の
精製は、Ｇ２３０７７複合体調製物の半分取ＨＰＬＣに
より簡便に行われうる。

【００４９】純粋なＧＥ２３０７７因子Ａ１、Ａ２、Ｂ
１およびＢ２の単離のための好ましい分取ＨＰＬＣ技術
は、４ｍｌ／分の流速での５０％〜８０％の相Ｂの２５
分間の直線勾配での溶出およびそれに続く８０％の相Ｂ
での５分間の溶出に付される２５０×１０ｍｍ Ｓｕｐ
ｅｌｃｏｓｉｌ ＬＣ８カラム，５μｍ，（Ｓｕｐｅｌ
ｃｏ Ｉｎｃ；Ｂｅｌｌｅｆｏｎｔｅ，ＵＳＡ）を備え
た半分取ＨＰＬＣ装置（Ｓｈｉｍａｄｚｕ−ＬＣ８Ａ）
上で行なわれうる。相Ａは、メタノール：１００ｍＭ
硫酸アンモニウム（ｐＨ７）バッファー ５：９５（ｖ
／ｖ）であり、相Ｂは、メタノール：水 ２：８（ｖ／
ｖ）である。ＵＶ検出は２３０ｎｍで行なう。分離され
たＧＥ２３０７７因子を含有する、反復実施クロマトグ
ラフィーの溶出液を、それらの含量に応じてプールし、
減圧下で水溶液にまで濃縮し、それを凍結乾燥して、Ｇ
Ｅ２３０７７因子Ａ１、Ａ２、Ｂ１およびＢ２を得る。

【００５０】この分野において通常行われるとおり、該
製造ならびに該回収および精製工程は、感受性微生物で
のバイオアッセイおよび／または細菌ＲＮＡポリメラー
ゼに関する阻害試験および／またはＴＬＣおよび／また
はＨＰＬＣ法を含む種々の分析方法によりモニターされ
うる。好ましい分析ＨＰＬＣ技術は、相ＡおよびＢの混
合物で１ｍｌ／分の流速で溶出する、Ｃ１８ Ｕｌｔｒ
ａｓｐｈｅｒｅ ＯＤＳ ５μｍ固定相（Ｂｅｃｋｍａ
ｎｎ Ｃｏ．）が充填された２５０×４．６ｍｍカラム
を備えたＨＰ １０９０装置上で行なう。相Ａは、メタ
ノール：１００ｍＭ 硫酸アンモニウムバッファー
５：９５（ｖ／ｖ）であり、相Ｂは、メタノール：水
２０：８０（ｖ／ｖ）であった。溶出は、５０％〜８０
％の相Ｂの直線勾配で２０分間、８０％の相Ｂで５分間
行なった。前記の４つのＧＥ２３０７７因子の典型的な
保持時間は、１４．４（Ａ１）、１６．５（Ｂ１）、１
９．４（Ａ２）、２１．３（Ｂ２）である。

【００５１】該ＧＥ２３０７７複合体は、２組の異性
体、すなわち、因子Ａ１、Ａ２および因子Ｂ１、Ｂ２か
ら構成される。個々の純粋な因子Ａ１および因子Ａ２
は、水溶液中または水混和性溶媒と水溶液との混合物中
に維持されると、それらの間の平衡状態に達することが
観察された。純粋な因子Ｂ１および因子Ｂ２に関して
も、同じ挙動が観察された。該平衡速度は、酸性および
塩基性ｐＨで加速化された。ＤＭＳＯ中でＧＥ２３０７
７因子Ａ２およびＢ２のＮＭＲスペクトルを記録したと
ころ、さらに、それらはそれぞれ因子Ａ１およびＢ２に
完全に変換された（共に室温で、Ａ２では１２時間、Ｂ
２では数分間かかった）ことが判明している。したがっ
て、完全な変換の後で記録すると、因子Ａ２およびＢ２
に関するスペクトルは、因子Ａ１およびＢ１のものに対
応した。

【００５２】化合物ＧＥ２３０７７複合体およびその因
子は酸機能を含有するため、それらは、通常の方法に従
い適当な塩基と塩を形成しうる。該抗生物質は、該酸形
態で得られた場合には、対応する無毒性の医薬上許容さ
れる塩に変換されうる。適当な塩には、アルカリおよび
アルカリ土類金属塩、典型的には、ナトリウム、カリウ
ム、カルシウムおよびマグネシウム塩、ならびにアンモ
ニウムおよび置換アンモニウム塩が含まれる。代表的な
置換アンモニウム塩には、第一級、第二級または第三級
（ＣＩ−Ｃ４）アルキルアンモニウムおよびヒドロキシ
（ＣＩ−Ｃ４）アルキルアンモニウム塩が含まれ、本発
明の１つの実施形態においては、ベンザチン、プロカイ
ン、ヒドラバミンおよび同様の水不溶性の無毒性の医薬
上許容される塩が含まれる。また、前記クラスの塩のう
ち、塩基付加塩（すなわち、塩基性アミノ酸、例えばア
ルギニンまたはリシン、あるいはアミノ糖、例えばグル
コサミンなどとの塩）として一般に表される本発明の化
合物の塩が好ましい。

【００５３】該アルカリおよびアルカリ土類金属塩は、
金属塩の製造に一般に用いる通常の方法に従い製造す
る。例えば、抗生物質ＧＥ２３０７７を最少量の適当な
溶媒、典型的には低級アルカノールに溶解し、得られた
溶液に、化学量論的量の適当な選択された塩基を徐々に
加え、得られた塩を非溶媒の添加により沈殿させる。つ
いで、得られたアルカリまたはアルカリ土類金属塩を、
濾過または該溶媒の蒸発により回収する。

【００５４】あるいは、これらの塩は、凍結乾燥によ
り、実質的に無水の形態で製造されうる。この場合、
７．０〜８．５に含まれるｐＨを与える量の適当に選択
されたアルカリまたはアルカリ土類金属カルボナートま
たはヒドロキシドと抗生物質ＧＥ２３０７７との塩形成
から生じた所望の塩を含有する水溶液を、いずれかの不
溶物から濾過し、凍結乾燥する。

【００５５】該有機アンモニウム塩は、適当に選択され
たアミンを適当な溶媒中の抗生物質ＧＥ２３０７７の溶
液に加え、ついで該溶媒および過剰の該アミンを蒸発さ
せることにより、あるいは該濃縮溶液を凍結乾燥させる
ことにより、前記方法に実質的に従い製造することがで
きる。

【００５６】そのようにして形成された医薬上許容され
る塩も、本発明の一部である。「医薬上許容される」塩
は、温血動物の治療に有用な塩である。

【００５７】本発明の化合物から対応するその塩への変
換およびその逆の変換（すなわち、本発明化合物の塩か
ら非塩形態への変換）は、通常の技術の範囲内のもので
あり、本発明に含まれる。

【００５８】ＧＥ２３０７７複合体の物理化学的特徴 Ａ）水：メタノール １：１（ｖ／ｖ）溶液中での紫外
線吸収スペクトルは、中性および酸性ｐＨにおける波長
吸収の有意なシフトを伴わない端吸収（２０４ｎｍで最
大）を示す。ＫＯＨを加えると、該最大は２１８ｎｍに
シフトした。該スペクトルは、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅ
ｒ分光光度計ｍｏｄ．Ｌａｍｂｄａ １６上で記録し
た。

【００５９】Ｂ）正イオンＦＡＢ質量分析は、該複合体
の成分の［Ｍ−Ｈ］^＋に対応し８０４および８０６ｍ／
ｚを有するピークを示している。該ＦＡＢ質量分析は、
キセノン原子銃を使用し８ｋＶ、電流０．２３ｍＡで運
転しグリセロールをイオン化マトリックスとして使用し
てＦｉｎｎｉｇａｎ ＴＳＱ７００三連四重極型質量分
析計上で測定した。

【００６０】Ｃ）バリン、セリン、トレオニン、イソセ
リン、グリシンおよび２，３−ジアミノプロパン酸なら
びに他の未同定フラグメントの存在を示す酸加水分解物
のアミノ酸分析。

【００６１】Ｐｉｃｏ−Ｔａｇ装置（Ｍｉｌｌｉｐｏｒ
ｅ−Ｗａｔｅｒｓ Ｃｏ．）を使用して、該ＧＥ２３０
７７複合体を、フェノールの存在下、５００μｌの６Ｎ
ＨＣｌで１０５℃で２４時間処理した。該残渣を水で
希釈し、凍結乾燥した。ついで該混合物を、連続的に、
ａ）ｎ−ブタノール中の２００μｌの２．４Ｎ ＨＣｌ
で１００℃で３０分間で処理し乾燥させ、ついで１００
ｍｌのトリフルオロ酢酸無水物で１００℃で１０分間処
理した。ついで該サンプルを窒素下で乾燥させ、１００
ｍｌのヘキサンに溶解した後、それをＧＣ−ＭＳ分析に
提出した。該分析は、０．２５μｍのフィルム厚を有す
るＳＰＢ１カラム，３０ｍｍ×０．２ｍｍ（Ｓｕｐｅｌ
ｃｏ Ｉｎｃ；Ｂｅｌｌｅｆｏｎｔｅ，ＵＳＡ）を備え
たＦｉｎｎｉｇａｎ ＴＳＱ ７００三連ステージＧＣ
／ＭＳ装置を使用して行なった。該オーブン温度は６０
℃で１分間、ついで１２℃／分で６０℃から２６０℃ま
での勾配であった。該キャリヤーガスは８Ｐｓｉのヘリ
ウムであり、スプリット・ベント（ｓｐｌｉｔ ｖｅｎ
ｔ）は８０ｍｌ／分におけるものであった。該インジェ
クター温度は２６０℃であった。電子衝撃（ＥＩ）条件
は、ＥＩ正イオン化；源温度：１５０℃；電子エネルギ
ー：７０ｅＶ、およびフィラメント電流：４００ｍａで
あった。クロマトグラフィーのピークは、それらの保持
時間およびＭＳフラグメンテーションに基づき同定し
た。

【００６２】Ｄ）以下の吸収極大を示す赤外吸収スペク
トル（図２に示されている）：ν（ｃｍ^−１）：３２９
２；３０７２；２９５５；２９２４（ヌジョール）；２
８５３（ヌジョール）；１７３２；１６８６；１６５
５；１６２８；１５４５；１４６２；１３７７；１３１
７；１２６３；１２１９；１１１３；１０４９；９７
８；７２１。該スペクトルは、ＩＦＳ−４８ Ｆｏｕｒ
ｉｅｒ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍ分光光度計でヌジョールマ
ル中で記録した。

【００６３】Ｅ）４つのＧＥ２３０７７因子の保持時
間：１４．１６分（Ａ１）、１６．５６分（Ｂ１）、２
０．９０分（Ａ２）、２２．７１分（Ｂ２）。これら
は、以下のクロマトグラフィー条件下（方法Ａ）のＨＰ
ＬＣ分析により判明した。

【００６４】装置：ＨＰ ｍｏｄ．１０９０（ＤＡＤ検
出器）； カラム：ベックマンＯＤＳ Ｃ１８（５μｍ ２５０×
４．６ｍｍ）； 溶出：無勾配で１５％の相Ｂ； 相Ａ：アンモニウムホルミアート（２．５ｇ／ｌ）：メ
タノール（９９：１ｖ／ｖ）； 相Ｂ：アンモニウムホルミアート（２．５ｇ／ｌ）：メ
タノール（３０：７０ｖ／ｖ）； 流速：１．５ｍｌ／分； 検出器：ＵＶ ２３０ｎｍ。

【００６５】Ｆ）^１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（図３に示さ
れているもの）は、ＤＭＳＯ−ｄ_６中、６００ｍＨｚで
記録した。

【００６６】９．００；８．９３；６．３４；４．６
５；４．４７；４．０４；３．９９；３．９０；３．８
８；３．７４；３．５３；２．５３；１．９５；１．８
７；１．７１；１．６７；０．９６；０．８７；０．８
５。

【００６７】Ｇ）シリカゲルプレートＭｅｒｃｋ ５７
１４（Ｅ．Ｍｅｒｃｋ；Ｄａｒｍｓｔａｄｔ Ｆ．Ｒ．
Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用しエタノール：ｎ−ブタノー
ル：水２：２：１（ｖ／ｖ）中で展開するＴＬＣにより
分析したところ、Ｒ_ｆ値は０．７であった。検出は、該
シリカゲル層の部分を擦り落としメタノールで抽出し該
ＲＮＡポリメラーゼアッセイで該抽出物を試験すること
によるものであった。

【００６８】ＧＥ２３０７７因子Ａ１の物理化学的特徴 Ａ）正イオンＦＡＢ質量分析は、［Ｍ−Ｈ］^＋に対応し
８０４ ｍ／ｚを有するピークを示した。該ＦＡＢ質量
分析は、キセノン原子銃を使用し８ｋＶ、電流０．２３
ｍＡで運転しグリセロールをイオン化マトリックスとし
て使用してＦｉｎｎｉｇａｎ ＴＳＱ７００三連四重極
型質量分析計上で測定した。

【００６９】Ｂ）^１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（図４に示さ
れている）は、ＤＭＳＯ−ｄ_６（ヘキサジューテロジメ
チルスルホキシド）中、６００ＭＨｚで記録した。それ
は、内部標準としての２．５ｐｐｍに定められたＤＭＳ
Ｏの残留ピークを基準として、以下のシグナル（単位は
ｐｐｍ）を示した。星印が付された値は、２つの^１Ｈシ
グナルが重複したものである。

【００７０】

【化１５】

【００７１】Ｃ）^１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル（図５に示
されているもの）は、ＤＭＳＯ−ｄ _６（ヘキサジューテ
ロジメチルスルホキシド）中、１５０ＭＨｚで記録し
た。それは、内部標準としての３９．５ｐｐｍに定めら
れたＤＭＳＯの残留ピークを基準として、以下のシグナ
ル（単位はｐｐｍ）を示した。星印が付された値は、２
つの^１３Ｃシグナルが重複したものである。

【００７２】

【化１６】

【００７３】Ｄ）方法Ａにより分析した因子Ａ１は、１
４．１６分の保持時間を示している。

【００７４】ＧＥ２３０７７因子Ａ２の物理化学的特徴 Ａ）正イオンＦＡＢ質量分析は、［Ｍ−Ｈ］^＋に対応し
８０４ ｍ／ｚを有するピークを示した。該ＦＡＢ質量
分析は、キセノン原子銃を使用し８ｋＶ、電流０．２３
ｍＡで運転しグリセロールをイオン化マトリックスとし
て使用してＦｉｎｎｉｇａｎ ＴＳＱ７００三連四重極
型質量分析計上で測定した。

【００７５】Ｂ）ＨＰＬＣ分析：方法Ａにより分析した
因子Ａ２は、２０．９０分の保持時間を示している。

【００７６】Ｃ）^１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（因子Ａ２か
ら因子Ａ１への完全な変換の後で記録されたものであ
り、図４に示されているものと同じである）は、ＤＭＳ
Ｏ−ｄ _６（ヘキサジューテロジメチルスルホキシド）
中、６００ＭＨｚで記録した。それは、内部標準として
の２．５ｐｐｍに定められたＤＭＳＯの残留ピークを基
準として、以下のシグナル（単位はｐｐｍ）を示した。
星印が付された値は、２つの^１Ｈシグナルが重複したも
のである。

【００７７】

【化１７】

【００７８】Ｄ）^１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル（因子Ａ２
から因子Ａ１への完全な変換の後で記録されたものであ
り、図５に示されているものと同じである）は、ＤＭＳ
Ｏ−ｄ_６（ヘキサジューテロジメチルスルホキシド）
中、１５０ＭＨｚで記録した。それは、内部標準として
の３９．５ｐｐｍに定められたＤＭＳＯの残留ピークを
基準として、以下のシグナル（単位はｐｐｍ）を示し
た。星印が付された値は、２つの^１３Ｃシグナルが重複
したものである。

【００７９】

【化１８】

【００８０】ＧＥ２３０７７因子Ｂ１の物理化学的特徴 Ａ）正イオンＦＡＢ質量分析は、［Ｍ−Ｈ］^＋に対応し
８０６ ｍ／ｚを有するピークを示した。該ＦＡＢ質量
分析は、キセノン原子銃を使用し８ｋＶ、電流０．２３
ｍＡで運転しグリセロールをイオン化マトリックスとし
て使用してＦｉｎｎｉｇａｎ ＴＳＱ７００三連四重極
型質量分析計上で測定した。

【００８１】Ｂ）^１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（図６に示さ
れているもの）は、ＤＭＳＯ−ｄ_６（ヘキサジューテロ
ジメチルスルホキシド）中、６００ＭＨｚで記録した。
それは、内部標準としての２．５ｐｐｍに定められたＤ
ＭＳＯの残留ピークを基準として、以下のシグナル（単
位はｐｐｍ）を示した。星印が付された値は、２つの ^１
Ｈシグナルが重複したものである。

【００８２】

【化１９】

【００８３】Ｃ）^１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル（図７に示
されているもの）は、ＤＭＳＯ−ｄ _６（ヘキサジューテ
ロジメチルスルホキシド）中、１５０ＭＨｚで記録し
た。それは、内部標準としての３９．５ｐｐｍに定めら
れたＤＭＳＯの残留ピークを基準として、以下のシグナ
ル（単位はｐｐｍ）を示した。星印が付された値は、２
つの^１３Ｃシグナルが重複したものである。

【００８４】

【化２０】

【００８５】Ｄ）ＨＰＬＣ分析：方法Ａにより分析した
因子Ｂ１は、１６．５６分の保持時間を示している。

【００８６】ＧＥ２３０７７因子Ｂ２の物理化学的特徴 Ａ）正イオンＦＡＢ質量分析は、［Ｍ−Ｈ］^＋に対応し
８０６ ｍ／ｚを有するピークを示した。該ＦＡＢ質量
分析は、キセノン原子銃を使用し８ｋＶ、電流０．２３
ｍＡで運転しグリセロールをイオン化マトリックスとし
て使用してＦｉｎｎｉｇａｎ ＴＳＱ７００三連四重極
型質量分析計上で測定した。

【００８７】Ｂ）ＨＰＬＣ分析：方法Ａにより分析した
因子Ｂ２は、２２．７１分の保持時間を示している。

【００８８】Ｃ）^１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（因子Ｂ２か
ら因子Ｂ１への完全な変換の後で記録されたものであ
り、図６に示されているものと同じである）は、ＤＭＳ
Ｏ−ｄ _６（ヘキサジューテロジメチルスルホキシド）
中、６００ＭＨｚで記録した。それは、内部標準として
の２．５ｐｐｍに定められたＤＭＳＯの残留ピークを基
準として、以下のシグナル（単位はｐｐｍ）を示した。
星印が付された値は、２つの^１Ｈシグナルが重複したも
のである。

【００８９】

【化２１】

【００９０】Ｄ）^１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル（因子Ｂ２
から因子Ｂ１への完全な変換の後で記録されたものであ
り、図７に示されているものと同じである）は、ＤＭＳ
Ｏ−ｄ_６（ヘキサジューテロジメチルスルホキシド）
中、１５０ＭＨｚで記録した。それは、内部標準として
の３９．５ｐｐｍに設定されたＤＭＳＯの残留ピークを
基準として、以下のシグナル（単位はｐｐｍ）を示し
た。星印が付された値は、２つの^１３Ｃシグナルが重複
したものである。

【００９１】

【化２２】

【００９２】前記の物理化学的データに基づき、本発明
の好ましい実施形態である抗生物質ＧＥ２３０７７複合
体およびその医薬上許容される塩には以下の構造式を仮
に割り当てることができる。

【００９３】

【化２３】 （式中、Ｒは、因子Ａ１およびＡ２に関しては、

【００９４】

【化２４】 であり、Ｒは、因子Ｂ１およびＢ２に関しては、

【００９５】

【化２５】 である）およびその医薬上許容される塩。

【００９６】生物活性 ＲＮＡポリメラーゼの阻害は、標準的なＵ底９６ウェル
プレート中の無細胞転写アッセイにおいて測定した。Ｒ
ＮＡ中の［Ｈ^３］−ＵＴＰの取込みは、トリクロロ酢酸
（ＴＣＡ）の添加の際に沈殿した物質において測定し
た。該反応混合物は、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐ
Ｈ８．０）、５０ｍＭ ＫＣｌ、１０ｍＭＭｇＣｌ_２、
０．１ｍＭ ＥＤＴＡ、５ｍＭ ジチオトレイトール
（ＤＴＴ）、１０μｇ／ｍｌ ＢＳＡ、２０ｇ／ｍｌ
ウシ胸腺ＤＮＡ、１ｍＭ ＡＴＰ、１ｍＭ ＣＴＰ、１
ｍＭ ＧＴＰ、０．５ｍＣｉ ^３Ｈ−ＵＴＰおよび０．
５Ｕの大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＲＮＡポリメラーゼ酵素
（Ｅｐｉｃｅｎｔｒｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；Ｍａｄ
ｉｓｏｎ ＷＩ）を含有していた。５μｌの該試験溶液
を４５μｌの反応混合物に加え、３７℃で１５分間イン
キュベートし、ついで１５０μｌの氷冷１０％（ｗ／
ｖ）ＴＣＡでクエンチした。氷中で３０分間放置した
後、９６ウェル細胞収集装置（Ｗａｌｌａｃ）を使用し
て、該ウェル内容物をガラス繊維フィルター（Ｆｉｌｔ
ｅｒｍａｔ Ａ，Ｗａｌｌａｃ）上に集め、β−プレー
トシンチレーションカウンター（Ｗａｌｌａｃ）中で放
射能を測定した。１分当たりのカウント（ＣＰＭ）は、
以下の式を用いてＲＮＡポリメラーゼ阻害率（％）に変
換される。 ＲＮＡポリメラーゼ（％）＝１００−［（化合物ＣＰＭ
−ブランクＣＰＭ）／（対照ＣＰＭ−ブランクＣＰ
Ｍ）］^＊１００ （式中、化合物ＣＰＭは、化合物を含むウェル中のＣＰ
Ｍであり、ブランクＣＰＭは、酵素鋳型を含まないウェ
ル中の平均ＣＰＭであり、対照ＣＰＭは、化合物を含ま
ないウェル中の平均ＣＰＭである）。

【００９７】該ＧＥ２３０７７複合体は、０．０２μｇ
／ｍｌにおいて大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＲＮＡポリメラ
ーゼのＩＣ_５０を示した。リファンピシン耐性ＲＮＡポ
リメラーゼ（Ｐｒｏｍｅｇａ；Ｍａｄｉｓｏｎ ＷＩ）
は、ＩＣ_５０＝０．０４μｇ／ｍｌで阻害された。コム
ギ胚芽ＲＮＡポリメラーゼ（Ｅｐｉｃｅｎｔｒｅ Ｔｅ
ｃｈｎｏｌｏｇｙ；Ｍａｄｉｓｏｎ ＷＩ）は、より高
い濃度（ＩＣ_５０＝１００μｇ／ｍｌ）で阻害された。

【００９８】個々のＧＥ２３０７７因子は、該大腸菌
（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＲＮＡポリメラーゼを阻害し、ＩＣ
_５０＝０．１５μｇ／ｍｌ（因子Ａ１）、０．０３５μ
ｇ／ｍｌ（因子Ａ２）、０．１μｇ／ｍｌ（因子Ｂ１）
および０．０２μｇ／ｍｌ（因子Ｂ２）を示した。

【００９９】抗微生物活性 Ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｆｏ
ｒ ＣｌｉｎｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓｔａｎ
ｄａｒｄｓ；Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｄｉｌｕｔｉｏ
ｎ Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂ
ｉｌｉｔｙＴｅｓｔｓ ｆｏｒ Ｂａｃｔｅｒｉａ ｔ
ｈａｔ Ｇｒｏｗ Ａｅｒｏｂｉｃａｌｌｙ−第３版，
Ａｐｐｒｏｖｅｄ Ｓｔａｎｄａｒｄ．ＮＣＣＬＳ文書
Ｍ７−Ａ３ Ｖｏｌ．１３ Ｎｏ．２５に従い標準的な
Ｕ底９６ウェルプレートを使用するミクロダイリューシ
ョン（ｍｉｃｒｏｄｉｌｕｔｉｏｎ）法を用いて、複合
体ＧＥ２３０７７の抗微生物活性を測定した。

【０１００】使用した培地は、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉ
ｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、スタフィロコッカス・アウレウ
ス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、
モラクセラ・カタラーリス（Ｍｏｒａｘｅｌｌａ ｃａ
ｔａｒｒｈａｌｉｓ）、バシラス・サチリス（Ｂａｃｉ
ｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、マイコバクテリウム・
スメグマチス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｍｅｇ
ｍａｔｉｓ）にはカチオン調節ミュラー・ヒントンブロ
ス（ＣＡＭＨＢ）；ストレプトコッカス・ピオゲネス
（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）に
はトッド・ヒューイットブロス（ＴＨＢ）；ヘモフィル
ス・インフルエンゼ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆ
ｌｕｅｎｚａｅ）にはブレインハートインフュージョン
ブロス＋１％（ｖ／ｖ）補足物Ｃ（ＣＢＨＩ）；ナイセ
リア・ゴノレエ（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈ
ｏｅａｅ）にはＧＣ塩基ブロス＋１％（ｖ／ｖ）イソビ
タレックス（Ｉｓｏｖｉｔａｌｅｘ）；コリネバクテリ
ウム・ジェイケイアム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕ
ｍ ｊｅｉｋｅｉｕｍ）にはトリプチケース・ダイズブ
ロス＋１０％ウシ胎仔血清（ＴＢ）；大腸菌（Ｅ．ｃｏ
ｌｉ）種および大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＡＴＣＣ ２５
９２２には５０ｍＭ リン酸ナトリウム（ｐＨ７）で緩
衝化されたテリフィック（Ｔｅｒｒｉｆｉｃ）ブロスで
あった。特に示さない限り、接種物は１０^４ ＣＦＵ／
ｍｌであった。５％ ＣＯ_２中でインキュベートしたヘ
モフィルス・インフルエンゼ（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａ
ｅ）とナイセリア・ゴノレエ（Ｎ．ｇｏｎｏｒｒｈｏｅ
ａｅ）とを除く全ての株は空気中で３５℃でインキュベ
ートした。４８時間培養したモラクセラ・カタラーリス
（Ｍｏｒａｘｅｌｌａ ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ）、ナ
イセリア・ゴノレエ（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒ
ｒｈｏｅａｅ）、ヘモフィルス・インフルエンゼ（Ｈａ
ｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）およびマ
イコバクテリウム・スメグマチス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅ
ｒｉｕｍ ｓｍｅｇｍａｔｉｓ）を除き、インキュベー
ション時間は１８〜２４時間であった。インキュベーシ
ョン後に視覚的な測定を行ない、試験微生物の増殖を完
全に阻害した低い方の濃度をＭＩＣと定義した。

【０１０１】ＧＥ２３０７７複合体は、モラクセラ・カ
タラーリス（Ｍ．ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ）の３つの株
の増殖を４〜８μｇ／ｍｌの範囲のＭＩＣで阻害した
が、試験した細菌のほとんどに対して活性ではない。こ
れらの株は臨床分離株であり、以下に示すとおり、β−
ラクタムに対する種々のレベルの感受性を有すると報告
されている。

【０１０２】

【表５】

【０１０３】ＧＥ２３０７７複合体はまた、ナイセリア
・ゴノレエ（Ｎ．ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）ＩＳＭ６８
／１２６臨床分離株に対して境界的（ｍａｒｇｉｎａ
ｌ）活性（ＭＩＣ ２５６μｇ／ｍｌ）を示す。

【０１０４】個々の因子Ａ１、Ａ２、Ｂ１およびＢ２は
また、モラクセラ・カタラーリス（Ｍ．ｃａｔａｒｒｈ
ａｌｉｓ）を阻害した。これは、ＧＥ２３０７７複合体
のＨＰＬＣ分画の溶出液を集めそれらを真空下で濃縮し
モラクセラ・カタラーリスに対してそれらの活性を試験
することにより示された。分離されたＡ１、Ａ２、Ｂ１
およびＢ２を含有する画分は、該試験微生物を阻害し
た。

【０１０５】このように、化合物ＧＥ２３０７７は、モ
ラクセラ・カタラーリス（Ｍ．ｃａｔａｒｒｈａｌｉ
ｓ）のインヒビターである。

【０１０６】モラクセラ・カタラーリス（Ｍ．ｃａｔａ
ｒｒｈａｌｉｓ）は、確認されている重要なヒト病原体
である。それは、気道感染症、特に、子供における中耳
炎および高齢者における下部気道感染症の一般的原因で
ある。広範に広がったβ−ラクタマーゼ酵素産生は、モ
ラクセラ・カタラーリス（Ｍ．ｃａｔａｒｒｈａｌｉ
ｓ）をペニシリンに対して耐性にする（Ｋ．ＭｃＧｒｅ
ｇｏｒ，Ｂ．Ｊ．Ｃｈａｎｇ，Ｂ．Ｊ．Ｍｅｅおよび
Ｔ．Ｖ．Ｒｉｌｅｙ．Ｍｏｒａｘｅｌｌａ ｃａｔａｒ
ｒｈａｌｉｓ：ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｉｇｎｉｆｉｃａ
ｎｃｅ，ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｓｕｓｃｅｐｔ
ｉｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ＢＲＯ ｂｅｔａ−ｌａｃｔ
ａｍａｓｅｓ．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｎ
ｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１７，２１９−３４，１９９８）。
最近では、モラクセラ・カタラーリス（Ｍ．ｃａｔａｒ
ｒｈａｌｉｓ）は、ストレプトコッカス・ニュモニエ
（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ
ｅ）およびヘモフィルス・インフルエンゼ（Ｈａｅｍｏ
ｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）に次ぐ３番目に
ありふれた気道病原体として認められている（Ｍ．Ｃ．
ＥｎｒｉｇｈｔおよびＨ．ＭｃＫｅｎｚｙ，Ｍｏｒａｘ
ｅｌｌａ（Ｂｒａｈａｍｅｌｌａ）ｃａｔａｒｒｈａｌ
ｉｓ−Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
ａｓｐｅｃｔ ｏｆａ ｒｅｄｉｓｃｏｖｅｒｅｄ
ｐａｔｈｏｇｅｎ，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．
４６，３６０−７１，１９９７）。

【０１０７】本発明の化合物は、医薬上許容される組成
物として単独で又は医薬上許容される担体と混合して投
与することが可能であり、他の抗微生物剤、例えばペニ
シリン、セファロスポリン、アミノグリコシドおよび糖
ペプチドと共に投与することも可能である。したがっ
て、併用療法は、最初の投与物の治療効果が完全には消
失しないうちに後続物が投与されるような該活性化合物
の連続的、同時および分離投与を含む。

【０１０８】したがって、本発明の化合物は医薬として
使用することができ、単一の因子Ａ１、Ａ２、Ｂ１およ
びＢ２は、単独で又は任意の比率のそれらの２以上の混
合物として使用することができる。該混合物は、所定量
の２以上の因子を混合することにより得ることができ
る。あるいは、それらの４つの因子の混合物を、前記方
法に従いアクチノマデュラ種（Ａｃｔｉｎｏｍａｄｕｒ
ａ ｓｐ．）ＤＳＭＺ１３４９１の発酵産物の単離から
直接的に得ることができる。該混合物の一例として、因
子Ａ１、Ａ２、Ｂ１およびＢ２により構成されるＧＥ２
３０７７複合体が挙げられる。

【０１０９】好ましくは、当技術分野において自体公知
であり参考図書（例えば、前記のもの）に報告されてい
る方法に従い非経口投与に適した製剤に、本発明の化合
物を製剤化する。

【０１１０】例えば、注射用無菌水中、可溶化剤、例え
ばポリプロピレングリコールまたはジメチルアセトアミ
ド、および界面活性剤、例えばポリオキシエチレンソル
ビタンモノオレアートまたはポリエトキシ化ヒマシ油
で、本発明の化合物を製剤化する。

【０１１１】非経口投与のための典型的な製剤化の一例
は、最終的な製剤１ｍｌ当たり１０ｍｇの抗生物質ＧＥ
２３０７７因子、１０〜２０％の界面活性剤（これは、
ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオ
キシエチレンヒマシ油誘導体またはポリオキシエチレン
硬化ヒマシ油誘導体でありうる）および０〜２０％、好
ましくは１０〜２０％の可溶化剤、例えばプロピレング
リコール、ジメチルアセトアミド、ジメチルホルムアミ
ド、ｔｅｒ−ブチル−Ｎ−ヒドロキシカルマバート、
１，２−、１，３−または１，４−ブタンジオール、オ
レイン酸エチル、テトラヒドロフルフリル−ポリエチレ
ン−グリコール ２００、ジメチルイソソルビド、ベン
ジルアルコールなどを含有する。好ましい可溶化剤はプ
ロピレングリコールである。

【０１１２】ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エス
テルは商業的に入手可能であり、それらのいくつかは商
品名「Ｔｗｅｅｎ」で取り引きされている。それらは、
非専有名「ポリソルベート」としても知られている。そ
れらの具体例としては、ポリソルベート２０、２１、４
０、６０、６１、６５、８０、８１および８５が挙げら
れる。本発明の製剤中での使用に好ましいものは、ポリ
ソルベート８０［ソルビタンモノ−９−オクタデカノア
ート、ポリ−（オキシ−１，２−エタンジイル）誘導
体］である。

【０１１３】ポリオキシエチレンヒマシ油およびポリオ
キシエチレン硬化ヒマシ油も、商業的に入手可能であ
る。それらのいくつかは、商品名「Ｃｒｅｍｏｐｈｏ
ｒ」で取り引きされている。そのような化合物の具体例
としては、ＣｒｅｍｏｐｈｏｒＥＬ（ポリエトキシル化
ヒマシ油）、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＲＨ ４０（ポリエ
トキシル化硬化ヒマシ油）、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＲＨ
６０（ＰＥＧ６０硬化ヒマシ油）またはＥｍｏｐｈｏ
ｒ ＥＬ−７１９（ポリオキシエチル化植物油）が挙げ
られる。

【０１１４】好ましくは、注射用製剤は、７±０．５の
範囲のｐＨを有すべきである。必要に応じて、適当な緩
衝剤で該製剤のｐＨを調節するのが望ましいかもしれな
い。ＴＲＩＳ（すなわち、トリヒドロキシメチルアミノ
メタン）またはリン酸塩が緩衝剤として簡便に使用され
うる。好ましい非経口投与用製剤は以下の賦形剤を含
む：０〜２０％、好ましくは１０〜２０％のプロピレン
グリコール。一般には、これらの製剤は、該有効成分を
該有機溶媒に溶解し次いで該界面活性成分を加え注射用
無菌水で所望の容積にまで最終的に希釈することにより
製造することができる。

【０１１５】あるいは、該有効成分は、使用前に再構成
される凍結乾燥粉末として製造することができる。

【０１１６】該有効成分と該界面活性剤（例えば、ポリ
エチレングリコール６０硬化ヒマシ油）とを含有する混
合物から該凍結乾燥物質を製造すれば、それは、有機溶
媒を加えることなく水性媒体のみで簡便に再構成されう
る。

【０１１７】所望により、必要に応じて、凍結乾燥物質
を粉末形態で得るために、一般的な凍結乾燥補助剤を加
えることができる。好ましくは、すべてのこれらの製剤
は、本発明の抗生物質に感受性である微生物を含む任意
の感染の治療におけるｉ．ｖ．投与に使用する。

【０１１８】あるいは、該有効成分は、使用前に再構成
される凍結乾燥粉末として製造することができる。該有
効成分と該界面活性剤（例えば、ポリエチレングリコー
ル６０硬化ヒマシ油）とを含有する混合物から該凍結乾
燥物質を製造すれば、それは、有機溶媒を加えることな
く水性媒体のみで簡便に再構成されうる。所望により、
必要に応じて、凍結乾燥物質を粉末形態で得るために、
一般的な凍結乾燥補助剤を加えることができる。

【０１１９】好ましくは、すべてのこれらの製剤は、本
発明の抗生物質に感受性である微生物を含む任意の感染
の治療におけるｉ．ｖ．投与に使用する。該抗生物質は
また、適当な医薬形態、例えばカプセル剤、錠剤または
水性懸濁剤として使用することができる。

【０１２０】該有効成分の投与量は、患者のタイプ、年
齢および状態、該投与のために選択した具体的な活性成
分および製剤、投与スケジュールなどを含む多数の要因
に左右される。一般には、単一の単位投与形ごとに、有
効な抗微生物投与量を用いる。反復適用／投与（例え
ば、１日２〜６回）が一般に好ましい。有効な投与量
は、一般には、０．５〜５０ｍｇ／ｋｇ体重／日の範囲
でありうる。好ましい局所製剤は、１％〜１０％の本発
明化合物を含有する軟膏剤である。

【０１２１】いずれにせよ、処方する医師は、与えられ
た状況における与えられた患者のための最適な投与量を
決定することができるであろう。

【０１２２】（図面の簡単な記載）図１は、株ＤＳＭＺ
１３４９１からのメナキノンのクロマトグラフィープ
ロフィールを示す。

【０１２３】図２は、ヌジョールマル中の抗生物質ＧＥ
２３０７７複合体のＩ．Ｒ．吸収スペクトルを示す。

【０１２４】図３は、ＤＭＳＯ−ｄ_６中で５００ＭＨｚ
で測定された抗生物質ＧＥ２３０７７複合体の^１Ｈ−Ｎ
ＭＲを示す。

【０１２５】図４は、ＤＭＳＯ−ｄ_６中で５００ＭＨｚ
で測定された抗生物質ＧＥ２３０７７因子Ａ１の^１Ｈ−
ＮＭＲを示す。

【０１２６】図５は、ＤＭＳＯ−ｄ_６中で１２５ＭＨｚ
で測定された抗生物質ＧＥ２３０７７因子Ａ１の^１３Ｃ
−ＮＭＲを示す。

【０１２７】図６は、ＤＭＳＯ−ｄ_６中で５００ＭＨｚ
で測定された抗生物質ＧＥ２３０７７因子Ｂ１の^１Ｈ−
ＮＭＲを示す。

【０１２８】図７は、ＤＭＳＯ−ｄ_６中で１２５ＭＨｚ
で測定された抗生物質ＧＥ２３０７７因子Ｂ１の^１３Ｃ
−ＮＭＲを示す。

【０１２９】以下の実施例は、本発明を限定することな
く本発明を更に説明するものである。

【０１３０】実施例１：ＧＥ２３０７７複合体の製造の
ための発酵方法 アクチノマデュラ種（Ａｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ ｓ
ｐ．）ＤＳＭＺ １３４９１をオートミール寒天斜面培
養上に維持した。これらの斜面培養を、５００ｍｌエル
レンマイヤーフラスコ内に含有された１００ｍｌの培地
Ａに対する接種物源として用いた。培地Ａは、グルコー
ス（２０ｇ）、酵母エキス（２ｇ）、大豆粉（８ｇ）、
ＮａＣｌ（１ｇ）、炭酸カルシウム（４ｇ）および１０
００ｍｌに調節される蒸留水を含んでいた。該培地のｐ
Ｈを７．３に調節した後、１２１℃で３０分間高圧滅菌
することにより滅菌した。接種後、該フラスコをロータ
リーシェーカー（２００ｒｐｍ、２インチの行程）上で
２８℃で７２時間インキュベートした。該インキュベー
ション時間の後、該増殖培養フラスコから、４Ｌの培地
Ａを含有する７Ｌジャーファーメンターへの、２％（ｖ
／ｖ）継代を行なった。該培養を、９００ｒｐｍで攪拌
し０．５ｖ／ｖ／分で通気しながら２８℃で４８時間イ
ンキュベートし、ついで、２００Ｌの培地Ａを含有する
発酵槽へ移した。該発酵を、２００ｒｐｍで攪拌し０．
５ｖ／ｖ／分で通気しながら２９℃で９６時間継続し
た。分析用ＨＰＬＣにより及びＲＮＡポリメラーゼ阻害
のアッセイで、該抗生物質の産生をモニターした。

【０１３１】実施例２：複合体ＧＥ２３０７７の回収お
よび精製のための方法 ９６時間後、２００Ｌの発酵のブロスを回収し、Ｈｙｆ
ｌｏフィルターマトリックスでの濾過により菌糸を除去
した。該濾液を、６ＬのＳ１１２ポリスチレン樹脂（Ｔ
ｈｅ Ｄｏｗ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．）と共にバッ
チ様（ｂａｔｃｈ−ｗｉｓｅ）に３時間攪拌した。つい
で該樹脂を回収し、水で洗浄し、アセトン：水：ｎ−ブ
タノール ８：１：１（ｖ／ｖ）の１５．５Ｌの混合物
で溶出した。ＧＥ２３０７７複合体を含有する溶出画分
を減圧下で濃縮し、予め平衡化された１．６ＬのＳ１１
２ポリスチレン樹脂（Ｔｈｅ Ｄｏｗ Ｃｈｅｍｉｃａ
ｌＣｏ．）を含有する４７×７ｃｍカラムの最上部に該
水性残渣をアプライした。該カラムを、相Ａ中の０％か
ら１００％までの相Ｂの２４０分間の直線勾配で２５ｍ
ｌ／分の流速で溶出した。相Ａは１００ｍＭ 硫酸アン
モニウムバッファー（ｐＨ７）であり、相Ｂは水であっ
た。該抗生物質を含有するプールした画分を集め、濃縮
し、凍結乾燥して、３８．６ｇの粗ＧＥ２３０７７複合
体を得た。

【０１３２】前記粗調製物の画分（２８ｇ）を１００ｍ
ｌの０．１Ｍ （ＮＨ_４）_２ＳＯ_４バッファーに溶解
し、ついで、０．１Ｍ 硫酸アンモニウムバッファー
（ｐＨ７）で平衡化された粒径７０〜２３０メッシュＡ
ＳＴＭのシラン化シリカゲル（Ｅ．Ｍｅｒｃｋ；Ｄａｒ
ｍｓｔａｄｔ Ｆ．Ｒ．Ｇｅｒｍａｎｙ）を含有する４
６×７．５ｃｍクロマトグラフィーカラムの最上部にア
プライした。中圧装置（Ｂｕｃｈｉ Ｐｒｅｐａｒａｔ
ｉｖｅ ＬＣ−ｓｙｓｔｅｍ Ｂ６８０−Ａ）を使用し
て、該カラムを６０ｍｌ／分の流速で溶出した。０．１
Ｍ 硫酸アンモニウムバッファー（ｐＨ７）中のメタノ
ールの比率を順次増加させることにより、ＧＥ２３０７
７複合体を溶出した。該溶出画分のすべてを、ＨＰＬＣ
により及びＲＮＡポリメラーゼ阻害に関する機能的アッ
セイを用いて分析した。

【０１３３】実施した分析用ＨＰＬＣ法は、カラムＣ１
８ Ｕｌｔｒａｓｐｈｅｒｅ ＯＤＳ（粒径５μｍ、２
５０×４．６ｍｍ；Ｂｅｃｋｍａｎｎ．Ｃｏ．）を備え
た装置ＨＰ ｍｏｄ．１０９０（Ｈｅｗｌｅｔｔ Ｐａ
ｃｈａｒｄ Ｃｏ．）上で行なった。相Ａは、メタノー
ル：１００ｍＭ 硫酸アンモニウムバッファー，５：９
５（ｖ／ｖ）の混合物であった。相Ｂは、メタノール：
水，２：８の混合物であった。５０％から８０％への相
Ｂの直線勾配を２０分のうちにアプライした。該流速は
１ｍｌ／分であった。該溶出は、２３０ｎｍでＵＶ−Ｄ
ＡＤ検出器でモニターした。

【０１３４】この方法で認められた保持時間は、１４．
４分（因子Ａ１）、１６．５分（因子Ｂ１）、１９．４
分（因子Ａ２）、２１．３分（因子Ｂ２）であった。

【０１３５】該活性画分をプールし、減圧下で乾燥し
た。ＧＥ２３０７７と（ＮＨ_４）_２ＳＯ_４とを含有する
得られた固体残渣を、メタノール中、室温で攪拌した。
該抗生物質を含有する該上清を取り出し、該固体残渣を
メタノールでの洗浄の反復サイクルに付した。該プール
化メタノール抽出物を真空下で濃縮し、水に溶解し、凍
結乾燥して、４．９ｇのＧＥ２３０７７複合体を得た。
該複合体を、２０ｍｌのＳｕｐｅｌｃｌｅａｎ ＬＣ−
ＳＡＸシリカに基づくアニオン交換樹脂（Ｓｕｐｅｌｃ
ｏ Ｉｎ、ｃ；Ｂｅｌｌｅｆｏｎｔｅ，ＵＳＡ）上での
クロマトグラフィーにより更に精製した。前記の複合体
調製物の一部（５００ｍｇ）を水に溶解し、水中で平衡
化された塩化物塩の形態の樹脂上にローディングした。
水で繰返し洗浄した後、０〜１ｍＭ ＨＣｌの１６０分
間の直線勾配をかけた。該溶出画分をＨＰＬＣにより分
析し、ＧＥ２３０７７複合体を含有するものをプール
し、凍結乾燥して、酸形態の精製されたＧＥ２３０７７
複合体２１０ｍｇを白色粉末として得た。

【０１３６】実施例３：ＧＥ２３０７７複合体の精製の
ための改良方法 実施例１に記載のとおりの４つ発酵体を集め、実施例２
に記載のとおりにＳ１１２樹脂上で加工した。アセト
ン：水：ｎ−ブタノール ８：１：１（ｖ／ｖ）で溶出
した固体残渣をメタノールに溶解し、エチルエーテルの
添加に際して沈殿させて、３１８ｇの粗ＧＥ２３０７７
複合体を得た。

【０１３７】この物質の一部（２９４ｇ）を水に溶解
し、９ＬのＨＰ２０ポリスチレン樹脂（Ｍｉｔｓｕｂｉ
ｓｈｉ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．）を含有する１１×
９６ｃｍのカラムの最上部にアプライした。該カラムを
２７Ｌの水で洗浄し、ついでアセトン：水 ５：９５
（ｖ／ｖ）で溶出した。集めた画分をＨＰＬＣにより及
びＲＮＡポリメラーゼ阻害に関して分析した。ＧＥ２３
０７７複合体を含有する画分をプールし、減圧下で濃縮
した。該固体残渣をメタノールに溶解し、エチルエーテ
ルの添加に際して沈殿させて、５５．２ｇの抗生物質Ｇ
Ｅ２３０７７複合体を固体残渣として得た。

【０１３８】２５ｇのこの調製物を、５０ｍＭ酢酸ナト
リウム（ｐＨ３．５）バッファーで平衡化された２．５
ＬのＱ−ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗ樹脂
（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｆｉｎｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ
ｓ，ＡＢ）を含有するカラム上で精製した。該カラムを
同じバッファーで溶出し、各画分を、同じバッファーで
溶出するＲＰ−８プレート（Ｅ．Ｍｅｒｃｋ；Ｆ．Ｒ．
Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）上のＴＬＣによ
り分析した。該ＧＥ２３０７７複合体を含有する画分を
プールし、１ＬのＨＰ−２０樹脂（Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈ
ｉ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．）上の吸着により及び水
での洗浄により及び水：アセトン ９：１（ｖ／ｖ）で
の溶出により脱塩した。ＧＥ２３０７７複合体を含有す
るプール化画分を濃縮乾固し、アセトンに再懸濁させ
た。該固体残渣を濾過して、６．２ｇの精製されたＧＥ
２３０７７複合体を得た。

【０１３９】実施例４：因子Ａ１、Ａ２、Ｂ１およびＢ
２の単離 実施例２に記載のとおりに製造した２１０ｍｇのＧＥ２
３０７７複合体を、２５０×１０ｍｍ Ｓｕｐｅｌｃｏ
ｓｉｌ ＬＣ８カラム，５μｍ（Ｓｕｐｅｌｃｏ Ｉｎ
ｃ；Ｂｅｌｌｅｆｏｎｔｅ，ＵＳＡ）上での分取ＨＰＬ
Ｃの反復クロマトグラフィー実施により分画した。水に
溶解した１２ｍｇの複合体を各クロマトグラフィー実施
において加工した。該分離は、４ｍｌ／分の流速で５０
％から８０％までの相Ｂの２５分間の直線勾配で溶出し
次いで８０％の相Ｂで５分間溶出することにより行なっ
た。相Ａはメタノール：１００ｍＭ 硫酸アンモニウム
（ｐＨ７）バッファー，５：９５（ｖ／ｖ）であり、相
Ｂはメタノール：水 ２：８（ｖ／ｖ）であった。ＵＶ
検出は２３０ｎｍにおけるものであった。個々のＧＥ２
３０７７因子を含有する溶出画分を集め、凍結乾燥し
た。該ＧＥ２３０７７因子から該無機塩を除去するため
に、該固体残渣をメタノール中で室温で攪拌した。該メ
タノール上清を取り出し、該固体残渣をメタノールでの
洗浄の反復サイクルに付した。該抗生物質を含有する該
メタノール層をプールし、真空下で濃縮乾固した。つい
で、水に溶解した該残渣を凍結乾燥させて、４１ｍｇの
因子Ａ１、３６ｍｇの因子Ｂ１、３１ｍｇの因子Ａ２お
よび３２ｍｇの因子Ｂ２を得た。

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、株ＤＳＭＺ １３４９１からのメナキ
ノンのクロマトグラフィープロフィールを示す。

【図２】図２は、ヌジョールマル中の抗生物質ＧＥ２３
０７７複合体のＩ．Ｒ．吸収スペクトルを示す。

【図３】図３は、ＤＭＳＯ−ｄ_６中で５００ＭＨｚで測
定された抗生物質ＧＥ２３０７７複合体の^１Ｈ−ＮＭＲ
を示す。

【図４】図４は、ＤＭＳＯ−ｄ_６中で５００ＭＨｚで測
定された抗生物質ＧＥ２３０７７因子Ａ１の^１Ｈ−ＮＭ
Ｒを示す。

【図５】図５は、ＤＭＳＯ−ｄ_６中で１２５ＭＨｚで測
定された抗生物質ＧＥ２３０７７因子Ａ１の^１３Ｃ−Ｎ
ＭＲを示す。

【図６】図６は、ＤＭＳＯ−ｄ_６中で５００ＭＨｚで測
定された抗生物質ＧＥ２３０７７因子Ｂ１の^１Ｈ−ＮＭ
Ｒを示す。

【図７】図７は、ＤＭＳＯ−ｄ_６中で１２５ＭＨｚで測
定された抗生物質ＧＥ２３０７７因子Ｂ１の^１３Ｃ−Ｎ
ＭＲを示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） //(Ｃ１２Ｐ 21/04 Ｃ１２Ｒ 1:03） Ｃ１２Ｒ 1:03） Ａ６１Ｋ 37/02 (72)発明者 エミリアーナ・コルテイ イタリア国、22069・ロベツラスカ（コ モ）、ビア・ドン・モイアーナ、27 (72)発明者 エドアルド・ジヤコモ・サルツビ フランス国、94120・ホントナイ−スー− ボワ、リユ・ドウ・ヌイイ、16・ビス (72)発明者 ステフアニア・ステフアネツリ イタリア国、20025・レーニヤノ（バレー ゼ）、ビア・カルロ・ポルタ・55 (72)発明者 ニコレツタ・モンタニーニ イタリア国、21046・マルナーテ（バレー ゼ）、ビア・レデイプツリヤ・15 (72)発明者 フラービア・マリネツリ イタリア国、20148・ミラノ（ミラノ）、 ビア・ルーベンス・25 (72)発明者 ミヒヤエル・クルツ ドイツ国、65719・ホーフハイム、エアレ ンベーク・７ (72)発明者 エンリコ・セルバ イタリア国、27027・グロペツロ・カイロ ーリ（パビーア）、ビア・デイ・ビツトー リオ・15 Ｆターム(参考） 4B064 AG37 CA03 CE11 DA03 4C084 AA01 AA02 AA07 BA10 BA17 BA24 DC50 MA17 MA44 MA66 ZB352 4C087 AA01 AA02 BC26 CA16 CA25 MA17 MA44 MA66 NA14 ZB35 4H045 AA10 AA20 AA30 BA35 CA11 DA55 EA29 FA73 GA23

Claims (17)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 以下の特徴： Ａ）キセノン原子銃を使用し８ｋＶ、電流０．２３ｍＡ
   で運転してフィニガン（Ｆｉｎｎｉｇａｎ）ＴＳＱ７０
   ０三連四重極型質量分析計上で得られた（サンプルはイ
   オン化マトリックスとしてのグリセロールと混合されて
   いる）、８０４ｍ／ｚの［Ｍ−Ｈ］^＋に対応する主ＦＡ
   Ｂ質量ピーク、 Ｂ）内部標準としての２．５ｐｐｍに定められたＤＭＳ
   Ｏの残留ピークを基準として以下のシグナル（単位はｐ
   ｐｍであり、星印が付された値は、２つの^１Ｈシグナル
   が重複したものである）を示す、ＤＭＳＯ−ｄ_６中、６
   ００ＭＨｚで記録された^１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（図
   ４）： 【化１】 Ｃ）内部標準としての３９．５ｐｐｍに定められたＤＭ
   ＳＯの残留ピークを基準として以下のシグナル（単位は
   ｐｐｍであり、星印が付された値は、２つの^{１ ３}Ｃシグ
   ナルが重複したものである）を示す、ＤＭＳＯ−ｄ
   _６中、１５０ＭＨｚで記録された^１３Ｃ−ＮＭＲスペク
   トル（図５）： 【化２】 Ｄ）以下のクロマトグラフィー条件下のＨＰＬＣ分析： 装置：ＨＰ ｍｏｄ．１０９０（ＤＡＤ検出器）； カラム：ベックマン（Ｂｅｃｋｍａｎｎ）ＯＤＳ Ｃ１
   ８（５μｍ ２５０×４．６ｍｍ）； 溶出：無勾配で１５％の相Ｂ； 相Ａ：アンモニウムホルミアート（２．５ｇ／ｌ）：メ
   タノール（９９：１ｖ／ｖ）； 相Ｂ：アンモニウムホルミアート（２．５ｇ／ｌ）：メ
   タノール（３０：７０ｖ／ｖ）； 流速：１．５ｍｌ／分； 検出器：ＵＶ ２３０ｎｍ により測定された保持時間：１４．１６分 を有する抗生物質ＧＥ２３０７７因子Ａ１およびその医
   薬上許容される塩。
2. 【請求項２】 以下の特徴： Ａ）キセノン原子銃を使用し８ｋＶ、電流０．２３ｍＡ
   で運転してフィニガン（Ｆｉｎｎｉｇａｎ）ＴＳＱ７０
   ０三連四重極型質量分析計上で得られた（サンプルはイ
   オン化マトリックスとしてのグリセロールと混合されて
   いる）、８０４ｍ／ｚの［Ｍ−Ｈ］^＋に対応する主ＦＡ
   Ｂ質量ピーク、 Ｂ）以下のクロマトグラフィー条件下のＨＰＬＣ分析： 装置：ＨＰ ｍｏｄ．１０９０（ＤＡＤ検出器）； カラム：ベックマン（Ｂｅｃｋｍａｎｎ）ＯＤＳ Ｃ１
   ８（５μｍ ２５０×４．６ｍｍ）； 溶出：無勾配で１５％の相Ｂ； 相Ａ：アンモニウムホルミアート（２．５ｇ／ｌ）：メ
   タノール（９９：１ｖ／ｖ）； 相Ｂ：アンモニウムホルミアート（２．５ｇ／ｌ）：メ
   タノール（３０：７０ｖ／ｖ）； 流速：１．５ｍｌ／分； 検出器：ＵＶ ２３０ｎｍ により測定された保持時間：２０．９０分、 Ｃ）内部標準としての２．５ｐｐｍに定められたＤＭＳ
   Ｏの残留ピークを基準として以下のシグナル（単位はｐ
   ｐｍであり、星印が付された値は、２つの^１Ｈシグナル
   が重複したものである）を示す、ＤＭＳＯ−ｄ_６（ヘキ
   サジューテロジメチルスルホキシド）中、６００ＭＨｚ
   で記録された^１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（図４；因子Ａ２
   から因子Ａ１への完全な変換の後に記録されたもの）： 【化３】 Ｄ）内部標準としての３９．５ｐｐｍに定められたＤＭ
   ＳＯの残留ピークを基準として以下のシグナル（単位は
   ｐｐｍであり、星印が付された値は、２つの^{１ ３}Ｃシグ
   ナルが重複したものである）を示す、ＤＭＳＯ−ｄ
   _６（ヘキサジューテロジメチルスルホキシド）中、１５
   ０ＭＨｚで記録された^１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル（図
   ５；因子Ａ２から因子Ａ１への完全な変換の後に記録さ
   れたもの）： 【化４】 を有する抗生物質ＧＥ２３０７７因子Ａ２およびその医
   薬上許容される塩。
3. 【請求項３】 以下の特徴： Ａ）キセノン原子銃を使用し８ｋＶ、電流０．２３ｍＡ
   で運転してフィニガン（Ｆｉｎｎｉｇａｎ）ＴＳＱ７０
   ０三連四重極型質量分析計上で得られた（サンプルはイ
   オン化マトリックスとしてのグリセロールと混合されて
   いる）、８０６ｍ／ｚの［Ｍ−Ｈ］^＋に対応する主ＦＡ
   Ｂ質量ピーク、 Ｂ）内部標準としての２．５ｐｐｍに定められたＤＭＳ
   Ｏの残留ピークを基準として以下のシグナル（単位はｐ
   ｐｍであり、星印が付された値は、２つの^１Ｈシグナル
   が重複したものである）を示す、ＤＭＳＯ−ｄ_６中、６
   ００ＭＨｚで記録された^１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（図
   ６）： 【化５】 Ｃ）内部標準としての３９．５ｐｐｍに定められたＤＭ
   ＳＯの残留ピークを基準として以下のシグナル（単位は
   ｐｐｍであり、星印が付された値は、２つの^{１ ３}Ｃシグ
   ナルが重複したものである）を示す、ＤＭＳＯ−ｄ
   _６中、１５０ＭＨｚで記録された^１３Ｃ−ＮＭＲスペク
   トル（図７）： 【化６】 Ｄ）以下のクロマトグラフィー条件下のＨＰＬＣ分析： 装置：ＨＰ ｍｏｄ．１０９０（ＤＡＤ検出器）； カラム：ベックマン（Ｂｅｃｋｍａｎｎ）ＯＤＳ Ｃ１
   ８（５μｍ ２５０×４．６ｍｍ）； 溶出：無勾配で１５％の相Ｂ； 相Ａ：アンモニウムホルミアート（２．５ｇ／ｌ）：メ
   タノール（９９：１ｖ／ｖ）； 相Ｂ：アンモニウムホルミアート（２．５ｇ／ｌ）：メ
   タノール（３０：７０ｖ／ｖ）； 流速：１．５ｍｌ／分； 検出器：ＵＶ ２３０ｎｍ により測定された保持時間：１６．５６分 を有する抗生物質ＧＥ２３０７７因子Ｂ１およびその医
   薬上許容される塩。
4. 【請求項４】 以下の特徴： Ａ）キセノン原子銃を使用し８ｋＶ、電流０．２３ｍＡ
   で運転してフィニガン（Ｆｉｎｎｉｇａｎ）ＴＳＱ７０
   ０三連四重極型質量分析計上で得られた（サンプルはイ
   オン化マトリックスとしてのグリセロールと混合されて
   いる）、８０６ｍ／ｚの［Ｍ−Ｈ］^＋に対応する主ＦＡ
   Ｂ質量ピーク、 Ｂ）以下のクロマトグラフィー条件下のＨＰＬＣ分析： 装置：ＨＰ ｍｏｄ．１０９０（ＤＡＤ検出器）； カラム：ベックマン（Ｂｅｃｋｍａｎｎ）ＯＤＳ Ｃ１
   ８（５μｍ ２５０×４．６ｍｍ）； 溶出：無勾配で１５％の相Ｂ； 相Ａ：アンモニウムホルミアート（２．５ｇ／ｌ）：メ
   タノール（９９：１ｖ／ｖ）； 相Ｂ：アンモニウムホルミアート（２．５ｇ／ｌ）：メ
   タノール（３０：７０ｖ／ｖ）； 流速：１．５ｍｌ／分； 検出器：ＵＶ ２３０ｎｍ により測定された保持時間：２２．７１分、 Ｃ）内部標準としての２．５ｐｐｍに定められたＤＭＳ
   Ｏの残留ピークを基準として以下のシグナル（単位はｐ
   ｐｍであり、星印が付された値は、２つの^１Ｈシグナル
   が重複したものである）を示す、ＤＭＳＯ−ｄ_６（ヘキ
   サジューテロジメチルスルホキシド）中、６００ＭＨｚ
   で記録された^１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（図６；因子Ｂ２
   から因子Ｂ１への完全な変換の後に記録されたもの）： 【化７】 Ｄ）内部標準としての３９．５ｐｐｍに定められたＤＭ
   ＳＯの残留ピークを基準として以下のシグナル（単位は
   ｐｐｍであり、星印が付された値は、２つの^{１ ３}Ｃシグ
   ナルが重複したものである）を示す、ＤＭＳＯ−ｄ
   _６（ヘキサジューテロジメチルスルホキシド）中、１５
   ０ＭＨｚで記録された^１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル（図
   ７；因子Ｂ２から因子Ｂ１への完全な変換の後に記録さ
   れたもの）： 【化８】 を有する抗生物質ＧＥ２３０７７因子Ｂ２およびその医
   薬上許容される塩。
5. 【請求項５】 ・アクチノマデュラ種（Ａｃｔｉｎｏｍ
   ａｄｕｒａ ｓｐ．）ＤＳＭＺ １３４９１またはその
   ＧＥ２３０７７産生変異体もしくは突然変異体を培養
   し、 ・得られた抗生物質を該菌糸および／または該培養ブロ
   スから単離し、 ・単離された抗生物質を精製し、 ・４つの抗生物質因子Ａ１、Ａ２、Ｂ１およびＢ２をク
   ロマトグラフィー手段により分離することを含んでな
   る、請求項１〜４のいずれか１項記載の抗生物質の製造
   方法。
6. 【請求項６】 任意の比率の請求項１〜４のいずれか１
   項記載の２以上の因子の抗生物質ＧＥ２３０７７混合物
   およびそれらの医薬上許容される塩。
7. 【請求項７】 以下の特徴： Ａ）パーキン・エルマー（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ）
   分光光度計ｍｏｄ．ラムダ（Ｌａｍｂｄａ）１６上で記
   録された、以下の特徴を示す紫外線吸収スペクトル： 【化９】 Ｂ）Ａ）キセノン原子銃を使用し８ｋＶ、電流０．２３
   ｍＡで運転してフィニガン（Ｆｉｎｎｉｇａｎ）ＴＳＱ
   ７００三連四重極型質量分析計上で得られた（サンプル
   はイオン化マトリックスとしてのグリセロールと混合さ
   れている）、８０４および８０６ ｍ／ｚの［Ｍ−Ｈ］
   ^＋に対応する主ＦＡＢ質量ピーク、 Ｃ）バリン、セリン、トレオニン、イソセリン、グリシ
   ンおよび２，３−ジアミノプロパン酸の存在を示す酸加
   水分解物のアミノ酸分析、 Ｄ）ＩＦＳ−４８フーリエ変換（Ｆｏｕｒｉｅｒ Ｔｒ
   ａｎｓｆｏｒｍ）分光光度計でヌジョールマル中で記録
   された、以下の吸収極大ν（ｃｍ^−１）を示す赤外吸収
   スペクトル（図２）： 【化１０】 Ｅ）以下のクロマトグラフィー条件下のＨＰＬＣ分析： 装置：ＨＰ ｍｏｄ．１０９０（ＤＡＤ検出器）； カラム：ベックマン（Ｂｅｃｋｍａｎｎ）ＯＤＳ Ｃ１
   ８（５μｍ ２５０×４．６ｍｍ）； 溶出：無勾配の１５％の相Ｂ； 相Ａ：アンモニウムホルミアート（２．５ｇ／ｌ）：メ
   タノール（９９：１ｖ／ｖ）； 相Ｂ：アンモニウムホルミアート（２．５ｇ／ｌ）：メ
   タノール（３０：７０ｖ／ｖ）； 流速：１．５ｍｌ／分； 検出器：ＵＶ ２３０ｎｍ により測定された前記の４つのＧＥ２３０７７因子の保
   持時間：１４．１６分（Ａ１）、１６．５６分（Ｂ
   １）、２０．９０分（Ａ２）、２２．７１分（Ｂ２）、 Ｆ）ＤＭＳＯ−ｄ_６中、６００ｍＨｚで記録された^１Ｈ
   −ＮＭＲスペクトル（図３）： 【化１１】 Ｇ）シリカゲルプレート メルク（Ｍｅｒｃｋ）５７１
   ４を使用しエタノール：ｎ−ブタノール：水 ２：２：
   １（ｖ／ｖ）中で展開するＴＬＣにより分析された０．
   ７のＲ_ｆ値を有する抗生物質ＧＥ２３０７７複合体およ
   びその医薬上許容される塩である、請求項１〜４記載の
   ４つの因子の請求項６記載の混合物。
8. 【請求項８】 以下の仮の式： 【化１２】 （式中、 Ｒは、因子Ａ１およびＡ２に関しては、 【化１３】 であり、 Ｒは、因子Ｂ１およびＢ２に関しては、 【化１４】 である）に対応する化学構造を有する、請求項１〜４の
   いずれか１項記載の抗生物質およびその医薬上許容され
   る塩。
9. 【請求項９】 ・アクチノマデュラ種（Ａｃｔｉｎｏｍ
   ａｄｕｒａ ｓｐ．）ＤＳＭＺ １３４９１またはその
   ＧＥ２３０７７産生変異体もしくは突然変異体を培養
   し、 ・得られた抗生物質を該菌糸および／または該培養ブロ
   スから単離し、 ・単離された抗生物質を精製することを含んでなる、請
   求項７〜８のいずれか１項記載の抗生物質の製造方法。
10. 【請求項１０】 精製をクロマトグラフィー技術により
    行なう、請求項９記載の製造方法。
11. 【請求項１１】 培養を、同化されうる炭素源、窒素源
    および無機塩源を含有する水性栄養培地内で好気性条件
    下で行なう、請求項５および９〜１０のいずれか１項記
    載の製造方法。
12. 【請求項１２】 該アクチノマデュラ種（Ａｃｔｉｎｏ
    ｍａｄｕｒａ ｓｐ．）ＤＳＭＺ １３４９１またはそ
    のＧＥ２３０７７産生変異体もしくは突然変異体を予備
    培養する、請求項１１記載の製造方法。
13. 【請求項１３】 請求項１〜４および６〜８のいずれか
    １項記載の抗生物質を含んでなる医薬組成物。
14. 【請求項１４】 医薬上許容される担体を含む、請求項
    １３記載の医薬組成物。
15. 【請求項１５】 ペニシリン、セファロスポリン、アミ
    ノグリコシドおよび糖ペプチドから選ばれるもう１つの
    抗微生物剤を含む、請求項１３または１４記載の医薬組
    成物。
16. 【請求項１６】 請求項１〜４および６〜８のいずれか
    １項記載の抗生物質の、医薬としての使用。
17. 【請求項１７】 請求項１〜４および６〜８のいずれか
    １項記載の抗生物質の、細菌感染症の治療用の医薬の製
    造のための使用。