JP2002014035A - Light measuring method and microplate - Google Patents
Light measuring method and microplateInfo
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- G01N21/645—Specially adapted constructive features of fluorimeters
- G01N21/6452—Individual samples arranged in a regular 2D-array, e.g. multiwell plates
Abstract
Description
【０００１】[0001]
【発明の属する技術分野】本発明は、マイクロプレート
の表面に形成される複数個のサンプル収容凹部（本明細
書中では「ウエル」という。）内に収容された標本を測
定する光測定方法、及びその光測定方法に使用されるマ
イクロプレートに関する。BACKGROUND OF THE INVENTION 1. Field of the Invention The present invention relates to an optical measurement method for measuring a sample accommodated in a plurality of sample accommodating recesses (hereinafter, referred to as "wells") formed on the surface of a microplate. And a microplate used for the optical measurement method.
【０００２】[0002]
【従来の技術】標本の蛍光などの特性を測定する装置と
して、マイクロプレートを使用するものがある。マイク
ロプレートはその表面に標本を個別に収容するための複
数個のウエルを有している。マイクロプレートの各ウエ
ルには、標本の他、標本と相互作用を起こす所定の試薬
が滴下され、その相互作用により発生する蛍光や透過光
の経時変化等を光学的に測定することにより、複数の標
本の反応の様子が調べられる。2. Description of the Related Art As an apparatus for measuring characteristics such as fluorescence of a specimen, there is an apparatus using a microplate. The microplate has a plurality of wells on its surface for individually storing specimens. In addition to the sample, a predetermined reagent that interacts with the sample is dropped into each well of the microplate, and a plurality of reagents that interact with the sample are optically measured to measure the change over time of the fluorescence and transmitted light generated by the interaction. The reaction of the specimen is examined.
【０００３】近年、取得すべき測定データが大量化され
るのに伴い、マイクロプレート上に形成されるウエルの
個数は、９６ウエル〜３８４ウエル、さらには１５３６
ウエルと増加する傾向にある。マイクロプレートの外形
寸法は、ウエルの個数に依らず１２７ｍｍ×８５ｍｍと
ほぼ統一されているので、ウエルの個数の増加に伴い、
ウエルの大きさが細分化される。因みに、細分化によ
り、１回の反応に必要な試薬と標本の量の節約が可能と
なりコスト低減にも繋がる。In recent years, as the amount of measurement data to be acquired has increased, the number of wells formed on a microplate has been increased from 96 wells to 384 wells, and even 1536 wells.
Wells tend to increase. Since the external dimensions of the microplate are almost unified to 127 mm x 85 mm regardless of the number of wells, with the increase in the number of wells,
The size of the well is subdivided. By the way, the subdivision makes it possible to save the amount of reagents and samples required for one reaction, which leads to cost reduction.
【０００４】現在は、３８４ウエルや１５３６ウエル等
マイクロプレートが多く使われ始めている。それぞれの
ウエルの大きさは、３８４ウエルのマイクロプレートで
直径４．５ｍｍ程度、１５３６ウエルのマイクロプレー
トになると直径１．５ｍｍと極めて小さくなる。さて、
このようなマイクロプレートを使い、全てのウエルから
の光の経時変化を短時間で測定するためには、１２７ｍ
ｍ×８５ｍｍのマイクロプレートの全体を覆うような口
径の大きいレンズで一括に照明することが有効である
（特開平１０−１９７４４９号公報）。At present, microplates such as 384 well and 1536 well have begun to be widely used. The size of each well is extremely small, about 4.5 mm in diameter for a 384-well microplate, and 1.5 mm for a 1536-well microplate. Now,
In order to use such a microplate to measure the change over time of light from all wells in a short time, 127 m
It is effective to collectively illuminate with a large-diameter lens that covers the entire mx85 mm microplate (JP-A-10-197449).
【０００５】本明細書では、このようにマイクロプレー
ト上の複数のウエルを含む広い範囲を一括に照明するこ
とによって、それら複数のウエルにそれぞれ収容された
各標本を同時に測定する光測定を「一括型光測定」と称
す。また、一括型光測定の際には、ＣＣＤカメラの撮像
面（例えば１００万ピクセル）上に各ウエルの縮小像が
一括して投影される。[0005] In the present specification, by illuminating a wide area including a plurality of wells on a microplate at a time as described above, the light measurement for simultaneously measuring each sample contained in each of the plurality of wells is referred to as a "batch". Mold light measurement ". Further, in the collective optical measurement, a reduced image of each well is collectively projected on the imaging surface (for example, 1 million pixels) of the CCD camera.
【０００６】そして一括型光測定では、どこのウエルで
どのような反応が生起したかを確認するために、各ウエ
ルに番地を付与して管理する必要がある。この際、９６
ウエルのようにウエル数が少ないマイクロプレートにつ
いては、予め各ウエルの位置とＣＣＤカメラの各ピクセ
ルの位置とを対応付けておけばよかった。In the collective optical measurement, it is necessary to assign an address to each well and manage the well in order to confirm what reaction has occurred in which well. At this time, 96
For a microplate with a small number of wells, such as wells, the position of each well should be associated with the position of each pixel of the CCD camera in advance.
【０００７】ここで、本明細書では、「ウエルの位置」
という表現を、「ウエルの投影像の撮像面上における位
置」の意味で使用する。Here, in this specification, "position of well"
Is used in the meaning of “the position of the well projection image on the imaging surface”.
【０００８】[0008]
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、ウエル
が細分化されると、ＣＣＤカメラ上でのウエルの投影像
の間隔も小さくなる。例えば、縮小倍率を１／１０とし
た場合、１５３６ウエルではウエルの間隔はおよそ１ｍ
ｍであるから、そのウエルの投影像の間隔は０．１ｍｍ
となる。However, when the wells are subdivided, the distance between the projected images of the wells on the CCD camera becomes smaller. For example, if the reduction ratio is 1/10, the spacing between wells is about 1 m in 1536 wells.
m, the distance between the projected images of the wells is 0.1 mm.
Becomes
【０００９】この場合、マイクロプレートが基準位置に
対して少しでも斜めに配置されると、ウエルの間隔が狭
いために、ＣＣＤカメラ上では、各ピクセルにそれぞれ
対応づけられた各ウエルの位置に、異なるウエルの投影
像が重なってしまう場合がある。因みに、マイクロプレ
ートが基準位置に対して１°斜めに傾いて配置される
と、マイクロプレート上で最大２．２ｍｍずれ、ＣＣＤ
カメラ上で０．２２ｍｍずれが生じてしまう。この０．
２２ｍｍのずれは、ウエルの投影像の間隔０．１ｍｍよ
りも大きいので、このときには、上記のような重なりが
生じてしまう。この結果、各ウエルに正しい番地を付与
することができなくなる。In this case, if the microplate is arranged at a slight angle with respect to the reference position, the distance between the wells is small. Therefore, on the CCD camera, the position of each well corresponding to each pixel is The projected images of different wells may overlap. By the way, when the microplate is arranged at an angle of 1 ° with respect to the reference position, the position of the microplate is shifted up to 2.2 mm on the microplate.
A displacement of 0.22 mm occurs on the camera. This 0.
Since the shift of 22 mm is larger than the interval between the projected images of the wells of 0.1 mm, the above-described overlap occurs at this time. As a result, a correct address cannot be assigned to each well.
【００１０】このように従来は、ウエルが細分化する
と、１つのマイクロプレートから得た各測定データを管
理することが困難になる。さらに、以上説明したように
測定データが大量化される傾向にある光測定（特に一括
型光測定）では、その測定が複数回に亘り、しかも各測
定の反応条件や使用されるマイクロプレートの種類など
が異なるような場合、測定データを測定の種類毎にも管
理しなければならない。しかし、一般に、マイクロプレ
ートにバーコードを付与する等の従来の管理方法は、専
用のバーコードリーダを要するために、装置が大型化す
る等の問題を孕んでいる。As described above, conventionally, when a well is subdivided, it becomes difficult to manage each measurement data obtained from one microplate. Furthermore, as described above, in light measurement (in particular, collective light measurement) in which measurement data tends to be large, the measurement is performed a plurality of times, and the reaction conditions of each measurement and the type of microplate used In such a case, the measurement data must be managed for each type of measurement. However, in general, conventional management methods, such as providing a barcode to a microplate, require a dedicated barcode reader, and thus have problems such as an increase in the size of the apparatus.
【００１１】本発明は、以上の問題に鑑みてなされたも
ので、測定データの大量化に対応することのできる光測
定方法、及びマイクロプレートを提供することを目的と
し、特に、請求項１、請求項２、請求項３、請求項４、
請求項５、請求項７、請求項８、請求項９に記載の発明
は、マイクロプレートの各ウエルから得た各測定データ
を確実に管理することを目的とし、請求項６、請求項７
に記載の発明は、測定データを測定の種類に応じて管理
することを目的とする。The present invention has been made in view of the above problems, and has as its object to provide an optical measurement method and a microplate that can cope with an increase in the amount of measurement data. Claim 2, Claim 3, Claim 4,
The invention according to claims 5, 7, 8, and 9 aims at reliably managing each measurement data obtained from each well of the microplate, and aims at claim 6, claim 7, and claim 7.
The object of the invention described in (1) is to manage the measurement data according to the type of measurement.
【００１２】[0012]
【課題を解決するための手段】請求項１に記載の光測定
方法は、複数のウエルを配置したマイクロプレートを照
明し、そのマイクロプレートにおけるウエル形成面から
の光が成す投影像を撮像素子にて検出することにより、
各ウエルに収容された各標本を光学測定する光測定方法
において、配置状態を示す所定の標識が設けられたマイ
クロプレートを使用し、前記標識の投影像を前記撮像素
子により検出し、前記検出した投影像の状態に基づい
て、前記各ウエルからの各光が成す各投影像の形成位置
を認識することを特徴とする。According to a first aspect of the present invention, there is provided a light measuring method, wherein a microplate on which a plurality of wells are arranged is illuminated, and a projection image formed by light from a well forming surface of the microplate is formed on an image sensor. By detecting
In the optical measurement method of optically measuring each sample housed in each well, using a microplate provided with a predetermined marker indicating the arrangement state, the projected image of the marker is detected by the imaging device, the detected The position of each projection image formed by each light from each well is recognized based on the state of the projection image.
【００１３】このように、前記標識を利用して前記認識
を行う結果、前記マイクロプレートの配置状態に依ら
ず、前記光学測定により得た各測定データ（各ウエルか
らの各光が成す各投影像）を、確実にウエル毎に管理す
ることが可能となる。しかも、上記認識のための手段と
して、前記光学測定において使用される前記撮像素子を
利用しているので、効率的である。As described above, as a result of performing the recognition using the marker, each measurement data (each projection image formed by each light from each well) obtained by the optical measurement is independent of the arrangement state of the microplate. ) Can be reliably managed for each well. Moreover, since the image pickup device used in the optical measurement is used as a means for the recognition, it is efficient.
【００１４】請求項２に記載の光測定方法は、請求項１
に記載の光測定方法において、前記標識は、前記複数の
ウエルのうち少なくとも２つの所定のウエルに注入され
た試薬からなることを特徴とする。このような標識は、
従来のマイクロプレートに何ら変更を加えることなく、
複数のウエルの一部に試薬を注入するだけの簡単な工程
で設けることができる。According to a second aspect of the present invention, there is provided a light measuring method.
The method according to claim 1, wherein the label comprises a reagent injected into at least two predetermined wells of the plurality of wells. Such signs are
Without changing the conventional microplate,
It can be provided by a simple process of injecting a reagent into a part of the plurality of wells.
【００１５】しかも、一般に試薬は所定の光学特性を有
するので、その光学特性を利用すれば、前記標識の投影
像を確実に検出することができる。また、本発明を適用
しないときには、その試薬を除去するだけで、マイクロ
プレートを従来と同様に使用することも可能である。す
なわち、この光測定方法は、試薬を注入するだけの簡単
な工程によって実現可能であり、また専用のマイクロプ
レートを使用する必要がない点で優れている。In addition, since the reagent generally has predetermined optical characteristics, the use of the optical characteristics makes it possible to reliably detect the projected image of the marker. Further, when the present invention is not applied, the microplate can be used in the same manner as in the related art simply by removing the reagent. That is, this optical measurement method is excellent in that it can be realized by a simple process of injecting a reagent, and there is no need to use a dedicated microplate.
【００１６】請求項３に記載の光測定方法は、請求項２
に記載の光測定方法において、前記試薬は、前記各標本
に注入されるべき標本測定用試薬とは異なる光学特性を
有した試薬であることを特徴とする。この場合、標識の
投影像と、標本測定用試薬が注入されたウエルからの光
が成す投影像とは、互いに異なる光学特性を有するの
で、仮に、標識として使用されるウエルが標本測定のた
めに使用される各ウエルの中に混在していても、前記撮
像素子によって確実に識別することができる。According to a third aspect of the present invention, there is provided an optical measurement method according to the second aspect.
Wherein the reagent is a reagent having an optical characteristic different from that of a sample measurement reagent to be injected into each of the samples. In this case, since the projected image of the label and the projected image formed by the light from the well into which the sample measurement reagent is injected have different optical characteristics from each other, if the well used as the label is used for the sample measurement, Even if they are mixed in each of the wells used, they can be reliably identified by the imaging device.
【００１７】この結果、標識として使用すべきウエルの
配置の仕方に自由度が増す。請求項４に記載の光測定方
法は、複数のウエルが形成されたマイクロプレートを照
明し、そのマイクロプレートにおけるウエル形成面から
の光が成す投影像を撮像素子にて検出することにより、
各ウエルに収容された各標本を光学測定する光測定方法
において、前記各ウエルに前記標本が収容されていない
状態で、前記マイクロプレートを照明し、前記照明下で
前記マイクロプレートからの光が成す投影像を前記撮像
素子により検出し、前記検出した前記投影像の状態に基
づいて、前記各ウエルからの各光が成す各投影像の形成
位置を認識することを特徴とする。As a result, the degree of freedom in arranging wells to be used as markers increases. The light measurement method according to claim 4 illuminates a microplate on which a plurality of wells are formed, and detects a projection image formed by light from a well formation surface of the microplate with an image sensor.
In the optical measurement method of optically measuring each sample accommodated in each well, the microplate is illuminated in a state where the sample is not accommodated in each well, and light from the microplate forms under the illumination. A projection image is detected by the imaging device, and a position of each projection image formed by each light from each of the wells is recognized based on the state of the detected projection image.
【００１８】このように、マイクロプレートを照明して
投影することにより前記認識を行う結果、前記マイクロ
プレートの配置状態に依らず、前記光学測定により得た
各測定データ（各ウエルからの各光が成す各投影像）
を、確実にウエル毎に管理することが可能となる。しか
も、上記認識のための手段として、前記光学測定におい
て使用される撮像素子を利用しているので、効率的であ
る。As described above, the recognition is performed by illuminating and projecting the microplate. As a result, regardless of the arrangement state of the microplate, each measurement data (each light from each well is obtained by the optical measurement) obtained by the optical measurement. Each projected image)
Can be reliably managed for each well. In addition, since the image pickup device used in the optical measurement is used as a means for the recognition, it is efficient.
【００１９】請求項５に記載の光測定方法は、複数のウ
エルを配置したマイクロプレートを照明し、そのマイク
ロプレートにおけるウエル形成面からの光が成す投影像
を撮像素子にて検出することにより、各ウエルに収容さ
れた各標本を光学測定する光測定方法であって、前記撮
像素子に対する前記マイクロプレートの位置を相対的に
ずらすことによって、前記ウエル形成面の複数の部分領
域について個別に前記光学測定を行う光測定方法におい
て、配置状態を示す所定の標識が設けられた前記マイク
ロプレートを使用すると共に、前記各光学測定において
は、その標識の投影像を前記撮像素子により検出し、前
記ウエル形成面全域の投影像を一画面として得るため
に、前記検出した前記標識の投影像に基づいて、前記各
光学測定において検出される、前記各部分領域の各投影
像を位置合わせすることを特徴とする。According to a fifth aspect of the present invention, in the light measuring method, a microplate on which a plurality of wells are arranged is illuminated, and a projection image formed by light from a well forming surface of the microplate is detected by an image sensor. An optical measurement method for optically measuring each sample housed in each well, wherein the position of the microplate is relatively shifted with respect to the imaging element, so that the optical measurement is individually performed for a plurality of partial regions of the well forming surface. In the optical measurement method for performing the measurement, the microplate provided with a predetermined mark indicating the arrangement state is used, and in each of the optical measurements, a projected image of the mark is detected by the imaging device, and the well formation is performed. In order to obtain a projection image of the entire surface as one screen, the optical measurement is performed based on the detected projection image of the sign. Is the characterized by aligning each projection image of the respective partial areas.
【００２０】このように、前記標識を利用することによ
り前記位置合わせを行う結果、各光学測定により得た各
測定データ（各部分領域からの各光が成す各投影像）
を、互いに繋ぎ合わせて一画面を構築し、管理すること
ができる。しかも、上記位置合わせのための手段とし
て、前記光学測定において使用される撮像素子を利用し
ているので、効率的である。As described above, as a result of performing the alignment by using the marker, each measurement data (each projection image formed by each light from each partial area) obtained by each optical measurement.
Can be connected to each other to construct and manage one screen. In addition, since the image pickup device used in the optical measurement is used as a means for the above-mentioned alignment, it is efficient.
【００２１】因みに、このようにマイクロプレートの部
分領域毎に光学測定を行う光測定方法によると、光学系
の小型化やマイクロプレートの大型化が可能である。請
求項６に記載の光測定方法は、複数のウエルを配置した
マイクロプレートを照明し、そのマイクロプレートにお
けるウエル形成面からの光が成す投影像を撮像素子にて
検出することにより、各ウエルに収容された各標本を光
学測定する光測定方法において、前記マイクロプレート
として、所定の光学特性を有した物質からなる標識であ
り、かつ前記光学測定に適用される測定条件の種類、前
記光学測定に適用されるマイクロプレートの種類の何れ
か一方又は双方からなる情報を示す標識が設けられたマ
イクロプレートを使用し、前記標識の投影像を前記撮像
素子により検出することによって、前記情報を読み取る
ことを特徴とする。Incidentally, according to the optical measurement method of performing optical measurement for each partial area of the microplate, it is possible to reduce the size of the optical system and increase the size of the microplate. The light measuring method according to claim 6 illuminates a microplate on which a plurality of wells are arranged, and detects a projection image formed by light from a well forming surface of the microplate with an imaging device, so that each well can be measured. In the optical measurement method of optically measuring each accommodated sample, the microplate is a label made of a substance having predetermined optical characteristics, and the type of measurement conditions applied to the optical measurement, the optical measurement Using a microplate provided with a sign indicating information comprising one or both of the types of microplates to be applied, and reading the information by detecting a projected image of the sign by the imaging device. Features.
【００２２】このように、前記標識を利用してマイクロ
プレートに対する前記情報の付与および読み取りを行う
結果、光学測定が複数回に亘る場合にも、各光学測定で
得た各測定データ（前記ウエル形成面からの光が成す投
影像）を、各光学測定に適用された測定条件の種類、各
光学測定に適用されたマイクロプレートの種類の何れか
一方又は双方からなる情報（すなわち測定の種類を示す
情報）に応じて管理することが可能となる。As described above, as a result of providing and reading the information on the microplate using the label, even when the optical measurement is performed a plurality of times, each measurement data (the well formation) obtained by each optical measurement is obtained. The projection image formed by the light from the surface is converted into information (that is, the type of measurement indicating the type of the measurement condition applied to each optical measurement, the type of the microplate applied to each optical measurement, or both). Information).
【００２３】請求項７に記載の光測定方法は、請求項１
〜請求項６の何れか１項に記載の光測定方法において、
前記標識の投影像の一部又は全部の変化から、前記照明
の状態変化を検出することを特徴とする。The light measuring method according to the seventh aspect is the first aspect of the present invention.
The light measurement method according to any one of claims 6 to 6,
A change in the state of the illumination is detected from a change in part or all of the projected image of the sign.
【００２４】すなわち、前記光学測定が複数回に亘る場
合にも、前記標識を利用して、各測定間における照明の
状態変化を得ることができる。したがって、各光学測定
で得た各測定データ（前記ウエル形成面からの光が成す
投影像）を、測定時の照明状態に応じて管理することが
可能となる。請求項８に記載のマイクロプレートは、請
求項１に記載の光測定方法に使用されるマイクロプレー
トであって、所定の光学特性を有した物質によって前記
標識が形成されていることを特徴とする。That is, even when the optical measurement is performed a plurality of times, it is possible to obtain a change in the state of illumination between each measurement using the marker. Therefore, each measurement data (projected image formed by light from the well forming surface) obtained by each optical measurement can be managed according to the illumination state at the time of measurement. The microplate according to claim 8 is a microplate used in the light measurement method according to claim 1, wherein the label is formed by a substance having predetermined optical characteristics. .
【００２５】このように予めマイクロプレートに形成さ
れた標識を利用すれば、請求項１に記載の光測定方法を
短時間で実現させることができる。請求項９に記載のマ
イクロプレートは、請求項８に記載のマイクロプレート
において、前記複数のウエルの底部と同面に、前記標識
が形成されていることを特徴とする。By using the label formed on the microplate in advance, the light measuring method according to the first aspect can be realized in a short time. A microplate according to a ninth aspect is the microplate according to the eighth aspect, wherein the label is formed on the same surface as the bottom of the plurality of wells.
【００２６】この場合、ウエルの底面に焦点を合わせた
ときに、同時に標識にも焦点を合わせることができる。
したがって、前記標識の投影像の検出を、前記光学測定
と同一の焦点調節状態で実施することができる。In this case, when focusing on the bottom surface of the well, it is possible to simultaneously focus on the marker.
Therefore, the detection of the projected image of the marker can be performed in the same focus adjustment state as the optical measurement.
【００２７】[0027]
【発明の実施の形態】以下、図面に基づいて本発明の実
施の形態について説明する。Embodiments of the present invention will be described below with reference to the drawings.
【００２８】［第１実施形態（請求項１、請求項２に対
応）］先ず、図１，図２，図３，図４に基づいて本発明
の第１実施形態について説明する。図１は、本実施形態
の蛍光測定装置の概略構成図である。この蛍光測定装置
は、マイクロプレート１を一括型に照明して測定する一
括型光測定を行うための装置である。すなわち、マイク
ロプレート１を、その下面から光源１０により照明し、
マイクロプレート１の各ウエルに注入された試薬からの
蛍光を、レンズ３により集光し、ダイクロイックミラー
７で波長選択し、結像レンズ６、及びフィルター８を介
してＣＣＤカメラ９上に投影する。なお、このフィルタ
ー８は、試薬からの蛍光波長を検出するためのフィルタ
である。[First Embodiment (Corresponding to Claims 1 and 2)] First, a first embodiment of the present invention will be described with reference to FIGS. 1, 2, 3 and 4. FIG. 1 is a schematic configuration diagram of the fluorescence measurement device of the present embodiment. This fluorescence measuring device is a device for performing collective light measurement in which the microplate 1 is collectively illuminated and measured. That is, the microplate 1 is illuminated from its lower surface by the light source 10,
The fluorescence from the reagent injected into each well of the microplate 1 is collected by the lens 3, the wavelength is selected by the dichroic mirror 7, and projected on the CCD camera 9 via the imaging lens 6 and the filter 8. The filter 8 is a filter for detecting a fluorescence wavelength from a reagent.
【００２９】図２は、本実施形態のマイクロプレート１
を示す図である。マイクロプレート１の構造は、従来の
マイクロプレートと同様である。すなわち、マイクロプ
レート１上には、サンプル収容凹部であるウエル２４が
複数形成されている。但し、本実施形態では、マイクロ
プレート１の最右側ウエルの列については、２箇所のウ
エル２１，２２に位置認識のための蛍光を発する試薬が
注入され（位置認識用ウエル）、それ以外のウエル２３
は空となっている。FIG. 2 shows a microplate 1 according to the present embodiment.
FIG. The structure of the microplate 1 is the same as a conventional microplate. That is, on the microplate 1, a plurality of wells 24, which are sample receiving recesses, are formed. However, in the present embodiment, a reagent that emits fluorescence for position recognition is injected into two wells 21 and 22 (position recognition wells) in the rightmost well row of the microplate 1, and the other wells are not used. 23
Is empty.
【００３０】そして、右側から２列目以降のウエル２４
のそれぞれに、標本が注入されると共に、その標本に反
応する試薬（標本測定用試薬）が滴下されている。つま
り、本実施形態では、マイクロプレート１の最右側ウエ
ルの列を標識として利用する。なお、この標識では、空
のウエル２３も利用しているので、位置認識用ウエル２
１，２２に注入される試薬が標本測定用試薬と同じであ
っても、その空のウエル２３からの光を指標として、位
置認識用ウエル２１，２２からの蛍光を他のウエル２４
からの蛍光と識別することができる。The wells 24 in the second and subsequent rows from the right side
In each of the samples, a sample is injected and a reagent (sample measurement reagent) reacting with the sample is dropped. That is, in the present embodiment, the row of the rightmost well of the microplate 1 is used as a marker. In this sign, since the empty well 23 is also used, the position recognition well 2 is used.
Even if the reagents to be injected into the first and second reagents 22 and 22 are the same as the sample measurement reagents, the fluorescence from the position recognition wells 21 and 22 is used as the other well 24 using the light from the empty well 23 as an index.
From the fluorescent light.
【００３１】図３は、本実施形態の測定手順を示すフロ
ーチャートである。本実施形態では、従来の測定と同
様、マイクロプレート１を照明し（ステップＳ１）、各
ウエルからの蛍光をＣＣＤカメラ９へ投影させ（ステッ
プＳ２）、各ウエルの蛍光量を測定し（ステップＳ
４）、各ウエルの蛍光量を解析する（ステップＳ５）。
但し、本実施形態では、ステップＳ２の後段かつステッ
プＳ４の前段に、以下のようなステップＳ３が挿入され
る。FIG. 3 is a flowchart showing the measurement procedure of the present embodiment. In the present embodiment, similarly to the conventional measurement, the microplate 1 is illuminated (Step S1), the fluorescence from each well is projected onto the CCD camera 9 (Step S2), and the amount of fluorescence in each well is measured (Step S2).
4) Analyze the amount of fluorescence in each well (step S5).
However, in the present embodiment, the following step S3 is inserted after step S2 and before step S4.
【００３２】ステップＳ３では、ステップＳ２の結果か
ら、ＣＣＤカメラ９上の各ピクセルで位置を認識するた
めに、蛍光を発する２箇所の位置認識用ウエル２１，２
２の位置を認識し、その後、計算により各ウエルの位置
を求める。ここで、図４に基づいて、マイクロプレート
４２（本実施形態ではマイクロプレート１）上の２箇所
の位置認識用ウエルＡ，Ｂ（本実施形態では位置認識用
ウエル２１，２２）を利用して、各ウエルの位置を検出
するための計算を説明する。In step S3, based on the result of step S2, in order to recognize the position of each pixel on the CCD camera 9, two position recognition wells 21 and 21 that emit fluorescence are used.
Then, the position of each well is determined by calculation. Here, based on FIG. 4, two position recognition wells A and B (in this embodiment, position recognition wells 21 and 22) on microplate 42 (microplate 1 in this embodiment) are used. The calculation for detecting the position of each well will be described.
【００３３】なお、以下に説明する計算は、ＣＣＤカメ
ラ９上に形成される標識の投影像の位置ずれ及び回転ず
れに応じた座標変換を行い、各ウエルの位置を、ＣＣＤ
カメラ９上のピクセルの位置によって認識するための計
算の一例である。また、図４では、ホルダー４１に対し
てマイクロプレート４２が傾いて配置された様子を示し
た。以下では、このホルダー４１の位置を基準位置とす
る。In the calculation described below, coordinate conversion is performed in accordance with the positional shift and rotational shift of the projected image of the sign formed on the CCD camera 9, and the position of each well is determined by the CCD.
It is an example of calculation for recognizing by the position of the pixel on the camera 9. FIG. 4 shows a state where the microplate 42 is arranged to be inclined with respect to the holder 41. Hereinafter, the position of the holder 41 is referred to as a reference position.
【００３４】先ず、原点ＯG（０，０）、位置認識用ウ
エルＡの中心を点ＡG（Ｘ１G1，Ｙ１ G1）、位置認識用
ウエルＢの中心を点ＢG（Ｘ２G2，Ｙ２G2）、番地検出
したいウエルＣの中心を点ＣG（ＸG，ＹG）とする。次
に、Ａ，Ｂの位置を基準とした、Ｃの相対的な位置を決
める。このとき、点ＡGを絶対座標の原点ＯGとなるよう
に変換（平行移動）し、Ａを基準としたマイクロプレー
ト４２の傾きθ（すなわち図４に示すようなＡに対して
Ｂが傾いている分θ）が垂直（すなわちθが０）となる
ように変換（回転）する。First, the origin OG(0,0), position recognition
Point A at the center of El AG(X1G1, Y1 G1), For location recognition
Point B at the center of well BG(X2G2, Y2G2), Address detection
Point C at the center of well CG(XG, YG). Next
Then, the relative position of C with respect to the positions of A and B is determined.
Confuse. At this time, point AGTo the origin O of absolute coordinatesGSo that
Converted (translated) to micro play based on A
The inclination θ of G (ie, with respect to A as shown in FIG. 4)
B) is vertical (that is, θ is 0).
(Rotate) as follows.
【００３５】点ＡGが原点ＯGとなるように変換すると点
ＣGは点Ｃg（ＸG−Ｘ１G1，ＹG−Ｙ１G1）に変換され
る。因みに、点ＡGは点Ａg（０，０）へ、点ＢGは点Ｂg
（Ｘ２ G2−Ｘ１G1，Ｙ２G2−Ｙ１G1）へと変換される。
さらに、点Ｂgを点Ａgに対して垂直になるようにした位
置を点Ｂggとし、直線ＡgＢgと直線ＡgＢggのなす角度
をθとする。Point AGIs origin OGWhen converted to become
CGIs point Cg(XG-X1G1, YG-Y1G1Is converted to
You. By the way, point AGIs point AgGo to (0,0), point BGIs point Bg
(X2 G2-X1G1, Y2G2-Y1G1).
Further, point BgTo point AgPosition perpendicular to
To point BggAnd the straight line AgBgAnd straight line AgBggAngle made
Is θ.
【００３６】Ｃはさらにθ回転（反時計回りを正とす
る）させたとき、以下のような変換式により点Ｃggの座
標をＡ，Ｂを基準とした座標として求めることができ
る。When C is further rotated by θ (counterclockwise is defined as positive), the coordinates of the point C gg can be obtained as coordinates based on A and B by the following conversion formula.
【数１】 このような計算を各ウエルについておこなうと、マイク
ロプレート４２が基準位置に対して斜めに傾いて配置さ
れても、各ウエルの位置を、ＣＣＤカメラ９上のピクセ
ル位置の絶対座標から決めることができる。(Equation 1) When such a calculation is performed for each well, the position of each well can be determined from the absolute coordinates of the pixel position on the CCD camera 9 even if the microplate 42 is arranged obliquely with respect to the reference position. .
【００３７】なお、本実施形態では位置認識のための試
薬を最右側列に入れた（図２参照）が、最左側列や中央
列や最下段列や最上段列であってもよい。つまり、マイ
クロプレート１における標識の形成箇所は、予め分かっ
ているのであれば、最右側列に限らず、最左列や中央列
など如何なる箇所としてもよい。 ［第２実施形態（請求項１、請求項２、請求項３に対
応）］次に、図５，図６，図７，図８に基づいて本発明
の第２実施形態について説明する。In this embodiment, the reagent for position recognition is placed in the rightmost column (see FIG. 2), but it may be in the leftmost column, the center column, the lowermost column, or the uppermost column. In other words, the location where the marker is formed on the microplate 1 is not limited to the rightmost row, but may be any location such as the leftmost row or the center row, as long as it is known in advance. [Second Embodiment (Corresponding to Claims 1, 2, and 3)] Next, a second embodiment of the present invention will be described with reference to FIGS. 5, 6, 7, and 8. FIG.
【００３８】図５は、本実施形態のマイクロプレート１
を示す図である。マイクロプレート１の構造は、従来
や、第１実施形態のマイクロプレート１と同様である。
但し、本実施形態では、複数のウエル５１に、標本を注
入すると共にその標本の反応を見るための標本測定用試
薬Ａを滴下し、特定の２箇所のウエル（例えば最右側列
のウエル５３，５２）にのみ、その標本測定用試薬Ａと
は異なる波長の蛍光を発する標識用試薬Bを注入する。FIG. 5 shows the microplate 1 of the present embodiment.
FIG. The structure of the microplate 1 is the same as the conventional one or the microplate 1 of the first embodiment.
However, in the present embodiment, the sample is injected into the plurality of wells 51 and the sample measurement reagent A for observing the reaction of the sample is dropped, and two specific wells (for example, the wells 53 in the rightmost row, Only in the step 52), the labeling reagent B emitting fluorescence having a wavelength different from that of the sample measuring reagent A is injected.
【００３９】つまり、本実施形態では、マイクロプレー
ト１のうち標識用試薬Ｂの注入された２つの位置認識用
ウエル５３，５４を標識として利用する。なお、この標
識には、標本測定用試薬Ａとは異なる光学特性を有した
標識用試薬Ｂが使用されているので、空の状態のウエル
を設けなくとも、位置認識用ウエル５３，５４を他のウ
エルから識別することができる。したがって、全てのウ
エルを無駄にすることなく有効に使うことができる。That is, in the present embodiment, the two position recognition wells 53 and 54 of the microplate 1 into which the labeling reagent B has been injected are used as labels. In addition, since the labeling reagent B having an optical property different from that of the sample measurement reagent A is used for this label, the position recognition wells 53 and 54 can be used without providing an empty well. From the wells. Therefore, all the wells can be used effectively without wasting.
【００４０】図６は、本実施形態の蛍光測定装置の概略
構成図である。この蛍光測定装置は、図１に示す装置に
おいて、フィルター切り替え装置１２を備えたものに等
しい。フィルター切り替え装置１２は、標本測定用試薬
Ａからの蛍光波長を取り出せるような測定用のフィルタ
ー８と、標識用試薬Ｂからの蛍光波長を取り出せるよう
な標識検出用フィルター１１とを有し、これら２つのフ
ィルターを選択的に光路に挿入することができる。FIG. 6 is a schematic configuration diagram of the fluorescence measuring device of the present embodiment. This fluorescence measuring device is equivalent to the device shown in FIG. The filter switching device 12 includes a measurement filter 8 that can extract the fluorescence wavelength from the sample measurement reagent A, and a label detection filter 11 that can extract the fluorescence wavelength from the labeling reagent B. One filter can be selectively inserted into the optical path.
【００４１】フィルター切り替え装置１２は、光路に挿
入すべきフィルターを、標識を検出する時には標識検出
用フィルター１１とし、各ウエルの反応を測定するとき
には測定用のフィルター８というように、適宜切り替え
る。図７は、本実施形態の測定手順を示すフローチャー
トである。本実施形態では、従来や上記第１実施形態と
同様、マイクロプレート１を照明し（ステップＳ１）、
各ウエルからの蛍光をＣＣＤカメラ９へ投影させ（ステ
ップＳ２）、各ウエルの蛍光量を測定し（ステップＳ
４）、各ウエルの蛍光量を解析する（ステップＳ５）。
但し、ステップＳ１の前段には、測定用のフィルター８
を光路に挿入する手順（ステップＳ２１）が挿入され、
ステップＳ４の後段かつステップＳ５の前段には、ウエ
ルの位置をＣＣＤカメラ９上のピクセル位置によって認
識するためのウエル位置認識手順（ステップＳ２２〜ス
テップＳ２５）が挿入される。The filter switching device 12 appropriately switches the filter to be inserted into the optical path, such as the label detecting filter 11 when detecting a label, and the measuring filter 8 when measuring the reaction of each well. FIG. 7 is a flowchart illustrating a measurement procedure according to the present embodiment. In the present embodiment, the microplate 1 is illuminated (step S1), similarly to the related art and the first embodiment.
The fluorescence from each well is projected onto the CCD camera 9 (step S2), and the amount of fluorescence in each well is measured (step S2).
4) Analyze the amount of fluorescence in each well (step S5).
However, a filter 8 for measurement is provided before the step S1.
Is inserted into the optical path (step S21),
A well position recognition procedure (steps S22 to S25) for recognizing the position of the well by the pixel position on the CCD camera 9 is inserted after step S4 and before step S5.
【００４２】ウエル位置認識手順では、測定用のフィル
ター８を光路から外して標識検出用フィルター１１を光
路に挿入し（ステップ２２）、各ウエルの位置を計算に
より求めて番地を決定し（ステップＳ２３）、標識用試
薬Ｂの位置を検出し（ステップＳ２４）、各ウエルの番
地と蛍光量とを対応づける（ステップＳ２５）。すなわ
ち、このウエル位置認識手順は、ＣＣＤカメラ９上に形
成される標識（ここではウエル最右列の位置認識用ウエ
ル５３，５４）の投影像の位置ずれ及び回転ずれに応じ
た座標変換（例えば、上記第１実施形態において説明し
たような計算による座標変換）を行い、各ウエルの番地
に、ステップＳ４において測定した各蛍光量を対応づけ
るものである。In the well position recognition procedure, the filter 8 for measurement is removed from the optical path, the filter 11 for label detection is inserted into the optical path (step 22), and the address of each well is determined by calculation (step S23). ), The position of the labeling reagent B is detected (step S24), and the address of each well is associated with the amount of fluorescence (step S25). That is, this well position recognition procedure is performed by coordinate transformation (for example, coordinate shift according to the position shift and rotation shift of the projected image of the mark formed on the CCD camera 9 (here, the position recognition wells 53 and 54 in the rightmost column of the well). The coordinate conversion by calculation as described in the first embodiment is performed, and each fluorescence amount measured in step S4 is associated with the address of each well.
【００４３】［第１実施形態，第２実施形態の変形］こ
こで、上記第１実施形態においては、上記マイクロプレ
ート１に代えて、図８に示すマイクロプレートを使用し
てもよい。このマイクロプレートは、ウエル形成領域の
外側に、複数のくぼみ８１，８２，・・・が形成された
ものである。これら複数のくぼみ８１，８２，・・・深
さは何れも各ウエルと同じである。[Modifications of First and Second Embodiments] Here, in the first embodiment, a microplate shown in FIG. 8 may be used instead of the microplate 1. This microplate has a plurality of depressions 81, 82,... Formed outside the well formation region. Each of the plurality of depressions 81, 82,... Has the same depth as each well.
【００４４】このマイクロプレートを使用した測定で
は、複数のくぼみ８１，８２，・・・のうち２箇所（例
えばくぼみ８１，８２）に、試薬が注入される。このと
き、試薬の注入された２つのくぼみ８１，８２が標識を
成す。この標識を利用すれば、上記第１実施形態と同様
の手順で各ウエルの番地を決めて正確な測定を行うこと
ができる。In the measurement using this microplate, a reagent is injected into two places (for example, the recesses 81, 82) among the plurality of recesses 81, 82,.... At this time, the two depressions 81 and 82 into which the reagent has been injected form a label. By using this marker, the address of each well can be determined in the same procedure as in the first embodiment, and accurate measurement can be performed.
【００４５】また、上記第２実施形態においても、上記
マイクロプレート１に代えて、図８に示すマイクロプレ
ートを使用してもよい。このマイクロプレートを使用し
た測定では、複数のくぼみ８１，８２，・・・のうち２
箇所（例えばくぼみ８１，８２）に、標識用試薬Ｂが注
入される。このとき、標識用試薬Ｂの注入された２つの
くぼみ８１，８２が標識を成す。In the second embodiment, the microplate shown in FIG. 8 may be used instead of the microplate 1. In the measurement using this microplate, two out of the plurality of depressions 81, 82,.
The labeling reagent B is injected into a location (for example, the depressions 81 and 82). At this time, the two recesses 81 and 82 into which the labeling reagent B has been injected form a label.
【００４６】この標識を利用すれば、上記第２実施形態
と同様の手順で各ウエルの番地を決めて正確な測定を行
うことができる。また、上記各実施形態においては、標
識として使用する２つのくぼみの間隔を、標本の濃度や
試薬の濃度や反応条件の情報（すなわち測定の種類を示
す情報）と対応させることもできる（請求項６に対
応）。Using this marker, the address of each well can be determined by the same procedure as in the second embodiment, and accurate measurement can be performed. Further, in each of the above embodiments, the interval between the two dents used as the label can be made to correspond to the information on the concentration of the sample, the concentration of the reagent, and the reaction condition (that is, information indicating the type of measurement). 6).
【００４７】例えば、選択された２つのくぼみの間隔が
「Ａ」という間隔であれば各ウエルに注入する試薬の濃
度を「ａ」とする、というように予め決めておけば、標
本の測定の種類の識別を可能とすることができる。For example, if the interval between the two selected depressions is “A”, the concentration of the reagent to be injected into each well is determined to be “a”. The type can be identified.
【００４８】この情報の読み取りは、専用の読取装置を
必要とせず、ＣＣＤカメラ９が、標識として使用する２
つのくぼみからの各光が成す投影像の間隔を検出するこ
とによって、簡単に行われる。この結果、測定データを
測定の種類に応じて分類、比較（すなわち管理）するこ
とが可能になる。The reading of this information does not require a dedicated reading device, and the CCD camera 9 uses the 2
This is easily done by detecting the distance between the projected images formed by each light from one of the depressions. As a result, the measurement data can be classified and compared (that is, managed) according to the type of measurement.
【００４９】なお、上記説明した標識は、必要に応じ
て、マイクロプレートの配置状態を示すための標識、測
定の種類を示すための標識、の何れか一方のみとして利
用しても構わない。 ［第３実施形態（請求項１、請求項８、請求項９に対
応）］次に、図６、図７、図９に基づいて本発明の第３
実施形態について説明する。It should be noted that the above-described label may be used as only one of a label for indicating the arrangement state of the microplate and a label for indicating the type of measurement, if necessary. [Third Embodiment (Corresponding to Claims 1, 8, and 9)] Next, a third embodiment of the present invention will be described with reference to FIGS.
An embodiment will be described.
【００５０】図９は、本実施形態のマイクロプレート９
１を示す図である。本実施形態では、上記第２実施形態
において、上記マイクロプレート１に代えて、このマイ
クロプレート９１を使用する。すなわち、図６に示す蛍
光測定装置に、マイクロプレート１に代えてマイクロプ
レート９１を装着し、図７に示す手順で測定を行う。FIG. 9 shows a microplate 9 according to this embodiment.
FIG. In the present embodiment, the microplate 91 is used instead of the microplate 1 in the second embodiment. That is, the microplate 91 is attached to the fluorescence measuring device shown in FIG. 6 instead of the microplate 1, and the measurement is performed according to the procedure shown in FIG.
【００５１】但し、標識検出用フィルター１１として使
用するのは、後述する蛍光物質９２からの蛍光を検出す
るためのフィルターである。図９に示すように、マイク
ロプレート９１には、ウエル形成領域の外側の２箇所
に、それぞれ蛍光を発する物質（蛍光物質）９２が予め
形成されている。２つの蛍光物質９２が形成される位置
は、長方形をしたマイクロプレート９１の長い方の辺の
外縁部から１．５ｍｍ程度内側の位置、かつウエルの底
面と同面となる位置とされることが好ましい。However, what is used as the label detecting filter 11 is a filter for detecting fluorescence from a fluorescent substance 92 described later. As shown in FIG. 9, a substance (fluorescent substance) 92 that emits fluorescence is formed beforehand at two places outside the well formation region in the microplate 91. The position where the two fluorescent materials 92 are formed may be a position about 1.5 mm inside the outer edge of the longer side of the rectangular microplate 91 and a position flush with the bottom surface of the well. preferable.
【００５２】つまり、本実施形態では、マイクロプレー
ト９１のうち２つの蛍光物質９２を標識として利用す
る。なお、蛍光物質９２の位置を前記同面にすること
で、ウエルの底面に蛍光測定装置の焦点を合わせたとき
に、同時に蛍光物質９２にも焦点を合わせることがで
き、図７における通常の測定手順（図７ステップＳ２
１，Ｓ１，Ｓ２，Ｓ４）の後、ウエル位置認識手順（図
７ステップＳ２２〜Ｓ２５）において、焦点を合わせ直
す手間及び時間を省くことができる。That is, in this embodiment, two fluorescent substances 92 of the microplate 91 are used as labels. By setting the position of the fluorescent substance 92 on the same plane, when the fluorescence measuring device is focused on the bottom of the well, the fluorescent substance 92 can also be focused at the same time. Procedure (Step S2 in FIG. 7)
After (1, S1, S2, S4), in the well position recognition procedure (steps S22 to S25 in FIG. 7), labor and time for refocusing can be saved.
【００５３】なお、本実施形態では、２つの蛍光物質９
２の形成位置の間隔を大きくとると、標識の投影像の回
転ずれ（図４θ参照）を検出し易くなる。例えば、ウエ
ルが細分化されたマイクロプレートを使用するときな
ど、高い精度が必要なときは、特にこの２つの蛍光物質
９２の形成位置の間隔を大きくすることが好ましい。ま
た、蛍光物質９２はほとんど退色せず、発光強度が大き
い機能性蛍光ガラス（例えば、（株）住田光学によるLU
MILASS（商品名））を使うことが有効である。In this embodiment, two fluorescent substances 9 are used.
If the interval between the formation positions of No. 2 is large, it is easy to detect the rotational displacement (see FIG. 4θ) of the projected image of the sign. For example, when high precision is required, for example, when using a microplate in which wells are subdivided, it is particularly preferable to increase the interval between the positions where the two fluorescent substances 92 are formed. In addition, the fluorescent substance 92 hardly discolors and has a high emission intensity.
MILASS (trade name)) is effective.
【００５４】ここで、“LUMILASS”は、紫外光による希
土類イオンの蛍光が効率よく得られるフツリン酸ガラス
を用いた、可視光の発光強度が大きい蛍光性ガラスであ
る。可視光に変換される紫外光は２００〜４２０nmの広
い波長域に亘る。また、微弱な紫外光でも十分な発光が
得られる。以上説明した本実施形態では、上記各実施形
態と同様に、マイクロプレート９１が基準位置から傾い
て配置されても、各ウエルの番地を正しく認識すること
ができる。Here, "LUMILASS" is a fluorescent glass having a large visible light emission intensity using a fluorophosphate glass capable of efficiently obtaining fluorescence of rare earth ions by ultraviolet light. Ultraviolet light converted to visible light covers a wide wavelength range from 200 to 420 nm. Also, sufficient light emission can be obtained even with weak ultraviolet light. In the present embodiment described above, similarly to the above embodiments, the address of each well can be correctly recognized even if the microplate 91 is arranged inclined from the reference position.
【００５５】なお、２つの蛍光物質９２の形成位置の間
隔を、マイクロプレートの種類と対応させることによっ
て、マイクロプレートの種別情報を予めマイクロプレー
トに付与することもできる（請求項６に対応）。例え
ば、上記２つの蛍光物質９２の間隔がＡのときには９６
ウエル、Ｂのときは３８４ウエル、Ｃのときは１５３６
ウエルというように、マイクロプレートのウエル数を示
す情報を予め組み込むことができる。By associating the interval between the formation positions of the two fluorescent substances 92 with the type of the microplate, the type information of the microplate can be given to the microplate in advance (corresponding to claim 6). For example, when the distance between the two fluorescent substances 92 is A, 96
Well, 384 well for B, 1536 for C
Information indicating the number of wells of the microplate, such as wells, can be incorporated in advance.
【００５６】この情報の読み取りは、専用の読取装置を
必要とせず、ＣＣＤカメラ９が、２つの蛍光物質９２か
らの各光が成す投影像の間隔を検出することによって、
簡単に行われる。この結果、多種類のマイクロプレート
が混ざり得る状況下で複数の測定が行われても、後に測
定データを、前記情報に応じて分類、比較（すなわち管
理）することが可能となる。The reading of this information does not require a dedicated reading device, and the CCD camera 9 detects the interval between the projected images formed by the two lights from the two fluorescent substances 92, and
Easy to do. As a result, even if a plurality of measurements are performed in a situation where various types of microplates can be mixed, the measurement data can be classified and compared (that is, managed) later according to the information.
【００５７】［第１実施形態、第２実施形態、第３実施
形態の変形例（請求項７に対応）］また、上記各実施形
態においては、位置認識用ウエル内の試薬（第３実施形
態では蛍光物質）から発せられる蛍光量をモニターする
ことで、マイクロプレート毎（測定毎）の照明強度のば
らつき（電源パワーの変動による照明強度の時間方向の
ばらつき）を把握することができる。例えば、或る測定
の際に位置認識用ウエル内の試薬からの蛍光量が多けれ
ば、そのとき測定した各ウエルからの蛍光量に対し、そ
のばらつきによる誤差を除去するような換算を行うこと
できる。[Modifications of the First, Second and Third Embodiments (Corresponding to Claim 7)] In each of the above embodiments, the reagents in the position recognition wells (third embodiment) By monitoring the amount of fluorescence emitted from the fluorescent substance, it is possible to grasp the variation in the illumination intensity for each microplate (each measurement) (the variation in the illumination intensity in the time direction due to the variation in the power supply power). For example, if the amount of fluorescence from the reagent in the position recognition well is large during a certain measurement, the amount of fluorescence from each well measured at that time can be converted to remove an error due to the variation. .
【００５８】例えば、各ウエルについて得た蛍光量から
位置認識用ウエルについて得た蛍光量を減算するなどし
て、上記ばらつきによる誤差を除去することができる。 ［第４実施形態（請求項５に対応）］次に、図１０，図
１１に基づいて本発明の第４実施形態について説明す
る。図１０は、本実施形態の蛍光測定装置の概略構成図
である。For example, by subtracting the amount of fluorescence obtained for the position recognition well from the amount of fluorescence obtained for each well, it is possible to remove the error due to the above-mentioned variation. [Fourth Embodiment (Corresponding to Claim 5)] Next, a fourth embodiment of the present invention will be described with reference to FIGS. FIG. 10 is a schematic configuration diagram of the fluorescence measurement device of the present embodiment.
【００５９】この蛍光測定装置は、図６に示した蛍光測
定装置において、マイクロプレート１１０（後述する）
を移動させるステージ１０１が備えられたものである。
本実施形態では、マイクロプレート１１０が移動して、
図１１のように左半分の検出範囲１１１と右半分の検出
範囲１１２とのをそれぞれを一括で照明し、それぞれの
測定が行われる。このとき、ＣＣＤカメラ９は、マイク
ロプレート１１０に対して、左右の２画面の投影像を取
り込む。This fluorescence measuring apparatus is different from the fluorescence measuring apparatus shown in FIG. 6 in that the microplate 110 (described later) is used.
Is provided with a stage 101 for moving the.
In the present embodiment, the microplate 110 moves,
As shown in FIG. 11, the left half detection range 111 and the right half detection range 112 are collectively illuminated, and each measurement is performed. At this time, the CCD camera 9 captures the projected images of the left and right two screens on the microplate 110.
【００６０】因みに、このような蛍光測定によれば、光
学系の小型化や、マイクロプレート１１０の大型化が可
能である。図１１は、本実施形態のマイクロプレート１
０を示す図である。マイクロプレート１１０の基本的な
構造は、従来や、第１実施形態、第２実施形態のマイク
ロプレート１と同じである。Incidentally, according to such fluorescence measurement, the size of the optical system can be reduced, and the size of the microplate 110 can be increased. FIG. 11 shows the microplate 1 of the present embodiment.
FIG. The basic structure of the microplate 110 is the same as the microplate 1 of the related art, the first embodiment, and the second embodiment.
【００６１】但し、本実施形態では、位置認識用ウエル
が、上記範囲１１１、１１２の重複範囲内の２つのウエ
ル１１３，１１４とされ、この位置認識用ウエル１１
３，１１４に、標識用試薬Ｂが注入される。そして、位
置認識用ウエル１１３，１１４以外のウエルに標本と標
本測定用試薬Ａとを注入する。However, in the present embodiment, the position recognition wells are two wells 113 and 114 within the overlapping range of the above ranges 111 and 112.
3, 114, the labeling reagent B is injected. Then, the sample and the sample measurement reagent A are injected into wells other than the position recognition wells 113 and 114.
【００６２】つまり、本実施形態では、マイクロプレー
ト１０１のうち標識用試薬Ｂの注入された２つの位置認
識用ウエル１１３，１１４を標識として利用する。この
ようにすれば、前記したそれぞれの測定で得られる測定
データ（ここでは、左右の２画面の投影像から得た蛍光
量）を、この標識を使って容易に重ね合わせることがで
き、１つのマイクロプレート１１０の全域の各ウエルの
蛍光量を、１画面として表示することができる。That is, in this embodiment, the two position recognition wells 113 and 114 of the microplate 101 into which the labeling reagent B has been injected are used as labels. By doing so, the measurement data (here, the fluorescence amounts obtained from the projected images of the two screens on the left and right) obtained by the above-described respective measurements can be easily superimposed using this marker, and one The amount of fluorescence of each well in the entire area of the microplate 110 can be displayed as one screen.
【００６３】さらにそれぞれの測定時に標識の一部又は
全部（位置認識用ウエル１１３，位置認識用ウエル１１
４の何れか一方又は送付尾）からの蛍光量とその他の各
ウエルの蛍光量との比較データ（比、差分等）をとって
おけば、両測定時の照明強度のばらつきを補正でき、１
つのマイクロプレート１１０内で各ウエルの各蛍光量を
適正に比較することができる。At the time of each measurement, a part or all of the marker (position recognition well 113, position recognition well 11)
If the comparison data (ratio, difference, etc.) between the fluorescence amount from either one of (4) or the transmission tail) and the fluorescence amount of each of the other wells is obtained, the variation in the illumination intensity during both measurements can be corrected.
In each of the microplates 110, the amount of fluorescence of each well can be appropriately compared.
【００６４】［第５実施形態（請求項４に対応）］次
に、図１２，図１３に基づいて本発明の第５実施形態に
ついて説明する。本実施形態は、従来と同じ測定を行う
が、その測定に先だって、以下のような手順が実施され
る。すなわち、図１２に示すように、マイクロプレート
１の各ウエルに標本や試薬を収容する前に、マイクロプ
レート１の全体を照明し、その反射光をＣＣＤカメラ９
上に投影する。[Fifth Embodiment (Corresponding to Claim 4)] Next, a fifth embodiment of the present invention will be described with reference to FIGS. In the present embodiment, the same measurement as in the related art is performed, but prior to the measurement, the following procedure is performed. That is, as shown in FIG. 12, before storing a sample or a reagent in each well of the microplate 1, the whole of the microplate 1 is illuminated, and the reflected light is reflected by the CCD camera 9.
Project on top.
【００６５】この投影では、図１３に示すような像、す
なわち、格子状の各ウエル間のすきまを認識できるよう
な縮小投影像１３１をＣＣＤカメラ９による得ることが
できる。この縮小投影像に基づけば、マイクロプレート
１の配置状態を検知できるので、その検知した配置状態
に基づいて各ウエルの番地を正確に付与することができ
る。In this projection, the CCD camera 9 can obtain an image as shown in FIG. 13, that is, a reduced projection image 131 for recognizing the gap between the grid-shaped wells. Since the arrangement state of the microplate 1 can be detected based on this reduced projection image, the address of each well can be accurately assigned based on the detected arrangement state.
【００６６】なお、本実施形態では、上記反射光のでき
るだけ多くをＣＣＤカメラ９で受光するために、上記投
影のときには、フィルター８を光路から外しておく。こ
のように、各ウエルのの番地が決定された後は、分注器
１２１及びその駆動装置１２２によって、標本及び試薬
を各ウエルに分注して、フィルター８を光路に挿入した
状態で測定を行えば、各ウエル内の反応によって得れら
た蛍光量を各ウエルの番地と関連付けることができる。In this embodiment, in order to receive as much of the reflected light as possible with the CCD camera 9, the filter 8 is removed from the optical path during the projection. After the address of each well is determined in this way, the sample and the reagent are dispensed into each well by the dispenser 121 and its driving device 122, and the measurement is performed with the filter 8 inserted in the optical path. If performed, the amount of fluorescence obtained by the reaction in each well can be associated with the address of each well.
【００６７】すなわち本実施形態は、従来の光測定にお
いて、蛍光測定する前にマイクロプレート１を照明、投
影する手順を付加し、マイクロプレート１に対して標識
を設けることなく、各ウエルの位置を認識するものであ
る。 ［その他］なお、上記各実施形態では、蛍光測定装置を
使用した光測定方法を説明したが、それら光測定方法を
自動的に行うための制御部を付加した蛍光測定装置を構
成してもよい。That is, in the present embodiment, in the conventional light measurement, a procedure for illuminating and projecting the microplate 1 before fluorescence measurement is added, and the position of each well can be determined without providing a label on the microplate 1. Recognize. [Others] In each of the above embodiments, the light measurement method using the fluorescence measurement device has been described. However, a fluorescence measurement device to which a control unit for automatically performing the light measurement method may be added. .
【００６８】また、上記各実施形態では、マイクロプレ
ートからの蛍光のうち特定の波長の蛍光を検出して測定
する蛍光測定装置を説明したが、マイクロプレートにお
ける透過光や反射光の強度を検出する光測定装置など、
如何なる種類の光を検出する装置にも、本発明は適用可
能である。また、上記各実施形態では、マイクロプレー
トの配置状態を示すための標識として、マイクロプレー
トの短手方向又は長手方向に配置された２つのポイント
（２つの位置認識用ウエル、又は２つの蛍光物質）を使
用しているが、これらのポイントは、マイクロプレート
上における所定の方向であれば、例えば長手方向に対し
て４５°傾いた方向など、如何なる方向に配置されてい
てもよい。Further, in each of the above embodiments, the fluorescence measuring apparatus for detecting and measuring the fluorescence of a specific wavelength out of the fluorescence from the microplate has been described. However, the intensity of the transmitted light or the reflected light in the microplate is detected. Optical measurement equipment, etc.
The present invention is applicable to any type of light detecting device. In each of the above embodiments, two points (two position recognition wells or two fluorescent substances) arranged in the short direction or the long direction of the microplate are used as markers for indicating the arrangement state of the microplate. However, these points may be arranged in any direction, such as a direction inclined at 45 ° to the longitudinal direction, in a predetermined direction on the microplate.
【００６９】また、上記各実施形態では、マイクロプレ
ートの配置状態を示すための標識として、２つのポイン
ト（２つの位置認識用ウエル、又は２つの蛍光物質）か
らなる標識を使用しているが、マイクロプレート上にお
いてウエル形成面内の所定の二次元ベクトルを示す標識
であれば、そのポイント数は２つ以上の如何なる数に代
えてもよい。Further, in each of the above embodiments, a label consisting of two points (two position recognition wells or two fluorescent substances) is used as a label for indicating the arrangement state of the microplate. If the mark indicates a predetermined two-dimensional vector in the well forming surface on the microplate, the number of points may be changed to any number of two or more.
【００７０】[0070]
【発明の効果】以上説明したとおり、請求項１、請求項
２、請求項３、請求項４、請求項５、請求項７、請求項
８、請求項９に記載の発明によれば、マイクロプレート
の各ウエルから得た各測定データを確実に管理すること
が可能となる。また、請求項６、請求項７に記載の発明
によれば、測定データを測定の種類に応じて管理するこ
とが可能となる。したがって、本発明によれば、測定デ
ータの大量化に対応することができる。As described above, according to the first, second, third, fourth, fifth, seventh, eighth, and ninth aspects of the present invention, the micro Each measurement data obtained from each well of the plate can be reliably managed. According to the inventions described in claims 6 and 7, it is possible to manage the measurement data according to the type of measurement. Therefore, according to the present invention, it is possible to cope with an increase in the amount of measurement data.
【図１】第１実施形態の蛍光測定装置の概略構成図であ
る。FIG. 1 is a schematic configuration diagram of a fluorescence measurement device according to a first embodiment.
【図２】第１実施形態のマイクロプレート１を示す図で
ある。FIG. 2 is a diagram illustrating a microplate 1 according to the first embodiment.
【図３】第１実施形態の測定手順を示すフローチャート
である。FIG. 3 is a flowchart illustrating a measurement procedure according to the first embodiment.
【図４】座標変換を説明する図である。FIG. 4 is a diagram illustrating coordinate conversion.
【図５】第２実施形態のマイクロプレート１を示す図で
ある。FIG. 5 is a view showing a microplate 1 according to a second embodiment.
【図６】第２実施形態の蛍光測定装置の概略構成図であ
る。FIG. 6 is a schematic configuration diagram of a fluorescence measurement device according to a second embodiment.
【図７】第２実施形態の測定手順を示すフローチャート
である。FIG. 7 is a flowchart illustrating a measurement procedure according to the second embodiment.
【図８】第１実施形態又は第２実施形態に適用される別
のマイクロプレートを説明する図である。FIG. 8 is a diagram illustrating another microplate applied to the first embodiment or the second embodiment.
【図９】第３実施形態のマイクロプレート９１を示す図
である。FIG. 9 is a diagram illustrating a microplate 91 according to a third embodiment.
【図１０】第４実施形態の蛍光測定装置の概略構成図で
ある。FIG. 10 is a schematic configuration diagram of a fluorescence measurement device according to a fourth embodiment.
【図１１】第４実施形態のマイクロプレート１１０を示
す図である。FIG. 11 is a diagram illustrating a microplate 110 according to a fourth embodiment.
【図１２】第５実施形態を説明する図である。FIG. 12 is a diagram illustrating a fifth embodiment.
【図１３】第５実施形態において得られるマイクロプレ
ートの縮小投影像を示す図である。FIG. 13 is a view showing a reduced projection image of a microplate obtained in a fifth embodiment.
１，９１，４２，１１０ マイクロプレート ２ ガイドレール ３，４，５，６ レンズ ７ ダイクロイックミラー ８ フィルター １１ 標識検出用フィルター ９ ＣＣＤカメラ １０ 光源 １２ フィルター切り替え装置 ４１ マイクロプレートホルダ ２４，５１ 標本測定用試薬Ａが注入されたウエル ２１，２２ 位置認識用ウエル（標本測定用試薬Ａが注
入される） ５２，５３，８１，８２，１１３，１１４ 標識用試薬
Bが注入されたウエル（位置認識用ウエル） ８３ くぼみ ９２ 蛍光物質 ９３ 投影レンズの検出範囲 １０１ ステージ １１１ 投影レンズの左半分の検出範囲 １１２ 投影レンズの右半分の検出範囲 １２１ 分注器 １２２ 駆動装置 １３１ マイクロプレートの縮小投影図1, 91, 42, 110 Microplate 2 Guide rail 3, 4, 5, 6 Lens 7 Dichroic mirror 8 Filter 11 Label detection filter 9 CCD camera 10 Light source 12 Filter switching device 41 Microplate holder 24, 51 Sample measurement reagent Well into which A is injected 21, 22 Position recognition well (sample A is injected) 52, 53, 81, 82, 113, 114 Labeling reagent
Well into which B is injected (well for position recognition) 83 Indentation 92 Fluorescent substance 93 Detection range of projection lens 101 Stage 111 Detection range of left half of projection lens 112 Detection range of right half of projection lens 121 Dispenser 122 Drive device 131 Reduced projection of microplate
Claims (9)
トを照明し、そのマイクロプレートにおけるウエル形成
面からの光が成す投影像を撮像素子にて検出することに
より、各ウエルに収容された各標本を光学測定する光測
定方法において、 配置状態を示す所定の標識が設けられたマイクロプレー
トを使用し、 前記標識の投影像を前記撮像素子により検出し、 前記検出した投影像の状態に基づいて、前記各ウエルか
らの各光が成す各投影像の形成位置を認識することを特
徴とする光測定方法。A microplate on which a plurality of wells are arranged is illuminated, and a projection image formed by light from a well forming surface of the microplate is detected by an image pickup device, so that each specimen accommodated in each of the wells is detected. In a light measurement method for optical measurement, a microplate provided with a predetermined sign indicating an arrangement state is used, a projected image of the sign is detected by the imaging device, and based on a state of the detected projected image, A light measuring method comprising recognizing a position where each light projected from each well forms each projected image.
所定のウエルに注入された試薬からなることを特徴とす
る光測定方法。2. The optical measurement method according to claim 1, wherein the marker is formed of a reagent injected into at least two predetermined wells of the plurality of wells.
薬とは異なる光学特性を有した試薬であることを特徴と
する光測定方法。3. The optical measurement method according to claim 2, wherein the reagent is a reagent having optical characteristics different from a sample measurement reagent to be injected into each of the samples. Method.
ートを照明し、そのマイクロプレートにおけるウエル形
成面からの光が成す投影像を撮像素子にて検出すること
により、各ウエルに収容された各標本を光学測定する光
測定方法において、 前記各ウエルに前記標本が収容されていない状態で、前
記マイクロプレートを照明し、 前記照明下で前記マイクロプレートからの光が成す投影
像を前記撮像素子により検出し、 前記検出した前記投影像の状態に基づいて、前記各ウエ
ルからの各光が成す各投影像の形成位置を認識すること
を特徴とする光測定方法。4. A sample contained in each well by illuminating a microplate on which a plurality of wells are formed and detecting a projection image formed by light from a well forming surface of the microplate with an image sensor. In the light measurement method of optically measuring, the microplate is illuminated in a state where the sample is not accommodated in each well, and a projection image formed by light from the microplate under the illumination is detected by the imaging device. And a method of recognizing a position of each projection image formed by each light from each well based on the detected state of the projection image.
トを照明し、そのマイクロプレートにおけるウエル形成
面からの光が成す投影像を撮像素子にて検出することに
より、各ウエルに収容された各標本を光学測定する光測
定方法であって、前記撮像素子に対する前記マイクロプ
レートの位置を相対的にずらすことによって、前記ウエ
ル形成面の複数の部分領域について個別に前記光学測定
を行う光測定方法において、 配置状態を示す所定の標識が設けられた前記マイクロプ
レートを使用すると共に、前記各光学測定においては、
その標識の投影像を前記撮像素子により検出し、 前記ウエル形成面全域の投影像を一画面として得るため
に、前記検出した前記標識の投影像に基づいて、前記各
光学測定において検出される、前記各部分領域の各投影
像を位置合わせすることを特徴とする光測定方法。5. A microplate on which a plurality of wells are arranged is illuminated, and a projection image formed by light from a well forming surface of the microplate is detected by an image pickup device, so that each specimen accommodated in each of the wells is detected. An optical measurement method for performing optical measurement, wherein the position of the microplate relative to the imaging device is relatively shifted to individually perform the optical measurement on a plurality of partial regions of the well forming surface. Along with using the microplate provided with a predetermined sign indicating the state, in each of the optical measurements,
The projected image of the sign is detected by the imaging device, and in order to obtain a projected image of the entire well-formed surface as one screen, based on the detected projected image of the sign, detected in each of the optical measurements, A light measurement method, wherein each projection image of each of the partial areas is aligned.
トを照明し、そのマイクロプレートにおけるウエル形成
面からの光が成す投影像を撮像素子にて検出することに
より、各ウエルに収容された各標本を光学測定する光測
定方法において、 前記マイクロプレートとして、所定の光学特性を有した
物質からなる標識であり、かつ前記光学測定に適用され
る測定条件の種類、前記光学測定に適用されるマイクロ
プレートの種類の何れか一方又は双方からなる情報を示
す標識が設けられたマイクロプレートを使用し、 前記標識の投影像を前記撮像素子により検出することに
よって、前記情報を読み取ることを特徴とする光測定方
法。6. A microplate on which a plurality of wells are arranged is illuminated, and a projection image formed by light from a well forming surface of the microplate is detected by an image pickup device, so that each specimen accommodated in each of the wells is detected. In the optical measurement method for performing optical measurement, the microplate is a label made of a substance having predetermined optical characteristics, and a type of measurement condition applied to the optical measurement, a microplate applied to the optical measurement. Using a microplate provided with a sign indicating one or both of the types of information, and reading the information by detecting a projected image of the sign by the imaging device. .
の光測定方法において、 前記標識の投影像の一部又は全部の変化から、前記照明
の状態変化を検出することを特徴とする光測定方法。7. The light measurement method according to claim 1, wherein a change in the state of the illumination is detected from a change in part or all of the projected image of the sign. Light measurement method.
るマイクロプレートであって、 所定の光学特性を有した物質によって前記標識が形成さ
れていることを特徴とするマイクロプレート。8. The microplate used in the light measurement method according to claim 1, wherein the label is formed by a substance having predetermined optical characteristics.
いて、 前記複数のウエルの底部と同面に、前記標識が形成され
ていることを特徴とするマイクロプレート。9. The microplate according to claim 8, wherein the marker is formed on the same surface as the bottom of the plurality of wells.
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