JP2001504233A

JP2001504233A - 癌を有する被験者の早期検出のための全血／マイトジェンアッセイおよびキット

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Publication number: JP2001504233A
Application number: JP52342398A
Authority: JP
Inventors: ジューダ，コーエン，タマール
Original assignee: シルーヴメディカルテクノロジーズリミテッド
Priority date: 1996-11-22
Filing date: 1997-11-21
Publication date: 2001-03-27
Also published as: AU5066098A; WO1998022825A2; WO1998022825A3; CA2272924A1; EP0943095A2; IL130074A0

Abstract

(57)【要約】本発明は、卵巣癌または乳癌を有する被験者を検出する方法であって、ａ）該被験者から全血サンプルを得、ｂ）マイトジェンを抗原の存在下または非存在下に含有する培地を含む、培養物中で該全血サンプルをインキュベートして、抗体産生につながるリンパ球細胞のポリクローナル的および特異的な活性化を誘導し、ｃ）工程ｂ）で得られた培養物を特異的腫瘍抗原にさらし、それにより抗原−抗体免疫複合体を形成させ、ｄ）工程ｃ）の抗原−抗体免疫複合体を検出する工程を含んでなり、腫瘍抗原関連抗体の存在が、該癌を有する被験者を示すことを特徴とする方法を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】癌を有する被験者の早期検出のための全血／マイトジェンアッセイおよびキット発明の背景癌を有する被験者に対する現在利用可能な診断手段としては、組換えタンパク質に基づくアッセイおよび／または合成ペプチドに基づく抗体アッセイ、遺伝子増幅技術などが挙げられる。本発明は、免疫系を介した、被験者における腫瘍の簡便な早期初期スクリーニングまたは検出を提供する。癌または腫瘍細胞は、体内（ヒトおよび腫瘍を有することが知られている他の任意の動物との両方）の「正常」な細胞フローラから出現する。癌化／腫瘍形成は、細胞の変化を伴う。これらの変化は細胞の遺伝暗号の突然変異として始まり、一方、細胞の挙動の変化はタンパク質の発現レベルの変化から生じる。腫瘍が増殖するにつれて、それが免疫系を抑制する効果が益々強力になり、そのため、活性な抗体分泌が非常に低下したり、更にはほとんど検出できなくなることもある。腫瘍細胞に特有の構造体は、「腫瘍抗原」である。腫瘍細胞に特有ではないものの腫瘍細胞上で異なって発現されたり過剰に発現されうる構造体は、「腫瘍関連抗原」とみなされる。場合によっては、それは、その抗原性を決定する炭水化物または脂質によるタンパク質の「コーティング」である。例えば乳腺由来のムチンの場合には、該タンパク質は腫瘍細胞内で変化しないが、乳癌（ときには卵巣癌）の患者では、それに対する抗体が見出される。その理由は、おそらく、糖鎖の濃厚なコーティング（すなわち、該タンパク質は非常に濃密にグリコシル化されている）のため、正常細胞内の該タンパク質が全く露出されないことにある。腫瘍細胞ではグリコシル化が不完全であり、したがって、免疫系に対する新たな抗原として機能する（または機能しうる）タンパク質配列が新たに露出されることになる。本発明は、たとえ抗体産生がin vivoで抑制される場合であっても腫瘍特異的抗体の検出を可能にする免疫系の体液性アーム（humoral arm）の可能性を明らかにする。発明の概要本発明は、癌を有するか又は発癌ウイルスに感染した被検者を検出するための改良されたアッセイに関する。本発明は、1）個体が癌を有するか否かを判定するための診断薬、2）予後指示薬、3）抗癌治療の有効性（または新規潜在的抗癌薬または抗癌剤の有効性）をモニターするための方法、4）被験者の腫瘍の除去または療法の後の再発を判定するための方法、および5）臨床試験所および研究所におけるアッセイで癌を検出し定量するための方法としての用途を意図する。本発明は、被験者において腫瘍を検出したり腫瘍または癌を有する被験者を検出するためのスクリーニングアッセイとして有用である。イメージングおよび療法の増強のために、誘導された抗体を使用する。本発明は、被験者から得られたサンプル中の腫瘍抗原関連抗体を検出するためのin vitro方法であって、a）該被験者から全血サンプルを得、b）マイトジェンを抗原の存在下または非存在下に含有する培地を含む、培養物中で該全血サンプルをインキュベートして、抗体産生につながるリンパ球細胞のポリクローナル的および特異的な活性化を誘導し、c）工程b）で得られた培養物を腫瘍抗原にさらし、それにより抗原−抗体免疫複合体を形成させ、d）工程c）の抗原−抗体免疫複合体を検出する工程を含んでなり、腫瘍関連抗体の存在が、癌を有する被験者を示すことを特徴とする方法を提供する。図面の簡単な説明図１：P3-一次元分析図２：P3およびP2-二次元分析図3A〜3B：P1およびP3、P2およびP3-二次元分析図4A〜4F：血清反応陰性マンガベイにおけるSIV特異的抗体の検出。図4Aは、E LISA（培養後）上のO.D.読取り値のレベルが、真の陰性、血清反応陽性および「無症状感染／曝露」の間で識別可能であることを示す。図4B〜4Fは、O.D.サンプル／O.D.陰性対照の比率である。発明の詳細な説明本発明は、癌を有するか又は発癌ウイルスに感染した被検者を検出するための改良されたアッセイに関する。本発明は、1）個体が癌を有するか否かを判定するための診断薬、2）予後指示薬、3）抗癌治療の有効性（または新規潜在的抗癌薬または抗癌剤の有効性）をモニターするための方法、4）被験者の腫瘍の除去または療法の後の再発を判定するための方法、および5）臨床試験所および研究所におけるアッセイで癌を検出し定量するための方法としての用途を意図する。本発明は、被験者から得られたサンプル中の腫瘍抗原関連抗体を検出するためのin vitro方法であって、a）該被験者から全血サンプルを得、b）マイトジェンを抗原の存在下または非存在下に含有する培地を含む、培養物中で該全血サンプルをインキュベートして、抗体産生につながるリンパ球細胞のポリクローナル的および特異的な活性化を誘導し、c）工程b）で得られた培養物を腫瘍抗原にさらし、それにより抗原−抗体免疫複合体を形成させ、d）工程c）の抗原−抗体免疫複合体を検出する工程を含んでなり、腫瘍関連抗体の存在が、癌を有する被験者を示すことを特徴とする方法を提供する。１つの実施形態では、リンパ球細胞のサンプルを被験者から得、マイトジェンを抗原の存在下または非存在下に含有する培地を含む、培養物中で該サンプルをインキュベートして、リンパ球細胞のポリクローナル的および特異的な活性化を誘導する。もう１つの実施形態では、リンパ球細胞のサンプルを被験者から得、マイトジェンを抗原の存在下または非存在下に含有する培地を含む、培養物中で該サンプルをインキュベートして、Ｂリンパ球細胞のポリクローナル的および特異的な活性化を誘導する。もう１つの実施形態では、PBMCのサンプルを被験者から得、マイトジェンを抗原の存在下または非存在下に含有する培地を含む、培養物中で該サンプルをインキュベートして、Ｂリンパ球細胞のポリクローナル的および特異的な活性化を誘導する。癌／腫瘍の型には、骨髄性白血病、例えば慢性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、急性前骨髄球性白血病、急性単球性白血病、急性骨髄単球性白血病；悪性リンパ腫、例えばバーキットリンパ腫および非ホジキンリンパ腫；リンパ性白血病、例えば急性リンパ芽球性白血病および慢性リンパ芽球性白血病；髄膜腫；腺腫；腺癌、例えば小細胞肺、腎臓、子宮、前立腺、膀胱、卵巣、結腸の腺癌；肉腫、例えば脂肪肉腫、粘液様肉腫、滑液膜肉腫、ユーイング腫、胞状肉腫、ウィルムス腫、神経芽細胞腫、精巣ジスゲルミノーマ、網膜芽細胞腫および黒色腫が含まれるが、これらに限定されるものではない。本発明で用いる乳癌は、***で見出される任意の型の組識に由来する任意の腫瘍を意味する。本発明で用いる卵巣癌は、卵巣で見出される任意の型の組識に由来する任意の腫瘍を意昧する。本発明で定義する「腫瘍抗原関連抗体」は、腫瘍抗原または腫瘍関連抗原に対する抗体を意味する。１つの実施形態では、特異的抗体を産生する細胞を検出する。工程b）の培養により上清を得、該上清を腫瘍抗原にさらし、それにより抗原−抗体免疫複合体を形成させることが可能である。また、該培養物の白血球または細胞画分を使用して、検出する抗体産生細胞を増殖させ、クローニングし、不死化する。１つの実施形態においては、腫瘍抗原には、MUC-1、HERneu2、BrCal、p53、He r-2-c-neu(AcIISAVVGIL-NH2)、癌胎児性抗原、前立腺特異的抗原、TAG-72、CA15 -3、CA549、BA46、***血清抗原、粘液癌抗原、PEMペプチド抗原、MUC1グリコシル化部位ペプチド、グリコシル化されたMUC1グリコシル化部位ペプチド、MUC1コア縦列反復ペプチド、MUC2コア縦列反復ペプチド、MUC3コア縦列反復ペプチド、 MUC5ACペプチド、SIMA、ルイスＸ抗原、シアリル・ルイスＸ抗原(BSAコンジュゲート)、Ｉ抗原(Gall,4、GlcNAc、1,3 Gal-R)、Ｔ抗原、TN抗原（OSM）シアリルT n抗原が含まれるが、これらに限定されるものではない。抗体は、「裸」の抗原に対するもの、またはそれが形質転換用遺伝子の産物と共に形成する複合体に対するものとみなされることが可能である。腫瘍特異的抗体の検出に必要な腫瘍抗原は、いくつかの形態であることが可能である。すなわち、a）全細胞（腫瘍の）が抗原として機能することが可能であり、b）抗原として使用することが可能な産物を与える細胞膜、c）特有の腫瘍構造またはタンパク質の配列（またはそのセグメント）を、ベクターを介して他の産生体（細胞、細菌、酵母、ファージ）中に挿入し、次いで個々のタンパク質および構造体を産生させることが可能であり、d）腫瘍特異的タンパク質のアミノ酸が既知の場合には、全タンパク質の断片であるペプチド（または全タンパク質自体）を生化学的に合成し、抗原として使用することが可能であり、e）血清または他の体液から高力価で単離することが可能である。誘導または移植されたほとんどの実験動物腫瘍が、それに続く同一腫瘍での攻撃に対してレシピエントを免疫するが、正常組識または他の腫瘍の移植に対しては免疫しない。TAAは、腫瘍によって異なる個々に特異的な抗原を有する傾向にある化学発癌物質誘発腫瘍により(さらには、同一発癌物質により誘発された腫瘍により)、また、ある所与のウイルスにより誘発された腫瘍間で交差反応性を示す傾向にあるウイルス誘発腫瘍により、特によく示されている。ウイルス感染は、「修飾された自己(modified self)」、すなわち主要組織適合遺伝子複合体と共に又はその環境(context)中で認識される新たな抗原を与える可能性がある。腫瘍抗原は、（1）ウイルスにより導入された新たな遺伝情報、（2）通常は不活性な遺伝物質（おそらく胚発生中は除外）を癌遺伝子へと活性化し細胞表現型にて発現させる、原癌遺伝子の活性化によると考えられる発癌物質による遺伝的機能の改変、（3）腫瘍細胞が膜構成体（例えば、シアル酸）を合成する能力を有さないことにより、通常は正常細胞上に存在するか又は細胞膜中に「埋もれている」抗原を露出させること、および（4）腫瘍細胞の死による、通常は細胞中またはその細胞小器官中に隔離されている抗原の遊離により形成される。動物腫瘍中のTATAを示すための技術には、標準的な組識移植方法、免疫蛍光法、色素取込みまたは放射性同位体の遊離による細胞傷害性試験、免疫化ドナー由来のリンパ球様細胞または血清に腫瘍をさらすことによるin vitroまたはin viv oでの腫瘍増殖の阻害、遅延型過敏症皮膚試験、およびin vitroにおけるリンパ球のトランスフォーメーションが含まれる。ヒト悪性腫瘍中のTAAに関する証拠は、いくつかの腫瘍（例えば、バーキットリンパ腫、神経芽細胞腫、悪性黒色腫、骨肉腫、いくつかのGI癌など）で示されている。女性における絨毛癌は、免疫応答が惹起される際に「腫瘍特異的」抗原として機能しうる父親由来の組識適合抗原を有する。化学療法による絨毛癌の完全治癒は、少なくとも一部は、そのような免疫応答に起因している可能性がある。残念なことに、それらはTAAを有しているかもしれないが、すべてのヒト腫瘍が宿主内で抗原性というわけではないらしい。したがって、免疫系にとって新規と考えられる任意の構造を、腫瘍抗原とみなすことができる。免疫系にとって新規な抗原として出現し機能する正常なタンパク質のもう１つの一般例は、新規な環境中に出現する正常なタンパク質（例えば、成熟（または成体）細胞上の胚性タンパク質）の例である。その場合、該新規エピトープは、それらの２つの構造体の間の境界（すなわち、免疫系が見つけ出し反応する新規な形態および構造体を形成する境界）内に存在するであろう。腫瘍関連抗原（TAA）は、腫瘍細胞に関連した抗原であり、正常細胞上にも存在するものの少量で存在するか又は異なる被検者生活相（phase of a subjects life）において存在する(すなわち、胚性タンパク質)。本発明は、腫瘍を有する被験者を検出する方法であって、a）該被験者から全血サンプルを得、b）マイトジェンを抗原の存在下または非存在下に含有する培地を含む、培養物中で該全血サンプルをインキュベートして、抗体産生につながるリンパ球細胞のポリクローナル的および特異的な活性化を誘導し、c）核酸配列を回収するために該細胞を処理し、d）得られた核酸配列を、ハイブリダイゼーション条件下、腫瘍抗原に対する曝露により産生する抗体の核酸配列に特異的にハイブリダイズしうる一本鎖標識オリゴヌクレオチドプライマーと接触させ、そしてe）癌を有する被験者を示す該増幅産物の存在を検出する工程を含んでなる方法を提供する。工程c）の細胞は、該細胞の核酸配列を露出させるよう処理することができる。露出方法は当業者に公知である。別法として、二本鎖増幅産物を与えるよう核酸配列にハイブリダイズするプライマー対により、工程d）で得られた核酸配列を増幅することができる。増幅産物は検出可能である。もう１つの実施形態では、ハイブリダイゼーション条件下で可変領域の末端の核酸配列にハイブリダイズしうる得られた核酸配列とプライマーとを接触させ、特異的検出を行なう。腫瘍抗原および腫瘍関連抗体のプライマーおよびプローブは、当業者に公知である。本発明は、腫瘍を有する被験者を検出する方法であって、a）該被験者から全血サンプルを得、b）マイトジェンを抗原の存在下または非存在下に含有する培地を含む、培養物中で該全血サンプルをインキュベートして、抗体産生につながるリンパ球細胞のポリクローナル的および特異的な活性化を誘導し、c）核酸配列を別々に回収するために該細胞を処理し、d）得られた核酸配列を複数の一本鎖標識オリゴヌクレオチドプライマー対（前記の各対は、腫瘍抗原に対する曝露により産生する抗体の核酸配列にハイブリダイゼーション条件下で特異的にハイブリダイズする能力を有する）と接触させ、e）プライマー対がハイブリダイズするいずれかの核酸配列を増幅して、二本鎖増幅産物を得、f）前記のいずれかの二本鎖増幅産物を処理して、それより一本鎖核酸配列を得、g）得られたいずれかの一本鎖核酸配列を、ハイブリダイゼーション条件下で該腫瘍抗原関連抗体に特異的にハイブリダイズしうる標識オリゴヌクレオチドプローブと接触させ、h ）得られたいずれかのハイブリッドを、該標識プローブと複合体を特異的に形成しうる（該プローブが前記複合体中に複合体形成条件下で存在する場合）検出可能に付けられたタグと接触させ、そしてi）癌を有する被験者を示す得られたいずれかの複合体の存在を検出する工程を含んでなる方法を提供する。本発明では、抗原の存在下または非存在下でマイトジェンと共にインキュベートする前に、バフィーコート（種々の容量の赤血球および血漿を有する）としても知られる境界層を集め、それにより、白血球に富む血液サンプル容量の一部を培養物中に加える。白血球を富化する方法は当業者に公知である。例えば、管内の中間層としてのバフィーコートを直接吸引したり、あるいは、まず血漿容量の大部分を除去し、ついで残存血漿と共にバフィーコートを採取することが可能である。別法として、赤血球を細胞溶解し、遠心分離し、底部から白血球を集める。１つの実施形態では、該方法は、a）該被験者から全血サンプルを得、b）該全血サンプルを、境界層を含む複数の成分層に分離し、c）該全血サンプルから該境界層を集め、d）マイトジェンを抗原の存在下または非存在下に含有する培地を含む、培養物中で該境界層をインキュベートして、抗体産生につながるリンパ球細胞のポリクローナル的および特異的な活性化を誘導し、e）工程d）で得られた培養物を抗原にさらし、それにより抗原−抗体免疫複合体を形成させ、f）工程e）の抗原−抗体免疫複合体を検出する工程を含んでなり、ウイルス特異的抗体の存在が、該抗原にさらされている被験者を示す。１つの実施形態では、該方法は、a）被験者から全血サンプルを得、b）該全血サンプルを、境界層を含む複数の成分層に分離し、c）該全血サンプルから該境界層を集め、d）マイトジェンを抗原の存在下または非存在下に含有する培地を含む、培養物中で該境界層をインキュベートして、Ｂリンパ球細胞のポリクローナル的および特異的な活性化およびウイルスの増殖を誘導し、e）核酸配列を別々に回収するために該細胞を処理し、f）得られた核酸配列を複数の一本鎖標識オリゴヌクレオチドプライマー対（前記の各対は、ヒト免疫不全ウイルスにハイブリダイゼーション条件下で特異的にハイブリダイズする能力を有する）と接触させ、g）プライマー対がハイブリダイズするいずれかの核酸配列を増幅して、二本鎖増幅産物を得、h）一本鎖増幅産物を得るために前記のいずれかの二本鎖増幅産物を処理して、ヒト免疫不全ウイルスにハイブリダイゼーション条件下で特異的にハイブリダイズしうる標識オリゴヌクレオチドプローブを有する一本鎖核酸配列を得、j）得られたいずれかのハイブリッドを、該標識プローブと複合体を特異的に形成しうる(該プローブが前記複合体中に複合体形成条件下で存在する場合)検出可能に付けられたタグと接触させ、そしてk）ヒト免疫不全ウイルスの存在を示す得られたいずれかの複合体の存在を検出する工程を含む。本発明は、腫瘍抗原関連抗体を検出するための方法であって、a）被験者から全血サンプルを得、b）マイトジェンを抗原の存在下または非存在下に含有する培地を含む、培養物中で該全血サンプルをインキュベートして、抗体産生につながるリンパ球細胞のポリクローナル的および特異的な活性化を誘導し、c）該細胞を露出させて、該腫瘍抗原関連抗体の核酸配列を別々に回収し、d）サンプル中の腫瘍抗原関連抗体のRNAの逆転写を行なって、DNAコピーを得、e）該DNAのポリメラーゼ連鎖反応増幅を行なって、複数のDNAコピーを得、f）該DNAコピーを、複数の相補的DNAプローブにハイブリダイズさせて、該サンプルのDNA含量を検出し、それにより腫瘍抗原関連抗体を検出することを含んでなる方法を提供する。本発明は、サンプル中の標的RNA配列を増幅するための方法であって、a）被験者から全血サンプルを得、b）マイトジェンを抗原の存在下または非存在下に含有する培地を含む、培養物中で該全血サンプルをインキュベートして、抗体産生につながるリンパ球細胞のポリクローナル的および特異的な活性化を誘導し、c ）該細胞を露出させて、該腫瘍抗原関連抗体の核酸配列を別々に回収し、d）第１プライマーおよび第２プライマー（第１プライマーは、標的RNAにハイブリダイズするのに十分な程度に、また、該標的RNAに相補的なcDNA配列の合成を開始させるのに十分な程度に、該標的RNAに対して相補的であり、第２プライマーは、該cDNAにハイブリダイズするのに十分な程度に、また、伸長産物の合成を開始させるのに十分な程度に、該標的RNAに対して相同である）ならびに耐熱性DNA ポリメラーゼを４個すべてのデオキシリボヌクレオシド三リン酸の存在下に適当なバッファー（該バッファーはMn+2を含む）中に含む反応混合物中、該耐熱性DN Aポリメラーゼが第１プライマーの伸長産物の合成を開始して該標的RNAに相補的なcDNA配列を与えるのに十分な温度で、該サンプルを処理し、e）該反応混合物を適当な温度で処理して、一本鎖cDNAを得、f）該耐熱性DNAポリメラーゼが第２プライマーの伸長産物の合成を開始するための適当な温度で該反応混合物を処理して、二本鎖cDNA配列を得、そしてg）工程e）の二本鎖cDNA配列をポリメラーゼ連鎖反応により増幅することを含んでなる方法を提供する。好ましい実施形態では、該バッファーは、酢酸マンガン(Mn(OAc)₂またはMn(CH₃CO₂)₂とも表される) 、ビシン-KOH(ビシンは、N,N-ビス(2-ヒドロキシエチル)グリシン)および酢酸カリウム（KOAcまたはKCH₃CO₂とも表される）を含む。本発明はまた、オリゴヌクレオチドプローブ配列の構造中に少なくとも１つの標識を結合させる又は組込むことを特徴とする標識方法を意図する。標識は、一般には、腫瘍抗原の検出を容易にすると意図される。標識は、酵素、発蛍光団、高親和性コンジュゲート、ケミホア（chemiphore）および放射性原子（「放射能標識」）よりなる群から選ばれる。他の標識を使用することも可能であるが、本発明は、1）酵素アルカリホスファターゼ、β-ガラクトシダーゼおよびグルコースオキシダーゼ、2）ビオチン−アビジンの親和性コンジュゲート系、3）フルオレセインである発蛍光団、4）ルミノールであるケミホア、および5）好ましい放射能標識である³H、¹⁴Cおよび³²Pを意図する。本発明は、腫瘍を有する被験者を検出する方法であって、a）該被験者から全血サンプルを得、b）マイトジェンを抗原の存在下または非存在下に含有する培地を含む、培養物中で該全血サンプルをインキュベートして、抗体産生につながるリンパ球細胞のポリクローナル的および特異的な活性化を誘導し、c）工程b）で得られた培養物を特異的腫瘍抗原関連抗体にさらし、それにより抗体−腫瘍抗原免疫複合体を形成させ、d）工程c）の抗体−腫瘍抗原免疫複合体を検出する工程を含んでなり、腫瘍抗原関連抗体の存在が、卵巣癌または乳癌を有する被験者を示すことを特徴とする方法を提供する。１つの実施形態では、工程b）の培養により上清を得、該上清を特異的腫瘍抗原関連抗体にさらし、それにより抗体−腫瘍抗原免疫複合体を形成させる。本発明は、被験者からの特異的腫瘍抗原関連抗体を検出するためのキットであって、該キットが、全血サンプルを集めるための容器を含んでなり、該容器が、抗体産生および該特異的腫瘍抗原関連抗体の検出のためのアッセイにつながるリンパ球細胞のポリクローナル的および特異的な活性化を誘導するのに有効なマイトジェンを抗原の存在下または非存在下に含有する培地を含有することを特徴と図される。１つの実施形態では、白血球細胞のサンプルを、被験者から得、マイトジェンを抗原の存在下または非存在下に含有する培地を含む、培養物中で該サンプルをインキュベートして、リンパ球細胞のポリクローナル的および特異的な活性化を誘導する。もう１つの実施形態では、リンパ球細胞のサンプルを、被験者から得、マイトジェンを抗原の存在下または非存在下に含有する培地を含む、培養物中で該サンプルをインキュベートして、Ｂリンパ球細胞のポリクローナル的および特異的な活性化を誘導する。もう１つの実施形態では、PBMCのサンプルを、被験者から得、マイトジェンを抗原の存在下または非存在下に含有する培地を含む、培養物中で該サンプルをインキュベートして、Ｂリンパ球細胞のポリクローナル的および特異的な活性化を誘導する。単一または複数の抗原を該容器に結合させることが可能である。本発明では、抗原の存在下または非存在下に有効濃度のマイトジェン（例えば、アメリカヤマゴボウマイトジェンおよび関連した腫瘍抗原およびペプチド）の溶液を含有する試験管（例えば、バキュチューブ(vacutube)）に、血液サンプルを加える。試験する血液サンプルを、アメリカヤマゴボウマイトジェンの存在下、 in vitroで培養する。アメリカヤマゴボウマイトジェンの代わりに又はそれに加えて、抗体の産生または分泌をもたらすＢリンパ球細胞または体液系の他の活性化物質およびTh₂型免疫応答の活性化物質を使用して、同じ機能を達成することができる。インキュベーションの後、アリコートを該液体から採取し、ついで標準的なELISA法および／またはウエスタンブロット分析により、所望の腫瘍抗原関連抗体の存在に関してアッセイする。サンプルを後日アッセイしようとする場合には、血液を遠心分離し、上清液体を集め、凍結し、保存することができる。結果は、ポリメラーゼ連鎖反応（PCR）/FACSの技術を用いて確認することができる。該容器中の細胞画分を、PCRまたはELISPOTにおいて使用することができる。抗体を検出するための他の方法は、当業者に公知である。本発明の方法は、腫瘍抗原関連抗体の存在の判定が可能となるよう、必要に応じて、血液の流体部分から血液細胞を分離することを含む。血液の流体部分からの血液細胞の分離は、当業者によく知られているいくつかの方法（例えば、遠心分離、濾過または密度勾配）のいずれかにより行なうことができる。血液細胞を液体から物理的に分離することは必ずしも必要でないと理解されるべきである。抗原の存在下または非存在下でマイトジェンと共に全血をインキュベートした後、血液からの液体を容易に抽出し、腫瘍抗原関連抗体に関して試験することができる。必要に応じて、穏やかな浸透圧ショックにより又は穏やかな界面活性剤で赤血球を細胞溶解することができる。この場合、白血球は依然として生存可能である。本発明の１つの実施形態では、抗原の存在下または非存在下に培地およびマイトジェンを含有する血液収集管内に全血を集める。ついで該血液サンプルを、約 1：500の最終希釈度のアメリカヤマゴボウマイトジェンと共に、2×10⁶個/mlの生存リンパ球の濃度にて、7％CO₂の加湿雰囲気中、37℃で1〜12日間インキュベートする。血液を遠心分離することが可能であり、直ちに上清流体を集め、約1 〜12時間以内にアッセイするか、またはELISA/ELISPOTおよび／またはウエスタンブロット法により反応性特異的抗体に関して試験するために後に凍結する。別法として、液体または細胞または細胞成分のアリコートを、サンプルから直接採取することができる。本発明はまた、抗原の存在下または非存在下に有効濃度のマイトジェンを含有する血液収集容器を含んでなるキットを含む。該容器は、必要に応じて、培地を含有し得る。好ましい容器は試験管である。該血液収集容器は、プラスチック、ガラスまたは血液培養に適した他の任意の物質であることが可能である。本発明は、血液収集管以外の血液含有手段（例えば、血液のインキュベートが可能なウェルを含有するマイクロタイタープレート、組識培養フラスコ、ガラスフラスコ、エーレンマイヤーフラスコおよび血液の培養が可能な他の任意の容器などであるが、これらに限定されるものではない）も含むと理解されるべきである。特異的腫瘍抗原に特異的に結合する腫瘍抗原関連抗体は、当業者に公知である。さらに、該腫瘍抗原に結合させるためのタグとして、抗体を使用することができる。１つの実施形態では、該抗体はモノクローナル抗体である。もう１つの実施形態では、該抗体はポリクローナル抗体である。本発明は、アミノ酸配列SGSGHGVTSAPDTR（配列番号1）を有するペプチドをコードする単離された核酸分子を提供する。本発明は、アミノ酸配列SGSGAPDTRPAP GSTAP（配列番号2）を有するペプチドをコードする単離された核酸分子を提供する。本発明は、アミノ酸配列IISAVVGIL（配列番号3）を有するペプチドをコードする単離された核酸分子を提供する。本発明は、表面に対する結合のための核酸上のタグを提供する。本発明は、配列番号１、２または３の核酸配列の配列に特異的にハイブリダイズしうる少なくとも15ヌクレオチドの核酸配列を提供する。本発明は、ペプチドSGSGHGVTSAPDTR（配列番号1）、SGSGAPDTRPAPGSTAP（配列番号2）またはIISAVVGIL（配列番号3）に対する抗体を提供する。１つの実施形態では、該抗体は、モノクローナルまたはポリクローナルであることが可能である。該抗体は、タグを有することが可能である。もう１つの実施形態において、本発明は、該ペプチドに結合するリガンドを提供する。本発明はまた、癌細胞の細胞表面に結合する能力を有しかつイメージング剤で標識付けした、配列番号1、2、もしくは3のペプチドに対する抗体の少なくとも1 つを、モノクローナル抗体と細胞表面抗原との間で複合体を形成する条件下で、被験体へ投与することを含んでなる被験体の卵巣癌もしくは乳癌をイメージングする方法を提供する。本発明はさらに、該ペプチドに対する抗体の有効イメージング量および製薬的に許容可能な担体を含有する組成物を提供する。該ペプチド配列に対する抗体の知識は、治療すなわち免疫毒素治療に、またはin vitroの診断用途すなわち免疫組織化学、もしくはin vivoの診断用途すなわち毒素によるターゲッティングのための放射能標識付けに有用である。前記キットは、腫瘍抗原もしくはその免疫反応性フラグメントと特異的に反応する腫瘍抗原関連抗体の存在を検出することができる。このキットは、基体に結合した腫瘍抗原、該抗体に反応性がある２次腫瘍抗原および２次腫瘍抗原と該抗体との反応を検出するための試薬を含むことができる。かかるキットは、ELISA キットのような抗体捕捉アッセイキットであり得、そして基体、適宜に１次および２次抗体、ならびに検出可能成分、酵素基質および発色試薬のような上記の他の必要な試薬を含んでもよい。あるいはまた、抗体捕捉診断キットは、一般的に本明細書に記載した成分および試薬を含んでなる免疫ブロットキットであってよい。本発明の診断キットに含まれる特定の試薬および他の成分は、そのキットで実施される特定の診断方法に合わせて当業界で利用可能なものから選択することができる。かかるキットは、被験体から得た培養前後の組織および体液のような生物学的サンプル中の抗体を検出するために使うことができる。本発明は、下記容器が、抗体産生に導くリンパ球のポリクローナル的かつ特異的活性化を誘導するために有効な、抗原を含むかもしくは含まないマイトジェン含有培地を含む、全血サンプル採集用の真空密閉容器を含んでなる、被験体からの特定の腫瘍抗原関連抗体を検出するためのキット、ならびに１以上の腫瘍関連抗体を検出するためのアッセイを提供する。本発明では、リガンドと腫瘍抗原との反応の検出は、適切な事例では、様々なエピトープと特異的に反応するかまたはリガンドもしくは反応抗体と非特異的に反応する２次抗体もしくは他のリガンドの使用より、さらに促進される。本発明は、a)被験体から全血サンプルを得ること；b)全血サンプルを、リンパ球のポリクローナル的かつ特異的活性化を誘導する、抗原を含むかもしくは含まないマイトジェン含有培地の存在下に培地中でインキュベートすること；c)リンパ球由来の核酸配列を得ること；d)その核酸配列を、単離したDNAと特異的にハイブリダイズする能力のある少なくとも15ヌクレオチドの標識した核酸配列に、ハイブリダイズする条件下で接触させること；e)ハイブリダイズした核酸配列の存在（その存在が被験体中の腫瘍抗原関連抗体の指標となる）を測定し、それによって被験体を診断することを含んでなる、癌について被験体を診断する方法を提供する。１つの実施形態では、腫瘍抗原関連抗体からのDNA配列を工程(b)の前で増幅する。他の実施形態では、核酸配列の増幅にPCRを用いる。核酸配列の増幅方法は当業者には公知である。ある薬物が使用できるかどうかを決定する腫瘍抗原関連抗体物質スクリーニングアッセイが本発明において意図されている。かかるアッセイは、全血、B細胞のようなリンパ球またはPBMCを、抗原を含むか含まないマイトジェンおよび腫瘍抗原関連抗体薬物と共にインキュベートすることを含んでなり、細胞が腫瘍抗原関連抗体を発現するかを評価して、それからかかる薬物の活性に及ぼす化合物の影響を判定する。本発明は、抗原に曝露された被験体を検出するための改良アッセイに関する。この発明は、1）個人が抗原に曝露されたことがあるかを判定する診断、2）予後徴候指示薬、3）抗抗原治療の有効性または新しい可能性のある抗抗原薬剤の有効性をモニターする方法、としての使用を意図している。本発明は、次の工程を含んでなる被験体から得たサンプル中の抗原に対する抗体のin vitro検出方法を提供する。すなわち、a)被験体から全血サンプルを得ること；b)全血サンプルを、抗体産生に導くリンパ球のポリクローナル的かつ特異的活性化を誘導する、抗原を含むかもしくは含まない培地でマイトジェンの存在下にインキュベートすること；c）工程b）で生じた培養物を抗原に曝露し、それによって抗原−抗体免疫複合体を形成させること；d）工程c）の抗原−抗体免疫複合体を検出し、特異的抗原抗体の存在は被験体が抗原に曝露されたことを示すものである、各工程を含んでなる。１つの実施形態では、白血球のサンプルを被験体から得て、Bリンパ球のポリクローナル的かつ特異的活性化を誘導するように、抗原を含むかもしくは含まないマイトジェンを含有する培地の存在下で培養下にインキュベートする。他の実施形態では、リンパ球のサンプルを被験体から得て、Bリンパ球のポリクローナル的かつ特異的活性化を誘導する、抗原を含むかもしくは含まないマイトジェンを含有する培地の存在下で培養下にインキュベートする。他の実施形態では、PB MCのサンプルを被験体から得て、Bリンパ球のポリクローナル的かつ特異的活性化を誘導する、抗原を含むかもしくは含まないマイトジェンを含有する培地の存在下で培養下にインキュベートする。１つの実施形態では、特異的抗体を産生する細胞を検出する。他の実施形態では、工程b）の培養物が上清をもたらし、上清を抗原に曝露して、抗原−抗体免疫複合体を形成させる。他の実施形態では、培養物の細胞画分が使われる。他の実施形態では、白血球が使われる。本発明はさらに、次の工程を含んでなる、抗原に曝露された被験体を検出する方法を提供する。すなわち、a)被験体から全血サンプルを得ること；b)全血サンプルを、抗体産生に導くリンパ球のポリクローナル的かつ特異的活性化を誘導する、抗原を含むかもしくは含まないマイトジェンを含有する培地の存在下で培養下にインキュベートすること；c）核酸配列を回収するように、細胞を処理すること；d）得られた核酸配列を、抗原に曝露した結果として産生された抗体の核酸配列と特異的にハイブリダイズする能力をもつプライマーである１本鎖標識付きオリゴヌクレオチドプライマーと、ハイブリダイズする条件下で接触させること；e）増幅産物の存在を検出し、その存在が抗原の存在を示すものである、各工程を含んでなる。工程c）の細胞は、細胞の核酸配列を露出するように処理される。露出方法は、当業者に公知である。あるいは、工程d）の得られた核酸配列を、核酸分子とハイブリダイズする１対のプライマーにより増幅して２本鎖の増幅産物を得る。増幅産物を検出することもできる。他の実施形態では、可変領域の端で核酸配列とハイブリダイズする能力のあるプライマーを、得られた核酸配列とハイブリダイズする条件下で接触させ、特異的に検出する。本発明はまた、次の工程を含んでなる、抗原に曝露された被験体を検出する方法も提供する。すなわち、a)被験体から全血サンプルを得ること；b)全血サンプルを、抗体産生に導くリンパ球のポリクローナル的かつ特異的活性化を誘導する、抗原を含むかもしくは含まないマイトジェンを含有する培地の存在下で培養下にインキュベートすること；c）核酸配列を別個に回収するように細胞を処理すること；d）得られた核酸配列を、核酸配列とそれぞれ特異的にハイブリダイズする能力のある複数対の１本鎖標識付きオリゴヌクレオチドプライマーと、ハイブリダイズする条件下で接触させること；e）１対のプライマーがハイブリッドする任意の核酸配列を増幅して、２本鎖増幅産物を得ること；f）かかる２本鎖増幅産物のどれかを処理して、それから１本鎖核酸配列を得ること；g）生じた１本鎖核酸配列を、抗原に曝露した結果として産生されたた抗体の核酸配列と特異的にハイブリダイズする能力のある標識付きオリゴヌクレオチドプローブと、ハイブリダイズする条件下で接触させること；h）生じたハイブリッドを、かかる複合体に標識付きプローブが存在するとき該プローブと特異的に複合体を形成する能力のある検出可能にマークされたタグと、複合体形成条件下で接触させること；およびi）生じた複合体のどれかの存在を検出し、その存在がその抗原の存在を示すものである、各工程を含んでなる。「抗原」は限定されるものでないが、免疫原、アレルゲン、発癌物質、同種抗原、自己抗原（自家抗原）、癌抗原、癌関連抗原、移植抗原、血液型抗原、または汚染物質を含む。本明細書に定義される全ての抗原は免疫応答を引き出す。したがって、抗原に対する（１または複数の）抗体を探すことは、検出系および試験のための抗原として、その全体またはセグメント（ペプチド）を使うことを意味する。抗原は、タンパク質、ペプチド、フラグメント、解離物、（任意の長さの）ペプチド；リポタンパク質；糖タンパク質および糖脂質（両方とも例えば細菌壁、血液型抗原、および骨髄腫構造物に代表される）のような炭水化物；オリゴ糖／多糖；脂質／脂肪；ハプテン；ならびにTNP（トリニトロフェニル）、ベンゼンアルセネート（benzene arsenate）および非有機化合物のような化学薬品であってよい。ヘリコバクター・ピロリ（Helicobacterium pylori）は大部分の消化性潰瘍の原因として示唆される細菌である。この細菌は多くの抗原／抗原エピトープまたは構造体をもつ。全細菌、またはそのタンパク質、炭水化物、ムチン、もしくはペプチドのいくつかは、抗体検出のための抗原となり得る。本発明はまた、a)被験体から全血サンプルを得ること；b)全血サンプルを、抗体産生に導くリンパ球のポリクローナル的かつ特異的活性化を誘導する、抗原を含むかもしくは含まないマイトジェンを含有する培地の存在下で培養下にインキュベートすること；c）抗原への曝露から生じる抗体の核酸配列を別個に回収するように、細胞を処理すること；d）４種全部のデオキシリボヌクレオシド三リン酸の存在下で、Mn⁺²を含む適切なバッファー中で、熱安定性DNAポリメラーゼが第１プライマーの伸長産物の合成を開始して標的RNAに相補的なcDNA配列を与えるに十分な温度で、第１および第２プライマー（第１プライマーは標的RNAに十分相補的であってそれとハイブリダイズし、標的RNAと相補的なcDNA配列合成を開始し、第２プライマーは標的RNAと十分相同性であってcDNAとハイブリダイズし、伸長産物の合成を開始する）ならびに熱安定性DNAポリメラーゼの混合物を含んでなる反応混合物中でサンプルを処理すること；e）反応混合物を、１本鎖cDNAを与えるに適切な温度で処理すること；f）反応混合物を、熱安定性DNAポリメラーゼが第２プライマーの伸長産物の合成を開始して２本鎖cDNA配列を与えるに適切な温度で、処理すること；およびg）工程e）の２本鎖cDNA配列を、ポリメラーゼ連鎖反応により増幅することを含んでなる、サンプル中の標的RNA配列を増幅する方法も提供する。好ましい実施形態では、バッファーは酢酸マンガン（またはMn(OAc)₂またはMn(CH₃CO₂)₂)とも記す）、ビシネ−KOH（ビシネはN,N- ビス(2-ヒドロキシエチル)グリシンである）、および酢酸カリウム（またはKOAc もしくはKCH₂CO₂とも記す）を含有する。本発明は、全血サンプルを採集するための、抗体産生に導くリンパ球のポリクローナル的かつ特異的活性化を誘導するために有効な、抗原を含むかもしくは含まないマイトジェンを含有する培地を容れる容器を含んでなる、被験体から抗原に曝露して生じる特異的な抗体を検出するためのキット、並びに抗原への曝露から生じる特異的な抗体の検出のためのアッセイを提供する。容器は、全血サンプルを採集するための真空密閉容器であってよく、抗体産生に導くリンパ球のポリクローナル的かつ特異的活性化を誘導するために有効な、抗原を含むかもしくは含まないマイトジェンを含有する培地を含む。単一または複数の抗原がその容器に結合され得る。本発明によれば、全血サンプルは、抗原を含むかもしくは含まないアメリカヤマゴボウマイトジェンのごときマイトジェンの有効濃度の溶液を容れたバキュウムチューブのような試験管中に吸い込む。試験すべき全血サンプルをアメリカヤマゴボウマイトジェンの存在下でin vitro培養する。同じ機能を達成するために、アメリカヤマゴボウマイトジェンの代わりにまたは追加して、抗体産生または分泌につながるTh₂型免疫応答を活性化する、他のBリンパ球の活性化物質または体液系を使うことができる。インキュベーション後、培養液からアリコートをとり、その後、標準ELISA手法および／またはウェスタンブロット分析を使って、所望の抗原の存在をアッセイする。後日サンプルをアッセイするのであれば、血液を遠心分離し上清液を採集し、凍結して保存する。結果は、他のどの検出技術を使って得てもよい。細胞画分をPCRおよびELISPOTと共に使うことができる。本発明の方法は、抗体の存在を測定するため、任意に血球を血液の液部から分離することを含む。血液の液部からの血球の分離は、遠心分離、濾過または密度勾配を含む当業者に公知のいくつかの方法のどれかによって行うことができる。血球を液部から物理的に分離する必要がないことは理解されるべきである。抗原を含むもしくは含まないマイトジェンと全血とのインキュベーション後に、血液から液部を容易に抽出し、抗体を試験することができる。任意に、赤血球を穏和な浸透圧ショックまたは穏和な界面活性剤のいずれかにより溶解することができる。この方法では白血球は生存し続ける。特定の抗体に特異的に結合する抗原は当業者に公知である。さらに、抗体は抗原に結合するタグとして使ってもよい。１つの実施形態では、抗体はモノクローナル抗体である。他の実施形態では、抗体はポリクローナル抗体である。１つ以上の抗原に対する特異的な抗体の存在を免疫酵素的に検出する他の方法は、ウェスタンブロットである。抗原を電気泳動により分離し、ニトロセルロース膜もしくは他の適切な支持体に移す。その後、試験すべき液を膜と接触させて、形成される免疫複合体の存在を既に記載した方法により検出する。この方法の変法では、精製抗原を膜上に線もしくはスポットとして塗布して結合させる。その後、膜を培養前および後の試験すべき体液と接触させ、形成される免疫複合体を先に記載した技術を使い検出する。本発明は、a）被験体から全血サンプルを得ること；b)全血サンプルを、リンパ球のポリクローナル的かつ特異的活性化を誘導するために、抗原を含むかもしくは含まないマイトジェンを含有する培地の存在下に培養下でインキュベートすること；c）リンパ球から核酸配列を得ること；d）核酸配列を、単離したDNAと特異的にハイブリダイズする能力のある少なくとも15ヌクレオチドの標識した核酸配列に、ハイブリダイズする条件下で接触させること；e)ハイブリダイズした核酸配列の存在（その存在が被験体の抗原への曝露を示す）を測定し、それによって被験体を診断することを含んでなる、抗原に曝露した被験体を診断する方法を提供する。上記の方法で、ポリアクリルアミドゲルにより行うサイズ分画を用いてもよい。１つの実施形態では、サイズ分画はアガロースゲルで行う。さらに、DNA断片の固体マトリックスへの移行は、ハイブリダイゼーション工程の前に実施してもよい。かかる固体マトリックスの１例はニトロセルロース・ペーパーである。抗原の感染もしくは曝露の結果として産生された特異的抗体を検出する方法には、PCRおよび／またはブロットハイブリダイゼーションが使用される。検出もしくは予知のための抗原物質の有無、または抗原のリスクアセスメントは、サザントランスファー、溶液ハイブリダイゼーションまたは非放射能検出システムを含み、これらは全て当業者に周知である。ハイブリダイゼーションはプローブを使って行われる。ハイブリダイズした部分の可視化により、病原物質の有無の定性的測定が可能となる。本発明は、薬物が使用可能かどうかを判定する抗原物質スクリーニングアッセイを意図している。かかるアッセイは、全血、B細胞のようなリンパ球、またはP BMCを、抗原を含むか含まないマイトジェンおよび抗原薬物と共にインキュベートし、細胞が抗原を発現するかを評価して、それからかかる物質の活性に及ぼす化合物の作用を判定することを含んでなる。本発明は、ウイルスに感染した被験体を検出する改良アッセイに関する。本発明は；1)個人がウイルスに感染しているかどうかを判定する診断、2）予後徴候指示薬、および3）抗ウイルス治療の有効性（または新しい可能性のある抗ウイルス薬または剤の有効性）をモニターする方法、としての使用を意図する。本発明は、次の工程を含んでなる、被験体から得たサンプル中のウイルスに対する抗体のin vitro検出法を提供する。すなわち、a)被験体から全血サンプルを得ること；b)全血サンプルを、抗体産生に導くリンパ球のポリクローナル的かつ特異的活性化を誘導する、抗原を含むかもしくは含まないマイトジェン含有培地で培養下にインキュベートすること；c）工程b）で得られた培養物をウイルス抗原に曝露し、それによって抗原−抗体免疫複合体を形成させること；d）工程c）の抗原−抗体免疫複合体を検出し、ウイルス特異的抗体の存在が被験体がウイルスに曝露されたことを示すものである、各工程を含んでなる。１つの実施形態では、特異的抗体を産生する細胞を検出する。工程b）の培養物から上清を得、その上清をウイルス抗原に曝露し、それにより抗原−抗体免疫複合体を形成させることができる。また、白血球または培養物の細胞画分を使うこともできる。本発明はさらに、次の工程を含んでなる、ウイルスに曝露された被験体を検出する方法を提供する。すなわち、a)被験体から全血サンプルを得ること；b)全血サンプルを、抗体産生に導くリンパ球のポリクローナル的かつ特異的活性化を誘導する、抗原を含むかもしくは含まないマイトジェンを含有する培地の存在下に培養下でインキュベートすること；c）核酸配列を回収するように、細胞を処理すること；d）得られた核酸配列を、ウイルスに曝露した結果として産生された抗体の核酸配列と特異的にハイブリダイズする能力をもつプライマーである１本鎖標識付きオリゴヌクレオチドプライマーと、ハイブリダイズする条件下で接触させること；e）増幅産物の存在を検出し、その存在がウイルスの存在を示すものである、各工程を含んでなる。工程c）の細胞は、その細胞の核酸配列を露出するように処理される。露出方法は当業者に公知である。あるいはまた、工程d）の得られた核酸配列を、核酸分子とハイブリダイズする１対のプライマーにより増幅し、２本鎖の増幅産物を得ることができる。増幅産物は検出可能でありうる。他の実施形態では、可変領域の端で核酸配列とハイブリダイズする能力のあるプライマーと、得られた核酸配列とを、ハイブリダイズする条件下で接触させ、特異的に検出する。本発明は、次の工程を含んでなる、ウイルスに感染した被験体を検出する方法を提供する。すなわち、a)被験体から全血サンプルを得ること；b)全血サンプルを、抗体産生に導くリンパ球のポリクローナル的かつ特異的活性化を誘導する、抗原を含むかもしくは含まないマイトジェンを含有する培地の存在下に培養下でインキュベートすること；c）核酸配列を別個に回収するように細胞を処理すること；d）得られた核酸配列を、ウイルスへの曝露の結果として産生された抗体の核酸配列とそれぞれ特異的にハイブリダイズする能力のある複数対の１本鎖標識付きオリゴヌクレオチドプライマーと、ハイブリダイズする条件下で接触させること；e）１対のプライマーがハイブリダイズする核酸配列のどれかを増幅して、２本鎖増幅産物を得ること；f）かかる２本鎖増幅産物のどれかを処理して、それから１本鎖核酸配列を得ること；g）生じた１本鎖核酸配列のどれかを、かかるウイルス抗体と特異的にハイブリダイズする能力のある標識付きオリゴヌクレオチドプローブと、ハイブリダイズする条件下で接触させること；h）生じたハイブリッドのどれかを、かかる複合体中に標識付きプローブが存在するとき該プローブと特異的に複合体を形成する能力のある検出可能にマークされたタグと、複合体形成条件下で接触させること；およびi）生じた複合体の存在を検出し、その存在がウイルスの存在を示すものである、各工程を含んでなる。ウイルス特異的抗体の検出に必要なウイルス抗原は、様々な形で存在し得る。すなわち、a）全ウイルス、または解離されていてよい不活化ウイルス（音波処理、ホモジナイズ、界面活性剤、酵素により解離；産物はグループでまたは個々に抗原として使うことができる）；c）ウイルス配列（またはそのセグメント）はベクターにより他の産生体（細胞、細菌、酵母ファージ）に挿入することができ、その後、個々のタンパク質と構造体が産生される；d）全タンパク質のペプチドフラグメント（裸およびグリコシル化の両方または脂質と結合したもの、特定のペプチド単独、または大きなもしくは種々の粒子／物体／細胞／担体／表面上に拘束した／結合した／連結した／の部分／発現させたもの）は生化学的に合成可能であり、抗原として使用される；e）ウイルスと細胞の間のインターフェース、またはウイルス抗原が感染細胞の表面上で発現される方法そのものが、特異的抗原エピトープとしての役割も果たすことができよう。ウイルスとしては、限定されるものでないが、トリ脳脊髄炎ウイルス（avian encephalomyelitis virus）、トリレオウイルス（avian reovirus）、トリパラミキソウイルス（avian paramyxovirus）、トリインフルエンザウイルス（avian influenza virus）、トリアデノウイルス（avian adenovirus）、鶏痘ウイルス（fowl pox virus）、トリコロナウイルス（avian coronavirus）、トリロタウイルス（avian rotavirus）、ニワトリ貧血ウイルス（chick anemia virus(agen t)）、Salmonellaspp.、E．coli、Pahsteurella spp.、Bordetella spp.、Eimer ia spp.、Histomonas spp.、Trichomonas spp.、トリ脳脊髄炎ウイルス（avian encephalomyelitis virus）、トリレオウイルス（avian reovirus）、トリパラミキソウイルス（avian paramyxovirus）、トリインフルエンザウイルス（avian influenza virus）、トリアデノウイルス（avian adenovirus）、鶏痘ウイルス（fowl pox virus）、トリコロナウイルス（avian coronavirus）、トリロタウイルス（avian rotavirus）、ニワトリ貧血ウイルス（chick anemia virus(agen t)）、Salmonella spp.、E．coli、Pasteurella spp.、Bordetella spp.、Eimer ia spp.、Histomonas spp.、Trichomonnas spp.、家禽線虫（Poultry nematodes ）、条虫（cestodes）、吸虫（trematodes）、家禽ダニ／シラミ（poultry mite s/lice）、家禽原虫（poultry protozoa）を含む。非ヒト霊長類のウイルスとしては、限定されるものでないが、Aotineherpesvi rus 1、Aotinehe rpesvirus 3、Cercopithecine herpesvirus 1(B型ウイルス、H V simiae)、Cercopithecine herpesvirus 2(SA8)、Cercopithecine herpesvirus 3(SA6)、Cercopithecine herpesvirus 4(SA15)、Cercopithecine herpesvirus 5（アフリカミドリザル・サイトメガロウイルス）、Cercopithecine herpesviru s 6(リバプールベルベットモンキーウイルス（Liverpool vervet monkey virus）)、Cercopithecine herpesvirus 7(パタスモンキー（Patas monkey）HV ；MMVまたはPHV delta HV)、Cercopithecine herpesvirus 8(アカゲザル・サイトメガロウイルス)、Cercopithecine herpesvirus 9(Medical LakeマカクHV sim ian varicella HV)、Cercopithecine herpesvirus 10(アカゲザル白血球関連HV 株I)、Cercopithecine herpesvirus 12（HV papio、ヒヒ（baboon）HV）、Cerco pithecine herpesvirus 13(Herpesvirus cyclopis)、Cercopithecineherpesviru s14(アフリカミドリザルEBV-様ウイルス)、Cercopithecine herpesvirus 15(アカゲザルEBV-様HV)、Ateline herpesvinrs 1(クモザル（Spider monkey）HV)、A teline herpesvirus 2(HV ateles)、Callitrichine herpesvirus(HV saguinus) 、Callitrichine herpesvirus(SSG、キヌザル（marmoset）サイトメガロウイルス)、Cebine herpesvirus I(オマキザル（capuchin）HV)、Cebine herpesvirus 2(オマキザルHV)、Pongine herpesvirus 1(チンパンジーHV;pan HV)、Pongine h erpesvirus 2(オランウータンHV)、Pongine herpesvirus 3(ゴリラHV)、Saimiri ine herpesvirus 1(キヌザルHV，herpes T，HV)、tamarinus，HV platyrrhinae 、(Saimiriine herpesvirus 2型）リスザル（squirrel monkey）HV、およびHV s aimiriを含む。哺乳動物のウイルスとしては、限定されるものでないが、ウシ・ヘルペスウイルス1-5、ヒツジ・ヘルペスウイルス1-2、Alcelaphineヘルペスウイルス1、パルボウイルス(Parvovirus)(マウスminute virus、ミンクのアリューシャン病、ウシ・パルボウイルス、イヌ・パルボウイルス、ニワトリ・パルボウイルス、ネコ panleukopenia、ネコ・パルボウイルス、ガチョウ・パルボウイルス、HBパルボウイルス、H-1パルボウイルス、Kilham rat lapineパルボウイルス、ミンク腸炎を含む)、エリトロウイルス(Erythrovirus)(アデノ随伴型1-5、ウシアデノ随伴、イヌアデノ随伴、ウマアデノ随伴、ヒツジアデノ随伴を含む)を含む。ウイルスは、限定されるものでないが、カリフラワー、バドナウイルス(Badna viruses)、ゲミニウイルス(Geminiviruses)、植物レオウイルス(Reoviruses)、クリプトウイルス(Cryptoviruses)、ラブドウイルス(Rhabdoviridae)、トマトSp otted、テヌイウイルス(Tenuiviruses)、タバコ、ジャガイモウイルス、ポチウイルス(Potyviridae)、クロステロウイルス(Closteroviruses)、黄色カブラ、低木トマト（Tomato Bushy）、ルテオウイルス(Luteoviruses)、セクイウイルス (Sequiviridae)、タバコ、ササゲ（Cowpea）、タバコ、Pean Enation、赤クローバー（Red Clover）、Brome(イネ科スズメノチャヒキ)、キュウリ、アルファルファ、大麦、黒斑ビート（Beet Necrotic）、dsRNA、サッカロミセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)、Cryphonectria parasitica、リーシュマニア(L eishmania)、Giardia Lamblia、トリコモナス（Tricomonas）、コレラ（Chlorel la）、およびサッカロミセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)を含む。さらに、次のファミリーからのウイルスが含まれる：バキュロウイルス(Bacul oviridae)およびヌディウイルス(Nudiviruses)、ポリドナウイルス(Polydnaviri dae)、アスコウイルス(Ascoviridae)、ノダウイルス(Nodaviridae)、テトラウイルス(Tetraviridae)、トンブスウイルス(Tombusviridae)、コロナウイルス(Coro naviridae)、フラビウイルス(Flaviviridae)、トガウイルス(Togaviridae)、ブロモウイルス(Bromoviridae)、バルナウイルス(Barnaviridae)、トチウイルス(T otiviridae)、パルチチウイルス(Partitiviridas)、ハイポウイルス(Hypovirida e)、パラミクソウイルス(Paramyxoviridae)、ラブドウイルス(Rhabdoviridae)、フィロウイルス(Filoviridae)、オルトミクソウイルス(Orthomyxoviridae)、ブンヤウイルス(Bunyaviridae)、アレナウイルス(Arenaviridae)、レビウイルス(L eviviridae)、ピコルナウイルス(Picornaviridae)、セクイウイルス(Sequivirid ae)、コモウイルス(Comoviridae)、ポチウイルス(Potyviridae)、カルチウイルス(Calciviridae)、アストロウイルス(Astroviridae)、ノダウイルス(Nodavirid ae)、イノウイルス(Inoviridae)、ミクロウイルス(Microviridae)、ゲミニウイルス(Geminiviridae)、シルコウイルス(Circoviridae)、パルボウイルス(Parvov iridae)、ヘパドナウイルス(Haepadnaviridae)、レトロウイルス(Retroviridae) 、シストウイルス(Cystoviridae)、レオウイルス(Reoviridae)、ビルナウイルス (Birnaviridae)、ミオウイルス(Myoviridae)、シフォウイルス(Siphoviridae)、ポドウイルス(Podoviridae)、テクチウイルス(Tectiviridae)、コルチコウイルス(Corticoviridae)、プラスマウイルス(Plasmaviridae)、Lipothrixviridae、F uselloviridae、Poxviridae、アフリカブタ熱様ウイルス（African swine fever -like viruses）、Iridoviridae、Phycodnaviridae、Baculoviridae、Herpesvir idae、Adenoviridae、Papovaviridae、Polydnaviridae、Picornaviridae、Calic iviridae、Astroviridae、Togaviridae、Flaviridae、Coronaviridae、Arterivi rus、Paramyxoviridae、Rhabdoviridae、Filoviridae、Orthomyxoviridae、Buny aviridae、Arenaviridae、Reoviridae、Birnaviridae、Retroviridae、Hepadnav iridae、Circoviridae、Parvoviridae、Papovaviridae、アデノウイルス(Adenov iridae)、ヘルペスウイルス(Herpesviridae)、ポックスウイルス(Poxviridae)、イリドウイルス(Iridoviridae)。ウイルスは、限定されるものでないが、次のものを含む：マレク病ウイルス(M arek's disease virus)(家禽)、ミンク腸炎ウイルス(Mink Enteritis virus)、マウスのMinuteウイルス、マウス肝炎ウイルス、マウス乳癌ウイルス、マウスポリオウイルス (タイレルウイルス(Theiler's virus))、粘膜病ウイルス(ウシ)、粘液腫ウイルス、ナイロビヒツジ病ウイルス、ニューカッスル病ウイルス(家禽) 、オルフウイルス（伝染性膿疱性口内炎ウイルス）、パラインフルエンザウイルス3、パラインフルエンザウイルス1（センダイウイルス）、小反芻動物病ウイルス(Peste-des-petits-ruminants virus)(ヒツジおよびヤギ)、マウス肺炎ウイルス、ヒツジ進行性肺炎ウイルス、偽牛痘ウイルス（搾乳者小結節ウイルス）、仮性狂犬病ウイルス、ウサギ出血病ウイルス、狂犬病ウイルス、レオウイルス1-3 、リフトバレー熱ウイルス、牛疫ウイルス、多種のロタウイルス、スクラピー因子(ヒツジおよびヤギ)、羊痘ウイルス、ショープ乳頭腫ウイルス、サル免疫不全ウイルス、ブタ水痘性疾患ウイルス、豚痘ウイルス、ダニ媒介脳炎ウイルス、伝染性胃腸炎ウイルス(ブタ)、シチメンチョウ・ブルーコムウイルス(Turkey blue comb virus)、ベネズエラウマ脳脊髄炎ウイルス、小水疱性発疹ウイルス(ブタ) 、水疱性口内炎ウイルス、シカおよびエルクの消耗病、ヴェッセルスブロン病ウイルス、西部ウマ脳脊髄炎ウイルス、アフリカウマ病ウイルス1-9、アフリカ豚コレラウイルス、アリューシャンミンク病ウイルス、トリ細網内皮症ウイルス、トリ肉腫-白血症ウイルス、Bウイルス(Cercopithecusヘルペスウイルス)、ベルネウイルス(Berne virus)(ウマ)、ブルータングウイルス1-25、ボーダー病ウイルス(ヒツジ)、ボルナ病ウイルス(ウマ)、ウシエンテロウイルス1-7、ウシ一過性熱ウイルス、ウシ免疫不全ウイルス、ウシ白血症ウイルス、Bovine mamil litis vitus、ウシ乳頭腫ウイルス、ウシ丘疹性口内炎ウイルス、ウシ呼吸器性シンシチアルウイルス、ウシウイルス性下痢症ウイルス、ブレダウイルス(コウシ)、イヌアデノウイルス2、イヌジステンパーウイルス、イヌパルボウイルス、ヤギ関節炎-脳脊髄炎ウイルス、牛痘ウイルス、西部ウマ脳脊髄炎ウイルス、エボラウイルス、エクトメリアウイルス(マウスポックスウイルス)、脳心筋炎ウイルス、伝染性出血性疾患ウイルス(シカ)、ウマ流産ウイルス(EHV1)、ウマアデノウイルス、ウマ動脈炎ウイルス、ウマ交疹ウイルス(EHV3)、ウマ伝染性貧血ウイルス、ウマ鼻肺炎ウイルス(EHV4)、ネコカリシウイルス(Feline calicivirus)、ネコ免疫不全ウイルス、ネコ伝染性腹膜炎ウイルス、ネコ汎白血球減少症ウイルス、ネコ肉腫・白血病ウイルス、ウサギおよび野ウサギおよびリスの線維腫ウイルス、***ウイルス、鶏痘ウイルス、Hemagglutinating encephalomyelitis v irus(ブタ)、Hog cholera virus、Infectious bovine rhinotrachetitis virus 、伝染性気管支炎ウイルス(家禽)、Infectious bursal disease virus(家禽)、イヌ伝染性肝炎ウイルス、Infectious hemaropoietic necrcosis virus(魚)、in fectious laryngotrachetis virus、Infectious hematopoietic necrosis virus (魚)、ブタ、ウマ、アザラシおよびトリのインフルエンザウイルス、日本脳炎ウイルス、乳酸デヒドロゲナーゼウイルス(マウス)、リンパ球脈絡髄膜炎ウイルス、マエディ/ビスナウイルス(ヒツジ)、マルブルクウイルス、Rocio virus、ロス川ウイルス、風疹ウイルス、ロシア春夏脳炎ウイルス、Sandfly fever-Naples v irus、Sandfly fever-Sicilian virus、セントルイス脳炎ウイルス、SV 40ウイルス、タヒナウイルス、ワクシニアウイルス、水痘-帯状疱疹ウイルス(ヒトヘルペスウイルス3)、痘瘡ウイルス、Venezuelan equine encephalitis virus、Vesi cular stomatitis viruses、西ナイルウイルス、東部ウマ脳脊髄炎ウイルス、黄熱病ウイルス、アデノウイルス1-49、アストロウイルス1、2、Bウイルス(Cercop ithecus herpesvirus)、BK virus、Bunyamwera virus、カリフォルニア脳炎ウイルス、中央ヨーロッパ脳炎ウイルス、チクングニヤウイルス、コロラドダニ熱ウイルス、Congo-Crimean hemorrhagic fever virus、Cowpox virus、Coxsacieuir uses A 1-21およびA 24、Coxsackieviruses B 1-6、Creutzfeldt-Jakob disease agent、Prions、デング熱ウイルス1-4、Duvenhage virus 、東部ウマ脳脊髄炎ウイルス、エボラウイルス、エコーウイルス1-9および11-27 および29-34、エンテロウイルス68-71、エプスタイン-バーウイルス(ヒトヘルペスウイルス4)、ハンターンウイルス、A型肝炎ウイルス、B型肝炎ウイルス、C型肝炎ウイルス、デルタ肝炎ウイルス、E型肝炎ウイルス、単純ヘルペスウイルス1 および2(ヒトヘルペスウイルス1および2)、Human enteric coronavirus、Human enteric conoravinrs、ヒトサイトメガロウイルス(ヒトヘルペスウイルス5)、ヒトヘルペスウイルス6A、6B、および7、ヒト免疫不全ウイルス1および 2、Human respiratory coronaviruses 229EおよびOC43、ヒトロタウイルス、Human T-lymp hotropic viruses 1および2、インフルエンザウイルスAおよびB、日本脳炎ウイルス、JC virus、Junin virus(アルゼンチン出血熱ウイルス)、Kuru agent、キャサヌール森林病ウイルス、La Crosse virus、ラッサ熱ウイルス、リンパ球脈絡髄膜炎ウイルス、Macuopo virus（ボリビア出血熱ウイルス）、マルブルクウイルス、麻疹ウイルス、モコラウイルス、伝染性軟属腫ウイルス、サル痘ウイルス、Muerto、Canyon virus、流行性耳下腺炎ウイルス、マリーバレー脳炎ウイルス、Norwalk virus(および関連ウイルス)、O'nyong-nyong virus、オムスク出血熱ウイルス、オルフウイルス（ヒツジ膿疱性皮膚炎ウイルス）、Oropouche viru s、乳頭腫ウイルス1-60、パラインフルエンザウイルス1および3、パラインフルエンザウイルス2および4、パルボウイルスB-19、ポリオウイルス1-3、偽牛痘ウイルス（搾乳者小結節ウイルス）、RA-Iウイルス、狂犬病ウイルス、呼吸シンシチアルウイルス、ライノウイルス1-113、およびリフトバレー熱ウイルス。ブドウ球菌性膿瘍(Staphylococcal abscesses);ブドウ球菌性肺炎(Staphyloco ccal pneumonia);ブドウ球菌性菌血症(Staphylococcal bacteremia);ブドウ球菌性骨髄炎(Staphylococcal osteomyelitis);ブドウ球菌(Staphylococcal);Ａ型、Ｂ型およびＣ型インフルエンザウイルス(Influenzaviruses Ａ，Ｂ and Ｃ);１〜４型パラインフルエンザウイルス(Parainfluenzaviruses 1-4);流行性耳下腺炎ウイルス(Mumps virus);アデノウイルス(Adenoviruses);レオウイルス(Reovir uses);呼吸シンシチアルウイルス(Respiratory syncytial virus);エプスタイン -バーウイルス(Epstein-Barrvirus)、ライノウイルス(Rhinoviruses);ポリオウイルス(Polioviruses);コロラドダニ熱(Colarado tick fever)、フレボトムス熱 (Phlebotomus fever)、ベネズエラウマ脳脊髄炎(Venezuelen equine encephalit is);リフトバレー熱(Rift valley fever);デング熱(Dengue fever);西ナイル熱( West Nile fever);バーマ森林ウイルス(Barmah Forest virus);チクングンヤ病( Chikungunya disease);マヤロウイルス病(Mayaro virus disease);ロス川ウイルス病(Ross river virus disease);シンドビスウイルス病(Sindbis virus diseas e)(Okelbo病、Pogosta病、Karelian熱);東部ウマ脳脊髄炎(Eastern equine ence phalitis);西部ウマ脳脊髄炎(Westernequine encephalitis);セントルイス脳炎( St.Louis encephalitis);ベネズエラウマ脳脊髄炎(Venezuelen equine encephal itis);カリフォルニアウイルス群(California virus group);日本脳炎(Japanese encephalitis);ポーワッサンウイルス(Powassan virus);マリーバレー脳炎(Mur ray Valley encephalitis);キャサヌール森林病(Kyasanur Forest disease);ダニ媒介脳炎ウイルス(Tick-borneencephalitis virus);リンパ球性脈絡膜炎(Lymp hocytic choriomeningitis);黄熱病(Yellow fever);デング出血性熱(Dengue hem orrhagic fever)、キャサヌール森林病(Kyasanur Forest disease);オムスク出血熱(Omsk hemorrhagic fever)、クリミア-コンゴ出血熱(Crimean-Congo hemorr hagic fever);ハンターンウイルス(Hantaan virus);ソウルウイルス(Seoul viru s);プーマラウイルス(Puumala virus)、マチュポウイルス(Machupo virus);ジュニンウイルス(Junin virus);ラッサ熱(Lassa fever);マルブルクウイルス(Marbu rg virus);エボラウイルス(Ebola virus)、ラスモデイウム(lasmodium)spp;トリパノソーマ(Trypanosoma) spp;ミクロフィラリア(Microfilarie);レイシュマニア(Leishmania)spp;ネグレリアハルトンアメーバアカントアメーバ群(naegleria Hartmannella Acanthamoe ba group);ランブル鞭毛虫(Giardia lamblia)、ストロンギロイデス(Strongyloi des)、赤痢アメーバ(Entamoeba histolytica)、マンソン住血吸虫(Schistosoma mansoni)、日本住血吸虫(Schistosoma japonicum);赤痢アメーバ(Entamoeba his tolytica)、他のアメーバ;ランブル鞭毛虫(Giardia lamblia);クリプトスポリジウム(Cryptosporidium);ヒト鞭虫(Trichuris trichiura)、回虫(Ascaris lumbri coides)、鉤虫ストロンギロイデス(Hookworm Strongyloides)、サナダムシ(Tape worm)、吸虫類(Fluke);エンテロウイルス虫(Enterobiusvermicularis);赤痢アメーバ(Entamoeba histolytica);ヴェステルマン肺吸虫(Paragonimus westermani) ;赤痢アメーバ(Entamoeba histolytica)、ストロンギロイデス(Strongyloides) 、単包条虫(Echinococcus granulosus)、鉤虫(Hookworm)、回虫(Ascaris)spp、ヌーモーシスティスカリーネイ(Pneumocystis carinii);ヌーモーシスティスカリーネイ(Pneumocystis carinii);回旋糸状虫リーシュマニア(Onchocerca volvu lus Leishmania)spp、赤痢アメーバ(Entamoeba histolytica);カギサナダ(Taeni a solium);トリコモナス(Trichomonas)spp;ビルハルツ住血吸虫(Schistosoma ha ematobium)を含む。病原体は、限定されるものでないが:ネコ病原体、イヌ病原体、ウマ病原体、ウシ病原体、トリ病原体、ブタ病原体、またはヒト病原体を含む。ヒト病原体は、限定されるものでないが:単純疱疹１型ウイルス(herpes simplex virus-1)、単純疱疹２型ウイルス(herpes simplex virus-2)、ヒトサイトメガロウイルス、エプスタイン-バーウイルス、水痘-帯状疱疹ウイルス(Varicell-Zostervirus)、ヒトヘルペスウイルス-6(human herpesvirus-6)、ヒトヘルペスウイルス-7(huma n herpesvirus-7)、ヒトインフルエンザ、ヒト免疫欠損ウイルス、狂犬病ウイルス、麻疹ウイルス(measles virus)、Ｂ型肝炎ウイルスおよびＣ型肝炎ウイルスを含む。さらに、ヒト病原体の抗原性ポリペプチドは、マラリアまたはプラスモディウムファルシパラム(Plasmodium falciparum)、ボルデテラ(Bordetella)からなる群由来の悪性腫瘍と関連しているかもしれない。ウマ病原体は、ウマインフルエンザウイルスまたはウマヘルペスウイルスから誘導することができる。かかる抗原性ポリペプチドの例は、ウマインフルエンザＡ型ウイルス/Alaska 91ノイラミニダーゼ、ウマインフルエンザＡ型ウイルス/P rague 56ノイラミニダーゼ、ウマインフルエンザＡ型ウイルス/Miami 63ノイラミニダーゼ、ウマインフルエンザＡ型ウイルス/Kentucky 81ノイラミニダーゼ、ウマヘルペス１型ウイルス糖タンパク質Ｂ、およびウマヘルペス１型ウイルス糖タンパク質Ｄである。ウシ病原体は限定されるものでないが：ウシ呼吸シンシチアルウイルス(bovin e respiratory syncytial virus)またはウシパラインフルエンザウイルスを含む。ウマインフルエンザウイルスから誘導されるウシ呼吸シンシチアルウイルス(b ovine respiratory syncyrial virus)ウマ病原体の抗原性ポリペプチドは、ウシ呼吸シンシチアルウイルス付着タンパク質(BRSV G)、ウシ呼吸シンシチアルウイルス融合タンパク質(BRSV F)、ウシ呼吸シンシチアルウイルスヌクレオキャプシドタンパク質(BRSV N)、ウシパラインフルエンザ３型ウイルス融合タンパク質およびウシパラインフルエンザ３型ウイルス赤血球凝集素ノイラミニダーゼである。本発明は、a)被験者から全血サンプルを得ること；b)全血サンプルを、抗原を含むかもしくは含まないマイトジェンを含有する培地の存在下の培養でインキュベートして、リンパ球細胞のポリクローナル的かつ特異的な活性化を誘導し、抗体産生を導くこと；c）細胞を曝露してウイルス特異的抗体の核酸配列を別々に回収すること；d）サンプル中のウイルス特異的抗体のRNAの逆転写を実施して、 DNA複写物を産生すること；e）RNAゲノムのDNA複写物のPCR増幅を実施して、複数のDNA複写物を産生すること；f）DNA複写物と複数の相補DNAプローブとのハイブリダイゼーションを実施して、サンプルのDNA含量を検出し、それによりウイルス感染を検出することを含む、ウイルス検出の方法を提供する。本発明は、抗体産生を導くリンパ球細胞のポリクローナル的かつ特異的な活性化を誘導するために有効な、抗原を含むかもしくは含まないマイトジェンを含有する培地を含む全血サンプル採集用容器、および特異的ウイルス抗体を検出するためのアッセイを含む、被験者から特異的ウイルス抗原を検出するためのキットを提供する。本発明はまた、抗原を含むかまたは含まないマイトジェンの有効な濃度を含有する血液採集容器を含むキットも含む。該容器は、任意に培養培地を容れることができる。好ましい容器は試験管である。血液採集容器はプラスチック、ガラス、または培養血液と適合する他のどんな材料でもあってもよい。本発明は、血液採集チューブ以外の血液収容手段も含み、限定されるものでないが、血液をインキュベーションすることができるウエルを含有するマイクロタイタープレート、組織培養フラスコ、エルレンマイヤーフラスコ（Erlenmeyer flask）のようなガラスフラスコおよび他の血液培養ができるどの容器も含むと理解されるべきである。本発明は、a)被験者から全血サンプルを得ること；b)全血サンプルを、抗原を含むかもしくは含まないマイトジェンを含有する培地の存在下の培養でインキュベートして、リンパ球細胞のポリクローナル的かつ特異的な活性化を誘導すること；c）リンパ球から核酸配列を得ること；d）該核酸配列を、特異的な抗体の単離したDNAと特異的にハイブリダイズする能力のある少なくとも15ヌクレオチドの標識した核酸配列に、ハイブリダイズする条件下で接触させること；およびe)その存在が被験者中のウイルスの存在を示す、ハイブリダイズした核酸配列の存在を測定し、それによって被験者のウイルスを診断することを含む、被験者のウイルスを診断する方法を提供する。本発明は、ウイルスに感染／曝露した被験者の診断／予後指示薬として使用する、次の工程を含みなるin vitroの方法を提供する：a)被験者から全血サンプルを得ること；b)全血サンプルを、抗原を含むかもしくは含まない培地のマイトジェンの存在下の培養でインキュベートして、抗体産生につながるリンパ球細胞のポリクローナル的かつ特異的な活性化を誘導すること；c）工程b）で生じた培養をウイルス抗原に曝露し、それによって抗原−抗体免疫複合体を形成させること；d）複合体の量を先に検出した複合体の第２の量と比較して、工程c）の抗原− 抗体免疫複合体の量を検出すること(この量の増加は被験者の抗体陽転(seroconv ereting)を示す)。１つの実施様態では、定量的(すなわち抗体力価レベル)または定性的な抗体の量は、或る時点と他の時点とを比較して求める。１つの実施様態では、ウイルスからのDNA配列を工程（b）の前に増幅する。他の実施様態では、核酸配列増幅のためにPCRを使う。核酸配列増幅の方法は、当業者には公知である。 HTVのためのプライマー対は、当業界では公知である。例えば、次のものを使うことができる： SK 38/79- （プローブSK19）gag SK 63/69 SK 101/145 pol SK68-/Benvb env B163 env/Benvend env １つの実施様態では、ウイルス酵素は逆転写酵素(RT)である。他の実施様態では、ウイルス酵素はプロテアーゼである。他の実施様態では酵素はインテグラーゼである。他の酵素は当業者に公知である。非経口的に伝達した非Ａ型、非Ｂ型肝炎（PT-NANBH）ウイルスで感染した患者からの血清に免疫反応性のあるこのような抗原と特異的抗体の例は、ペプチドをコードするポリヌクレオチド配列について、該ペプチドを産生する能力のある発現系について、そしてヒト血清におけるPT-NANBH感染を検出するためのペプチドの使用方法について、当業者に公知である。特に、本発明は、HCVゲノムコア、N S4領域、表面結合HCV抗原、409-1-1抗原（409-1-1(abc)、409-1-1(c-a)、および関係する抗原）の使用を意図する。Yoshikura Hiroshi,ら，米国特許第5,552,31 0号Replication of Hepatitis C virus genome and identification of virus h aving high infectivity;Reyes，Gregory,ら，米国特許第5,538,865号、第5,443 ,965号および第5,436,318号Hepatitis C virus epitopes;Resnick,Robert M,ら，米国特許第5,527,669号，Methods，primers and probes for detection of he patitis C and novel variants;ならびにWang,Chang Y.，米国特許第5,436,126 号Synthetic peptides specific for the detection of specific antibodies t o HCV diagnosis of HCV infection。さらなる抗原が当業者には公知である。例えば、次の抗原を使うことができる：SOD/HCVポリペプチドc100-3(363AA);第２ポリペプチド;およびカプソイド・ペプチド(capsoid peptide)。本明細書で定義される「サンプル」は、生物から得られるサンプルのいずれかを意味する。生物学的サンプルの例は、体液および組織検体を含む。サンプルのソースは、血液、血清、血漿、母乳、膿、組織掻取物、洗浄液、尿、およびリンパ節、脾などの組織のような生理学的基質から得ることができる。被験者は哺乳動物、またはさらに特定的にはヒト、ウマ、ブタ、ウサギ、イヌ、ヒツジ、ヤギ、サル、ウシ、ネコ、もしくは、げっ歯類であってよい。好ましい実施様態では、被験者はヒトである。本明細書に定義されているように、「マイトジェン」とは、特定の抗体を分泌または産生させるために、リンパ球を活性化するいずれの物質をも意味する。１つの実施形態では、マイトジェンはアメリカヤマゴボウマイトジェン、レクチン、細菌内毒素、抗原、脂質ＡまたはリンホカインのようなＢ細胞活性化物質である。もう１つの実施形態では、マイトジエンはブドウ球菌(staphylococci)を含む細菌由来の毒素およびブドウ球菌Ａ毒素(30KD毒素)、腸毒素Ａ、Ｂ、C1、C2、Ｄ、Ｅ(黄色ブドウ球菌(staphylococcus aureus)由来)、外毒素Ａ、Ｂ、Ｃおよび表皮剥脱毒素Ａ、Ｂのようなスーパー抗原である。もう１つの実施形態では、マイトジェンはグラム陰性LPS配列である。もう１つの実施形態では、マイトジェンは、例えばトキシックショック症候群毒素TSST-1、ExFT、MAM、Strep M、またはグラム陰性リポ多糖(LPS)配列のような、グラム陰性細菌およびグラム陽性細菌双方由来のペプチドグリカンである。もう１つの実施形態では、マイトジェンは、エプスタイン・バーウイルス(EBV)、レトロウイルス、マウス乳癌ウイルス(MMTV)、ピコルナウイルス(ラット)、コクサッキーウイルス、流行性耳下腺炎ウイルスおよび麻疹ウイルス、ならびにMtvウイルス(1-9、11、13、43)のようなヘルペスウイルスである。もう１つの実施形態においては、マイトジェンは熱ショックタンパク質(HSP)である。もう１つの実施形態では、マイトジェンは、限定されるものではないが：抗CD3抗体、抗TCR(T細胞受容体)、抗IgM、抗IgD、可溶性型または結合型抗CD28を含む抗体である。単独でまたは付加的な因子と共に、IL-4のようなインターロイキン類またはサイトカイン類も加えてよいことが考えられる。もう１つの実施形態では、マイトジェンは、ホルボールミリステートアセテート等のホルボールエステル、カルシウムイオノフォアおよび IL-4と併用されるPMAである。もう１つの実施形態では、PIP₂誘導第２メッセンジャー経路のような、経路において作用する、薬理学的活性化物質(ジアシルグリセロール等)である。もう１つの実施形態では、マイトジェンは、アメリカヤマゴボウマイトジェン(PWM)および、抗原存在下または不在下で類似する作用を有するマイトジェンを含むレクチンである。好ましい実施形態では、アメリカヤマゴボウマイトジェンが使用される。アメリカヤマゴボウマイトジェンには、Ph ylotacca Americana由来の純粋および粗抽出物が含まれる。本明細書において使用されているように、「全血」とは、動物またはヒトから採取された血液を意昧する。全血は、残存する白血球の生存度を維持したまま細胞溶解し得る赤血球を含む。全血は、ヘパリン、EDTA、クエン酸または、血液凝固および血餅形成を妨げる他のいずれの物質を用いて採取することができる。１つの実施形態では、抗原存在下、または抗原不在下でのマイトジェンの至適濃度は、過度の実験を行うことなく、当業者により容易に決定される。好ましいマイトジェンであるアメリカヤマゴボウマイトジェンに関しては、好ましい濃度範囲は、保存PWMの約1:100〜1:1600希釈である。最も好ましい濃度範囲は、保存 PWMの約1:200〜1:1:400希釈である。保存PWMの好ましい供給源はGIBCO,New York ,New York.である。凍結乾燥されたPWMは、5mlの蒸留水で元に戻され、これを保存溶液とする。アメリカヤマゴボウマイトジェン濃度は、約0.025〜50.0μl/mlの範囲でよい。濃度範囲は約0.1〜0.5μl/mlでよい。好ましい濃度は、0.2μl/mlである。マイトジェンがコムギ胚芽凝集素である場合、濃度範囲は約0.1〜2.5μl/mlである。マイトジェンがSac Cowan Iマイトジェンである場合、濃度範囲は1:200〜1:20 00希釈である，本明細書において定義されているように、「培地」とは、限定されるものではないが、ウシ胎児血清を含有または含有しないRPMI 1640(GIBCO,New York,New Y ork)を含む、本発明を行うためにサンプルを維持する目的で使用可能ないずれの培地をも意味し、好ましくは適切な抗生物質およびグルタミンが補われている。本発明の実施に使用してよいその他の培地には、限定されるものではないが、Ea gles、Dubecco's、McCoy's、Media 199、Waymouth's mediaおよび補足剤含有または非含有の血清非含有培地が含まれる。もう１つの実施形態では、マイトジェンには培地を用いない。本明細書に記載される核酸配列は、DNA、RNAまたはcDNAであってよい。種々の長さのPCR産物を提供するために、単一または複数のプライマーセットとポリメラーゼ連鎖反応を用いて増幅を行う。複数のプライマーセットは、PCRによりともに増幅される。それぞれのプライマーセットは、PCRにより別々に増幅される。２つの異なるプライマーセットを用いる場合、本発明は、第１のプライマーセットは、定義された増幅条件下での、核酸への付加化合物の付加に対して本質的に明白であるに十分短い長さの産物を生成し得ることを意図するものである。それは付加化合物の共有結合型付加の効率に関係なく、産物の長さが十分であるため、結果として増幅産物が検出されるであろう。第２のプライマーセットはまた、前記と同じ増幅条件下での、核酸含有抗体の核酸への付加化合物の付加により、完全には阻害されないが、部分的に阻害されるに十分長い長さの産物を生成し得る。これは、付加化合物の共有結合型付加の効率が検出される増幅産物の量に反映されるためであろう。３つの異なるプライマーセットが用いられる場合、本発明は、第１のプライマーセットは、定義された増幅条件下での、核酸への付加化合物の付加に対して本質的に明白であるに十分短い長さの産物を生成し得ることを意図するものである。言い換えれば、付加化合物の共有結合型付加の効率に関係なく、産物の長さが十分であるため、結果として増幅産物が検出されるであろう。第２のプライマーセットはまた、前記と同じ増幅条件下での、核酸含有抗体の核酸への付加化合物の付加により、完全には阻害されないが、部分的に阻害されるに十分長い長さの産物を生成し得る。また、付加化合物の共有結合型付加の効率が、検出される増幅産物の量に反映されるであろう。第３のプライマーセットは、核酸含有抗体の核酸への付加化合物の付加により、完全に阻害されるに十分長い長さの産物を生成し得る。付加化合物の共有結合型付加は、測定可能な増幅産物の完全な不在により反映されるであろう。例えば、増幅後に、PCR反応混合物の一部を分離し、³²P標識アデノシン三リン酸末端標識プローブのような、末端標識ヌクレオチドプローブとのハイブリダイゼーションに供することができる。PCRにおいて、末端標識オリゴヌクレオチドプローブは、溶液中において、増幅された配列の領域へハイブリダイズし、その過程において、特異的エンドヌクレアーゼ部位を再構築する。かくして、増幅された配列と標識プローブのハイブリダイゼーションにより、選択的制限酵素による消化に感受性を有する二本鎖DNAが生成される。エンドヌクレアーゼによる制限の後に、得られたサンプルをポリアクリルアミド上で分析することができ、診断用標識断片を含むゲルの一部分のオートラジオグラムが得られる。オートラジオグラムにおける診断用断片の出現(例えば10〜15塩基長)は、PBMCs中の腫瘍抗原関連抗体ヌクレオチド配列の存在を示す。「PCR」は、１以上の特異的な核酸配列の増幅工程を表し、(1)増幅される配列の末端を決定するオリゴヌクレオチドプライマーが、被検サンプル中の一本鎖核酸とアニーリングし、(2)核酸ポリメラーゼがアニーリングしたプライマーの３ ’末端を伸長させ、プライマーがアニーリングした核酸配列に相補的な核酸鎖を形成し、(3)得られた二本鎖核酸を変性させて、一本鎖核酸を生じさせ、(4)容易に同定でき、定量できる量の、プライマーにより定義される配列を生成するまでプライマーのアニーリング、プライマーの伸長および産物の変性の工程を繰り返す。配列のアニーリング、伸長および変性工程の実際の制御は、通常、反復周期的に反応容器の温度を変化させることにより行われる。アニーリングおよび伸長は、40℃〜80℃の温度範囲が最も好ましく(正確な値は、プライマーの濃度および配列に依存する)、一方、変性には80℃〜100℃の範囲の温度が要求される(正確な値は、標的配列および濃度に依存する)。 PCRによるDNA増幅法は周知であり、米国特許第4,683,195号、同第4,683,202号および同第4,965,188号に記載されており、それぞれ引用により本明細書に組み入れる。本発明により供される利益の理解を容易にするために、PCRの概要を提供する。PCRには、増幅する二本鎖標的核酸配列をハイブリダイズする２つのプライマーが必要である。PCRにおいて、この二本鎖標的配列を変性させ、１つのプライマーが変性した標的のそれぞれの鎖へアニーリングする。互いに離れた部位において、１つのプライマーの伸長産物がその相補体から分離された時、もう一方のプライマーとハイブリダイズできるような方向で、プライマーが標的核酸へアニーリングする。ひとたび所与のプライマーが標的配列へハイブリダイズすれば、そのプライマーは、DNAポリメラーゼの作用により伸長される。次いで伸長産物を標的配列から変性させ、この工程を繰り返す。核酸増幅の交差汚染の影響を最小限にするための１つの特別な方法は、米国特許第5,035,996号に記載されており、これは引用により本明細書に組み入れる。 PCR技術は、血清反応陽性または血清反応陰性の患者が検出可能なレベルの特異的抗体を有しているかどうかの決定に有用である。PCR技術において、特異的腫瘍関連抗体に対するオリゴヌクレオチドプライマーは、患者が癌であることを示す。増幅されるDNA領域の２つの３'境界に相補的に生成された癌抗原関連抗体を合成する。次いで、２つのプライマーを用いてポリメラーゼ連鎖反応を行う。PCR プロトコール：方法と適用の指針[PCR Protocols;A Guide to Methods and Appl ications (1990)Innis,M.,Gelfand D.,Sninsky,J and White,T.,eds.,Academic P ress,San Diego]を参照。PCR増幅に引き続き、腫瘍抗原関連抗体のPCR増幅領域を、前記の３つの特異的核酸プローブとハイブリダイズするそれらの能力について試験することができる。あるいは、腫瘍抗原関連抗体の核酸と前記の核酸プローブとのハイブリダイゼーションを、DNA増幅せずに、本明細書に記載されているストリンジェントなハイブリダイゼーション条件のもと、サザンブロット法により行うことができる。米国特許第5,494,810号Barany,Francisら「ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)」は、向かい合った鎖へハイブリダイズし、標的DNAの目的の領域と隣接する(flank)2つのオリゴヌクレオチドプライマーを用いる、特異的DNA 断片の対数増幅のための特許された工程(米国特許第4,683,202号および同第4,68 3,195号に記載)に言及しており、引用により本明細書に組み入れる。また、以下の米国特許：米国特許第4,459,359号に開示されているそれらのアッセイは、引用により本明細書に組み入れられる。 PCRプライマー配列の選択、PCR試薬および反応混合液の調製、ならびにPCR反応の計画および実施は、PCR技術において周知の手段である。標準的なPCRチューブ内の懸濁細胞に対して核酸増幅を行う場合、細胞は従来のPCR試験サンプルのいずれとも同じように扱う、すなわち、増幅を始める直前に反応混合液に、およそ100〜およそ10⁶の範囲の細胞総数になるよう希釈する。複数のサンプルを異なるチューブで同時に増幅する場合は、交叉汚染を防ぐため、新しいサンプラーチップを用いて各チューブに消費された試薬を加える。すべてのチューブを調製し、封をした後、サーマルサイクラー・マイクロプロセッサの制御下で、およそ10〜40サイクルで、変性、アニーリング、および伸長からなる標準的な３温度の熱サイクルプログラムを行う。また、アニーリングと伸長を、通常、プライマーの鋳型へのストリンジェントなアニーリングのために最適化した単一温度で行う、一連の２温度サイクルがしばしば好ましい。反応速度は、細胞を含まない核酸に比べ、細胞調製物ではいくらか遅いと考えられるので、変性、アニーリング、伸長またはアニーリング-伸長サイクルのセグメントの時間を、試験サンプルが細胞を含まない核酸を含む場合の標準値より数倍長くする必要があろう。この調節は、増幅した核酸の検出の際に見られるシグナル強度を最大にする、または与えられたシグナル強度に達するために必要なサイクル数を最小にする条件を探すことによって容易に行われる。反応混合液のMgCl₂、dNTP 、プライマー、および酵素濃度についても同様の至適化手段を用いることができ、これらのパラメーターはしばしば異なる標的に対しては異なる至適条件を示し、また、固定細胞内で増幅が起こる場合にも影響すると考えられる。 10-300塩基対離れて位置する既知の配列のプライマ一対は、増幅させるDNAのプラスおよびマイナス鎖に相補的であり、周知のオリゴヌクレオチド合成技術により調製できる。プライマーを特異的な抗体の核酸配列へアニーリングさせる場合、各プライマーの一方の末端を伸長、修飾して制限エンドヌクレアーゼ部位を作り出すことができる。PCR反応混合物は特異的な抗体のDNA、DNAプライマー対、４種のデオキシリボヌクレオシド三リン酸、MgCl₂、DNAポリメラーゼ、および通例のバッファーを含んでよい。DNAは多数回のサイクルで増幅させることができる。一般に、多数のサイクルを用いることにより検出の感度を上げることができ、各サイクルは、短時間の高温での特異的抗体DNAの変性、反応混合物の冷却、およびDNAポリメラーゼでの重合からなる。オリゴヌクレオチドプライマーおよびプローブは当業者に公知である。プローブまたはPCRプライマーとして使用するオリゴヌクレオチドは、Needham -VanDevanter[Needham-VanDevanter,D.R.ら,(1984)Nucleic AcidsRes,12:6159-6 168]に記載されているような自動合成装置を用い、BeaucageおよびCarruthers[B eaucage and Carruthers(1981)Tetrahedron Lett.22:1859-1862]により最初に記載された固相ホスホルアミダイトトリエステル法に従って化学的に合成される。オリゴヌクレオチドの精製は、Pearson,J.D.およびRegnier,F.E．[Pearson,J.D. およびRegnier,F.E.,(1983)J．Chrom．255:137-14976]に記載されたように、天然アクリルアミドゲル電気泳か、または陰イオン交換HPLCのいずれかによる。合成オリゴヌクレオチドの配列は、Maxam，A.M.およびGilbert，W[Maxam，A.M.およびGilbert，W．Methods in Enzymology(1980)Grossman,L.およびMoldave，D. 編,Academic Press,New York，65:499-560]の化学分解法を用いて変更可能である。Tavernarakis,N.,米国特許5,569,582号は、腫瘍抗原関連抗体核酸の増幅および検出に関し、引用により本明細書に組み入れる。本発明は、抗腫瘍抗原関連抗体の核酸配列の増幅およびそれに次ぐ検出により、癌を有する被験者の診断に適用可能である。「増幅」とは、鋳型特異性を含む特殊な場合の核酸の複製である。これは非特異的鋳型複製（すなわち、鋳型に依存するが、特異的鋳型に依存するわけではない複製）と対比される。ここでは、鋳型特異性は複製の忠実度（すなわち、適切なポリヌクレオチド配列の合成）やヌクレオチド（リボまたはデオキシリボ）特異性からは区別される。鋳型特異性は「標的」特異性という言葉で記載されることが多い。標的配列は、他の非標的核酸配列の存在下で優先的に増幅または検出されることが求められるという意味において「標的」である。増幅技術はもともと、特異的標的配列の検出のために設計されたものである。ほとんどの増幅技術で鋳型特異性は酵素の選択により達成される。増幅酵素とは、それらが使用される条件の下で、不均一な核酸混合物中の特異的な核酸配列だけを処理する。 T4 DNAリガーゼの場合、この酵素は、連結反応部分においてオリゴヌクレオチド基質と鋳型の間に誤対合があるときは、２つのオリゴヌクレオチドを連結しない。D.Y.WuおよびR.B.Wallace,Genomics 4:560(1980)。最後に、Taqポリメラーゼは、その高温での作用力により、プライマーが結合し、かくしてプライマーにより定義された配列に対して高い特異性を示し；高温のため、プライマーが特異的標的配列と好もしくハイブリダイズし、かつ、非標的配列とはハイブリダイズしないという熱力学条件がもたらされる。R.K.Saiki，PCR Technology，P rinciples and Applications for DNA Amplification(H.A．Erlich編)，7-16頁( 1989)。増幅技術には、標的を増幅し、次いで検出するというアプローチを取るものもあり、標的を検出し、次いでプローブを増幅するアプローチを取るものもある。アプローチに関わらず、高い効率で起こるよう、核酸を含有するサンプルが増幅に対する阻害剤を含んではならない増幅「試薬」とは、増幅に必要な、核酸および増幅酵素以外の試薬（プライマー、デオキシリボヌクレオチド三リン酸など）と定義される。典型的には、増幅試薬は他の反応成分とともに置かれ、反応容器（試験管、マイクロウェルなど）内に含まれる。好ましい溶解剤としては、プロテアーゼＫがある。プロテアーゼＫはTritirac hium album由来のタンパク質分解酵素である。これは有意なDNase活性を持たず、ゆえに、核酸を分解して増幅を妨げないので、本発明では特に有用である。またこの酵素は安価であり、市販されている（例えば、Sigma,St.Louis,Mo.,U.S.A .,カタログ番号p4914「プロテイナーゼＫ」）ので魅力がある。プロテアーゼＫを用いる種々の処理条件が有用であることがわかっている。細胞および腫瘍抗原関連抗体を完全に分解するためには、高濃度のプロテアーゼＫ(例えば、1.5-2.5mg /ml)を短いインキュベーション時間(5-10分）で用いることが好ましい。より低い濃度のプロテアーゼＫ(例えば、0.5mg/ml)を用いると、同じ効果を達成するにはより長いインキュベーション時間が必要となる(30-60分)。加熱による溶解をはじめとする他の溶解アプローチも考えられる。 PCRにより増幅された核酸の「検出」とは、PCR反応物から識別されるようなPC Rの増幅産物と特異的に関連していると推定される分析シグナルを観察する、位置決定する、または定量するプロセスをいう。分析シグナルは可視もしくは紫外吸収、または蛍光、化学発光、または吸収、蛍光、化学発光、もしくは電離放射線の写真もしくは、オートラジオグラフ画像から得られる。In situでのP CR産物の検出は、このようなシグナルの顕微鏡観察または記録を含む。このシグナルはPCRプライマーもしくはdNTPに、または核酸プローブに結合した分子「タグ」から直接または間接的に得られ、このようなタグは放射活性原子、発色団、蛍光団、化学発光試薬、発色、蛍光もしくは化学発光生成物を生成できる酵素、または分析シグナルを直接有するか、もしくは触媒により生成する他の配列もしくは粒子と反応できる結合部分であってよい。一般的な結合部分としては、ストレプトアビジンまたはアビジンと強く結合するビオチン、または抗ジゴキシゲニン抗体と強く結合するジゴキシゲニン、および抗フルオレセイン抗体と強く結合するフルオレセインがある。アビジン、ストレプトアビジンおよび抗体は、発色団、蛍光団、放射活性原子、および発色、蛍光または化学発光シグナルを生成できる酵素と容易に結合する。 RNAは多数の方法のいずれによって調製してもよく；その選択はサンプルの供給源および有効性による。RNAの調製方法は、Davisら,1986,Basic Methods in M olecular Biology，Elsevier，NY，第11章;Ausubelら,1987，Current Protocols in Molecular Biology，第４章，John WileyおよびSons，NY;KawasakiおよびWa ng，1989，PCR Technology，Erlich編，Stockton Press NY;Kawasaki，1990，PC R Protocols;A Guide to Methods and Applications，Innisら編，Academic Pre ss,San Diego;ならびにWangおよびMark，1990，PCR Protocols;A Guide to Meth ods and Applications，Innisら編,Academic Press，San Diegoに記載されており、これらはすべて参照により本明細書に組み入れる。前記のように、特異的な腫瘍抗原と関連した抗体核酸と特異的にハイブリダイズ可能であるプローブは、癌を有する被験者の指標となる。このような「特異的ハイブリダイゼーション」は、プローブが、サンプル中に存在する他の核酸（例えば、動物細胞または他の細菌の核酸）とはハイブリダイズしない条件の下で、検出可能なシグナルによって証明されたように、該プローブが標的核酸とハイブリダイズする場合に起こる。プローブの長さおよび塩基組成、プローブと標的核酸の間でミスマッチしている塩基の範囲、塩および有機溶媒の有無、プローブ濃度、ならびに温度をはじめとする種々の因子がハイブリダイゼーションに影響を及ぼし、ハイブリダイゼーションの至適条件ばしばしば経験的に決定しなければならない。核酸プローブの設計およびアニーリング条件に関する考察としては、例えば、Ausubel,F.ら,Methods in Enzymology[Methods i n Enxymology 第152巻，(1987)Berger，S.およびKimmel，A.編，Academic Press ，New York]またはHybridization with Nucleic Acid Probesを参照し、これらはすべて参照により本明細書に組み入れる。高いストリンジェントのハイブリダイゼーション条件は、規定されたイオン強度およびpHで、特異的配列の熱融解点(Tm)より約５℃低い温度で選択される。Tm とは、標的配列の50％が、完全にマッチしたプローブとハイブリダイズする温度（規定されたイオン強度およびpHの下）である。典型的には、ストリンジェントな条件とは、pH7で塩濃度が少なくとも約0.02モル、かつ、温度が少なくとも約6 0℃というものである。その他のうち、相補鎖の塩基組成および大きさ、有機溶媒の有無、すなわち塩またはホルムアミドの濃度、ならびに塩基のミスマッチの範囲をはじめとする他の因子もハイブリダイゼーションのストリンジェンシーに有意に影響を及ぼすので、これらのパラメーターの組み合わせが、互いの絶対測定値(absolute measure)よりも重要である。例えば、高いストリンジェンシーは、例えば6xSSC溶液中、約68℃で一晩ハイブリダイズし、室温にて6xSSC溶液で洗浄し、次いで6xSSC含有0.6xSSX溶液中、約68℃で洗浄することにより達成してもよい。中程度のストリンジェンシーでのハイブリダイゼーションは、例えば、1)3x塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウム(SSC)、50％ホルムアミド、0.1Mトリスバッファー(pH7.5)、5xデンハート溶液からなる溶液でフィルタープレハイブリダイゼーションおよびハイブリダイゼーションを行い；2)37℃にて４時間プレハイブリダイゼーションを行い；3)37℃にて,3,000,000cpmと等量の標識プローブと計1 6時間ハイブリダイズし；4)2xSSCおよび0.1％SDS溶液中で洗浄し；5)室温で各１分間４回、60℃にて各30分間４回洗浄し；次いで6)乾燥し、フィルムに露光することにより達成してもよい。「選択的にハイブリダイズする」とは、全細胞DNAまたはRNAの調製物中に標的配列が存在する場合に、特定の標的DNAまたはRNA配列とのみハイブリダイズする、二重らせんを形成する、または結合する核酸プローブに対していう。選択的にハイブリダイズするとは、プローブが、高いストリンジェンシーのハイブリダイゼーション条件下で、非標的配列とは異なる様式で検出可能な様式で与えられた標的と結合することを意味する。「相補的」または「標的」核酸配列とは、核酸プローブと選択的にハイブリダイズする核酸配列をいう。適切なアニーリング条件は、例えば、プローブの長さ、塩基組成、ならびにミスマッチの数およびプローブ上のそれらの位置に依存し、それらはしばしば経験的に決定しなければならない。核酸プローブの設計およびアニーリング条件に関する考察としては、例えば、Sambrookら，[Sambrookら，(1989)Molecular Cloning:A LaboratoryMan ual( 第２版) ,Cold Spring Harbor Laboratory，第1-3巻]またはAusubel,F.ら,[A usubel，F.ら,(1987)Current Protocols in Moleculer Biology,New York]を参照。腫瘍抗原関連抗体のDNAまたはmRNAは、サザンブロッティング、一本鎖高次構造多型ゲル電気泳動(SSCP)、PCRもしくは他のDNAに基づく技術により、またはRN A種についてはノーザンブロッティング、PCRもしくは他のRNAに基づく技術により検出し得る。本明細書で定義したように、核酸プローブはDNAまたはRNA断片であってもよい。DNA断片は、例えば、プラスミドDNAを消化することによって、もしくはPCRの使用によって調製してもよいし、または、双方とも参照により本明細書に組み入れるBeaucageおよびCarruthersによって記載されたホスホルアミダイト法か、もしくはMatteucciら,[Matteucciら(1981)Am ．Chem．Soc．103:3185]に従ったトリエステル法のいずれかにより合成してもよい。次いで所望により、適当な条件の下で一緒に化学合成した一本鎖をアニーリングすることにより、または適当なプライマー配列とともにDNAポリメラーゼを用いて相補鎖を合成することにより二本鎖断片を得てもよい。核酸プローブに対して特異的な抗体が与えられた場合、相補鎖もまた同定され、包含されると理解される。相補鎖は、標的が二本鎖の核酸である状況下で十分同等に働くと考えられる。また、特異的な配列が核プローブの使用のために同定される場合、一覧化された25塩基対以上の長さの配列の部分配列もプローブとしての使用のために包含されるということも理解される。抗体またはDNA配列は、限定されるものではないが、放射活性標識、または比色、発光、もしくは蛍光マーカー、または金をはじめとする検出可能なマーカーで標識してもよい。放射活性標識としては、限定されるものではないが、³H、¹⁴ C、³²P、³³P、³⁵S、³⁶Cl、⁵¹Cr、⁵⁷Co、⁵⁹Co、⁵⁹Fe、⁹⁰Y、¹²⁵I、¹³¹I、および¹ ⁸⁶ Reが挙げられる。蛍光マーカーとしては、限定されるものではないが、フルオレセイン、ローダミン、およびオーラミンが挙げられる。比色マーカーとしては、限定されるものではないが、ビオチンおよびジゴキシゲニンが挙げられる。ポリクローナルまたはモノクローナル抗体を産生する方法は当業者には公知である。さらに、抗体または核酸配列複合体は、アルカリホスファターゼまたは西洋ワサビペルオキシダーゼなどの酵素と結合させ得る二次抗体によって検出してもよい。使用してもよい他の酵素は、当業者には十分に公知である。また、腫瘍抗原もしくは抗体は、当技術分野で公知の技術を用い、蛍光標識、酵素標識、フリーラジカル標識、またはバクテリオファージ標識を用いて標識してもよい。典型的な蛍光標識としては、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、フィコエリトリン、フィコシアニン、アロフィコシアニンおよびテキサスレッドが挙げられる。特異的酵素は共有結合により他の配列と結合し得るので、それらをトレーサー物質の製造のための標識として使用できる可能性もある。適切な酵素としては、アルカリホスファターゼ、β-ガラクトシダーゼ、グルコース-6-リン酸デヒドロゲナーゼ、リンゴ酸デヒドロゲナーゼおよびペルオキシダーゼが挙げられる。酵素のイムノアッセイのタイプとしては、固相酵素免疫検定法(ELISA)、ELISPOTおよび均一系酵素イムノアッセイがあり、エンザイム・マルチプライド・イムノアツセイ(enzyme-multiplied immunoassay)(EMIT．Syva Corporation，Palo Alto ，CA)としても知られている。ELISA系では、分離は、例えば固相に結合させた抗体の使用によって達成してもよい。EMIT系は、トレーサー-抗体複合体中の酵素の失活に依存し；従ってこの活性を分離工程を必要とせずに測定することができる。加えて、化学発光化合物を標識として用いてもよい。典型的な化学発光化合物としては、ルミノール、イソルミノール、芳香族アクリジニウムエステル、イミダゾール、アクリジニウム塩およびシュウ酸エステルが挙げられる。同様に、生物発光化合物を標識として利用してもよく、生物発光化合物としては、ルシフェリン、ルシフェラーゼおよびエクオリンがある。ひと度標識すると、その抗体は、当技術分野で十分公知の技術を用いて、免疫対照物（抗体または腫瘍抗原性ポリペプチド）を同定および定量するために使用し得る。抗体としては、限定されるものではないが、IgGおよびサブセットであるIgA、IgE、IgM、IgDが挙げられる。「腫瘍抗原関連抗体と特異的に結合する」または「特異的に免疫反応する」とは、腫瘍抗原関連抗体についていう場合、腫瘍抗原関連抗体の有無が決定できる結合反応をいう。このように、示されたイムノアッセイ条件下で、明示された腫瘍抗原関連抗体は、腫瘍抗原関連抗体と結合するが、そのサンプル中に存在する他の抗体とは有意な量では結合しない。このような条件の下では、腫瘍抗原関連抗体に対する特異的な結合には、特定のタンパク質に対するその特異性に関して選択された腫瘍抗原が必要とされる。特定のタンパク質と特異的に免疫反応する特異的な抗体を選択するためには、種々のイムノアッセイ様式を用いてよい。例えば、タンパク質と特異的に免疫反応するモノクローナル抗体を選択するには、固相ELISAイムノアッセイが慣例的に用いられる。特異的な免疫反応性を決定する使用できるイムノアッセイ様式および条件に関しては、HarlowおよびLane[HarlowおよびLane，(1988)Antibodies, A Laborary Manual ,Cold,Spring Harbor Publicetion New York]を参照。ラジオイムノアッセイ(RIA)についての記載は、Laboratory Techniques in Bi ochemistry and Molecular Biology[Laboratory Techniques in Binchemistry a nd Molecular Biology (1978)North Holland Publishing Company,New York]中の特にChard,T.による"An Introduction to Radioimmune Assay and Related Tech niques"と題された章に関して見出され、これは参照により本明細書に組み入れる。種々のタイプの一般的なイムノメトリックアッセイの記載は、以下の米国特許第4,376,110号(Davidら）または同第4,098,876号(Piasio)および同第4,870,003 号(Kortright)に見出すことができ、これらは参照により本明細書に組み入れる。生物学的サンプルの腫瘍抗原関連抗体の存在を検出する、または定量するためには、この抗原-抗体複合体の有無または濃度を測定する。ペプチド配列に対するリガンドは、金属イオン（鉄または亜鉛他）などの特異的な物質を腫瘍内に運び、かくして、腫瘍に対して、有毒物質（放射活性または細胞傷害性の化学物質、すなわち、リシンまたは細胞傷害性アルキル化剤または細胞傷害性プロドラッグ）を送達する手段として機能する。抗体と毒素または放射性同位元素との結合は化学的なものであってよい。直接結合する毒素の例としては、ドキソルビシン、クロラムブシル、リシン、シュードモナス菌外毒素などが挙げられ、あるいは半分はペプチドに対する特異性を有し、かつ、他の半分は毒素に関する特異性を有するようにハイブリッド毒素を作製することができる。このような二価分子は、腫瘍に結合し、他の半分は腫瘍に細胞傷害性を送達するか、または細胞傷害性リンパ球に結合し、これを活性化させるように機能する( 例えば、T₁-T₃受容体複合体との結合)。また、求められる特異性を有する抗体は、Ｔ細胞受容体(TcR)の免疫グロブリンドメインを置換し；望ましいMab重鎖および軽鎖中にクローン化し；αおよびβ TCR鎖の定常領域を有するU_hおよびU_L遺伝子セグメントをスプライシングし、次いでこれらキメラAb/TcR遺伝子を患者のＴ細胞にトランスフェクトし、これらハイブリッド細胞を増殖させ、次いでそれらを患者に注入することにより、Ｔ細胞中にクローン化できる。標的に対して組織特異的な抗原およびこのような標的に対して特異的なMabの作製に関する特殊な知見は、これを使用可能なアプローチとする助けとなろう。 TGF-α由来のcDNAとシュードモナス外毒素の有毒部分とを有し、このためハイブリッドのTGF部分が上皮増殖因子受容体(EGFR)と結合し、シュードモナス部分が細胞に酵素的に取り込まれ、次いでタンパク質合成を行うリボソームの能力を活性化させて細胞死を起こす、遺伝子組換え体TP-40などの有毒な遺伝子キメラを作製することができる。抗体(またはリガンド)の腫瘍抗原との反応の検出は、当技術分野で公知の方法により検出可能な部分で標識した抗体またはリガンドの使用により容易にすることができる。このような検出可能な部分により、沈殿もしくは変色の視覚的検出、顕微鏡による視覚的検出、または分光測定もしくは放射性測定などによる自動化検出を可能にする。検出可能な部分の例としては、フルオレセインおよびローダミン(蛍光顕微鏡用)、西洋ワサビペルオキシダーゼ(光学顕微鏡または電子顕微鏡のいずれかおよび生化学的検出用)、ビオチン-ストレプトアビジン（光学または電子顕微鏡用）およびアルカリホスファターゼ（変色による生化学的検出用）が挙げられる。使用する検出方法および検出部分は、例えば、前記リストまたは他の適切な例から、かかる選択に適用される標準的な基準により選択できる(H arlowおよびLane,Antibodies:A laboratory Manual，Cold Spring Harbor Labor atory,Cold Spring Harbor,N.Y.,1988)。免疫蛍光アッセイ(IFA)、光分析アッセイ、固相酵素免疫検定法(ELISA)、ELIS POTおよびイムノブロッティングなどの酵素イムノアッセイを適用して、容易に特異的な抗体の検出を達成することができる。腫瘍抗原関連抗体の検出に有効な ELISA法は例えば以下のようであってよい：(1)腫瘍抗原を基質に結合させ；(2) 結合した腫瘍抗原を、抗体を含有する培養前後の体液、または培養前後の組織サンプルもしくはリンパ球などの生物学的サンプルと接触させ；(3)前記を検出可能な部分（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ酵素またはアルカリホスファターゼ酵素）と結合した二次抗体と接触させ；(4)前記を酵素に対する基質と接触させ；(5)前記を呈色試薬と接触させ；(6)色の変化を観察する。腫瘍抗原を標識する場合、標識としては、放射性同位元素、蛍光団、酵素、発色剤または粒子がある。これらおよび他の標識は当技術分野で十分公知であり、例えば以下の米国特許第3,766,162号、同第3,791,932号、同第3,817,837号、同第3,996,345号および同第4,233,402号に記載されている。細胞系由来の腫瘍抗原関連抗体を使用するアッセイは、不均一（すなわち分離工程を必要とする）であっても、均一であってもよい。アッセイが不均一である場合には、遠心分離、濾過、クロマトグラフィーまたは磁気学をはじめとする種々の分離手段が使用できる。また、使用可能な他の検出系には、ブドウ球菌(Staphylococcusaureus)Cowan Ｉ系統由来のプロテインＡ、ブドウ球菌エスピー．Ｃ群(26RP66系統）由来のプロテインＧに基づくもの、またはビオチン-アビジン結合反応の使用を用いる系がある。抗体の存在の免疫酵素検出の別法としては、ウエスタンブロットがある。腫瘍抗原は電気泳動により分離しニトロセルロース膜または他の適切な支持体に転移させる。次いで試験する体液をこの膜と接触させ、生じた免疫複合体の存在を、既に記載した方法により検出する。この方法に対する変法では、精製した腫瘍抗原関連抗体を膜上にライン状、またはスポット状に塗布して結合させる。次いで、この膜を試験すべき培養前後の体液と接触させ、前記した技術を用いて生じた免疫複合体を検出する。また、培養前後の体液中の特異的な抗体の存在は、凝集によって検出してもよい。本発明に従い記載された腫瘍抗原関連抗体の溶解物、腫瘍抗原または精製組成物は、例えば均一な懸濁液を形成するラテックス粒子を被覆するのに用いる。ラテックス粒子は、存在する抗体に対して特異的な抗原を含有する血清と混合した場合、凝集を引き起こし、大きな凝集塊が視覚的に検出できる。また、腫瘍抗原の特異的抗体と反応する腫瘍抗原関連抗体は、種々のイムノアッセイ法によっても測定できる。イムノアッセイ技術による抗体の測定に適用可能な免疫学的方法およびイムノアッセイ法に関する概説としては、Basic and Cl inical Immunology第７版[Basic and Clinical Immunology第７版D.Stites and A.Terr編]。血球凝集反応阻害(HI)および補体結合(CF)は、抗体の存在に関して試験することにより腫瘍抗原関連抗体を検出するのに使用可能な２つの実験室的試験である。当業者ならば、被験者を診断するために適切なDNAサンプルを得ることができる。前記の方法により得られたDNAサンプルを制限酵素により切断すればよい。D NAの切断のための制限酵素の使用、およびこのような切断を行う条件は当技術分野で十分公知である。前記の方法では、ポリアクリルアミドゲルにより達成されるサイズ分画を使用してもよい。１つの実施形態では、このサイズ分画はアガロースゲルによって達成される。さらに、ハイブリダイゼーション工程の前に固相マトリックスへの DNA断片の転移を用いてもよい。このような固相マトリックスの一例には、ニトロセルロースペーパーがある。同様に、RNAまたは逆転写酵素PCRのサンプル中のメッセージを検出するのにノーザントランスファーを使用してよく、cDNAは前記の方法により検出できる。この手法もまた当業者に公知である。腫瘍抗原関連抗体の感染、または曝露の結果として産生された特異的抗体の存在を決定する代替手段としては、in situハイブリダイゼーション、またはより最近のものとしてはin situポリメラーゼ連鎖反応がある。in situ PCRはNeuvo ら[Neuvoら，(1993)American Journal of Surgical Pathology 17(7),683-690] 、ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)により増幅した腫瘍抗原cDNAの細胞内局在化；Bag asraら[Bagasraら(1992)J.New England Journal of Medicine 326(21):1385-139 1]、in situポリメラーゼ連鎖反応による腫瘍抗原の検出；およびHenifordら[He nifordら(1993)Nucleic Acids Research 21(14):3159-3166]、in situ逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応により示された細胞質EGF受容体mRNA発現における変異、に記載されている。in situハイブリダイゼーションアッセイは十分公知であり、参照により本明細書に組み入れるMethods Enzymol．に概説されている。in situハイブリダイゼーションでは、細胞を固相支持体、典型的にはスライドガラスに固定する。次いで、この細胞を、標識された標的特異的プローブのアニーリングが可能な中程度の温度でハイブリダイゼーション溶液と接触させる。プローブは放射性同位元素または蛍光リポーターで標識することが好ましい。前記のプローブはまた、種々の生物学的組織において、in situハイブリダイゼーション、すなわち、この遺伝子を発現する組織の位置決定を行うために、またはこの遺伝子もしくはそのmRNAの存在に関しての他のハイブリダイゼーションアッセイのために有用である。in situハイブリダイゼーションは、腫瘍抗原の発現によらない、または天然、対変性条件に関わらない鋭敏な位置決定法である。オリゴヌクレオチドは、ターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼを用い、１ｘ10¹⁰dpm/ugの範囲の特異的活性に対し、[α-³⁵S]dATPで3'末端標識する。組み込まれていない標識ヌクレオチドは、Sephadex G-25カラムを通しての遠心分離により、またはWaters Sep PakC-18カラムからの溶出によりオリゴプローブから除去する。プローブは、サンプルが標的腫瘍抗原関連抗体と動物細胞（例えば神経細胞）の双方を含む、本発明のプロトコールに従って処理されたサンプルに該プローブがハイブリダイズすることにより、その標的核酸と特異的にハイブリダイズすることができると証明できる。プローブの特徴的なシグナルが、サンプル中の腫瘍抗原関連抗体DNAと関連しており、かつ、サンプル中の宿主細胞および非生物学的材料（例えば基質）のDNAとは概して関連していないならば、該プローブは特異的である。以下のストリンジェントなハイブリダイゼーションおよび洗浄条件で、非特異的なプローブと特異的プローブ（例えば蛍光標識したDNAプローブ）とを十分識別される：変性プローブ、50％ホルムアミド、2X SSCおよび0.1％(w/v)硫酸デキストランを含有する溶液中で37℃にて12時間、サンプルとともにプローブをインキュベートし、次いで、1X SSC中で70℃にて５分間；2X SSC中で37℃にて５分間；0.2X SSC中で室温にて５分間；さらに水中で室温にて５分間洗浄する。当業者ならば、核酸ハイブリダイゼーション（すなわちin situサザンその他）においては、ハイブリダイゼーション溶液または洗浄液に界面活性剤(例えばドデシル硫酸ナトリウム)、キレート剤(例えばEDTA）、その他試薬（例えばバッファー、デンハート溶液、硫酸デキストラン）を含むことがしばしば有利であることに気付くであろう。プローブが腫瘍抗原関連抗体の核酸に特異的であるかどうかを決定する簡便な方法は、１以上の腫瘍抗原関連抗体から調製したDNAを用いるサザンブロット（またはドットブロット）を使用するものであることは、当業者には明白であろう。便宜には、標的特異的なプローブを同定するため、腫瘍抗原関連抗体からDNA を単離する。試験DNAを固相（例えば電荷ナイロン）マトリックスに転移させる。プローブは従来法に従い標識する。当技術分野で公知の変性および／またはプレハイブリダイゼーション工程の後、ストリンジェントな条件の下で、プローブを固定化したDNAにハイブリダイズさせる。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件は、使用するプローブに依存し、算出したハイブリダイゼーションプローブのT_m（融解温度）から評価できる(T_mの算出に関する記載としては例えば、Sambrookを参照)。放射活性標識したDNAまたはRNAプローブに関してのストリンジェントなハイブリダイゼーション条件の例としては、変性プローブおよび5x SSCを含有する溶液中で、65℃にて8-24時間のハイブリダイゼーション、次いで、0.1x SSC、0.1％ SDS（ドデジル硫酸ナトリウム）中、50-60℃の洗浄というものである。一般に、温度および塩濃度は、ハイブリダイゼーション後の洗浄を、ハイブリッドのT_mより約５℃低い温度で行うよう選択する。このように特定の塩濃度に対して温度は T_mより約５℃低い温度を選択し、または逆に、特定の温度に対して塩濃度は、ハイブリッドのT_mが洗浄温度より５℃高くなるように選択する。ストリンジエントなハイブリダイゼーションおよび洗浄の後、適当な標的と会合したシグナルの存在および非標的核酸からのシグナルの不在により証明されるように、腫瘍抗原関連抗体とハイブリダイズするプローブが同定される。さらに、プローブ特異性をを決定する際、また腫瘍抗原関連抗体を検出するために本発明の方法を用いる際には、ある量のバックグランドシグナルが典型的に存在し、当業者により特異的シグナルから容易に識別できることが認識される。バックグランドの２倍のシグナルが許容される。以下の実験詳細の節で本発明をさらに説明する。この節は本発明の理解を助けるために示され、以下の請求の範囲で示すように、本発明を限定することを意図したものではなく、また限定するものと解釈すべきではない。試験詳細：実施例１：卵巣癌および乳癌の早期発見方法および物質：乳癌腫瘍から摘出した抗体は癌細胞に結合され、ムチン、特にMuc-1分子に結合することが示されている。さらなる解析により、この抗体はムチン-1のタンパク質コア／主鎖と結合することが示された。遺伝突然変異はムチン-1のタンパク質鎖には見られない。正常タンパク質（非突然変異の）の異種抗原としての作用は、タンパク質コアの脱グリコシル化が起因すると考えられた。タンパク質コアの脱グリコシル化が、ムチン-1が異種抗原として認識される原因であると考えられる。ペプチドP1-P3は、数種の形態を有し乳癌および卵巣癌に共通のムチン-1 の縦列反復の主要抗原決定基エピトープを覆うよう設計された。用いられてきたペプチドは、MUC-1の縦列反復から誘導された。 OC-P1=SGSGHGVTSAPDTR-NH₂,（配列番号１） OC-P2=SGSGAPDTRPAPGSTAP-NH₂,（配列番号２） OC-P3=IISAVVGIL-NH₂,（配列番号３）最初の２種は水に可溶性であり、最後のものは非常に疎水性が大きく、それを溶解させるのに非常に低いpHを必要とする。最初の２種はそれらのAc側（技術的根拠）のビオチンに結合し、３番目のものは結合していなかった。OC-P1およびO C-P2の純度レベルは95％より高い。OC-P3はわずか〜60％純度である。結果：予備データを採取した群は、推測されたOCにより手術を受けた15人の女性を含んだ。対照サンプル(n=21)は血液提供サービスから入手可能であった。6-7日間のリンパ球の培養に引き続いて、抗体を血清(IBT_S)および上清(IBT_C)の双方で探索した。用いた３種のペプチドは公開されたMUC-1およびHER-2neuの配列に基づいて設計した。表１で示されるように、組織病理学的結論に基づいて、11/15は悪性であるとわかった。対照は、血清において、またはin vitro培養後、３種のペプチドのいずれに対しても反応が全くない。IBT_SおよびIBT_Cは、10/11の場合において、少なくとも１つのペプチドに対して反応性を示した。アッセイを組合せた場合、11 /11(100％）は抗体陽性であった。総ての４の良性の場合では、IBT_S陽性であったが、１サンプルのみIBT_Cを用いて、(弱く)陽性であった。検査された個体数が大規模な統計上の分析および予測に対して少なすぎたにもかかわらず、データは両アッセイを用いることにより、OCに対してハイリスクの個体群において試験するのに都合がよく、かつ実用的な手段を提供し、あらゆる腫瘍がペプチド特異的な抗体によって確認され得ることを示すと考えられる。10/11が悪性の場合においてそうであったのと同様に、1/4の良性の場合のみIBT_C陽性であったという事実により、IBT_Cが良性か悪性の場合の識別を助けるであろうことを示すことができた。表1.診断グレード評価による新しいIBTの診断値血液サンプルは推測されたOCにより手術を受けた患者、および健康な血液供与者から採取した。組織病理学的結論に基づいて、グレード評価を行った。考察：（抗体の）免疫応答試験は抗原特異的である。スクリーン用に選択された抗原は、癌またはいずれの特異的な癌（この場合では***）の試験の特異性をも決定する。卵巣癌と乳癌の交差反応性があること、およびMUC-1のような数種の抗原が双方の検出に使用できることが可能であることが、繰り返して示されてきた。交差反応性は、双方の癌が同一のホルモンによるホルモン感受性であるという事実に起因すると考えられる。癌抗原の他の例は乳癌のHERneu2を含む。BC（例えば家族性BCにおいて）に対してハイリスクな女性は、HERneu2に対する抗体での徴候が、マンモグラフィーおよび／または手による身体の診察による発見より先に起こるということを、長期的なの研究によって示すことができる。実施例２：本発明は免疫系により被験者の腫瘍の簡単かつ早期の初期スクリーニングまたは発見を提供する。腫瘍が成長するにつれて、免疫系への抑制効果はより強くなり、かくして抗体の能動分泌は非常に低くまたかろうじて検出可能でさえあると考えられる。本発明は、抗体の産生がin vivoで抑制されても、腫瘍特異的抗体の検出を可能にする免疫系の体液性アームの可能性を明らかにするものである。従って、警告シグナルとして作用する。方法：血液および組織サンプル（腫瘍）は同意の上、卵巣癌患者から採取した。その患者はすべて手術を受けた女性であった。そこで適切な嚢胞性液を採取した。全血、分離血漿およびPBMCを研究に用いた。細胞を4-6日間RPMI完全培地および1200アメリカヤマゴボウマイトジェン(PWM)とともに37 C CO2培養器で培地に入れた。サンプルを後に、標準ペプチドELISA(1μg/ウエルペプチド、BSAにより阻止された)を用いて抗ペプチドの抗体を試験した。結果：結果はELISAのO.D.読み取り値として記載する。各マークまたは文字（h=健康またはc=癌）は試験した１サンプルである。統計上の分析は95％信頼区間に基づいている。図１：P3-1次元分析 O.D.のサンプルの分類をするとc=癌、h=健康の２群となる。示されるように、癌患者の間で、ペプチドに対してより高く、より特異的な感受性の傾向がある。しかしながら、１次元分析は、このサイズのサンプルで癌を有している患者の指標として十分であるようには思えない。図２：P3およびP2-2次元分析両ペプチドの１試験。コンピユータは正常（＝健康）サンプルを作り上げることができた(x:.5;y:.52)(0.6-0.65O.D.の範囲にある3-5の公知な高い陽性の対照を0.25-0.3O.D.の範囲にある3-5の公知な陰性サンプルの対照と共に試験した、それは図２には示されていない)。そうすることにより、非常にわずかな癌サンプルだけが正常であると考えられ逆も成り立つ。図3A-3B：P2、P1およびP3-2次元分析研究されたサンプルを各々100以下のグループで実施した。２つの異なるペプチドELISAの２次元分析を同一のサンプル組で実施した。p2およびp3の図3A、ならびにp1およびp3の図3Bは、明確な境界線でh=健康患者とc=癌患者とを分けることを示す。境界線の右方の忠者はその中に免疫学的な側面により卵巣癌または乳癌の徴候を示す人である。一方、境界線の左方の患者は患者が健康であることを示す。p2およびp3、またはp1およびp3間のO.D.読み取り値の比率が診断を決定する。表2. ３次元線形分類の結果表２は組合せた３種のペプチドの線形分類を示す。示されるように、統計上の計算の両方法を用いる高い分解能がある。実施例３：前立腺癌の早期発見前立腺特異的腫瘍抗原(PSA)は、腫瘍増殖により著しく増加する。正常レベルでの血清のPSAおよび腫瘍によりまたはそれが原因で産生されたPSA間の腫瘍抗原的／腫瘍抗原差があるかどうかは明確ではない。（乳癌のMUC-1のような）他の例に基づいて、かかる差があるであろう。それゆえ、それが前立腺癌患者の血清からのPSA追跡治療に役立つであろう抗体の検出は、腫瘍抗原ペプチド／セグメントがそれを、または腫瘍の細胞系からの細胞を形成するよう使用されると考えられる。新規な培養方法からの血清および上清をPSA特異的反応性に関して試験をする。数人の患者の血清では、正常な対照の個体群より高い抗体レベルがあるが、それらのはるかに高い割合が培養液中に抗PSA抗体を有するであろうことが推測される。これらの腫瘍抗原が、細胞膜の発現に関する限りRNAウイルスについてより一般的に見つけられても、ウイルスはウイルス(DNAおよびRNAの両方のウイルス)を誘導する腫瘍から腫瘍抗原をコードしていた。例えばウイルスエンベロープ糖タンパク質からのgp70（化学的に誘導された腫瘍でも見つけられる）。精製されたgp70は腫瘍抗原として（または定義されたペプチド／セグメントがそれを生成するように、または感染した細胞がそれを発現するように）用いられる。新規方法の培養血清および上清をgp70特異的反応性に関して試験をする。数人の患者の血清では、正常な対照の個体群より高い抗体レベルがあるが、それらのはるかに高い割合が培養液中に抗gp70抗体を有するであろうことが推測される。実施例４：多様な腫瘍抗原アッセイ（数種の担体のタイプの）腫瘍抗原は培養（血液培養）のインキュベーション期間の間、試験管内にある。腫瘍抗原の存在はおもに、「検出剤」および「結合剤」（リガンド用の）として、培養液に存在する（また産生される）腫瘍抗原特異的抗原に対して利用できる。それは同時に、試験管内で起こっている免疫プロセスについて特異的なセグメントの特異的な興奮剤として利用することもできる。腫瘍抗原は培養中のいずれの時間点での血液採取（または細胞添加）または添加より前に試験管内に存在するであろう。（かくして、それは培養日、時間または分の間接触している。）腫瘍抗原は：1)培養液のレベル以上か、培養液のレベルか、または培養液のレベル以下のいずれかの試験管自体に付着（または結合）可能：2)ニトロセルロース細片に結合可能：3)いずれの合成担体（あらゆる種類のプラチック）に結合可能；4)ビーズ、微小球などに結合可能；5)「乾式化学」（またはより厳密な「乾式免疫化学」系[閉鎖または開放]）の部分であり得る。前記のものすべて（特にビーズ）の表面は平滑もしくは溝付であり、またはその表面積を拡大する形状の任意の他の形であり得る。腫瘍抗原は、前記のすべての担体に直接的に、または担体、「アーム」、および銀と「担体の」表面間に距離を置く他の方法によって結合される。腫瘍抗原はいずれの形態またはサイズ：試験管を取り囲む輪、線、点、＋の形、＋、Ｐまたはいずれの他の文字または形で、「担体」に用いることができる。腫瘍抗原を、1種の与えられた濃度または数種の濃度で（不連続「部位」としてまたは連続「部位」（または勾配）としてのいずれか）担体に付着させることができる。1以上の腫瘍抗原が、1の試験管（もしくは担体、またはビーズ、ビーズ群など）に用いられるように、腫瘍抗原はいくつかの腫瘍抗原であり得る。異なる腫瘍抗原を（混合物として）同時に、もしくは群で、または個々に用いることができる。1箇所以上に用いられる場合は、同一の形の印を用いて、または各々の腫瘍抗原に異なるものを用いて使用することができる。腫瘍抗原に結合する抗体の検出は、これまでに公知の（または後に見出されるであろう）「発現」および検出システムのいずれによっても行うことができる。発現試薬は初めから試験管内にあってもよいし、または後に添加してもよい。非常に簡便な方法としては、培養期間の終了時、またはそれがすべて終了した後に、発現工程が終了する。その発現は「タグ付き」抗体の直接結合か、または競合アッセイのいずれかによる。「タグ」は酵素、金属、カラーコロイド、（または蛍光物質、発光性物質）である。実施例5：アロ抗体：輸血に関して非常に慎重な血液型適合の後でさえ、いくつかの小さな組織適合性抗原に対して供与者が免疫応答を引き出すかもしれず、かくしてアロ抗体が産生されるであろう。ほとんどの場合において、この事象は病理学的効果がない。数人の患者において、応答が強く、供与者の血液の溶血現象を引き起こし、受容者をより大きな危険にさらす。これらのアロ抗体は輸血後、数ケ月で消え、不適切であった同一の各患者には次の血液適合を施す(2種の血液をin vitroで混合し、逆効果を検出するが、抗体がそこになければ、2種の血液は適合性を表すであろう。)。その人がアロ抗体を産生する記憶を保有しているのであれば、これらはすぐに現れ、第2の輸血後、その男性／女性の生命を危険にさらして、すぐに死に至らせるかもしれない。新しい培養方法を用いて、受容者の血液の1サンプルを培養し、上清を提案された血液ユニットとのその反応性の試験をし、かくして、溶解せず、またはin v ivoで他の障害を引き起こさないであろうユニットの選択を可能にする。実施例6：移植された組織または器官が生き延びる可能性を増大させること、および受容性のある２つのパラメーターにより順応することは平行して論じられる;1.免疫系は移植に先立って抑制され、それに引き続く。2.組織を可能な限り最もよい方法で適合させる。適合の２つの主要な方法：1.抗原的／構造的、すなわち多数のおよび少数の移植抗原が確認され、求められる最適な適合。2.生物学的／免疫学的すなわちin vitroで試験する受容者の血液（またはその成分白血球および血漿）の供与者の細胞との反応。免疫系の抗体レパートリーの多くは活性型ではなく、与えられた時間内に分泌されないので、移植に対する潜在的体液性応答の多くは現在の方法では見ることはできない。新しい培養方法がこれらの抗体を明らかにし、培養上清または細胞を供与者の細胞とともにin vitroで試験して、原形は予測され、備えられているので、供与者の最終選択およびより強いin vivoでの拒絶反応に先立って危険を明らかにすることが可能である。実施例7： H.PYLORIに対する抗体の検出血清反応陽性の個体群の抗体型の正確な解釈は、主要抗原決定基エピトープの適合を理解するのに重要である。抗原に向けられた個体群は通例多くの抗原に対して一般的な体液性応答を増す。抗原暴露の早期検出、または暴露の確認がこのアッセイに基づいて可能である。ヘリコバクター・ピロリ(Helicobacter pylori)株は慢性Ｂ型胃炎と関連しており、消化性潰瘍疾患で病因的役割を果たすと考えられる。さらに最近の証明では胃癌の発生におけるヘリコバクター・ピロリに対する役割を示唆している。ヘリコバクター・ピロリによる感染を検出する方法は、尿素呼吸検査の使用および免疫蛍光、ラテックス凝集反応、および補体結合アッセイのような技術による患者の血清における抗ヘリコバクター・ピロリ抗体の検出を含む。しかしながら、最も一般的に用いられる系は酵素結合免疫検定法(ELISA)に基づいたものである。多くのELISA系は全細胞タンパク質抽出物（酸性グリシンまたは全細胞超音波破壊物）から調製した抗原を用いる。この細菌は多数の抗原／免疫原エピトープまたは構造を有する。全細菌、もしくはそのタンパク質のいくつか、炭水化物、ムチン、またはペプチドは抗体検出に抗原として利用できる。最初に来国の患者から単離されたヘリコバクター・ピロリ株は、超音波破壊物により破裂させる。遠心分離後、試験抗原として上清をため、平底のマイクロタイターウェル(Immulon-2，Dynatech Laboratorles，Ale xandria，Va.)上の0.05M炭酸塩バッファー(pH9.6)に入れる。ヘリコバクター・ピロリに対する抗体は、酵素免疫アッセイ法によりIgG、IgA 、IgE、IgD、およびIgMの個々の評価が可能である。吸光度の読みは終点力価の逆数に変換する。高分子量の細胞関連抗原調製物は、分子量400,000-700,000の範囲の少なくとも２つのタンパク質を含む。かくして、ヘリコバクター・ピロリに対する抗体（抗体群）を探すことは、全免疫原またはそれのセグメント（ペプチド）を検出系および試験に抗原として用いるということを意味する。ヘリコバクター・ピロリに対する抗体の存在は消化性潰瘍背景の徴候であり、これはヘリコバクター・ピロリ感染の適切な治療法をもたらし、、かくして消化器系統の粘膜ライニングの治療が可能となる。実施例8： HTLVの抗体の早期検出方法および物質：血液銀行供与者からの、ヘパリンで凝結防止した血液サンプルをこの試験で使用した。1ml.の血液を2ml.の完全培地およびマイトジェンと混合した。試験管を 37℃給湿CO₂インキュベーターで培養した。培養液をウイルス-I特異的抗体の存在について市販のELISAを用いて試験した。結果はO.D.読み取り値である。対照のO.D.読み取り値は陰性:O.006、陽性;0.370であった。結果：表1:HILV-1抗体の血清学対新試験サンプル番号1、3、4、9および10は、HTLV-Iに対して血清反応陰性であったが、ウイルスに対する抗体は培養後検出可能であった。アステリスク(^*)により印をつけたサンプルは、さらなる確認を行った（行われたカットオフは0.1000.D. であった）。実施例9： HCV暴露の特異的抗体の早期検出血清反応陽性の個体群の抗体型の正確な解釈は、主要抗原決定基エピトープマッピングを理解するのに重要である。構造および非構造タンパク質の両方において、HCVゲノムによりコードされる非常に多数の免疫学的エピトープがある。感染した個体群は通例多くの抗原に対して一般的な体液性免疫応答を増す；しかしながら、持続的HCV感染からの回復を識別可能にする特異的抗体型は確認されていない。いくつかの場合ではNS4(c-100-3)またはNS5抗原に対する抗体が最初に産生するが、将来的に続く多くの急性感染した患者では、コア(c22-3)およびNS3 (c33-c)抗原に対する抗体が前に、他の抗原に対する抗体より高い力価で発現する。いずれの血清変換型についても感染の結末を予測するということは示されていない。主要抗原決定基エピトープはコア抗原(aa20ないし34)のN-末端内、およびNS4領域(aa1712ないし1731)内で見つけ出されてきており、後者は組換え抗原( 各々Ｃ-22-3およびＣ-100-3)に対応している。すべてではないが、大部分の慢性的に感染した患者は、E2/NS1遺伝子生成物(gp70)の超可変5'末端に対する抗体を有する。さらに、生検で証明された慢性肝炎が、見かけ上の急性自己制限Ｃ型肝炎患者および正常なALTレベルを持続的に有している抗HCV陽性血液供与者の双方で報告されている。輸血関連Ｃ型肝炎(TAH)ウイルスが抗HCV陰性血液受容者内に出現していること、インターフェロン治療下にあり、次いでインターフェロン投与中止後ウイルス血症を再発した忠者の血清からHCV-RNAが常習的に減少していること、および血清反応陰性の慢性Ｃ型肝炎患者の肝臓中にHCV-RNAが見られることが報告されているが、これらはALTの正常化も、抗HCV抗体の消失も、また血清HCV-RNAの消失も、完全な回復を必ずしも意味するものではないことを示唆している。従って、大多数のHCV感染患者に持続的感染（活性または鎮静期のいずれか）が起こり得ると考えられる。 HCV持続性の基礎をなすメカニズムは知られていないが、いくつかの観察は、H CVがその溶菌力を調節し、さらに宿主の免疫系による検出および排除を回避する戦略の可能性を示唆している。HCVはDNA中間生成物を通じては複製しないので、その持続性は宿主ゲノム中へのウイルスゲノムの組み込みによる潜伏期間の点からは説明できない。現在利用可能なHCV感染の診断法には、組換えタンパク質に基づく血清学的アッセイおよび／または合成ペプチドに基づく抗体捕捉アッセイ、血清または肝臓におけるHCV-RNA配列の検出のための遺伝子増幅技術、ならびに組織におけるHCV 抗原またはHCV-RNA配列の検出のための免疫組織化学的技術および「insitu」ハイブリダイゼーション技術が含まれる。組織に基づく技術は発達の初期段階におけるものであり、限られた数の研究施設でしか利用できない。HCV検出アッセイのＣ型肝炎の臨床経過との関係は図2-2に示されている。第一世代抗HCVアッセイは、NS3のＣ末端の小部分に相当する単一の組換え抗原 (C-100-3)に対する抗体を検出し、ほとんどすべてのNS4遺伝子産物は酵母で融合タンパク質として発現した。最も広範囲に評価された２番目に作られた試験(EIA-2)は、C-33(NS3)およびC- 100-3(NS4)を含む、組換えタンパク質の組成を示す、コア組換えタンパク質C-22 -3に対する抗体および組換えタンパク質C-200に対する抗体を検出する。EIA-2は急性の、輸血関連肝炎、または散発性NANB肝炎における血清変換速度を10ないし 20％まで速め、疾病の発症と血清変換の間の時間を平均８週間まで短縮し；70ないし80％の場合において、EIA-2は疾病の発症から４週間以内に抗ＨＣＶを検出できる。最も広範囲に評価された「確認アッセイ」は、第二世代組換えイムノブロットアッセイ(RIBA-2,Chiron Corporation,Emeryville,CA)である。このアッセイは、２種のレベルのヒトIgGおよびスーパーオキシドジスムターゼ(SOD)対照とともに組換えHCVタンパク質5.1.1(NS4)、C-100-3(NS4)、C33-c(NS3)、およびC-22-3( コア）が別個のバンドとしてブロットされたニトロセルロースストリップチップからなる。ほぼ一致したIgM抗HCV応答がヌクレオキャプシド（コア）抗原に対して向けられ、いくつかの場合では、活性型抗HCV血清変換の第1のマーカーとなる。 IgMの反応性はIgGに比べ寿命が短いが、それゆえ、IgM抗体はHCV感染の急性期マーカーとして使用できる。異なるHCV単離物の構造および非構造コード領域の双方における配列の多様性は、擬陰性PCR反応性を生じる結果となる。高度に保存された5'UTRに対して特異的なプライマーを用いて、配列の異種性による失したウイルス血症を回避しなければならない。感受性を増強するため、またハイブリダイゼーション工程を回避するためにしばしば用いられるネスティッドPCR(nested PCR)(ネスティッドプライマーを用いるダブルOCR)の使用は、内在するコンタミネーションの危険性を大幅に大きくし、期待される大きさの非特異的な増幅産物をもたらすと考えられる。方法および材料高リスクのHCV感染により追跡されている患者由来の、ヘパリンを添加した血液サンプルをこの実験に用いた。1mlの血液を2mlの完全培地と混合し、マイトジェン(PWM)を加えた。試験管を37℃の加湿したCO₂インキュベーター内で培養した。ELISAキット(Minoliga)を用い、培養液をHCV特異的抗体の存在に関して試験した。結果はO.D.読み取り値である。この試行のカットオフは0.392であった。研究センターではそのカットオフ(-0.470)の少なくとも1.2であるものが陽性とみなす。立体配座試験は、構造的および非構造的抗体に関するものであった(血清においてのみ)。結果：表２のサンプルはすべてＣ型肝炎ウイルスに関する高リスク群由来の被験体である。抗体はすべてＣ型肝炎ウイルス特異的であった。表２un=測定されずサンブル5319は、血清学を通じてより培養を通じての方がよりよく検出される明確なサンプルである。カットオフは0.4O.D.に近かったので、サンプル5314も培養後のみで明確に陽性である(これもまた確認)。ある試験において初期陽性または境界線ELISAを有する患者集団においてさらに研究する。結果表３ un=測定されず立体配座は、血清中の構造および非構造タンパク質抗体試験を用いて行ったのみであった。サンプル5322、5325、5326は培養後にのみ陽性診断であった例である。実施例10： ELISPOT検出方法および材料本発明では、特異的抗体を活発に分泌する細胞を検出し、計数し得るELISPOT などのような抗体検出系が考えられる。方法および材料不活性化した全SIVを96ウェルプレート中のニトロセルロース膜に塗布した。S IVを洗い流し、膜を0.2％脱脂粉乳でブロッキングした。限界希釈で細胞をウェルに加え、６時間インキュベートした。このプレートをPBS-Tweenで５回すすぎ、次いで抗体αヒトIgG（サルIgGとも結合する）と着色剤の非可溶性生成物を用いて現像し、SIV特異的抗体（細胞より分泌）がウェル中のSIVと結合したところのドットを視覚化した。倍率x4（またはx10）の下で青紫のスポットを計数した。標準的な限界希釈法により、SIV特異的細胞の頻度および数を算出した。この実験には、SIVのサイレントキャリヤーであることが既に確認されているすず色マンガベイザル（Sooty Mangabey Monkey）由来の、また、いくつかの陽性および陰性対照由来の、ヘパリンを添加した血液サンプルを用いた。1mlの血液を2mlの完全培地と混合した。各マイトジェンを別々の試験管で試験した。試験管を37℃の加湿したCO₂で培養した。粉砕、不活性化した全SIV粒子を抗原として用いる自家SIV ELISAキットを用い、培養液をSIV特異的抗体の存在に関して試験した。結果はO.D.読み取り値である。結果：表５Ｂ細胞を分泌する抗SIV Igの頻度活発に抗体を分泌するSIV特異的Ｂ細胞は、血清反応陽性のサルでしか検出できない。表６血清反応陰性のMangabeyザル由来のPWMとの培養物由来のELISPOTの ELISA力価との比較サル番号１はSIVに関して真に陰性であった。（細胞は血清反応陰性のアカゲザルから採取した。）SIV特異的細胞は検出されなかった。血清反応陰性のサルでは、それらが（サイレント）キャリヤーである場合でさえも、SIV抗体産生細胞は検出できなかったが、培養後のELISPOTにより、SIVが誘導したＢ細胞は検出できた。それらはまた、培養物中に検出可能な抗体を有している。「サイレントキャリヤー」におけるSIV特異的細胞の頻度および数は、血清反応陽性のSIVキャリヤーにおけるものよりもずっと低い。実施例11：ウエスタンブロット検出また、新規な方法を、検出方法としてウエスタンブロットとともに用いた。この研究からSIVおよびHIVに関して以下のことが示された：1.陽性血清サンプルはすべて培養後も陽性であった；2.培養期間によるバンドの消失はなかった；3.いくつかの血清反応陽性の場合では、培養段階により付加的バンドが生じた；4.EL ISA試験が陽性である血清反応陰性の高リスク個体（およびサル）では、主要なH IV（およびSIV）タンパク質のすべての明瞭なバンドが反応性を示した。いくつかのサンプルはバンドに一部、通常はenvおよびコア（core）しか有していなかった。実施例12：Ｂ型肝炎(HBV)の早期検出 in vivoにおいては、感染と抗体形成の間には、現在の診断試験（通常ELISA）の検出レベルまでには少なくとも数週間のウインドウ期間がある。新規な方法およびキットを用い、血清／血漿および培養上清の双方での、HBV特異的抗体の存在に関する集団のスクリーニング(ELISAを使用）により、血清反応陽性のすべてが新規な方法によっても陽性であり(100％相対的特異性)、一方、血清反応陰性サンプルのいくつかは新規な方法およびキットを用いては陽性であることを示すものである。より後の時点では、これら新規な方法で示された陽性は、血清変換し、ゆえにアッセイの真の特異性（擬陽性がサンプルの不一致をもたらすことはない）ならびにその優れた感受性を明確に示すであろう。感染の存在を証明する他の方法では、PCRなどを使用できる。Ｂ型肝炎コア抗原（抗HBc）に対する抗体− 合衆国においては輸血されるすべての血液は抗HBcに関してスクリーニングされている。最初に非Ａ型非Ｂ型肝炎に関する代用試験として導入されたが、それは今や、他のウイルス（HIVなど）の潜在的キャリヤーを検出するための「ライフスタイル」指標として、また、抗原陰性であるがなお感染しているまれなＢ型肝炎キャリヤー（抗HBc単独[抗Hb sは持たない]がＢ型肝炎を伝染させる可能性を持つことが示された）を検出するための試験として用いられる。抗HBcに関する現在の試験法はELISAである。実施例13： HPVの早期検出 HPV感染の極めて早期の段階にある女性では、子宮頸部塗抹試験を用いては検出できない可能性がある。試験する抗体の値はあまり鮮明ではないが、抗体が容易に検出できるレベルで産生されていない場合でさえ、新規な方法は、新規な方法およびキットを用いたスクリーニングならびに極めて早期の検出を試みる機会を与えるものである。実施例14：サイトメガロウイルス(CMV)の早期検出成人人口におけるCMV曝露に対する罹患率はかなり高く、必ずしもすべての血液ユニットがCMVに関してスクリーニングされているわけではない。さらに、新生児および免疫抑制個体（放射線療法もしくは化学療法中の癌患者、または組織移植後の患者など）にCMVに冒された血液が与えられた場合、輸血感染後死に至る可能性がある。従って、CMV陰性の血液だけをこれらの患者に与えることができるように、血液の40数％がCMVに関してスクリーニングされている。これらCMV 陰性ユニットのうちいくらかはCMVを伝播して死をもたらす。 CMV- ほとんどのサイトメガロウイルス(CMV)感染は無症状であるが、このウイルスは３つの主な病状を伴う：1.子宮内感染後の先天的欠陥；2.新生児感染と死；3.免疫抑制宿主、特に骨髄移植を受けている宿主におけるCMV肺炎。合衆国人口の約半数が感染しており、これら相当な人口が、健康であり抗体を有しているとしても、なおウイルスを保持（潜伏）している。ウイルスは宿主内で種々の条件の下で活性化し得る。CMVはまた、CMV陰性受容者に与えられた場合、輸血によって伝染する。その臨床上の重要性のため、感受性のあるCMV陰性患者に与えられる輸血がしばしばCMVに対する抗体に関してスクリーニングされ、陽性であるならば、そのようなユニットは輸血を控えられる。合衆国で輸血されるおそらく1/3のユニットがCMV抗体に関してスクリーニングされ、必要であれば十分なストックのCMV陰性血液を利用できる。実施例15：培養アッセイの「推定値」について。同じ期間の追跡調査中には血清変換しない他の60を超える「サイレントキャリヤー」サルでは、培養後のO.D.読み取り値はすべて陽性ではあるが低いものであった(アッセイの陰性対照の〜２倍)。図1A ないし1F。材料および方法与えられた間隔（陽性誘導後最初の２ないし４ケ月については、１週間に１度の培養抗体試験、もしそれまでに血清変換が起こらなければ、「サイレントキャリヤー」とみなすことができ、以降は１ケ月に１度ほど。）での血清および培養後抗体に関する試験。２回の連続測定で50％を上回ってO.D.読み取り値(または比率)が上昇すれば(または１回では100%上昇)、近い将来血清変換が示される。考察異なる時点（ｘ軸）で採取した培養血液サンプルのＳＩＶ特異的抗体についての一連のO.D.読み取り値(ｙ軸)。図1Bないし1Fは各々ｌ個体のサルを示す。これら血清変換の５例の他、他の60個体を超えるサル(Mangabey)を２年間追跡した。それらのin vitroにおけるSIV抗体産生レベルは常に低い陽性に維持されていた。これら60個体のうち追跡調査期間中に血清変換したものはなかった。in vitro におけるSIV抗体レベルが血清変換サンプルでしか上昇しないサルがさらに３個体いた。SIV抗体レベルは血清変換に先立って顕著に、かつ、確実に上昇した。このように意外に早く血清変換の月が推定される。この推定の重要性はいくつかの因子から生じる：a)ウイルス（例えばHIV）に対するTh1からTh2応答へのシフトは血清変換をもたらすだけでなく、将来に疾病の後遺症をもたらす；b)血清変換プロセスでは通常、ウイルス複製の高まりが先行する。従って、潜在的な前血清変換状態においては奨励されない抗ウイルス治療は、その段階で非常に有効であろう(それは実際のところプロセスを転じることが可能であり、血清変換を防ぐ)；c)前血清変換の時点での、体液アーム(humo ral arm)を抑制する、またはより長い無症候期、高まる感染に伴うより良好な複写を与える免疫機構において血清反応陽性状態に入るように免疫バランスに対して他の受益的効果を持ついくつかの治療法の使用が奨励され得る。図1Aないし1F は、培養後のELISAにおけるO.D.読み取り値のレベルが真の陰性、血清反応陽性、およびサイレント感染／曝露の間で識別できることを示している。実施例16：ヒトにおける推定値のアッセイ表７抗HIV Ab ELISA O.D. in vitro抗体産生(IVAP)試験では、被験者由来のHIV特異的抗体はGENELAVIAを用いて検出し、さらにELAVIA（双方ともDiagnostic Pasteurによる）で確認した。PCRは２つの異なる実験で行い、３分の１はISH（in situハイブリダイゼーション）で行なった。陽性の結果は３つすべてにおける陽性を意味する。表６で示したように、培養細胞のO.D.（＝抗体レベル）の上昇が明瞭な陽性PC R試験を進める、すなわち感染負荷量の上昇を進める。HIV抗体の検出は２週間時点で行う。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (31)優先権主張番号０８／７５５，２８７ (32)優先日平成８年11月22日(1996．11．22) (33)優先権主張国米国（ＵＳ） (31)優先権主張番号０８／７５５，４１２ (32)優先日平成８年11月22日(1996．11．22) (33)優先権主張国米国（ＵＳ） (31)優先権主張番号０８／７５５，４１３ (32)優先日平成８年11月22日(1996．11．22) (33)優先権主張国米国（ＵＳ） (31)優先権主張番号０８／７５５，４１４ (32)優先日平成８年11月22日(1996．11．22) (33)優先権主張国米国（ＵＳ） (31)優先権主張番号０８／７５５，４１５ (32)優先日平成８年11月22日(1996．11．22) (33)優先権主張国米国（ＵＳ） (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ

Claims

【特許請求の範囲】１．被験者由来のサンプル中の腫瘍抗原関連抗体を検出するためのin vitro方法であって、 a）該被験者から全血サンプルを得、 b）マイトジェンを抗原の存在下または非存在下に含有する培地を含む、培養物中で該全血サンプルをインキュベートして、腫瘍抗原関連抗体の産生および腫瘍抗原特異的抗体の発現につながるリンパ球細胞のポリクローナル的および特異的な活性化を誘導し、 c）工程b）で得られた培養物を腫瘍抗原にさらし、それにより抗原−抗体免疫複合体を形成させ、そして d）工程c）の抗原−抗体免疫複合体を検出する工程を含んでなり、抗原特異的抗体の存在が、腫瘍を有する被験者を示すことを特徴とする方法。２．工程b）の培養物から上清を得、該上清を腫瘍抗原にさらし、それにより抗原−抗体免疫複合体を形成させる、請求項１に記載の方法。３．工程b）の培養物から細胞画分を得、それを抗原にさらし、それにより抗原 −抗体免疫複合体を形成させる、請求項１に記載の方法。４．該マイトジェンがリンパ球細胞の活性化物質である、請求項１に記載の方法。５．該マイトジェンが、アメリカヤマゴボウマイトジェン、レクチン、細菌内毒素、腫瘍抗原、リピドＡまたはリンホカインである、請求項４に記載の方法。６．該マイトジェンがアメリカヤマゴボウマイトジェンである、請求項５に記載の方法。７．卵巣癌または乳癌を有する被験者をスクリーニングするための方法であって、 a）該被験者から全血サンプルを得、 b）マイトジェンを抗原の存在下または非存在下に含有する培地を含む、培養物中で該全血サンプルをインキュベートして、腫瘍抗原関連抗体の産生および腫瘍抗原特異的抗体の発現につながるリンパ球細胞のポリクローナル的および特異的な活性化を誘導し、 c）工程b）で得られた培養物を腫瘍抗原にさらし、それにより抗原−抗体免疫複合体を形成させ、そして d）工程c）の抗原−抗体免疫複合体を検出する工程を含んでなり、腫瘍抗原特異的抗体の存在が、卵巣癌または乳癌を有することを示すことを特徴とする方法。８．工程b）の培養物から上清を得、該上清を腫瘍抗原にさらし、それにより抗原−抗体免疫複合体を形成させる、請求項７に記載の方法。９．該マイトジェンがリンパ球細胞の活性化物質である、請求項７に記載の方法。１０．該マイトジェンが、アメリカヤマゴボウマイトジェン、レクチン、細菌内毒素、腫瘍抗原、リピドＡ、サイトカインまたはリンホカインである、請求項９に記載の方法。１１．該マイトジェンがアメリカヤマゴボウマイトジェンである、請求項９に記載の方法。１２．腫瘍を有する被験者を検出する方法であって、 a）該被験者から全血サンプルを得、 b）マイトジェンを抗原の存在下または非存在下に含有する培地を含む、培養物中で該全血サンプルをインキュベートして、腫瘍抗原関連抗体の産生につながるリンパ球細胞のポリクローナル的および特異的な活性化を誘導し、 c）該細胞を露出させて、核酸配列を別々に回収し、 d）得られた核酸配列を、ハイブリダイゼーション条件下で腫瘍抗原関連抗体の核酸配列に特異的にハイブリダイズしうる一本鎖標識オリゴヌクレオチドプライマーと接触させ、 e）プライマー対がハイブリダイズするいずれかの核酸配列を増幅して、二本鎖増幅産物を得、そして f)腫瘍抗原の存在を示す該増幅産物の存在を検出する工程を含んでなる方法。１３．該核酸配列が、DNA、RNAまたはcDNAである、請求項12に記載の方法。１４．該一本鎖オリゴヌクレオチドプライマーがビオチンで標識されている、請求項12に記載の方法。１５．該一本鎖オリゴヌクレオチドプローブがフルオレセインで標識されている、請求項12に記載の方法。１６．該マーカーがアルカリホスファターゼである、請求項12に記載の方法。１７．該マイトジェンがリンパ球細胞の活性化物質である、請求項12に記載の方法。１８．該マイトジェンが、アメリカヤマゴボウマイトジェン、レクチン、細菌内毒素、ウイルス、リピドＡまたはリンホカインである、請求項12に記載の方法。１９．被験者からの特異的腫瘍抗原関連抗体を検出するためのキットであって、該キットが、全血サンプルを集めるための容器を含んでなり、該容器が、抗体産生および該特異的腫瘍抗原関連抗体の検出のためのアッセイにつながるリンパ球細胞のポリクローナル的および特異的な活性化を誘導するのに有効なマイトジェンを抗原の存在下または非存在下に含有する培地を含有することを特徴とするキット。２０．該アッセイが酵素結合免疫吸着アッセイまたは免疫蛍光アッセイである、請求項19に記載のキット。２１．該容器がプラスチック、ガラスまたは金属物質よりなる、請求項19に記載のキット。２２．該容器が試験管またはフラスコである、請求項21に記載のキット。２３．該容器が真空密封されている、請求項22に記載のキット。２４．腫瘍抗原が該容器に結合している、請求項19に記載のキット。２５．複数の腫瘍抗原が該容器に結合している、請求項24に記載のキット。２６．抗原にさらされた被験者を検出する方法であって、 a）該被験者から全血サンプルを得、 b）マイトジェンを抗原の存在下または非存在下に含有する培地を含む、培養物中で該全血サンプルをインキュベートして、抗体産生につながるリンパ球細胞のポリクローナル的および特異的な活性化を誘導し、 c）該細胞を露出させて、核酸配列を別々に回収し、 d）得られた核酸配列を、ハイブリダイゼーション条件下で抗原特異的抗体の核酸配列に特異的にハイブリダイズしうる一本鎖標識オリゴヌクレオチドプライマーと接触させ、 e）プライマー対がハイブリダイズするいずれかの核酸配列を増幅して、二本鎖増幅産物を得、そして f）該抗原の存在を示す該増幅産物の存在を検出する工程を含んでなる方法。２７．該核酸配列が、DNA、RNAまたはcDNAである、請求項26に記載の方法。２８．該一本鎖オリゴヌクレオチドプライマーがビオチンで標識されている、請求項27に記載の方法。２９．該一本鎖オリゴヌクレオチドプローブがフルオレセインで標識されている、請求項27に記載の方法。３０．該マーカーがアルカリホスファターゼである、請求項27に記載の方法。３１．該マイトジェンがリンパ球細胞の活性化物質である、請求項27に記載の方法。３２．該マイトジェンが、アメリカヤマゴボウマイトジェン、レクチン、細菌内毒素、ウイルス、リピドＡまたはリンホカインである、請求項31に記載の方法。３３．該マイトジェンがアメリカヤマゴボウマイトジェンである、請求項32に記載の方法。３４．抗原にさらされることにより生じた被験者からの特異的抗体を検出するためのキットであって、該キットが、全血サンプルを集めるための容器を含んでなり、該容器が、抗体産生および該特異的抗原抗体の検出のためのアッセイにつながるリンパ球細胞のポリクローナル的および特異的な活性化を誘導するのに有効なマイトジェンを抗原の存在下または非存在下に含有する培地を含有することを特徴とするキット。