JP2001501975A

JP2001501975A - Binding peptide nucleic acids with enhanced cellular uptake

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Publication number: JP2001501975A
Application number: JP11500871A
Authority: JP
Inventors: ニールセン，ペーター・エー; クヌートセン，ヘレ
Original assignee: ペーター・エー・ニールセン
Priority date: 1997-05-28
Filing date: 1998-05-28
Publication date: 2001-02-13
Also published as: NZ501289A; EP1003480A1; CA2291839A1; EP1003480A4; AU745309B2; WO1998053801A1; AU7602198A; IL133087A0

Abstract

(57)【要約】親脂質基に結合し、そしてリポソームに取り込まれているペプチド核酸は、亢進した細胞取り込みおよび分布を示す。ペプチド核酸の細胞取り込みおよび分布はまた、ペプチド核酸の骨格にアミノ酸側鎖を導入することでも増加する。細胞取り込みを調節する方法および動物を治療する方法が提供される。本発明のペプチド核酸は、天然発生核酸塩基およびポリアミド骨格に結合する非天然発生核酸塩基を含む。 (57) [Summary] Peptide nucleic acids bound to the parent lipid group and incorporated into the liposome show enhanced cellular uptake and distribution. Cellular uptake and distribution of peptide nucleic acids is also increased by introducing amino acid side chains into the peptide nucleic acid backbone. Methods for modulating cell uptake and treating animals are provided. The peptide nucleic acids of the invention include naturally occurring nucleobases and non-naturally occurring nucleobases that bind to a polyamide backbone.

Description

【発明の詳細な説明】亢進した細胞取り込みを有する結合ペプチド核酸発明の分野本発明は、親脂質基（lipophilic group）に結合し、そしてリポソームに取り込まれているペプチド核酸（PNA）を含む組成物に関する。該PNAは、ポリアミド骨格に共有結合した天然発生核酸塩基（nucleobase）または非天然発生核酸塩基から構成される。本発明のPNA組成物はさらに、アミノ酸側鎖により修飾されたP NAを含んでもよい。本発明のPNA組成物は、亢進した細胞取り込みおよび分布を示す。リポソームに取り込まれたPNA組成物は、リポソームを含まないPNA組成物より増加した細胞取り込みおよび拡散した分布を示した。発明の背景遺伝子の機能は、その情報をメッセンジャーRNA（mRNA）に転写することにより開始する。リボソーム複合体との相互作用により、mRNAはタンパク質の合成を指示する。このタンパク質合成過程は、翻訳として知られる。翻訳には、多様な補因子、構築ブロック、アミノ酸およびトランスファーRNA（tRNA）の存在が必要であり、これらはすべて正常細胞に存在する。ほとんどの慣用的な薬剤は、１つまたはそれ以上の標的内因性タンパク質、例えば酵素と相互作用し、そして該タンパク質を調節することにより、その効果を発揮する。しかし、典型的には、こうした薬剤は標的タンパク質に特異的でなく、他のタンパク質とも相互作用する。したがって、特定のタンパク質の作用を効果的に調節するには、比較的大量の薬剤用量を使用することが必要である。タンパク質活性の調節を、mRNAとの相互作用またはmRNAの不活性化により達成することが可能であるならば、必要な薬剤量および薬剤の副作用の劇的な減少が達成される可能性がある。こうした相互作用が部位特異的であるならば、必要な薬剤量および副作用のさらなる減少が達成される可能性がある。機能している遺伝子は連続的にmRNAを産生するため、遺伝子転写が完全に停止されることが可能ならば、さらにより都合がよいであろう。オリゴヌクレオチドおよびその類似体（analogue）が開発されてきており、そして診断、治療および研究試薬として用いられてきている。オリゴヌクレオチドへの修飾の１つの例は、非同位体標識、例えばフルオレセイン、ビオチン、ジゴキシゲニン、アルカリホスファターゼ、または他のレポーター分子による標識である。ヌクレアーゼへの耐性を増加させるリボースリン酸骨格への他の修飾も作成されてきている。これらの修飾にはメチルホスホネート類、ホスホロチオエート類およびホスホロジチオエート類などの結合、および２’−Ｏ−メチルリボース糖部分の使用が含まれる。他のオリゴヌクレオチド修飾には、取り込みおよび細胞分布を調節するために作成されるものが含まれる。ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドは、現在、多様な疾患状態の治療のため、ヒトの臨床試験において、アンチセンス剤として用いられている。これらのオリゴヌクレオチド修飾に関し、診断および治療用途におけるいくつかの改善が達成されてきたものの、改善されたオリゴヌクレオチド類似体への要求は存在しつづけている。天然発生リボ核酸またはデオキシリボ核酸以外の骨格に結合する核酸塩基を有するいくつかの既知の核酸類似体が存在する。これらの核酸類似体は、相補的な核酸塩基配列を持つ核酸に結合する能力を有する。とりわけ、例えばＷＯ92/207 02に記載されるようなペプチド核酸（PNA）が、治療および診断試薬として有用であることが示されてきている。これは、これらが一般的に、対応する野生型核酸より、相補的核酸塩基配列に対し高い親和性を持つためである可能性がある。 PNAはDNAおよびRNAへの結合においてオリゴヌクレオチドの有用な代用物である。Egholmら,Nature,1993,365,566および該論文に引用される参考文献。最新の文献はPNAの多様な適用を反映している。Hyrupら，Bioorganic＆Med.Chem.,1996 ,4,5；およびNielsen,Perspectives Drug Disc.Des.,1996,4,76。 PNAはオリゴヌクレオチドに類似であるが組成物が異なる化合物である。PNAにおいて、オリゴヌクレオチドのデオキシリボース骨格は、ペプチド骨格により置き換えられている。ペプチド骨格の各サブユニットは、天然発生または非天然発生核酸塩基に結合している。こうしたペプチド骨格の１つは、アミド結合を通じ連結されたＮ−（2−アミノエチル）グリシンの反復単位で構築される。あらかじめ形成された単量体を介したPNAの合成は、以前ＷＯ 92/20702およびWO 92/20703に記載されており、これらの内容は本明細書に援用される。PNAの構造および合成における、より最近の進歩は、WO 93/12129および1996年７月23日に発行された米国特許第5,539,082号に例示されており、どちらの内容も本明細書に援用される。さらに、文献には、PNAの合成方法、生物学的特性および使用を記載する刊行物が豊富である。例えば、PNAは二本鎖DNAの鎖に取って代わる能力を持つ。Patel,Nature,1993,365,490。PNAの改善された合成方法もまた記載されてきている。Nielsenら，Science，1991，254，1497；およびEgholm,J.Am.Chem. Soc.,1992,114,1895。PNAは相補的なDNAまたはRNAと二重鎖および三重鎖を形成する。Knudsonら,Nucleic Acids Researh,1996,24,494;Nielsenら，J．Am.Chem. Soc.,1996,118,2287;Egholmら,Science,1991,254,1497；Egholmら,J.Am.Chem.So c.,1992,114,1895；およびEgholmら，J.Am.Chem.Soc.，1992,114,9677。 PNAはDNAおよびRNA両方に結合し、そしてPNA/DNAまたはPNA/RNA二重鎖を形成する。生じたPNA/DNAまたはPNA/RNA二重鎖は、より高い融解温度（T_m）により立証されるように、対応するDNA/DNAまたはDNA/RNA二重鎖より強く結合している。 PNA/DNA（RNA）二重鎖のこの高い熱安定性は、DNA/DNAまたはRNA/RNA二重鎖に存在する電荷斥力の除去を生じる、PNA骨格の中性性（neutrality）に起因しているとされている。PNA/DNA（RNA）二重鎖の別の利点は、Ｔ_mが実質的に塩濃度に依存していないことである。一方、DNA/DNA複合体は、イオン強度に非常に依存している。オリゴヌクレオチドによる三重鎖形成は、配列特異的な二重鎖デオキシリボ核酸(DNA)切断が立証されて以来、重点的な研究領域であった。Moserら,Science,1 987，238，645。遺伝子治療、診断精査および他の生体臨床医学的適用における三重鎖形成オリゴヌクレオチドの潜在的な使用は、かなりの関心を引いてきた。 Uhlmannら,Chemical Reviews,1990,90,543。ピリミジンオリゴヌクレオチドは、二本鎖DNAにおけるホモプリン標的への結合を通して、三重らせん構造を形成することが示されてきている。これらの構造において、新たなピリミジン鎖は、DNAの主溝において、ワトソン−クリック（Watson-Crick）プリン鎖と平行に置かれ、そして配列特異的フーグスティーン（Hoogsteen）結合を通じて結合する。配列特異性はチミン認識アデニン（T:A-T）およびプロトン付加シトシン認識グアニン（C⁺:G-C）に由来する。Bestら,J.Am.Chem.Soc.,1995,117,1187。これよりよく研究されていない三重鎖モチーフのうち、プリンリッチオリゴヌクレオチドは二本鎖ＤＮＡのプリン標的に結合する。このモチーフ中の第三の鎖の方向は、ワトソン−クリックプリン鎖と逆平行であり、そして特異性はグアニン認識グアニン（G:G-C）およびチミンまたはアデニン認識アデニン（A:A-Tまたは T:A-T）に由来する。Greenbergら,J.Am.Chem.Soc.,1995,117,5016。ホモピリミジンPNAは相補的なDNAまたはRNAに結合し、高い熱安定性の(PNA)₂/ DNA（RNA）三重鎖を形成することが示されている。Egholmら,Science,1991,254, 1497;Egholmら，J.Am.Chem.Soc.,1992,114,1895;Egholmら,J.Am.Chem.Soc.,1992 ,114,9677。２つのPNA鎖および１つのヌクレオチド鎖を含む三重鎖の形成は、19 93年７月２日に提出された米国特許出願第08/088,661号に報告されており、その内容は本明細書に援用される。フーグスティーン鎖がDNAプリン標的鎖に平行である三重鎖の形成は、逆平行複合体の形成より好ましい。これにより、ビス−PN Aの使用が可能になり、フーグスティーン鎖においてシトシンの代わりに偽イソシトシン（pseudoisocytosine）を用い、pH非依存性熱安定性が増加した三重らせん構造が得られる。Egholmら，J.Am.Chem.Soc.,1992,114,1895。さらに、その内容が本明細書に援用されるWO 96/02558を参照されたい。ペプチド核酸は、DNAおよびRNA両方に関し、DNAまたはRNAのDNAまたはRNAいずれかへの結合親和性より、（それらのＴ_mから決定されるように）より高い結合親和性を有することが示されている。結合親和性のこの増加は、これらのペプチド核酸オリゴマーを、核酸種に対する分子プローブおよび診断剤として、特に有用なものにしている。親和性の増加に加え、PNAはDNA結合に対し、増加した特異性を有する。したがって、PNA/DNA二重鎖ミスマッチは、DNA/DNA二重鎖に比べ、Ｔ_mの８から20℃の減少を示す。Ｔ_mのこの減少は、対応するDNA/DNA二重鎖ミスマッチでは観察されない。Egholmら,Nature 1993,365,566。オリゴヌクレオチドに比べ、PNAのさらなる利点は、PNAのポリアミド骨格が酵素による分解に耐性であることである。かなりの研究が、相補的DNAおよびRNA鎖に結合するオリゴヌクレオチドおよびオリゴヌクレオチド類似体の、診断、研究試薬および潜在的な治療剤としての適用に向けられてきた。多くの適用に関し、該オリゴヌクレオチドおよびオリゴヌクレオチド類似体は、その活性を発現するのに、細胞膜を通して輸送されるかまたは細胞により取り込まれなければならない。 PCT/EP/01219は対応するDNAより強く、相補的なDNAおよびRNAに結合する新規P NAを記載する。これらのPNAに、その活性を調節する、その膜透過性を修飾する、またはその細胞取り込み特性を増加させるであろう基を付加するのが望ましい。PNAの細胞取り込み特性量を増加させる１つの方法は、親脂質基を結合させることである。1993年９月３日に提出された米国特許出願第117,363号は、いくつかのアルカリアミノ官能性（functionality）およびこうした側鎖をオリゴヌクレオチドに結合するその使用を記載している。 1992年９月11日に提出された米国特許出願第07/943,516号およびその対応する公表されたPCT出願WO 94/06815は、とりわけ、細胞取り込みを亢進し、親脂質性を増加させ、より大きい細胞保持を生じ、そして細胞内の化合物の分布を増加させる目的で、他の新規アミン含有化合物およびそのオリゴヌクレオチドへの取り込みを記載している。 1993年９月３日に提出された米国特許出願第08/116,801号は、チオールアルキル官能性を含み、それを通して側鎖が結合するよう誘導体化されたヌクレオシドおよびオリゴヌクレオシドを記載する。最近、多様な生体分子および薬剤を取り込むリポソーム薬剤搬送系が研究され、そして細胞取り込みおよび分布が亢進したことにより、毒性の減少および効能の増加を示すことが見出されてきている。ChonnおよびCullis,Current Opinion in Biotechnology,1995,6,698;Manninoら,Biotechniques,1988,6,682;BlumeおよびCevc,Biochem et Biophys.Acta,1990,1029,91;およびLappalainenら，Antivir al Res.,1994,23,119。リポソームは水性コアおよびコアを被包する脂質二重層から構成される非常に小さな球体である。リポソーム調製法は、文献中に入手可能である。G．Gregoridadis,“Liposome Technology”中，第２巻，G.Gre goridadis（監修）,CRC Press,1993,p.1;WatweおよびBellare,Curr.Sci.,1995,6 8,715。いくつかのリポソーム薬剤が現在、市場にあるかまたは開発中である。C honnおよびCullis,Current Opinion in Biotechnology,1995,6,698。 1995年４月11日に公表されたWO 96/10391は、リポソームを形成するのに用いられるポリエチレングリコール修飾セラミド脂質、およびこれらのリポソームの薬剤搬送媒体（vehicle）としての使用を記載する。 1996年８月15日に公表されたWO 96/24334は、薬剤を細胞の細胞質、特に血管平滑筋組織に搬送するための、アミノマンノース誘導体化コレステロール部分を有する脂質構築物を記載する。 1996年12月19日に公表されたWO 96/40627は、オリゴヌクレオチド、核酸、ペプチドおよび他の剤などの生体分子の搬送に有用な陽イオン脂質含有リポソーム処方を記載する。最近の進歩にも関わらず、亢進した細胞取り込みおよび分布を持つ安定した組成物への要求が依然としてある。発明の概要本発明は、親脂質基に結合し、そしてアミノ酸側鎖が骨格に結合している修飾骨格を有するペプチド核酸（PNA）を提供する。本発明はまた、親脂質基に結合し、リポソームに取り込まれているペプチド核酸（PNA）を含むリポソーム組成物も提供する。本発明のPNAは、ポリアミド骨格に共有結合している核酸塩基を含む。典型的な核酸塩基には、４つの主要な天然発生DNA核酸塩基（すなわち、チミン、シトシン、アデニンおよびグアニン）、他の天然発生核酸塩基（例えば、イノシン、ウラシル、５−メチルシトシン、チオウラシルおよび2,6−ジアミノプリン）および人工核酸塩基（例えば、ブロモチミン、アザアデニン類およびアザグアニン類）が含まれる。これらの核酸塩基は、適切なリンカーを通じ、ポリアミド骨格に結合する。本発明の好ましいペプチド核酸は一般式（I）：を有し、ここで：各Ｌは、独立して、天然発生核酸塩基または非天然発生核酸塩基であり；各Ｒ^7'は水素または天然発生または非天然発生アミノ酸の側鎖であり、少なくとも１つのＲ^7'はアミノ酸側鎖であり；Ｒ^hはOH，NH₂、またはNHLysNH₂であり；ＲⁱおよびＲ^jの各々は、独立して、親脂質基または蛍光基で標識されたアミノ酸であり；またはＲⁱおよびＲ^jは共に親脂質基であり；ｎは１から30までの整数である。Ｒⁱが蛍光基で標識されたＤ−リジンであり、そしてＲ^jがアダマントイル基である式（I）を有するPNAが好ましい。さらにより好ましいのは、Ｒⁱがフルオレセインで標識されたＤ−リジンであり、そしてＲ^jがアダマントイル基である式（I）のPNAである。やはり好ましいのは、ＲⁱおよびＲ^jが共にアダマントイル基である式（I）を有するPNAである。さらに好ましいのは前記Ｒ^7'の少なくとも１つがＤ−リジンの側鎖である式（I）のPNAである。好ましくは、置換基Ｒ^7'が結合する炭素原子は、立体化学的に濃縮されている。以下、「立体化学的に濃縮される」は、有益な影響を提供するのに十分な量、１つの立体異性体が他の立体異性体より多いことを意味する。好ましくは、１つの立体異性体が、50％以上を占める。より好ましくは、１つの立体異性体が、80 ％以上を占める。さらにより好ましくは、１つの立体異性体が、90％以上を占める。さらにより好ましくは、１つの立体異性体が、95％以上を占める。さらにより好ましくは、１つの立体異性体が、99％以上を占める。さらにより好ましくは、１つの立体異性体が、実質的に全量で（quantitatively）存在する。本発明はまた、リポソームに取り込まれたペプチド核酸を含むリポソーム組成物であって、前記ペプチド核酸が：各Ｌは、独立して、天然発生核酸塩基または非天然発生核酸塩基であり；各Ｒ^7'は水素または天然発生または非天然発生アミノ酸の側鎖であり；Ｒ^hはOH，NH₂、またはNHLysNH₂であり；ＲⁱおよびＲ^jの各々は、独立して、親脂質基または蛍光基で標識されたアミノ酸であり；またはＲⁱおよびＲ^jは共に親脂質基であり；ｎは１から30までの整数である式（I）を有する、前記リポソーム組成物も提供する。Ｒⁱが蛍光基で標識されたＤ−リジンであり、そしてＲ^jがアダマントイル基である式（I）を有するPNAが好ましい。さらにより好ましいのは、Ｒⁱがフルオレセインで標識されたＤ−リジンであり、そしてＲ^jがアダマントイル基である式（I）のPNAである。やはり好ましいのは、ＲⁱおよびＲ^jが共にアダマントイル基である式（I）を有するPNAである。さらに好ましいのは前記Ｒ^7'の少なくとも１つがＤ−リジンの側鎖である式（I）のPNAである。好ましくは、置換基Ｒ^7'が結合する炭素原子は、立体化学的に濃縮されている。本発明のPNAは、溶液中または固相上いずれかでの標準的ペプチド合成法の適応により合成される。本発明はさらに、PNA骨格にアミノ酸側鎖を取り込み、親脂質基をPNAに結合させ、そしてPNAをリポソームに導入することにより、ペプチド核酸の細胞取り込みおよび分布を亢進させる方法も提供する。図の簡単な説明図１は、いくつかの親脂質基の構造を示す。発明の詳細な説明本発明にしたがって、亢進した細胞取り込みおよび分布を示すペプチド核酸およびリポソーム組成物が提供される。本発明のペプチド核酸（PNA）は、適切なリンカーによりポリアミド骨格に結合する複数の核酸塩基から構築されている。本発明の１つの好ましい態様において、PNAは親脂質基に結合している。本明細書において、「結合」は親脂質基を本発明のPNAに結合させることを指す。別の好ましい態様において、本発明のPNAのポリアミド骨格は誘導体化されている。本明細書において、「誘導体化」は、少なくとも１つの天然発生または非天然発生アミノ酸の側鎖をポリアミド骨格に結合することにより、PNAの骨格を修飾することを指す。本発明のリポソーム組成物は、リポソームに取り込まれている本発明のペプチド核酸を含む。したがって、本発明のリポソーム組成物は、リポソームにより被包されているPNAを含む。本発明のPNAおよびリポソーム組成物は、亢進した細胞取り込みおよび分布を示す。本発明のPNAは、式（I）を有し、ここで核酸塩基Ｌは天然に見られる位で天然発生核酸塩基と結合する、すなわち、アデニンまたはグアニンに対し９位で、そしてチミンまたはシトシン、非天然発生核酸塩基（核酸塩基類似体）または核酸塩基結合部分に対し１位で結合する。典型的な核酸塩基には、４つの主要な天然発生DNA核酸塩基（すなわち、チミン、シトシン、アデニンおよびグアニン）、他の天然発生核酸塩基（例えば、イノシン、ウラシル、５−メチルシトシン、チオウラシルおよび2,6−ジアミノプリン）および人工核酸塩基（例えば、ブロモチミン、アザアデニン類およびアザグアニン類）が含まれる。これらの核酸塩基は、適切なリンカーを通じ、ポリアミド骨格に結合する。式（I）のPNAには、その構造内に１つまたはそれ以上のアミノ酸部分が含まれる。これらのアミノ酸は、天然発生でも、または非天然発生でもよい。天然発生アミノ酸には、キラル中心がＤ−立体配置を有するα−アミノ酸が含まれる。こうした天然発生アミノ酸は、必須または非必須アミノ酸のどちらであってもよい。式（I）の本発明のPNAに用いられる非天然発生アミノ酸には、キラル中心がＬ −立体配置を持つα−アミノ酸が含まれる。非天然発生アミノ酸にはまた、天然には存在せず、そして合成により調製される、例えばハロ−およびシアノ−置換ベンジル、テトラヒドロイソキノリルメチル、シクロヘキシルメチル、およびピリジルメチルなどの通常のものでない側鎖を持つアミノ酸が含まれる。他の合成アミノ酸には、β−アミノ酸が含まれる。アミノ酸は、式（I）のPNAに、用いられる単量体の一部として、またはPNAの末端で、導入されてもよい。PNA合成に用いられる単量体構築ブロックに、上述のアミノ酸のいずれを取り込むことも可能である。好ましくは、用いられるアミノ酸はグリシンであり、Ｒ^7'はＨである。Ｒ^7'はまた、メチル、エチル、ベンジル、イソプロピル、p−ヒドロキシベンジル、ハロベンジル、カルボキシメチル、テトラヒドロイソキノリニルメチル、またはアミノヘキサノイルであってもよい。アミノ酸はまた、末端Ｒ^h−CO−基が天然または非天然発生アミノ酸、α− またはβ−アミノ酸のいずれかに由来するアミノアシル基を示し、そしてα−キラル中心でＤ−またはＬ−立体配置を持つように、PNAのＣ末端に結合させてもよい。好ましくは、Ｃ末端アミノ酸はリジンである。アミノ酸はまた、ＲⁱおよびＲ^jの各々が、独立した、天然または非天然発生アミノ酸、α−またはβ−アミノ酸のいずれかに由来するアミノアシル基であり、そしてα−キラル中心でＤ −またはＬ−立体配置を持ってもよい、構造（I）のPNAのＮ末端に取り込まれてもよい。好ましくは、Ｎ末端アミノ酸はリジンである。本発明の式（I）のPNAに結合する親脂質基には、天然および合成脂肪酸、脂肪アルコール誘導体およびジアシルグリセロール誘導体、例えば、アジピン酸、パルミチン酸、デカン酸、オクタデカン酸、オレイン酸、エライジン酸、リノレン酸、胆汁酸、ヘプチルコハク酸、パルミチルコハク酸、ポリグリコール酸、ジオクタデシルグリセロールホスファチジル酸、ジオレオイルグリセロールホスファチジル酸、アダマントイル、オクタデシルオキシカロボニル、およびデカリノイルなどが含まれる。これらの親脂質基は、式（I）のPNA分子のいかなる適切な位置で結合してもよい。好ましくは、親脂質基は、ＲⁱおよびＲ^jの各々が独立して、親脂質基であってもよい、本発明のPNAのＮ末端に結合する。より好ましくは、ＲⁱおよびＲ^jは共にアダマントイル基である。本発明のPNAは、該PNAを検出する簡便な手段を可能にするように、標識、例えば蛍光基が取り込まれている式（I）を有する。蛍光基には、限定されるわけではないが、フルオレセイン、ローダミン、ピレニル、シアニン色素、Cy5^TM（Bio logical Detection Systems，Inc.、ペンシルバニア州ピッツバーグ）などの色素、およびこうした色素の誘導体が含まれる。これらは式（I）のPNAに、該 PNAのいかなる適切な位で取り込まれてもよい。好ましくは各Ｒⁱは蛍光基が結合する化学部分である。Ｒⁱが蛍光基で誘導体化されているアミノ酸であるのがより好ましい。Ｒⁱがε−フルオレセイニル基を持つリジンであるのがさらにより好ましい。本発明のリポソーム組成物は、リポソームに取り込まれている本発明のPNAを含む。リポソーム組成物は、亢進した細胞取り込みおよび分布を示す。リポソームはコロイド分散系であり、そして取り込まれたPNAを環境から保護しながら標的領域に輸送する安定した搬送系を構成する。リポソームは、本発明のPNAのin vitroおよびin vivo安定性を亢進させる、安定した搬送媒体に相当する。リポソームに取り込まれた本発明のPNAを含む、本発明のリポソーム組成物は、当業者に知られる標準的方法にしたがい、適切でそして許容されるキャリアーおよびアジュバントを用い、薬剤組成物として処方してもよい。用いてもよいリポソームには、小単膜小胞(small unilamellar vesicle)(SUV) 、大単膜小胞(large unilamellar vesicle)（LUV）および多膜小胞(multilamell ar vesicle)（MLV）が含まれる。大きさ0.2から0.4μｍの範囲にあるLUVは、水性緩衝剤を含む大きな高分子のかなりの割合を被包することが可能であることが示されてきている（例えばRNA、DNAおよび損なわれていない（intact）ビリオンは水性である内部に被包され、そして生物学的活性型で脳細胞に搬送されることが可能である：Fraleyら,Trends Biochem.Sci.,1981,6,77）。リポソーム組成物は、通常、脂質、特にリン脂質、特に高相転移温度リン脂質が、通常、１つまたはそれ以上のステロイド、特にコレステロールと結合した前記脂質の結合体である。リポソーム産生に有用な脂質の例には、ホスファチジル化合物、例えばホスファチジルグリセロール、ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルエタノールアミン、スフィンゴ脂質類、セレブロシド類およびガングリオシド類が含まれる。特に有用なのは、脂質部分が14から18の炭素原子、特に 16から18の炭素原子を含み、そして飽和している（14から18の炭素原子鎖中に二重結合を欠く）ジアシルホスファチジルグリセロール類である。リン脂質の例には、ホスフアチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリンおよびジステアロイルホスファチジルコリンが含まれる。リポソーム標的化は受動的でも能動的でもどちらでもよい。受動標的化は、リポソームが、洞様毛細血管を含む器官内の細網内皮系の細胞に分布する、自然の傾向を利用する。能動標的化は、対照的に、局在化の天然発生部位以外の器官および細胞種への分布を達成するために、ウイルスタンパク質コート（Morishita ら,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,1993,90,8474）、モノクローナル抗体（またはその適切な結合部分）、糖、糖脂質またはタンパク質（またはその適切なオリゴペプチド断片）などの特定のリガンドにカップリングさせることによる、またはリポソームの組成物および／または大きさを変化させることによる、リポソームの修飾を伴う。標的化されるコロイド分散系の表面は多様な方法で修飾されてもよい。リポソーム標的化搬送系の場合、標的リガンドを脂質二重層と強く結合させたままにするため、リポソームの脂質二重層に脂質基を取り込んでもよい。脂質鎖を標的リガンドに結合させるため、多様な連結基を用いてもよい。標的リガンドは、本発明のオリゴヌクレオチドの搬送が望ましい細胞上に顕著に見られる特定の細胞表面分子に結合し、例えば（1）搬送が望ましい細胞により顕著に発現される特定の細胞受容体により結合される、ホルモン、成長因子またはそれらの適切なオリゴペプチド断片；または（2）標的細胞に顕著に見られる抗原性エピトープに特異的に結合する、ポリクローナルまたはモノクローナル抗体、またはそれらの適切な断片（例えば、Fab；F(ab')₂）であってもよい。２つまたはそれ以上の生体活性剤（例えばPNAおよび慣用薬剤、または２つのPNA）を単一のリポソーム内で組み合わせ、そして該リポソームにより搬送してもよい。細胞内安定性および／またはその含有物の標的化を亢進するコロイド分散系に剤を添加することも可能である。本発明のPNAは、遺伝子調節（例えば遺伝子標的薬剤）、診断法、バイオテクノロジーおよび他の研究目的に用いてもよい。該PNAはまた、RNAおよび一本鎖DN A（ssDNA）を標的とし、両方のアンチセンス型遺伝子制御部分を産生するのに用いてもよいし、そして例えば核酸の同定および精製のためのハイブリダイゼーションプローブとして用いてもよい。さらに、該PNAを二本鎖DNA（dsDNA）と三重らせんを形成するように修飾してもよい。dsDNAに配列特異的に結合する化合物は、遺伝子標的薬剤としての適用を有する。これらの化合物は、癌、後天性免疫不全症（AIDS）および他のウイルス感染および遺伝的障害を含む、多様な疾患を治療するのに非常に有用な薬剤である。さらに、これらの化合物は、研究、診断法において、そして特定の核酸の検出および単離のために用いてもよい。遺伝子標的薬剤は、標的遺伝子の制御領域（プロモーター）に相補的な核酸塩基配列（好ましくは10から20単位を含む）を持つよう設計される。したがって、投与の際、遺伝子標的薬剤は該プロモーターに結合し、そしてRNAポリメラーゼがプロモーターに近づくのを妨げる。その結果、mRNAそしてしたがって遺伝子産物（タンパク質）はまったく産生されない。標的がウイルスにとって必須の遺伝子内にあるならば、生存可能な（viable）ウイルス粒子はまったく産生されないであろう。また別に、標的領域はプロモーターから下流であり、RNAポリメラーゼがこの位で終結するようにし、したがって機能しない一部切除mRNA／タンパク質を形成してもよい。 PNAオリゴマーの合成反応中、分子を固体マトリックス上に固定する原理は、固相合成またはメリフィールド(Merrifield)合成として知られる。Merrifield,J.Am.Chem.Soc.,1963,8 5,2149；およびScience,1986,232,341。アミノ酸のペプチドへの段階的または断片的固相構築に関する確立された方法は、通常、架橋スチレン−ジビニルベンゼン・コポリマーのビーズ化マトリックスを使用する。架橋コポリマーは、スチレン単量体のパール重合にジビニルベンゼンの混合物が添加されることにより形成される。通常、１から2％の架橋が使用される。こうしたマトリックスを、本発明の固相PNA合成に用いてもよい。固相の最初の官能化（functionalization）に関し、伝統的固相ペプチド合成と関連し、50以上の方法が記載されている。BaranyおよびMerrifield,“The Pep tides”中，第２巻，Academic Press，ニューヨーク，1979，pp.1；およびStewa rtおよびYoung,“Solid Phase Peptide Synthesis”中，第２版，Pierce Chemic al Company，イリノイ，1984。その性質に関わらず、固相上に官能性を導入する目的は、コポリマー固体支持体および該固体支持体にカップリングされる第一のアミノ酸のＣ末端の間に固定連結（anchoring linkage）を形成することである。認識されるであろうように、固定連結はまた、固体支持体およびアミノ酸Ｎ末端の間に形成されてもよい。固相に存在する官能基の「濃度」は、一般的にグラム当たりのミリモル（mmol/g）で表される。これらの確立された方法はすべて、原則として、本発明の背景内で有用である。 PNA合成の好ましい方法は、最初の官能性としてアミノメチルを使用する。アミノメチルは、ほとんど全量がカルボン酸基とアミド結合を形成するため、「スペーサー」または「ハンドル」基として特に有用である。対応する多くのスペーサーまたはハンドル形成二官能試薬が記載されている。Baranyら,Int.J.Peptide Protein Res.,1987,30,705。特定の官能性（例えばベンズヒドリルアミノ、4− メチルベンズヒドリルアミノおよび4−メトキシベンズヒドリルアミノ）は、PNA 鎖のＣ末端がアミドとして放出されるように、固体支持体から合成PNA鎖を切断する目的で取り込まれてもよく、スペーサー基の導入を必要としない。いかなるこうした官能性も、本発明の背景において有益に使用されてもよい。典型的なＮ保護基は、tert−ブチルオキシカルボニル(BOC)（Carpino,J.Am.Ch em.Soc.,1957,79,4427；McKeyら,J.Am.Chem.Soc.,1957,79,4686；およびAnderso nら,J.Am.Chem.Soc.,1957,79,6180）、9−フルオレニルメチルオキシカルボニル（FMOC）(Carpinoら,J.Am.Chem.Soc.,1970,92,5748およびJ.Org.Chem.,1972,37, 3404)、Adoc(Hassら,J.Am.Chem.Soc.,1966,88,1988)、Bpoc（Sieber,Helv.Chem. Acta.,1968,51,614）、Mcb（Bradyら,J.Org.Chem.,1977,42,143）、Bic（Kempら ,Tetrahedron,1975,4624）、ｏ−ニトロフェニルスルフェニル(Nps)（Zervasら, J.Am.Chem.Soc.,1963,85,3660）およびジチアスクシノイル（Dts）（Baranyら,J .Am.Chem.Soc.,1977,99,7363）と共に、当業に知られる他の基である。これらのアミノ保護基、特に広く用いられるウレタン官能性に基づくものは、ほとんどの α−アミノ酸のカップリング中、ラセミ化を妨げる（容易に形成されるオキサゾリノン（アズラクトン）中間体の互変異化により仲介される（Goodmanら,J.Am.C hem.Soc.,1964,86,2918））。こうしたアミノ保護基に加え、非ウレタン型アミノ保護基もまた、PNA分子を構築する際、適用されることが可能である。側鎖保護基は、反復アミノ脱保護サイクルの条件に耐性でなければならないため、側鎖保護基の選択は、一般的に、アミノ保護基の選択に依存する。これは、化学的にPNA分子を構築する全体の戦略が、例えば（上述の「BOC−ベンジル」アプローチの場合のように）アミノおよび側鎖保護基の異なる酸安定性に頼っていようと、または（上述の「FMOC−t−Bu」アプローチのように）直交（orthogona l）すなわち化学選択的（chemoselective）保護計画を使用しようと、真実である。第一のアミノ酸のカップリングに続き、固相合成の次の段階は、望ましいPNA 鎖の系統的な仕上げ（elaboration）である。この仕上げには、反復脱保護／カップリングサイクルが含まれる。最後にカップリングされたアミノ酸上の一時的な保護基、例えばBOCまたはFMOCは、Ｎ末端アミン官能基を遊離させるように、適切な処理により、例えば、BOCの場合のトリフルオロ酢酸など酸分解により、またはFMOCの場合のピペリジンなどの塩基処理により、全量が除去される。次の望ましいＮ保護アミノ酸をその後、最後にカップリングされたアミノ酸のＮ末端にカップリングする。この、最後にカップリングされたアミノ酸のＮ末端と、アミノ酸のＣ末端とのカップリングは、いくつかの方法により達成することが可能である。例えば、後続のアミノ酸をいくつかの方法のいずれで活性化されたカルボキシル基を含む形で提供することにより達成してもよく、前記の活性化の方法には、フタルイミドエステル（Nefkensら,J.Am.Chem.Soc.,1961,83,1263 ）、ペンタフルオロフェニルエステル（Kovacsら,J.Am.Chem.Soc.,1963,85,183 ）、イミダゾールエステル（Liら,J.Am.Chem.Soc.,1970,92,7608）、および3− ヒドロキシ−4−オキソ−3,4−ジヒドロキナゾリン（Dhbt-OH）エステル（Konig ら,Chem.Ber.,1973,103,2024および2034）などの活性エステル誘導体の最初の形成、または対称無水物（Wielandら,Angew.Chem.,Int.Ed.Engl.,1971,10,336）などの無水物の最初の形成が含まれる。また別に、後続のアミノ酸のカルボキシル基を、例えば、ジシクロヘキシルカルボジイミド（Sheehanら,J.Am.Chem.Soc.,1 955,77,1067）またはその誘導体などの縮合試薬の補助と共に、最後にカップリングされたアミノ酸のＮ末端と直接反応させてもよい。第二級アミノ基を含むPN A分子を構築する際には、ベンゾトリアゾリルＮ−オキシ−トリスジメチルアミノホスホニウム・ヘキサフルオロリン酸（ BOP）、「カストロ試薬（Castro'sreagent）」（Rivailleら,Tetrahedron,1980,36 ,3413）が推奨される。保護基を含む、望ましいPNA鎖の構築に続き、次の段階は、通常、PNA鎖のアミノ酸部分の脱保護および合成されたPNAの固体支持体からの切断であろう。これらの過程は、実質的に同時に行い、それにより望ましい型の遊離PNA分子を提供してもよい。上述の「BOC−ベンジル」保護計画において、側鎖の最後の脱保護および固体支持体からのPNA分子の放出は、強酸、例えば無水HF（Sakakibaraら,Bull.Chem. Soc.Jpn.,1965,38,4921）、ホウ素トリス（トリフルオロ酢酸）（Plessら，Helv .Chim.Acta,1973,46,1609）および、トリフルオロメタンスルホン酸およびメタンスルホン酸（Yajimaら,J.Chem.Soc.,Chem.Comm.,1974,107）などのスルホン酸の使用により行われるのが最も多い。強酸（例えば無水HF）脱保護法は、PNA鎖における感受性残基のアルキル化およびアシル化につながる可能性がある、高い反応性のカルボカチオンを産生する可能性がある。こうした副反応は、アニソール、フェノール、ジメチルスルフィド、およびメルカプトエタノールなどのスカベンジャーの存在により、部分的にしか避けられない。したがって、有害なカルボカチオンの前駆体を除去し不活性スルホニウム塩を形成する、スルフィド補助酸分解S_N2脱保護法(Tamら,J.Am.Chem.Soc.,1983,105,6442およびJ.Am.Chem.Soc. ,1986,108,5242)、いわゆる「低（low）」法が、ペプチドおよびPNA合成にしばしば使用される。脱保護および／またはPNA固体支持体結合の最後の切断の他の方法には、塩基触媒アルコーリシス（Bartonら,J.Am.Chem.Soc.,1973,95,4501）、アンモノリシス、加ヒドラジン分解(Bodanszkyら,Chem.Ind.,1964,1423)、水素分解(Jones,Tetrahedron Lett.1977，2853およびSchlatterら，TetrahedronLe tt．1977，2861)および光分解（RichおよびGurwara,J.Am.Chem.Soc.,1975,97,15 75）を含んでもよい。最後に、慣用ペプチドの化学合成と対照的に、アミノエチルグリシル骨格単位に基づくものなどアキラルPNAの段階的鎖構築は、Ｎ末端またはＣ末端どちらから出発してもよい。当業者は、Ｃ末端で出発する合成は、典型的には保護アミン基および遊離または活性化酸基を使用し、そしてＮ末端で出発する合成は、典型的には保護酸基および遊離または活性化アミン基を使用することを認識するであろう。治療および予防標的となる可能性があるものには、単純疱疹ウイルス（herpes simplex virus）(HSV)、ヒト乳頭腫ウイルス（human papilloma virus）(HPV)、ヒト免疫不全ウイルス（human immunodeficiency virus）（HIV）、カンジダアルビカンス（candida albicans）、インフルエンザウイルス（influenza virus ）、サイトメガロウイルス（cytomegalovirus）（CMV）、細胞間接着分子（ICAM ）、5−リポキシゲナーゼ（5−LO）、ホスホリパーゼＡ₂（PLA₂）、プロテインキナーゼＣ（PKC）、およびrasオンコジーンが含まれる。こうした標的の潜在的な治療には、眼、***、性器、および全身の単純疱疹ＩおよびII感染；性器いぼ；子宮頚癌；尋常性ゆうぜい；カポジ肉腫；AIDS；皮膚および全身の真菌感染；インフルエンザ；肺炎；免疫抑制された患者における網膜炎および肺炎；単核細胞症；眼、皮膚および全身の炎症；心臓血管疾患；癌；喘息；乾癬；心臓血管虚脱；心筋梗塞；胃腸疾患；腎臓疾患；慢性関節リウマチ；変形性関節症；急性膵炎；敗血症ショック；およびクローン病が含まれる。一般的に、治療または予防的処置には、こうした療法が必要であると疑われる患者に、通常、薬学的に許容されるキャリアー中の本発明のPNAまたはリポソーム組成物を、特定の疾患の性質、その重症度および患者の全体的な状態に依存して変化するであろう量および期間、投与する。本発明のPNAおよびリポソーム組成物は、キャリアー、増粘剤（thickener）、希釈剤、緩衝剤、保存剤、界面活性剤およびそれらに匹敵するものを含んでもよい、薬剤組成物に処方してもよい。薬剤組成物はまた、ペプチド核酸に加え、１つまたはそれ以上の活性成分、例えば抗菌剤、抗炎症剤、麻酔剤およびそれらに匹敵するものも含んでもよい。薬剤組成物は、局所または全身性治療が望ましいのかに依存して、そして治療される領域に依存して、多くの方法で投与してもよい。投与は局所（眼、膣、直腸、鼻腔内、経皮を含む）、経口または非経口（parenteral）、例えば静脈内点滴、皮下、腹腔内または筋内注射または鞘内または脳室内投与によってもよい。局所投与のための処方には、経皮パッチ（patch）、軟膏、ローション、クリーム、ゲル、ドロップ、座薬、スプレー、液体および粉末が含まれてもよい。慣用的な薬剤キャリアー、核酸キャリアー、水性、粉末または油性基剤（base）、増粘剤およびそれらに匹敵するものが、特定の環境では必要または望ましい可能性がある。被膜コンドーム、手袋およびそれらに匹敵するものもまた、有用である可能性がある。局所投与にはまた、本発明のPNAおよびリポソーム組成物のエレクトロポレーションによる動物の表皮への搬送も含まれる。1996年12月12日に公表されたZewartら、WO 96/39531。経口投与のための組成物には、粉末または顆粒、水性または非水性媒体中の懸濁物または溶液、カプセル、サシェー剤（sachet）、または錠剤が含まれる。増粘剤、香料、希釈剤、乳化剤、分散補助剤または結合剤が望ましい。本発明のPNAおよびリポソーム組成物を動物の目の硝子体液に直接搬送するための硝子体内注射が、1997年１月21に発行された米国特許第5,595,978号に記載され、その内容は本明細書に援用される。管状器官または組織（例えば、動脈、静脈、尿管または尿道）の分離された部分に本発明のPNAおよびリポソーム組成物を直接搬送するための管内投与は、こうした器官または組織の管腔に影響を与える疾患または状態がある患者の治療に望ましい可能性がある。この投与形態を達成するため、カテーテルまたはカニューレを適切な手段により外科的に導入する。治療しようとする管器官または組織の部分を分離した後、本発明のPNAまたはリポソーム組成物をカテーテルまたはカニューレを通じ注入する。注入カテーテルまたはカニューレをその後、除去し、そして管器官または組織中の流動を、その部分の分離を達成した結紮糸を除去することにより復活させる。Morishitaら,Proc.Natl.Acad.Sci.,U.S.A.,1993,90 ,8474。本発明のPNAまたはリポソーム組成物を患者の脳に直接搬送するための脳室内投与は、脳に影響を与える疾患または状態がある患者の治療に望ましい可能性がある。投与のこの形態を達成するため、シリコンカテーテルを脳室内に外科的に導入し、そして腹部領域に外科的に移植されている皮下注入ポンプ(Medtronic I nc.、ミネソタ州ミネアポリス)に連結する。Zimmら,Cancer Research,1984,44,1 698；およびShaw,Cancer,1993,72(11 Suppl.),3416。該ポンプを用い、 PNAまたはリポソーム組成物を注入し、そして外部プログラミング装置の補助により、正確な投薬調整および投薬スケジュールの変動を可能にする。ポンプの貯蔵容量は18から20mlであり、そして注入速度は毎時0.1mlから１mlの範囲にあってもよい。毎日から月ごとの範囲の投与頻度、および体重kg当たり0.01μｇから 100ｇの範囲の投与される用量に依存して、ポンプ貯蔵容器は３から10週間間隔で補充される。ポンプの補充はポンプの自動防漏隔膜の経皮穿刺により達成される。脳室内投与の組成物は、無菌水溶液を含んでもよく、これはまた緩衝剤、希釈剤および他の適切な添加物も含んでもよい。本発明のPNAまたはリポソーム組成物を患者の脊柱に直接搬送するための鞘内投与は、中枢神経系の疾患がある患者の治療に望ましい可能性がある。投与のこの経路を達成するため、患者のL3−4腰部脊柱間空にシリコンカテーテルを外科的に移植し、そして上腹部領域に外科的に移植されている皮下注入ポンプに連結する。LuerおよびHatton,TheAnnals of Pharmacotherapy,1993,27,912；Ettinge rら,Cancer,1978,41,1270；およびYaidaら,Regul.Pept.,1995,59,193。該ポンプを用い、PNAまたはリポソーム組成物を注入し、そして外部プログラミング装置の補助により、正確な投薬調整および投薬スケジュールの変動を可能にする。ポンプの貯蔵容量は18から20mlであり、注入速度は毎時0.1mlから１mlの範囲にあってもよい。毎日から月ごとの範囲の投与頻度、および体重kg当たり0.01μｇから100ｇの範囲の投与される用量に依存して、ポンプ貯蔵容器は３から10週間間隔で補充される。ポンプの補充はポンプの自動防漏隔膜の単回経皮穿刺により達成される。鞘内投与の組成物は、無菌水溶液を含んでもよく、これはまた緩衝剤、希釈剤および他の適切な添加物も含んでもよい。本方法を介し、脳または脊柱以外の領域への搬送を達成するため、シリコンカテーテルを、例えば肝臓への搬送のため肝動脈への皮下注入ポンプに連結するよう形成してもよい。Kemenyら,Cancer,1993,71,1964。注入ポンプはまた、全身搬送を達成するのに用いてもよい。Ewelら，Cancer Research，1992，52，3005；およびRubensteinら,J.Surg.Oncol.,1996,62,194。非経口、鞘内または脳室内投与のための組成物、またはリポソーム系は、無菌水溶液を含んでもよく、これはまた緩衝剤、希釈剤および他の適切な添加物も含んでもよい。用量決定は、治療されるべき疾患状態の重症度および反応性に依存し、治療経過は数日から数か月、または治癒が達成されるまでまたは疾患状態の軽減が達成されるまで続く。最適投薬スケジュールは患者体内の薬剤集積測定から計算されてもよい。一般の当業者は、容易に、最適用量、投薬方法論および反復率を決定することが可能である。最適用量は、個々のPNAの相対効能に依存して変化する可能性があり、そして一般的にin vitroおよびin vivo動物モデルで有効であることが見出されるEC₅₀に基づいて概算することが可能である。一般的に用量は体重kg当たり0.01μｇから100ｇであり、そして毎日１回またはそれ以上、毎週、毎月、または毎年、または２から20年毎に１回の投与でもよい。単量体サブユニットの合成単量体サブユニットは、好ましくは、実施例１および２に記載されるように、保護／脱保護過程を介し、（BOC−アミノエチル）グリシンのメチルまたはエチルエステルのいずれかの調製で始まる一般的な計画により合成される。チミン単量体の台成は実施例４および５に記載され、そして保護シトシン単量体の合成は実施例６に記載される。保護アデニン単量体の合成は、ブロモ酢酸エチルでのアデニンのアルキル化( 実施例７)およびＸ線結晶解析による置換位（すなわち９位）の確認を含む。その後、Ｎ⁶−アミノ基を、試薬Ｎ−エチル−ベンジルオキシカルボニルイミダゾール・テトラフルオロホウ酸を用いることにより、ベンジルオキシカルボニル基で保護する（実施例８）。産物エステルの単純加水分解（実施例９）によりＮ⁶ −ベンジルオキシカルボニル−9−カルボキシメチルアデニンが得られ（実施例1 0および11）、これを標準的PNAオリゴマー合成に用いた。保護Ｇ単量体の合成には、出発物質、2−アミノ−6−クロロプリンをブロモ酢酸でアルキル化し（実施例12）、そしてその後6−クロロ基をベンジルオキシ基で置換した（実施例13）。生じた酸をカップリング剤として用いる剤PyBrop^TMと共に（BOC−アミノエチル）グリシンメチルエステル（実施例２由来）とカップリングさせ、そして生じたエステルを加水分解し（実施例14）、保護Ｇ単量体を得た。PNAオリゴマー合成に続き、Ｏ⁶−ベンジル基を、最後のHF切断段階において除去した。本発明のさらなる目的、利点、および新規の特徴は、これらの以下の実施例を調べることにより、当業者に明白になるであろう。以下の実施例は本発明を例示し、そして本発明を制限することを意図しない。当業者は、本明細書に記載される特定の物質、組成物および方法の多くの同等物を認識し、または慣例の実験を通し確認することが可能であろう。こうした同等物は本発明の範囲内であると見なされる。一般的な言及以下の略語は実験例に用いられる：DMF、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド；Tyr 、チロシン；Lys、リジン；DCC、Ｎ,Ｎ−ジシクロヘキシル−カルボジイミド；D CU、Ｎ,Ｎ−ジシクロヘキシル尿素；THF、テトラヒドロフラン；aeg、Ｎ−アセチル−Ｎ−（2'−アミノエチル）グリシン；aek、Ｎ−アセチル−Ｎ−（2'−アミノエチル）リジン；Pfp、ペンタフルオロフェニル;BOC，tert−ブトキシカルボニル：Ｚ、ベンジルオキシカルボニル；NMR、核磁気共鳴；s、一重線；d、二重線；dd、二重線の二重線；t、三重線；q、四重線；m、多重線；b、広い（broa d）；δ、化学シフト；ppm、百万分率（化学シフト）。 NMRスペクトルは、テトラメチルシランを内部標準として用い、JEOL FX90Q分光計またはBruker 250 MHz上に記録された。質量分析は、VG FAB供給源およびプローブに適応させたMassLab VG 12-250四重極（quadropole）計器上で行った。融点はBuchi融点装置上に記録され、そして修正されていない。Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミドは4Å分子ふるい上で乾燥させ、蒸留しそして4Å分子ふるい上で保存した。ピリジン(HPLC品質）を4Å分子ふるい上で乾燥させ、そして保存した。他の使用溶媒は入手可能な最高の品質であるか、または使用前に蒸留した。ジオキサンは使用前に塩基性アルミナを通過させた。BOC−無水物、4−ニトロフェノール、ブロモ酢酸メチル、ベンジルオキシカルボニルクロリド、ペンタフルオロフェノールはすべて、Aldrich Chemical Companyから得た。チミン、シトシン、アデニンはすべて、Sigmaから得た。薄層クロマトグラフィー（tlc）は以下の溶媒系を用いて行った：（1）クロロホルム：トリエチルアミン：メタノール、７：１：２；（2）塩化メチレン：メタノール、９：１；（3）クロロホルム：メタノール：酢酸、85：10:5。点はUV （254nm）およびまたはニンヒドリン溶液（1−ブタノール1000mlおよび酢酸30ml 中、ニンヒドリン３g）をスプレーした後120℃で５分加熱し、そしてスプレー、加熱を再度行うことにより視覚化した。 PNAオリゴマーのカルボキシ末端（Ｃ末端）を多様な官能基で置換してもよい。１つの方法では、これは異なる樹脂の使用を通じて行われる。PNAオリゴマーのアミノ末端（Ｎ末端）もまた、最後のカップリング段階において最後のPNA単量体に対し、カルボン酸に基づくキャップ試薬を用いてキャッピングしてもよく、または多用な結合基で置換してもよい。ＣおよびＮ末端基の代表的な例を以下に示す。使用される樹脂調製されるaeg-PNA／aeg-PNA誘導体（キャッピング試薬＝アセチル）メリフィールド CH₃CONH-(PNA)-COOH H₂N-(PNA)-COOH Lys置換メリフィールド H₂N-(PNA)-Lys-COOH メリフィールド H₂N-(PNA)-CONH₂ Lys置換MBHA H₂N-(PNA)-Lys-CONH₂ Lys置換メリフィールド CH₃CONH-(PNA)-Lys-COOH H₂N-(PNA)-COOH Lys置換メリフィールド H₂N-(PNA)-Lys-COOH メリフィールド H₂N-(PNA)-CONH₂ MBHA H₂N-(PNA)-CONH₂ Lys置換MBHA H₂N-(PNA)-Lys-CONH₂ MBHA CH₃CONH-(PNA)-CONH₂ H₂N-(PNA)-CONH₂ Lys置換MBHA CH₃CONH-(PNA)-Lys-CONH₂ （キャッピング試薬＝Ｎ−Bocグリシン）メリフィールド BocGly-(PNA)-COOH Lys置換メリフィールド BocGly-(PNA)-Lys-COOH MBHA BocGly-(PNA)-CONH₂ Lys置換MBHA BocGly-(PNA)-Lys-CONH₂ （キャッピング試薬＝1.グリシン；2.コール酸（Chol））メリフィールド Chol-Gly-(PNA)-COOH Lys置換メリフィールド Chol-Gly-(PNA)-Lys-COOH MBHA Chol-Gly-(PNA)-CONH₂ Lys置換MBHA Chol-Gly-(PNA)-Lys-CONH₂ さらなる例は、1994年７月15日に出願され、そして本明細書に援用される米国特許出願第08/275,951号に見られる。実施例１Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−Ｎ'−（BOC−アミノエチル）グリシンの合成アミノエチルグリシン（52.86g、0.447mol）を水（900ml）に溶解し、そしてジオキサン（900ml）を添加した。２Ｎ NaOHでｐＨを11.2に調整した。ｐＨを11 .2に維持しながら、tert−ブチル−p−ニトロフェニルカルボネート（128.4g、0 .537mol）をジオキサン（720ml）に溶解し、そして２時間にわたり一滴ずつ添加した。少なくともさらに３時間ｐＨを11.2に維持し、そしてその後、攪拌しながら一晩置いた。黄色溶液を０℃に冷却し、そして２Ｎ HClでpHを3.5に調整した。混合物をクロロホルム（4ｘ100ml）で洗浄し、そして０℃で２ＮNaOHで水相のｐＨを9.5に再調整した。ベンジルオキシカルボニルクロリド（73.5ml、0.515mo l）を半時間にわたり添加する一方、２Ｎ NaOHでｐＨを9.5に維持した。続く４時間、頻繁にｐＨを調整し、そして溶液を攪拌しながら一晩置いた。翌日、溶液をエーテル（3x600ml）で洗浄し、そしてその後０℃で２Ｎ HClで溶液のｐＨを1 .5に調整した。表題化合物を酢酸エチル（5x1000ml）を用いた抽出により単離した。酢酸エチル溶液を硫酸マグネシウムで乾燥させ、そして真空で蒸発乾固させた。これにより産物138ｇが得られ,これをエーテル(300 ml)に溶解し、そして石油エーテル（1800ml）の添加により沈澱させた。収量124 .7ｇ（79％）。融点64.5−85℃。C₁₇H₂₄N₂O₆分析の観察値（計算値）、ＵＶスペクトル（200nm−300nm）が同一であり、小さいピークがビス−Ｚ−AEG からなることが示される。実施例２Ｎ'−BOC−アミノエチルグリシンエステルの合成（a）エチルエステル：Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−Ｎ'−（BOC−アミノエチル）グリシン（60g、0.170mol）およびＮ,Ｎ−ジメチル−4−アミノピリジン（6g）を無水エタノール（500ml）に溶解し、そしてDCC（42.2g、0.204mol）を添加する前に0℃に冷却した。氷槽を５分後に除去し、そしてさらに２時間攪拌を続けた。沈澱したDCU（32.5g、乾燥）を濾過により除去し、そしてエーテル（ 3ｘ100ml）で洗浄した。合わせた濾過物を、希釈した硫酸水素カリウム（2ｘ400 ml）、希釈した炭酸水素ナトリウム（2ｘ400ml）および飽和塩化ナトリウム（1 ｘ400ml）で連続的に洗浄した。有機相を濾過し、そして硫酸マグネシウムで乾燥させ、そして真空で蒸発乾固させ、DCUをいくらか含む油状物質66.1gを得た。該油状物質を無水エタノール（600ml）に溶解し、そして炭素（6.6g）中の10 ％パラジウムを添加した。溶液を大気圧で水素化した。4時間後、理論上の4.2ｌから3.3ｌが消費された。反応混合物をセライト（celite）を通して濾過し、そして真空で蒸発乾固させ、油状物質39.5g（94％）を得た。油状物質の一部、13g をシリカゲル（SiO₂、600g）クロマトグラフィーにより精製した。塩化メチレン中の20％石油エーテル300mlで溶出した後、表題化合物を塩化メチレン中の5％メタノール1700mlで溶出した。溶媒を真空で分画から除去し、満足できる純度の産物8.49ｇを得た。また別に未精製成分10ｇをKugelrohr蒸留により精製した。（b）メチルエステル：メタノールをエタノールに対し置換し、エチルエステルに関する上述の方法を用いた。最終産物はカラムクロマトグラフィーにより精製した。実施例３（Ｎ'−BOC−アミノエチル）グリシンエチルエステルの大規模な別の合成（a） BOC−アミノアセトアルデヒドの調製 3−アミノ−1,2−プロパンジオール（80g，0.88mol）を水（1500ml）に溶解し、そして溶液を4℃に冷却した後、一部にBOC無水物（230g、1.05mol）を添加した。水槽中で溶液をゆるやかに室温まで加熱した。水酸化ナトリウムを一滴ずつ添加することにより、ｐＨを10.5に維持した。反応経過にわたり、水480mlに溶解した総量70.2ｇのNaOHを添加した。一晩攪拌した後、酢酸エチル（1000ml）を添加し、混合物を0℃に冷却し、そして４Ｍ塩酸の添加によりｐＨを2.5に調整した。酢酸エチル層を除去し、そして酸性水溶液をさらに酢酸エチル（8ｘ500ml）で抽出した。合わせた酢酸エチル溶液を、回転蒸発装置を用い、体積1500mlに減少させた。生じた溶液を半飽和硫酸水素カリウム（1500ml）そしてその後、飽和塩化ナトリウムで洗浄した。その後、硫酸マグネシウムで乾燥させ、そして真空で蒸発乾固させた。収量：145.3ｇ（86％）。 3−BOC−アミノ−1,2−プロパンジオール(144.7g、0.757mol)を水(750ml)に懸濁し、そして過ヨウ素酸カリウム（191.5g、0.833mol）を添加した。混合物を窒素下で2.5時間攪拌し、そして沈澱したヨウ素酸カリウムを濾過により除去し、そして水（100ml）で一度洗浄した。水相をクロロホルム（6ｘ400ml）で抽出した。クロロホルム抽出物を乾燥させ、真空で蒸発乾固させた。収量：油 102ｇ（93％）。BOC−アミノアセトアルデヒドの２つの部分を、84℃および0.3m mHgでKugelrohr蒸留により精製した。収量：無色油として79g（77％）。（b）（Ｎ'−BOC−アミノエチル）グリシンメチルエステルの調製炭素中のパラジウム（10％、2.00g）を、メタノール（150ml）中のBOC−アミノアセトアルデヒド（10g、68.9mmol）溶液に0℃で添加した。メタノール（150m l）中の酢酸ナトリウム（11.3g、438mmol）、およびメタノール（75ml）中のグリシンメチルエステル塩酸（8.65g、68.9mmol）を添加した。混合物を大気圧で2 .5時間水素化し、その後セライトを通じて濾過し、そして真空で蒸発乾固させた。成分を水（150ml）に再溶解し、そして0.5Ｎ NaOHでｐＨを８に調整した。水溶液を塩化メチレン（5ｘ150ml）で抽出した。合わせた抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空で蒸発乾固させた。これにより（Ｎ'−BOC−アミノエチル）グリシンメチルエステルの収量14.1g（88％）が生じた。未精製成分を120℃および 0.5mmHgでKugelrohr蒸留により精製し、無色油11.3ｇ（70％）を得た。産物はtl c分析（塩化メチレン中10％メタノール）により、実施例26で産生された成分より高い純度を有した。また別に、（触媒としてのPd(C)と共に）水素の代わりに減少剤としてシアノホウ水素化ナトリウムを用いてもよいが、収率（42％）はより低かった。（c）（Ｎ'−BOC−アミノエチル）グリシンエチルエステルの調製表題化合物を、グリシンメチルエステル塩酸に対しグリシンエチルエステル塩酸を置換し、上記の方法により調製した。また、用いた溶媒はエタノールであった。収率は78％だった。実施例４１−（BOC−aeg）チミンエチルエステルの合成Ｎ'−BOC−アミノエチルグリシンエチルエステル（13.5g、54.8mmol）、DhbtO H（9.84g、60.3mmol）および１−カルボキシメチルチミン（11.1g、60.3mmol）をDMF（210ml）に溶解した。塩化メチレン（210ml）を添加した。溶液をエタノール／氷槽で0℃に冷却し、そしてDCC（13.6g、65.8mmol）を添加した。１時間後、氷槽を除去し、そして室温で攪拌をさらに２時間続けた。沈澱したDCUを濾過により除去し、そして塩化メチレン（2ｘ75ml）で２回洗浄した。合わせた濾過物にさらに塩化メチレン（650ml）を添加した。溶液を、希釈した炭酸水素ナトリウム（3ｘ500ml）、希釈した硫酸水素カリウム（2ｘ500ml）、および飽和塩化ナトリウム（1ｘ500ml）で連続的に洗浄した。沈澱のいくらかは、濾過により有機相から除去した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、そして真空で蒸発乾固させた。油状残渣を塩化メチレン（150ml）に溶解し、濾過し、そして0℃で石油エーテル（350ml）を添加することにより表題化合物を沈澱させた。塩化メチレン／石油エーテル処置をもう一度繰り返した。これによりHP LCにより99％以上の純度である成分16g（71％）が得られた。実施例５１−（BOC−aeg）チミンの合成実施例４の成分をTHF（194ml、0.2Ｍの溶液が得られる）に懸濁し、そして１Ｍ水酸化リチウム水溶液（116ml）を添加した。混合物を室温で45分攪拌し、そしてその後、残渣DCUを除去するため濾過した。水（40ml）を溶液に添加し、その後、塩化メチレン（300ml）で洗浄した。さらに水（30ml）を添加し、そして該アルカリ溶液を塩化メチレン（150ml）でもう一度洗浄した。水溶液を0℃に冷却し、そして１Ｎ HCl（およそ110ml）を一滴ずつ添加することによりｐＨを２に調整した。表題化合物を酢酸エチル（9ｘ200ml）で抽出し、合わせた抽出物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、そして真空で蒸発乾固させた。残渣をメタノールからもう一度蒸発させ、一晩乾燥させた後、無色ガラス状固体を得た。収量：9. 57g（64％）。HPLC＞98％。Ｒ_T＝14.8分。C₁₆H₂₄N₄O₇・0.25H₂O分析の観察値（計算値）、Ｃ:49.29（49.42）；Ｈ:6.52（6.35）；Ｎ：14.11（14.41）。第二級アミドの周囲で回転が制限されたため、シグナルのいくつかは２：１の比で二重になっていた（大きいものはmj.、小さいものはmi.とリストに示している。）実施例６Ｎ⁴−ベンジルオキシカルボニル−１−（BOC−aeg）シトシンの合成Ｎ'−BOC−アミノエチルグリシンエチルエステル(5g、20.3mmol)、DhbtOH（3. 64g、22.3mmol）およびＮ⁴−ベンジルオキシカルボニル−１−カルボキシメチルシトシン（6.77g、22.3mmol）をDMF（100ml）に懸濁した。塩化メチレン(100ml) を添加した。溶液を0℃に冷却し、そしてDCC(5.03g、24.4mmol)を添加した。２時間後、氷槽を除去し、そして室温で攪拌をさらに１時間続けた。反応混合物をその後、真空で蒸発乾固させた。残渣をエーテル（100ml）に懸濁し、30分激しく攪拌した。固体成分を濾過により分離し、そしてエーテル洗浄処置を２回繰り返した。成分をその後、希釈炭酸水素ナトリウム（およそ4％溶液、100ml）で15 分激しく攪拌し、濾過し、そして水で洗浄した。この処置をその後、もう一度繰り返し、乾燥後、黄色い固体成分17gが残った。固体をその後、ジオキサン（200 ml）で還流し、そして熱いうちに濾過した。冷却した後、水（200ml）を添加した。沈澱成分を濾過により分離し、水で洗浄し、そして乾燥させた。HPLC（260n mで観察）によれば、この成分はDCUの他は、99％以上の純度を有した。該エステルをその後、THF（100ml）に懸濁し、0℃に冷却し、そして１ＮLiOH（61ml）を添加した。15分攪拌した後、混合物を濾過し、そして濾過物を塩化メチレン（2 ｘ150ml）で洗浄した。該アルカリ溶液をその後0℃に冷却し、そして１ＮHClでp Hを2.0に調整した。表題化合物を濾過により分離し、そして水で一度洗浄し、乾燥後白色粉末11.3gが残った。該成分を塩化メチレン（300ml）に懸濁し、そして石油エーテル（300ml）を添加した。濾過および洗浄により、乾燥後7.1ｇ（69％）が得られた。HPLCは99％の純度を示した。Ｒ_T＝19.5分であり、そしてＺ−脱保護単量体である可能性が最も高い少量の不純物（およそ1％）が12.6分に見られた。C₂₃H₂₉N₅O₈分析の観察値（計算値）、実施例７ 9−カルボキシメチルアデニンエチルエステルの合成アデニン（10g、74mmol）および炭酸カリウム（10.29g、74mmol）をDMFに懸濁し、そしてブロモ酢酸エチル（8.24ml、74mmol）を添加した。懸濁物を窒素下で、室温で2.5時間攪拌し、そしてその後、濾過した。固体残渣をDMF（10ml）で３回洗浄した。合わせた濾過物を真空で蒸発乾固させた。水(200ml)を黄橙色固体成分に添加し、そして４Ｎ HClでｐＨを６に調整した。0℃で10分攪拌した後、固体を濾過して除き、水で洗浄し、そして96％エタノール(150ml)から再結晶させた。表題化合物を濾過により分離し、そしてエーテルで完全に洗浄した。収量：3.4g（20％）。融点215.5−220℃。C₉H₁₁N₅O₂分析の観察値（計算値）、アルキル化の位は、96％エタノールからの再結晶により得られた結晶のＸ線結晶解析により確認した。また別に、9−カルボキシメチルアデニンエチルエステルを以下の方法により調製してもよい。窒素注入口、機械的攪拌器および注入漏斗を備えた２１の三つ首フラスコ中のDMF（1100ml）に懸濁したアデニン（50g、0.37mol）に、ヘキサン洗浄水素化ナトリウム−ミネラルオイル分散物16.4g（0.407mol）を添加した。混合物を２時間激しく攪拌し、その後ブロモ酢酸エチル（75ml、0.67mol）を３時間にわたり一滴ずつ添加した。混合物をさらに１時間攪拌し、その後tlcによりアデニンの完全な変換が示された。混合物を１mmHgで蒸発乾固させ、そして油状残渣に水（500ml）を添加し、表題化合物の結晶化を起こした。該固体を96 ％エタノール(600ml)から再結晶させた。収量（乾燥後):53.7g(65.6％)。HPLC（ 215nm）純度＞99.5％。実施例８Ｎ⁶−ベンジルオキシカルボニル−9−カルボキシメチルアデニンエチルエステルの合成 9−カルボキシメチルアデニンエチルエステル(3.4ｇ、15.4mmol)を乾燥DMF（5 0ml）に穏やかに加熱することにより溶解し、20℃に冷却し、そして塩化メチレン（50ml）中のＮ−エチル−ベンジルオキシカルボニルイミダゾール・テトラフルオロホウ酸（62mmol）溶液を、氷槽中で15分にわたり添加した。沈澱がいくらか観察された。氷槽を除去し、そして溶液を一晩攪拌した。反応混合物を飽和炭酸水素ナトリウム（100ml）で処理した。10分攪拌した後、相を分離し、そして有機相を、１体積の水、希釈硫酸水素カリウム（2回）、および飽和塩化ナトリウムで連続的に洗浄した。溶液を硫酸マグネシウムで乾燥させ、そして真空で蒸発乾固させ、油状成分11gを得た。該成分を塩化メチレン（25ml）に溶解し、0℃ に冷却し、そして石油エーテル（50ml）で沈澱させた。この処置をもう一度繰り返し、表題化合物3.45g（63％）を得た。融点132-35℃。 C₁₇H₁₇N₅O₄分析の観察値（計算値）、実施例９Ｎ⁶−ベンジルオキシカルボニル−9−カルボキシメチルアデニンの合成Ｎ⁶−ベンジルオキシカルボニル−9−カルボキシメチルアデニンエチルエステル（3.2g、9.01mmol）をメタノール（50ml）と混合し、0℃に冷却した。水酸化ナトリウム溶液（2Ｎ、50ml）を添加し、それにより成分は素早く溶解した。30 分後、0℃で、該アルカリ溶液を塩化メチレン（2ｘ50ml）で洗浄した。0℃で４Ｎ HClで水溶液のpHを１に調整し、それにより表題化合物が沈澱した。濾過、水での洗浄、および乾燥後の収量は3.08g（104％）であった。産物は塩を含み、そして元素分析はそれを反映した。C₁₅H₁₃N₅O₄分析の観察値（計算値）、系１でのHPLC（215nm、260nm）：15.18分、少量の不純物は全部で2％未満。実施例10 Ｎ⁶−ベンジルオキシカルボニル−1−（BOC−aeg）アデニンエチルエステルの合成Ｎ'−BOC−アミノエチルグリシンエチルエステル(2g、8.12mmol)、DhbtOH（1. 46g、8.93mmol）およびＮ⁶−ベンジルオキシカルボニル−9−カルボキシメチルアデニン（2.92g、8.93mmol）をDMF（15ml）に溶解した。塩化メチレン（15ml）をその後、添加した。溶液をエタノール／水槽で0℃に冷却した。DCC（2.01g、9 .74mmol）を添加した。2.5時間後、氷槽を除去し、そして攪拌を室温でさらに1.5時間続けた。沈澱したDCUを濾過により除去し、そしてDMF（1 5ml）で１回、そして塩化メチレン（2ｘ15ml）で２回洗浄した。合わせた濾過物に、さらに塩化メチレン（100ml）を添加した。溶液を、希釈炭酸水素ナトリウム（2ｘ100ml）、希釈硫酸水素カリウム（2ｘ100ml）および飽和塩化ナトリウム（1ｘ100ml）で連続的に洗浄した。有機相を真空で蒸発乾固させ、黄色油状物質を3.28g（73％）得た。未精製産物のHPLCにより、主ピークより極性の高いおよび低いもの両方の、いくつかの不純物を含む、わずか66％の純度が示された。該油を無水エタノール（50ml）に溶解し、そして活性炭を添加した。５分攪拌した後、溶液を濾過した。濾過物を水（30ml）と混合し、そして一晩攪拌した。翌日、白色沈澱物を濾過により除去し、水で洗浄し、そして乾燥させ、HPLCによると 98％より高い純度である成分1.16g（26％）を得た。母液に水を添加することにより、さらに純度およそ95％の0.53gの産物が得られた。C₂₆H₃₃N₇O₇・H₂O分析の観察値（計算値）、スペクトルは、エタノールおよびDCUの痕跡を示した。実施例11 Ｎ⁶−ベンジルオキシカルボニル−1−（BOC−aeg）アデニンの合成Ｎ⁶−ベンジルオキシカルボニル−1−（BOC−aeg）アデニンエチルエステル（ 1.48g、2.66mmol）をTHF（13ml）に懸濁し、そして混合物を0℃に冷却した。水酸化リチウム（8ml、１Ｎ）を添加した。15分攪拌した後、反応混合物を濾過し、さらに水（25ml）を添加し、そして溶液を塩化メチレン（2ｘ25ml）で洗浄した。１Ｎ HClで水溶液のｐＨを２に調整した。沈殿物を濾過により分離し、水で洗浄し、そして乾燥させ、産物0.82g（58％）を得た。塩化メチレン／石油エーテルから産物をさらに２回沈澱させた。収量（乾燥後）:0.77g（55％）。融点119℃（分解(decomp.)）。C₂₄H₂₉N₇O₇・H₂O分析の観察値（計算値）、実施例12 2−アミノ−6−クロロ−9−カルボキシメチルプリンの合成 DMF（50ml）中の2−アミノ−6−クロロプリン（5.02g、29.6mmol）および炭酸カリウム(12.91g、93.5mmol)の懸濁物に、ブロモ酢酸(4.7g、22.8mmol)を添加した。混合物を窒素下で20時間、激しく攪拌した。水（150ml）を添加し、そして溶液をセライトを通じて濾過し、透明な黄色溶液を得た。該溶液を４Ｎ塩酸でpH ３に酸性化した。沈澱物を濾過し、そしてsicapentで、真空で乾燥させた。収量：3.02g（44.8％）。実施例13 2−アミノ−6−ベンジルオキシ−9−カルボキシメチルプリンの合成ナトリウム（2g、87mmol）をベンジルアルコール（20ml）に溶解し、加熱して 130℃にし２時間置いた。0℃に冷却した後、DMF（85ml）中の2−アミノ−6−クロロ−9−カルボキシメチルプリン（4.05g、18mmol）をゆっくりと添加し、そして生じた懸濁物を20℃で一晩攪拌した。水酸化ナトリウム溶液（１Ｎ、100ml）を添加し、そして透明な溶液を酢酸エチル（3ｘ100ml）で洗浄した。水相をその後、４Ｎ塩酸でpH３に酸性化した。沈澱物を酢酸エチル（200ml）に溶解し、そして水相を酢酸エチル（2ｘ100ml）で抽出した。合わせた有機相を飽和塩化ナトリウム溶液（2ｘ75ml）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、そして真空で蒸発乾固させた。残渣をエタノール（300ml）から再結晶させた。sicapentでの真空乾燥後の収量：2.76g（52％）。融点159−65℃。分析（計算値、観察値）、実施例14 Ｎ−（[2−アミノ−6−ベンジルオキシ−プリン−9−イル]−アセチル）−Ｎ− （2−BOC−アミノエチル）グリシン[BOC−Gaeg−ＯＨ単量体]の合成 2−アミノ−6−ベンジルオキシ−9−カルボキシメチル−プリン（0.5g、1.67m mol）、メチル−Ｎ（2−[tert−ブトキシカルボニルアミノ]エチル）グリシネート（0.65g、2.8mmol）、ジィソプロピルエチルアミン（0.54g、4.19mmol）、およびブロモ−トリス−ピロリジノ−ホスホニウム−ヘキサフルオロ−リン酸（Py BroP（登録商標））（0.798g、1.71mmol）をDMF（2ml）中で４時間攪拌した。透明な溶液を炭酸水素ナトリウムの氷***液（１Ｎ、40ml）に注ぎ、そして酢酸エチル（3ｘ40ml）で抽出した。有機層を硫酸水素カリウム溶液（１Ｎ、2ｘ40ml）、炭酸水素ナトリウム（１Ｎ、1ｘ40ml）および飽和塩化ナトリウム溶液（60ml ）で洗浄した。無水硫酸ナトリウムで乾燥させた後、真空で蒸発させ、固体残渣を２：１酢酸エチル／ヘキサン（20ml）から再結晶させ、収率63％のメチルエステルを得た。MS-FAB、514（M+1）。濃水酸化ナトリウム（1ml）を含む1：2エタノール／水（30ml）に該エステルを溶解することにより、加水分解を達成した。２時間攪拌した後、溶液を濾過し、そして４Ｎ塩酸を添加することにより、ｐＨ３に酸性化した。表題化合物を濾過により得た。収量：370mg（加水分解に対し7 2％）。HPLCによる純度は99％以上だった。第二級アミドの周囲で回転が制限されたため、シグナルのいくつかは２：１の比で二重になっていた（大きいものは mj、小さいものはmiとリストに示している。）実施例15 エチル−Ｎ⁶−（ベンジルオキシカルボニル）−2,6−ジアミノプリン−9−イル −アセテートの合成乾燥DMF（90ml）中の2,6−ジアミノプリン（3g、19.46mmol）の懸濁物にNaH（油中60％、0.87g、21.75mmol）を添加した。１時間後、ブロモ酢酸エチル（4.23 g、25.34mmol）を添加した。反応混合物は30分後に均質となり、そしてさらに90 分攪拌した。DMFを真空で除去すると、褐色粉末が生じた。該褐色粉末をその後、1,4−ジオキサン（200ml）で10分還流し、そしてセライトを通して濾過した。溶液を濃縮し、薄黄色粉末を得た。1,4−ジオキサン（150ml）中の薄黄色粉末（ 5.52g）に、新たに調製されたＮ−ベンジルオキシカルボニル−Ｎ'−メチルイミダゾリウムトリフレート（10.7g、29.2mmol）を添加した。反応混合物を室温で1 6時間攪拌し、赤い溶液を生じた。ジオキサンを真空で除去し、そして未精製成分をMeOH：ジエチルエーテルから再結晶させ、クリーム色固体として表題化合物 4.56g（63％）を得た。実施例16 Ｎ⁶−（ベンジルオキシカルボニル）−2,6−ジアミノプリン−9−イル−酢酸の合成エチル−Ｎ⁶−（ベンジルオキシカルボニル）−2,6−ジアミノプリン−9−イル−アセテート（3g、8.1mmol）をNaOH（2Ｎ、30ml）に溶解した。１時間後、溶液を２Ｍ HClでpH2.5に酸性化した。沈澱を濾過し、水で洗浄し、そして乾燥させ、白色固体としての表題化合物2.82g（98％）を得た。 IR（KBr）：3300、3095、1750、1630、1590、1410。実施例17 BOC−アミノアセトアルデヒドの合成表題化合物は公表された論文の方法にしたがい調製した（Dueholmら，Organic Preparations and Procedures Intl.,1993,25,457）。実施例18 ε−（2−クロロベンジルオキシカルボニル）−リジンアリルエステルの合成表題化合物は公表された論文の方法にしたがい調製した（WaldmannおよびHors t,Liebigs Ann.Chem.,1983,1712）。実施例19 Ｎ−（BOC−アミノエチル）−ε−（2−クロロベンジルオキシカルボニル）−リジンアリルエステルの合成 ε−（2−クロロベンジルオキシカルボニル）−リジンアリルエステル（実施例18由来）をメタノール（50ml）に溶解し、そして0℃に冷却した。生じた溶液にシアノホウ水素化ナトリウム（5.9mmol）、続いて酢酸（0.75ml）を添加した。５分後、BOC−アミノアセトアルデヒド（13.3mmol）を添加し、そして反応混合物をさらに１時間攪拌した。メタノールを真空で除去し、そして該油を酢酸エチル（40ml）に溶解し、飽和水性NaHCO₃、食塩水で洗浄し、Na₂SO₄で乾燥させ、そして濃縮し、無色透明油を得た。この油を乾燥エーテル（80ml）に溶解し、-2 0℃に冷却し、そしてエーテル中の等モルのHClをゆっくり添加した。生じた白色固体を濾過により収集し、そして空気乾燥した。空気乾燥した白色固体の乾燥エーテルからの沈澱により分析上純粋な表題化合物を得た。実施例20 Ｎ−（BOC−アミノエチル）−Ｎ−[Ｎ⁶−（ベンジルオキシカルボニル）−2,6− ジアミノプリン−９−イル−アセチル]−ε−(2−クロロベンジルオキシカルボニル)−リジンアリルエステルの合成 DMF(150ml)中のＮ⁶−（ベンジルオキシカルボニル）−2,6−ジアミノプリン− 9−イル−酢酸（3.6g、10.5mmol）にＮ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（2.75 ml、21mmol）、およびＮ−（BOC−アミノエチル）−ε−（2−クロロベンジルオキシカルボニル）−リジンアリルエステル塩酸（7.31g、15.8mmol）を添加した。反応混合物を窒素下で20分攪拌し、そしてブロモ−トリス−ピロリジノ−ホスホニウム−ヘキサフルオロリン酸（PyBrop、5.4g、11.6mmol）を添加した。反応混合物を、窒素ガス中で室温で一晩攪拌した。生じた混合物を濃縮し、そして酢酸エチルに溶解した。該酢酸エチル溶液を水性飽和炭酸水素ナトリウムで洗浄し、分離しそして濃縮した。未精製成分を、溶出剤として酢酸エチル：ヘキサン：メタノール（6：3：1、v/v/v）を用いるシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。適切な分画の濃縮および乾燥により表題化合物3.1g（ 37％）が得られた。実施例21 Ｎ−（BOC−アミノエチル）−Ｎ−[Ｎ⁶−（ベンジルオキシカルボニル）−2,6− ジアミノプリン−9−イル−アセチル]−ε−(2−クロロベンジルオキシカルボニル)−リジンの合成Ｎ−（BOC−アミノエチル）−Ｎ−[Ｎ⁶−（ベンジルオキシカルボニル）−2,6 −ジアミノプリン−9−イル−アセチル]−ε−(2−クロロベンジルオキシカルボニル)−リジンアリルエステル塩酸（3.1g、3.93mmol）にTHF（100ml）、モルホリン（3.5ml。39.3mmol）、およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）−パラジウム（0）（0.45g、0.393mmol）を添加した。反応混合物を窒素下で室温で2.5時間攪拌した。生じた混合物を濃縮し、そして酢酸エチルに溶解した。酢酸エチル溶液を水性飽和硫酸水素カリウム（水で半分に希釈したもの）で洗浄し、分離し、そして濃縮した。未精製成分を、溶出液としてクロロホルム：メタノール（9：1、v/v)を用いるシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。適切な分画の濃縮および乾燥により表題化合物1.25g（42 ％）が得られた。実施例22 グアニン単量体（BOC−Gaek−OH）の調製Ｎ⁶−ベンジル−9−カルボキシメチレン−グアニン（2.63g、8.78mmol）にDIE A（2.6ml、20mmol）、DMF（30ml）、ジクロロメタン（70ml）、およびＮ−（BOC −アミノエチル）−ε−（2−クロロベンジルオキシカルボニル）−リジンアリルエステル（3.7g、8.04mmol）を添加した。反応混合物を窒素下で20分攪拌した。PyBrop（４g、8.58mmol）を添加し、そして反応混合物をさらに16時間攪拌した。反応混合物を濃縮し、そして残渣を、クロロホルム／ヘキサン／メタノール（12：7：1、v/v/v）を用いるシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し、アリルエステルとしての表題化合物４g（60％）を得た。該アリルエステル（4g、5.37mmol）にTHF（100ml）、テトラキスパラジウム（ 0）（0.18g、0.15mmol）およびモルホリン（6.1ml、70mmol）を添加した。反応混合物を窒素下で2.5時間攪拌し、そして濃縮した。残渣を、クロロホルム／ヘキサン／メタノール（11:8：1、v/v/v）を用いるシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し、表題化合物2.67g（60％）を得た。実施例23 アデニン単量体（BOC−Aaek−OH）の調製上述の実施例22のグアニン単量体に用いた方法にしたがい、Ｎ⁶−ベンジル−9 −カルボキシメチレン−アデニンを用い、アデニン単量体の合成を行った。実施例24 シトシン単量体（BOC−Caek−OH）の調製Ｎ−（BOC−アミノエチル）−ε−（2−クロロベンジルオキシカルボニル）− リジンアリルエステル（8.21g、17.7mmol）にトリエチルアミン（10ml、98mmol ）およびジクロロメタン（200ml）を添加した。溶液を窒素下で氷槽中で約0℃に冷却した。冷却した溶液にクロロアセチルクロリド(2.2ml、27.6mmol)を10分にわたり添加し、そして反応混合物を室温で16時間攪拌した。反応混合物を濃縮し、そして残渣を、酢酸エチル／ヘキサン（1：1、v/v）を用いるシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し、Ｎ−アセチル化リジン骨格6.54 g（68％）を得た。 0℃でのピリジン中のクロロギ酸ベンジル処理により、シトシンをＮ⁴−位で保護し、Ｎ⁴−ベンジル−シトシンを得た。Ｎ⁴−ベンジル−シトシン（1.31g、5.34mmol）にDMF（200ml）、およびミネラルオイル中の60％NaH（0.22g、5.4mmol）を添加し、そして生じた混合物を窒素下で30分攪拌した。生じた混合物にDMF（25ml）中のＮ−アセチル化リジン骨格（2.9g、5.34mmol）を添加し、そして混合物を16時間攪拌した。反応混合物を濃縮し、そして残渣をジクロロメタン（250ml）に溶解した。ジクロロメタン相を水（200ml）で洗浄し、そして濃縮した。生じた残渣を、ジクロロメタン：ヘキサン：メタノール（8：2：1）を用いるシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し、アリルエステルとしてアミノエチル−リジン骨格に結合するシトシン2.4g（85％）を得た。該アリルエステルを、上述の実施例22に用いられる方法にしたがい、パラジウムを用いて脱保護することにより、活性単量体に変換し、表題化合物1.05ｇ（46 ％）が得られる。実施例25 チミン単量体(BOC−Taek−OH）の調製チミン単量体を、上述の実施例24の方法にしたがい調製した。実施例26 Ｈ−Taeg−Aaeg−[Taeg]₈−Lys−NH₂の固相合成（a） BOC−Taeg−Ａ（Ｚ）aeg−[Taeg]₈−Lys（CIZ）−MBHA樹脂の段階的構築約0.3ｇの湿BOC−[Taeg]₈−Lys（CIZ）−MBHA樹脂を３ml SPPS反応容器中に置いた。BOC−Taeg−Ａ（Ｚ）aeg−[Taeg]₈−Lys（CIZ）−MBHA樹脂を、0.19ＭのB OC−Ａ(Z)aeg−OHを50％DMF/CH₂Cl₂ 2.5ml中の0.15Ｍ DCCと共に利用するＡ（Ｚ）aeg残基のin situ DCCカップリング（単一）および純CH₂Cl₂中の0.15Ｍ BOC− Taeg−Opfpの単一カップリングにより構築した(「合成プロトコルＩ」)。合成は定量的ニンヒドリン反応によりモニターし、Ａ（Ｚ）aegの約50％の取り込みおよびTaegの約96％の取り込みが示された。（b）Ｈ−Taeg−Aaeg−[Taeg]₈−Lys−NH₂の切断、精製、および同定保護BOC−Taeg−Ａ（Ｚ）aeg−[Taeg]₈−Lys（CIZ）−BHA樹脂を塩化メチレン中の50％トリフルオロ酢酸で処理し、HF切断の前に、Ｎ末端BOC基（潜在的に有害なtert−ブチル陽イオンの前駆体）を除去した。中和および洗浄(「合成プロトコルＩ」の段階2−4のものと同様の方法で行われた)、および真空での２時間の乾燥後、生じたＨ−[Taeg]₅−BHA樹脂53.1mgを、0℃で60分攪拌しながら、HF：アニソール（9：1、v/v）５mlで切断した。HFを除去した後、残渣を乾燥ジエチルエーテル（4ｘ15ml、各15分）と共に攪拌し、アニソールを除去し、フリットした（fritted）ガラス漏斗を通して重力下で濾過し、そして乾燥させた。該ＰＮＡをその後、10％酢酸水溶液60ml（4ｘ15ml、攪拌し各15分）で抽出した。本溶液のアリコットを分析用逆相HPLCにより分析し、未精製PNAの純度を確認した。1 3分の主ピークは、総吸光度の約93％と計測された。残った溶液を凍結しそして凍結乾燥させ、未精製成分約15.6mgを得た。14.4分の主ピークは、総吸光度の50 ％未満と計測された。未精製産物の一部0.5mgを精製し、約0.1mgのＨ−Taeg−Aa eg−[Taeg]₈−Lys−NH₂を得た。（MH+）⁺に関し、計算m/z値は2816.16であり、そして測定m/z値は2816.28であった。（c）合成プロトコルＩ（1）TFA/CH₂Cl₂（1：1、v/v）、2.5mlで３ｘ１分および１ｘ30分、BOC脱保護；（2）CH₂Cl₂、2.5mlで6ｘ1分洗浄；（3）DIEA/CH₂Cl₂（1：19、v/v）、2. 5mlで３ｘ２分中和；（4）CH₂Cl₂、2.5mlで６ｘ１分洗浄、および１分乾燥（dra in）；（5）PNA樹脂試料２−５mgを除去し、そして置換を測定する定量的ニンヒドリン分析のため完全に乾燥させた；(6)DMF1.25mlに溶解した0.47mmol(0.25g） BOC−Ａ（Ｚ）aeg−OHの添加に続き、CH₂Cl₂1.25ml中の0.47mmol（0.1g）DCCまたはCH₂Cl₂2.5ml中の0.36mmol（0.2g）BOC−Taeg−Opfpの添加；カップリング反応を、震蕩しながら全部で20−24時間進める；（7）DMF2.5mlで１ｘ２分洗浄；（8）CH₂Cl₂、2.5mlで４ｘ１分洗浄；（9）DIEA/CH₂Cl₂（1：19、v/v）、2.5ml で２ｘ２分中和；（10）CH₂Cl₂、2.5mlで６ｘ１分洗浄；（11）保護PNA樹脂試料２−５mgを除去し、そしてカップリングの度合いを測定する定量的ニンヒドリン分析のため完全に乾燥させた；(12)無水酢酸／ピリジン／CH₂Cl₂（1：1：2、v/v /v）の混合物25mlで２時間アセチル化することによる、未反応アミノ基のブロッキング（最後のサイクルの後は除く）；および（13）CH₂Cl₂、2.5mlで６ｘ１分洗浄；（14）保護PNA樹脂試料２ｘ２−５mgを除去し、DIEA/CH₂Cl₂（1：19、v/v ）で中和し、そしてニンヒドリン分析のためCH₂Cl₂で洗浄する。実施例27 Ｈ−[Taeg]₂−Aaeg−[Taeg]₅−Lys−NH₂の固相合成（a） BOC−[Taeg]₂−Ａ（Ｚ）aeg−[Taeg]₅−Lys（CIZ）−MBHA樹脂の段階的構築約0.5ｇの湿BOC−[Taeg]₅−Lys（CIZ）−MBHA樹脂を５ml SPPS反応容器中に置いた。BOC−[Taeg]₂−Ａ（Ｚ）aeg−[Taeg]₅−Lys（CIZ）−MBHA樹脂を、0.15Ｍから0.2Ｍの保護PNA単量体（遊離酸）を純CH₂Cl₂２ml中の等量のDCCと共に利用するＡ（Ｚ）aegおよびTaeg残基両方のin situ DCCカップリングにより構築した（「合成プロトコルII」）。合成は定量的ニンヒドリン反応によりモニターし、３回カップリングした後のＡ（Ｚ）aegの総量約82％の取り込み（第一のカップリングは約50％取り込みを示し;50％DHF/CH₂Cl₂中の第四のHOBt媒介カップリングは総カップリング収量を有意に増加させなかった）およびTaeg残基の量的な取り込み（単一カップリング）を示した。（b）Ｈ−[Taeg]₂−Aaeg−[Taeg]₅−Lys−NH₂の切断、精製、および同定保護BOC−[Taeg]₂−Ａ（Ｚ）aeg−[Taeg]₅−Lys（CIZ）−BHA樹脂を実施例26 （b）に記載されるように処理し、乾燥Ｈ−[Taeg]₂−Ａ（Ｚ）aeg−[Taeg]₅−Ly s（CIZ）−BHA樹脂102.5mgのHF切断に際し、未精製成分約16.2mgを得た。未精製産物のごく少量の一部を精製した。(ＭＨ+)⁺に関し、計算m/z値は2050.85 であり、そして測定m/z値は2050.90であった。（c）合成プロトコルII （1）TFA/CH₂Cl₂（1：1、v/v）、２mlで３ｘ１分および１ｘ30分、BOC脱保護；（2）CH₂Cl₂、２mlで６ｘ１分洗浄；（3）DIEA/CH₂Cl₂（1：19、v/v）、２ml で３ｘ２分中和；（4）CH₂Cl₂、２mlで６ｘ１分洗浄、および１分乾燥；（5）PN A樹脂試料２−５mgを除去し、そして置換を測定する定量的ニンヒドリン分析のため完全に乾燥させた；（6）CH₂Cl₂1.5mlに溶解した0.44mmol（0.23g）BOC−Ａ（Ｚ）aeg−OHの添加に続き、CH₂Cl₂0.5ml中の0.44mmol（0.09g）DCCまたはCH₂C l₂1.5ml中の0.33mmol（0.13g）BOC−Taeg−OHの添加に続き、CH₂Cl₂0.5ml中の0. 33mmol（0.07g）DCCの添加；カップリング反応を、震蕩しながら全部で20−24時間進める；（7）DMF２mlで１ｘ２分洗浄；（8）CH₂Cl₂、２mlで４ｘ１分洗浄；（9）DIEA/CH₂Cl₂(1：19、v/v)、２mlで２ｘ２分中和；（10）CH₂Cl₂、２mlで６ｘ１分洗浄；（11）保護PNA樹脂試料２−５mgを除去し、そしてカップリングの度合いを測定する定量的ニンヒドリン分析のため完全に乾燥させた；（12）無水酢酸／ピリジン／CH₂Cl₂（1：1：2、v/v/v)の混合物25mlで２時間アセチル化することによる、未反応アミノ基のブロッキング（最後のサイクルの後は除く）； (13)CH₂Cl₂、２mlで６ｘ１分洗浄；および（14）保護PNA樹脂試料２ｘ２−５mg を除去し、DIEA/CH₂Cl₂（1：19、v/v）で中和し、そしてニンヒドリン分析のためCH₂Cl₂で洗浄する。実施例28 PNA合成および性質決定の標準的プロトコル器械：PerSeptive Biosystems 8909 Expedite 合成スケール：2マイクロモル試薬：洗浄液Ａ：NMP中の20％DMSO 洗浄液Ｂ：NMP中の20％DMSO中の２Ｍコリジン脱ブロック剤：5％ｍ−クレゾール、95％TFA 中和剤：NMP中の20％DMSO中の１Ｍ DIEA キャップ：0.5Ｍ無水酢酸、NMP中の20％DMSO中の1.5Ｍコリジン活性化剤：DMF中の0.2Ｍ HATU 単量体：２Ｍコリジン中0.22Ｍ（DMF中50％ピリジン）合成：固体支持体（BOC−BHA−PEG−樹脂）を708μｌの洗浄液Ａで洗浄する。脱ブロック剤（177μl）を6.3分にわたり３回カラムを通過させる。樹脂をその後1416μｌの洗浄液Ａで洗浄する。遊離アミンを中和剤1063μｌで中和する。樹脂を1062μｌの洗浄液Ｂで洗浄する。単量体および活性化剤（各141μｌ）を14 分にわたりゆっくりとカラムに添加する。樹脂を708μｌの洗浄液Ｂおよび708μ ｌの洗浄液Ａで洗浄する。未反応アミンを、５分にわたりキャップ溶液708μｌをゆっくり添加することによりキャップする。樹脂をその後2124μｌの洗浄液Ａで洗浄する。望ましいPNA配列の合成が完了するまでサイクルを繰り返す。切断：PNA樹脂を５mlのMeOHで洗浄し、そして真空下で乾燥させる。乾燥樹脂を1 .5ml Durapore限外濾過装置に空ける。チオアニソール（25μｌ）、25μｌのｍ −クレゾール、100μｌのTFAおよび100μｌのTFMSAを樹脂に添加し、約30秒ボルテックスし、そして２時間置く。反応混合物をその後、10Ｋで５分遠心分離し、そして樹脂を含む内部試験管を除去する。エーテルおよそ1.5mlをTFA溶液に添加し、産物を沈澱させる。TFA溶液をボルテックスした後、10Ｋで２分遠心分離する。エーテルを真空で除去する。エーテル沈澱および遠心分離をさらに２回繰り返す。乾燥沈澱物を熱ブロック（55℃）で15から30分加熱し、過剰なエーテルを除き、そして200μlのH₂Oに再溶解する。1.5ml Durapore限外濾過装置中のDowex アセテート樹脂100mgに溶媒を添加し、ボルテックスし、30分置き、そして10Ｋで２分遠心分離する。性質決定:１mlのH₂O中の試料１μｌの吸光度を260nmで測定する。1％酢酸を含むH₂O中のィソプロパノール（50％）(100μｌ）を試料4μｌに添加する。本試料をエレクトロスプレー質量分析により性質決定する。共通の略語 NMP：Ｎ−メチルピロリジノン TFA：トリフルオロ酢酸 DIEA：Ｎ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン HATU：Ｏ−（7−アザベンゾトリアゾール−1−イル)−1,1,3,3−テトラメチルウロニウム−ヘキサフルオロリン酸 TFMSA：トリフルオロメタンスルホン酸実施例２９結合PNAオリゴマーの合成および細胞取り込み実施例28の方法、実施例５から14までのアミノエチルグリシンPNA単量体、および実施例15から21までの単量体を用い、以下のPNA単量体を合成した。［（+）＝PNA凝集；＝細胞取り込み見られず；+＝細胞取り込みが見られる；o＝リポソームあり；x＝リポソームなし；Tkはアミノエチルリジン骨格に結合するチミンであり；LysはＤ−リジンであり；Adaはアダマンチルであり；そしてFlはフルオレセイニルリジンである。］実施例30 リノレニル−TAG−CAG−AGG−AGC−TC（配列番号１）の合成リノレン酸(40マイクロモル)をカップリング溶媒(100μｌ)(20％DMSO/NMP中の 0.5Ｍ DIEA)に溶解し、これにHATU（0.4Ｍを90μｌ）を添加し、そして溶液を混合した。2分の活性化時間の後、溶液を保護PNA樹脂（15.4mg、2マイクロモル）と混合した。1時間後、樹脂を20％DMSO/NMP、CH₂Cl₂およびMeOH（各約３ml）で洗浄した。生じたリノレニル結合PNAを固体支持体から切断し、そして実施例28 に記載される方法にしたがい、性質決定した。実施例31 オレイル−TAG−CAG−AGG−AGC−TC（配列番号１）の合成オレイン酸(40マイクロモル)をカップリング溶媒(100μｌ)(20％DMSO/NMP中の 0.5Ｍ DIEA)に溶解し、これにHATU（0.4Ｍを90μｌ）を添加し、そして溶液を混合した。２分の活性化時間の後、溶液を保護PNA樹脂（5.4mg、2マイクロモル）と混合した。1時間後、樹脂を20％DMSO/NMP、CH₂Cl₂およびMeOH（各約３ml）で洗浄した。生じたオレイル結合PNAを固体支持体から切断し、そして実施例28に記載される方法にしたがい、性質決定した。実施例32 カプロイル−Gly−TAG−CAG−AGG−AGC−TC（配列番号１）の合成カプロイル−Gly(40マイクロモル）をカップリング溶媒(100!tl) (20％DMSO/ NMP中の0.5Ｍ DIEA）に溶解し、これにHATU（0.4Ｍを90μｌ）を添加し、そして溶液を混合した。2分の活性化の後、溶液を保護PNA樹脂（15.4mg、2マイクロモル）と混合した。1時間後、樹脂を20％DMSO/NMP、CH₂Cl₂およびMeOH（各約３ml ）で洗浄した。生じたPNAを固体支持体から切断し、そして実施例28に記載される方法にしたがい、性質決定した。実施例33 Ｎ−BOC−ε−（フルオレセイニルカルボニル）−Ｄ−リジンおよびそのエチルエステルの合成 α−BOC保護リジンエチルエステルをTHFおよびDMFの混合物中で過剰のフルオレセインイソシアネートで、室温で数時間処理した。出発アミノ酸の消滅に関し、反応をtlcによりモニターした。反応をその後、等量の水およびクロロホルムで処理し、そして相分離した。水相をさらにクロロホルムで抽出し、そしてこうして得られた合わせた有機溶液を硫酸マグネシウムで乾燥させた。本溶液を真空で濃縮し、そして得られた未精製産物をカラムクロマトグラフィーにより精製し、Ｎ−BOC−ε−（フルオレセイニルカルボニル）−Ｄ−リジンエチルエステルを得た。該エチルエステルを、１Ｍ水性水酸化リチウムおよび溶媒としてテトラヒドロフランを用い、加水分解した。反応の進行をtlcにより追い、そして完了に際し、反応混合物を水で処理し、そしてその後ジクロロメタンで２回洗浄した。該塩基性溶液をその後、10℃未満に冷却し、１Ｎ HClで４以下のpHに中和し、そして酢酸エチルを用い産物を抽出した。硫酸マグネシウムを用い有機抽出物を乾燥させ、そして真空で濃縮し、そしてＮ−BOC−ε−（フルオレセイニルカルボニル）−Ｄ−リジンを得た。実施例34 Ｎ−BOC−ε−（フルオレセイニルカルボニル）−Ｄ−リジンの、配列GGT−GCT −CAC−TGC−GGC−Lys−NH₂（配列番号2）のPNAへのカップリング配列GGT−GCT −CAC−TGC−GGC−Lys−NH₂のPNAは、（実施例27および28におけるような）標準的PNA合成プロトコルにしたがい合成し、そしてリジン誘導体化合成樹脂で開始した。樹脂に結合したPNAのＮ末端BOC基は:1．３mlの1：1v/vTFA／ＤＣＭ、1ｘ2 分およびその後1ｘ0.5時間 2．３ml DCMで、4ｘ20秒洗浄３ml DMFで、2ｘ20秒洗浄３ml DCMで、2ｘ20秒洗浄 30秒乾燥 3．３ml DIEA/DCM１：19v/vで、2ｘ3分洗浄を用い、脱保護した。フルオレセイニルリジンのカップリングをその後、以下の段階にしたがい行った： 1．３ml DCMで、4ｘ20秒洗浄１分乾燥 2．４等量のDIC、および４等量の1：1v/v DCM/DMFに溶解したＮ−BOC−ε−（フルオレセイニルカルボニル）−Ｄ−リジンの添加（該アミノ酸の最終濃度は 0.1Ｍ） 3．室温で震蕩しながら0.5時間カップリングを進める 4．20秒乾燥３ml DMFで、2ｘ20秒および1ｘ2分洗浄３ｍｌＤＣＭで、4ｘ20秒洗浄 5．３ml DIEA/DCM１：19v/vで、2ｘ3分洗浄３ml DCMで、4ｘ20秒洗浄；１分乾燥 6．定性Kaiser試験を行う。陰性結果は100％近いカップリングを示す。 BOC基を切断し、そしてその後該PNA(Fl−GGT−GCT−CAC−TGC−GGC−Lys−NH₂ )を切断し、そして実施例27および28のように精製した。また別に、該PNAを樹脂に結合したまま残し、そして実施例35のように親脂質基での誘導体化に用いた。実施例35 Ada−Fl−GGT−GCT−CAC−TGC−GGC−Lys−NH₂（配列番号2）の合成樹脂に結合したFl−GGT−GCT−CAC−TGC−GGC−Lys−NH₂PNAのＮ末端BOC基を（実施例34におけるように）まず切断し、そして遊離のアミノ末端をその後以下のように誘導体化した：アダマントイルクロリド100マイクロモルを1：5v/v DIEA/DMFに溶解し、樹脂結合PNA（BOC基が切断されているＮ末端以外は完全に保護されている）２マイクロモルに添加した。反応１時間後、樹脂を20％NMP/DMSO、DCMおよびメタノール各３mlで洗浄した。PNAを樹脂から切断し、そして実施例27および28のような標準的プロトコルにしたがい精製した。実施例36 アダマンチル−Ahx−TAG−CAG−AGG−AGC−TC（配列番号1）の合成アダマンチルカルボニルクロリド（100マイクロモル）をDMF（1.0ml）およびD IEA（200マイクロモル）に溶解した。本溶液を、アミノヘキサン酸基連結基が結合した保護PNA樹脂（15.4mg、２マイクロモル）と混合した。１時間後、樹脂を2 0％DMSO/NMP、CH₂Cl₂およびメタノール（各約３ml）で洗浄した。生じたPNAを、既知の方法および技術にしたがい、固体支持体から切断した。実施例37 PNA／リポソームの調製 PNAアダマンチル−（Fl^*）−TTT AGC TTC AGC−LysNH₂（配列番号3）、ここで Fl^*はフルオレセイン化PNA単量体である、を含むリポソームを、Campbell.Biote chniques,1995,18,1027により記載されるエタノール注入法の修飾法により調製した。DOPE（ジオレイル−Ｌ−α−ホスファチジルエタノールアミン）（13.4mm ol）およびDDAB（ジメチルジオクタデシルアンモニウムブロミド）（6.6mmol）を96％エタノール１mlに溶解した。DMSO中のPNA溶液（10ml、2.5mM）を該脂質混合物（40ml）と混合した。生じた成分50mlをその後、ボルテックスしながら無菌蒸留H₂O（１ml）に迅速に添加した。生じたPNAのリポソーム混合物中の濃度は25 mMであった。細胞取り込み実験には、該PNA−リポソーム混合物（40ml）をOptiM EM^TM（1ml）に添加し、そして細胞に与えた。PNAの最終濃度は１mMであった。リポソームトランスフェクション試薬：商業的に入手可能なトランスフェクションリポソーム試薬４つを使用した：Lipofectin^TM（Gibco BRL）、Lipofectamin^T ^M （Gibco BRL）、Tfx-50（Promega）およびDOTAP^TM（Boehringer Mannheim）。各リポソーム試薬を結合PNA1118と混合し、培地（1ml）中の最終PNA濃度を1mMにした。PNA細胞取り込みに関する各リポソーム試薬の最適濃度を決定した。以下の表はOptiMEM 1ml当たりに用いられる試薬の量を示す。 Lipofectin^TM Lipofectamin^TM Tfx-50^TM DOTAP^TM ２ml ４ml 10ml 10ml 細胞：ヒト癌細胞株HeLaを、Glutamax^TM、ペニシリン、ストレプトマイシンおよびウシ胎児血清を含むRPMI 1640培地で増殖させた。実験前日、カバーガラスを含む35mmプレート中に2ｘ10⁵細胞の密度で、細胞を蒔いた。翌日、細胞をOptiME Mで一度洗浄し、その後１μＭ PNAまたはPS-ODN、どちらかを単独で含むOptiMEM １mlを、上述のように、４つのリポソーム試薬の１つと混合するか、またはDOPE /DDABリポソームに取り込んだ。一晩インキュベーションした後、PNA処理細胞を、氷上で3％ホルムアルデヒド／0.2％グルタルアルデヒド中で固定した。その後、カバーガラスを対物ガラス上に乗せ、そしてLeits Diaplan顕微鏡上で蛍光顕微鏡検査により細胞を観察した。Kodak Ektacrome 1600ASAフィルムにより顕微鏡写真を撮影した。実施例38 結合PNAの細胞取り込み表題の式を有する４つの結合PNA（実施例30−32および36）を、実施例28に例示される標準的方法にしたがい調製した。リジン残基を、Boc−Lys−ClCbz（ClC bz＝2−クロロベンジルオキシカルボニル）を用い、修飾MBHA樹脂を用いることによりPNAに取り込んだ（Dueholm,J.Org.Chem.,1994,59,5767）。PNAオリゴマーをその後、ε−アミノ基であらかじめフルオレセイン化された保護Lys基を用い、伸長した。アミノ基の脱保護の後、親脂質基を結合することにより、支持体に結合した結合PNAが得られた。固体支持体から切断することにより、蛍光標識を有する遊離PNA結合体が得られた。調べた親脂質基（R）には、（図１に示されるように）アダマントイル、デカノイル、ヘプチル−スクシニルおよびパルミチル −スクシニル基が含まれる。４つの結合PNAのストック溶液は該PNAをDMSOに溶解することにより、調製した。これらのストック溶液の希釈は、水またはOptiMEM（Gibco BRL）のいずれかで行った。ヒト癌細胞株HeLaを、Glutamax^TM、ペニシリン、ストレプトマイシンおよびウシ胎児血清（10％v/v）を含むRPMI 1640培地で増殖させた。実験前日、カバーガラスを含む35mmプレート中に2ｘ10⁵細胞の密度で、細胞を蒔いた。翌日、細胞をOptiMEMで一度リンスし、その後OptiMEM１ml中の3μＭPNAを添加し、そしてさらにインキュベーションした。PNA取り込みを視覚化するため、カバーガラスをPBSで２回洗浄し、そして細胞を、氷上で3％ホルムアルデヒド／0.2％グルタルアルデヒド中で15分固定した。PBSで２回洗浄した後、PBS中の90％グリセロールを用い、カバーガラスを対物ガラス上に乗せ、そしてLeits Diaplan顕微鏡上で蛍光顕微鏡検査により細胞を観察した。Kodak Ektacrome 1600 ASAフィルムにより顕微鏡写真を撮影した。培養中のヒト細胞への取り込みに関し、４つの結合PNAを試験した。PNAは細胞培地に直接添加した。カバーガラス上で増殖させたHeLa細胞を、無血清培地中で PNA（3μＭ）と一晩インキュベーションし、その後固定し、そして蛍光顕微鏡検査により調べた。パルミチル−スクシニルおよびヘプチル−スクシニル結合PNA は共に、すべての細胞において点状および斑点状の蛍光を示した。一般的に斑点は細胞上に均等に分布しており、細胞の縁、おそらく細胞膜で亢進した染色を持つ傾向があった。アダマントイルおよびデカノイル結合PNAは、より少ない細胞結合蛍光を示し、細胞外に大きな蛍光凝集物が見られた。パルミチル−スクシニルPNA結合体をさらに共焦点顕微鏡検査により研究し、細胞内部のPNA結合体の正確な局在および分布を決定した。細胞を上記の研究から選択し、そしてさらに12切片を通してスキャンした。映像により、PNA結合体が実際に細胞に取り込まれており、そして細胞質全体に斑点として分布していることが確認された。外見上、核には蛍光はなかった。このパターンは取り込みのエンドサイトーシス経路を示し、PNA結合体がエンドソームに落ち着くことを暗示する。パルミチル−スクシニルPNA結合体をまた、時間経過実験においても観察した。細胞を3μＭのPNAの存在下で異なる時間インキュベーションした。PNA 結合体の細胞による取り込みはインキュベーションの24時間まで時間と共に増加し、その時点でPNA含有培地を新鮮な血清含有培地と置き換えた。48時間後、細胞内PNAは、細胞の区画、おそらく二次リソソーム中に濃縮された。72時間後、細胞内に残るPNAは実質的になかった。実施例39 結合PNAを用いたin vitro翻訳検定配列Ｒ−Lys(フルオレセイン)−TTT−AGC−TTC−CTT−AGC−Lys−NH₂（配列番号3）を有するPNAは、CAT mRNAのAUG開始コドンのすぐ5'側の15ヌクレオチドに相補的であり、そして対応する非結合PNAは以前、in vitroでCATの翻訳を阻害することが可能であることが示されている。実施例38の４つの結合PNA（配列番号2 ）を本検定で試験した。４つの結合PNAはすべて、非結合PNAと同様の濃度でCAT 翻訳を特異的に阻害した。実施例40 PNA結合体（配列番号2）を用いたリポソーム構築物の調製配列番号２を有する２つの結合PNAを用い、リポソーム構築物を調製した。Cam pbellによりBiotechniques,1995,18,1027に記載されるエタノール注入法の修飾法により、アダマントイルおよびデカノイル結合PNAをリポソームと結合させた。本方法に続き、DOPE（ジオレイル−Ｌ−α−ホスファチジルエタノールアミン）13.4マイクロモルおよびDDAB（ジメチルジオクタデシルアンモニウムブロミド）6.6マイクロモルを無水エタノール１mlに溶解した。PNA溶液（10μｌ、３mM P NA/DMSO）を該脂質混合物40μｌと混合した。生じた反応混合物50μｌをその後、ボルテックス混合しながら無菌蒸留H₂O１mlに迅速に添加した。リポソーム混合物中のPNA濃度はしたがって、30μＭであった。細胞取り込み実験には、PNA− リポソーム混合物60μｌをOptiMEM１mlに添加し、そして細胞に与えた。結合PNAのリポソーム構築物への取り込みを、蛍光顕微鏡検査により確認した。蛍光顕微鏡写真により、PNA結合体で見られたように、細胞に結合した蛍光の斑点が示された。さらに、より拡散した蛍光が細胞の全体に観察され、いくつかの細胞では核に蛍光が観察された。他の細胞を用いた場合（COS-7、ミドリザル腎臓由来細胞；およびNIH 3T3、マウス繊維芽細胞）、同一の取り込みパターンが観察された。実施例41 アダマンチル結合PNAの細胞取り込みアダマンチル−PNA（実施例35または36にしたがい調製されたもの）の細胞取り込みを測定し、そしてまた、ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドの取り込みとも比較した。アダマンチル結合PNAおよびオリゴヌクレオチドを１μＭ濃度で、集密に達していない（subconfluent）HeLa細胞に直接添加し、そして一晩置いた。細胞を次に固定し、そして取り込みを蛍光顕微鏡検査により視覚化した。オリゴヌクレオチドは、主として細胞質でのみ密集し、そして核には欠ける細かい点状蛍光を示した。PNAでは点状蛍光が同様に観察された。しかし、斑点は幾分大きく、そして細胞質および細胞膜上の両方に存在した。アダマンチル−PNAの取り込みを改善する試みの中で、通常DNAのトランスフェクションに用いられる多様な商業的に入手可能な陽イオンリポソームと、PNAを組み合わせた。さらに、脂質DOPEおよびDDABから構成されるPNA含有リポソームもまた調製した。理論上、PNAの疎水性アダマンチル基は、リポソームの脂質層に挿入されており、そしてしたがってPNAを捕獲（entrap）しているはずである。リポソームは、プラスミドDNAを細胞に輸送するのに有効であると報告された単純エタノール注入法により調製された。異なるPNA−リポソーム混合物を、最終PNA濃度1μＭで細胞に与え、そして一晩インキュベーションした。リポソーム試薬またはDOPE/DDABリポソームのいずれかが存在することにより、PNAが単独で添加された場合と比較して、細胞内によりはるかに拡散した蛍光が生じた。しかし、蛍光はそれでも細胞質に限定され、核取り込みの徴候はなかった。対照的に、オリゴヌクレオチドをLipofectamine^TMと混合し、そして最終濃度1μＭで細胞に与えると、細胞の大部分は蛍光染色された核を有した。結論として、アダマンチル結合PNAを細胞に添加すると、PNAが細胞のエンドソームまたはリソソーム区画に落ち着く、エンドサイトーシス経路を連想させる取り込みパターンを生じる。PNAをリポソームトランスフェクション試薬とあらかじめ混合するか、またはDOPE/DDABリポソームに取り込むと、よりはるかに拡散した様式で細胞質中に分布する。当業者は、本発明の好ましい態様に多くの改変および修飾を施してもよく、そしてこうした改変および修飾は本発明の精神から逸脱することなくなされることが可能であることを認識するであろう。したがって、添付の請求項は、本発明の真の精神および範囲内にある、こうしたすべての同等の変動を覆うことが意図される。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION Binding peptide nucleic acids with enhanced cellular uptake Field of the invention The present invention provides a method for binding lipophilic groups and binding to liposomes. Compositions comprising a peptide nucleic acid (PNA) incorporated therein. The PNA is a polyamide Naturally occurring nucleobases or non-naturally occurring nucleobases covalently linked to the backbone Consists of The PNA composition of the present invention further comprises a PNA modified with an amino acid side chain. It may contain NA. The PNA compositions of the present invention exhibit enhanced cell uptake and distribution. Show. The PNA composition incorporated in the liposome is a PNA composition containing no liposome. It showed a more increased cellular uptake and diffuse distribution. Background of the Invention Genes function by transcribing that information into messenger RNA (mRNA). Start. MRNA interacts with the ribosome complex to allow mRNA synthesis. To instruct. This protein synthesis process is known as translation. A variety of translations Requires the presence of cofactors, building blocks, amino acids and transfer RNA (tRNA). Importantly, these are all present in normal cells. Most conventional drugs include one or more target endogenous proteins, e.g. For example, by interacting with enzymes and regulating the protein, Demonstrate. However, typically these agents are not specific for the target protein Interacts with other proteins. Therefore, the effects of specific proteins Effective regulation requires the use of relatively large drug doses. Tan Regulation of protein activity can be achieved by interacting with or inactivating mRNA. If possible, a dramatic reduction in the amount of drug required and the side effects of the drug can be achieved. Could be If these interactions are site-specific, the amount of drug required And further reduction of side effects may be achieved. The working genes If gene transcription can be completely stopped to continuously produce mRNA Would be even more convenient. Oligonucleotides and similar Analogues have been developed and are used as diagnostic, therapeutic and research reagents It has been used. One example of a modification to an oligonucleotide is a non-isotopic label Such as fluorescein, biotin, digoxigenin, alkaline phosphatase Or other reporter molecules. Increased nuclease resistance Other modifications to the ribose phosphate backbone have been made. These modifications include Methyl phosphonates, phosphorothioates and phosphorodithioates Includes any linkage and use of a 2'-O-methyl ribose sugar moiety. Other olives Gonucleotide modifications are created to regulate uptake and cellular distribution Things included. Phosphorothioate oligonucleotides are currently being used in a variety of diseases Used as an antisense agent in human clinical trials for the treatment of conditions I have. With respect to these oligonucleotide modifications, Some improvements have been achieved, but improved oligonucleotide analogs Requests continue to exist. Has a nucleobase that binds to a backbone other than naturally-occurring ribonucleic acid or deoxyribonucleic acid There are several known nucleic acid analogs that These nucleic acid analogs are complementary It has the ability to bind to nucleic acids having a nucleobase sequence. In particular, for example, WO 92/207 Peptide nucleic acids (PNA) as described in 02 are useful as therapeutic and diagnostic reagents It has been shown that This is because they generally have the corresponding wild-type nucleus. This may be because they have a higher affinity for the complementary nucleobase sequence than the acid. PNAs are useful substitutes for oligonucleotides in binding to DNA and RNA. You. Egholm et al., Nature, 1993, 365, 566 and references cited therein. latest The literature reflects the diverse applications of PNA. Hyrup et al., Bioorganic & Med. Chem., 1996. And Nielsen, Perspectives Drug Disc. Des., 1996, 4, 76. A PNA is a compound that is similar to an oligonucleotide but has a different composition. PNA In the above, the deoxyribose skeleton of the oligonucleotide is replaced by a peptide skeleton. Has been replaced. Each subunit of the peptide backbone can be naturally occurring or non-naturally occurring. Binds to raw nucleobases. One such peptide backbone is an amide bond Are constructed with repeating units of N- (2-aminoethyl) glycine linked through. The synthesis of PNAs via preformed monomers has been previously described in WO 92/20702 and WO 92/20703, the contents of which are incorporated herein by reference. PNA structure And more recent advances in synthesis have been described in WO 93/12129 and July 23, 1996. Illustrated in issued U.S. Pat.No. 5,539,082, both of which are incorporated herein by reference. Invite to In addition, the literature describes methods of synthesis, biological properties and uses of PNAs. The publications listed are plentiful. For example, PNAs have the ability to displace double-stranded DNA strands have. Patel, Nature, 1993, 365, 490. Improved methods of synthesizing PNAs are also described. Is coming. Nielsen et al., Science, 1991, 254, 1497; and Egholm, J. Am. Chem. Soc., 1992, 114, 1895. PNA forms duplex and triplex with complementary DNA or RNA I do. Knudson et al., Nucleic Acids Researh, 1996, 24, 494; Nielsen et al. Am.Chem. Soc., 1996, 118, 2287; Egholm et al., Science, 1991, 254, 1497; Egholm et al., J. Am. Chem. So c., 1992, 114, 1895; and Egholm et al., J. Am. Chem. Soc., 1992, 114, 9677. PNA binds to both DNA and RNA and forms a PNA / DNA or PNA / RNA duplex I do. The resulting PNA / DNA or PNA / RNA duplex has a higher melting temperature (T_m) As evidenced, it binds stronger than the corresponding DNA / DNA or DNA / RNA duplex. This high thermal stability of PNA / DNA (RNA) duplexes is a consequence of DNA / DNA or RNA / RNA duplexes. Due to the neutrality of the PNA framework, causing the removal of existing charge repulsions It is said that. Another advantage of a PNA / DNA (RNA) duplex is that T_mIs substantially reduced to salt concentration It is not dependent. DNA / DNA complexes, on the other hand, are highly dependent on ionic strength are doing. Triplex formation by oligonucleotides is a sequence-specific double-stranded deoxyribonucleus. It has been a focus area of research since acid (DNA) cleavage was demonstrated. Moser et al., Science, 1 987, 238, 645. In gene therapy, diagnostic scrutiny and other bioclinical medical applications The potential use of triplex forming oligonucleotides has attracted considerable interest. Uhlmann et al., Chemical Reviews, 1990, 90, 543. Pyrimidine oligonucleotides are Forms a triple helix structure through binding to homopurine targets in double-stranded DNA Has been shown. In these structures, a new pyrimidine chain Is parallel to the Watson-Crick purine strand in the major groove of DNA And bound through sequence-specific Hoogsteen binding I do. Sequence specificity includes thymine recognition adenine (T: A-T) and protonated cytosine Recognized guanine (C⁺: G-C). Best et al., J. Am. Chem. Soc., 1995, 117, 1187. Among the less well studied triplex motifs, purine-rich oligonucleotides Reotide binds to the purine target of double-stranded DNA. Of the third strand in this motif The direction is antiparallel to the Watson-Crick purin chain and the specificity is guanine Recognition guanine (G: G-C) and thymine or adenine recognition adenine (A: A-T or T: A-T). Greenberg et al., J. Am. Chem. Soc., 1995, 117, 5016. Homopyrimidine PNA binds to complementary DNA or RNA and is highly thermostable (PNA)_Two/ It has been shown to form DNA (RNA) triplex. Egholm et al., Science, 1991, 254, 1497; Egholm et al., J. Am. Chem. Soc., 1992, 114, 1895; Egholm et al., J. Am. Chem. Soc., 1992. , 114, 9677. The formation of a triplex comprising two PNA chains and one nucleotide chain was 19 No. 08 / 088,661, filed Jul. 2, 1993, and The contents are incorporated herein by reference. Hoogsteen strand parallel to DNA purine target strand Certain triplex formation is preferred over antiparallel complex formation. By this, screw-PN A allows the use of pseudoisomers instead of cytosines in the Hoogsteen strand. Mie et al. Increased the pH-independent thermostability using cytosine (pseudoisocytosine) A spiral structure is obtained. Egholm et al., J. Am. Chem. Soc., 1992, 114, 1895. In addition, See WO 96/02558, the contents of which are incorporated herein by reference. Peptide nucleic acid refers to both DNA and RNA, both DNA and RNA. Than their binding affinity (their T_mHigher binding, as determined from It has been shown to have affinity. This increase in binding affinity is Nucleic acid oligomers are particularly useful as molecular probes and diagnostics for nucleic acid species. It is useful. In addition to increased affinity, PNAs have increased specificity for DNA binding. But Thus, a PNA / DNA duplex mismatch has a T_m8 to 20 ° C Indicates a decrease. T_mThis decrease in DNA corresponds to the corresponding DNA / DNA duplex mismatch. Not observed in Ji. Egholm et al., Nature 1993, 365,566. A further advantage of PNA over oligonucleotides is that the polyamide backbone of PNA is an enzyme. It is resistant to elemental degradation. Considerable research has been done on oligonucleotides and binding to complementary DNA and RNA strands. The applicability of oligonucleotide analogues as diagnostics, research reagents and potential therapeutics Have been turned to For many applications, the oligonucleotides and oligonucleotides Nucleotide analogues are transported through the cell membrane to express their activity. Or must be taken up by cells. PCT / EP / 01219 is a novel P that binds to complementary DNA and RNA more strongly than the corresponding DNA Enter NA. These PNAs modulate their membrane permeability, modulating their activity Or to add groups that will increase its cellular uptake properties . One way to increase the cellular uptake characteristics of PNAs is to attach a parent lipid group That is. US Patent Application No. 117,363, filed September 3, 1993, Some alkaline amino functionality and these side chains It describes its use to bind leotide. U.S. Patent Application No. 07 / 943,516, filed September 11, 1992 and its corresponding Published PCT application WO 94/06815, inter alia, enhances cellular uptake and is lipophilic. Increased cell retention, and increased distribution of the compound within the cell. Incorporation of other novel amine-containing compounds and their oligonucleotides into Is included. United States patent application Ser. No. 08 / 116,801, filed Sep. 3, 1993, Derivatized to contain a thiol functionality through which side chains are attached And oligonucleosides. Recently, liposome drug delivery systems incorporating various biomolecules and drugs have been studied. And increased cellular uptake and distribution, resulting in reduced toxicity and efficacy Has been found to show an increase in Chonn and Cullis, Current Opinion in Biotechnology, 1995, 6, 698; Mannino et al., Biotechniques, 1988, 6,682; Blume and And Cevc, Biochem et Biophys. Acta, 1990, 1029, 91; and Lappalainen et al., Antivir al Res., 1994, 23, 119. Liposomes are aqueous cores and lipids that encapsulate the core It is a very small sphere composed of double layers. Liposome preparation methods are described in the literature. Available. G. Gregoridadis, "Liposome Technology", Volume 2, G. Gre goridadis (supervised), CRC Press, 1993, p. 1; Watwe and Bellare, Curr. Sci., 1995, 6 8,715. Several liposome drugs are currently on the market or under development. C honn and Cullis, Current Opinion in Biotechnology, 1995, 6, 698. WO 96/10391 published April 11, 1995 was used to form liposomes. Polyethylene glycol-modified ceramide lipids and the use of these liposomes Use as a drug delivery vehicle is described. WO 96/24334, published on August 15, 1996, describes the use of drugs in the cytoplasm of cells, Amino mannose derivatized cholesterol moieties for delivery to smooth muscle tissue A lipid construct is described. WO 96/40627, published December 19, 1996, describes oligonucleotides, nucleic acids, Cationic lipid-containing liposomes useful for delivery of biomolecules such as peptides and other agents Describe the prescription. Despite recent advances, stable pairs with enhanced cell uptake and distribution There is still a demand for products. Summary of the Invention The present invention relates to modifications in which the parent lipid group is attached and the amino acid side chain is attached to the backbone. A peptide nucleic acid (PNA) having a backbone is provided. The present invention also provides for attachment to a parent lipid group. And liposome composition containing peptide nucleic acid (PNA) incorporated in the liposome Also provide things. The PNA of the present invention comprises a nucleic acid base covalently bonded to a polyamide backbone. Including. Typical nucleobases include four major naturally occurring DNA nucleobases (ie, Thymine, cytosine, adenine and guanine), other naturally occurring nucleobases (eg, , Inosine, uracil, 5-methylcytosine, thiouracil and 2,6-diamido Nopurin) and artificial nucleobases (eg, bromothymine, azaadenines and Azaguanines). These nucleobases are linked through appropriate linkers. It binds to the lamide skeleton. Preferred peptide nucleic acids of the invention have the general formula (I):And where: Each L is independently a naturally occurring or non-naturally occurring nucleobase; Each R^{7 '}Is hydrogen or the side chain of a naturally occurring or non-naturally occurring amino acid, And one R^{7 '}Is an amino acid side chain; R^hIs OH, NH_Two, Or NHLisNH_TwoIs; RⁱAnd R^jEach independently represents an amino acid labeled with a parent lipid group or a fluorescent group. An acid; or RⁱAnd R^jAre both lipophilic groups; n is an integer from 1 to 30. RⁱIs D-lysine labeled with a fluorescent group, and R^jIs an adamantoyl group PNAs having certain formulas (I) are preferred. Even more preferably, RⁱBut fluore C-labeled D-lysine and R^jIs an adamantoyl group (I) PNA. Also preferred is RⁱAnd R^jAre both adamantoyl groups Is a PNA having the formula (I) More preferably, R^{7 '}At least one of One is a PNA of the formula (I), which is a side chain of D-lysine. Preferably, the substituent R^{7 '}The carbon atom to which is attached is stereochemically enriched . Hereinafter, “stereochemically enriched” is an amount sufficient to provide a beneficial effect, It means that one stereoisomer is more than another stereoisomer. Preferably one Occupies more than 50%. More preferably, one stereoisomer has 80 Account for more than%. Even more preferably, one stereoisomer makes up 90% or more You. Even more preferably, one stereoisomer makes up 95% or more. Even better More preferably, one stereoisomer accounts for 99% or more. Even more preferably , 1 The two stereoisomers are present in substantially quantitative amounts. The present invention also provides a liposome composition comprising a peptide nucleic acid incorporated into a liposome. Wherein said peptide nucleic acid is: Each L is independently a naturally occurring or non-naturally occurring nucleobase; Each R^{7 '}Is hydrogen or the side chain of a naturally occurring or non-naturally occurring amino acid; R^hIs OH, NH_Two, Or NHLisNH_TwoIs; RⁱAnd R^jEach independently represents an amino acid labeled with a parent lipid group or a fluorescent group. An acid; or RⁱAnd R^jAre both lipophilic groups; n is an integer from 1 to 30 Also provided is the above liposome composition having formula (I). RⁱIs D-lysine labeled with a fluorescent group, and R^jIs an adamantoyl group PNAs having certain formulas (I) are preferred. Even more preferably, RⁱBut fluore C-labeled D-lysine and R^jIs an adamantoyl group (I) PNA. Also preferred is RⁱAnd R^jAre both adamantoyl groups Is a PNA having the formula (I) More preferably, R^{7 '}At least one of One is a PNA of the formula (I), which is a side chain of D-lysine. Preferably, the substituent R^{7 '}The carbon atom to which is attached is stereochemically enriched . The PNAs of the present invention are suitable for standard peptide synthesis methods, either in solution or on a solid phase. In response, they are synthesized. The present invention further incorporates amino acid side chains into the PNA backbone and attaches the parent lipid group to the PNA. And introducing the PNA into the liposome to allow cellular uptake of the peptide nucleic acid Also provided are methods for enhancing the distribution and distribution. Brief description of figures FIG. 1 shows the structure of some parent lipid groups. Detailed description of the invention In accordance with the present invention, peptide nucleic acids and cells exhibiting enhanced cellular uptake and distribution. And liposome compositions are provided. The peptide nucleic acid (PNA) of the present invention It is constructed from a plurality of nucleobases linked to a polyamide backbone by a linker. In one preferred embodiment of the invention, the PNA is attached to a parent lipid group. This specification As used herein, "attach" refers to attaching a parent lipid group to a PNA of the invention. another In a preferred embodiment, the polyamide skeleton of the PNA of the present invention is derivatized. As used herein, “derivatized” refers to at least one naturally occurring or non-naturally occurring Modifies the PNA backbone by attaching the side chains of the raw amino acids to the polyamide backbone Refers to The liposome composition of the present invention comprises Including the peptide nucleic acids of the invention. Therefore, the liposome composition of the present invention Includes PNA encapsulated by the The PNA and liposome composition of the present invention comprise: Figure 2 shows enhanced cell uptake and distribution. The PNA of the present invention has the formula (I) wherein the nucleobase L is naturally occurring in a position as found in nature. Binds to the generated nucleobase, ie, at position 9 relative to adenine or guanine. Thymine or cytosine, non-naturally occurring nucleobase (nucleobase analog) or nucleic acid Binds at position 1 to the base binding moiety. A typical nucleobase has four major natural Generated DNA nucleobases (ie, thymine, cytosine, adenine and guanine), Other naturally occurring nucleobases (e.g., inosine, uracil, 5-methylcytosine, Uracil and 2,6-diaminopurine) and artificial nucleobases (eg, bromo Thymine, azaadenines and azaguanines). These nucleobases Is attached to the polyamide backbone through a suitable linker. The PNA of formula (I) contains one or more amino acid moieties in its structure. You. These amino acids may be naturally occurring or non-naturally occurring. Naturally occurring Amino acids include α-amino acids where the chiral center has the D-configuration. This Such naturally occurring amino acids may be either essential or non-essential amino acids . The non-naturally occurring amino acids used in the PNAs of the invention of formula (I) include a chiral center at the L -Α-amino acids having a steric configuration are included. Non-naturally occurring amino acids also include And are prepared synthetically, for example, halo- and cyano-substituted Benzyl, tetrahydroisoquinolylmethyl, cyclohexylmethyl, and Includes amino acids with unusual side chains, such as lysylmethyl. Other synthesis Amino acids include β-amino acids. Amino acids may be added to the PNA of formula (I), as part of the monomer used, or At the end, it may be introduced. The monomer building blocks used for PNA synthesis It is possible to incorporate any of these amino acids. Preferably, the amino used Noic acid is glycine and R^{7 '}Is H. R^{7 '}Also means methyl, ethyl, benzyl Isopropyl, p-hydroxybenzyl, halobenzyl, carboxymethyl , Tetrahydroisoquinolinylmethyl, or aminohexanoyl No. Amino acids also have a terminal R^h-CO- group is a natural or non-naturally occurring amino acid, α- Or an aminoacyl group derived from any of the β-amino acids; Can be attached to the C-terminus of the PNA so that it has a D- or L-configuration at the ral center. Good. Preferably, the C-terminal amino acid is lysine. Amino acids are also RⁱAnd And R^jIs an independent, naturally occurring or non-naturally occurring amino acid, α- or β- An aminoacyl group derived from any of the amino acids, and at the α-chiral center -Or L-configuration, may be incorporated at the N-terminus of the PNA of structure (I) Is also good. Preferably, the N-terminal amino acid is lysine. The parent lipid groups that bind to the PNA of formula (I) of the present invention include natural and synthetic fatty acids, Alcohol and diacylglycerol derivatives such as adipic acid, Lumitic acid, decanoic acid, octadecanoic acid, oleic acid, elaidic acid, linolenic Acid, bile acid, heptyl succinic acid, palmityl succinic acid, polyglycolic acid, geo Kutadecyl glycerol phosphatidylic acid, dioleoyl glycerol phospha Tidylic acid, adamantoyl, octadecyloxycarbonyl, and decalinoy And so on. These parent lipid groups may be located at any suitable position on the PNA molecule of formula (I). May be combined with each other. Preferably, the parent lipid group is RⁱAnd R^jEach independently Binds to the N-terminus of the PNA of the present invention, which may be a parent lipid group. More preferably , RⁱAnd R^jAre both adamantoyl groups. The PNA of the present invention may be labeled, e.g., to allow for a convenient means of detecting the PNA. For example, it has the formula (I) in which a fluorescent group is incorporated. Fluorescent groups are limited None, but fluorescein, rhodamine, pyrenyl, cyanine dye, Cy5^TM(Bio logical Detection Systems, Inc., Pittsburgh, PA) And derivatives of such dyes. These are added to the PNA of formula (I) It may be incorporated at any suitable position on the PNA. Preferably each RⁱIs a fluorescent group Chemical moiety. RⁱIs an amino acid derivatized with a fluorescent group. Is more preferable. RⁱIs still more preferably lysine having an ε-fluoresceinyl group. preferable. The liposome composition of the present invention comprises the liposome-encapsulated PNA of the present invention. Including. The liposome composition exhibits enhanced cell uptake and distribution. Liposo Is a colloidal dispersion and protects the entrapped PNA from the environment A stable transport system for transporting to the target area. The liposome is the PNA of the present invention. Represents a stable delivery vehicle that enhances in vitro and in vivo stability. Liposo A liposome composition of the invention comprising a PNA of the invention incorporated into a Appropriate and acceptable carriers and carriers are used according to standard methods known to It may be formulated as a pharmaceutical composition using adjuvant. Liposomes that may be used include small unilamellar vesicles (SUV) , Large unilamellar vesicles (LUV) and multilamellar vesicles (multilamell ar vesicle) (MLV). LUVs in the size range of 0.2 to 0.4 μm are water It is possible to encapsulate a significant proportion of large macromolecules, including ionic buffers Have been shown (eg, RNA, DNA and intact virions) Is encapsulated in an aqueous form and transported to brain cells in biologically active form Is possible: Fraley et al., Trends Biochem. Sci., 1981, 6, 77). Liposome composition Usually comprises one or more lipids, in particular phospholipids, in particular high phase transition temperature phospholipids. Is a conjugate of the lipid bound to further steroids, especially cholesterol. You. Examples of lipids useful for liposome production include phosphatidyl compounds, e.g. Fatidylglycerol, phosphatidylcholine, phosphatidylserine, phos Fatidylethanolamine, sphingolipids, cerebrosides and gangs Liosides. Particularly useful are those in which the lipid moiety has 14 to 18 carbon atoms, especially Contains 16 to 18 carbon atoms and is saturated (2 to 18 carbon atoms in the chain) Diacylphosphatidylglycerols (lacking heavy bonds). Examples of phospholipids Are phosphatidylcholine, dipalmitoylphosphatidylcholine and Aroylphosphatidylcholine is included. Liposomal targeting can be either passive or active. Passive targeting is Posomes are naturally distributed in cells of the reticuloendothelial system in organs including sinusoids. Take advantage of trends. Active targeting, in contrast, involves organs and other than the naturally occurring site of localization. Virus protein coat (Morishita Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1993, 90, 8474), monoclonal antibody (or Its suitable linking moiety), sugar, glycolipid or protein (or its appropriate oligo) By coupling to specific ligands such as peptide fragments), or Liposome by changing the composition and / or size of the liposome With the modification of The surface of the targeted colloidal dispersion can be modified in a variety of ways. Good. For liposome-targeted delivery systems, the targeting ligand is tightly bound to the lipid bilayer. Lipid groups may be incorporated into the lipid bilayer of the liposome in order to keep it. Fat A variety of linking groups may be used to attach the protein chain to the target ligand. Target Riga Is prominently found on cells where delivery of the oligonucleotides of the invention is desired. Binds to specific cell surface molecules and, for example, (1) is more pronounced in cells where delivery is desired Hormones, growth factors, or any of them, which are bound by specific cell receptors A suitable oligopeptide fragment; or (2) antigenic Polyclonal or monoclonal antibodies that specifically bind to pitopes, or Are their appropriate fragments (eg, Fab; F (ab ')_Two). Two or so Combine more bioactive agents (eg, PNA and conventional drug, or two PNAs) into a single They may be combined in a posome and delivered by the liposome. Intracellular Add agents to colloidal dispersions that enhance qualitative and / or targeting of their contents It is also possible. The PNAs of the present invention can be used for gene regulation (eg, gene targeted drugs), diagnostic methods, It may be used for science and other research purposes. The PNA also contains RNA and single-stranded DN Targets A (ssDNA) and is used to produce both antisense gene regulatory parts And hybridization, eg, for identification and purification of nucleic acids. It may be used as a probe. Furthermore, the PNA is double-stranded with double-stranded DNA (dsDNA). It may be modified to form a helix. Compounds that specifically bind to dsDNA Has applications as a gene targeting drug. These compounds Reduces cancer, acquired immunodeficiency disorders (AIDS) and other viral infections and genetic disorders It is a very useful drug for treating various diseases, including. In addition, these The compounds are used in research, diagnostics, and for the detection and isolation of specific nucleic acids. May be. Gene targeting drugs are nucleic acid salts that are complementary to the regulatory region (promoter) of the target gene. It is designed to have a base sequence (preferably containing 10 to 20 units). Therefore, Upon administration, the gene targeting agent binds to the promoter and RNA polymerase Prevents access to the promoter. As a result, mRNA and thus gene production No product (protein) is produced. Targets are essential for viruses No viable virions are produced if they are in the offspring Will. Alternatively, the target region is downstream from the promoter and RNA polymerase Truncated mRNAs / proteins that cause the The quality may be formed. Synthesis of PNA oligomer The principle of immobilizing molecules on a solid matrix during the reaction is either solid-phase synthesis or Also known as Merrifield synthesis. Merrifield, J. Am. Chem. Soc., 1963, 8 5,2149; and Science, 1986, 232,341. Stepwise or cleavage of amino acids into peptides Established methods for one-sided solid-phase construction generally involve cross-linked styrene-divinylbenzene. A beaded matrix of the copolymer is used. The crosslinked copolymer is Formed by adding a mixture of divinylbenzene to pearl polymerization of monomer Is done. Usually, 1 to 2% crosslinking is used. Such a matrix It may be used for light phase solid phase PNA synthesis. For the first functionalization of the solid phase, traditional solid phase peptide synthesis More than 50 methods have been described in relation to. Barany and Merrifield, “The Pep tides ", Volume 2, Academic Press, New York, 1979, pp. 1; and Stewa rt and Young, “Solid Phase Peptide Synthesis”, 2nd edition, Pierce Chemic al Company, Illinois, 1984. Introduce functionality on the solid phase, regardless of its properties The objective is to couple to a copolymer solid support and to said solid support Forming an anchoring linkage between the C-termini of the first amino acid And As will be appreciated, the fixed linkage also provides for solid support and amino support. It may be formed between the N-terminal of the noic acid. The "concentration" of functional groups present on the solid phase is generally It is typically expressed in millimoles per gram (mmol / g). These established methods are All are in principle useful within the context of the present invention. The preferred method of PNA synthesis uses aminomethyl as the initial functionality. A Minomethyl almost completely forms an amide bond with a carboxylic acid group. Particularly useful as a "pacer" or "handle" group. Many corresponding spaces Sir or handle forming bifunctional reagents are described. Barany et al., Int. J. Peptide Protein Res., 1987, 30, 705. Certain functionalities (eg, benzhydrylamino, 4- Methylbenzhydrylamino and 4-methoxybenzhydrylamino) are Cleave the synthetic PNA chain from the solid support so that the C-terminus of the chain is released as an amide And may not be required to introduce a spacer group. Any Such functionality may also be used beneficially in the context of the present invention. A typical N protecting group is tert-butyloxycarbonyl (BOC) (Carpino, J. Am. Ch. em. Soc., 1957, 79, 4427; McKey et al., J. Am. Chem. Soc., 1957, 79, 4686; and Anderso. n et al., J. Am. Chem. Soc., 1957, 79, 6180), 9-fluorenylmethyloxycarbonyl (FMOC) (Carpino et al., J. Am. Chem. Soc., 1970, 92, 5748 and J. Org. Chem., 1972, 37, 3404), Adoc (Hass et al., J. Am. Chem. Soc., 1966, 88, 1988), Bpoc (Sieber, Helv. Chem. Acta., 1968, 51, 614), Mcb (Brady et al., J. Org. Chem., 1977, 42, 143), Bic (Kemp et al.). , Tetrahedron, 1975, 4624), o-nitrophenylsulfenyl (Nps) (Zervas et al., J. Am. Chem. Soc., 1963, 85, 3660) and dithia succinoyl (Dts) (Barany et al., J. Am. Chem. Soc., 1977, 99, 7363) and other groups known in the art. these Amino protecting groups, especially those based on the widely used urethane functionality, Prevents racemization during the coupling of α-amino acids (the easily formed oxazo Mediated by tautomerization of a linone (azlactone) intermediate (Goodman et al., J. Am. C hem. Soc., 1964, 86, 2918)). In addition to these amino protecting groups, non-urethane Protecting groups can also be applied when constructing PNA molecules. Side chain protecting groups must be resistant to the conditions of repeated amino deprotection cycles. Thus, the choice of side-chain protecting group generally depends on the choice of amino protecting group. this is, The overall strategy for chemically constructing PNA molecules is described, for example, in the "BOC-benzyl" Relies on different acid stability of amino and side chain protecting groups (as in the case of approaches) Or orthogonal (as in the “FMOC-t-Bu” approach described above). l) that is, trying to use a chemoselective protection scheme, You. Following the coupling of the first amino acid, the next step in solid phase synthesis is the desired PNA It is a systematic elaboration of chains. This finish includes repeated deprotection / power A pull cycle is included. Transient on the last coupled amino acid A suitable protecting group, such as BOC or FMOC, releases the N-terminal amine function, With appropriate treatment, for example, acid degradation such as trifluoroacetic acid in the case of BOC, Alternatively, treatment with a base such as piperidine in the case of FMOC removes the entire amount. The next desired N-protected amino acid is then substituted for the last coupled amino acid Coupling to N-terminus. This N-terminal of the last coupled amino acid And coupling with the C-terminus of amino acids can be achieved by several methods Is possible. For example, subsequent amino acids may be activated in any of several ways May be achieved by providing in the form containing a carboxyl group. Phthalimide esters (Nefkens et al., J. Am. Chem. Soc., 1961, 83, 1263). ), Pentafluorophenyl ester (Kovacs et al., J. Am. Chem. Soc., 1963, 85, 183) ), Imidazole esters (Li et al., J. Am. Chem. Soc., 1970, 92, 7608), and 3- Hydroxy-4-oxo-3,4-dihydroquinazoline (Dhbt-OH) ester (Konig First forms of active ester derivatives such as Chem. Ber., 1973, 103, 2024 and 2034). Or symmetrical anhydrides (Wieland et al., Angew. Chem., Int. Ed. Engl., 1971, 10, 336). Includes the initial formation of any anhydride. Alternatively, the carboxyl of the subsequent amino acid The group is, for example, dicyclohexylcarbodiimide (Sheehan et al., J. Am. Chem. Soc., 1 955,77,1067) or its derivatives, with the aid of a condensing reagent. May be directly reacted with the N-terminal of the labeled amino acid. PN containing secondary amino group When constructing the A molecule, benzotriazo Ryl N-oxy-trisdimethylaminophosphonium hexafluorophosphate ( BOP), “Castro'sreagent” (Rivaille et al., Tetrahedron, 1980, 36) , 3413) is recommended. Following the construction of the desired PNA chain, including the protecting groups, the next step is usually the PNA chain Deprotection of the acid moiety and cleavage of the synthesized PNA from the solid support. this These steps are performed substantially simultaneously, thereby providing the desired type of free PNA molecule. May be. In the “BOC-benzyl” protection scheme described above, the last deprotection of the side chain and the solid Release of the PNA molecule from the support can be achieved by using a strong acid such as anhydrous HF (Sakakibara et al., Bull. Chem. Soc. Jpn., 1965, 38,4921), boron tris (trifluoroacetic acid) (Pless et al., Helv. Chim. Acta, 1973, 46, 1609) and trifluoromethanesulfonic acid and meta Sulfonic acids such as sulfonic acids (Yajima et al., J. Chem. Soc., Chem. Comm., 1974, 107) Most often this is done by the use of The strong acid (eg anhydrous HF) deprotection method uses a PNA chain May lead to alkylation and acylation of sensitive residues in May produce reactive carbocations. These side reactions are caused by Aniso Phenol, dimethyl sulfide, and mercaptoethanol Due to the presence of Benger, it can only be partially avoided. Therefore, the harmful Cal Sulfide-assisted removal of bocation precursors to form inert sulfonium salts Acid decomposition S_N2 Deprotection method (Tam et al., J. Am. Chem. Soc., 1983, 105, 6442 and J. Am. Chem. Soc. 1986,108,5242), the so-called "low" method is often used for peptide and PNA synthesis. Often used. Deprotection and / or other cleavage at the last cleavage of the PNA solid support The method includes base catalyzed alcoholysis (Barton et al., J. Am. Chem. Soc., 1973, 95, 4501). , Ammonolysis, hydrazinolysis (Bodanszky et al., Chem. Ind., 1964, 1423), water Elemental decomposition (Jones, Tetrahedron Lett. 1977, 2853 and Schlatter et al., Tetrahedron Le tt. 1977, 2861) and photolysis (Rich and Gurwara, J. Am. Chem. Soc., 1975, 97, 15). 75) may be included. Finally, in contrast to the chemical synthesis of conventional peptides, the aminoethylglycyl backbone unit The stepwise chain construction of achiral PNAs, such as those based on You may start from. One skilled in the art will recognize that syntheses starting at the C-terminus will typically be protected amino acids. The synthesis using a thiol group and a free or activated acid group and starting at the N-terminus Recognizing the use of protected acid groups and free or activated amine groups There will be. Potential targets for treatment and prevention include herpes simplex virus (herpes). simplex virus) (HSV), human papilloma virus (HPV), Human immunodeficiency virus (HIV), Candida Rubicans (candida albicans), influenza virus ), Cytomegalovirus (CMV), intercellular adhesion molecule (ICAM) ), 5-lipoxygenase (5-LO), phospholipase A_Two(PLA_Two),protein Includes kinase C (PKC), and the ras oncogene. The potential of these targets Various treatments include herpes simplex I and II infections of the eyes, lips, genitals, and the whole body; genital warts Cervical cancer; vulgar vulgaris; Kaposi's sarcoma; AIDS; skin and systemic fungal infections; Influenza; pneumonia; retinitis and pneumonia in immunosuppressed patients; Alveolus; inflammation of the eye, skin and systemic; cardiovascular disease; cancer; asthma; psoriasis; Prolapse; myocardial infarction; gastrointestinal disease; kidney disease; rheumatoid arthritis; osteoarthritis; acute pancreas Inflammation; septic shock; and Crohn's disease. Generally, therapeutic or prophylactic treatment is suspected to require such therapy The patient is given a PNA or liposome of the invention, usually in a pharmaceutically acceptable carrier. Depends on the nature of the particular disease, its severity and the overall condition of the patient. The amount and duration of administration will vary. PNA and liposome combination of the present invention The composition consists of carriers, thickeners, diluents, buffers, preservatives, surfactants May be formulated into pharmaceutical compositions, which may include sexual agents and their equivalents . The pharmaceutical composition may also include one or more active ingredients, e.g. For example, antimicrobial agents, anti-inflammatory agents, anesthetics and the like may be included. The pharmaceutical composition will depend on whether local or systemic treatment is desired, and Depending on the area to be administered, it may be administered in a number of ways. Administration is topical (eye, vagina, Enteral, intranasal, transdermal), oral or parenteral, eg intravenous It may be by drops, subcutaneous, intraperitoneal or intramuscular injection or intrathecal or intraventricular administration. Formulations for topical administration include transdermal patches, ointments, lotions and creams. Lozenges, gels, drops, suppositories, sprays, liquids and powders may be included. Custom Customary drug carriers, nucleic acid carriers, aqueous, powder or oily bases, Thickeners and their equivalents may be necessary or desirable in certain circumstances There is. Coated condoms, gloves and the like are also useful. May be For topical administration, the PNA and liposome compositions of the present invention may also be used. It also includes the transport of the animal to the epidermis by lectroporation. December 12, 1996 Published Zewart et al., WO 96/39531. Compositions for oral administration include powders or granules, suspensions in aqueous or non-aqueous media. Includes suspensions or solutions, capsules, sachets, or tablets. Increase Thickeners, fragrances, diluents, emulsifiers, dispersing aids or binders are desirable. The PNA and liposome compositions of the present invention are delivered directly to the vitreous humor of an animal eye. Intravitreal injection is described in US Pat. No. 5,595,978 issued Jan. 21, 1997. And its contents are incorporated herein by reference. An isolated part of a tubular organ or tissue (eg, artery, vein, ureter or urethra) Tube delivery for direct delivery of the PNA and liposome compositions of the invention to For the treatment of patients with diseases or conditions affecting the lumen of such organs or tissues May be desirable. To achieve this mode of administration, a catheter or cannula Surgically introduced by appropriate means. The organ or tissue to be treated Is separated, and then the PNA or liposome composition of the present invention is catheterized or Inject through cannula. The infusion catheter or cannula is then removed Remove the ligature, which has achieved flow through the organ or tissue, and separation of that part Revive by doing. Morishita et al., Proc. Natl. Acad. Sci., U.S.A., 1993, 90. , 8474. Intraventricular for delivering the PNA or liposome composition of the present invention directly to the patient's brain Administration may be desirable in treating patients with diseases or conditions affecting the brain is there. To achieve this form of administration, a silicone catheter is surgically placed in the ventricle. A subcutaneous infusion pump (Medtronic I) introduced and surgically implanted in the abdominal area nc., Minneapolis, MN). Zimm et al., Cancer Research, 1984, 44, 1 698; and Shaw, Cancer, 1993, 72 (11 Suppl.), 3416. Using the pump, Inject PNA or liposome composition and aid external programming equipment It allows more accurate dosing adjustments and dosing schedule variations. Pump storage The storage capacity is 18 to 20 ml and the infusion rate is in the range of 0.1 ml to 1 ml per hour. You may. Dosing frequency ranging from daily to monthly, and from 0.01 μg / kg body weight Pump reservoirs are every 3 to 10 weeks, depending on the dose administered in the range of 100 g Will be replenished with. Pump refilling is achieved by percutaneous puncture of the pump's self-sealing diaphragm. You. Compositions for intraventricular administration may include sterile aqueous solutions, which may also include buffering agents, diluted solutions. Excipients and other suitable additives may also be included. Intrathecal delivery of the PNA or liposome composition of the present invention directly to the spinal column of a patient Administration may be desirable for treatment of a patient with a disease of the central nervous system. Administration A silicone catheter into the L3-4 lumbar intervertebral space of the patient to achieve Implanted and connected to a subcutaneous infusion pump that is surgically implanted in the upper abdominal region I do. Luer and Hatton, The Annals of Pharmacotherapy, 1993, 27,912; Ettinge r et al., Cancer, 1978, 41, 1270; and Yaida et al., Regul. Pept., 1995, 59, 193. The pump Using a PNA or liposome composition, and an external programming device Aid in accurate dosing adjustments and dosing schedule variations. Po The pump has a storage capacity of 18 to 20 ml and an infusion rate in the range of 0.1 to 1 ml per hour. You may. Dosing frequency ranging from daily to monthly, and 0.01 μg / kg body weight Pump storage containers for 3 to 10 weeks, depending on the dose administered in the range Replenished at intervals. Pump refill is achieved by a single percutaneous puncture of the pump's self-sealing septum Is done. Compositions for intrathecal administration may include sterile aqueous solutions, which may also include buffering agents. , Diluents and other suitable additives. To achieve delivery to areas other than the brain or spinal column through this method, Connect the catheter to a subcutaneous infusion pump into the hepatic artery for delivery to the liver, for example. It may be formed. Kemeny et al., Cancer, 1993, 71, 1964. The infusion pump is also It may be used to accomplish forwarding. Ewel et al., Cancer Research, 1992, 52, 3005; And Rubenstein et al., J. Surg. Oncol., 1996, 62, 194. Compositions for parenteral, intrathecal or intraventricular administration, or liposome systems, are sterile Aqueous solutions may also be included, which may also include buffers, diluents and other suitable additives. It may be. Dose determination depends on the severity and responsiveness of the disease state to be treated The course of treatment may range from days to months, until healing is achieved, or Continue until mitigation is achieved. Is the optimal dosing schedule a measurement of drug accumulation in patients? It may be calculated from it. Those of ordinary skill in the art will readily appreciate optimum dosages, dosing methodologies and countermeasures. It is possible to determine the reinstatement rate. The optimal dose depends on the relative potency of the individual PNA. And are generally variable in in vitro and in vivo animal models. EC found to be effective₅₀Can be estimated based on general The dose is 0.01 μg to 100 g per kg of body weight, and once or more daily In addition, administration may be once, weekly, monthly, or annually, or once every 2 to 20 years. Synthesis of monomer subunit The monomer subunit is preferably, as described in Examples 1 and 2, Through the protection / deprotection process, the methyl or ethyl of (BOC-aminoethyl) glycine Synthesized according to the general scheme starting with the preparation of any of the esters. Thymine alone The base of the dimer is described in Examples 4 and 5, and the synthesis of the protected cytosine monomer is This is described in Example 6. Synthesis of the protected adenine monomer involves alkylation of adenine with ethyl bromoacetate ( Example 7) and confirmation of the substitution position (ie, the 9th position) by X-ray crystallography. So After N⁶The amino group with the reagent N-ethyl-benzyloxycarbonylimidazo; Benzyloxycarbonyl group by using (Example 8). By simple hydrolysis of the product ester (Example 9)⁶ -Benzyloxycarbonyl-9-carboxymethyladenine was obtained (Example 1). 0 and 11), which were used for standard PNA oligomer synthesis. For the synthesis of the protected G monomer, the starting material, 2-amino-6-chloropurine, was prepared by adding Alkylation with an acid (Example 12) and then the 6-chloro group is replaced by a benzyloxy group (Example 13). PyBrop, an agent that uses the resulting acid as a coupling agent^TMWhen Both (BOC-aminoethyl) glycine methyl ester (from Example 2) and cup And the resulting ester is hydrolyzed (Example 14) to give the protected G monomer Obtained. Following PNA oligomer synthesis, O⁶-The benzyl group is added to the last HF cleavage stage Removed on floor. Further objects, advantages and novel features of the invention will be apparent from these following examples. Upon examination, it will become apparent to one skilled in the art. The following examples illustrate the invention And is not intended to limit the invention. One skilled in the art will appreciate that Recognize many equivalents of certain materials, compositions and methods or perform routine experimentation. It will be possible to check through. Such equivalents are not considered to be within the scope of the present invention. Done. General mention The following abbreviations are used in the experimental examples: DMF, N, N-dimethylformamide; Tyr Lys, lysine; DCC, N, N-dicyclohexyl-carbodiimide; D CU, N, N-dicyclohexylurea; THF, tetrahydrofuran; aeg, N-acetone Tyl-N- (2'-aminoethyl) glycine; aek, N-acetyl-N- (2'-A Minoethyl) lysine; Pfp, pentafluorophenyl; BOC, tert-butoxycal Bonyl: Z, benzyloxycarbonyl; NMR, nuclear magnetic resonance; s, singlet; d, Doublet; dd, doublet doublet; t, triplet; q, quadruple; m, multiplet; b, wide (broa d); δ, chemical shift; ppm, parts per million (chemical shift). NMR spectra were analyzed using JEOL FX90Q using tetramethylsilane as the internal standard. Recorded on a light meter or Bruker 250 MHz. Mass spectrometry is based on VG FAB sources and Performed on a MassLab VG 12-250 quadropole instrument fitted with lobes. Melting points are recorded on a Buchi melting point apparatus and are uncorrected. N, N-dimethyl Formamide is dried over a 4Å molecular sieve, distilled and stored over a 4Å molecular sieve. Existed. Pyridine (HPLC quality) was dried over a 4 molecular sieve and stored. Other working solvents were of the highest quality available or distilled prior to use. Geo The xane was passed through basic alumina before use. BOC-anhydride, 4-nitropheno , Methyl bromoacetate, benzyloxycarbonyl chloride, pentafluoro All phenols were obtained from Aldrich Chemical Company. Thymine, cytosine, All adenines were obtained from Sigma. Thin layer chromatography (tlc) was performed using the following solvent system: (1) chloro Form: triethylamine: methanol, 7: 1: 2; (2) methylene chloride: (3) chloroform: methanol: acetic acid, 85: 10: 5. The point is UV (254 nm) and / or ninhydrin solution (1000 ml of 1-butanol and 30 ml of acetic acid) Ninhydrin (3 g), heated at 120 ° C. for 5 minutes, and sprayed. Visualization was achieved by re-heating. The carboxy terminus (C terminus) of the PNA oligomer may be substituted with various functional groups . In one method, this is done through the use of different resins. PNA oligomer The amino terminus (N-terminus) is also the last PNA unit in the last coupling step. The monomer may be capped using a carboxylic acid-based capping reagent. Or may be substituted with various linking groups. Representative examples of C and N terminal groups are as follows: Shown in Resin used aeg-PNA / aeg-PNA derivative to be prepared (Capping reagent = acetyl) Merrifield CH_ThreeCONH- (PNA) -COOH H_TwoN- (PNA) -COOH Lys replacement Merrifield H_TwoN- (PNA) -Lys-COOH Merrifield H_TwoN- (PNA) -CONH_Two Lys replacement MBHA H_TwoN- (PNA) -Lys-CONH_Two Lys replacement Merrifield CH_ThreeCONH- (PNA) -Lys-COOH H_TwoN- (PNA) -COOH Lys replacement Merrifield H_TwoN- (PNA) -Lys-COOH Merrifield H_TwoN- (PNA) -CONH_Two MBHA H_TwoN- (PNA) -CONH_Two Lys replacement MBHA H_TwoN- (PNA) -Lys-CONH_Two MBHA CH_ThreeCONH- (PNA) -CONH_Two H_TwoN- (PNA) -CONH_Two Lys substituted MBHA CH_ThreeCONH- (PNA) -Lys-CONH_Two (Capping reagent = N-Boc glycine) Merrifield BocGly- (PNA) -COOH Lys substituted Merrifield BocGly- (PNA) -Lys-COOH MBHA BocGly- (PNA) -CONH_Two Lys substituted MBHA BocGly- (PNA) -Lys-CONH_Two (Capping reagent = 1. Glycine; 2. Cholic acid) Merrifield Chol-Gly- (PNA) -COOH Lys substituted Merrifield Chol-Gly- (PNA) -Lys-COOH MBHA Chol-Gly- (PNA) -CONH_Two Lys substituted MBHA Chol-Gly- (PNA) -Lys-CONH_Two Further examples are described in U.S. Pat. See in patent application Ser. No. 08 / 275,951. Example 1 Synthesis of N-benzyloxycarbonyl-N '-(BOC-aminoethyl) glycine Aminoethylglycine (52.86 g, 0.447 mol) is dissolved in water (900 ml), and Dioxane (900 ml) was added. The pH was adjusted to 11.2 with 2N NaOH. pH 11 Tert-butyl-p-nitrophenyl carbonate (128.4 g, 0 .537 mol) in dioxane (720 ml) and added dropwise over 2 hours did. Maintain the pH at 11.2 for at least another 3 hours and then with stirring Left overnight. The yellow solution was cooled to 0 ° C. and adjusted to pH 3.5 with 2N HCl . The mixture was washed with chloroform (4 × 100 ml) and the aqueous phase was washed with 2N NaOH at 0 ° C. The pH was readjusted to 9.5. Benzyloxycarbonyl chloride (73.5ml, 0.515mo l) was added over half an hour while maintaining the pH at 9.5 with 2N NaOH. 4 following The pH was adjusted frequently over time, and the solution was left overnight with stirring. Next day, solution Is washed with ether (3 × 600 ml) and then the pH of the solution is adjusted to 1 with 2N HCl at 0 ° C. Adjusted to .5. The title compound was isolated by extraction with ethyl acetate (5x1000ml) Was. The ethyl acetate solution is dried over magnesium sulfate and And evaporated to dryness in vacuo. This gave 138 g of product, which was mixed with ether (300 ml) and precipitated by the addition of petroleum ether (1800 ml). Yield 124 .7 g (79%). 64.5-85 ° C. C₁₇H_{twenty four}N_TwoO₆Analysis observations (calculated), UV spectrum (200nm-300nm) is the same, small peak is bis-Z-AEG Is shown. Example 2 Synthesis of N'-BOC-aminoethylglycine ester (A)Ethyl ester: N-benzyloxycarbonyl-N '-(BOC-amino Tyl) glycine (60 g, 0.170 mol) and N, N-dimethyl-4-aminopyridine (6 g) in absolute ethanol (500 ml) and DCC (42.2 g, 0.204 mol) Cooled to 0 ° C before addition. Remove the ice bath after 5 minutes and stir for another 2 hours Continued. The precipitated DCU (32.5 g, dry) was removed by filtration and the ether ( 3 × 100 ml). The combined filtrate is washed with diluted potassium hydrogen sulfate (2 x 400 ml), diluted sodium bicarbonate (2 x 400 ml) and saturated sodium chloride (1 x 400 ml). Filter the organic phase and dry over magnesium sulfate Dry and evaporate to dryness in vacuo to give 66.1 g of an oil containing some DCU. The oil was dissolved in absolute ethanol (600 ml) and 10% in carbon (6.6 g). % Palladium was added. The solution was hydrogenated at atmospheric pressure. After 4 hours, theoretical 4.2 l Consumed 3.3 liters. The reaction mixture was filtered through celite and the And evaporated to dryness in vacuo to give 39.5 g (94%) of an oil. Part of oily substance, 13g To silica gel (SiO_Two, 600 g). Methylene chloride After elution with 300 ml of 20% petroleum ether in water, the title compound was eluted with 5% Elution was carried out with 1700 ml of ethanol. Solvent is removed from fractions by vacuum, satisfactory 8.49 g of pure product were obtained. Separately, 10 g of unpurified components are purified by Kugelrohr distillation did. (B)Methyl ester: Ethyl ester, replacing methanol with ethanol The method described above was used. The final product is purified by column chromatography did. Example 3 Large scale alternative synthesis of (N'-BOC-aminoethyl) glycine ethyl ester (A) Preparation of BOC-aminoacetaldehyde Dissolve 3-amino-1,2-propanediol (80 g, 0.88 mol) in water (1500 ml) , And after cooling the solution to 4 ° C, a portion of BOC anhydride (230 g, 1.05 mol) was added. Was. The solution was slowly heated to room temperature in a water bath. Sodium hydroxide drop by drop The pH was maintained at 10.5 by addition. Dissolve in 480 ml of water over the course of the reaction A total of 70.2 g of NaOH dissolved was added. After stirring overnight, ethyl acetate (1000 ml) was added. Was added, the mixture was cooled to 0 ° C. and the pH was adjusted to 2.5 by addition of 4M hydrochloric acid. Was. The ethyl acetate layer was removed, and the acidic aqueous solution was further diluted with ethyl acetate (8 × 500 ml) Extracted. The combined ethyl acetate solution was reduced to a volume of 1500 ml using a rotary evaporator. I reduced it. The resulting solution is half-saturated potassium bisulfate (1500 ml) and then saturated Washed with sodium chloride. Then dry over magnesium sulfate and vacuum And evaporated to dryness. Yield: 145.3 g (86%). 3-BOC-amino-1,2-propanediol (144.7 g, 0.757 mol) is suspended in water (750 ml). It became cloudy and potassium periodate (191.5 g, 0.833 mol) was added. Nitrogen mixture Stirred for 2.5 hours under nitrogen and the precipitated potassium iodate was removed by filtration, Then, it was washed once with water (100 ml). The aqueous phase is chloroform (6x400ml) Extracted. The chloroform extract was dried and evaporated to dryness in vacuo. Yield: oil 102 g (93%). Two portions of BOC-aminoacetaldehyde were prepared at 84 ° C. and 0.3 m Purified by Kugelrohr distillation at mHg. Yield: 79 g (77%) as a colorless oil. (B) Preparation of (N′-BOC-aminoethyl) glycine methyl ester Palladium in carbon (10%, 2.00 g) was added to BOC-amido in methanol (150 ml). To a solution of noacetaldehyde (10 g, 68.9 mmol) at 0 ° C. was added. Methanol (150m l) sodium acetate (11.3 g, 438 mmol) and methanol in methanol (75 ml). Lysine methyl ester hydrochloride (8.65 g, 68.9 mmol) was added. Mix the mixture at atmospheric pressure Hydrogenated for .5 hours, then filtered through celite and evaporated to dryness in vacuo . The components were redissolved in water (150 ml) and the pH was adjusted to 8 with 0.5N NaOH. water The solution was extracted with methylene chloride (5x150ml). Combined extracts with sodium sulfate And evaporated to dryness in vacuo. This gives (N'-BOC-aminoethyl) g A yield of 14.1 g (88%) of lysine methyl ester resulted. Unpurified components at 120 ° C and Purification by Kugelrohr distillation at 0.5 mmHg gave 11.3 g (70%) of a colorless oil. The product is tl c Analysis (10% methanol in methylene chloride) indicated that the component produced in Example 26 Higher purity. Alternatively, instead of hydrogen (along with Pd (C) as a catalyst), cyano can be used as a reducing agent instead of hydrogen. Sodium borohydride may be used, but the yield (42%) was lower. (C) Preparation of (N′-BOC-aminoethyl) glycine ethyl ester Glycine methyl ester hydrochloride to glycine ethyl ester salt Prepared by the method described above, substituting the acid. The solvent used was ethanol. Was. The yield was 78%. Example 4 Synthesis of 1- (BOC-aeg) thymine ethyl ester N'-BOC-aminoethylglycine ethyl ester (13.5 g, 54.8 mmol), DhbtO H (9.84 g, 60.3 mmol) and 1-carboxymethylthymine (11.1 g, 60.3 mmol) Was dissolved in DMF (210 ml). Methylene chloride (210 ml) was added. Etano solution Cooled to 0 ° C. in a cooling / ice bath and DCC (13.6 g, 65.8 mmol) was added. Was added. After 1 hour, the ice bath was removed and stirring at room temperature was continued for another 2 hours. The precipitated DCU was removed by filtration and washed twice with methylene chloride (2 × 75 ml). Was. More methylene chloride (650 ml) was added to the combined filtrate. Dilute the solution Sodium hydrogen carbonate (3 x 500 ml), diluted potassium hydrogen sulfate (2 x 500 ml) , And saturated sodium chloride (1 x 500 ml). Some of the precipitation Was removed from the organic phase by filtration. The organic phase is dried over magnesium sulfate and And evaporated to dryness in vacuo. Dissolve the oily residue in methylene chloride (150ml) and filter And the title compound is precipitated at 0 ° C. by the addition of petroleum ether (350 ml). I let it. The methylene chloride / petroleum ether treatment was repeated once more. This allows HP LC yielded 16 g (71%) of the component with> 99% purity. Example 5 Synthesis of 1- (BOC-aeg) thymine The components of Example 4 were suspended in THF (194 ml, a 0.2 M solution was obtained) and M lithium hydroxide aqueous solution (116 ml) was added. The mixture was stirred at room temperature for 45 minutes, And then filtered to remove residual DCU. Water (40 ml) is added to the solution and After that, it was washed with methylene chloride (300 ml). Add more water (30 ml) and The alkaline solution was washed once more with methylene chloride (150 ml). Cool the aqueous solution to 0 ° C And the pH was adjusted to 2 by the dropwise addition of 1N HCl (approximately 110 ml). Was adjusted to Extract the title compound with ethyl acetate (9 × 200 ml) and combine the combined extracts. Dried over magnesium sulfate and evaporated to dryness in vacuo. Residue in methanol After another evaporation and drying overnight, a colorless glassy solid was obtained. Yield: 9. 57g (64%). HPLC> 98%. R_T= 14.8 minutes. C₁₆H_{twenty four}N_FourO₇・ 0.25H_TwoO-analysis observations ( Calculated), C: 49.29 (49.42); H: 6.52 (6.35); N: 14.11 (14.41). Second grade Due to limited rotation around the amide, some of the signals were doubled in a 2: 1 ratio. (Large ones are listed as mj. Small ones are shown as mi.) Example 6 N^FourOf benzyloxycarbonyl-1- (BOC-aeg) cytosine N′-BOC-aminoethylglycine ethyl ester (5 g, 20.3 mmol), DhbtOH (3. 64 g, 22.3 mmol) and N^Four-Benzyloxycarbonyl-1-carboxymethyl Cytosine (6.77 g, 22.3 mmol) was suspended in DMF (100 ml). Methylene chloride (100ml) Was added. The solution was cooled to 0 ° C. and DCC (5.03 g, 24.4 mmol) was added. 2 After time, the ice bath was removed and stirring at room temperature continued for another hour. The reaction mixture Then, it was evaporated to dryness in vacuo. The residue is suspended in ether (100 ml) and vigorously stirred for 30 minutes. Stirred well. The solid component was separated by filtration and the ether washing procedure was repeated twice. I returned. The components are then added with dilute sodium bicarbonate (approximately 4% solution, 100 ml) for 15 minutes. Vigorously stirred, filtered and washed with water. Then repeat this procedure again. After repeated drying, 17 g of a yellow solid component remained. The solid is then diluted with dioxane (200 ml) and filtered while hot. After cooling, add water (200 ml) Was. The precipitated component was separated by filtration, washed with water and dried. HPLC (260n m)), this component, besides DCU, had a purity of 99% or more. The esthetic Was then suspended in THF (100 ml), cooled to 0 ° C., and 1N LiOH (61 ml) was added. Was added. After stirring for 15 minutes, the mixture was filtered and the filtrate was methylene chloride (2 x 150 ml). The alkaline solution is then cooled to 0 ° C. and p H was adjusted to 2.0. The title compound is separated by filtration and washed once with water, dried After drying, 11.3 g of a white powder remained. Suspend the components in methylene chloride (300 ml), and Petroleum ether (300 ml) was added. 7.1 g (69%) after drying by filtration and washing )was gotten. HPLC showed 99% purity. R_T= 19.5 minutes and Z-de- A small amount of impurities (approximately 1%) most likely to be protected monomers are seen at 12.6 minutes. Was. C_{twenty three}H₂₉N_FiveO₈Analysis observations (calculated), Example 7 Synthesis of 9-carboxymethyladenine ethyl ester Adenine (10 g, 74 mmol) and potassium carbonate (10.29 g, 74 mmol) are suspended in DMF And ethyl bromoacetate (8.24 ml, 74 mmol) was added. Suspension under nitrogen Stirred at room temperature for 2.5 hours and then filtered. The solid residue was washed with DMF (10 ml) 3 Washed twice. The combined filtrate was evaporated to dryness in vacuo. Water (200 ml) yellow-orange solid Added to components and adjusted pH to 6 with 4N HCl. After stirring at 0 ° C for 10 minutes, The solid was filtered off, washed with water and recrystallized from 96% ethanol (150 ml). I let you. The title compound was separated by filtration and washed thoroughly with ether. yield : 3.4 g (20%). 215.5-220 ° C. C₉H₁₁N_FiveO_TwoAnalysis observations (calculated), The alkylation position was determined by the X-ray crystal of the crystal obtained by recrystallization from 96% ethanol. Confirmed by analysis. Separately, 9-carboxymethyladenine ethyl ester is prepared by the following method. It may be prepared. 21 three with nitrogen inlet, mechanical stirrer and injection funnel Hexane was added to adenine (50 g, 0.37 mol) suspended in DMF (1100 ml) in a neck flask. Washing sodium hydride-mineral oil dispersion 16.4 g (0.407 mol) was added. . The mixture was stirred vigorously for 2 hours, after which ethyl bromoacetate (75 ml, 0.67 mol) was added. Added dropwise over 3 hours. The mixture was stirred for an additional hour and then tic More complete conversion of adenine was shown. The mixture is evaporated to dryness at 1 mmHg and Water (500 ml) was added to the oily residue, causing crystallization of the title compound. 96 Recrystallized from% ethanol (600 ml). Yield (after drying): 53.7 g (65.6%). HPLC ( 215 nm) Purity> 99.5%. Example 8 N⁶-Benzyloxycarbonyl-9-carboxymethyladenine ethyl ester Synthesis of 9-carboxymethyladenine ethyl ester (3.4 g, 15.4 mmol) was added to dry DMF (5 0 ml) by gentle heating, cool to 20 ° C. -Ethyl-benzyloxycarbonylimidazole tetrafide in toluene (50 ml) Fluoroboric acid (62 mmol) solution was added in an ice bath over 15 minutes. How much precipitation Was observed. The ice bath was removed and the solution was stirred overnight. The reaction mixture is saturated carbon Treated with sodium hydrogen oxyacid (100 ml). After stirring for 10 minutes, the phases were separated, and The organic phase was combined with one volume of water, diluted potassium hydrogen sulfate (twice), and saturated sodium chloride. Washed continuously with um. Dry the solution over magnesium sulfate and evaporate in vacuo. It was evaporated to dryness to obtain 11 g of an oily component. This component was dissolved in methylene chloride (25 ml), And precipitated with petroleum ether (50 ml). Repeat this procedure again Returned to give 3.45 g (63%) of the title compound. 132-35 ° C. C₁₇H₁₇N_FiveO_FourAnalysis observations (calculated), Example 9 N⁶Synthesis of -benzyloxycarbonyl-9-carboxymethyladenine N⁶-Benzyloxycarbonyl-9-carboxymethyladenine ethyl ester (3.2 g, 9.01 mmol) was mixed with methanol (50 ml) and cooled to 0 ° C. Hydroxylation Sodium solution (2N, 50 ml) was added, whereby the components dissolved quickly. 30 After a minute, at 0 ° C., the alkaline solution was washed with methylene chloride (2 × 50 ml). 4 at 0 ° C The pH of the aqueous solution was adjusted to 1 with N HCl, whereby the title compound precipitated. Filtration, water The yield after washing with and drying was 3.08 g (104%). The product contains salt, Elemental analysis reflected that. C_FifteenH₁₃N_FiveO_FourAnalysis observations (calculated), HPLC in system 1 (215 nm, 260 nm): 15.18 min, minor impurities less than 2% in total. Example 10 N⁶-Benzyloxycarbonyl-1- (BOC-aeg) adenine ethyl ester Success N′-BOC-aminoethylglycine ethyl ester (2 g, 8.12 mmol), DhbtOH (1. 46 g, 8.93 mmol) and N⁶-Benzyloxycarbonyl-9-carboxymethyl Adenine (2.92 g, 8.93 mmol) was dissolved in DMF (15 ml). Methylene chloride (15ml) Was then added. The solution was cooled to 0 ° C. in an ethanol / water bath. DCC (2.01g, 9 .74 mmol) was added. After 2.5 hours, remove the ice bath and stir Was continued at room temperature for another 1.5 hours. Precipitated DCU was removed by filtration and DMF (1 5 ml) and twice with methylene chloride (2 × 15 ml). Combined filtrate Further methylene chloride (100 ml) was added. The solution is diluted with sodium bicarbonate (2x100ml), diluted potassium hydrogen sulfate (2x100ml) and saturated sodium chloride (1 × 100 ml). The organic phase is evaporated to dryness in vacuo, a yellow oil 3.28 g (73%). HPLC of the unpurified product indicates that the more polar Only 66% purity, including some impurities, both low and high. The The oil was dissolved in absolute ethanol (50 ml) and activated charcoal was added. Stir for 5 minutes Afterwards, the solution was filtered. The filtrate was mixed with water (30ml) and stirred overnight. next day The white precipitate was removed by filtration, washed with water and dried, according to HPLC 1.16 g (26%) of the component with a purity higher than 98% were obtained. To add water to the mother liquor Further, 0.53 g of a product having a purity of about 95% was obtained. C₂₆H₃₃N₇O₇・ H_TwoO analysis Observations (calculated), The spectrum showed traces of ethanol and DCU. Example 11 N⁶Of benzyloxycarbonyl-1- (BOC-aeg) adenine N⁶-Benzyloxycarbonyl-1- (BOC-aeg) adenine ethyl ester ( 1.48 g, 2.66 mmol) were suspended in THF (13 ml) and the mixture was cooled to 0 ° C. water Lithium oxide (8 ml, 1N) was added. After stirring for 15 minutes, the reaction mixture was filtered , More water (25 ml) was added and the solution was washed with methylene chloride (2 × 25 ml). Was. The pH of the aqueous solution was adjusted to 2 with 1N HCl. The precipitate is separated by filtration and Washing and drying gave 0.82 g (58%) of product. Methylene chloride / The product was precipitated twice more from petroleum ether. Yield (after drying): 0.77 g (55%) . 119 ° C (decomp.). C_{twenty four}H₂₉N₇O₇・ H_TwoObserved value (calculated value) of O analysis, Example 12 Synthesis of 2-amino-6-chloro-9-carboxymethylpurine 2-Amino-6-chloropurine (5.02 g, 29.6 mmol) and carbonic acid in DMF (50 ml) To a suspension of potassium (12.91 g, 93.5 mmol) was added bromoacetic acid (4.7 g, 22.8 mmol). Was. The mixture was stirred vigorously under nitrogen for 20 hours. Add water (150ml) and The solution was filtered through celite to give a clear yellow solution. The solution is pH adjusted with 4N hydrochloric acid. Acidified to 3. The precipitate was filtered and dried with sicapent in vacuo. yield : 3.02 g (44.8%). Example 13 Synthesis of 2-amino-6-benzyloxy-9-carboxymethylpurine Dissolve sodium (2 g, 87 mmol) in benzyl alcohol (20 ml) and heat The temperature was kept at 130 ° C. for 2 hours. After cooling to 0 ° C., 2-amino-6-cyclohexane in DMF (85 ml) was used. Loro-9-carboxymethyl purine (4.05 g, 18 mmol) was slowly added and The resulting suspension was stirred at 20 ° C. overnight. Sodium hydroxide solution (1N, 100ml) Was added and the clear solution was washed with ethyl acetate (3 × 100 ml). The aqueous phase Thereafter, it was acidified to pH 3 with 4N hydrochloric acid. Ethyl acetate (200ml) And the aqueous phase was extracted with ethyl acetate (2 × 100 ml). Combined organic phases Wash with saturated sodium chloride solution (2x75ml), dry over anhydrous sodium sulfate And evaporated to dryness in vacuo. The residue was recrystallized from ethanol (300ml) . Yield after vacuum drying on sicapent: 2.76 g (52%). Mp 159-65 ° C. Analysis (calculation Value, observed value), Example 14 N-([2-amino-6-benzyloxy-purin-9-yl] -acetyl) -N- Synthesis of (2-BOC-aminoethyl) glycine [BOC-Gaeg-OH monomer] 2-amino-6-benzyloxy-9-carboxymethyl-purine (0.5 g, 1.67 m mol), methyl-N (2- [tert-butoxycarbonylamino] ethyl) glycine (0.65 g, 2.8 mmol), diisopropylethylamine (0.54 g, 4.19 mmol), and And bromo-tris-pyrrolidino-phosphonium-hexafluoro-phosphate (Py BroP® (0.798 g, 1.71 mmol) was stirred in DMF (2 ml) for 4 hours. Transparent The clear solution was poured into an ice-cold solution of sodium bicarbonate (1N, 40 ml) and acetic acid was added. Extracted with chill (3 × 40 ml). The organic layer is potassium hydrogen sulfate solution (1N, 2x40ml) , Sodium bicarbonate (1N, 1x40ml) and saturated sodium chloride solution (60ml ). After drying over anhydrous sodium sulfate, evaporating in vacuo, the solid residue Was recrystallized from 2: 1 ethyl acetate / hexane (20 ml) to give a methyl ester of 63% yield. Got a tell. MS-FAB, 514 (M + 1). 1: 2 eta containing concentrated sodium hydroxide (1ml) Hydrolysis was achieved by dissolving the ester in knol / water (30 ml). After stirring for 2 hours, the solution was filtered and the pH was adjusted by adding 4N hydrochloric acid. Acidified to 3. The title compound was obtained by filtration. Yield: 370 mg (7 for hydrolysis) 2%). The purity by HPLC was more than 99%. Limited rotation around secondary amide Some of the signals were duplicated in a 2: 1 ratio (the larger ones mj, small ones are shown in the list as mi. ) Example 15 Ethyl-N⁶-(Benzyloxycarbonyl) -2,6-diaminopurin-9-yl -Synthesis of acetate A suspension of 2,6-diaminopurine (3 g, 19.46 mmol) in dry DMF (90 ml) was treated with NaH ( (60% in oil, 0.87 g, 21.75 mmol) was added. One hour later, ethyl bromoacetate (4.23 g, 25.34 mmol). The reaction mixture became homogenous after 30 minutes and an additional 90 Minutes. DMF was removed in vacuo to give a brown powder. The brown powder is then Refluxed with 1,4-dioxane (200 ml) for 10 minutes and filtered through celite. The solution was concentrated to give a pale yellow powder. Pale yellow powder in 1,4-dioxane (150 ml) 5.52 g) was added to the newly prepared N-benzyloxycarbonyl-N'-methylimidine. Dazolium triflate (10.7 g, 29.2 mmol) was added. Bring the reaction mixture to room temperature for 1 hour. Stirred for 6 hours, resulting in a red solution. The dioxane is removed in vacuo and the crude product Recrystallized from MeOH: diethyl ether to give the title compound as a cream solid 4.56 g (63%) were obtained. Example 16 N⁶-(Benzyloxycarbonyl) -2,6-diaminopurin-9-yl-acetic acid Synthesis Ethyl-N⁶-(Benzyloxycarbonyl) -2,6-diaminopurine-9-i Ru-acetate (3 g, 8.1 mmol) was dissolved in NaOH (2N, 30 ml). After 1 hour, The liquor was acidified to pH 2.5 with 2M HCl. The precipitate is filtered, washed with water and dried. To give 2.82 g (98%) of the title compound as a white solid. IR (KBr): 3300, 3095, 1750, 1630, 1590, 1410. Example 17 Synthesis of BOC-aminoacetaldehyde The title compound was prepared according to published methods (Dueholm et al., Organic Preparations and Procedures Intl., 1993, 25, 457). Example 18 Synthesis of ε- (2-chlorobenzyloxycarbonyl) -lysine allyl ester The title compound was prepared according to published literature methods (Waldmann and Hors t, Liebigs Ann. Chem., 1983, 1712). Example 19 N- (BOC-aminoethyl) -ε- (2-chlorobenzyloxycarbonyl)- Synthesis of gynallyl ester ε- (2-chlorobenzyloxycarbonyl) -lysine allyl ester (implemented Example 18) was dissolved in methanol (50 ml) and cooled to 0 ° C. The resulting solution To this was added sodium cyanoborohydride (5.9 mmol) followed by acetic acid (0.75 ml) . After 5 minutes, BOC-aminoacetaldehyde (13.3 mmol) was added and the reaction mixed. The mixture was stirred for another hour. The methanol is removed in vacuo and the oil is extracted with acetic acid. Dissolve in chill (40 ml) and add saturated aqueous NaHCO_Three, Washed with saline and Na_TwoSO_FourAnd let it dry Then, the mixture was concentrated to obtain a colorless transparent oil. Dissolve the oil in dry ether (80 ml) and add -2 Cool to 0 ° C. and slowly add equimolar HCl in ether. Was. The resulting white solid was collected by filtration and air dried. Air dry white Precipitation of the color solid from dry ether gave the analytically pure title compound. Example 20 N- (BOC-aminoethyl) -N- [N⁶-(Benzyloxycarbonyl) -2,6- Diaminopurin-9-yl-acetyl] -ε- (2-chlorobenzyloxycarbo Synthesis of (nyl) -lysine allyl ester N in DMF (150ml)⁶-(Benzyloxycarbonyl) -2,6-diaminopurine- N, N-diisopropylethylamine (2.75) was added to 9-yl-acetic acid (3.6 g, 10.5 mmol). ml, 21 mmol), and N- (BOC-aminoethyl) -ε- (2-chlorobenzyl (Xycarbonyl) -lysine allyl ester hydrochloride (7.31 g, 15.8 mmol) was added. . The reaction mixture is stirred under nitrogen for 20 minutes and bromo-tris-pyrrolidino-phospho Phonium-hexafluorophosphoric acid (PyBrop, 5.4 g, 11.6 mmol) was added. reaction The mixture was stirred at room temperature under nitrogen gas overnight. The resulting mixture is concentrated and vinegar Dissolved in ethyl acetate. Wash the ethyl acetate solution with aqueous saturated sodium bicarbonate , Separated and concentrated. Unpurified components were eluted with ethyl acetate: hexane: Silica gel flash column chromatography using methanol (6: 3: 1, v / v / v) Purified by luffy. The appropriate fractions were concentrated and dried to give 3.1 g of the title compound ( 37%). Example 21 N- (BOC-aminoethyl) -N- [N⁶-(Benzyloxycarbonyl) -2,6- Diaminopurin-9-yl-acetyl] -ε- (2-chlorobenzyloxycarbonyl ) -Synthesis of lysine N- (BOC-aminoethyl) -N- [N⁶-(Benzyloxycarbonyl) -2,6 -Diaminopurin-9-yl-acetyl] -ε- (2-chlorobenzyloxycarbo Nyl) -lysine allyl ester hydrochloric acid (3.1 g, 3.93 mmol) in THF (100 ml), morpholine Phosphorus (3.5 ml, 39.3 mmol) and tetrakis (triphenylphosphine) -pa Radium (0) (0.45 g, 0.393 mmol) was added. Nitrogen reaction mixture The mixture was stirred at room temperature for 2.5 hours. Concentrate the resulting mixture and dissolve in ethyl acetate did. Ethyl acetate solution in aqueous saturated potassium hydrogen sulfate (diluted in half with water) , Separated and concentrated. Use unpurified components as chloroform : Flash column chromatography on silica gel using methanol (9: 1, v / v) Purified by Concentration and drying of appropriate fractions gave 1.25 g (42 %)was gotten. Example 22 Preparation of guanine monomer (BOC-Gaek-OH) N⁶-DIE in benzyl-9-carboxymethylene-guanine (2.63 g, 8.78 mmol) A (2.6 ml, 20 mmol), DMF (30 ml), dichloromethane (70 ml), and N- (BOC -Aminoethyl) -ε- (2-chlorobenzyloxycarbonyl) -lysine Luster (3.7 g, 8.04 mmol) was added. The reaction mixture was stirred under nitrogen for 20 minutes . PyBrop (4 g, 8.58 mmol) was added and the reaction mixture was stirred for another 16 hours Was. The reaction mixture was concentrated, and the residue was purified with chloroform / hexane / methanol. Silica gel flash column chromatography using (12: 7: 1, v / v / v) To give 4 g (60%) of the title compound as an allyl ester. The allyl ester (4 g, 5.37 mmol) was added to THF (100 ml), tetrakis palladium ( 0) (0.18 g, 0.15 mmol) and morpholine (6.1 ml, 70 mmol) were added. reaction The mixture was stirred under nitrogen for 2.5 hours and concentrated. Residue is chloroform / He Silica gel flash column using xane / methanol (11: 8: 1, v / v / v) Purification by chromatography gave 2.67 g (60%) of the title compound. Example 23 Preparation of adenine monomer (BOC-Aaek-OH) Following the method used for the guanine monomer of Example 22 above,⁶-Benzyl-9 -Adenine monomer was synthesized using -carboxymethylene-adenine. Example 24 Preparation of cytosine monomer (BOC-Caek-OH) N- (BOC-aminoethyl) -ε- (2-chlorobenzyloxycarbonyl)- Lysine allyl ester (8.21 g, 17.7 mmol) and triethylamine (10 ml, 98 mmol) ) And dichloromethane (200 ml) were added. Bring the solution to about 0 ° C in an ice bath under nitrogen Cool. Chloroacetyl chloride (2.2 ml, 27.6 mmol) was added to the cooled solution in 10 minutes. Added over and the reaction mixture was stirred at room temperature for 16 hours. Concentrate the reaction mixture And the residue was purified on a silica gel column using ethyl acetate / hexane (1: 1, v / v). Purified by flash column chromatography, N-acetylated lysine skeleton 6.54 g (68%) was obtained. Treatment of cytosine with N by treatment with benzyl chloroformate in pyridine at 0 ° C^Four- Protect, N^Four-Benzyl-cytosine was obtained. N^Four-DMF (200 ml) in benzyl-cytosine (1.31 g, 5.34 mmol), and minerala 60% NaH in oil (0.22 g, 5.4 mmol) was added and the resulting mixture was flushed with nitrogen. Stirred under for 30 minutes. The resulting mixture has an N-acetylated lysine skeleton in DMF (25 ml) (2.9 g, 5.34 mmol) was added and the mixture was stirred for 16 hours. Concentrate the reaction mixture And the residue was dissolved in dichloromethane (250 ml). Dichloromethane phase Washed with water (200ml) and concentrated. The resulting residue is washed with dichloromethane: Sun: Methanol (8: 2: 1) silica gel flash column chromatography Purified by luffy and bound to aminoethyl-lysine skeleton as allyl ester 2.4 g (85%) of the corresponding cytosine was obtained. The allyl ester was prepared according to the method used in Example 22 above, The active compound was converted to the active monomer by deprotection using the title compound. %) Is obtained. Example 25 Preparation of thymine monomer (BOC-Taek-OH) Thymine monomer was prepared according to the method of Example 24 above. Example 26 H-Taeg-Aaeg- [Taeg]₈-Lys-NH_TwoSolid-phase synthesis of (A) BOC-Taeg-A (Z) aeg- [Taeg]₈-Step-by-step construction of Lys (CIZ) -MBHA resin About 0.3g of wet BOC- [Taeg]₈-Place Lys (CIZ) -MBHA resin in a 3 ml SPPS reaction vessel Was. BOC-Taeg-A (Z) aeg- [Taeg]₈-Lys (CIZ) -MBHA resin was added to 0.19M B OC-A (Z) aeg-OH is 50% DMF / CH_TwoCl_Two A (Z) for use with 0.15 M DCC in 2.5 ml ) In situ DCC coupling of aeg residues (single) and pure CH_TwoCl_Two0.15M BOC- in Constructed by single coupling of Taeg-Opfp ("Synthetic Protocol I"). Combination is fixed Monitored by quantitative ninhydrin reaction and found about 50% uptake of A (Z) aeg And about 96% uptake of Taeg. (B) H-Taeg-Aaeg- [Taeg]₈-Lys-NH_TwoCleavage, purification, and identification Protection BOC-Taeg-A (Z) aeg- [Taeg]₈-Lys (CIZ) -BHA resin with methylene chloride Treated with 50% trifluoroacetic acid in N-terminal BOC group (potentially The harmful tert-butyl cation precursor) was removed. Neutralization and washing (see Synthetic Col I ", steps 2-4) and drying under vacuum for 2 hours. After drying, the resulting H- [Taeg]_Five-While stirring 53.1 mg of BHA resin at 0 ° C for 60 minutes, Cut with 5 ml of Nisole (9: 1, v / v). After removing the HF, the residue is dried in diethyl Stir with ether (4 x 15 ml, 15 min each) to remove anisole and frit Filtered under gravity through a fritted glass funnel and dried. The PN A was then extracted with 60 ml of a 10% aqueous acetic acid solution (4 x 15 ml, 15 minutes each with stirring). Main solution An aliquot of the liquid was analyzed by analytical reverse phase HPLC to confirm the purity of the unpurified PNA. 1 The main peak at 3 minutes measured about 93% of the total absorbance. Freeze the remaining solution and Lyophilization yielded about 15.6 mg of unpurified component. The main peak at 14.4 minutes is 50% of the total absorbance. %. A 0.5 mg portion of the unpurified product was purified and about 0.1 mg of H-Taeg-Aa eg- [Taeg]₈-Lys-NH_TwoI got (MH +)⁺, The calculated m / z value is 2816.16, And the measured m / z value was 2816.28. (C) Synthesis protocol I (1) TFA / CH_TwoCl_Two(1: 1, v / v), 2.5 ml, 3 x 1 min and 1 x 30 min, BOC removal Protection; (2) CH_TwoCl_TwoWash with 2.5 ml for 6 x 1 minute; (3) DIEA / CH_TwoCl_Two(1:19, v / v), 2. Neutralize 3 x 2 minutes with 5 ml; (4) CH_TwoCl_Two, 2.5 ml for 6 x 1 minute, and 1 minute drying (dra in); (5) Quantitative ninth to remove 2-5 mg of PNA resin sample and measure displacement Dried completely for analysis of drin; (6) 0.47 mmol (0.25 g) dissolved in 1.25 ml DMF Following the addition of BOC-A (Z) aeg-OH, CH_TwoCl_Two0.47 mmol (0.1 g) DCC in 1.25 ml Or CH_TwoCl_TwoAddition of 0.36 mmol (0.2 g) BOC-Taeg-Opfp in 2.5 ml; The reaction is allowed to proceed for a total of 20-24 hours with shaking; (7) washing with 2.5 ml of DMF for 1 × 2 minutes; (8) CH_TwoCl_Two, 2.5 ml for 4 x 1 minute; (9) DIEA / CH_TwoCl_Two(1:19, v / v), 2.5ml With 2x2 minutes; (10) CH_TwoCl_TwoWash with 2.5 ml for 6 x 1 minute; (11) Protected PNA resin sample Quantitative ninhydrin to remove 2-5 mg and measure the degree of coupling Completely dried for analysis; (12) Acetic anhydride / pyridine / CH_TwoCl_Two(1: 1: 2, v / v of unreacted amino groups by acetylation with 25 ml of a mixture of King (except after the last cycle); and (13) CH_TwoCl_Two6x1 minute with 2.5ml Washing: (14) Remove 2 x 2-5 mg of the protected PNA resin sample and add DIEA / CH_TwoCl_Two(1:19, v / v ) And CH for ninhydrin analysis_TwoCl_TwoWash with. Example 27 H- [Taeg]_Two−Aaeg− [Taeg]_Five-Lys-NH_TwoSolid-phase synthesis of (A) BOC- [Taeg]_Two-A (Z) aeg- [Taeg]_Five-Lys (CIZ) -MBHA resin step by step Construction About 0.5g of wet BOC- [Taeg]_Five-Place Lys (CIZ) -MBHA resin in 5ml SPPS reaction vessel Was. BOC- [Taeg]_Two-A (Z) aeg- [Taeg]_Five-Lys (CIZ) -MBHA resin, 0.15M 0.2M protected PNA monomer (free acid) from pure CH_TwoCl_TwoUsed with an equal amount of DCC in 2ml Constructed by in situ DCC coupling of both A (Z) aeg and Taeg residues ("Synthetic protocol II"). The synthesis was monitored by a quantitative ninhydrin reaction, Incorporation of about 82% of the total amount of A (Z) aeg after three couplings (first cup Ring shows about 50% uptake; 50% DHF / CH_TwoCl_TwoFourth HOBt-mediated coupling in Did not significantly increase the total coupling yield) And quantitative incorporation of Taeg residues (single coupling). (B) H- [Taeg]_Two−Aaeg− [Taeg]_Five-Lys-NH_TwoCleavage, purification, and identification Protection BOC- [Taeg]_Two-A (Z) aeg- [Taeg]_FiveExample 26 using -Lys (CIZ) -BHA resin Treat as described in (b) and dry H- [Taeg]_Two-A (Z) aeg- [Taeg]_Five−Ly HF cleavage of 102.5 mg of s (CIZ) -BHA resin yielded about 16.2 mg of unpurified component. Only a small portion of the crude product was purified. (MH +)⁺, The calculated m / z value is 2050.85 And the measured m / z value was 2050.90. (C) Synthesis protocol II (1) TFA / CH_TwoCl_Two(1: 1, v / v) 2ml, 3x1min and 1x30min, BOC deprotection ; (2) CH_TwoCl_Two2. Washing with 2 ml for 6 x 1 minute; (3) DIEA / CH_TwoCl_Two(1:19, v / v), 2 ml With 3x2 minutes; (4) CH_TwoCl_TwoWash with 6 ml for 1 minute and dry for 1 minute; (5) PN A 2-5 mg of A resin sample was removed and quantitative ninhydrin analysis was performed to determine displacement. (6) CH_TwoCl_Two0.44 mmol (0.23 g) BOC-A dissolved in 1.5 ml (Z) Following the addition of aeg-OH, CH_TwoCl_Two0.44 mmol (0.09 g) DCC or CH in 0.5 ml_TwoC l_TwoFollowing addition of 0.33 mmol (0.13 g) BOC-Taeg-OH in 1.5 ml, followed by CH_TwoCl_Two0 in 0.5 ml. Addition of 33 mmol (0.07 g) DCC; coupling reaction is shaken for a total of 20-24 hours (7) Washing 1 × 2 minutes with 2 ml of DMF; (8) CH_TwoCl_Two4 × 1 minute wash with 2 ml; (9) DIEA / CH_TwoCl_Two(1:19, v / v), 2 × 2 minutes neutralization with 2 ml; (10) CH_TwoCl_Two6 for 2ml (1) Remove 2-5 mg of protected PNA resin sample and Completely dried for quantitative ninhydrin analysis to determine degree; (12) anhydrous Acetic acid / pyridine / CH_TwoCl_Two(1: 1: 2, v / v / v) Acetylation with 25 ml for 2 hours Blocking of unreacted amino groups (except after the last cycle); (13) CH_TwoCl_TwoWash with 2 ml for 6 × 1 min; and (14) 2 × 2-5 mg of protected PNA resin sample And remove DIEA / CH_TwoCl_Two(1:19, v / v) and ninhydrin assay CH_TwoCl_TwoWash with. Example 28 Standard protocol for PNA synthesis and characterization Instrument: PerSeptive Biosystems 8909 Expedite Synthetic scale: 2 micromol reagent: Cleaning solution A: 20% DMSO in NMP Wash B: 2M collidine in 20% DMSO in NMP Deblocking agent: 5% m-cresol, 95% TFA Neutralizer: 1M DIEA in 20% DMSO in NMP Cap: 0.5M acetic anhydride, 1.5M collidine in 20% DMSO in NMP Activator: 0.2M HATU in DMF Monomer: 0.22M in 2M Collidine (50% pyridine in DMF) Synthesis: Wash the solid support (BOC-BHA-PEG-resin) with 708 μl Wash A. Pass the deblocking agent (177 μl) through the column three times over 6.3 minutes. The resin Thereafter, washing is performed with 1416 μl of washing solution A. Neutralize the free amine with 1063 μl of neutralizing agent. Tree The fat is washed with 1062 μl of washing solution B. Add monomer and activator (141 μl each) to 14 Add to column slowly over minutes. Resin was washed with 708 μl of Wash B and 708 μl Wash with 1 wash solution A. Unreacted amine was removed by 708 μl of cap solution over 5 minutes. By slowly adding. The resin was then washed with 2124 μl of Wash A Wash with. The cycle is repeated until the synthesis of the desired PNA sequence is complete. Cleavage: The PNA resin is washed with 5 ml of MeOH and dried under vacuum. 1 dry resin Empty into a .5 ml Durapore ultrafiltration unit. Thioanisole (25 μl), 25 μl m -Add cresol, 100 μl TFA and 100 μl TFMSA to the resin and vortex for about 30 seconds. Tex and leave for 2 hours. The reaction mixture is then centrifuged at 10K for 5 minutes, Then, the internal test tube containing the resin is removed. Add about 1.5 ml of ether to the TFA solution And precipitate the product. After vortexing the TFA solution, centrifuge at 10K for 2 minutes You. The ether is removed in vacuo. Repeat ether precipitation and centrifugation twice more return. Heat the dried precipitate in a hot block (55 ° C) for 15-30 minutes to remove excess ether. Remove and 200 μl H_TwoRedissolve in O. Dowex in 1.5ml Durapore ultrafiltration device Add solvent to 100 mg of acetate resin, vortex, leave for 30 minutes, and add 10K And centrifuge for 2 minutes. Characterization: 1 ml H_TwoThe absorbance of 1 μl of the sample in O is measured at 260 nm. 1% acetic acid Including H_TwoAdd 100 μl of isopropanol (50%) in O to 4 μl of sample. Main trial The material is characterized by electrospray mass spectrometry. Common abbreviations NMP: N-methylpyrrolidinone TFA: trifluoroacetic acid DIEA: N, N-diisopropylethylamine HATU: O- (7-azabenzotriazol-1-yl) -1,1,3,3-tetramethylu Ronium-hexafluorophosphoric acid TFMSA: trifluoromethanesulfonic acid Example 29 Synthesis and cellular uptake of conjugated PNA oligomers The method of Example 28, the aminoethylglycine PNA monomer of Examples 5 to 14, Using the monomers of Examples 15 to 21, the following PNA monomers were synthesized. [(+) = PNA aggregation; = no cell uptake; + = cell uptake; o = With liposomes; x = without liposomes; Tk binds to aminoethyllysine skeleton Lys is D-lysine; Ada is adamantyl; and Fl is thymine; Fluoresceinyl lysine. ] Example 30 Synthesis of Linolenyl-TAG-CAG-AGG-AGC-TC (SEQ ID NO: 1) Linolenic acid (40 μmol) was coupled with coupling solvent (100 μl) in 20% DMSO / NMP. Dissolve in 0.5 M DIEA), add HATU (90 μl of 0.4 M) to this, and mix the solution. I combined. After an activation time of 2 minutes, the solution is protected PNA resin (15.4 mg, 2 μmol) And mixed. After 1 hour, the resin was changed to 20% DMSO / NMP, CH_TwoCl_TwoAnd MeOH (about 3 ml each) Washed. The resulting linolenyl-bound PNA was cleaved from the solid support and Characterized according to the method described in Example 31 Synthesis of Oleyl-TAG-CAG-AGG-AGC-TC (SEQ ID NO: 1) Oleic acid (40 μmol) was coupled with coupling solvent (100 μl) in 20% DMSO / NMP. Dissolve in 0.5 M DIEA), add HATU (90 μl of 0.4 M) to this, and mix the solution. I combined. After an activation time of 2 minutes, the solution is protected PNA resin (5.4 mg, 2 μmol) And mixed. After 1 hour, the resin was changed to 20% DMSO / NMP, CH_TwoCl_TwoAnd MeOH (about 3 ml each) Washed. The resulting oleyl-bound PNA was cleaved from the solid support and Characterized according to the method described. Example 32 Synthesis of Caproyl-Gly-TAG-CAG-AGG-AGC-TC (SEQ ID NO: 1) Caproyl-Gly (40 μmol) was coupled with a coupling solvent (100! Tl) (20% DMSO / Dissolve in 0.5 M DIEA in NMP), add HATU (90 μl of 0.4 M) to it, and The solutions were mixed. After 2 minutes of activation, the solution was protected PNA resin (15.4 mg, 2 μm Le). After 1 hour, the resin was changed to 20% DMSO / NMP, CH_TwoCl_TwoAnd MeOH (about 3 ml each) ). The resulting PNA was cleaved from the solid support and described in Example 28. The properties were determined according to the method. Example 33 N-BOC-ε- (fluoresceinylcarbonyl) -D-lysine and its ethyl Ester synthesis The α-BOC protected lysine ethyl ester is treated with an excess of fluoro in a mixture of THF and DMF. Treated with resinine isocyanate at room temperature for several hours. Regarding the disappearance of the starting amino acid The reaction was monitored by tlc. The reaction is then followed by equal volumes of water and chloroform. And the phases were separated. The aqueous phase is further extracted with chloroform, and The combined organic solution obtained was dried over magnesium sulfate. Vacuum this solution And purify the resulting crude product by column chromatography. , N-BOC-ε- (fluoresceinylcarbonyl) -D-lysine ethyl ester I got The ethyl ester was converted to 1 M aqueous lithium hydroxide and tetrahydro Hydrolysis was performed using furan. Follow the progress of the reaction by tlc, and upon completion The reaction mixture was treated with water and then washed twice with dichloromethane. The salt The basic solution is then cooled to less than 10 ° C., neutralized with 1N HCl to a pH of less than 4, and The product was extracted using ethyl acetate. Dry the organic extract using magnesium sulfate And concentrated in vacuo and N-BOC-ε- (fluoresceinylcarbonyl ) -D-Lysine was obtained. Example 34 Sequence GGT-GCT of N-BOC-ε- (fluoresceinylcarbonyl) -D-lysine -CAC-TGC-GGC-Lys-NH_Two(SEQ ID NO: 2) coupling sequence to PNA GGT-GCT -CAC-TGC-GGC-Lys-NH_TwoPNA is standard (as in Examples 27 and 28) Synthesized according to a typical PNA synthesis protocol and started with a lysine-derivatized synthetic resin did. The N-terminal BOC group of the PNA bound to the resin was: 1.3 ml of 1: 1 v / v TFA / DCM, 1 × 2 Minutes and then 1x0.5 hours 2. Wash 4x20 seconds with 3ml DCM Wash 2 x 20 seconds with 3ml DMF Wash 2x20 seconds with 3ml DCM 30 seconds drying 3.3ml DIEA / DCM 1: Wash with 19v / v for 2x3min And deprotected. The coupling of fluoresceinyl lysine is then performed according to the following steps: Was: Wash with 4x20 seconds with 1.3ml DCM 1 minute drying 2.4 equivalents of DIC and 4 equivalents of N-BOC-ε- (F) dissolved in 1: 1 v / v DCM / DMF Addition of fluoresceinylcarbonyl) -D-lysine (final concentration of the amino acid is 0.1M) 3． Proceed with coupling for 0.5 hour while shaking at room temperature 4. Dry for 20 seconds Wash 2 x 20 seconds and 1 x 2 minutes with 3ml DMF 4x20 second wash with 3ml DCM 5. 3 ml DIEA / DCM 1: Wash with 19 v / v for 2 x 3 minutes 4x20 second wash with 3ml DCM; 1 minute dry 6． Perform a qualitative Kaiser test. Negative results indicate close to 100% coupling. Cleavage the BOC group and then the PNA (Fl-GGT-GCT-CAC-TGC-GGC-Lys-NH_Two ) Was cut and purified as in Examples 27 and 28. Separately, the PNA is And used for derivatization with the parent lipid group as in Example 35. Example 35 Ada-Fl-GGT-GCT-CAC-TGC-GGC-Lys-NH_TwoSynthesis of (SEQ ID NO: 2) Fl-GGT-GCT-CAC-TGC-GGC-Lys-NH bound to resin_TwoN-terminal BOC group of PNA Cleavage first (as in Example 34) and free amino terminus Derivatized as: Dissolve 100 μmol of adamantoyl chloride in 1: 5 v / v DIEA / DMF and resin Bound PNA (fully protected except at the N-terminus where the BOC group is cleaved) Added to 2 micromolar. One hour after the reaction, the resin was washed with 20% NMP / DMSO, DCM and Washed with 3 ml each of ethanol. The PNA was cleaved from the resin and treated as in Examples 27 and 28. Purified according to such standard protocol. Example 36 Synthesis of Adamantyl-Ahx-TAG-CAG-AGG-AGC-TC (SEQ ID NO: 1) Adamantyl carbonyl chloride (100 micromol) was added to DMF (1.0 ml) and D Dissolved in IEA (200 micromolar). This solution is linked with aminohexanoic acid Combined with the combined protected PNA resin (15.4 mg, 2 micromolar). After 1 hour, remove the resin 0% DMSO / NMP, CH_TwoCl_TwoAnd methanol (about 3 ml each). The resulting PNA is Cleavage from solid support according to known methods and techniques. Example 37 Preparation of PNA / liposome PNA Adamantyl- (Fl^*) -TTT AGC TTC AGC-LysNH_Two(SEQ ID NO: 3), where Fl^*Is a fluoresceinated PNA monomer, Campbell.Biote Prepared by a modification of the ethanol injection method described by Chniques, 1995, 18, 1027 did. DOPE (dioleyl-L-α-phosphatidylethanolamine) (13.4mm ol) and DDAB (dimethyldioctadecyl ammonium bromide) (6.6 mmol) Was dissolved in 1 ml of 96% ethanol. Mix PNA solution (10 ml, 2.5 mM) in DMSO with the lipid Compound (40 ml). 50 ml of the resulting component is then sterilized while vortexing Distilled H_TwoO (1 ml) was added quickly. The resulting PNA has a concentration of 25 in the liposome mixture. mM. For cell uptake experiments, the PNA-liposome mixture (40 ml) was EM^TM(1 ml) and fed to the cells. The final concentration of PNA was 1 mM. Liposome transfection reagent: commercially available transfection Four liposome reagents were used: Lipofectin^TM(Gibco BRL), Lipofectamin^T ^M (Gibco BRL), Tfx-50 (Promega) and DOTAP^TM(Boehringer Mannheim). Each liposome reagent was mixed with bound PNA1118 and the final PNA concentration in the medium (1 ml) To 1 mM. Optimal concentration of each liposome reagent for PNA cell uptake was determined . The following table shows the amounts of reagents used per ml of OptiMEM. Lipofectin^TM Lipofectamin^TM Tfx-50^TM DOTAP^TM 2ml 4ml 10ml 10ml Cells: Human cancer cell line HeLa, Glutamax^TM, Penicillin, streptomycin and The cells were grown in RPMI 1640 medium containing fetal calf serum. The day before the experiment, remove the cover glass 2x10 in 35mm plate including^FiveCells were seeded at the density of the cells. The next day, OptiME Wash once with M, then OptiMEM containing 1 μM PNA or PS-ODN, either alone 1 ml is mixed with one of the four liposome reagents as described above, or DOPE / DDAB incorporated into liposomes. After overnight incubation, remove the PNA-treated cells. And fixed in 3% formaldehyde / 0.2% glutaraldehyde on ice. afterwards Place the coverslip on the objective glass and fluoresce on a Leits Diaplan microscope. Cells were observed by microscopy. Microscopic with Kodak Ektacrome 1600ASA film I took a mirror photo. Example 38 Cellular uptake of bound PNA Four conjugated PNAs with the title formula (Examples 30-32 and 36) are given in Example 28 Prepared according to the standard method indicated. The lysine residue is replaced with Boc-Lys-ClCbz (ClC bz = 2-chlorobenzyloxycarbonyl) and modified MBHA resin (Dueholm, J. Org. Chem., 1994, 59, 5767). PNA oligomer Using a protected Lys group which has been previously fluoresced with an ε-amino group. Extended. After deprotection of the amino group, the support is attached to the support by attaching the parent lipid group. Bound conjugated PNA was obtained. By cleaving from the solid support, the fluorescent label is The resulting free PNA conjugate was obtained. The parent lipid groups (R) examined include (as shown in FIG. 1) Adamantoyl, decanoyl, heptyl-succinyl and palmityl -A succinyl group is included. Stock solutions of four bound PNAs were prepared by dissolving the PNAs in DMSO. . Dilution of these stock solutions can be done with either water or OptiMEM (Gibco BRL) went. Glutamax, a human cancer cell line HeLa^TM, Penicillin, streptomycin and And grown in RPMI 1640 medium containing fetal calf serum (10% v / v). The day before the experiment, 2x10 in 35mm plate including bar glass^FiveCells were seeded at the density of the cells. next day, Rinse the cells once with OptiMEM, then add 3 μM PNA in 1 ml OptiMEM and add For further incubation. Cover glass to visualize PNA uptake The cells are washed twice with PBS and the cells are washed on ice with 3% formaldehyde / 0.2% glue. Fixed for 15 minutes in taraldehyde. After washing twice with PBS, 90% glycero in PBS Using a tool, place the coverslip on the objective glass and use a Leits Diaplan microscope The cells were observed by fluorescence microscopy above. Kodak Ektacrome 1600 ASA film To take a micrograph. Four bound PNAs were tested for incorporation into human cells in culture. PNA is a cell Added directly to the medium. HeLa cells grown on coverslips were grown in serum-free medium. Incubate with PNA (3 μM) overnight, then fix, and examine with fluorescence microscopy Inspection was conducted. Palmityl-succinyl and heptyl-succinyl linked PNAs Both showed spotted and spotted fluorescence in all cells. Generally spots Are evenly distributed on the cells and have enhanced staining at the cell edges, possibly at the cell membrane There was a tendency. Adamantoyl and decanoyl conjugated PNAs require fewer cells Bound fluorescence was shown, and large fluorescent aggregates were seen extracellularly. The palmityl-succinyl PNA conjugate was further studied by confocal microscopy, The exact localization and distribution of the PNA conjugate inside the cells was determined. Do the cells in the study above And scanned through an additional 12 sections. PNA conjugate by video Is actually taken up by cells and is distributed as spots throughout the cytoplasm It was confirmed that. Apparently, there was no fluorescence in the nucleus. This pattern is Shows the endocytosis pathway, implying that the PNA conjugate settles in the endosome. Show. Palmityl-succinyl PNA conjugate was also observed in time course experiments . Cells were incubated for different times in the presence of 3 μM PNA. PNA Cell uptake of conjugate increases with time up to 24 hours of incubation At that time, the PNA-containing medium was replaced with fresh serum-containing medium. 48 hours later, fine Intravesicular PNA was enriched in cell compartments, presumably secondary lysosomes. 72 hours later, Substantially no PNA remained in the cells. Example 39 In vitro translation assay using bound PNA Sequence R-Lys (fluorescein) -TTT-AGC-TTC-CTT-AGC-Lys-NH_Two(Array number No. 3) is located 15 nucleotides immediately 5 ′ to the AUG start codon of CAT mRNA. Complementary and corresponding unbound PNA previously inhibited CAT translation in vitro Has been shown to be possible. Four binding PNAs of Example 38 (SEQ ID NO: 2 ) Was tested in this assay. All four bound PNAs were CAT at similar concentrations as unbound PNA. Translation was specifically inhibited. Example 40 Preparation of liposome construct using PNA conjugate (SEQ ID NO: 2) A liposome construct was prepared using two conjugated PNAs having SEQ ID NO: 2. Cam Modification of the ethanol injection method described by Pbell in Biotechniques, 1995, 18, 1027. Adamantoyl- and decanoyl-conjugated PNA were bound to liposomes . Following this method, DOPE (dioleyl-L-α-phosphatidylethanolamine) ) 13.4 micromolar and DDAB (dimethyldioctadecyl ammonium bromide) ) 6.6 micromoles were dissolved in 1 ml of absolute ethanol. PNA solution (10 μl, 3 mM P NA / DMSO) was mixed with 40 μl of the lipid mixture. 50 μl of the resulting reaction mixture is then Aseptically distilled H while mixing with vortex_TwoO was quickly added to 1 ml. Liposome mixture The PNA concentration in the compound was therefore 30 μM. For cell uptake experiments, PNA- 60 μl of the liposome mixture was added to 1 ml of OptiMEM and given to the cells. Incorporation of bound PNA into the liposome construct was confirmed by fluorescence microscopy . Fluorescence micrographs show fluorescence bound to cells as seen with the PNA conjugate. Spots were shown. In addition, more diffuse fluorescence was observed throughout the cells, In those cells, fluorescence was observed in the nucleus. When other cells were used (COS-7, green monkey kidney-derived cells; and NIH 3T3, Mouse fibroblasts), the same uptake pattern was observed. Example 41 Cellular uptake of adamantyl-bound PNA Cell collection of adamantyl-PNA (prepared according to Example 35 or 36) Measurement of incorporation and also the incorporation of phosphorothioate oligonucleotides I also compared it. Adamantyl-bound PNA and oligonucleotide at 1 μM concentration Add directly to subconfluent HeLa cells and place overnight Was. Cells were then fixed and uptake was visualized by fluorescence microscopy. Oligonucleotides are clustered mainly only in the cytoplasm and lack the fine nuclei It showed strong point-like fluorescence. Point fluorescence was similarly observed for PNA. However, the spots And were present both on the cytoplasm and on the cell membrane. In an attempt to improve uptake of adamantyl-PNA, DNA transfer A variety of commercially available cationic liposomes used for Combined. Furthermore, PNA-containing liposomes composed of lipids DOPE and DDAB Was also prepared. In theory, the hydrophobic adamantyl group of PNAs is And should therefore be entrapping the PNA . Liposomes reportedly effective in delivering plasmid DNA to cells Prepared by simple ethanol injection method. Mix different PNA-liposome mixtures Cells were given a final PNA concentration of 1 μM and incubated overnight. Liposome The presence of either reagents or DOPE / DDAB liposomes allows the PNA to stand alone There was much more diffuse fluorescence inside the cells than when added. Only However, the fluorescence was still limited to the cytoplasm and there was no sign of nuclear uptake. In contrast Lipofectamine, oligonucleotide^TMAnd cells at a final concentration of 1 μM , Most of the cells had fluorescently stained nuclei. In conclusion, when adamantyl-conjugated PNA is added to cells, the PNA is That resemble the endocytic pathway, settling in the chromosome or lysosomal compartment This results in an inset pattern. PNA with liposome transfection reagent Much more diffuse when premixed or incorporated into DOPE / DDAB liposomes In the cytoplasm in a defined manner. Those skilled in the art may make numerous alterations and modifications to the preferred embodiments of the invention, Such alterations and modifications may be made without departing from the spirit of the invention. Will recognize that is possible. Accordingly, the appended claims are directed to the subject matter of the present invention. It is intended to cover all these equivalent variations that are within the true spirit and scope It is.

【手続補正書】【提出日】平成１２年１月２０日（２０００．１．２０）【補正内容】請求の範囲１．式：を有するペプチド核酸であって：各Ｌは、独立して、天然発生核酸塩基または非天然発生核酸塩基であり；各Ｒ^7'は水素または天然発生または非天然発生アミノ酸の側鎖であり、少なくとも１つのＲ^7'は天然発生または非天然発生アミノ酸の側鎖であり；Ｒ^hはＯＨ、ＮＨ₂、またはＮＨＬｙｓＮＨ₂であり；ＲⁱおよびＲ^jの各々は、独立して、親脂質基または蛍光基で標識されたアミノ酸であり；またはＲⁱおよびＲ^jは共に親脂質基であり；そしてｎは１から３０までの整数である前記ペプチド核酸。２．前記Ｒ^7'の少なくとも１つが天然発生アミノ酸の側鎖である、請求項１のペプチド核酸。３．Ｒ^7'の少なくとも１つがＤ−リジンの側鎖である、請求項２のペプチド核酸。４．Ｒⁱが蛍光基で標識されたＤ−リジンであり、そしてＲ^jがアダマントイル基である、請求項１のペプチド核酸。５．前記蛍光基がフルオレセインである、請求項４のペプチド核酸。６．ＲⁱおよびＲ^jが共にアダマントイル基である、請求項１のペプチド核酸。７．Ｒ^7'がアミノ酸の側鎖であり、そして該側鎖が結合する炭素原子が立体化学的に濃縮されている、請求項１のペプチド核酸。８．リポソームに取り込まれたペプチド核酸を含む組成物であって、前記ペプチド核酸が、式：を有し、ここで：各Ｌは、独立して、天然発生核酸塩基または非天然発生核酸塩基であり；各Ｒ^7'は水素または天然発生または非天然発生アミノ酸の側鎖であり；Ｒ^hはＯＨ、ＮＨ₂、またはＮＨＬｙｓＮＨ₂であり；ＲⁱおよびＲ^jの各々は、独立して、親脂質基または蛍光基で標識されたアミノ酸であり；またはＲⁱおよびＲ^jは共に親脂質基であり；そしてｎは１から３０までの整数である前記組成物。９．前記Ｒ^7'の少なくとも１つが天然発生アミノ酸の側鎖である、請求項８の組成物。１０．前記アミノ酸がＤ−リジンである、請求項９の組成物。１１．Ｒⁱが蛍光基で標識されたＤ−リジンであり、そしてＲ^jがアダマントイル基である、請求項８の組成物。１２．前記蛍光基がフルオレセインである、請求項１１の組成物。１３．ＲⁱおよびＲ^jが共にアダマントイル基である、請求項８の組成物。１４．Ｒ^7'がアミノ酸の側鎖であり、そして該側鎖が結合する炭素原子が立体化学的に濃縮されている、請求項８の組成物。１５．ペプチド核酸の細胞取り込みおよび分布を調節する方法であって：前記ペプチド核酸の骨格位を誘導体化し；そして段階（ａ）の誘導体化ペプチド核酸を親脂質基と結合する段階を含む、前記方法。１６．前記の誘導体化が、少なくとも１つの天然発生または非天然発生アミノ酸の側鎖を前記ペプチド核酸の骨格に結合させることを含む、請求項１５の方法。１７．前記の誘導体化が、天然発生アミノ酸の側鎖を前記ペプチド核酸の骨格に結合させることを含む、請求項１６の方法。１８．前記アミノ酸がＤ−リジンである、請求項１７の方法。１９．前記親脂質基がアダマンチル基である、請求項１５の方法。２０．さらに、段階（ｂ）のペプチド核酸をリポソームに導入することを含む、請求項１５の方法。２１．ペプチド核酸の細胞取り込みおよび分布を調節する方法であって：前記ペプチド核酸を親脂質基と結合し；そして段階（ａ）の結合ペプチド核酸をリポソームに導入する段階を含む、前記方法。２２．前記親脂質基がアダマンチル基である、請求項２１の方法。２３．請求項１のペプチド核酸および少なくとも１つの薬学的に許容されるキャリアー、結合剤、増粘剤、希釈剤、緩衝剤、保存剤または界面活性剤を含む、薬剤組成物。２４.請求項８の組成物および少なくとも１つの薬学的に許容されるキャリアー、結合剤、増粘剤、希釈剤、緩衝剤、保存剤または界面活性剤を含む、薬剤組成物。２５．インビトロまたはヒトを除く動物において、細胞または組織におけるペプチド核酸の細胞取り込みおよび分布を調節する方法であって、該細胞または組織にペプチド核酸を投与することを含み、前記ペプチド核酸が式：を有し、ここで：各Ｌは、独立して、天然発生核酸塩基または非天然発生核酸塩基であり；各Ｒ^7'は水素または天然発生または非天然発生アミノ酸の側鎖であり、少なくとも１つのＲ^7'は天然発生または非天然発生アミノ酸の側鎖であり；Ｒ^hはＯＨ、ＮＨ₂、またはＮＨＬｙｓＮＨ₂であり；ＲⁱおよびＲ^jの各々は、独立して、親脂質基または蛍光基で標識されたアミノ酸であり；またはＲⁱおよびＲ^jは共に親脂質基であり；そしてｎは１から３０までの整数である前記方法。２６．前記Ｒ^7'の少なくとも１つが天然発生アミノ酸の側鎖である、請求項２５の方法。２７．前記アミノ酸がＤ−リジンである、請求項２６の方法。２８．Ｒⁱが蛍光基で標識されたＤ−リジンであり、そしてＲ^jがアダマントイル基である、請求項２５の方法。２９．前記蛍光基がフルオレセインである、請求項２８の方法。３０．ＲⁱおよびＲ^jが共にアダマントイル基である、請求項２５の方法。３１．Ｒ^7'がアミノ酸の側鎖であり、そして該側鎖が結合する炭素原子が立体化学的に濃縮されている、請求項２５の方法。３２．インビトロまたはヒトを除く動物において、細胞または組織におけるペプチド核酸の細胞取り込みおよび分布を調節する方法であって、該細胞または組織にリポソームに取り込まれているペプチド核酸を含む組成物を投与することを含み、前記ペプチド核酸が式：を有し、ここで：各Ｌは、独立して、天然発生核酸塩基または非天然発生核酸塩基であり；各Ｒ^7'は水素または天然発生または非天然発生アミノ酸の側鎖であり；Ｒ^hはＯＨ、ＮＨ₂、またはＮＨＬｙｓＮＨ₂であり；ＲⁱおよびＲ^jの各々は、独立して、親脂質基または蛍光基で標識されたアミノ酸であり；またはＲⁱおよびＲ^jは共に親脂質基であり；そしてｎは１から３０までの整数である前記方法。３３．前記Ｒ^7'の少なくとも１つが天然発生アミノ酸の側鎖である、請求項３２の方法。３４．前記アミノ酸がＤ−リジンである、請求項３３の方法。３５．Ｒⁱが蛍光基で標識されたＤ−リジンであり、そしてＲ^jがアダマントイル基である、請求項３２の方法。３６．前記蛍光基がフルオレセインである、請求項３５の方法。３７．ＲⁱおよびＲ^jが共にアダマントイル基である、請求項３２の方法。３８．Ｒ^7'がアミノ酸の側鎖であり、そして該側鎖が結合する炭素原子が立体化学的に濃縮されている、請求項３２の方法。３９．ヒトを除く動物を治療する方法であって、該動物にペプチド核酸の治療的に有効な量を投与することを含み、前記ペプチド核酸が式：を有し、ここで：各Ｌは、独立して、天然発生核酸塩基または非天然発生核酸塩基であり；各Ｒ^7'は水素または天然発生または非天然発生アミノ酸の側鎖であり、少なくとも１つのＲ^7'は天然発生または非天然発生アミノ酸の側鎖であり；Ｒ^hはＯＨ、ＮＨ₂、またはＮＨＬｙｓＮＨ₂であり；ＲⁱおよびＲ^jの各々は、独立して、親脂質基または蛍光基で標識されたアミノ酸であり；またはＲⁱおよびＲ^jは共に親脂質基であり；そしてｎは１から３０までの整数である前記方法。４０．前記Ｒ^7'の少なくとも１つが天然発生アミノ酸の側鎖である、請求項３９の方法。４１．Ｒ^7'の少なくとも１つがＤ−リジンの側鎖である、請求項４０の方法。４２．Ｒⁱが蛍光基で標識されたＤ−リジンであり、そしてＲ^jがアダマントイル基である、請求項３９の方法。４３．前記蛍光基がフルオレセインである、請求項４２の方法。４４．ＲⁱおよびＲ^jが共にアダマントイル基である、請求項３９の方法。４５．Ｒ^7'がアミノ酸の側鎖であり、そして該側鎖が結合する炭素原子が立体化学的に濃縮されている、請求項３９の方法。４６．ヒトを除く動物を治療する方法であって、リポソームに取り込まれているペプチド核酸を含む組成物の治療的に有効な量を該動物に投与することを含み、前記ペプチド核酸が式：を有し、ここで：各Ｌは、独立して、天然発生核酸塩基または非天然発生核酸塩基であり；各Ｒ^7'は水素または天然発生または非天然発生アミノ酸の側鎖であり；Ｒ^hはＯＨ、ＮＨ₂、またはＮＨＬｙｓＮＨ₂であり；ＲⁱおよびＲ^jの各々は、独立して、親脂質基または蛍光基で標識されたアミノ酸であり；またはＲⁱおよびＲ^jは共に親脂質基であり；そしてｎは１から３０までの整数である前記方法。４７．前記Ｒ^7'の少なくとも１つが天然発生アミノ酸の側鎖である、請求項４６の方法。４８．前記アミノ酸がＤ−リジンである、請求項４７の方法。４９．Ｒⁱが蛍光基で標識されたＤ−リジンであり、そしてＲ^jがアダマントイル基である、請求項４６の方法。５０．前記蛍光基がフルオレセインである、請求項４６の方法。５１．ＲⁱおよびＲ^jが共にアダマントイル基である、請求項４６の方法。５２．Ｒ^7'がアミノ酸の側鎖であり、そして該側鎖が結合する炭素原子が立体化学的に濃縮されている、請求項４６の方法。[Procedural amendment] [Date of submission] January 20, 2000 (2000.1.20) [Content of amendment] Claims 1. formula: Wherein each L is independently a naturally-occurring nucleobase or a non-naturally occurring nucleobase; each R ^{7 ′} is hydrogen or a side chain of a naturally-occurring or non-naturally occurring amino acid; One R ^{7 ′} is the side chain of a naturally occurring or non-naturally occurring amino acid; R ^h is OH, NH ₂ , or NHLysNH ₂ ; each of R ⁱ and R ^j is independently a parent lipid group or Said peptide nucleic acid wherein the amino acid is labeled with a fluorescent group; or R ⁱ and R ^j are both lipophilic groups; and n is an integer from 1 to 30. 2. Wherein at least one R ^{7 'is} a side chain of a naturally occurring amino acid, according to claim 1 peptide nucleic acids. 3. 3. The peptide nucleic acid of claim 2, wherein at least one of R7 ^' is a side chain of D-lysine. 4. R ⁱ is labeled D- lysine fluorescent group, and R ^j is an adamantoyl group, according to claim 1 peptide nucleic acids. 5. 5. The peptide nucleic acid of claim 4, wherein said fluorescent group is fluorescein. 6. The peptide nucleic acid according to claim 1, wherein R ⁱ and R ^j are both adamantoyl groups. 7. 2. The peptide nucleic acid of claim 1, wherein R7 ^' is the side chain of an amino acid and the carbon atoms to which the side chain is attached are stereochemically enriched. 8. A composition comprising a peptide nucleic acid incorporated into a liposome, wherein said peptide nucleic acid has the formula: Has, wherein: each L is independently a naturally occurring nucleobase or a non-naturally occurring nucleobase; each R ^{7 'is} the side chain of hydrogen or naturally occurring or non-naturally occurring amino acid; R ^h Is OH, NH ₂ , or NHLysNH ₂ ; each of R ⁱ and R ^j is independently an amino acid labeled with a parent lipid or fluorescent group; or R ⁱ and R ^j are both parent lipid groups. And n is an integer from 1 to 30. 9. Wherein at least one R ^{7 'is} a side chain of a naturally occurring amino acid composition of claim 8. 10. 10. The composition of claim 9, wherein said amino acid is D-lysine. 11. R ⁱ is labeled D- lysine fluorescent group, and R ^j is an adamantoyl group The composition of claim 8. 12. 12. The composition of claim 11, wherein said fluorescent group is fluorescein. 13. R ⁱ and R ^j are both adamantoyl group The composition of claim 8. 14． 9. The composition of claim 8, wherein R7 ^' is the side chain of an amino acid and the carbon atoms to which the side chain is attached are stereochemically enriched. 15. A method of regulating cellular uptake and distribution of a peptide nucleic acid, comprising: derivatizing a backbone position of the peptide nucleic acid; and coupling the derivatized peptide nucleic acid of step (a) to a parent lipid group. 16. 16. The method of claim 15, wherein said derivatization comprises attaching a side chain of at least one naturally occurring or non-naturally occurring amino acid to the backbone of said peptide nucleic acid. 17． 17. The method of claim 16, wherein said derivatization comprises attaching a side chain of a naturally occurring amino acid to the backbone of said peptide nucleic acid. 18. 18. The method of claim 17, wherein said amino acid is D-lysine. 19. 16. The method of claim 15, wherein said lipophilic group is an adamantyl group. 20. 16. The method of claim 15, further comprising introducing the peptide nucleic acid of step (b) into the liposome. 21. A method of regulating cellular uptake and distribution of a peptide nucleic acid, comprising: binding the peptide nucleic acid to a parent lipid group; and introducing the bound peptide nucleic acid of step (a) into a liposome. 22. 22. The method of claim 21, wherein said lipophilic group is an adamantyl group. 23. A pharmaceutical composition comprising the peptide nucleic acid of claim 1 and at least one pharmaceutically acceptable carrier, binder, thickener, diluent, buffer, preservative or surfactant. 24. A pharmaceutical composition comprising the composition of claim 8 and at least one pharmaceutically acceptable carrier, binder, thickener, diluent, buffer, preservative or surfactant. 25. A method of regulating the cellular uptake and distribution of a peptide nucleic acid in a cell or tissue in vitro or in an animal other than a human, comprising administering the peptide nucleic acid to the cell or tissue, wherein the peptide nucleic acid has the formula: Wherein each L is independently a naturally occurring nucleobase or a non-naturally occurring nucleobase; each R ^{7 ′} is hydrogen or a side chain of a naturally occurring or non-naturally occurring amino acid, and has at least one One R ^{7 ′} is the side chain of a naturally occurring or non-naturally occurring amino acid; R ^h is OH, NH ₂ , or NHLysNH ₂ ; each of R ⁱ and R ^j is independently a parent lipid group or fluorescent The method wherein R ⁱ and R ^j are both parent lipid groups; and n is an integer from 1 to 30. 26. Wherein at least one R ^{7 'is} a side chain of a naturally occurring amino acid The method of claim 25. 27. 27. The method of claim 26, wherein said amino acid is D-lysine. 28. R ⁱ is labeled D- lysine fluorescent group, and R ^j is an adamantoyl group, The method of claim 25. 29. 29. The method of claim 28, wherein said fluorescent group is fluorescein. 30. R ⁱ and R ^j are both adamantoyl group, The method of claim 25. 31. 26. The method of claim 25, wherein R7 ^' is the side chain of an amino acid and the carbon atoms to which the side chain is attached are stereochemically enriched. 32. A method of regulating the cellular uptake and distribution of a peptide nucleic acid in a cell or tissue in vitro or in an animal other than a human, comprising administering to the cell or tissue a composition comprising the peptide nucleic acid incorporated into a liposome. Wherein the peptide nucleic acid has the formula: Has, wherein: each L is independently a naturally occurring nucleobase or a non-naturally occurring nucleobase; each R ^{7 'is} the side chain of hydrogen or naturally occurring or non-naturally occurring amino acid; R ^h Is OH, NH ₂ , or NHLysNH ₂ ; each of R ⁱ and R ^j is independently an amino acid labeled with a parent lipid or fluorescent group; or R ⁱ and R ^j are both parent lipid groups. And n is an integer from 1 to 30. 33. Wherein at least one R ^{7 'is} a side chain of a naturally occurring amino acid The method of claim 32. 34. 34. The method of claim 33, wherein said amino acid is D-lysine. 35. R ⁱ is labeled D- lysine fluorescent group, and R ^j is an adamantoyl group, The method of claim 32. 36. 36. The method of claim 35, wherein said fluorescent group is fluorescein. 37. R ⁱ and R ^j are both adamantoyl group, The method of claim 32. 38. 33. The method of claim 32, wherein R7 ^' is the side chain of an amino acid and the carbon atoms to which the side chain is attached are stereochemically enriched. 39. A method of treating an animal other than a human, comprising administering to the animal a therapeutically effective amount of a peptide nucleic acid, wherein the peptide nucleic acid has the formula: Wherein each L is independently a naturally occurring nucleobase or a non-naturally occurring nucleobase; each R ^{7 ′} is hydrogen or a side chain of a naturally occurring or non-naturally occurring amino acid, and has at least one One R ^{7 ′} is the side chain of a naturally occurring or non-naturally occurring amino acid; R ^h is OH, NH ₂ , or NHLysNH ₂ ; each of R ⁱ and R ^j is independently a parent lipid group or fluorescent The method wherein R ⁱ and R ^j are both parent lipid groups; and n is an integer from 1 to 30. 40. Wherein at least one R ^{7 'is} a side chain of a naturally occurring amino acid The method of claim 39. 41. 41. The method of claim 40, wherein at least one of R7 ^' is a side chain of D-lysine. 42. R ⁱ is labeled D- lysine fluorescent group, and R ^j is an adamantoyl group, The method of claim 39. 43. 43. The method of claim 42, wherein said fluorescent group is fluorescein. 44. R ⁱ and R ^j are both adamantoyl group, The method of claim 39. 45. 40. The method of claim 39, wherein R7 ^' is the side chain of an amino acid and the carbon atoms to which the side chain is attached are stereochemically enriched. 46. A method of treating an animal other than a human, comprising administering to the animal a therapeutically effective amount of a composition comprising a peptide nucleic acid incorporated into a liposome, wherein the peptide nucleic acid has the formula: Has, wherein: each L is independently a naturally occurring nucleobase or a non-naturally occurring nucleobase; each R ^{7 'is} the side chain of hydrogen or naturally occurring or non-naturally occurring amino acid; R ^h Is OH, NH ₂ , or NHLysNH ₂ ; each of R ⁱ and R ^j is independently an amino acid labeled with a parent lipid or fluorescent group; or R ⁱ and R ^j are both parent lipid groups. And n is an integer from 1 to 30. 47. Wherein at least one R ^{7 'is} a side chain of a naturally occurring amino acid The method of claim 46. 48. 48. The method of claim 47, wherein said amino acid is D-lysine. 49. R ⁱ is labeled D- lysine fluorescent group, and R ^j is an adamantoyl group, The method of claim 46. 50. 47. The method of claim 46, wherein said fluorescent group is fluorescein. 51. R ⁱ and R ^j are both adamantoyl group, The method of claim 46. 52. 47. The method of claim 46, wherein R7 ^' is the side chain of an amino acid and the carbon atoms to which the side chain is attached are stereochemically enriched.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 31/18 Ａ６１Ｐ 35/00 35/00 Ｃ０７Ｋ 1/00 Ｃ０７Ｋ 1/00 Ｃ１２Ｑ 1/68 ＺＮＡＡＣ１２Ｎ 15/09 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＡＣ１２Ｑ 1/68 ＺＮＡＡ６１Ｋ 37/02 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＧＷ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ──────────────────────────────────────────────────続き Continued on the front page (51) Int.Cl. ⁷ Identification symbol FI Theme coat ゛ (Reference) A61P 31/18 A61P 35/00 35/00 C07K 1/00 C07K 1/00 C12Q 1/68 ZNAA C12N 15 / 09 C12N 15/00 A C12Q 1/68 ZNA A61K 37/02 (81) Designated countries EP (AT, BE, CH, CY, DE, DK, ES, FI, FR, GB, GR, IE, IT, LU , MC, NL, PT, SE), OA (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, ML, MR, NE, SN, TD, TG), AP (GH, GM, KE, L) S, MW, SD, SZ, UG, ZW), EA (AM, AZ, BY, KG, KZ, MD, RU, TJ, TM), AL, AM, AT, AU, A , BA, BB, BG, BR, BY, CA, CH, CN, CU, CZ, DE, DK, EE, ES, FI, GB, GE, GH, GM, GW, HU, ID, IL, IS, JP, KE, KG, KP, KR, KZ, LC, LK, LR, LS, LT, LU, LV, MD, MG, MK, MN, MW, MX, NO, NZ, PL, PT, RO, RU , SD, SE, SG, SI, SK, SL, TJ, TM, TR, TT, UA, UG, US, UZ, VN, YU, ZW

Claims

【特許請求の範囲】１．式：を有するペプチド核酸であって：各Ｌは、独立して、天然発生核酸塩基または非天然発生核酸塩基であり；各Ｒ^7'は水素または天然発生または非天然発生アミノ酸の側鎖であり、少なくとも１つのＲ^7'は天然発生または非天然発生アミノ酸の側鎖であり；Ｒ^hはOH、NH₂、またはNHLysNH₂であり；ＲⁱおよびＲ^jの各々は、独立して、親脂質基または蛍光基で標識されたアミノ酸であり；またはＲⁱおよびＲ^jは共に親脂質基であり；そしてｎは１から30までの整数である前記ペプチド核酸。２．前記Ｒ^7'の少なくとも１つが天然発生アミノ酸の側鎖である、請求項１のペプチド核酸。３．Ｒ^7'の少なくとも１つがＤ−リジンの側鎖である、請求項２のペプチド核酸。４．Ｒⁱが蛍光基で標識されたＤ−リジンであり、そしてＲ^jがアダマントイル基である、請求項１のペプチド核酸。５．前記蛍光基がフルオレセインである、請求項４のペプチド核酸。６．ＲⁱおよびＲ^jが共にアダマントイル基である、請求項１のペプチド核酸。７．Ｒ^7'がアミノ酸の側鎖であり、そして該側鎖が結合する炭素原子が立体化学的に濃縮されている、請求項１のペプチド核酸。８．リポソームに取り込まれたペプチド核酸を含む組成物であって、前記ペプチド核酸が、式：を有し、ここで：各Ｌは、独立して、天然発生核酸塩基または非天然発生核酸塩基であり；各Ｒ^7'は水素または天然発生または非天然発生アミノ酸の側鎖であり；Ｒ^hはOH、NH₂、またはNHLysNH₂であり；ＲⁱおよびＲ^jの各々は、独立して、親脂質基または蛍光基で標識されたアミノ酸であり；またはＲⁱおよびＲ^jは共に親脂質基であり；そしてｎは１から30までの整数である前記組成物。９．前記Ｒ^7'の少なくとも１つが天然発生アミノ酸の側鎖である、請求項８の組成物。 10．前記アミノ酸がＤ−リジンである、請求項９の組成物。 11．Ｒⁱが蛍光基で標識されたＤ−リジンであり、そしてＲ^jがアダマントイル基である、請求項８の組成物。 12．前記蛍光基がフルオレセインである、請求項11の組成物。 13．ＲⁱおよびＲ^jが共にアダマントイル基である、請求項８の組成物。 14．Ｒ^7'がアミノ酸の側鎖であり、そして該側鎖が結合する炭素原子が立体化学的に濃縮されている、請求項８の組成物。 15．ペプチド核酸の細胞取り込みおよび分布を調節する方法であって：（a）前記ペプチド核酸の骨格位を誘導体化し；そして（b）段階（a）の誘導体化ペプチド核酸を親脂質基と結合する段階を含む、前記方法。 16．前記の誘導体化が、少なくとも１つの天然発生または非天然発生アミノ酸の側鎖を前記ペプチド核酸の骨格に結合させることを含む、請求項15の方法。 17．前記の誘導体化が、天然発生アミノ酸の側鎖を前記ペプチド核酸の骨格に結合させることを含む、請求項16の方法。 18．前記アミノ酸がＤ−リジンである、請求項17の方法。 19．前記親脂質基がアダマンチル基である、請求項15の方法。 20．さらに、段階（b）のペプチド核酸をリポソームに導入することを含む、請求項15の方法。 21．ペプチド核酸の細胞取り込みおよび分布を調節する方法であって：（a）前記ペプチド核酸を親脂質基と結合し；そして（b）段階（a）の結合ペプチド核酸をリポソームに導入する段階を含む、前記方法。 22．前記親脂質基がアダマンチル基である、請求項21の方法。 23．請求項１のペプチド核酸および少なくとも１つの薬学的に許容されるキャリアー、結合剤、増粘剤、希釈剤、緩衝剤、保存剤または界面活性剤を含む、薬剤組成物。 24．請求項８の組成物および少なくとも１つの薬学的に許容されるキャリアー、結合剤、増粘剤、希釈剤、緩衝剤、保存剤または界面活性剤を含む、薬剤組成物。 25．細胞または組織におけるペプチド核酸の細胞取り込みおよび分布を調節する方法であって、該細胞または組織にペプチド核酸を投与することを含み、前記ペプチド核酸が式：を有し、ここで：各Ｌは、独立して、天然発生核酸塩基または非天然発生核酸塩基であり；各Ｒ^7'は水素または天然発生または非天然発生アミノ酸の側鎖であり、少なくとも１つのＲ^7'は天然発生または非天然発生アミノ酸の側鎖であり；Ｒ^hはOH，NH₂、またはNHLysNH₂であり；ＲⁱおよびＲ^jの各々は、独立して、親脂質基または蛍光基で標識されたアミノ酸であり；またはＲⁱおよびＲ^jは共に親脂質基であり；そしてｎは１から30までの整数である前記方法。 26．前記Ｒ^7'の少なくとも１つが天然発生アミノ酸の側鎖である、請求項25の方法。 27．前記アミノ酸がＤ−リジンである、請求項26の方法。 28．Ｒⁱが蛍光基で標識されたＤ−リジンであり、そしてＲ^jがアダマントイル基である、請求項25の方法。 29．前記蛍光基がフルオレセインである、請求項28の方法。 30．ＲⁱおよびＲ^jが共にアダマントイル基である、請求項25の方法。 31．Ｒ^7'がアミノ酸の側鎖であり、そして該側鎖が結合する炭素原子が立体化学的に濃縮されている、請求項25の方法。 32．細胞または組織におけるペプチド核酸の細胞取り込みおよび分布を調節する方法であって、該細胞または組織にリポソームに取り込まれているペプチド核酸を含む組成物を投与することを含み、前記ペプチド核酸が式：を有し、ここで：各Ｌは、独立して、天然発生核酸塩基または非天然発生核酸塩基であり；各Ｒ^7'は水素または天然発生または非天然発生アミノ酸の側鎖であり；Ｒ^hはOH，NH₂、またはNHLysNH₂であり；ＲⁱおよびＲ^jの各々は、独立して、親脂質基または蛍光基で標識されたアミノ酸であり；またはＲⁱおよびＲ^jは共に親脂質基であり；そしてｎは１から30までの整数である前記方法。 33．前記Ｒ^7'の少なくとも１つが天然発生アミノ酸の側鎖である、請求項32の方法。 34．前記アミノ酸がＤ−リジンである、請求項33の方法。 35．Ｒⁱが蛍光基で標識されたＤ−リジンであり、そしてＲ^jがアダマントイル基である、請求項32の方法。 36．前記蛍光基がフルオレセインである、請求項35の方法。 37．ＲⁱおよびＲ^jが共にアダマントイル基である、請求項32の方法。 38．Ｒ^7'がアミノ酸の側鎖であり、そして該側鎖が結合する炭素原子が立体化学的に濃縮されている、請求項32の方法。 39．動物を治療する方法であって、該動物にペプチド核酸の治療的に有効な量を投与することを含み、前記ペプチド核酸が式：を有し、ここで：各Ｌは、独立して、天然発生核酸塩基または非天然発生核酸塩基であり；各Ｒ^7'は水素または天然発生または非天然発生アミノ酸の側鎖であり、少なくとも１つのＲ^7'は天然発生または非天然発生アミノ酸の側鎖であり；Ｒ^hはOH、NH₂、またはNHLysNH₂であり；ＲⁱおよびＲ^jの各々は、独立して、親脂質基または蛍光基で標識されたアミノ酸であり；またはＲⁱおよびＲ^jは共に親脂質基であり；そしてｎは１から30までの整数である前記方法。 40．前記Ｒ^7'の少なくとも１つが天然発生アミノ酸の側鎖である、請求項39の方法。 41．Ｒ^7'の少なくとも１つがＤ−リジンの側鎖である、請求項40の方法。 42．Ｒⁱが蛍光基で標識されたＤ−リジンであり、そしてＲ^jがアダマントイル基である、請求項39の方法。 43．前記蛍光基がフルオレセインである、請求項42の方法。 44．ＲⁱおよびＲ^jが共にアダマントイル基である、請求項39の方法。 45．Ｒ^7'がアミノ酸の側鎖であり、そして該側鎖が結合する炭素原子が立体化学的に濃縮されている、請求項39の方法。 46．動物を治療する方法であって、リポソームに取り込まれているペプチド核酸を含む組成物の治療的に有効な量を該動物に投与することを含み、前記ペプチド核酸が式：を有し、ここで：各Ｌは、独立して、天然発生核酸塩基または非天然発生核酸塩基であり；各Ｒ^7'は水素または天然発生または非天然発生アミノ酸の側鎖であり；Ｒ^hはOＨ、NH₂、またはNHLysNH₂であり；ＲⁱおよびＲ^jの各々は、独立して、親脂質基または蛍光基で標識されたアミノ酸であり；またはＲⁱおよびＲ^jは共に親脂質基であり；そしてｎは１から30までの整数である前記方法。 47．前記Ｒ^7'の少なくとも１つが天然発生アミノ酸の側鎖である、請求項46の方法。 48．前記アミノ酸がＤ−リジンである、請求項47の方法。 49．Ｒⁱが蛍光基で標識されたＤ−リジンであり、そしてＲ^jがアダマントイル基である、請求項46の方法。 50．前記蛍光基がフルオレセインである、請求項46の方法。 51．ＲⁱおよびＲ^jが共にアダマントイル基である、請求項46の方法。 52．Ｒ^7'がアミノ酸の側鎖であり、そして該側鎖が結合する炭素原子が立体化学的に濃縮されている、請求項46の方法。[Claims] 1. formula: Wherein each L is independently a naturally occurring or non-naturally occurring nucleobase; each R ^{7 ′} is hydrogen or a side chain of a naturally occurring or non-naturally occurring amino acid; At least one R ^{7 ′} is a side chain of a naturally occurring or non-naturally occurring amino acid; R ^h is OH, NH ₂ , or NHHLsNH ₂ ; each of R ⁱ and R ^j is independently a parent lipid; A peptide or a nucleic acid, wherein R ⁱ and R ^j are both lipophilic groups; and n is an integer from 1 to 30. 2. Wherein at least one R ^{7 'is} a side chain of a naturally occurring amino acid, according to claim 1 peptide nucleic acid. 3. The peptide nucleic acid according to claim 2, wherein at least one of R ^{7 ′} is a side chain of D-lysine. 4. The peptide nucleic acid of claim 1, wherein R ⁱ is D-lysine labeled with a fluorescent group and R ^j is an adamantoyl group. 5. 5. The peptide nucleic acid of claim 4, wherein said fluorescent group is fluorescein. 6. The peptide nucleic acid according to claim 1, wherein R ⁱ and R ^j are both adamantoyl groups. 7. 2. The peptide nucleic acid of claim 1, wherein R7 ^' is the side chain of an amino acid and the carbon atoms to which the side chain is attached are stereochemically enriched. 8. A composition comprising a peptide nucleic acid incorporated into a liposome, wherein the peptide nucleic acid has the formula: Has, wherein: each L is independently a naturally occurring nucleobase or a non-naturally occurring nucleobase; each R ^{7 'is} the side chain of hydrogen or naturally occurring or non-naturally occurring amino acid; R ^h Is OH, NH ₂ , or NHLisNH ₂ ; each of R ⁱ and R ^j is independently an amino acid labeled with a parent lipid or fluorescent group; or R ⁱ and R ^j are both parent Said composition is a lipid group; and n is an integer from 1 to 30. 9. Wherein at least one R ^{7 'is} a side chain of a naturally occurring amino acid, a set composition as claimed in claim 8. Ten. 10. The composition of claim 9, wherein said amino acid is D-lysine. 11． R ⁱ is labeled D- lysine fluorescent group, and R ^j is an adamantoyl group The composition of claim 8. 12． 12. The composition of claim 11, wherein said fluorescent group is fluorescein. 13. R ⁱ and R ^j are both adamantoyl group The composition of claim 8. 14. 9. The composition of claim 8, wherein R7 ^' is the side chain of an amino acid and the carbon atoms to which the side chain is attached are stereochemically enriched. 15． A method for regulating cellular uptake and distribution of a peptide nucleic acid, comprising: (a) derivatizing a skeletal position of said peptide nucleic acid; and (b) coupling the derivatized peptide nucleic acid of step (a) to a parent lipid group The method, comprising: 16． 16. The method of claim 15, wherein said derivatization comprises attaching a side chain of at least one naturally occurring or non-naturally occurring amino acid to the peptide nucleic acid backbone. 17． 17. The method of claim 16, wherein said derivatization comprises attaching a side chain of a naturally occurring amino acid to the peptide nucleic acid backbone. 18． 18. The method of claim 17, wherein said amino acid is D-lysine. 19. 16. The method of claim 15, wherein said lipophilic group is an adamantyl group. 20. 16. The method of claim 15, further comprising introducing the peptide nucleic acid of step (b) into the liposome. twenty one. A method for regulating cellular uptake and distribution of a peptide nucleic acid, comprising: (a) binding the peptide nucleic acid to a parent lipid group; and (b) introducing the bound peptide nucleic acid of step (a) into a liposome. The method. twenty two. 22. The method of claim 21, wherein said lipophilic group is an adamantyl group. twenty three. A pharmaceutical composition comprising the peptide nucleic acid of claim 1 and at least one pharmaceutically acceptable carrier, binder, thickener, diluent, buffer, preservative or surfactant. twenty four. 9. A pharmaceutical composition comprising the composition of claim 8 and at least one pharmaceutically acceptable carrier, binder, thickener, diluent, buffer, preservative or surfactant. twenty five. A method of regulating the cellular uptake and distribution of a peptide nucleic acid in a cell or tissue, comprising administering the peptide nucleic acid to the cell or tissue, wherein the peptide nucleic acid has the formula: Wherein each L is independently a naturally occurring or non-naturally occurring nucleobase; each R ^{7 ′} is hydrogen or a side chain of a naturally occurring or non-naturally occurring amino acid, R 1 ^′ is the side chain of a naturally occurring or non-naturally occurring amino acid; R ^h is OH, NH ₂ , or NHLisNH ₂ ; each of R ⁱ and R ^j is independently a parent lipid group Or the amino acid labeled with a fluorescent group; or R ⁱ and R ^j are both lipophilic groups; and n is an integer from 1 to 30. 26. Wherein at least one R ^{7 'is} a side chain of a naturally occurring amino acid, methods who claim 25. 27. 27. The method of claim 26, wherein said amino acid is D-lysine. 28. R ⁱ is labeled D- lysine fluorescent group, and R ^j is an adamantoyl group, The method of claim 25. 29. 29. The method of claim 28, wherein said fluorescent group is fluorescein. 30. R ⁱ and R ^j are both adamantoyl group, The method of claim 25. 31. 26. The method of claim 25, wherein R7 ^' is the side chain of an amino acid and the carbon atoms to which the side chain is attached are stereochemically enriched. 32. A method of regulating the cellular uptake and distribution of a peptide nucleic acid in a cell or tissue, comprising administering to the cell or tissue a composition comprising a peptide nucleic acid incorporated into a liposome, wherein the peptide nucleic acid has the formula: Has, wherein: each L is independently a naturally occurring nucleobase or a non-naturally occurring nucleobase; each R ^{7 'is} the side chain of hydrogen or naturally occurring or non-naturally occurring amino acid; R ^h Is OH, NH ₂ , or NHLisNH ₂ ; each of R ⁱ and R ^j is independently an amino acid labeled with a parent lipid or fluorescent group; or R ⁱ and R ^j are both parent Said method is a lipid group; and n is an integer from 1 to 30. 33. Wherein at least one R ^{7 'is} a side chain of a naturally occurring amino acid, methods who claim 32. 34. 34. The method of claim 33, wherein said amino acid is D-lysine. 35. R ⁱ is labeled D- lysine fluorescent group, and R ^j is an adamantoyl group, The method of claim 32. 36. 36. The method of claim 35, wherein said fluorescent group is fluorescein. 37. 33. The method of claim 32, wherein R ⁱ and R ^j are both adamantoyl groups. 38. 33. The method of claim 32, wherein R7 ^' is the side chain of an amino acid and the carbon atoms to which the side chain is attached are stereochemically enriched. 39. A method of treating an animal, comprising administering to the animal a therapeutically effective amount of a peptide nucleic acid, wherein the peptide nucleic acid has the formula: Wherein each L is independently a naturally occurring or non-naturally occurring nucleobase; each R ^{7 ′} is hydrogen or a side chain of a naturally occurring or non-naturally occurring amino acid, R 1 ^′ is the side chain of a naturally occurring or non-naturally occurring amino acid; R ^h is OH, NH ₂ , or NHLisNH ₂ ; each of R ⁱ and R ^j is independently a parent lipid group Or the amino acid labeled with a fluorescent group; or R ⁱ and R ^j are both lipophilic groups; and n is an integer from 1 to 30. 40. Wherein at least one R ^{7 'is} a side chain of a naturally occurring amino acid, methods who claim 39. 41. 41. The method of claim 40, wherein at least one of R7 ^' is a side chain of D-lysine. 42. R ⁱ is labeled D- lysine fluorescent group, and R ^j is an adamantoyl group, The method of claim 39. 43. 43. The method of claim 42, wherein said fluorescent group is fluorescein. 44. 40. The method of claim 39, wherein R ⁱ and R ^j are both adamantoyl groups. 45. 40. The method of claim 39, wherein R7 ^' is the side chain of an amino acid and the carbon atoms to which the side chain is attached are stereochemically enriched. 46. A method of treating an animal, comprising administering to the animal a therapeutically effective amount of a composition comprising a peptide nucleic acid incorporated into a liposome, wherein the peptide nucleic acid has the formula: Has, wherein: each L is independently a naturally occurring nucleobase or a non-naturally occurring nucleobase; each R ^{7 'is} the side chain of hydrogen or naturally occurring or non-naturally occurring amino acid; R ^h Is OH, NH ₂ , or NHLisNH ₂ ; each of R ⁱ and R ^j is independently an amino acid labeled with a parent lipid or fluorescent group; or R ⁱ and R ^j are both parent Said method is a lipid group; and n is an integer from 1 to 30. 47. Wherein at least one R ^{7 'is} a side chain of a naturally occurring amino acid, methods who claim 46. 48. 48. The method of claim 47, wherein said amino acid is D-lysine. 49. R ⁱ is labeled D- lysine fluorescent group, and R ^j is an adamantoyl group, The method of claim 46. 50. 47. The method of claim 46, wherein said fluorescent group is fluorescein. 51. 47. The method of claim 46, wherein R ⁱ and R ^j are both adamantoyl groups. 52. 47. The method of claim 46, wherein R7 ^' is the side chain of an amino acid and the carbon atoms to which the side chain is attached are stereochemically enriched.