JP2001346596A - Method for producing optically active cyanohydrin - Google Patents
Method for producing optically active cyanohydrinInfo
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Abstract
Description
【０００１】[0001]
【発明の属する技術分野】本発明は、カルボニル化合物
及び青酸（シアン化水素酸）を原料として、酵素反応に
より光学活性シアノヒドリンを合成する反応に関する。The present invention relates to a reaction for synthesizing optically active cyanohydrin by an enzymatic reaction using a carbonyl compound and hydrocyanic acid (hydrocyanic acid) as raw materials.
【０００２】[0002]
【従来の技術】カルボニル化合物及び青酸を原料とし
て、ヒドロキシニトリルリアーゼ等の酵素を触媒に用
い、光学活性シアノヒドリンを合成する反応については
多くの報告がある。しかし、いずれも工業的に生産され
ている青酸に安定剤が含まれており、しかも、その安定
剤がヒドロキシニトリルリアーゼの活性に重大な影響を
及ぼすことについては全く言及されていない。この理由
として、これまでの報告例が工業的に生産された青酸で
はなく、実験室内でごく少量調製された青酸であるた
め、安定剤を含まないためにこの事実に気がつかなかっ
たこと、また、反応系に添加する青酸が低濃度である場
合には、安定剤の影響が出難いことなどから、この事実
について知られていなかったためであろうことが考えら
れる。2. Description of the Related Art There are many reports on reactions for synthesizing optically active cyanohydrin using carbonyl compound and hydrocyanic acid as raw materials and using an enzyme such as hydroxynitrile lyase as a catalyst. However, there is no mention of a stabilizer contained in industrially produced hydrocyanic acid and that the stabilizer has a significant effect on the activity of hydroxynitrile lyase. The reason for this was that the reported case was not hydrocyanic acid produced industrially, but hydrocyanic acid prepared in a small amount in a laboratory, so that this fact was not noticed because it did not contain a stabilizer. If the concentration of hydrocyanic acid to be added to the reaction system is low, it may be because this fact was not known because the effect of the stabilizer is difficult to appear.
【０００３】[0003]
【発明が解決しようとする課題】本発明は、カルボニル
化合物及び青酸を原料として、ヒドロキシニトリルリア
ーゼ等の酵素を触媒に用い、光学活性シアノヒドリンを
合成するに際し、工業的に有利な方法を提供することを
目的とする。SUMMARY OF THE INVENTION The present invention provides an industrially advantageous method for synthesizing optically active cyanohydrin using a carbonyl compound and hydrocyanic acid as raw materials and using an enzyme such as hydroxynitrile lyase as a catalyst. With the goal.
【０００４】[0004]
【課題を解決するための手段】本発明者らは、前記課題
を達成すべく鋭意研究を重ねた結果、工業的に利用可能
な青酸に安定剤として含まれている酸性物質（亜硫酸や
硫酸）がヒドロキシニトリルリアーゼ等の酵素の活性を
阻害しており、この安定剤の阻害作用を低減させること
により、ヒドロキシニトリルリアーゼ等の酵素の寿命を
大幅に延長することができることを見出し、本発明を完
成するに至った。Means for Solving the Problems The present inventors have made intensive studies to achieve the above object, and as a result, have found that acidic substances (sulfurous acid and sulfuric acid) contained as stabilizers in industrially available hydrocyanic acid. Inhibits the activity of enzymes such as hydroxynitrile lyase, and found that by reducing the inhibitory action of this stabilizer, the life span of enzymes such as hydroxynitrile lyase can be significantly extended, completing the present invention. I came to.
【０００５】即ち、本発明は、以下の発明を包含する。 （１）青酸を１．５Ｍの濃度で水と実質的に混和しない
有機溶媒に溶解した溶液と純水とを、有機相と水相に二
相分離する比率で混合した後、静置して得られる水相の
ｐＨが５以下を示す、安定剤として酸性物質を含む青
酸、及びカルボニル化合物を原料として、酵素反応によ
り光学活性シアノヒドリンを合成するに際し、当該安定
剤の酵素に対する阻害作用を低減させるための処理を行
った青酸を原料として用いることを特徴とする光学活性
シアノヒドリンの製造方法。That is, the present invention includes the following inventions. (1) A solution of hydrocyanic acid dissolved in an organic solvent that is substantially immiscible with water at a concentration of 1.5 M and pure water are mixed at a ratio of two-phase separation into an organic phase and an aqueous phase, and then allowed to stand. When the pH of the resulting aqueous phase is 5 or less, a cyanide containing an acidic substance as a stabilizer and a carbonyl compound are used as raw materials, and when an optically active cyanohydrin is synthesized by an enzymatic reaction, the inhibitory effect of the stabilizer on the enzyme is reduced. A method for producing optically active cyanohydrin, comprising using as a raw material hydrocyanic acid subjected to the above treatment.
【０００６】（２）青酸及びカルボニル化合物を原料と
して、酵素反応により光学活性シアノヒドリンを合成す
る方法において、青酸を一旦水と実質的に混和しない有
機溶媒に溶解して、青酸有機溶媒溶液を調製し、次いで
当該青酸有機溶媒溶液に対して緩衝液を飽和量以上加
え、混合した後、青酸有機溶媒溶液相を回収し、反応に
用いることを特徴とする光学活性シアノヒドリンの製造
方法。 （３）緩衝液がｐＨ４〜７の範囲で緩衝能を有する緩衝
液である前記（２）に記載の方法。 （４）酵素反応がヒドロキシニトリルリアーゼを用いる
酵素反応である前記（１）〜（３）のいずれかに記載の
方法。(2) In a method of synthesizing optically active cyanohydrin by an enzymatic reaction using hydrocyanic acid and a carbonyl compound as raw materials, hydrocyanic acid is once dissolved in an organic solvent which is substantially immiscible with water to prepare a hydrocyanic acid organic solvent solution. A method for producing an optically active cyanohydrin, comprising adding a buffer solution to the organic solvent solution in an amount equal to or more than a saturation amount, mixing and then collecting the organic solvent solution phase in the organic solution, and using the solution for the reaction. (3) The method according to the above (2), wherein the buffer is a buffer having a buffering ability in a pH range of 4 to 7. (4) The method according to any one of (1) to (3), wherein the enzymatic reaction is an enzymatic reaction using hydroxynitrile lyase.
【０００７】[0007]
【発明の実施の形態】本発明に用いるヒドロキシニトリ
ルリアーゼとは、シアン化水素とカルボニル化合物とか
ら光学活性なシアノヒドリンを合成する活性を有するも
のを意味し、Ｒ体のシアノヒドリンを合成するヒドロキ
シニトリルリアーゼ（（Ｒ）−ヒドロキシニトリルリア
ーゼ）としては、アーモンド(Prunus amygdalus)などの
バラ科植物由来の（Ｒ）−ヒドロキシニトリルリアー
ゼ、アマ科植物由来の（Ｒ）−ヒドロキシニトリルリア
ーゼ、Ｓ体のシアノヒドリンを合成するヒドロキシニト
リルリアーゼ（（Ｓ）−ヒドロキシニトリルリアーゼ）
としては、モロコシ(Sorghum bicolor)などのイネ科植
物由来の（Ｓ）−ヒドロキシニトリルリアーゼ、キャッ
サバ(Manihot esculenta)、パラゴムノキ(Hevea brasil
iensis)などのトウダイグサ科植物由来の（Ｓ）−ヒド
ロキシニトリルリアーゼ、キシメニア(Ximenia america
na)などのボロボロノキ科植物由来の（Ｓ）−ヒドロキ
シニトリルリアーゼなどが例示できる。BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION The term "hydroxynitrile lyase" used in the present invention means a compound having an activity of synthesizing optically active cyanohydrin from hydrogen cyanide and a carbonyl compound. As (R) -hydroxynitrile lyase), (R) -hydroxynitrile lyase derived from a Rosaceae plant such as almond (Prunus amygdalus), (R) -hydroxynitrile lyase derived from a flaxaceous plant, and cyanohydrin in S form are synthesized. Hydroxynitrile lyase ((S) -hydroxynitrile lyase)
Examples are (S) -hydroxynitrile lyase, cassava (Manihot esculenta), and Hevea brasil (Hevea brasil) derived from gramineous plants such as sorghum (Sorghum bicolor).
(S) -Hydroxynitrile lyase from Euphorbiaceae plants such as Xiennia america (Ximenia america)
(S) -Hydroxynitrile lyase derived from a plant of the family Bornaceae, such as na).
【０００８】前記酵素は酵素を含む生物組織からの抽出
によって調製することができるが、前記酵素の遺伝子を
クローニングし、当該遺伝子を組み込んで作成した遺伝
子組換え生物によっても生産することができる。[0008] The enzyme can be prepared by extraction from a biological tissue containing the enzyme, but can also be produced by a genetically modified organism prepared by cloning the gene of the enzyme and incorporating the gene.
【０００９】前記酵素は、酵素粉末状、酵素液状、適当
な担体に固定化してなる固定化酵素などの状態のものを
使用することができる。酵素を固定化する方法として
は、種々の方法があるが、例えば、多孔性の無機担体、
セルロースなどの繊維状の担体、高分子化合物からなる
担体などが挙げられ、具体的には、多孔性のセラミック
粒子、多孔性のシリカゲル粒子、ゼオライト系粒子、寒
天、アルギン酸カルシウム、キトサンなどの天然高分子
ゲル、ポリアクリル酸、ポリアクリルアミド、ポリビニ
ルアルコールなどの合成高分子ゲルなどが例示できる
が、これらに限定されるものではない。酵素の固定化方
法としては、特に制限はなく、例えば、担体に酵素液を
吸収させる方法、酵素液と担体とを混合し、酵素を吸着
固定する方法、酵素を包括固定化する方法、酵素を架橋
剤で架橋する方法等が挙げられる。The enzyme may be in the form of an enzyme powder, an enzyme liquid, or an immobilized enzyme immobilized on a suitable carrier. There are various methods for immobilizing the enzyme, for example, a porous inorganic carrier,
Examples include fibrous carriers such as cellulose, and carriers composed of polymer compounds. Specific examples include porous ceramic particles, porous silica gel particles, zeolite-based particles, agar, calcium alginate, and chitosan. Examples include, but are not limited to, molecular gels, synthetic polymer gels such as polyacrylic acid, polyacrylamide, and polyvinyl alcohol. The method of immobilizing the enzyme is not particularly limited.For example, a method of absorbing the enzyme solution in the carrier, a method of mixing the enzyme solution and the carrier to adsorb and fix the enzyme, a method of entrapping and immobilizing the enzyme, and a method of immobilizing the enzyme Examples of the method include crosslinking with a crosslinking agent.
【００１０】本発明においては、光学活性シアノヒドリ
ンの製造原料としてカルボニル化合物及び青酸（シアン
化水素酸）を用いる。ここでカルボニル化合物とは、ア
ルデヒド又はケトンをいい、具体的には、次式（Ｉ）：In the present invention, a carbonyl compound and hydrocyanic acid (hydrocyanic acid) are used as raw materials for producing optically active cyanohydrin. Here, the carbonyl compound refers to an aldehyde or a ketone, specifically, the following formula (I):
【００１１】[0011]
【化１】Ｒ1−ＣＯ−Ｒ2 （Ｉ） （式中、Ｒ1及びＲ2は、互いに異なり、それぞれ水素原
子又は炭素数２２以下の１価の炭化水素基を表し、前記
炭化水素基中、−ＣＨ2−並びに−ＣＨ3のＣＨ2はカル
ボニル基、スルホニル基、−Ｏ−又は−Ｓ−で置き換え
られていてもよく、＝ＣＨ2は＝Ｏ又は＝Ｓで置き換え
られていてもよく、また−ＣＨ2−のＣ−Ｈ、−ＣＨ3の
Ｃ−Ｈ、＞ＣＨ−のＣ−Ｈ、＝ＣＨ−のＣ−Ｈ並びに＝
ＣＨ2のＣ−Ｈは、Ｎ又はＣ−ハロゲンで置き換えられ
ていてもよく、また、Ｒ1及びＲ2は、共同して非対称の
２価の基を表してもよい。）で示される。## STR1 ## R 1 -CO-R 2 (I ) ( wherein, R 1 and R 2 are different from each other, each represent a monovalent hydrocarbon group having 22 or less hydrogen atom or a carbon, the hydrocarbon group Wherein CH 2 of —CH 2 — and —CH 3 may be replaced by a carbonyl group, a sulfonyl group, —O— or —S—, and ＝ CH 2 may be replaced by ＯO or ＳS. well, also -CH 2 - C-H, C -H in -CH 3,> CH- of C-H, = CH- C- H as well as the =
CH of CH 2 may be replaced by N or C-halogen, and R 1 and R 2 may together represent an asymmetric divalent group. ).
【００１２】前記式（Ｉ）において、炭素数２２以下の
１価の炭化水素基とは、直鎖状又は分岐状の鎖状炭化水
素基、側鎖のない又は側鎖のある単環式炭化水素基、側
鎖のない又は側鎖のある多環式炭化水素基、側鎖のない
又は側鎖のあるスピロ炭化水素基、側鎖のない又は側鎖
のある環集合構造の炭化水素基、あるいは、前記の環式
炭化水素基が置換した鎖状炭化水素基のいずれをも含
む。また、飽和な炭化水素基並びに不飽和な炭化水素基
のいずれをも含むが、不飽和な炭化水素基において、Ｃ
＝Ｃ＝Ｃのアレン構造を含む基は除く。直鎖状又は分岐
状の鎖状炭化水素基としては、例えば、飽和な鎖状炭化
水素基である、炭素数１以上の直鎖状アルキル基、炭素
数３以上の分岐状アルキル基、不飽和な鎖状炭化水素基
である、炭素数２以上の直鎖状アルケニル基、炭素数３
以上の分岐状アルケニル基、炭素数３以上の直鎖状アル
キニル基、炭素数４以上の分岐状アルキニル基、炭素数
４以上の直鎖状アルカジエニル基、炭素数５以上の分岐
状アルカジエニル基などを例示することができる。単環
式炭化水素基としては、例えば、飽和な単環式炭化水素
基である、炭素数３以上の側鎖のないシクロアルキル
基、総炭素数４以上の側鎖のあるシクロアルキル基、不
飽和な単環式炭化水素基である、炭素数４以上の側鎖の
ないシクロアルケニル基、総炭素数５以上の側鎖のある
シクロアルキニル基、炭素数５以上の側鎖のないシクロ
アルカジエニル基、総炭素数６以上の側鎖のあるシクロ
アルカジエニル基などを例示することができる。不飽和
な単環式又は多環式炭化水素基としては、芳香族炭化水
素基、例えば、フェニル基、１−ナフチル基、２−ナフ
チル基、９−アントリル基など総炭素数６〜２２の側鎖
のない芳香族基、総炭素数７以上の側鎖のある芳香族
基、更には、環集合構造の炭化水素基でもある、炭素数
１２のフェニルフェニル基、総炭素数１３以上の側鎖の
あるフェニルフェニル基を例示することができる。ま
た、多環式炭化水素基としては、炭素数６以上の側鎖の
ない縮合環式炭化水素基、総炭素数７以上の側鎖のある
縮合環式炭化水素基、炭素数７以上の側鎖のない架橋環
式炭化水素基、総炭素数８以上の側鎖のある架橋環式炭
化水素基、総炭素数９以上の側鎖のないスピロ炭化水素
基、総炭素数１０以上の側鎖のあるスピロ炭化水素基な
どを例示することができる。なお、前記の側鎖のない縮
合環式炭化水素基において、縮合する環の一つがベンゼ
ン環である場合、その総炭素数が９以上となるものを挙
げることができ、前記の側鎖のある縮合環式炭化水素基
において、縮合する環の一つがベンゼン環である場合、
その総炭素数が１０以上となるものを挙げることができ
る。環集合構造の炭化水素基としては、総炭素数６以上
の側鎖のないシクロアルキルシクロアルキル基、総炭素
数７以上の側鎖のあるシクロアルキルシクロアルキル
基、総炭素数６以上の側鎖のないシクロアルキリデンシ
クロアルキル基、総炭素数７以上の側鎖のあるシクロア
ルキリデンシクロアルキル基などを例示することができ
る。なお、これらの環式炭化水素において、側鎖のある
とは、環上に鎖状炭化水素基が置換していることを意味
する。前述する環式炭化水素基が置換した鎖状炭化水素
基としては、総炭素数７以上の側鎖のない芳香族基で置
換された直鎖状アルキル基、総炭素数８以上の側鎖のあ
る芳香族基で置換された直鎖状アルキル基、総炭素数９
以上の側鎖のない芳香族基で置換された分岐状アルキル
基、総炭素数１０以上の側鎖のある芳香族基で置換され
た分岐状アルキル基、総炭素数８以上の側鎖のない芳香
族基で置換された直鎖状アルケニル基、総炭素数９以上
の側鎖のある芳香族基で置換された直鎖状アルケニル
基、総炭素数９以上の側鎖のない芳香族基で置換された
分岐状アルケニル基、総炭素数１０以上の側鎖のある芳
香族基で置換された分岐状アルケニル基、総炭素数８以
上の側鎖のない芳香族基で置換された直鎖状アルキニル
基、総炭素数９以上の側鎖のある芳香族基で置換された
直鎖状アルキニル基、総炭素数１０以上の側鎖のない芳
香族基で置換された分岐状アルキニル基、総炭素数１１
以上の側鎖のある芳香族基で置換された分岐状アルキニ
ル基、総炭素数１０以上の側鎖のない芳香族基で置換さ
れた直鎖状アルカジエニル基、総炭素数１１以上の側鎖
のある芳香族基で置換された直鎖状アルカジエニル基、
総炭素数１１以上の側鎖のない芳香族基で置換された分
岐状アルカジエニル基、総炭素数１２以上の側鎖のある
芳香族基で置換された分岐状アルカジエニル基、総炭素
数４以上の側鎖のないシクロアルキル基で置換された直
鎖状アルキル基、総炭素数５以上の側鎖のあるシクロア
ルキル基で置換された直鎖状アルキル基、総炭素数６以
上の側鎖のないシクロアルキル基で置換された分岐状ア
ルキル基、総炭素数７以上の側鎖のあるシクロアルキル
基で置換された分岐状アルキル基、総炭素数５以上の側
鎖のないシクロアルキル基で置換された直鎖状アルケニ
ル基、総炭素数６以上の側鎖のあるシクロアルキル基で
置換された直鎖状アルケニル基、総炭素数６以上の側鎖
のないシクロアルキル基で置換された分岐状アルケニル
基、総炭素数７以上の側鎖のあるシクロアルキル基で置
換された分岐状アルケニル基、総炭素数５以上の側鎖の
ないシクロアルキル基で置換された直鎖状アルキニル
基、総炭素数６以上の側鎖のあるシクロアルキル基で置
換された直鎖状アルキニル基、総炭素数７以上の側鎖の
ないシクロアルキル基で置換された分岐状アルキニル
基、総炭素数８以上の側鎖のあるシクロアルキル基で置
換された分岐状アルキニル基、総炭素数８以上の側鎖の
ないシクロアルキル基で置換された分岐状アルカジエニ
ル基、総炭素数９以上の側鎖のあるシクロアルキル基で
置換された分岐状アルカジエニル基などを例示すること
ができる。In the above formula (I), a monovalent hydrocarbon group having 22 or less carbon atoms means a linear or branched chain hydrocarbon group, a monocyclic hydrocarbon having no side chain or having a side chain. A hydrogen group, a polycyclic hydrocarbon group having no side chain or having a side chain, a spiro hydrocarbon group having no side chain or having a side chain, a hydrocarbon group having a ring assembly structure having no side chain or having a side chain, Alternatively, it includes any of the chain hydrocarbon groups substituted by the above-mentioned cyclic hydrocarbon groups. Further, it includes both a saturated hydrocarbon group and an unsaturated hydrocarbon group.
A group containing an allene structure of ＣC ＝ C is excluded. Examples of the linear or branched chain hydrocarbon group include, for example, a saturated linear hydrocarbon group, a linear alkyl group having 1 or more carbon atoms, a branched alkyl group having 3 or more carbon atoms, and an unsaturated A linear alkenyl group having 2 or more carbon atoms,
The above branched alkenyl group, a linear alkynyl group having 3 or more carbon atoms, a branched alkynyl group having 4 or more carbon atoms, a straight-chain alkadienyl group having 4 or more carbon atoms, a branched alkadienyl group having 5 or more carbon atoms, etc. Examples can be given. Examples of the monocyclic hydrocarbon group include, for example, a saturated monocyclic hydrocarbon group, a cycloalkyl group having 3 or more carbon atoms without a side chain, a cycloalkyl group having a total of 4 or more carbon atoms and a side chain. A saturated monocyclic hydrocarbon group, a cycloalkenyl group having no side chain having 4 or more carbon atoms, a cycloalkynyl group having a side chain having 5 or more carbon atoms, a cycloalkadi group having no side chain having 5 or more carbon atoms. Examples thereof include an enyl group and a cycloalkadienyl group having a side chain having a total carbon number of 6 or more. As the unsaturated monocyclic or polycyclic hydrocarbon group, an aromatic hydrocarbon group, for example, a phenyl group, a 1-naphthyl group, a 2-naphthyl group, a 9-anthryl group or the like having 6 to 22 carbon atoms in total. An aromatic group having no chain, an aromatic group having a total number of carbon atoms of 7 or more, and a phenylphenyl group having 12 carbon atoms, which is also a hydrocarbon group having a ring assembly structure, and a side chain having a total number of 13 or more carbon atoms A phenylphenyl group having a group can be exemplified. Examples of the polycyclic hydrocarbon group include a condensed cyclic hydrocarbon group having 6 or more carbon atoms without side chains, a condensed cyclic hydrocarbon group having 7 or more total carbon atoms with side chains, and a side chain having 7 or more carbon atoms. Cross-linked cyclic hydrocarbon group having no chain, cross-linked cyclic hydrocarbon group having side chains having a total of 8 or more carbon atoms, spiro hydrocarbon group having no side chain having a total of 9 or more carbon atoms, side chain having a total of 10 or more carbon atoms Spiro hydrocarbon group having the same can be exemplified. In the above-mentioned condensed cyclic hydrocarbon group having no side chain, when one of the condensed rings is a benzene ring, those having a total carbon number of 9 or more can be mentioned. In the condensed cyclic hydrocarbon group, when one of the condensed rings is a benzene ring,
Those having a total carbon number of 10 or more can be given. Examples of the hydrocarbon group having a ring assembly structure include a cycloalkylcycloalkyl group having 6 or more total carbon atoms without side chains, a cycloalkylcycloalkyl group having 7 or more total carbon atoms and side chains having 6 or more total carbon atoms. And a cycloalkylidenecycloalkyl group having no side chain and a side chain having 7 or more carbon atoms in total. In these cyclic hydrocarbons, having a side chain means that a ring-like hydrocarbon group is substituted on the ring. Examples of the above-mentioned chain hydrocarbon group substituted by a cyclic hydrocarbon group include a straight-chain alkyl group substituted with an aromatic group having no total side chain having 7 or more carbon atoms, and a side chain having 8 or more total carbon atoms. A linear alkyl group substituted with a certain aromatic group, having 9 carbon atoms
A branched alkyl group substituted with an aromatic group having no side chain, a branched alkyl group substituted with an aromatic group having a total of 10 or more carbon atoms, and no side chain having a total of 8 or more carbon atoms A straight-chain alkenyl group substituted with an aromatic group, a straight-chain alkenyl group substituted with an aromatic group having a total number of carbon atoms of 9 or more, and an aromatic group having no total side chains of 9 or more carbon atoms. A substituted branched alkenyl group, a branched alkenyl group substituted with an aromatic group having a total number of carbon atoms of 10 or more, a straight chain substituted with an aromatic group having a total number of 8 or more carbon atoms without a side chain. Alkynyl group, linear alkynyl group substituted with an aromatic group having a total number of carbon atoms of 9 or more, branched alkynyl group substituted with an aromatic group having a total number of not less than 10 carbon atoms, total carbon number Number 11
A branched alkynyl group substituted with an aromatic group having a side chain, a linear alkadienyl group substituted with an aromatic group having no side chain having 10 or more carbon atoms, and a side chain having a total carbon atom of 11 or more. A straight-chain alkadienyl group substituted with an aromatic group,
A branched alkadienyl group substituted with an aromatic group having no side chain having 11 or more carbon atoms, a branched alkadienyl group substituted with an aromatic group having a side chain having 12 or more carbon atoms, having 4 or more carbon atoms A linear alkyl group substituted with a cycloalkyl group having no side chain, a linear alkyl group substituted with a cycloalkyl group having a total of 5 or more carbon atoms, no side chain having a total of 6 or more carbon atoms A branched alkyl group substituted with a cycloalkyl group, a branched alkyl group substituted with a cycloalkyl group having a total number of carbon atoms of 7 or more, or a substituted or unsubstituted cycloalkyl group having a total number of carbon atoms of 5 or more. Linear alkenyl group, straight-chain alkenyl group substituted by a cycloalkyl group having 6 or more total carbon atoms, branched alkenyl substituted by a cycloalkyl group having 6 or more total carbon atoms and no side chain Group, total carbon number 7 or less A branched alkenyl group substituted with a cycloalkyl group having a side chain, a linear alkynyl group substituted with a cycloalkyl group having no total side chain having 5 or more carbon atoms, and a side chain having a total carbon number of 6 or more A straight-chain alkynyl group substituted by a cycloalkyl group, a branched alkynyl group substituted by a cycloalkyl group having no total side chain having 7 or more carbon atoms, or a cycloalkyl group having a total side chain having 8 or more carbon atoms Branched alkynyl group, branched alkadienyl group substituted by unsubstituted cycloalkyl group having 8 or more total carbon atoms, branched alkadienyl group substituted by cycloalkyl group having 9 or more total carbon atoms And the like.
【００１３】なお、以下においては、側鎖のない芳香族
基、側鎖のある芳香族基、並びに、フェニルフェニル基
又は側鎖のあるフェニルフェニル基などを併せて、アリ
ール基といい、このアリール基で置換された直鎖状又は
分岐状のアルキル基をアラルキル基という。他の環式炭
化水素基に関しても、特に明記しない場合、環上に側鎖
のないものとあるものを併せて指す場合には、単にシク
ロアルキル基等の名称を用いる。鎖状炭化水素基につい
ても、直鎖状のものと分岐状のものを併せて指す場合に
は、単にアルキル基等の名称を用いる。In the following, an aromatic group having no side chain, an aromatic group having a side chain, and a phenylphenyl group or a phenylphenyl group having a side chain are collectively referred to as an aryl group. A linear or branched alkyl group substituted with a group is called an aralkyl group. Regarding other cyclic hydrocarbon groups, unless otherwise specified, in the case of referring to those having no side chain on the ring and those having a side chain, simply use the name such as cycloalkyl group. When a chain hydrocarbon group refers to both a straight-chain hydrocarbon group and a branched hydrocarbon group, simply use a name such as an alkyl group.
【００１４】前記炭化水素基中、−ＣＨ2−がカルボニ
ル基、スルホニル基、−Ｏ−又は−Ｓ−で置き換えられ
ると、それぞれケトン、スルホン、エーテル又はチオエ
ーテルの構造が導入され、−ＣＨ3の−ＣＨ2−がカルボ
ニル基、−Ｏ−又は−Ｓ−で置き換わると、それぞれホ
ルミル基（アルデヒド）、水酸基又はメルカプト基に変
わり、あるいは、末端の＝ＣＨ2が＝Ｏ又は＝Ｓに置き
換わると、ケトン、チオケトンの構造が導入されること
を意味し、また、−ＣＨ2−のＣ−ＨがＮに変わると、
−ＮＨ−となり、＞ＣＨ−のＣ−ＨがＮに変わると、＞
Ｎ−となり、＝ＣＨ−のＣ−ＨがＮに変わると、＝Ｎ−
となり、末端の−ＣＨ3のＣ−ＨがＮに変わると、−Ｎ
Ｈ2が導入され、＝ＣＨ2のＣ−ＨがＮに変わると、＝Ｎ
Ｈとなる。また、−ＣＨ3、−ＣＨ2−、＝ＣＨ−、≡Ｃ
Ｈ又は＞ＣＨ−のＣ−ＨがＣ−ハロゲンで置き換えられ
ると、当該炭素上へハロゲン原子を置換することにな
る。なお、炭素鎖中における−Ｏ−、−Ｓ−、Ｎへの置
き換えは、当該炭化水素基に対する、それぞれオキサ置
換、チア置換、アザ置換に当たり、例えば、炭化水素環
の環の骨格炭素で起こると、炭化水素環のそれぞれ含酸
素複素環、含硫黄複素環、含窒素複素環への変換とな
る。該炭化水素基中、ＣＨ2並びにＣ−Ｈにおける置き
換えは、それぞれ独立に行われてよく、加えて、前記の
置き換えを行った後、なお当該炭素上にＣＨ2又はＣ−
Ｈが残存する際には、更に置き換えがなされてもよい。
更には、前記の置き換えにより、−ＣＨ2−ＣＨ3の−Ｃ
Ｏ−Ｏ−Ｈ；カルボン酸構造への変換などもなされる。When -CH 2 -is replaced by a carbonyl group, a sulfonyl group, -O- or -S- in the above-mentioned hydrocarbon group, a ketone, sulfone, ether or thioether structure is introduced, respectively, and -CH 3- When —CH 2 — is replaced by a carbonyl group, —O— or —S—, a formyl group (aldehyde), a hydroxyl group or a mercapto group is obtained, respectively, or when the terminal ＣＨCH 2 is replaced by ＯO or = S, It means that a ketone or thioketone structure is introduced, and when CH of —CH 2 — is changed to N,
-NH-, and when CH of CH- is changed to N,>
N-, and when CH of = CH- is changed to N, = N-
Next, the C-H in -CH 3 terminal is changed to N, -N
H 2 was introduced, = the CH of CH 2 changes to N, = N
H. Also, -CH 3 , -CH 2- , = CH-, ΔC
When CH of H or> CH- is replaced by C-halogen, a halogen atom is substituted on the carbon. The substitution with -O-, -S-, and N in the carbon chain corresponds to oxa substitution, thia substitution, and aza substitution, respectively, with respect to the hydrocarbon group, for example, when it occurs at a skeletal carbon of a hydrocarbon ring. , And the hydrocarbon ring is converted into an oxygen-containing heterocycle, a sulfur-containing heterocycle, and a nitrogen-containing heterocycle, respectively. In the hydrocarbon group, substitution at CH 2 and C—H may be performed independently of each other. In addition, after the above substitution, CH 2 or C—
When H remains, it may be further replaced.
Further, by the above-mentioned substitution, -C 2 -CH 3 -C
O—O—H; conversion to a carboxylic acid structure is also performed.
【００１５】本明細書において、ハロゲン原子とは、フ
ッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子を指すが、
フッ素原子、塩素原子、臭素原子が好ましい。従って、
前記炭化水素基としては、鎖状炭化水素基並びに環式炭
化水素基など環構造を有する炭化水素基のいずれをも選
択でき、例えば、飽和鎖状炭化水素基である直鎖状又は
分岐状のアルキル基、不飽和鎖状炭化水素基である直鎖
状又は分岐状のアルケニル基、直鎖状又は分岐状のアル
キニル基、直鎖状又は分岐状のアルカジエニル基など、
飽和な環式炭化水素基であるシクロアルキル基、不飽和
な環式炭化水素基であるシクロアルケニル基、シクロア
ルキニル基、シクロアルカジエニル基など、芳香族炭化
水素基であるアリール基、アラルキル基、アリールアル
ケニル基などが挙げられる。In the present specification, a halogen atom refers to a fluorine atom, a chlorine atom, a bromine atom and an iodine atom.
Fluorine, chlorine and bromine are preferred. Therefore,
As the hydrocarbon group, any of a chain hydrocarbon group and a hydrocarbon group having a ring structure such as a cyclic hydrocarbon group can be selected, for example, a linear or branched saturated hydrocarbon group. Alkyl groups, linear or branched alkenyl groups that are unsaturated chain hydrocarbon groups, linear or branched alkynyl groups, linear or branched alkadienyl groups,
Aryl and aralkyl groups that are aromatic hydrocarbon groups such as cycloalkyl groups that are saturated cyclic hydrocarbon groups, cycloalkenyl groups, cycloalkynyl groups, and cycloalkadienyl groups that are unsaturated cyclic hydrocarbon groups And an arylalkenyl group.
【００１６】更に詳しくいえば、直鎖状又は分岐状のア
ルキル基としては、例えばメチル基、エチル基、プロピ
ル基、イソプロピル基、ブチル基、１−メチルプロピル
基、ペンチル基、１−メチルブチル基、ヘキシル基、１
−メチルペンチル基、ヘプチル基、１−メチルヘキシル
基、１−エチルペンチル基、オクチル基、ノニル基、デ
シル基、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル基、テ
トラデシル基、２−メチルプロピル基、２−メチルブチ
ル基、３−メチルブチル基、２−メチルペンチル基、３
−メチルペンチル基、４−メチルペンチル基、メチルヘ
キシル基、メチルヘプチル基、メチルオクチル基、メチ
ルノニル基、１，１−ジメチルエチル基、１，１−ジメ
チルプロピル基、２，６−ジメチルヘプチル基、３，７
−ジメチルオクチル基、２−エチルヘキシル基など、シ
クロアルキルアルキル基としては、シクロペンチルメチ
ル基、シクロヘキシルメチル基など、シクロアルキル基
としては、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロ
ペンチル基、メチルシクロペンチル基、シクロヘキシル
基、メチルシクロヘキシル基、シクロヘプチル基、シク
ロオクチル基など、ビシクロアルキル基としては、ノル
ボルニル基、ビシクロ［２．２．２］オクチル基、アダ
マンチル基などが挙げられる。直鎖状又は分岐状のアル
ケニル基としては、例えばビニル基、アリル基、クロチ
ル基（２−ブテニル基）、イソプロペニル基（１−メチ
ルビニル基）など、シクロアルケニル基又はシクロアル
カジエニル基としては、シクロペンテニル基、シクロペ
ンタジエニル基、シクロヘキセニル基、シクロヘキサン
ジエニル基などが挙げられる。直鎖状又は分岐状のアル
キニル基としては、例えばエチニル基、プロピニル基、
ブチニル基などが挙げられる。アリール基としては、例
えばフェニル基、１−ナフチル基、２−ナフチル基、２
−フェニルフェニル基、３−フェニルフェニル基、４−
フェニルフェニル基、９−アントリル基、メチルフェニ
ル基、ジメチルフェニル基、トリメチルフェニル基、エ
チルフェニル基、メチルエチルフェニル基、ジエチルフ
ェニル基、プロピルフェニル基、ブチルフェニル基など
が挙げられる。アラルキル基としては、例えばベンジル
基、１−ナフチルメチル基、２−ナフチルメチル基、フ
ェネチル基（２−フェニルエチル基）、１−フェニルエ
チル基、フェニルプロピル基、フェニルブチル基、フェ
ニルペンチル基、フェニルヘキシル基、メチルベンジル
基、メチルフェネチル基、ジメチルベンジル基、ジメチ
ルフェネチル基、トリメチルベンジル基、エチルベンジ
ル基、ジエチルベンジル基などが挙げられる。アリール
アルケニル基としては、例えばスチリル基、メチルスチ
リル基、エチルスチリル基、ジメチルスチリル基、３−
フェニル−２−プロペニル基などが挙げられる。More specifically, examples of the linear or branched alkyl group include a methyl group, an ethyl group, a propyl group, an isopropyl group, a butyl group, a 1-methylpropyl group, a pentyl group, a 1-methylbutyl group, Hexyl group, 1
-Methylpentyl, heptyl, 1-methylhexyl, 1-ethylpentyl, octyl, nonyl, decyl, undecyl, dodecyl, tridecyl, tetradecyl, 2-methylpropyl, 2-methylbutyl Group, 3-methylbutyl group, 2-methylpentyl group, 3
-Methylpentyl group, 4-methylpentyl group, methylhexyl group, methylheptyl group, methyloctyl group, methylnonyl group, 1,1-dimethylethyl group, 1,1-dimethylpropyl group, 2,6-dimethylheptyl group, 3,7
-Dimethyloctyl group, 2-ethylhexyl group and the like, cycloalkylalkyl groups such as cyclopentylmethyl group and cyclohexylmethyl group, and cycloalkyl groups such as cyclopropyl group, cyclobutyl group, cyclopentyl group, methylcyclopentyl group and cyclohexyl group; Examples of the bicycloalkyl group such as a methylcyclohexyl group, a cycloheptyl group, and a cyclooctyl group include a norbornyl group, a bicyclo [2.2.2] octyl group, and an adamantyl group. Examples of the linear or branched alkenyl group include a cycloalkenyl group and a cycloalkadienyl group such as a vinyl group, an allyl group, a crotyl group (2-butenyl group), and an isopropenyl group (1-methylvinyl group). Examples thereof include a cyclopentenyl group, a cyclopentadienyl group, a cyclohexenyl group, a cyclohexanedienyl group and the like. Examples of the linear or branched alkynyl group include an ethynyl group, a propynyl group,
Butynyl group and the like. Examples of the aryl group include a phenyl group, a 1-naphthyl group, a 2-naphthyl group,
-Phenylphenyl group, 3-phenylphenyl group, 4-
Examples include a phenylphenyl group, a 9-anthryl group, a methylphenyl group, a dimethylphenyl group, a trimethylphenyl group, an ethylphenyl group, a methylethylphenyl group, a diethylphenyl group, a propylphenyl group, and a butylphenyl group. Examples of the aralkyl group include benzyl, 1-naphthylmethyl, 2-naphthylmethyl, phenethyl (2-phenylethyl), 1-phenylethyl, phenylpropyl, phenylbutyl, phenylpentyl, and phenyl. Examples include a hexyl group, a methylbenzyl group, a methylphenethyl group, a dimethylbenzyl group, a dimethylphenethyl group, a trimethylbenzyl group, an ethylbenzyl group, and a diethylbenzyl group. Examples of the arylalkenyl group include a styryl group, a methylstyryl group, an ethylstyryl group, a dimethylstyryl group,
And a phenyl-2-propenyl group.
【００１７】前記炭化水素基中のＣＨ2がカルボニル
基、スルホニル基、Ｏ又はＳで、又はＣ−ＨがＮ又はＣ
−ハロゲンで置き換えられた基としては、ケトン、アル
デヒド、カルボン酸、スルホン、エーテル、チオエーテ
ル、アミン、アルコール、チオール、ハロゲン、複素環
（例えば、含酸素複素環、含硫黄複素環、含窒素複素
環）などの構造を一つ以上含む基が挙げられる。なお、
含酸素複素環、含硫黄複素環、含窒素複素環とは、環式
炭化水素基の環骨格の炭素がそれぞれ酸素、硫黄、窒素
で置き換わるものを意味し、更には、これらヘテロ原子
置換が二種以上ある複素環であってもよい。前記の置換
を有する炭化水素基としては、例えば、ケトン構造のア
セチルメチル基、アセチルフェニル基；スルホン構造の
メタンスルホニルメチル基；エーテル構造のメトキシメ
チル基、メトキシエチル基、エトキシエチル基、メトキ
シプロピル基、ブトキシエチル基、エトキシエトキシエ
チル基、メトキシフェニル基、ジメトキシフェニル基、
フェノキシメチル基；チオエーテル構造のメチルチオメ
チル基、メチルチオフェニル基；アミン構造のアミノメ
チル基、２−アミノエチル基、２−アミノプロピル基、
３−アミノプロピル基、２，３−ジアミノプロピル基、
２−アミノブチル基、３−アミノブチル基、４−アミノ
ブチル基、２，３−ジアミノブチル基、２，４−ジアミ
ノブチル基、３，４−ジアミノブチル基、２，３，４−
トリアミノブチル基、メチルアミノメチル基、ジメチル
アミノメチル基、メチルアミノエチル基、プロピルアミ
ノメチル基、シクロペンチルアミノメチル基、アミノフ
ェニル基、ジアミノフェニル基、アミノメチルフェニル
基；含酸素複素環のテトラヒドロフラニル基、テトラヒ
ドロピラニル基、モルホリルエチル基；含酸素複素芳香
環のフリル基、フルフリル基、ベンゾフリル基、ベンゾ
フルフリル基；含硫黄複素芳香環のチエニル基；含窒素
複素芳香環のピロリル基、イミダゾリル基、オキサゾリ
ル基、チアジアゾリル基、ピリジル基、ピリミジニル
基、ピリダジニル基、ピラジニル基、テトラジニル基、
キノリル基、イソキノリル基、ピリジルメチル基；アル
コール構造の２−ヒドロキシエチル基、２−ヒドロキシ
プロピル基、３−ヒドロキシプロピル基、２，３−ジヒ
ドロキシプロピル基、２−ヒドロキシブチル基、３−ヒ
ドロキシブチル基、４−ヒドロキシブチル基、２，３−
ジヒドロキシブチル基、２，４−ジヒドロキシブチル
基、３，４−ジヒドロキシブチル基、２，３，４−トリ
ヒドロキシブチル基、ヒドロキシフェニル基、ジヒドロ
キシフェニル基、ヒドロキシメチルフェニル基、ヒドロ
キシエチルフェニル基；チオール構造の２−メルカプト
エチル基、２−メルカプトプロピル基、３−メルカプト
プロピル基、２，３−ジメルカプトプロピル基、２−メ
ルカプトブチル基、３−メルカプトブチル基、４−メル
カプトブチル基、メルカプトフェニル基；ハロゲン化炭
化水素基である２−クロロエチル基、２−クロロプロピ
ル基、３−クロロプロピル基、２−クロロブチル基、３
−クロロブチル基、４−クロロブチル基、フルオロフェ
ニル基、クロロフェニル基、ブロモフェニル基、ジフル
オロフェニル基、ジクロロフェニル基、ジブロモフェニ
ル基、クロロフルオロフェニル基、トリフルオロフェニ
ル基、トリクロロフェニル基、フルオロメチルフェニル
基、トリフルオロメチルフェニル基；アミン構造とアル
コール構造を有する２−アミノ−３−ヒドロキシプロピ
ル基、３−アミノ−２−ヒドロキシプロピル基、２−ア
ミノ−３−ヒドロキシブチル基、３−アミノ−２−ヒド
ロキシブチル基、２−アミノ−４−ヒドロキシブチル
基、４−アミノ−２−ヒドロキシブチル基、３−アミノ
−４−ヒドロキシブチル基、４−アミノ−３−ヒドロキ
シブチル基、２，４−ジアミノ−３−ヒドロキシブチル
基、３−アミノ−２，４−ジヒドロキシブチル基、２，
３−ジアミノ−４−ヒドロキシブチル基、４−アミノ−
２，３−ジヒドロキシブチル基、３，４−ジアミノ−２
−ヒドロキシブチル基、２−アミノ−３，４−ジヒドロ
キシブチル基、アミノヒドロキシフェニル基；ハロゲン
と水酸基で置換された炭化水素基であるフルオロヒドロ
キシフェニル基、クロロヒドロキシフェニル基；カルボ
ン構造のカルボキシフェニル基などが挙げられる。CH 2 in the hydrocarbon group is a carbonyl group, a sulfonyl group, O or S, or CH is N or C
-As the group replaced with halogen, ketone, aldehyde, carboxylic acid, sulfone, ether, thioether, amine, alcohol, thiol, halogen, heterocycle (for example, oxygen-containing heterocycle, sulfur-containing heterocycle, nitrogen-containing heterocycle) And a group containing one or more structures. In addition,
The term "oxygen-containing heterocycle, sulfur-containing heterocycle and nitrogen-containing heterocycle" means those in which the carbon of the ring skeleton of the cyclic hydrocarbon group is replaced with oxygen, sulfur or nitrogen, respectively. There may be more than one heterocycle. Examples of the substituted hydrocarbon group include an acetylmethyl group and an acetylphenyl group having a ketone structure; a methanesulfonylmethyl group having a sulfone structure; a methoxymethyl group, a methoxyethyl group, an ethoxyethyl group, and a methoxypropyl group having an ether structure. , Butoxyethyl group, ethoxyethoxyethyl group, methoxyphenyl group, dimethoxyphenyl group,
Phenoxymethyl group; thioether structure methylthiomethyl group, methylthiophenyl group; amine structure aminomethyl group, 2-aminoethyl group, 2-aminopropyl group,
3-aminopropyl group, 2,3-diaminopropyl group,
2-aminobutyl group, 3-aminobutyl group, 4-aminobutyl group, 2,3-diaminobutyl group, 2,4-diaminobutyl group, 3,4-diaminobutyl group, 2,3,4-
Triaminobutyl, methylaminomethyl, dimethylaminomethyl, methylaminoethyl, propylaminomethyl, cyclopentylaminomethyl, aminophenyl, diaminophenyl, aminomethylphenyl; oxygen-containing heterocyclic tetrahydrofuranyl Group, tetrahydropyranyl group, morpholylethyl group; furyl group, furfuryl group, benzofuryl group, benzofurfuryl group of oxygen-containing heteroaromatic ring; thienyl group of sulfur-containing heteroaromatic ring; pyrrolyl group of nitrogen-containing heteroaromatic ring, imidazolyl group , Oxazolyl group, thiadiazolyl group, pyridyl group, pyrimidinyl group, pyridazinyl group, pyrazinyl group, tetrazinyl group,
Quinolyl group, isoquinolyl group, pyridylmethyl group; 2-hydroxyethyl group, 2-hydroxypropyl group, 3-hydroxypropyl group, 2,3-dihydroxypropyl group, 2-hydroxybutyl group, 3-hydroxybutyl group having an alcohol structure , 4-hydroxybutyl group, 2,3-
Dihydroxybutyl, 2,4-dihydroxybutyl, 3,4-dihydroxybutyl, 2,3,4-trihydroxybutyl, hydroxyphenyl, dihydroxyphenyl, hydroxymethylphenyl, hydroxyethylphenyl; thiol 2-mercaptoethyl group, 2-mercaptopropyl group, 3-mercaptopropyl group, 2,3-dimercaptopropyl group, 2-mercaptobutyl group, 3-mercaptobutyl group, 4-mercaptobutyl group, mercaptophenyl group A halogenated hydrocarbon group, 2-chloroethyl group, 2-chloropropyl group, 3-chloropropyl group, 2-chlorobutyl group, 3
-Chlorobutyl group, 4-chlorobutyl group, fluorophenyl group, chlorophenyl group, bromophenyl group, difluorophenyl group, dichlorophenyl group, dibromophenyl group, chlorofluorophenyl group, trifluorophenyl group, trichlorophenyl group, fluoromethylphenyl group, Trifluoromethylphenyl group; 2-amino-3-hydroxypropyl group, 3-amino-2-hydroxypropyl group, 2-amino-3-hydroxybutyl group, 3-amino-2-hydroxyl having an amine structure and an alcohol structure Butyl group, 2-amino-4-hydroxybutyl group, 4-amino-2-hydroxybutyl group, 3-amino-4-hydroxybutyl group, 4-amino-3-hydroxybutyl group, 2,4-diamino-3 -Hydroxybutyl group, 3-amino-2 4-dihydroxy-butyl group, 2,
3-diamino-4-hydroxybutyl group, 4-amino-
2,3-dihydroxybutyl group, 3,4-diamino-2
-Hydroxybutyl group, 2-amino-3,4-dihydroxybutyl group, aminohydroxyphenyl group; fluorohydroxyphenyl group, chlorohydroxyphenyl group which is a hydrocarbon group substituted by halogen and hydroxyl group; carboxyphenyl group having a carboxylic structure And the like.
【００１８】Ｒ1及びＲ2で表される非対称の２価の基と
しては、特に制限はなく、例えば、ノルボルナン−２−
イリデン、２−ノルボルネン−５−イリデンが挙げられ
る。前記式（Ｉ）で示されるカルボニル化合物として
は、例えば、ベンズアルデヒド、ｍ−フェノキシベンズ
アルデヒド、ｐ−メチルベンズアルデヒド、ｏ−クロロ
ベンズアルデヒド、ｍ−クロロベンズアルデヒド、ｐ−
クロロベンズアルデヒド、ｍ−ニトロベンズアルデヒ
ド、３，４−メチレンジオキシベンズアルデヒド、２，
３−メチレンジオキシベンズアルデヒド、フェニルアセ
トアルデヒド、フルフラール等の芳香族アルデヒド；ア
セトアルデヒド、ブチルアルデヒド、イソブチルアルデ
ヒド、バレルアルデヒド、シクロヘキサンアルデヒド等
の脂肪族アルデヒド；エチルメチルケトン、ブチルメチ
ルケトン、メチルプロピルケトン、イソプロピルメチル
ケトン、メチルペンチルケトン、メチル（２−メチルプ
ロピル）ケトン、メチル（３−メチルブチル）ケトン等
の飽和脂肪族ケトン；メチル（２−プロペニル）ケト
ン、（３−ブテニル）メチルケトン等の不飽和脂肪族ケ
トン；（３−クロロプロピル）メチルケトン等のアルキ
ル（ハロアルキル）ケトン；２−（アルコキシカルボニ
ルアミノ）−３−シクロヘキシルプロピオンアルデヒド
等の２−（保護アミノ）アルデヒド；３−メチルチオプ
ロピオンアルデヒド等のアルキルチオ脂肪族アルデヒド
が挙げられる。The asymmetric divalent group represented by R 1 and R 2 is not particularly limited. For example, norbornane-2-
Ylidene and 2-norbornene-5-ylidene. Examples of the carbonyl compound represented by the formula (I) include benzaldehyde, m-phenoxybenzaldehyde, p-methylbenzaldehyde, o-chlorobenzaldehyde, m-chlorobenzaldehyde,
Chlorobenzaldehyde, m-nitrobenzaldehyde, 3,4-methylenedioxybenzaldehyde, 2,
Aromatic aldehydes such as 3-methylenedioxybenzaldehyde, phenylacetaldehyde, and furfural; aliphatic aldehydes such as acetaldehyde, butyraldehyde, isobutyraldehyde, valeraldehyde, and cyclohexanealdehyde; ethyl methyl ketone, butyl methyl ketone, methyl propyl ketone, and isopropyl methyl Saturated aliphatic ketones such as ketone, methylpentyl ketone, methyl (2-methylpropyl) ketone and methyl (3-methylbutyl) ketone; unsaturated aliphatic ketones such as methyl (2-propenyl) ketone and (3-butenyl) methyl ketone Alkyl (haloalkyl) ketones such as (3-chloropropyl) methyl ketone; 2- (protected amino groups such as 2- (alkoxycarbonylamino) -3-cyclohexylpropionaldehyde ) Aldehyde; alkylthio aliphatic aldehydes such as 3-methylthio propionaldehyde and the like.
【００１９】本発明においては、青酸としては安定剤と
して酸性物質を含む青酸を用いる。前記安定剤とは、大
量生産された青酸の重合などによる変質を抑制し、品質
を安定に保持するために添加されている物質で亜硫酸、
硫酸などの酸性物質を意味する。本発明に用いる安定剤
として酸性物質を含む青酸としては、青酸を１．５Ｍの
濃度で水と実質的に混和しない有機溶媒に溶解した溶液
と純水とを、有機相と水相に二相分離する比率で混合し
た後、静置して得られる水相のｐＨが５以下を示すもの
を意味し、当該ｐＨが４以下を示すものに本発明の方法
を適用することが好ましい。In the present invention, hydrocyanic acid containing an acidic substance is used as a stabilizer as hydrocyanic acid. The stabilizer is a substance that is added in order to suppress deterioration due to polymerization of mass-produced hydrocyanic acid and the like and to maintain the quality stably.
It means acidic substances such as sulfuric acid. As the hydrocyanic acid containing an acidic substance as a stabilizer used in the present invention, pure water and a solution in which hydrocyanic acid is dissolved in an organic solvent that is substantially immiscible with water at a concentration of 1.5 M, and two phases of an organic phase and an aqueous phase are used. It means that the aqueous phase obtained by mixing at a ratio that separates and then standing still has a pH of 5 or less, and the method of the present invention is preferably applied to those having a pH of 4 or less.
【００２０】本発明における、青酸に含まれる安定剤の
酵素に対する阻害効果を低減させる方法としては、例え
ば、前記安定剤として酸性物質を含む青酸を一旦水と実
質的に混和しない有機溶媒に溶解して、青酸有機溶媒溶
液を調製し、次いで当該青酸有機溶媒溶液に対して緩衝
液を飽和量以上加え、混合した後、有機相を回収し、反
応に用いる方法；アルカリ性水溶液又はｐＨ４〜７で緩
衝能を有する水性緩衝液を当該青酸に添加して、ｐＨを
５〜６の間になるように調整する方法が挙げられる。In the present invention, a method for reducing the inhibitory effect of a stabilizer contained in hydrocyanic acid on an enzyme is exemplified by dissolving hydrocyanic acid containing an acidic substance as the stabilizer in an organic solvent which is substantially immiscible with water. To prepare a hydrocyanic acid organic solvent solution, and then add a buffer solution to the hydrocyanic acid organic solvent solution in a saturated amount or more, and after mixing, collect the organic phase and use it for the reaction; alkaline aqueous solution or buffering with pH 4 to 7 An aqueous buffer solution having a function is added to the hydrocyanic acid to adjust the pH to be between 5 and 6.
【００２１】前記安定剤の酵素に対する阻害効果を低減
させる方法の好ましい手順の一例を以下に示す。 １．通常、水と実質的に混和しない有機溶媒（既に水又
は水性緩衝液で飽和されていてもよい）に安定剤を含む
青酸を所定量添加する。 ２．緩衝液を前記溶液の飽和溶解量より過剰に添加、混
合し、静置する。 ３．二相分離した有機相を分離し、反応に用いる。An example of a preferred procedure for reducing the inhibitory effect of the stabilizer on the enzyme is shown below. 1. Usually, a certain amount of hydrocyanic acid containing a stabilizer is added to an organic solvent which is substantially immiscible with water (which may be already saturated with water or an aqueous buffer). 2. The buffer is added in excess of the saturated amount of the solution, mixed and allowed to stand. 3. The organic phase separated into two phases is separated and used for the reaction.
【００２２】以上のような極めて簡単な方法によって工
業生産された青酸に含まれる安定剤の悪影響を効果的に
除去することが可能になる。シアン化水素の供給方法と
しては液体として供給する方法、気体として供給する方
法のいずれをも採用することができる。By the above-described very simple method, it is possible to effectively remove the adverse effect of the stabilizer contained in industrially produced hydrocyanic acid. As a method for supplying hydrogen cyanide, either a method for supplying a liquid or a method for supplying a gas can be adopted.
【００２３】前記の安定剤の酵素に対する阻害効果を低
減させる方法に用いる緩衝液とは、酵素活性の最適ｐＨ
付近において緩衝能を発揮する緩衝液を意味し、具体的
には、クエン酸、グルタル酸、リンゴ酸、マロン酸、ｏ
−フタル酸、コハク酸などの塩等が挙げられ、通常ｐＨ
が４〜７、好ましくは５〜７の範囲のものが用いられ
る。緩衝液の濃度は、所定量の青酸を溶解した有機溶媒
と混合した後の水相のｐＨを５〜７の範囲に維持するこ
とができる濃度が好ましい。The buffer used in the method for reducing the inhibitory effect of the stabilizer on the enzyme is defined as the optimum pH of the enzyme activity.
A buffer that exhibits buffering capacity in the vicinity, specifically, citric acid, glutaric acid, malic acid, malonic acid, o
-Salts such as phthalic acid and succinic acid;
Is in the range of 4 to 7, preferably 5 to 7. The concentration of the buffer is preferably a concentration that can maintain the pH of the aqueous phase in a range of 5 to 7 after being mixed with an organic solvent in which a predetermined amount of hydrocyanic acid is dissolved.
【００２４】本発明においては、反応原料の濃度を高
め、生産性を高めるために、反応溶媒として、水と実質
的に混和しない有機溶媒を用いる。ここで、「水と実質
的に混和しない有機溶媒」とは、水に任意の割合で溶解
する溶媒を除く有機溶媒を意味する。有機溶媒として
は、水と実質的に混和せず、基質及び生成物を充分に溶
解し、酵素反応に悪影響を与えないものであれば特に制
限なく用いることができる。このような有機溶媒は、原
料のアルデヒド又はケトンの物性、生成物であるシアノ
ヒドリンの物性に応じて適宜選択することができる。In the present invention, an organic solvent that is substantially immiscible with water is used as the reaction solvent in order to increase the concentration of the reaction raw materials and increase the productivity. Here, the “organic solvent that is substantially immiscible with water” means an organic solvent excluding a solvent that dissolves in water at an arbitrary ratio. Any organic solvent may be used without particular limitation as long as it is substantially immiscible with water, sufficiently dissolves the substrate and the product, and does not adversely affect the enzymatic reaction. Such an organic solvent can be appropriately selected according to the physical properties of the starting aldehyde or ketone and the physical properties of the product cyanohydrin.
【００２５】水と実質的に混和しない有機溶媒として
は、具体的には、ハロゲン化されていてもよい炭化水素
系溶媒（例えば、直鎖状、分岐状又は環状の飽和又は不
飽和脂肪族炭化水素、芳香族炭化水素）、例えば、ペン
タン、ヘキサン、シクロヘキサン、ベンゼン、トルエ
ン、キシレン、塩化メチレン、クロロホルムなど；ハロ
ゲン化されていてもよいアルコール系溶媒（例えば、直
鎖状、分岐状又は環状の飽和又は不飽和脂肪族アルコー
ル、アラルキルアルコール）、例えば、ｎ−ブタノー
ル、イソブタノール、ｔ−ブタノール、ヘキサノール、
シクロヘキサノール、ｎ−アミルアルコールなど；ハロ
ゲン化されていてもよいエーテル系溶媒（例えば、直鎖
状、分岐状又は環状の飽和又は不飽和脂肪族エーテル、
芳香族エーテル）、例えば、ジエチルエーテル、ジプロ
ピルエーテル、ジイソプロピルエーテル、ジブチルエー
テル、ｔ−ブチルメチルエーテル、ジメトキシエタンな
ど；ハロゲン化されていてもよいエステル系溶媒（例え
ば、直鎖状、分岐状又は環状の飽和又は不飽和脂肪族エ
ステル、芳香族エステル）、例えば、ギ酸メチル、酢酸
メチル、酢酸エチル、酢酸ブチル、プロピオン酸メチル
等が挙げられ、これらを単独で用いてもまた２種以上を
混合して用いてもよい。Examples of the organic solvent which is substantially immiscible with water include hydrocarbon solvents which may be halogenated (for example, linear, branched or cyclic saturated or unsaturated aliphatic hydrocarbons). Hydrogen, aromatic hydrocarbon), for example, pentane, hexane, cyclohexane, benzene, toluene, xylene, methylene chloride, chloroform and the like; optionally halogenated alcoholic solvents (for example, linear, branched or cyclic) Saturated or unsaturated aliphatic alcohols, aralkyl alcohols), for example, n-butanol, isobutanol, t-butanol, hexanol,
Cyclohexanol, n-amyl alcohol and the like; ether solvents which may be halogenated (for example, linear, branched or cyclic saturated or unsaturated aliphatic ethers,
Aromatic ethers), for example, diethyl ether, dipropyl ether, diisopropyl ether, dibutyl ether, t-butyl methyl ether, dimethoxyethane and the like; optionally halogenated ester solvents (for example, linear, branched or Cyclic saturated or unsaturated aliphatic esters and aromatic esters), for example, methyl formate, methyl acetate, ethyl acetate, butyl acetate, methyl propionate and the like. These may be used alone or in combination of two or more. You may use it.
【００２６】前記有機溶媒は、水又は水性緩衝液で飽和
されていてもよい。また、更に過剰の水又は水性緩衝液
を加えて有機溶媒相と水相との二相系を形成する溶液状
態で使用してもよい。前記の有機溶媒を水又は水性緩衝
液で飽和する方法としては、特に制限はないが、例え
ば、前記の有機溶媒と水又は水性緩衝液を二相を形成す
る割合で混合し、暫く撹拌した後、静置し、その有機層
を用いる方法が挙げられる。ここで用いる水性緩衝液と
しては、特に制限はないが、例えば、前記の緩衝液が挙
げられる。The organic solvent may be saturated with water or an aqueous buffer. Further, it may be used in a solution state in which an excess of water or an aqueous buffer is added to form a two-phase system of an organic solvent phase and an aqueous phase. The method for saturating the organic solvent with water or an aqueous buffer is not particularly limited, but, for example, after mixing the organic solvent and water or the aqueous buffer at a ratio forming two phases, stirring for a while And leaving the organic layer to stand. The aqueous buffer used here is not particularly limited, and examples thereof include the above-mentioned buffers.
【００２７】本発明は、工業的に生産され、安定剤を含
む青酸を光学活性シアノヒドリンの合成反応に用いるに
あたり、当該青酸に含まれる安定剤の酵素に対する悪影
響を低減させる方法を提供するものであり、当該青酸を
使用する形態については制限しない。即ち、本発明が提
供する安定剤の悪影響を低減する方法を実施して得られ
る青酸は、水・有機溶媒混合系、有機溶媒系、有機溶媒
水二相系、固定化酵素を使う反応系などのいずれの反応
系においても効果的に使用することができる。The present invention provides a method for reducing the adverse effect of a stabilizer contained in a hydrocyanic acid on an enzyme when an industrially produced hydrocyanic acid containing a stabilizer is used in a synthesis reaction of optically active cyanohydrin. The form in which the hydrocyanic acid is used is not limited. That is, hydrocyanic acid obtained by performing the method for reducing the adverse effect of the stabilizer provided by the present invention is a water-organic solvent mixed system, an organic solvent system, an organic solvent aqueous two-phase system, a reaction system using an immobilized enzyme, and the like. Can be effectively used in any of the above reaction systems.
【００２８】固定化酵素及び基質の使用量、反応温度
は、用いる基質に応じて適宜決定される。通常、固定化
酵素の使用量は基質であるカルボニル化合物５０mmolに
対して１〜１０００単位、好ましくは１０〜５００単位
である。基質の濃度は、カルボニル化合物の場合は通常
０.１〜１０mol/Lの範囲に設定し、シアン化水素は用い
るカルボニル化合物に対して１〜５倍モル、好ましくは
１.１〜３倍モルの濃度で添加する。本反応は基質濃度
によって酵素活性及び反応速度が変化するので、用いる
カルボニル化合物の種類に応じて適宜決定する。反応時
間は、基質であるカルボニル化合物の転換率が８０％以
上、好ましくは９０％以上に達するまでの時間が適当で
あるが、この限りではない。反応温度は酵素の活性が十
分発揮される温度であればよく、通常０〜４０℃、好ま
しくは４〜３０℃である。The amounts of the immobilized enzyme and the substrate and the reaction temperature are appropriately determined depending on the substrate used. Usually, the amount of the immobilized enzyme to be used is 1-1000 units, preferably 10-500 units, per 50 mmol of the carbonyl compound as the substrate. The concentration of the substrate is usually set in the range of 0.1 to 10 mol / L in the case of a carbonyl compound, and hydrogen cyanide is used at a concentration of 1 to 5 times, preferably 1.1 to 3 times the mol of the carbonyl compound used. Added. In this reaction, the enzyme activity and the reaction rate change depending on the substrate concentration, and thus the reaction is appropriately determined according to the type of the carbonyl compound used. The reaction time is suitably, but not limited to, the time required for the conversion of the carbonyl compound as the substrate to reach 80% or more, preferably 90% or more. The reaction temperature may be a temperature at which the activity of the enzyme is sufficiently exhibited, and is usually 0 to 40 ° C, preferably 4 to 30 ° C.
【００２９】本発明方法によって生成された光学活性シ
アノヒドリンは、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬ
Ｃ）などによって、測定、定量することができ、必要に
応じて、抽出、減圧蒸留、カラム分離などの通常の手段
によって分離精製することができ、長時間保存する場合
には安定剤を添加してもよい。The optically active cyanohydrin produced by the method of the present invention can be used for high performance liquid chromatography (HPL).
C) can be measured and quantified, and if necessary, can be separated and purified by ordinary means such as extraction, distillation under reduced pressure, column separation, and the like. You may.
【００３０】[0030]
【実施例】以下、本発明を実施例により具体的に説明す
るが、本発明の範囲はこれらに限定されるものではな
い。 （調製例１）（Ｓ）−ヒドロキシニトリルリアーゼの調
製 （Ｓ）−ヒドロキシニトリルリアーゼは、酵母サッカロ
マイセス・セレビシエを宿主として、キャッサバ由来の
当該遺伝子をクローニングしたものを当該酵母へ遺伝子
組換えして得た遺伝子組換え酵母を培養することによっ
て調製した。当該遺伝子組換え酵母をＹＰＤ培地（酵母
エキス１％、ペプトン２％、グルコース２％）１Ｌで２
４時間当該遺伝子組換え酵母を培養し、回収した菌体を
破砕して不溶分を除去した液を回収した。EXAMPLES Hereinafter, the present invention will be described specifically with reference to examples, but the scope of the present invention is not limited to these examples. (Preparation Example 1) Preparation of (S) -hydroxynitrile lyase (S) -hydroxynitrile lyase was obtained by cloning the cassava-derived gene and using the yeast Saccharomyces cerevisiae as a host, by genetic recombination into the yeast. Was prepared by culturing the recombinant yeast. The genetically modified yeast is added to 1 L of YPD medium (1% of yeast extract, 2% of peptone, 2% of glucose).
The genetically modified yeast was cultured for 4 hours, and the collected cells were crushed to recover a liquid from which insolubles had been removed.
【００３１】（調製例２）固定化（Ｓ）−ヒドロキシニ
トリルリアーゼの調製 調製例１の方法で調製した（Ｓ）−ヒドロキシニトリル
リアーゼ酵素液に、酵素活性３００単位に対して１ｇの
固定化担体（多孔性シリカゲル、microbead silicagel
300A、富士シリシア化学製）を添加し、緩やかに一晩混
合した。次いで、濾過して固定化酵素を回収し、これを
以降の反応に用いた。(Preparation Example 2) Preparation of immobilized (S) -hydroxynitrile lyase The (S) -hydroxynitrile lyase enzyme solution prepared by the method of Preparation Example 1 was mixed with 1 g of the immobilized carrier for 300 units of enzyme activity. (Porous silica gel, microbead silicagel
300A, manufactured by Fuji Silysia Chemical Ltd.) and gently mixed overnight. Then, the immobilized enzyme was recovered by filtration and used for the subsequent reactions.
【００３２】（実施例１）ｔ−ブチルメチルエーテル６
１０ｇと安定剤として亜硫酸を含む青酸４１ｇを混合し
たものに、０．２Ｍクエン酸緩衝液（ｐＨ７）を４０ｍ
ｌ添加し、攪拌混合した後、静置してから有機相を分離
した。この有機相に調製例２で調製した固定化酵素（６
万単位）を添加し、次いでベンズアルデヒド１０６ｇを
添加した。これを室温で攪拌することによって、（Ｓ）
−マンデロニトリルの合成を行った。３０分間反応させ
た後、反応液を回収し、ＨＰＬＣによりアルデヒドの転
換率を測定した。反応終了後、固定化酵素を回収し、前
記と同じ操作で調製した基質液と回収した固定化酵素を
再び混合し、同じ条件で繰り返し反応を行った。この検
討の結果、反応を繰り返しても、酵素の活性は安定に保
持され、１１回の反応において、活性の低下は認められ
なかった（図１）。１１回目の反応液２．５ｍｌを採取
し、純水５ｍｌと混合して得た水相のｐＨは５であっ
た。(Example 1) t-butyl methyl ether 6
A mixture of 10 g and 41 g of hydrocyanic acid containing sulfurous acid as a stabilizer was mixed with 0.2 M citrate buffer (pH 7) for 40 m.
After adding and stirring and mixing, the mixture was allowed to stand, and then the organic phase was separated. The immobilized enzyme prepared in Preparation Example 2 (6
(Ten thousand units), and then 106 g of benzaldehyde. By stirring this at room temperature, (S)
-Synthesis of mandelonitrile was carried out. After reacting for 30 minutes, the reaction solution was recovered, and the aldehyde conversion was measured by HPLC. After completion of the reaction, the immobilized enzyme was recovered, and the substrate solution prepared by the same operation as described above and the recovered immobilized enzyme were mixed again, and the reaction was repeated under the same conditions. As a result of this examination, even if the reaction was repeated, the activity of the enzyme was stably maintained, and no decrease in the activity was observed in the eleven reactions (FIG. 1). The pH of the aqueous phase obtained by collecting 2.5 ml of the eleventh reaction liquid and mixing it with 5 ml of pure water was 5.
【００３３】なお、原料として用いた、安定剤として亜
硫酸を含む青酸を１．５Ｍの濃度でｔ−ブチルメチルエ
ーテルに溶解した溶液と純水とを、有機相と水相に二相
分離する比率（有機相：水＝１：２（ｖ／ｖ））で混合
した後、静置して得られた水相のｐＨは２．９であっ
た。The ratio of two phases of pure water and a solution in which hydrocyanic acid containing sulfurous acid as a stabilizer was dissolved in t-butyl methyl ether at a concentration of 1.5 M and pure water were used. After mixing at (organic phase: water = 1: 2 (v / v)), the aqueous phase obtained by standing still had a pH of 2.9.
【００３４】（比較例１）１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ
５）で飽和させたｔ−ブチルメチルエーテル６１０ｇと
安定剤として亜硫酸を含む青酸４１ｇを混合したものに
調製例２で調製した固定化酵素（６万単位）を添加し、
次いでベンズアルデヒド１０６ｇを添加した。これを室
温で攪拌することによって、（Ｓ）−マンデロニトリル
の合成を行った。３０分間反応させた後、反応液を回収
し、ＨＰＬＣによりアルデヒドの転換率を測定した。反
応終了後、固定化酵素を回収し、前記と同じ操作で調製
した基質液と回収した固定化酵素を再び混合し、同じ条
件で繰り返し反応を行った。この検討の結果、繰り返し
反応５回目で活性が顕著に低下し、６回目でほぼ活性が
なくなった（図１）。この時の反応液を２．５ｍｌ採取
し、純水５ｍｌと混合したときの水相のｐＨを測定した
ところ、３．５に低下していた。Comparative Example 1 10 mM phosphate buffer (pH
The immobilized enzyme (60,000 units) prepared in Preparation Example 2 was added to a mixture of 610 g of t-butyl methyl ether saturated in 5) and 41 g of hydrocyanic acid containing sulfurous acid as a stabilizer,
Then 106 g of benzaldehyde were added. This was stirred at room temperature to synthesize (S) -mandelonitrile. After reacting for 30 minutes, the reaction solution was recovered, and the aldehyde conversion was measured by HPLC. After completion of the reaction, the immobilized enzyme was recovered, and the substrate solution prepared by the same operation as above and the recovered immobilized enzyme were mixed again, and the reaction was repeated under the same conditions. As a result of this examination, the activity was remarkably reduced at the fifth repetition reaction, and almost disappeared at the sixth reaction (FIG. 1). At this time, 2.5 ml of the reaction solution was sampled, and the pH of the aqueous phase when it was mixed with 5 ml of pure water was measured.
【００３５】[0035]
【発明の効果】本発明によれば、ヒドロキシニトリルリ
アーゼ等の酵素の活性低下を抑制でき、酵素としての寿
命を大幅に延長することができる。そのため、工業的に
生産された安定剤を含む青酸を用いて、光学活性シアノ
ヒドリンを安価に安定的に工業的生産が可能となる。According to the present invention, a decrease in the activity of an enzyme such as hydroxynitrile lyase can be suppressed, and the life of the enzyme can be greatly extended. Therefore, the optically active cyanohydrin can be stably and industrially produced at low cost by using an industrially produced hydrocyanic acid containing a stabilizer.
【図１】繰り返し反応の回数とアルデヒドの転換率との
関係を示す図である。FIG. 1 is a graph showing the relationship between the number of repeated reactions and the aldehyde conversion.
● 実施例１ ○ 比較例１ ● Example 1 ○ Comparative Example 1
Claims (4)
和しない有機溶媒に溶解した溶液と純水とを、有機相と
水相に二相分離する比率で混合した後、静置して得られ
る水相のｐＨが５以下を示す、安定剤として酸性物質を
含む青酸、及びカルボニル化合物を原料として、酵素反
応により光学活性シアノヒドリンを合成するに際し、当
該安定剤の酵素に対する阻害作用を低減させるための処
理を行った青酸を原料として用いることを特徴とする光
学活性シアノヒドリンの製造方法。1. A solution of hydrocyanic acid dissolved in an organic solvent substantially immiscible with water at a concentration of 1.5 M, and pure water are mixed at a ratio of two phases separated into an organic phase and an aqueous phase, and then allowed to stand. When the pH of the aqueous phase obtained by the reaction is 5 or less, a cyanide containing an acidic substance as a stabilizer and a carbonyl compound as raw materials are used to synthesize an optically active cyanohydrin by an enzymatic reaction. A method for producing an optically active cyanohydrin, comprising using, as a raw material, hydrocyanic acid that has been treated to reduce the amount.
て、酵素反応により光学活性シアノヒドリンを合成する
方法において、青酸を一旦水と実質的に混和しない有機
溶媒に溶解して、青酸有機溶媒溶液を調製し、次いで当
該青酸有機溶媒溶液に対して緩衝液を飽和量以上加え、
混合した後、青酸有機溶媒溶液相を回収し、反応に用い
ることを特徴とする光学活性シアノヒドリンの製造方
法。2. A method for synthesizing optically active cyanohydrin by an enzymatic reaction using hydrocyanic acid and a carbonyl compound as raw materials, dissolving hydrocyanic acid in an organic solvent that is substantially immiscible with water once to prepare a hydrocyanic acid organic solvent solution, Next, a buffer solution is added to the hydrocyanic acid organic solvent solution at a saturation amount or more,
A method for producing an optically active cyanohydrin, comprising recovering a solution phase of an organic solvent of hydrocyanic acid after mixing and using it in a reaction.
する緩衝液である請求項２記載の方法。3. The method according to claim 2, wherein the buffer has a buffering capacity in a pH range of 4 to 7.
を用いる酵素反応である請求項１〜３のいずれか１項に
記載の方法。4. The method according to claim 1, wherein the enzymatic reaction is an enzymatic reaction using hydroxynitrile lyase.
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| JP5431165B2 (en) * | 2007-10-23 | 2014-03-05 | 日宝化学株式会社 | Method for producing cyanohydrin compound and method for producing α-hydroxyester compound |
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