JP2001231588A - New substance y-634 - Google Patents

Abstract

PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a new compound having a PAF synthetase inhibiting activity and to provide a preventive and a curing agent for diseases supposed to be associated with PAF such as inflammation or allergy. SOLUTION: A new substance Y-634 obtained from a metabolic product of a ray fungi, Saccharothrix flava, strain JCM3296.

Description

【発明の詳細な説明】DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION

【０００１】[0001]

【発明の属する技術分野】本発明は、優れた血小板活性
化因子合成酵素阻害作用を有する新規Ｙ−６３４物質に
関する。また本発明は、該物質の用途、生産菌および製
造方法にも関する。The present invention relates to a novel Y-634 substance having an excellent inhibitory activity on platelet activating factor synthase. The invention also relates to the use of the substance, the producing bacteria and the production method.

【０００２】[0002]

【従来の技術】血小板活性化因子（以下、PAFとい
う。）は、抗原刺激した感作ウサギ好塩基球より遊離さ
れ、血小板を活性化する液性因子として発見され、その
後１−O−アルキル−２−アセチル−ｓｎ−グリセロ−
３−ホスホコリン（1-O-alkyl-2-acetyl-sn-glycero-3-
phosphcholine）と構造決定されたリン脂質性のメディ
エーターである。PAFは血小板を活性化するのみなら
ず、好中球などの白血球を活性化する他に血管透過性亢
進、気管支収縮、血圧降下など多彩な生理活性を示し、
炎症・アレルギー疾患、播種性血管内凝固症候群などの
病態の発症、進展に関与している可能性が示唆されてい
る。2. Description of the Related Art Platelet activating factor (hereinafter referred to as PAF) is released from antigen-stimulated sensitized rabbit basophils and discovered as a humoral factor for activating platelets. 2-acetyl-sn-glycero-
3-phosphocholine (1-O-alkyl-2-acetyl-sn-glycero-3-
It is a phospholipid mediator whose structure has been determined. PAF not only activates platelets, but also activates leukocytes such as neutrophils, and exhibits various physiological activities such as vascular hyperpermeability, bronchoconstriction, and blood pressure reduction,
It has been suggested that it may be involved in the development and progression of pathological conditions such as inflammatory and allergic diseases and disseminated intravascular coagulation.

【０００３】細胞膜を構成しているリン脂質と化学構造
が類似しているPAFであるが、細胞膜上の特異的レセプ
ターを介しその作用を発現することから、国内外の製薬
企業によってこれまでにも病態モデル動物に対しては著
明な効果を持つ数多くのアンタゴニストが開発され、臨
床試験まで進められてきた。しかしながら大部分の薬物
が予想に反して著明な治療効果を示さず、病態時のメデ
ィエーターとしてPAFは中心的な役割を果たしていない
との疑問も持たれている。[0003] PAF, which has a similar chemical structure to the phospholipids constituting the cell membrane, expresses its action through a specific receptor on the cell membrane. Numerous antagonists having remarkable effects on disease model animals have been developed and progressed to clinical trials. However, it has been questioned that most drugs unexpectedly do not show significant therapeutic effects, and that PAF does not play a central role as a mediator in disease states.

【０００４】しかしながら三輪らにより発見された血液
中のPAFレベル調節に関わっている血漿／血清PAFアセチ
ルヒドロラーゼの欠損者が重症小児喘息（J. Clin. Inv
est., 82(6):1983-91(1988)）やアテローム性動脈硬化
症患者群（Jpn. Circ. J., 62(5):328-35(1998)）に健
常者群より高い頻度で見いだされること、この酵素の異
常遺伝子保有したステロイド反応性ネフローゼ症候群患
者や IgA腎症患者は病態再発し易い、あるいは重篤な症
状に進行し易いことが報告され（Kidney Int.,54(6):18
67-71(1998)およびAm. J. Kidney Dis., 34(2):289-95
(1999)）、PAFがこれら病態時にメディエーターとして
機能していることを伺わせる結果が得られている。However, a deficiency in plasma / serum PAF acetylhydrolase involved in the regulation of PAF levels in blood discovered by Miwa et al. Was reported in severe childhood asthma (J. Clin. Inv.
est., 82 (6): 1983-91 (1988)) and atherosclerosis patients (Jpn. Circ. J., 62 (5): 328-35 (1998)) more frequently than healthy subjects. It has been reported that patients with steroid-reactive nephrotic syndrome or IgA nephropathy who carry an abnormal gene for this enzyme are susceptible to recurrence or progress to severe symptoms (Kidney Int., 54 (6) ): 18
67-71 (1998) and Am. J. Kidney Dis., 34 (2): 289-95.
(1999)), results have been obtained indicating that PAF functions as a mediator in these disease states.

【０００５】[0005]

【発明が解決しようとする課題】PAFの生化学的研究か
ら得られた知見とPAFの細胞内および生体内動態を考慮
し、新たな視点から炎症・アレルギー疾患治療薬開発を
考えたときに、PAF合成酵素阻害活性を有する化合物が
有効な医薬品の候補にあげられる。Considering the findings obtained from biochemical studies of PAF and the intracellular and in vivo kinetics of PAF, when considering the development of therapeutic agents for inflammatory and allergic diseases from a new perspective, Compounds having PAF synthase inhibitory activity are candidates for effective pharmaceuticals.

【０００６】PAFはデ・ノボ（de novo）経路とリモデリ
ング（remodeling）経路の2つの合成経路で合成される
ことが報告されている。デ・ノボ経路は、１−O−アル
キル−２−リゾ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスフェート
（1-O-alkyl-2-lyso-sn-glycero-3-phosphate）から、
アセチルトランスフェラーゼ、ホスファチジン酸ホスフ
ァターゼの作用により生成される１−O−アルキル−２
−アセチル−ｓｎ−グリセロール（1-O-alkyl-2-acetyl
-sn-glycerol）にコリンホスホトランスフェラーゼによ
りCDPコリンからホスホコリンが転移されPAFが合成され
る経路で、これは脳・腎臓などの組織で見られる（J. B
iol. Chem., 262(6):2520-7(1987)）。一方、炎症反応
に関与している細胞は様々な刺激を受け、PAFを産生す
るが、これらの細胞では、刺激を受けて活性化されたホ
スホリパーゼA₂が生体膜を構成するアルキルエーテル型
コリンリン脂質に作用し、アラキドン酸を遊離する際に
不活性型である１−O−アルキル−ｓｎ−グリセロ−３
−ホスホコリン（1-O-alkyl-sn-glycero-3-phosphcholi
ne） (以下lyso-PAFという。)が生成され、さらにlyso-
PAF : アセチルＣｏＡアセチルトランスフェラーゼ（以
下LysoPAF-ATという。）の作用でアセチル基が導入され
るリモデリングと呼ばれる経路でPAFが合成される（J.
Biol. Chem., 255(21):10256-60(1980)、Biochim. Biop
hys. Acta., 710(1):23-31(1982)、J. Immunol., 129
(2):809-13(1982)、J. Biol. Chem., 257(7):3376-8(19
82)、J. Immunol., 137(8):2653-61(1986)、J. Biol. C
hem., 259(9):5526-30(1984)およびBiochem. Biophys.
Res. Commun., 105(4):1303-8(1982)）。[0006] It has been reported that PAF is synthesized by two synthetic pathways, a de novo pathway and a remodeling pathway. The de novo route is from 1-O-alkyl-2-lyso-sn-glycero-3-phosphate to 1-O-alkyl-2-lyso-sn-glycero-3-phosphate
1-O-alkyl-2 produced by the action of acetyltransferase and phosphatidic acid phosphatase
-Acetyl-sn-glycerol (1-O-alkyl-2-acetyl
This is a pathway in which phosphocholine is transferred from CDP choline to choline phosphotransferase to PAF-synthesis to PAF and is found in tissues such as brain and kidney (J. B
iol. Chem., 262 (6): 2520-7 (1987)). Meanwhile, cells involved in the inflammatory response is subjected to various stimuli, but produce PAF, in these cells, alkyl ether choline lipids phospholipase A _2, which is activated by receiving the stimulus constitutes a biological membrane 1-O-alkyl-sn-glycero-3, which is inactive when releasing arachidonic acid
-Phosphocholine (1-O-alkyl-sn-glycero-3-phosphcholi
ne) (hereinafter referred to as lyso-PAF), and further lyso-PAF
PAF: PAF is synthesized by a pathway called remodeling in which an acetyl group is introduced by the action of acetyl-CoA acetyltransferase (hereinafter, LysoPAF-AT) (J.
Biol. Chem., 255 (21): 10256-60 (1980), Biochim. Biop.
hys. Acta., 710 (1): 23-31 (1982), J. Immunol., 129.
(2): 809-13 (1982), J. Biol. Chem., 257 (7): 3376-8 (19
82), J. Immunol., 137 (8): 2653-61 (1986), J. Biol. C
hem., 259 (9): 5526-30 (1984) and Biochem. Biophys.
Res. Commun., 105 (4): 1303-8 (1982)).

【０００７】[0007]

【課題を解決するための手段】本発明者らは、炎症時の
PAF生成を抑えるためには後者のリモデリング系生合成
経路を抑制することが必要と考え、炎症時に活性化され
るLysoPAF-AT阻害活性を指標とし、鋭意研究を進めた結
果、放線菌サッカロスリクス・フラバ（Saccharothrix
flava）ＪＣＭ３２９６株の代謝産物に強いLysoPAF-AT
阻害作用があることをつきとめた。さらに本発明者らは
LysoPAF-AT阻害活性物質の精製を進め、炎症モデルマウ
スで抗炎症作用を示すＹ−６３４物質を得る事に成功し
た。DISCLOSURE OF THE INVENTION The present inventors have developed a method for treating inflammation.
We believe that it is necessary to suppress the latter remodeling biosynthetic pathway in order to suppress PAF production, and as a result of intensive research using the LysoPAF-AT inhibitory activity activated during inflammation as an index, we found that actinomycetes Saccharos Saccharothrix
flava) LysoPAF-AT resistant to metabolites of JCM3296 strain
We found that it had an inhibitory effect. In addition, the present inventors
Purification of the LysoPAF-AT inhibitory substance was advanced, and Y-634 substance showing anti-inflammatory action was successfully obtained in an inflammation model mouse.

【０００８】すなわち、本発明は、エレクトロスプレー
質量分析において、ネガティブ測定の場合にはイオンが
m/z 942.4に観測され、そのマス／マス測定における親
イオンおよび娘イオンがm/z 942.7、924.1、880.2、73
4.1、616.0、597.8に観測され、あるいは、ポジティブ
測定の場合にはイオンがm/z 944.4に観測され、そのマ
ス／マス測定における娘イオンがm/z 797.0、781.0、63
4.9、617.0、599.2、481.2、441.2、423.3に観察される
Ｙ−６３４物質に関する。さらに本発明は、微生物によ
りＹ−６３４物質を製造する方法、微生物がサッカロス
リクス属の放線菌であることを特徴とする上記製造方
法、および、微生物がサッカロスリクス・フラバＪＣＭ
３２９６株であることを特徴とする上記製造方法に関す
る。さらに本発明は、Ｙ−６３４物質を含有してなる医
薬および動物薬、および、血小板活性因子合成酵素阻害
剤、抗炎症剤および抗アレルギー剤としてＹ−６３４物
質を含有してなる医薬および動物薬に関する。That is, according to the present invention, in the case of negative measurement in electrospray mass spectrometry,
m / z 942.4, the parent and daughter ions in the mass / mass measurement were found to be m / z 942.7, 924.1, 880.2, 73
4.1, 616.0, 597.8, or in the case of positive measurement, the ion was observed at m / z 944.4, and the daughter ion in the mass / mass measurement was m / z 797.0, 781.0, 63
4.9, 617.0, 599.2, 481.2, 441.2, 423.3. Furthermore, the present invention provides a method for producing a Y-634 substance by a microorganism, the above-mentioned production method characterized in that the microorganism is an actinomycete belonging to the genus Saccharo-Sricus,
3296 strains. Furthermore, the present invention relates to a medicament and an animal medicine containing the Y-634 substance, and a medicine and an animal medicine containing the Y-634 substance as a platelet-activating factor synthase inhibitor, an anti-inflammatory agent and an anti-allergic agent. About.

【０００９】[0009]

【発明の実施の形態】本発明のＹ−６３４物質は、微生
物を利用して製造することが可能である。その際、本発
明のＹ−６３４物質を産生する微生物や変異株を制限無
く利用することが可能であり、サッカロスリクス属の菌
株を利用することが好ましく、さらに好ましくは理化学
研究所微生物系統保存施設（ＪＣＭ）に寄託されている
サッカロスリクス・フラバＪＣＭ３２９６株を利用する
と良い。BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION The Y-634 substance of the present invention can be produced using microorganisms. At this time, microorganisms and mutants that produce the Y-634 substance of the present invention can be used without limitation, and it is preferable to use strains of the genus Saccharosomeus, and more preferably to preserve microorganism strains of RIKEN. It is preferable to use the Saccharothrix flava JCM3296 strain deposited at the facility (JCM).

【００１０】上記のサッカロスリクス・フラバＪＣＭ３
２９６株を培養し、Ｙ−６３４物質を得ることが可能で
ある。[0010] The above Saccharo Srix Flava JCM3
By culturing 296 strains, it is possible to obtain Y-634 substance.

【００１１】本発明のＹ−６３４物質を医薬、特にＰＡ
Ｆ合成酵素阻害剤として用いる場合、常法により薬学的
に許容される担体、賦形剤、希釈剤と混合し、錠剤、顆
粒剤、粉剤、カプセル剤、シロップ剤、坐剤、硬膏剤、
軟膏剤、クリーム剤、液剤、注射剤等にすることができ
る。さらに、医薬として調製する時に、本発明以外の有
効成分と併用することも可能である。The Y-634 substance of the present invention is used as a medicament, especially PA
When used as an F synthase inhibitor, it is mixed with pharmaceutically acceptable carriers, excipients, and diluents in a conventional manner, and tablets, granules, powders, capsules, syrups, suppositories, plasters,
Ointments, creams, solutions, injections and the like can be prepared. Furthermore, when preparing as a medicament, it is possible to use it together with an active ingredient other than the present invention.

【００１２】以下に、実施例を挙げて本発明をさらに具
体的に説明する。以下の具体例に示す材料、使用量、割
合、操作等は、本発明の趣旨から逸脱しない限り適宜変
更することが出来る。従って、本発明の範囲は以下に示
す具体例に制限されるものではない。本明細書によって
明かにされた本発明の物質の性状に基づいて、別の公知
の手段を用いて生産、濃縮、抽出、精製した本発明の物
質、および該物質を含むＰＡＦ合成酵素阻害剤はすべて
本発明に包含される。Hereinafter, the present invention will be described more specifically with reference to examples. The materials, amounts, ratios, operations, and the like shown in the following specific examples can be appropriately changed without departing from the spirit of the present invention. Therefore, the scope of the present invention is not limited to the following specific examples. Based on the properties of the substance of the present invention disclosed by the present specification, the substance of the present invention produced, concentrated, extracted, and purified using another known means, and a PAF synthase inhibitor containing the substance, All are included in the present invention.

【００１３】[0013]

【実施例】（実施例１）物質の製法 ＩＳＰ Ｎｏ．３培地（ＤＩＦＣＯ製）２．２ｇを蒸留
水に加温しながら溶解して、全量１００ｍｌとし、高圧
蒸気滅菌して斜面培地を作成した。この斜面培地で培養
したサッカロスリクス・フラバＪＣＭ３２９６株を接
種、培養してスラント菌体を作成した。EXAMPLES (Example 1) Method for producing substance ISP No. 2.2 g of 3 medium (manufactured by DIFCO) was dissolved in distilled water while heating to make a total volume of 100 ml, and sterilized by high pressure steam to prepare a slant medium. Saccharosomeus flava JCM3296 strain cultured in this slant medium was inoculated and cultured to prepare slant cells.

【００１４】次に、グルコース１％（ｗ／ｖ）、可溶性
デンプン３％（ｗ／ｖ）、大豆粉２．５％（ｗ／ｖ）、
ビール酵母０．４％（ｗ／ｖ）、肉エキス０．１％（ｗ
／ｖ）、塩化ナトリウム０．２％（ｗ／ｖ）、炭酸カル
シウム０．１％（ｗ／ｖ）、塩化コバルト６水和物０．
０００５％（ｗ／ｖ）および硫酸第一鉄７水和物０．０
００５％（ｗ／ｖ）を蒸留水に溶解して、水酸化ナトリ
ウムでｐＨ７．８とし、５００ｍｌ三角フラスコに７０
ｍｌずつ分注後、高圧蒸気滅菌してシード用培養液を調
製した。このシード用培養液に上述のスラント菌体を一
白金耳接種し、２８℃、２１０ｒｐｍ条件下で７２時間
振盪培養してシード菌液を作成した。Next, glucose 1% (w / v), soluble starch 3% (w / v), soy flour 2.5% (w / v),
Beer yeast 0.4% (w / v), meat extract 0.1% (w
/ V), sodium chloride 0.2% (w / v), calcium carbonate 0.1% (w / v), cobalt chloride hexahydrate 0.
0005% (w / v) and ferrous sulfate heptahydrate 0.0
005% (w / v) was dissolved in distilled water, adjusted to pH 7.8 with sodium hydroxide, and placed in a 500 ml Erlenmeyer flask.
After dispensing each ml, high pressure steam sterilization was performed to prepare a culture solution for seeds. One platinum loop of the above-mentioned slant cells was inoculated into this seed culture and shake-cultured at 28 ° C. and 210 rpm for 72 hours to prepare a seed culture.

【００１５】次に、グルコース１％（ｗ／ｖ）、可溶性
デンプン６％（ｗ／ｖ）、大豆粉２．５％（ｗ／ｖ）、
ビール酵母０．４％（ｗ／ｖ）、肉エキス０．１％（ｗ
／ｖ）、塩化ナトリウム０．２％（ｗ／ｖ）、炭酸カル
シウム０．１％（ｗ／ｖ）、塩化コバルト６水和物０．
０００５％（ｗ／ｖ）および硫酸第一鉄７水和物０．０
００５％（ｗ／ｖ）を蒸留水２０リットルに溶解して、
水酸化ナトリウムでｐＨ７．８とし、高圧蒸気滅菌後、
ジャー培養を行った。ジャー培養は消泡剤ＫＭ−７０を
０．０５％（ｖ／ｖ）、ＬＧ−１０９を０．０５％（ｖ
／ｖ）添加し、シード菌液２００ｍｌを接種して、２８
℃、９６時間の通気撹拌を行った。Next, glucose 1% (w / v), soluble starch 6% (w / v), soybean flour 2.5% (w / v),
Beer yeast 0.4% (w / v), meat extract 0.1% (w
/ V), sodium chloride 0.2% (w / v), calcium carbonate 0.1% (w / v), cobalt chloride hexahydrate 0.
0005% (w / v) and ferrous sulfate heptahydrate 0.0
005% (w / v) dissolved in 20 liters of distilled water,
PH 7.8 with sodium hydroxide, after autoclaving,
Jar culture was performed. In the jar culture, 0.05% (v / v) of the antifoaming agent KM-70 and 0.05% (v / v) of LG-109 were used.
/ V) and inoculated with 200 ml of seed solution,
The mixture was aerated at 96 ° C. for 96 hours.

【００１６】ジャー培養終了後、その培養液１８リット
ルに３６リットルのアセトンを添加し、１晩室温放置し
て抽出を行った。After completion of the jar culture, 36 liters of acetone was added to 18 liters of the culture solution, and the mixture was left standing overnight at room temperature for extraction.

【００１７】次いで、不溶成分を濾過、除去し、粗抽出
液を減圧下濃縮、アセトンを除去して水相約１４リット
ルを得た。この水相にほぼ等量のｎ−ブタノールを添加
し、２回抽出してｎ−ブタノール相２９リットルを得
た。ｎ−ブタノール相を減圧下、濃縮乾固して粗抽出物
５０．４ｇを得た。Next, the insoluble components were removed by filtration, the crude extract was concentrated under reduced pressure, and acetone was removed to obtain about 14 liters of an aqueous phase. Approximately equal amounts of n-butanol were added to the aqueous phase, and extracted twice to obtain 29 liters of the n-butanol phase. The n-butanol phase was concentrated to dryness under reduced pressure to obtain 50.4 g of a crude extract.

【００１８】この粗抽出物をシリカゲルカラムクロマト
グラフィー（Ｗａｋｏ−ｇｅｌ Ｃ−２００（和光純薬
製）、１ｋｇ）に供し、クロロホルム／メタノール＝５
０／１（ｖ／ｖ）、１０／１（ｖ／ｖ）、５／１（ｖ／
ｖ）、２／１（ｖ／ｖ）、１／１（ｖ／ｖ）およびメタ
ノール（各４リットル）にて順次抽出し、減圧乾固し
た。This crude extract was subjected to silica gel column chromatography (Wako-gel C-200 (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd., 1 kg)), and chloroform / methanol = 5.
0/1 (v / v), 10/1 (v / v), 5/1 (v / v)
v) It was sequentially extracted with 2/1 (v / v), 1/1 (v / v) and methanol (4 liters each) and dried under reduced pressure.

【００１９】このメタノール溶出画分１５．３ｇの内、
１９７ｍｇをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（Ｗ
ａｋｏ−ｇｅｌ Ｃ−２００、１９．７ｇ）に供し、ク
ロロホルム２５０ｍｌ、クロロホルム／メタノール＝２
／１（ｖ／ｖ）２５０ｍｌ、３／２（ｖ／ｖ）５００ｍ
ｌ、１／１（ｖ／ｖ）２５０ｍｌおよびメタノール２５
０ｍｌにて順次抽出した。また、残りのメタノール溶出
画分も同様にシリカゲルカラムクロマトグラフィーに供
し、クロロホルム／メタノール＝３／２（ｖ／ｖ）溶出
画分を合計４．５１ｇ得た。Of 15.3 g of the methanol eluted fraction,
197 mg of silica gel column chromatography (W
ako-gel C-200, 19.7 g), chloroform 250 ml, chloroform / methanol = 2
/ 1 (v / v) 250 ml, 3/2 (v / v) 500 m
1, 250 ml of 1/1 (v / v) and 25 methanol
Extracted sequentially with 0 ml. The remaining methanol eluted fraction was similarly subjected to silica gel column chromatography to obtain a chloroform / methanol = 3/2 (v / v) eluted fraction in total of 4.51 g.

【００２０】次に、このクロロホルム／メタノール＝３
／２（ｖ／ｖ）溶出画分１０９ｍｇを逆相ＨＰＬＣ（CA
PCELL PAK C18 UG120、5μm、20mmφ×250mm（資生堂
製））に供した。試料はごく少量のクロロホルム／メタ
ノール＝１／１に溶解し、上記分取用逆相ＨＰＬＣカラ
ムにアプライした。溶出溶媒は、水／メタノール混合溶
媒を用い、流速を１０ｍｌ／分として、２０％メタノー
ルで５分間溶出後、その後２０分かけてメタノール濃度
が１００％となるようにリニアグラジエント溶出して、
その後メタノールで２５分溶出した。この操作を繰り返
し、リテンションタイム２４分から２５分に溶出する画
分を集めて濃縮乾固し、先のクロロホルム／メタノール
＝３／２（ｖ／ｖ）溶出画分４．５１ｇから分取逆相Ｈ
ＰＬＣ溶出画分６２３ｍｇを得た。Next, this chloroform / methanol = 3
/ 2 (v / v) eluted fraction 109 mg by reverse phase HPLC (CA
PCELL PAK C18 UG120, 5 μm, 20 mmφ × 250 mm (manufactured by Shiseido). The sample was dissolved in a very small amount of chloroform / methanol = 1/1 and applied to the above-mentioned preparative reverse-phase HPLC column. The elution solvent was a water / methanol mixed solvent at a flow rate of 10 ml / min, eluted with 20% methanol for 5 minutes, and then a linear gradient elution was performed so that the methanol concentration became 100% over 20 minutes.
Thereafter, the mixture was eluted with methanol for 25 minutes. This operation was repeated, and fractions eluted at a retention time of 24 to 25 minutes were collected, concentrated to dryness, and fractionated reverse phase H was extracted from 4.51 g of the chloroform / methanol = 3/2 (v / v) eluted fraction.
623 mg of PLC elution fraction was obtained.

【００２１】次に、分取逆相ＨＰＬＣ溶出画分６２３ｍ
ｇの内、０．４３ｍｇをごく少量のメタノール／アセト
ニトリル＝１／４（ｖ／ｖ）に溶解して、シリカゲルＨ
ＰＬＣ（TSK-GEL Silica-60、4.6mmφ×250mm（東ソー
製））に供した。溶出溶媒は、メタノール（０．４％ト
リエチルアミン）／アセトニトリル（０．４％トリエチ
ルアミン）混合溶媒を用い、流速を１ｍｌ／分として、
アセトニトリル（０．４％トリエチルアミン）で５分間
溶出後、その後２０分かけてメタノール（０．４％トリ
エチルアミン）濃度が１００％となるようにリニアグラ
ジエント溶出して、その後メタノール（０．４％トリエ
チルアミン）で１５分溶出した。同様の操作を繰り返
し、リテンションタイム１７分から１８分の画分を集
め、先の分取逆相ＨＰＬＣ溶出画分６２３ｍｇから、第
１段順相ＨＰＬＣ溶出画分３３７．５ｍｇを得た。Next, a fraction of 623 m from the fraction eluted by preparative reverse phase HPLC was used.
g, dissolved in a very small amount of methanol / acetonitrile = 1/4 (v / v).
This was supplied to a PLC (TSK-GEL Silica-60, 4.6 mmφ × 250 mm (manufactured by Tosoh Corporation)). The elution solvent used was a mixed solvent of methanol (0.4% triethylamine) / acetonitrile (0.4% triethylamine) at a flow rate of 1 ml / min.
Elution with acetonitrile (0.4% triethylamine) for 5 minutes, followed by linear gradient elution over 20 minutes such that the methanol (0.4% triethylamine) concentration becomes 100%, and then methanol (0.4% triethylamine) For 15 minutes. The same operation was repeated to collect fractions having a retention time of 17 minutes to 18 minutes, and 337.5 mg of the first-stage normal-phase HPLC elution fraction was obtained from 623 mg of the preparative reverse-phase HPLC elution fraction.

【００２２】次に、第１段順相ＨＰＬＣ溶出画分３３
７．５ｍｇの内、０．８１ｍｇをごく少量のメタノール
／アセトニトリル＝１／１（ｖ／ｖ）に溶解して、逆相
ＨＰＬＣ（CAPCELL PAK C18 UG120、5μm、4.6mmφ×25
0mm（資生堂製））に供した。溶出溶媒は、水（１％酢
酸）／アセトニトリル（１％酢酸）混合溶媒を用い、流
速を１ｍｌ／分として、３０％アセトニトリル（１％酢
酸）から２分間で４０％アセトニトリル（１％酢酸）と
し、その後２３分間４０％アセトニトリル（１％酢酸）
で溶出し、その後１０分間かけてリニアグラジエントに
てアセトニトリル（１％酢酸）とした。この操作を繰り
返し、リテンションタイム１８分から１８．６分に溶出
する画分を集めて濃縮乾固し、先の第１段順相ＨＰＬＣ
溶出画分３３７．５ｍｇから第１段逆相ＨＰＬＣ溶出画
分８８．８ｍｇを得た。Next, the first-stage normal phase HPLC elution fraction 33
Of 7.5 mg, 0.81 mg was dissolved in a very small amount of methanol / acetonitrile = 1/1 (v / v), and reverse phase HPLC (CAPCELL PAK C18 UG120, 5 μm, 4.6 mmφ × 25
0 mm (manufactured by Shiseido)). The elution solvent used was a mixed solvent of water (1% acetic acid) / acetonitrile (1% acetic acid) and the flow rate was 1 ml / min. 40% acetonitrile (1% acetic acid) for 23 minutes
And eluted with acetonitrile (1% acetic acid) in a linear gradient over 10 minutes. This operation was repeated, and fractions eluted at a retention time of 18 minutes to 18.6 minutes were collected, concentrated to dryness, and subjected to the first-stage normal phase HPLC.
From the eluted fractions 337.5 mg, 88.8 mg of the first-stage reverse phase HPLC eluted fractions were obtained.

【００２３】次に、再度、逆相ＨＰＬＣ（CAPCELL PAK
C18 UG120、5μm、4.6mmφ×250mm（資生堂製））によ
る分画を行った。先の第１段逆相ＨＰＬＣ溶出画分８
８．８ｍｇの内、０．１１ｍｇをごく少量のメタノール
／アセトニトリル＝１／１（ｖ／ｖ）に溶解して、逆相
ＨＰＬＣに供した。溶出溶媒は、水（１％酢酸）／メタ
ノール（１％酢酸）混合溶媒を用い、流速を０．８ｍｌ
／分として、５２％メタノール（１％酢酸）を２分間流
した後、８分間かけてリニアグラジエントにて７６％メ
タノール（１％酢酸）とし、さらに１５分かけてリニア
グラジエントにて８０％メタノール（１％酢酸）とし、
５分間かけてリニアグラジエントにてメタノール（１％
酢酸）とした。この操作を繰り返し、リテンションタイ
ム２５分から２７分に溶出する画分を集めて濃縮乾固
し、第１段逆相ＨＰＬＣ溶出画分８８．８ｍｇから第２
段逆相ＨＰＬＣ溶出画分５０．５ｍｇを得た。Next, reverse phase HPLC (CAPCELL PAK
Fractionation was performed using C18 UG120, 5 μm, 4.6 mmφ × 250 mm (manufactured by Shiseido). Fraction 8 from the first-stage reverse phase HPLC elution
Of 8.8 mg, 0.11 mg was dissolved in a very small amount of methanol / acetonitrile = 1/1 (v / v) and subjected to reverse phase HPLC. The elution solvent used was a mixed solvent of water (1% acetic acid) / methanol (1% acetic acid) and the flow rate was 0.8 ml.
After flowing 52% methanol (1% acetic acid) for 2 minutes, the linear gradient was changed to 76% methanol (1% acetic acid) over 8 minutes, and then 80% methanol (1% acetic acid) was further reduced for 15 minutes. 1% acetic acid)
A linear gradient over 5 minutes with methanol (1%
Acetic acid). This operation was repeated, and the fractions eluted at a retention time of 25 to 27 minutes were collected and concentrated to dryness.
50.5 mg of a fraction eluted by reversed-phase HPLC was obtained.

【００２４】次に、２回目のシリカゲルＨＰＬＣ（TSK-
GEL Silica-60、4.6mmφ×250mm（東ソー製））による
分画を行った。先の第２段逆相ＨＰＬＣ溶出画分５０．
５ｍｇの内、０．１８ｍｇをごく少量のメタノール／ア
セトニトリル＝１／４（ｖ／ｖ）に溶解して、シリカゲ
ルＨＰＬＣに供した。溶出溶媒は、水（０．４％トリエ
チルアミン）／アセトニトリル（０．４％トリエチルア
ミン）混合溶媒を用い、流速を１ｍｌ／分として、アセ
トニトリル（０．４％トリエチルアミン）から２５分か
けてリニアグラジエントにて９０％アセトニトリル
（０．４％トリエチルアミン）とし、その後９０％アセ
トニトリル（０．４％トリエチルアミン）にて１０分間
溶出し、その後２分かけてリニアグラジエントにて８５
％アセトニトリル（０．４％トリエチルアミン）とし
た。ＨＰＬＣ上、２９０ｎｍの吸光度でリテンションタ
イム２３．５分に単一ピークを示すＹ−６３４物質が溶
出された。同様の操作を繰り返し、先の第２段逆相ＨＰ
ＬＣ溶出画分５０．５ｍｇから、Ｙ−６３４物質３．３
５ｍｇを得た。Next, a second silica gel HPLC (TSK-
Fractionation was performed using GEL Silica-60, 4.6 mmφ × 250 mm (manufactured by Tosoh Corporation). 50. Second stage reverse phase HPLC elution fraction above
Of 5 mg, 0.18 mg was dissolved in a very small amount of methanol / acetonitrile = 1/4 (v / v) and subjected to silica gel HPLC. The elution solvent used was a mixed solvent of water (0.4% triethylamine) / acetonitrile (0.4% triethylamine) at a flow rate of 1 ml / min and a linear gradient from acetonitrile (0.4% triethylamine) over 25 minutes. 90% acetonitrile (0.4% triethylamine) followed by elution with 90% acetonitrile (0.4% triethylamine) for 10 minutes, followed by a linear gradient over 2 minutes to 85%
% Acetonitrile (0.4% triethylamine). On HPLC, Y-634 substance showing a single peak at a retention time of 23.5 minutes at an absorbance of 290 nm was eluted. The same operation is repeated, and the above-mentioned second-stage reverse phase HP
From 50.5 mg of LC elution fraction, 3.3 of Y-634 substance
5 mg were obtained.

【００２５】（実施例２）ＬＣ／ＭＳによるＹ−６３４
物質の分析 Ｙ−６３４物質１５μｇをごく少量のメタノール／アセ
トニトリル＝１／１（ｖ／ｖ）に溶解し、逆相ＨＰＬＣ
（CAPCELL PAK C18 UG120、5μm、4.6mmφ×250mm（資
生堂製））を使用したＬＣ／ＭＳ（Hewlett Packard製
Series 1100／Finnigan製 LCQマススペクトロメータ
ー）分析を行った。水（１％酢酸）アセトニトリル（１
％酢酸）混合溶媒を用い、流速を１ｍｌ／分とし、３０
％アセトニトリル（１％酢酸）から２分間でリニアグラ
ジエントにて４０％アセトニトリル（１％酢酸）とし、
その後４０％アセトニトリル（１％酢酸）で２８分間溶
出し、その後１０分間かけてリニアグラジエントにてア
セトニトリル（１％酢酸）とした。イオン化はエレクト
ロスプレー（ＥＳＩ）法により行い、コリジョンエネル
ギー３５．００でポジティブイオンおよびネガティブイ
オンをスキャンした。(Example 2) Y-634 by LC / MS
Analysis of substance 15 μg of Y-634 substance was dissolved in a very small amount of methanol / acetonitrile = 1/1 (v / v), and reverse phase HPLC was performed.
LC / MS using (CAPCELL PAK C18 UG120, 5 μm, 4.6 mmφ × 250 mm (manufactured by Shiseido)) (manufactured by Hewlett Packard)
Series 1100 / Finnigan LCQ mass spectrometer) analysis. Water (1% acetic acid) acetonitrile (1
% Acetic acid) mixed solvent at a flow rate of 1 ml / min.
From 2% acetonitrile (1% acetic acid) to 40% acetonitrile (1% acetic acid) in a linear gradient in 2 minutes,
Thereafter, elution was performed with 40% acetonitrile (1% acetic acid) for 28 minutes, and then a linear gradient was used for 10 minutes to obtain acetonitrile (1% acetic acid). Ionization was performed by an electrospray (ESI) method, and positive ions and negative ions were scanned at a collision energy of 35.00.

【００２６】ＵＶ検出器による波長２００ｎｍから４０
０ｎｍの吸収はほとんど認められなかったが、マスクロ
マトグラムでリテンションタイム１５分付近に有意なイ
オン量が検出され、ポジティブイオン、ネガティブイオ
ンともにフルスキャン（m/z50〜2000）、フルスキャンM
S/MS、ズームスキャンによるマススペクトルを得た。ネ
ガティブイオンのフルスキャン（図１）ではm/z 942.4
のイオンが得られ、このフルスキャンMS/MS（図２）で
はm/z 942.7、924.1、880.2、734.1、616.0、597.8 の
イオンが得られた。また、m/z 943のイオンをズームス
キャンしたところ、m/z 941.9、942.8、943.6のm/z差0.
8〜0.9の同位体イオンが得られた（図３）。ポジティブ
イオンのフルスキャン（図４）ではm/z 944.4のイオン
が得られ、このフルスキャンMS/MS（図５）ではm/z 79
7.0、781.0、634.9、617.0、599.2、481.2、441.2、42
3.3のイオンが得られた。また、m/z 944のイオンをズー
ムスキャンしたところ、m/z 943.1、944.0、944.9のm/z
差0.9の同位体イオンが得られた（図６）。From a wavelength of 200 nm to 40 by a UV detector
Almost no absorption at 0 nm was recognized, but a significant amount of ions was detected at a retention time of about 15 minutes in the mass chromatogram, and both positive ions and negative ions were full-scan (m / z 50 to 2000) and full-scan M
Mass spectra were obtained by S / MS and zoom scan. M / z 942.4 for negative ion full scan (Figure 1)
The full scan MS / MS (FIG. 2) yielded ions at m / z 942.7, 924.1, 880.2, 734.1, 616.0, and 597.8. Also, when zoom scanning was performed on ions at m / z 943, the m / z difference between m / z 941.9, 942.8, and 943.6 was 0.
8-0.9 isotope ions were obtained (FIG. 3). A full scan of positive ions (FIG. 4) yielded ions at m / z 944.4, and a full scan MS / MS (FIG. 5) gave m / z 79
7.0, 781.0, 634.9, 617.0, 599.2, 481.2, 441.2, 42
3.3 ions were obtained. In addition, when zoom scan was performed on ions at m / z 944, m / z of m / z 943.1, 944.0, and 944.9 were obtained.
Isotope ions with a difference of 0.9 were obtained (FIG. 6).

【００２７】次に、本発明化合物の生理活性について試
験例を挙げて説明する。 （実施例３）Ｙ−６３４物質のLysoPAF-AT阻害作用 LysoPAF-AT阻害活性は、三輪らの方法（Biochem. Pharm
acol.，４７（６）：９９５−１００６，（１９９
４））を用いて測定した。すなわち、反応溶液（DTT 1.
5 mM , NaF 37.5 mM in Tris-HCl）60 μlに400μM lys
o-PAF(C16) / 0.1 %BSA / Tris-HClを10μl（lyso-PAF
(C16)はNovabiochem製）、検体10μl、3 mM[³H] Acetyl
CoA （アマシャム製）溶液10μl、ラット脾ミクロソー
ム画分（1 mg / ml）10μlを加え、全量100μlとし37
℃、15分間インキュベートした。6.5 %BSA / saline 20
μlを添加し、0℃で反応を停止した。生じた[³H] PAFを
BSAに吸着させ、30% TCA 80μlを添加、撹拌し、750×g
で2分間遠心した。沈澱に7 %TCA 400μlを加え、ソニケ
ーターを用いて再懸濁し、再び750×gで4分間遠心・洗
浄した。沈澱に1 % SDS / 0.1 M リン酸緩衝液（pH 8.
0）200 ?lを添加し、溶解した。シンチレーター4 mlを
添加して、液体シンチレーションカウンターを用いて生
成された[³H] PAFの放射活性を測定した。[³H] Acetyl
CoA溶液は[³H] Acetyl CoA（277.5 kBq）に12 mM Acety
l CoA、10 mM 酢酸緩衝液（pH 5.0）を加え、3 mM Acet
yl CoA（100,000 dpm/10μl）となるよう調製した。Next, the physiological activity of the compound of the present invention will be described with reference to test examples. (Example 3) LysoPAF-AT inhibitory activity of Y-634 substance LysoPAF-AT inhibitory activity was determined by the method of Miwa et al. (Biochem. Pharm
acol., 47 (6): 995-1006, (199
4)) was measured. That is, the reaction solution (DTT 1.
5 mM, NaF 37.5 mM in Tris-HCl) 400 μM lys in 60 μl
10 μl of o-PAF (C16) /0.1% BSA / Tris-HCl (lyso-PAF
(C16) is from Novabiochem), sample 10 μl, 3 mM [ ³ H] Acetyl
10 μl of CoA (Amersham) solution and 10 μl of rat spleen microsome fraction (1 mg / ml) were added to make a total volume of 100 μl.
Incubated at 15 ° C for 15 minutes. 6.5% BSA / saline 20
The reaction was stopped at 0 ° C. by adding μl. The resulting ^[3 H] PAF
Adsorb to BSA, add 80 μl of 30% TCA, stir, 750 × g
For 2 minutes. 400 μl of 7% TCA was added to the precipitate, resuspended using a sonicator, and again centrifuged and washed at 750 × g for 4 minutes. 1% SDS / 0.1 M phosphate buffer (pH 8.
0) 200 µl was added and dissolved. 4 ml of a scintillator was added, and the radioactivity of the generated [ ³ H] PAF was measured using a liquid scintillation counter. [ ³ H] Acetyl
The CoA solution was prepared by adding 12 mM Acety to [ ³ H] Acetyl CoA (277.5 kBq).
l Add CoA, 10 mM acetate buffer (pH 5.0) and add 3 mM Acetate
yl CoA (100,000 dpm / 10 μl).

【００２８】検体Ｙ−６３４物質を遠心濃縮により乾固
後、50 % DMSO / Tris-HCl（0.1 M, pH6.9）に溶解して
用いた。Ｙ−６３４物質のLysoPAF-AT５０％阻害濃度
は、94.9μg/mlであった。The sample Y-634 substance was dried by centrifugal concentration, and dissolved in 50% DMSO / Tris-HCl (0.1 M, pH 6.9) before use. The LysoPAF-AT 50% inhibitory concentration of the Y-634 substance was 94.9 μg / ml.

【００２９】（実施例４）Ｙ−６３４物質の抗炎症作用 カラゲニン（和光純薬製）を生理食塩水に10 mg / mlに
なるように溶解した後、高圧蒸気滅菌した。その後冷え
て固まるのを防ぐため、投与直前まで温浴に入れ、50〜
60℃に保った。同様に生理食塩水も高圧蒸気滅菌した。
Ｙ−６３４物質を、10μg / 50μl、20μg / 50μlとな
るように0.1 % マウス血清アルブミン（MSA）溶液に溶
解し、1 mlテルモシリンジを用いてddy系雄性マウス（6
〜7週齢）の尾静脈に投与した。その10分後、軽くエー
テル麻酔し、右後肢足裏にカラゲニン10μlを皮下注射
した。対照実験として左後肢足裏には生理食塩水10μl
を皮下注射した。0〜4時間後までに経時的に足の厚さを
測定した。また、0.1 % MSAを尾静脈注射したものを対
象として用いた。なお厚さの測定はノギスを用い、カラ
ゲニン注射直前及び一定時間後の両足の厚みから、以下
の計算式により足浮腫の度合いを求めた。 足浮腫（mm）=（AR-BR）−（AL-BL） AR : カラゲニン投与一定時間後の右後肢足裏の厚さ BR : カラゲニン投与直後の右後肢足裏の厚さ AL : 生理食塩水投与一定時間後の左後肢足裏の厚さ BL : 生理食塩水投与直後の左後肢足裏の厚さ(Example 4) Anti-inflammatory activity of Y-634 substance Carrageenan (manufactured by Wako Pure Chemical Industries) was dissolved in physiological saline to a concentration of 10 mg / ml, followed by high-pressure steam sterilization. After that, place in a warm bath until just before administration to prevent
Maintained at 60 ° C. Similarly, physiological saline was autoclaved.
The Y-634 substance was dissolved in a 0.1% mouse serum albumin (MSA) solution to a concentration of 10 μg / 50 μl or 20 μg / 50 μl, and the ddy male mouse (6
77 weeks old) in the tail vein. Ten minutes later, the mixture was lightly anesthetized with ether, and carrageenan (10 μl) was injected subcutaneously into the sole of the right hind leg. As a control experiment, 10 μl of saline was placed on the sole of the left hind leg.
Was injected subcutaneously. Paw thickness was measured over time by 0-4 hours. In addition, 0.1% MSA injected into the tail vein was used as a subject. The thickness was measured using calipers, and the degree of paw edema was calculated from the thickness of both feet immediately before carrageenin injection and after a certain time by the following formula. Foot edema (mm) = (AR-BR)-(AL-BL) AR: Thickness of the right hind foot sole after a certain period of carrageenin administration BR: Thickness of the right hind foot sole immediately after carrageenin administration AL: Saline Thickness of the sole of the left hind limb after a certain period of administration BL: Thickness of the sole of the left hind limb immediately after administration of saline

【００３０】その結果、Ｙ−６３４物質10μg / 50μl
マウスでは、投与後3時間で足の厚さの増加はプラトー
に達し、そのときの足浮腫抑制率は20.4 %であった。こ
れに対し、Ｙ−６３４物質20μg / 50μl投与したマウ
スでは、投与後1〜4時間後まで足浮腫抑制効果が有意に
認められ、足厚がプラトーに達した3時間後の足浮腫抑
制率は47.8 %であった。これらの結果から精製分離した
LysoPAF-AT阻害活性画分は濃度依存的に足浮腫抑制作用
を有していることが示された。As a result, 10 μg / 50 μl of Y-634 substance
In mice, the increase in paw thickness reached a plateau 3 hours after administration, at which time the paw edema inhibition rate was 20.4%. In contrast, in mice administered with 20 μg / 50 μl of the Y-634 substance, the paw edema inhibitory effect was significantly observed until 1 to 4 hours after administration, and the paw edema inhibition rate 3 hours after the foot thickness reached the plateau was 47.8%. Purified and separated from these results
It was shown that the LysoPAF-AT inhibitory fraction had a foot edema inhibitory effect in a concentration-dependent manner.

【００３１】また、精製したLysoPAF-AT阻害活性画分を
投与してから、1、2、4週間後の体重変化を調べたとこ
ろ、Ｙ−６３４物質の投与による体重減少は認められな
かった。また、投与4週間後にマウスの下行大静脈より
採血し、その200μl（血液19容に対し1容の割合で7.6 %
クエン酸ナトリウムを添加）を血球計数計を用いて赤血
球数を測定したところ、Ｙ−６３４物質投与マウスの血
液像、血球数に変化は認められなかった。In addition, when the change in body weight was examined 1, 2, and 4 weeks after administration of the purified LysoPAF-AT inhibitory activity fraction, no decrease in body weight due to administration of the Y-634 substance was observed. Four weeks after the administration, blood was collected from the descending vena cava of the mouse, and 200 µl of the blood was collected (7.6% at a ratio of 1 volume to 19 volumes of blood).
When red blood cell count was measured using a hemocytometer, no change was observed in the blood image and blood cell count of the mouse administered with the Y-634 substance.

【００３２】[0032]

【発明の効果】これらの結果から明らかなように、Ｙ−
６３４物質は、ＰＡＦ合成酵素阻害作用を特徴とする、
炎症、アレルギー等のＰＡＦが関与していると考えられ
る疾患の予防薬、治療薬として利用されることが期待さ
れる。As is apparent from these results, Y-
634 substances are characterized by a PAF synthase inhibitory action,
It is expected to be used as a preventive or therapeutic agent for diseases in which PAF such as inflammation or allergy is considered to be involved.

【００３３】[0033]

【図面の簡単な説明】[Brief description of the drawings]

【図１】エレクトロスプレー質量分析によるＹ−６３４
物質のネガティブマススペクトルである。FIG. 1: Y-634 by electrospray mass spectrometry.
It is a negative mass spectrum of a substance.

【図２】エレクトロスプレー質量分析によるＹ−６３４
物質のネガティブイオンm/z 942.4のマス／マススペク
トルである。FIG. 2. Y-634 by electrospray mass spectrometry.
4 is a mass / mass spectrum of a material negative ion m / z 942.4.

【図３】エレクトロスプレー質量分析によるＹ−６３４
物質のネガティブマススペクトルである。FIG. 3. Y-634 by electrospray mass spectrometry.
It is a negative mass spectrum of a substance.

【図４】エレクトロスプレー質量分析によるＹ−６３４
物質のポジティブマススペクトルである。FIG. 4. Y-634 by electrospray mass spectrometry.
It is a positive mass spectrum of a substance.

【図５】エレクトロスプレー質量分析によるＹ−６３４
物質のポジティブイオンm/z 944.4のマス／マススペク
トルである。FIG. 5. Y-634 by electrospray mass spectrometry.
FIG. 4 is a mass / mass spectrum of positive ion m / z 944.4 of a substance. FIG.

【図６】エレクトロスプレー質量分析によるＹ−６３４
物質のポジティブマススペクトルである。FIG. 6. Y-634 by electrospray mass spectrometry.
It is a positive mass spectrum of a substance.

Claims (6)

【特許請求の範囲】[Claims] 【請求項１】エレクトロスプレー質量分析において、ネ
ガティブ測定の場合にはイオンがm/z 942.4に観測さ
れ、そのマス／マス測定における親イオンおよび娘イオ
ンがm/z 942.7、924.1、880.2、734.1、616.0、597.8に
観測され、あるいは、ポジティブ測定の場合にはイオン
がm/z 944.4に観測され、そのマス／マス測定における
娘イオンがm/z 797.0、781.0、634.9、617.0、599.2、4
81.2、441.2、423.3に観察されるＹ−６３４物質。1. In electrospray mass spectrometry, in the case of negative measurement, ions are observed at m / z 942.4, and the parent ions and daughter ions in the mass / mass measurement are m / z 942.7, 924.1, 880.2, 734.1, 616.0, 597.8, or in the case of positive measurement, ions were observed at m / z 944.4, and daughter ions in the mass / mass measurement were m / z 797.0, 781.0, 634.9, 617.0, 599.2, 4
Y-634 substance observed at 81.2, 441.2, 423.3. 【請求項２】微生物により、請求項１記載のＹ−６３４
物質を製造する方法。2. Y-634 according to claim 1, wherein the microorganism is a microorganism.
A method of manufacturing a substance. 【請求項３】微生物がサッカロスリクス属の放線菌であ
ることを特徴とする請求項２記載の製造方法。3. The method according to claim 2, wherein the microorganism is an actinomycete belonging to the genus Saccharosomeus. 【請求項４】微生物がサッカロスリクス・フラバＪＣＭ
３２９６株であることを特徴とする請求項２記載の製造
方法。4. The microorganism according to claim 1, wherein the microorganism is Saccharosomeus flava JCM.
The method according to claim 2, wherein the number of strains is 3,296. 【請求項５】請求項１記載のＹ−６３４物質を含有して
なる医薬および動物薬。5. A pharmaceutical or veterinary medicine comprising the Y-634 substance according to claim 1. 【請求項６】血小板活性因子合成酵素阻害剤、抗炎症剤
および抗アレルギー剤として請求項１記載のＹ−６３４
物質を含有してなる医薬および動物薬。6. Y-634 according to claim 1, which is used as a platelet-activating factor synthase inhibitor, an anti-inflammatory agent and an anti-allergic agent.
Pharmaceutical and veterinary drugs comprising the substance.