JP2001172190A - 乳酸蓄積抑制剤 - Google Patents
乳酸蓄積抑制剤Info
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- JP2001172190A JP2001172190A JP35600699A JP35600699A JP2001172190A JP 2001172190 A JP2001172190 A JP 2001172190A JP 35600699 A JP35600699 A JP 35600699A JP 35600699 A JP35600699 A JP 35600699A JP 2001172190 A JP2001172190 A JP 2001172190A
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- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 本発明は、慢性疲労等の為の乳酸蓄積抑制剤
を提供することを課題とする。 【解決手段】 下記の性質で特定されるタンパク質、ま
たはローヤルゼリー中の全タンパク質における同タンパ
ク質量を好ましくは6重量%以上含むローヤルゼリーを
乳酸蓄積抑制剤の有効成分とする。 (a)ローヤルゼリー中のタンパク質の非変性ポリアク
リルアミドゲル電気泳動において単一のバンドを形成す
る。 (b)還元条件下でのSDS−ポリアクリルアミドゲル
電気泳動により測定される分子量:約57kDa。
を提供することを課題とする。 【解決手段】 下記の性質で特定されるタンパク質、ま
たはローヤルゼリー中の全タンパク質における同タンパ
ク質量を好ましくは6重量%以上含むローヤルゼリーを
乳酸蓄積抑制剤の有効成分とする。 (a)ローヤルゼリー中のタンパク質の非変性ポリアク
リルアミドゲル電気泳動において単一のバンドを形成す
る。 (b)還元条件下でのSDS−ポリアクリルアミドゲル
電気泳動により測定される分子量:約57kDa。
Description
【0001】
【発明の属する技術分野】本発明は、スポーツ等による
筋肉疲労の回復、改善、緩和等に好適な、乳酸蓄積抑制
剤に関する。
筋肉疲労の回復、改善、緩和等に好適な、乳酸蓄積抑制
剤に関する。
【0002】
【従来の技術】現代社会は、ストレスが多い為、スポー
ツや娯楽等をしてストレスの解消をしている人たちが比
較的多いのが現状である。スポーツをした後は、筋肉疲
労などを起こし筋肉痛を訴える人たちは少なくない。こ
の原因の一つとして、筋肉中に蓄積された老廃物である
乳酸量の増加と言われている。筋肉の疲労を定量的に評
価するには、血液中の乳酸を測定することが行われてい
る。一般的に、筋肉疲労改善の為の手軽な方法として、
入浴やマッサージを行い、血流量の増大や組織循環を改
善し老廃物質としての乳酸の蓄積を減少をさせたり、充
分に休養につとめ乳酸が代謝されるのを待つのが現状で
ある。
ツや娯楽等をしてストレスの解消をしている人たちが比
較的多いのが現状である。スポーツをした後は、筋肉疲
労などを起こし筋肉痛を訴える人たちは少なくない。こ
の原因の一つとして、筋肉中に蓄積された老廃物である
乳酸量の増加と言われている。筋肉の疲労を定量的に評
価するには、血液中の乳酸を測定することが行われてい
る。一般的に、筋肉疲労改善の為の手軽な方法として、
入浴やマッサージを行い、血流量の増大や組織循環を改
善し老廃物質としての乳酸の蓄積を減少をさせたり、充
分に休養につとめ乳酸が代謝されるのを待つのが現状で
ある。
【0003】又、現代に於けるストレスは、精神的な影
響に留まらず、肉体的にも影響を及ぼす場合も少なくな
い。これは、精神的ストレスの影響は肉体にも及ぶから
である。従って、このストレスにより、人々の体調のバ
ランスが崩れたりして慢性疲労症候群等にかかり、ここ
数年社会的な問題となっている。この様な場合にも乳酸
などの疲労物質の関与が疑われている。最近、頻繁に起
きている突然死も一つには過度の疲労からくるものと考
えられている。これに加えて、睡眠不足や残業の急増に
よる直接肉体に寄与する負荷ストレス量も急増してお
り、今や現代人にとって過労はごく一般的なものとなっ
ている。この様な過労に於いても乳酸などの疲労物質の
関与が疑われている。即ち、この様な精神ストレスから
の影響も含めて、肉体的な過労のパラメータとしては乳
酸蓄積量が一つの指標になっている。この様な人たちに
とっても乳酸蓄積量を抑制させることは、過労からの早
期の回復へとつながり非常に好ましい。この様に乳酸蓄
積の程度は現代社会を生きるにあたって非常に重要なフ
ァクターであり、これを効率良く抑制、或いは代謝によ
り速やかに体内より取り除く手段が望まれていたが、得
られていないのが現状であった。
響に留まらず、肉体的にも影響を及ぼす場合も少なくな
い。これは、精神的ストレスの影響は肉体にも及ぶから
である。従って、このストレスにより、人々の体調のバ
ランスが崩れたりして慢性疲労症候群等にかかり、ここ
数年社会的な問題となっている。この様な場合にも乳酸
などの疲労物質の関与が疑われている。最近、頻繁に起
きている突然死も一つには過度の疲労からくるものと考
えられている。これに加えて、睡眠不足や残業の急増に
よる直接肉体に寄与する負荷ストレス量も急増してお
り、今や現代人にとって過労はごく一般的なものとなっ
ている。この様な過労に於いても乳酸などの疲労物質の
関与が疑われている。即ち、この様な精神ストレスから
の影響も含めて、肉体的な過労のパラメータとしては乳
酸蓄積量が一つの指標になっている。この様な人たちに
とっても乳酸蓄積量を抑制させることは、過労からの早
期の回復へとつながり非常に好ましい。この様に乳酸蓄
積の程度は現代社会を生きるにあたって非常に重要なフ
ァクターであり、これを効率良く抑制、或いは代謝によ
り速やかに体内より取り除く手段が望まれていたが、得
られていないのが現状であった。
【0004】一方、ローヤルゼリーは、滋養強壮作用を
有する素材として知られており、これを主成分とした健
康食品などが広く販売されているが、その生理活性の本
体全てが未だ決定されておらず、その為、その生理活性
にロット差が大きく、活性値としてコントロールされて
いないのが現状であった。又、このローヤルゼリーが筋
肉等の肉体内の乳酸の存在量を抑制し、疲労の回復、改
善、緩和等を行うのに好適な作用を有することは全く知
られていない。
有する素材として知られており、これを主成分とした健
康食品などが広く販売されているが、その生理活性の本
体全てが未だ決定されておらず、その為、その生理活性
にロット差が大きく、活性値としてコントロールされて
いないのが現状であった。又、このローヤルゼリーが筋
肉等の肉体内の乳酸の存在量を抑制し、疲労の回復、改
善、緩和等を行うのに好適な作用を有することは全く知
られていない。
【0005】加えて、SDSポリアクリルアミドゲル電
気泳動等により、分子量57kDaと決定された、ロー
ヤルゼリー中のタンパク質が、上述した作用を有するこ
とは知られていなかった。
気泳動等により、分子量57kDaと決定された、ロー
ヤルゼリー中のタンパク質が、上述した作用を有するこ
とは知られていなかった。
【0006】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、上記のよう
な状況をふまえて為されたものであり、慢性疲労等の肉
体的ストレスより生体を守る指標となる乳酸の蓄積を抑
制する作用を有する乳酸蓄積抑制剤を提供することを課
題とする。
な状況をふまえて為されたものであり、慢性疲労等の肉
体的ストレスより生体を守る指標となる乳酸の蓄積を抑
制する作用を有する乳酸蓄積抑制剤を提供することを課
題とする。
【0007】
【課題を解決するための手段】この様な状況に鑑みて、
本発明者らは鋭意研究努力を重ねた結果、ローヤルゼリ
ー、特にその中に含まれる特定のタンパク質が乳酸蓄積
抑制作用を有することを見いだし、本発明を完成させる
に至った。
本発明者らは鋭意研究努力を重ねた結果、ローヤルゼリ
ー、特にその中に含まれる特定のタンパク質が乳酸蓄積
抑制作用を有することを見いだし、本発明を完成させる
に至った。
【0008】すなわち本発明は、以下のとおりである。 (1)乳酸蓄積抑制作用を有するローヤルゼリー中のタ
ンパク質を有効成分として含有する乳酸蓄積抑制剤。 (2)前記タンパク質が下記の性質によって特定される
タンパク質である(1)記載の乳酸蓄積抑制剤。 (a)ローヤルゼリー中のタンパク質の非変性ポリアク
リルアミドゲル電気泳動において単一のバンドを形成す
る。 (b)還元条件下でのSDS−ポリアクリルアミドゲル
電気泳動により測定される分子量:約57kDa。 (3)前記タンパク質が、トーソー株式会社製TSKゲ
ルG3000SW(7.5×30cm)をカラムとして
用いて、0.3M塩化ナトリウム、0.05%アジ化ナ
トリウム含有0.1Mリン酸緩衝液(pH7.0)を展
開液とし、流速を0.3ml/min、カラム温度を3
5℃に設定し、280nmの吸光度で検出する、高速液
体クロマトグラフィーにおいて、保持時間25分〜30
分にピークを有するタンパク質である、(1)又は
(2)に記載の乳酸蓄積抑制剤。 (4)前記タンパク質が、配列番号1のアミノ酸番号1
〜8のアミノ酸配列を含むことを特徴とする(1)〜
(3)のいずれか一に記載の乳酸蓄積抑制剤。 (5)前記タンパク質を含有するローヤルゼリーを含む
ことを特徴とする(1)〜(4)のいずれか一に記載の
乳酸蓄積抑制剤。 (6)前記ローヤルゼリー中の全タンパク質における前
記タンパク質の含有率が6重量%以上であることを特徴
とする(5)に記載の乳酸蓄積抑制剤。 (7)(1)〜(2)のいずれか一に記載の乳酸蓄積抑
制剤を含む医薬。 (8)(1)〜(2)のいずれか一に記載の乳酸蓄積抑
制剤を含む食品。
ンパク質を有効成分として含有する乳酸蓄積抑制剤。 (2)前記タンパク質が下記の性質によって特定される
タンパク質である(1)記載の乳酸蓄積抑制剤。 (a)ローヤルゼリー中のタンパク質の非変性ポリアク
リルアミドゲル電気泳動において単一のバンドを形成す
る。 (b)還元条件下でのSDS−ポリアクリルアミドゲル
電気泳動により測定される分子量:約57kDa。 (3)前記タンパク質が、トーソー株式会社製TSKゲ
ルG3000SW(7.5×30cm)をカラムとして
用いて、0.3M塩化ナトリウム、0.05%アジ化ナ
トリウム含有0.1Mリン酸緩衝液(pH7.0)を展
開液とし、流速を0.3ml/min、カラム温度を3
5℃に設定し、280nmの吸光度で検出する、高速液
体クロマトグラフィーにおいて、保持時間25分〜30
分にピークを有するタンパク質である、(1)又は
(2)に記載の乳酸蓄積抑制剤。 (4)前記タンパク質が、配列番号1のアミノ酸番号1
〜8のアミノ酸配列を含むことを特徴とする(1)〜
(3)のいずれか一に記載の乳酸蓄積抑制剤。 (5)前記タンパク質を含有するローヤルゼリーを含む
ことを特徴とする(1)〜(4)のいずれか一に記載の
乳酸蓄積抑制剤。 (6)前記ローヤルゼリー中の全タンパク質における前
記タンパク質の含有率が6重量%以上であることを特徴
とする(5)に記載の乳酸蓄積抑制剤。 (7)(1)〜(2)のいずれか一に記載の乳酸蓄積抑
制剤を含む医薬。 (8)(1)〜(2)のいずれか一に記載の乳酸蓄積抑
制剤を含む食品。
【0009】
【発明の実施の形態】<1>本発明の乳酸蓄積抑制剤の
有効成分であるタンパク質 本発明の乳酸蓄積抑制剤の有効成分は、ローヤルゼリー
中に含まれる乳酸蓄積抑制作用を有するタンパク質であ
る。実施例に示すように、本発明者らは、採取したての
ローヤルゼリーが乳酸蓄積抑制作用を有していること、
及び、ローヤルゼリー中の特定のタンパク質の含有率が
低下すると、乳酸蓄積抑制作用も下がることを見い出し
た。そして、この乳酸蓄積抑制作用と相関するタンパク
質を特定することに成功した。前記乳酸蓄積抑制作用を
有するタンパク質を特定する方法としては、電気泳動に
より特定する方法が挙げられる。該タンパク質は電気泳
動により下記の性質で特定される。 (a)ローヤルゼリー中のタンパク質の非変性ポリアク
リルアミドゲル電気泳動において単一のバンドを形成す
る。 (b)還元条件下でのSDS−ポリアクリルアミドゲル
電気泳動により測定される分子量:約57kDa。
有効成分であるタンパク質 本発明の乳酸蓄積抑制剤の有効成分は、ローヤルゼリー
中に含まれる乳酸蓄積抑制作用を有するタンパク質であ
る。実施例に示すように、本発明者らは、採取したての
ローヤルゼリーが乳酸蓄積抑制作用を有していること、
及び、ローヤルゼリー中の特定のタンパク質の含有率が
低下すると、乳酸蓄積抑制作用も下がることを見い出し
た。そして、この乳酸蓄積抑制作用と相関するタンパク
質を特定することに成功した。前記乳酸蓄積抑制作用を
有するタンパク質を特定する方法としては、電気泳動に
より特定する方法が挙げられる。該タンパク質は電気泳
動により下記の性質で特定される。 (a)ローヤルゼリー中のタンパク質の非変性ポリアク
リルアミドゲル電気泳動において単一のバンドを形成す
る。 (b)還元条件下でのSDS−ポリアクリルアミドゲル
電気泳動により測定される分子量:約57kDa。
【0010】上記「性質で特定される」タンパク質と
は、ローヤルゼリーを原料として得られる上記性質を有
するタンパク質のみならず、同タンパク質と実質的に同
一のタンパク質、例えば組み換えDNA技術によって得
られるタンパク質であっても良いことを意味する。
は、ローヤルゼリーを原料として得られる上記性質を有
するタンパク質のみならず、同タンパク質と実質的に同
一のタンパク質、例えば組み換えDNA技術によって得
られるタンパク質であっても良いことを意味する。
【0011】本発明に用いるタンパク質を特定するに際
し、電気泳動の方法としては、特に制限されないが、例
えば、水溶性ローヤルゼリータンパク質(3%ローヤル
ゼリー水溶液(W/V))をポリアクリルアミドゲル
(10%均一)にて、電流20mAで電気泳動し、クマ
シーブリリアントブルーにより染色して、タンパク質を
特定する方法がある。
し、電気泳動の方法としては、特に制限されないが、例
えば、水溶性ローヤルゼリータンパク質(3%ローヤル
ゼリー水溶液(W/V))をポリアクリルアミドゲル
(10%均一)にて、電流20mAで電気泳動し、クマ
シーブリリアントブルーにより染色して、タンパク質を
特定する方法がある。
【0012】上記の条件でローヤルゼリー中のタンパク
質の非変性ポリアクリルアミドゲル電気泳動を行うと、
前記乳酸蓄積抑制作用を有するタンパク質は、単一のバ
ンドを形成する。分子量マーカーとしてLMW Kit E(フ
ァルマシアバイオテク社)を用いた場合、本発明のタン
パク質の分子量は約51kDaである。
質の非変性ポリアクリルアミドゲル電気泳動を行うと、
前記乳酸蓄積抑制作用を有するタンパク質は、単一のバ
ンドを形成する。分子量マーカーとしてLMW Kit E(フ
ァルマシアバイオテク社)を用いた場合、本発明のタン
パク質の分子量は約51kDaである。
【0013】また、還元条件下でのSDS−ポリアクリ
ルアミドゲル電気泳動は、Laemmliらの方法(Laemmli,
U. K. et al., J. Biol. Chem. 252, 1102-1106 (197
7))で行うことができる。分子量マーカーとしてLMW Ki
t E(ファルマシアバイオテク社)を用いた場合、本発
明のタンパク質の分子量は約57kDaである。
ルアミドゲル電気泳動は、Laemmliらの方法(Laemmli,
U. K. et al., J. Biol. Chem. 252, 1102-1106 (197
7))で行うことができる。分子量マーカーとしてLMW Ki
t E(ファルマシアバイオテク社)を用いた場合、本発
明のタンパク質の分子量は約57kDaである。
【0014】また、本発明におけるタンパク質の別の特
定方法としては、ゲル濾過クロマトグラフィー等の各種
クロマトグラフィーによっても、識別・定量することに
より特定する方法が挙げられる。クロマトグラフィーと
しては、ゲル濾過クロマトグラフィー、イオン交換クロ
マトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー等
が挙げられる。また、クロマトグラフィーは、オープン
カラムを用いることもできるが、高速液体クロマトグラ
フィーが好ましい。
定方法としては、ゲル濾過クロマトグラフィー等の各種
クロマトグラフィーによっても、識別・定量することに
より特定する方法が挙げられる。クロマトグラフィーと
しては、ゲル濾過クロマトグラフィー、イオン交換クロ
マトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー等
が挙げられる。また、クロマトグラフィーは、オープン
カラムを用いることもできるが、高速液体クロマトグラ
フィーが好ましい。
【0015】例えば、ゲル濾過分析は、通常に知られて
いる方法に従って行えば良く、好ましい例としては、例
えば、トーソー株式会社製TSKゲルG3000SW
(7.5×30cm)をカラムとして用いて、0.3M
塩化ナトリウム、0.05%アジ化ナトリウム含有0.
1Mリン酸緩衝液(pH7.0)を展開液とし、流速を
0.3ml/min、カラム温度を35℃に設定し、2
80nmの吸光度で検出する、高速液体クロマトグラフ
ィーが挙げられる。この分析条件下で、上記タンパク質
は、保持時間約25分〜30分にピークとして現れるこ
とより、特定される。
いる方法に従って行えば良く、好ましい例としては、例
えば、トーソー株式会社製TSKゲルG3000SW
(7.5×30cm)をカラムとして用いて、0.3M
塩化ナトリウム、0.05%アジ化ナトリウム含有0.
1Mリン酸緩衝液(pH7.0)を展開液とし、流速を
0.3ml/min、カラム温度を35℃に設定し、2
80nmの吸光度で検出する、高速液体クロマトグラフ
ィーが挙げられる。この分析条件下で、上記タンパク質
は、保持時間約25分〜30分にピークとして現れるこ
とより、特定される。
【0016】さらに、本発明におけるタンパク質の別の
特定方法としては、該タンパク質のN末端配列分析によ
り決定されたアミノ酸配列(配列番号1)の、全部の配
列あるいは部分配列をN末端側に有していることを確認
することで特定する方法が挙げられ、なかでも配列番号
1のアミノ酸番号1〜8のアミノ酸配列をN末端側に有
していることを確認することで特定する方法が好まし
い。
特定方法としては、該タンパク質のN末端配列分析によ
り決定されたアミノ酸配列(配列番号1)の、全部の配
列あるいは部分配列をN末端側に有していることを確認
することで特定する方法が挙げられ、なかでも配列番号
1のアミノ酸番号1〜8のアミノ酸配列をN末端側に有
していることを確認することで特定する方法が好まし
い。
【0017】上述したこれら特定方法の内の、一つの方
法単独で行うことによっても特定する事ができるが、こ
れらを組み合わせることにより、さらに明確に特定する
ことができる。以下、上記のようにして特定されるロー
ヤルゼリー中のタンパク質を、「57kDaタンパク
質」ということがある。
法単独で行うことによっても特定する事ができるが、こ
れらを組み合わせることにより、さらに明確に特定する
ことができる。以下、上記のようにして特定されるロー
ヤルゼリー中のタンパク質を、「57kDaタンパク
質」ということがある。
【0018】<2>57kDaタンパク質の調製方法 本発明のローヤルゼリー中の乳酸蓄積抑制作用を有する
タンパク質の調製方法としては、該タンパク質を調製で
きれば特に限定されるものではなく、現在および今後に
おいて利用が可能な分離・精製方法から適切なものを組
み合わせた方法が用いることができる。具体的には、ゲ
ル濾過クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフ
ィー、アフィニティークロマトグラフィー等の各種クロ
マトグラフィーを使用する方法が挙げられる。
タンパク質の調製方法としては、該タンパク質を調製で
きれば特に限定されるものではなく、現在および今後に
おいて利用が可能な分離・精製方法から適切なものを組
み合わせた方法が用いることができる。具体的には、ゲ
ル濾過クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフ
ィー、アフィニティークロマトグラフィー等の各種クロ
マトグラフィーを使用する方法が挙げられる。
【0019】より具体的には、以下に述べる方法が挙げ
られる。凍結乾燥したローヤルゼリーを0.7重量%で
10mMのトリス塩酸緩衝液pH7に溶解し、UF10
万(Miniplate100)で6倍濃縮、7回脱塩
を行い、その濾液をさらにUF3万(Miniplat
e30)で8倍濃縮、1回脱塩を行い、分子量10万〜
3万の画分を得る。
られる。凍結乾燥したローヤルゼリーを0.7重量%で
10mMのトリス塩酸緩衝液pH7に溶解し、UF10
万(Miniplate100)で6倍濃縮、7回脱塩
を行い、その濾液をさらにUF3万(Miniplat
e30)で8倍濃縮、1回脱塩を行い、分子量10万〜
3万の画分を得る。
【0020】次に、この画分をゲル濾過クロマトグラフ
ィーにより分画する。ファルマシア株式会社製HiLo
ad16/60Superdex600(1.6cm×60c
m)をカラムとして用いて、0.15M塩化ナトリウム
含有50mMリン酸カリウムバッッファーpH7.0を
展開液とし、流速を1.0ml/min、カラム温度を
35℃に設定し、280nmの吸光度で検出することに
よって、上記サンプルを分画する。分画は、1フラクシ
ョン2mlとして行う。その結果、フラクションNo.
35〜43に分子量57kDaのタンパク質を得ること
が出来る。
ィーにより分画する。ファルマシア株式会社製HiLo
ad16/60Superdex600(1.6cm×60c
m)をカラムとして用いて、0.15M塩化ナトリウム
含有50mMリン酸カリウムバッッファーpH7.0を
展開液とし、流速を1.0ml/min、カラム温度を
35℃に設定し、280nmの吸光度で検出することに
よって、上記サンプルを分画する。分画は、1フラクシ
ョン2mlとして行う。その結果、フラクションNo.
35〜43に分子量57kDaのタンパク質を得ること
が出来る。
【0021】上述した方法により得られたタンパク質の
分子量を、電気泳動により確認した。分子量マーカーと
してゲル濾過用LMW Kit及びHMW Kit(ファルマシアバイ
オテク社)を用いた上記と同様のゲル濾過分析により、
上記タンパク質の分子量は、約57kDaと推定され
た。さらにこのタンパク質は、(1)と同様の還元条件
下でのSDS−ポリアクリルアミドゲル電気泳動分析に
おいて、分子量約57kDaを示した。また、57kD
aタンパク質をN−グリコシダーゼFで消化した後の分
子量は、48kDaであり、糖タンパク質であることが
わかっている。
分子量を、電気泳動により確認した。分子量マーカーと
してゲル濾過用LMW Kit及びHMW Kit(ファルマシアバイ
オテク社)を用いた上記と同様のゲル濾過分析により、
上記タンパク質の分子量は、約57kDaと推定され
た。さらにこのタンパク質は、(1)と同様の還元条件
下でのSDS−ポリアクリルアミドゲル電気泳動分析に
おいて、分子量約57kDaを示した。また、57kD
aタンパク質をN−グリコシダーゼFで消化した後の分
子量は、48kDaであり、糖タンパク質であることが
わかっている。
【0022】さらに、上述した分子量10万〜3万の画
分を得るまでの工程(工程A)と、得られた画分をゲル
濾過クロマトグラフィーにより分画して57kDaタン
パク質を得る工程(工程B)との間に、以下に述べる工
程を設けることが好ましい。
分を得るまでの工程(工程A)と、得られた画分をゲル
濾過クロマトグラフィーにより分画して57kDaタン
パク質を得る工程(工程B)との間に、以下に述べる工
程を設けることが好ましい。
【0023】この工程とは、工程Aで得られる分子量1
0万〜3万のサンプルを、陰イオン交換クロマトグラフ
ィー等によって分画する工程であり、これによりタンパ
ク質を分離できる。陰イオン交換クロマトグラフィーと
しては通常に知られている方法に従って行えばよく、こ
のような好ましい例として、例えばトーソー株式会社製
DEAE-Toyoperal 650M (2.2×20cm)をカラムとして用い
て、20mM Tris−HClバッファー(pH7.0)
を展開液A、20mM Tris−HClバッファー
(pH7.0)、1M NaClを展開液Bとしてグラジエ
ントにより、流速5ml/分で溶出し、280nmの吸
光度で検出し、2.5ml/チューブで分画したフラク
ションNo.119〜127に分子量57kDaのタン
パク質を含む画分を検出することができる。この画分を
続いて工程Bに用いることによりさらに精製された分子
量57kDaタンパク質を得る事ができる。
0万〜3万のサンプルを、陰イオン交換クロマトグラフ
ィー等によって分画する工程であり、これによりタンパ
ク質を分離できる。陰イオン交換クロマトグラフィーと
しては通常に知られている方法に従って行えばよく、こ
のような好ましい例として、例えばトーソー株式会社製
DEAE-Toyoperal 650M (2.2×20cm)をカラムとして用い
て、20mM Tris−HClバッファー(pH7.0)
を展開液A、20mM Tris−HClバッファー
(pH7.0)、1M NaClを展開液Bとしてグラジエ
ントにより、流速5ml/分で溶出し、280nmの吸
光度で検出し、2.5ml/チューブで分画したフラク
ションNo.119〜127に分子量57kDaのタン
パク質を含む画分を検出することができる。この画分を
続いて工程Bに用いることによりさらに精製された分子
量57kDaタンパク質を得る事ができる。
【0024】尚、上述した調製方法により精製したタン
パク質について、N末端アミノ酸配列を決定したとこ
ろ、ローヤルゼリー中の報告されているタンパク質MR
JP1(Schmitzova, J., et al., Cell. Mol. Life Sc
i. 54 (9), 1020-1030 (1998))及びアピシン(apisi
n)(Kimura, Y. et al., Biosci, Biotech. Biochem,
60(12), 2099-2102 (1996))のアミノ酸配列と高い相同
性を有していた。特に、57kDaタンパク質のN末端
の8アミノ酸残基は、MRJP1中のアミノ酸配列(N
末端から20〜27番目のアミノ酸残基)と完全に一致
している。報告されているMRJP1をコードするDN
Aの塩基配列及び該配列がコードするアミノ酸配列を、
配列番号2及び3に示す。
パク質について、N末端アミノ酸配列を決定したとこ
ろ、ローヤルゼリー中の報告されているタンパク質MR
JP1(Schmitzova, J., et al., Cell. Mol. Life Sc
i. 54 (9), 1020-1030 (1998))及びアピシン(apisi
n)(Kimura, Y. et al., Biosci, Biotech. Biochem,
60(12), 2099-2102 (1996))のアミノ酸配列と高い相同
性を有していた。特に、57kDaタンパク質のN末端
の8アミノ酸残基は、MRJP1中のアミノ酸配列(N
末端から20〜27番目のアミノ酸残基)と完全に一致
している。報告されているMRJP1をコードするDN
Aの塩基配列及び該配列がコードするアミノ酸配列を、
配列番号2及び3に示す。
【0025】MRJP1は、432アミノ酸からなり、
蜜蜂の下咽頭腺から分泌された後、N末端にあるシグナ
ルペプチドが切断され、ローヤルゼリー中に存在する。
成熟タンパク質は416アミノ酸からなり、その推定分
子量は、46.8kDaである。しかし、ローヤルゼリ
ー中の電気泳動で55kDaを示すタンパク質のN末端
アミノ酸配列が、MRJP1のN末端から20番目のア
ミノ酸残基以降の配列と一致したことから、MRJP1
の成熟タンパク質の分子量は55kDaであると推定さ
れている(前記Schmitzova, J., et al.)。そして、M
RJP1中には3つの糖鎖付加部位が存在すると記載さ
れていることから、上記の分子量の差異は糖鎖付加によ
るものと考えられる。
蜜蜂の下咽頭腺から分泌された後、N末端にあるシグナ
ルペプチドが切断され、ローヤルゼリー中に存在する。
成熟タンパク質は416アミノ酸からなり、その推定分
子量は、46.8kDaである。しかし、ローヤルゼリ
ー中の電気泳動で55kDaを示すタンパク質のN末端
アミノ酸配列が、MRJP1のN末端から20番目のア
ミノ酸残基以降の配列と一致したことから、MRJP1
の成熟タンパク質の分子量は55kDaであると推定さ
れている(前記Schmitzova, J., et al.)。そして、M
RJP1中には3つの糖鎖付加部位が存在すると記載さ
れていることから、上記の分子量の差異は糖鎖付加によ
るものと考えられる。
【0026】上記のように、57kDaタンパク質とM
RJP1成熟タンパク質のN末端のアミノ酸配列は一致
し、さらに、ローヤルゼリー中のタンパク質を非変性条
件でポリアクリルアミドゲル電気泳動を行った場合に
も、57kDaタンパク質に相当するバンドは単一であ
ることから、57kDaタンパク質とMRJP1は同一
タンパク質である可能性が高い。尚、配列番号1のアミ
ノ酸配列と配列番号3のアミノ酸番号20以降のアミノ
酸配列とで、一部異なるが、一般的に塩基配列決定に比
べてアミノ酸配列決定は不正確である場合があることか
ら、これらの相違は読み誤りである可能性がある。
RJP1成熟タンパク質のN末端のアミノ酸配列は一致
し、さらに、ローヤルゼリー中のタンパク質を非変性条
件でポリアクリルアミドゲル電気泳動を行った場合に
も、57kDaタンパク質に相当するバンドは単一であ
ることから、57kDaタンパク質とMRJP1は同一
タンパク質である可能性が高い。尚、配列番号1のアミ
ノ酸配列と配列番号3のアミノ酸番号20以降のアミノ
酸配列とで、一部異なるが、一般的に塩基配列決定に比
べてアミノ酸配列決定は不正確である場合があることか
ら、これらの相違は読み誤りである可能性がある。
【0027】また、アピシンは、ローヤルゼリー中に存
在するタンパク質であり、ゲル濾過分子量は350kD
a、SDS−ポリアクリルアミドゲル電気泳動による分
子量は58kDaである(米倉ら、ローヤルゼリーのタ
ンパク質の特徴と機能 ミツバチ科学、第19巻第1
号、第15−22頁、1998年)。また、N末端アミ
ノ酸配列分析の結果、2種類の配列がみられたことか
ら、2種の58kDaのサブユニットが3分子づつ会合
したヘテロオリゴマータンパク質である。このように、
サブユニットの分子量は57kDaタンパク質に近く、
N末端アミノ酸配列も同一であることから、アピシンも
57kDaタンパク質と同一である可能性が高い。
在するタンパク質であり、ゲル濾過分子量は350kD
a、SDS−ポリアクリルアミドゲル電気泳動による分
子量は58kDaである(米倉ら、ローヤルゼリーのタ
ンパク質の特徴と機能 ミツバチ科学、第19巻第1
号、第15−22頁、1998年)。また、N末端アミ
ノ酸配列分析の結果、2種類の配列がみられたことか
ら、2種の58kDaのサブユニットが3分子づつ会合
したヘテロオリゴマータンパク質である。このように、
サブユニットの分子量は57kDaタンパク質に近く、
N末端アミノ酸配列も同一であることから、アピシンも
57kDaタンパク質と同一である可能性が高い。
【0028】これらの事より、MRJP1およびアピシ
ンは、57kDaタンパク質と同一、または類似である
ことが示唆される。したがってMRJP1およびアピシ
ンは、57kDaタンパク質と同一でなかったとして
も、本発明の乳酸蓄積抑制剤の有効成分として用いるこ
とができる可能性が高い。従って、これらのタンパク質
は、例えば、それぞれに対応する塩基配列を用い、組み
換えDNA技術を利用することによって製造することが
でき、これらを本発明における有効成分として用いるこ
とができることも予測される。
ンは、57kDaタンパク質と同一、または類似である
ことが示唆される。したがってMRJP1およびアピシ
ンは、57kDaタンパク質と同一でなかったとして
も、本発明の乳酸蓄積抑制剤の有効成分として用いるこ
とができる可能性が高い。従って、これらのタンパク質
は、例えば、それぞれに対応する塩基配列を用い、組み
換えDNA技術を利用することによって製造することが
でき、これらを本発明における有効成分として用いるこ
とができることも予測される。
【0029】<3>本発明の乳酸蓄積抑制剤 本発明の乳酸蓄積抑制剤は、ローヤルゼリーから抽出し
た分子量57kDaのタンパク質を含有することを特徴
とする。したがって、この分子量57kDaタンパク質
を有効性を現す程に含有していれば、ローヤルゼリー自
体、または57kDaタンパク質の部分精製物でもよ
い。尚、57kDaタンパク質は保存中に劣化しやすい
ので、ローヤルゼリー自体を用いる場合は、同タンパク
質の含有量が高いこと、例えば全タンパク質中6重量%
以上、好ましくは9重量%以上であることが望ましい。
57kDaタンパク質が含有されていることの確認、又
はその含有量は、前記の57kDaタンパク質を特定す
る方法と同様にして、例えば、高速液体クロマトグラフ
ィーによって評価することができる。具体的には、例え
ば、前記と同様の条件で高速液体クロマトグラフィーを
行い、得られるクロマトグラム中の全ピーク面積に対す
る57kDaタンパク質のピーク面積の比率によって、
該タンパク質の含有率を算出することができる。
た分子量57kDaのタンパク質を含有することを特徴
とする。したがって、この分子量57kDaタンパク質
を有効性を現す程に含有していれば、ローヤルゼリー自
体、または57kDaタンパク質の部分精製物でもよ
い。尚、57kDaタンパク質は保存中に劣化しやすい
ので、ローヤルゼリー自体を用いる場合は、同タンパク
質の含有量が高いこと、例えば全タンパク質中6重量%
以上、好ましくは9重量%以上であることが望ましい。
57kDaタンパク質が含有されていることの確認、又
はその含有量は、前記の57kDaタンパク質を特定す
る方法と同様にして、例えば、高速液体クロマトグラフ
ィーによって評価することができる。具体的には、例え
ば、前記と同様の条件で高速液体クロマトグラフィーを
行い、得られるクロマトグラム中の全ピーク面積に対す
る57kDaタンパク質のピーク面積の比率によって、
該タンパク質の含有率を算出することができる。
【0030】上記57kDaタンパク質を有効成分とし
て含有する本発明の乳酸蓄積抑制剤は、通常の疲労の回
復・改善にも有効であり、上記、生体の乳酸蓄積抑制の
増強という面での疲労には著効を示す。
て含有する本発明の乳酸蓄積抑制剤は、通常の疲労の回
復・改善にも有効であり、上記、生体の乳酸蓄積抑制の
増強という面での疲労には著効を示す。
【0031】本発明の乳酸蓄積抑制剤は、そのまま、あ
るいは慣用の製剤担体と共に動物及び人に投与すること
が出来る。1日の好ましい有効投与量は、分子量57k
Daのタンパク質量として、0.01〜100mg/k
g体重/日、更に好ましい投与量は0.5〜50mg/
kg体重/日である。投与形態としては、特に限定はな
く、必要に応じて適宜選択して使用され、錠剤、カプセ
ル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤等の経口剤、注射剤、座剤
等の非経口剤が挙げられる。以上の製剤は、常法によっ
て製造される。通常知られた任意成分を本発明の分子量
57kDaのタンパク質の生理活性が損なわれない程度
に配合することが出来る。かかる任意成分として、白
糖、乳糖等の賦形剤、デンプン、ゼラチン等の結合剤、
カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメ
チルセルロースカルシウム等の崩壊剤、大豆レシチン、
ショ糖脂肪酸エステル等の界面活性剤、タルク、ロウ類
等の滑沢剤、軽質無水ケイ酸、乾燥水酸化アルミニウム
ゲル等の流動促進剤、生理食塩水、ブドウ糖水溶液等の
希釈剤、矯味矯臭剤、着色剤、殺菌剤、防腐剤、香料等
が挙げられる。本発明の乳酸蓄積抑制剤の適応症として
は、虚弱体質、病中・病後や産前・産後の体力の回復、
慢性疲労症候群、過剰ストレス負荷状態の改善等が挙げ
られる。
るいは慣用の製剤担体と共に動物及び人に投与すること
が出来る。1日の好ましい有効投与量は、分子量57k
Daのタンパク質量として、0.01〜100mg/k
g体重/日、更に好ましい投与量は0.5〜50mg/
kg体重/日である。投与形態としては、特に限定はな
く、必要に応じて適宜選択して使用され、錠剤、カプセ
ル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤等の経口剤、注射剤、座剤
等の非経口剤が挙げられる。以上の製剤は、常法によっ
て製造される。通常知られた任意成分を本発明の分子量
57kDaのタンパク質の生理活性が損なわれない程度
に配合することが出来る。かかる任意成分として、白
糖、乳糖等の賦形剤、デンプン、ゼラチン等の結合剤、
カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメ
チルセルロースカルシウム等の崩壊剤、大豆レシチン、
ショ糖脂肪酸エステル等の界面活性剤、タルク、ロウ類
等の滑沢剤、軽質無水ケイ酸、乾燥水酸化アルミニウム
ゲル等の流動促進剤、生理食塩水、ブドウ糖水溶液等の
希釈剤、矯味矯臭剤、着色剤、殺菌剤、防腐剤、香料等
が挙げられる。本発明の乳酸蓄積抑制剤の適応症として
は、虚弱体質、病中・病後や産前・産後の体力の回復、
慢性疲労症候群、過剰ストレス負荷状態の改善等が挙げ
られる。
【0032】本発明の乳酸蓄積抑制剤を医薬として使用
する場合、57kDaタンパク質の配合量は、乳酸蓄積
抑制作用が期待できる量であれば限り特に制限されない
が、例えば、医薬全量に対して1〜30重量%が好まし
い。また、本発明の乳酸蓄積抑制剤は、食品に配合する
ことによって、乳酸蓄積抑制作用を有する機能性食品と
しても用いることができる。食品の成分としては、乳酸
蓄積抑制作用を害さない限り特に制限されない。食品へ
の配合量は、食品の味を損なわずに、且つ十分な乳酸蓄
積抑制作用が期待できる量であれば特に制限されない
が、例えば、1〜30重量%が好ましい。
する場合、57kDaタンパク質の配合量は、乳酸蓄積
抑制作用が期待できる量であれば限り特に制限されない
が、例えば、医薬全量に対して1〜30重量%が好まし
い。また、本発明の乳酸蓄積抑制剤は、食品に配合する
ことによって、乳酸蓄積抑制作用を有する機能性食品と
しても用いることができる。食品の成分としては、乳酸
蓄積抑制作用を害さない限り特に制限されない。食品へ
の配合量は、食品の味を損なわずに、且つ十分な乳酸蓄
積抑制作用が期待できる量であれば特に制限されない
が、例えば、1〜30重量%が好ましい。
【0033】
【実施例】以下に、実施例を挙げて本発明について更に
詳細に説明を加えるが、本発明がかかる実施例にのみ限
定を受けないことは、言うまでもない。
詳細に説明を加えるが、本発明がかかる実施例にのみ限
定を受けないことは、言うまでもない。
【0034】<実施例1>乳酸蓄積抑制剤のマウスに対
する乳酸蓄積抑制作用(マウス強制遊泳試験、抗疲労試
験) 実験動物としてddYマウス、5週齢、雄、1群10匹
を用いた。京大松元式マウス運動量測定流水槽を用い
て、マウスの強制遊泳による乳酸蓄積抑制剤の乳酸蓄積
抑制作用に対する影響を測定した。乳酸蓄積抑制剤とし
てのローヤルゼリー(ローヤルゼリー中の全タンパク質
における57kDaタンパク質含有量;11.6重量
%)を乾燥重量0.7g/kgで、遊泳試験の48、2
4、0.5時間前に、各被験マウスに経口投与した。次
に、1群10匹の該マウスを15分間遊泳させた後、1
0分間休息させ、再度前記ローヤルゼリーを同量投与し
た。さらに20分間休息させた後、15分間遊泳させ
た。そして、各マウスから採血し、FキットL乳酸(ベ
ーリンガー・マンハイム社製)を用いることにより、血
中の乳酸値を測定した。尚、劣化ローヤルゼリー(ロー
ヤルゼリー中のタンパク質全量における57kDaタン
パク質含有量;5.1重量%)投与群とコントロール実
験としてローヤルゼリー非投与のものも同様に実験を行
った。ローヤルゼリーの血中の乳酸値の抑制に対する影
響を測定することにより、乳酸蓄積抑制作用(抗疲労作
用)を測定した。結果を表1に示す。ローヤルゼリー投
与群が血中乳酸値が抑制されていることがわかる。
する乳酸蓄積抑制作用(マウス強制遊泳試験、抗疲労試
験) 実験動物としてddYマウス、5週齢、雄、1群10匹
を用いた。京大松元式マウス運動量測定流水槽を用い
て、マウスの強制遊泳による乳酸蓄積抑制剤の乳酸蓄積
抑制作用に対する影響を測定した。乳酸蓄積抑制剤とし
てのローヤルゼリー(ローヤルゼリー中の全タンパク質
における57kDaタンパク質含有量;11.6重量
%)を乾燥重量0.7g/kgで、遊泳試験の48、2
4、0.5時間前に、各被験マウスに経口投与した。次
に、1群10匹の該マウスを15分間遊泳させた後、1
0分間休息させ、再度前記ローヤルゼリーを同量投与し
た。さらに20分間休息させた後、15分間遊泳させ
た。そして、各マウスから採血し、FキットL乳酸(ベ
ーリンガー・マンハイム社製)を用いることにより、血
中の乳酸値を測定した。尚、劣化ローヤルゼリー(ロー
ヤルゼリー中のタンパク質全量における57kDaタン
パク質含有量;5.1重量%)投与群とコントロール実
験としてローヤルゼリー非投与のものも同様に実験を行
った。ローヤルゼリーの血中の乳酸値の抑制に対する影
響を測定することにより、乳酸蓄積抑制作用(抗疲労作
用)を測定した。結果を表1に示す。ローヤルゼリー投
与群が血中乳酸値が抑制されていることがわかる。
【0035】
【表1】表1 ───────────────────────── 投与群 血中乳酸値(mM) ───────────────────────── コントロール 4.05±0.15 ローヤルゼリー 3.86±0.24 劣化ローヤルゼリー 4.01±0.10 ─────────────────────────
【0036】<実施例2〜4>乳酸蓄積抑制剤としてロ
ーヤルゼリー(ローヤルゼリー中の全タンパク質におけ
る57kDaタンパク質の含有量;11.6重量%)を
用い、以下に示す処方に従って、医薬品を作成した。即
ち、処方成分を10重量部の水と共に転動相造粒し、打
錠して錠剤状の医薬品を得た。これらのものは何れも優
れた筋肉痛改善作用を有していた。尚、表中の数値の単
位は重量部を表す。
ーヤルゼリー(ローヤルゼリー中の全タンパク質におけ
る57kDaタンパク質の含有量;11.6重量%)を
用い、以下に示す処方に従って、医薬品を作成した。即
ち、処方成分を10重量部の水と共に転動相造粒し、打
錠して錠剤状の医薬品を得た。これらのものは何れも優
れた筋肉痛改善作用を有していた。尚、表中の数値の単
位は重量部を表す。
【0037】
【表2】 表2 ────────────────────────────────── 成分 実施例2 実施例3 実施例4 ────────────────────────────────── 乳糖 30 30 30 デンプン 37 32 27 結晶セルロース 18 18 18 ヒドロキシプロピルメチルセルロース 9 9 9 ステアリン酸マグネシウム 1 1 1 ローヤルゼリー 5 10 15 ──────────────────────────────────
【0038】<実施例5〜7>乳酸蓄積抑制剤としてロ
ーヤルゼリー(ローヤルゼリー中の全タンパク質におけ
る57kDaタンパク質の含有量;11.6重量%)を
用い、以下に示す処方に従って、健康食品を作成した。
即ち、処方成分を撹拌可溶化しドリンク製剤の健康食品
を得た。これらのものは何れも優れた疲労回復効果を有
していた。尚、表中の数値の単位は重量部を表す。
ーヤルゼリー(ローヤルゼリー中の全タンパク質におけ
る57kDaタンパク質の含有量;11.6重量%)を
用い、以下に示す処方に従って、健康食品を作成した。
即ち、処方成分を撹拌可溶化しドリンク製剤の健康食品
を得た。これらのものは何れも優れた疲労回復効果を有
していた。尚、表中の数値の単位は重量部を表す。
【0039】
【表3】 表3 ────────────────────────────────── 成分 実施例5 実施例6 実施例7 ────────────────────────────────── 水 82 77 72 イソオリゴ糖 12 12 12 ビタミンB6 0.5 0.5 0.5 アスコルビン酸ナトリウム 0.5 0.5 0.5 ローヤルゼリー 5 10 15 ──────────────────────────────────
【0040】
【発明の効果】本発明によれば、慢性疲労等の改善及び
予防をするのに好適な乳酸蓄積抑制剤を提供することが
出来る。
予防をするのに好適な乳酸蓄積抑制剤を提供することが
出来る。
【0041】
【配列表】 SEQUENCE LISTING <110> ポーラ化成工業株式会社 <120> 乳酸蓄積抑制剤 <130> P-6857 <140> <141>1999-12-15 <160> 3 <170> PatentIn Ver. 2.0
【0042】 <210> 1 <211> 25 <212> PRT <213> Apis mellifera <220> <221> UNSURE <222> (24) <223> Xaa=unkwnon <400> 1 Asn Ile Leu Arg Gly Glu Ser Leu Leu Lys Lys Leu Pro Ile Leu His 1 5 10 15 Glu Met Lys Phe Phe Asp Tyr Xaa Asp 20 25
【0043】 <210> 2 <211> 1430 <212> DNA <213> Apis mellifera <220> <221> CDS <222> (46)..(1341) <220> <221> sig_peptide <222> (46)..(102) <220> <221> mat_peptide <222> (103)..(1341) <220> <221> UNSURE <222> (1134) <223> n=a or g or c or t <400> 2 ttcacgtaca atattccatt gcttcgttac tcgcagctta gaaaa atg aca aga ttg 57 Met Thr Arg Leu ttt atg ctg gta tgc ctt ggc ata gtt tgt caa ggt acg aca ggc aac 105 Phe Met Leu Val Cys Leu Gly Ile Val Cys Gln Gly Thr Thr Gly Asn -15 -10 -5 -1 1 att ctt cga gga gag tct tta aac aaa tca tta ccc atc ctt cac gaa 153 Ile Leu Arg Gly Glu Ser Leu Asn Lys Ser Leu Pro Ile Leu His Glu 5 10 15 tgg aaa ttc ttt gat tat gat ttc ggt agc gat gaa aga aga caa gat 201 Trp Lys Phe Phe Asp Tyr Asp Phe Gly Ser Asp Glu Arg Arg Gln Asp 20 25 30 gca att cta tct ggc gaa tac gac tac aag aat aat tat cca tcc gac 249 Ala Ile Leu Ser Gly Glu Tyr Asp Tyr Lys Asn Asn Tyr Pro Ser Asp 35 40 45 att gac caa tgg cat gat aag att ttt gtc acc atg ctg aga tac aat 297 Ile Asp Gln Trp His Asp Lys Ile Phe Val Thr Met Leu Arg Tyr Asn 50 55 60 65 ggc gta cct tcc tct ttg aac gtg ata tct aaa aag gtc ggt gat ggt 345 Gly Val Pro Ser Ser Leu Asn Val Ile Ser Lys Lys Val Gly Asp Gly 70 75 80 ggt cct ctt cta caa cct tat ccc gat tgg tcg ttt gct aaa tat gac 393 Gly Pro Leu Leu Gln Pro Tyr Pro Asp Trp Ser Phe Ala Lys Tyr Asp 85 90 95 gat tgc tct gga atc gtg agc gcc tca aaa ctt gcg atc gac aaa tgc 441 Asp Cys Ser Gly Ile Val Ser Ala Ser Lys Leu Ala Ile Asp Lys Cys 100 105 110 gac aga ttg tgg gtt ctg gac tca ggt ctt gtc aat aat act caa ccc 489 Asp Arg Leu Trp Val Leu Asp Ser Gly Leu Val Asn Asn Thr Gln Pro 115 120 125 atg tgt tct cca aaa ctg ctc acc ttt gat ctg act acc tcg caa ttg 537 Met Cys Ser Pro Lys Leu Leu Thr Phe Asp Leu Thr Thr Ser Gln Leu 130 135 140 145 ctc aag caa gtt gaa ata cca cat gat gtt gcc gta aat gcc act aca 585 Leu Lys Gln Val Glu Ile Pro His Asp Val Ala Val Asn Ala Thr Thr 150 155 160 gga aag gga aga tta tca tct cta gct gtt caa tct tta gat tgc aat 633 Gly Lys Gly Arg Leu Ser Ser Leu Ala Val Gln Ser Leu Asp Cys Asn 165 170 175 aca aat agc gat act atg gtg tac ata gca gac gag aaa ggt gaa ggt 681 Thr Asn Ser Asp Thr Met Val Tyr Ile Ala Asp Glu Lys Gly Glu Gly 180 185 190 tta atc gtg tat cat aat tct gat gat tcc ttc cat cga ttg act tcc 729 Leu Ile Val Tyr His Asn Ser Asp Asp Ser Phe His Arg Leu Thr Ser 195 200 205 aac act ttc gat tac gat cct aaa ttt acc aaa atg acg atc gat gga 777 Asn Thr Phe Asp Tyr Asp Pro Lys Phe Thr Lys Met Thr Ile Asp Gly 210 215 220 225 gaa agt tac aca gcc caa gat gga att tct gga atg gct ctt agt ccc 825 Glu Ser Tyr Thr Ala Gln Asp Gly Ile Ser Gly Met Ala Leu Ser Pro 230 235 240 atg act aac aat ctc tat tac agt cct gta gct tcc acc agt ttg tat 873 Met Thr Asn Asn Leu Tyr Tyr Ser Pro Val Ala Ser Thr Ser Leu Tyr 245 250 255 tat gtt aac acg gaa caa ttc aga aca tcc gat tat caa cag aat gac 921 Tyr Val Asn Thr Glu Gln Phe Arg Thr Ser Asp Tyr Gln Gln Asn Asp 260 265 270 ata cat tac gaa gga gtc caa aat att ttg gat acc caa tcg tcc gct 969 Ile His Tyr Glu Gly Val Gln Asn Ile Leu Asp Thr Gln Ser Ser Ala 275 280 285 aaa gta gta tca aag agt ggc gtt ctc ttc ttc gga ttg gtg ggc gat 1017 Lys Val Val Ser Lys Ser Gly Val Leu Phe Phe Gly Leu Val Gly Asp 290 295 300 305 tca gct ctt ggc tgc tgg aac gaa cat cga aca ctt gaa aga cac aat 1065 Ser Ala Leu Gly Cys Trp Asn Glu His Arg Thr Leu Glu Arg His Asn 310 315 320 atc cgt acc gtc gct caa agt gat gag act ctt caa atg atc gct agc 1113 Ile Arg Thr Val Ala Gln Ser Asp Glu Thr Leu Gln Met Ile Ala Ser 325 330 335 atg aag att aag gaa gct ctn cca cac gtg cct ata ttc gat agg tat 1161 Met Lys Ile Lys Glu Ala Xaa Pro His Val Pro Ile Phe Asp Arg Tyr 340 345 350 ata aac cgt gaa tac ata ttg gtt tta agt aac aaa atg caa aaa atg 1209 Ile Asn Arg Glu Tyr Ile Leu Val Leu Ser Asn Lys Met Gln Lys Met 355 360 365 gtg aat aat gac ttc aac ttc gac gat gtt aac ttc aga att atg aac 1257 Val Asn Asn Asp Phe Asn Phe Asp Asp Val Asn Phe Arg Ile Met Asn 370 375 380 385 gcg aat gta aac gaa ttg ata ttg aac act cgt tgc gaa aat ccc gat 1305 Ala Asn Val Asn Glu Leu Ile Leu Asn Thr Arg Cys Glu Asn Pro Asp 390 395 400 aat gat cga aca cct ttc aaa att tca atc cat ttg taaaatctga 1351 Asn Asp Arg Thr Pro Phe Lys Ile Ser Ile His Leu 405 410 gttttttgtt atatattaaa tatttctcga aatttctttc cattatgaat gtataaaata 1411 aatattgttt tcgcataat 1430
【0044】 <210> 3 <211> 432 <212> PRT <213> Apis mellifera <220> <221> UNSURE <222> (344) <223> Xaa=unkwnon <400> 3 Met Thr Arg Leu Phe Met Leu Val Cys Leu Gly Ile Val Cys Gln Gly -15 -10 -5 Thr Thr Gly Asn Ile Leu Arg Gly Glu Ser Leu Asn Lys Ser Leu Pro -1 1 5 10 Ile Leu His Glu Trp Lys Phe Phe Asp Tyr Asp Phe Gly Ser Asp Glu 15 20 25 Arg Arg Gln Asp Ala Ile Leu Ser Gly Glu Tyr Asp Tyr Lys Asn Asn 30 35 40 45 Tyr Pro Ser Asp Ile Asp Gln Trp His Asp Lys Ile Phe Val Thr Met 50 55 60 Leu Arg Tyr Asn Gly Val Pro Ser Ser Leu Asn Val Ile Ser Lys Lys 65 70 75 Val Gly Asp Gly Gly Pro Leu Leu Gln Pro Tyr Pro Asp Trp Ser Phe 80 85 90 Ala Lys Tyr Asp Asp Cys Ser Gly Ile Val Ser Ala Ser Lys Leu Ala 95 100 105 Ile Asp Lys Cys Asp Arg Leu Trp Val Leu Asp Ser Gly Leu Val Asn 110 115 120 125 Asn Thr Gln Pro Met Cys Ser Pro Lys Leu Leu Thr Phe Asp Leu Thr 130 135 140 Thr Ser Gln Leu Leu Lys Gln Val Glu Ile Pro His Asp Val Ala Val 145 150 155 Asn Ala Thr Thr Gly Lys Gly Arg Leu Ser Ser Leu Ala Val Gln Ser 160 165 170 Leu Asp Cys Asn Thr Asn Ser Asp Thr Met Val Tyr Ile Ala Asp Glu 175 180 185 Lys Gly Glu Gly Leu Ile Val Tyr His Asn Ser Asp Asp Ser Phe His 190 195 200 205 Arg Leu Thr Ser Asn Thr Phe Asp Tyr Asp Pro Lys Phe Thr Lys Met 210 215 220 Thr Ile Asp Gly Glu Ser Tyr Thr Ala Gln Asp Gly Ile Ser Gly Met 225 230 235 Ala Leu Ser Pro Met Thr Asn Asn Leu Tyr Tyr Ser Pro Val Ala Ser 240 245 250 Thr Ser Leu Tyr Tyr Val Asn Thr Glu Gln Phe Arg Thr Ser Asp Tyr 255 260 265 Gln Gln Asn Asp Ile His Tyr Glu Gly Val Gln Asn Ile Leu Asp Thr 270 275 280 285 Gln Ser Ser Ala Lys Val Val Ser Lys Ser Gly Val Leu Phe Phe Gly 290 295 300 Leu Val Gly Asp Ser Ala Leu Gly Cys Trp Asn Glu His Arg Thr Leu 305 310 315 Glu Arg His Asn Ile Arg Thr Val Ala Gln Ser Asp Glu Thr Leu Gln 320 325 330 Met Ile Ala Ser Met Lys Ile Lys Glu Ala Xaa Pro His Val Pro Ile 335 340 345 Phe Asp Arg Tyr Ile Asn Arg Glu Tyr Ile Leu Val Leu Ser Asn Lys 350 355 360 365 Met Gln Lys Met Val Asn Asn Asp Phe Asn Phe Asp Asp Val Asn Phe 370 375 380 Arg Ile Met Asn Ala Asn Val Asn Glu Leu Ile Leu Asn Thr Arg Cys 385 390 395 Glu Asn Pro Asp Asn Asp Arg Thr Pro Phe Lys Ile Ser Ile His Leu 400 405 410
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 三谷 信 神奈川県横浜市戸塚区柏尾町560 ポーラ 化成工業株式会社戸塚研究所内 (72)発明者 宮崎 博隆 神奈川県横浜市戸塚区柏尾町560 ポーラ 化成工業株式会社戸塚研究所内 Fターム(参考) 4B018 LB08 LE05 MD20 MD23 MD25 MD31 MD77 ME02 ME14 4C084 AA02 BA22 CA49 MA52 NA14 ZC212 4C087 AA01 AA02 BB22 CA16 CA33 MA01 MA52 NA14 ZC21 4H045 AA10 AA30 BA53 CA51 EA01 EA20 FA71 GA10 GA22 HA04
Claims (8)
- 【請求項1】 乳酸蓄積抑制作用を有するローヤルゼリ
ー中のタンパク質を有効成分として含有する乳酸蓄積抑
制剤。 - 【請求項2】 前記タンパク質が下記の性質で特定され
るタンパク質である請求項1記載の乳酸蓄積抑制剤。 (a)ローヤルゼリー中のタンパク質の非変性ポリアク
リルアミドゲル電気泳動において単一のバンドを形成す
る。 (b)還元条件下でのSDS−ポリアクリルアミドゲル
電気泳動により測定される分子量:約57kDa。 - 【請求項3】 前記タンパク質が、トーソー株式会社製
TSKゲルG3000SW(7.5×30cm)をカラ
ムとして用いて、0.3M塩化ナトリウム、0.05%
アジ化ナトリウム含有0.1Mリン酸緩衝液(pH7.
0)を展開液とし、流速を0.3ml/min、カラム
温度を35℃に設定し、280nmの吸光度で検出す
る、高速液体クロマトグラフィーにおいて、保持時間2
5分〜30分にピークを有するタンパク質である、請求
項1又は2に記載の乳酸蓄積抑制剤。 - 【請求項4】 前記タンパク質が、配列番号1のアミノ
酸番号1〜8のアミノ酸配列を含むことを特徴とする請
求項1〜3のいずれか一項に記載の乳酸蓄積抑制剤。 - 【請求項5】 前記タンパク質を含有するローヤルゼリ
ーを含むことを特徴とする請求項1〜4のいずれか一項
に記載の乳酸蓄積抑制剤。 - 【請求項6】 前記ローヤルゼリー中の全タンパク質に
おける前記タンパク質の含有率が6重量%以上であるこ
とを特徴とする請求項5に記載の乳酸蓄積抑制剤。 - 【請求項7】 請求項1〜6のいずれか一項に記載の乳
酸蓄積抑制剤を含む医薬。 - 【請求項8】 請求項1〜6のいずれか一項に記載の乳
酸蓄積抑制剤を含む食品。
Priority Applications (1)
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JP35600699A JP2001172190A (ja) | 1999-12-15 | 1999-12-15 | 乳酸蓄積抑制剤 |
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JP35600699A JP2001172190A (ja) | 1999-12-15 | 1999-12-15 | 乳酸蓄積抑制剤 |
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JP2001172190A true JP2001172190A (ja) | 2001-06-26 |
JP2001172190A5 JP2001172190A5 (ja) | 2006-12-07 |
Family
ID=18446854
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Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
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JP35600699A Pending JP2001172190A (ja) | 1999-12-15 | 1999-12-15 | 乳酸蓄積抑制剤 |
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Country | Link |
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JP (1) | JP2001172190A (ja) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2003061648A (ja) * | 2001-08-29 | 2003-03-04 | Pola Chem Ind Inc | プロテインキナーゼb活性化剤 |
JP2003061649A (ja) * | 2001-08-29 | 2003-03-04 | Pola Chem Ind Inc | Mapキナーゼ活性化剤 |
JP2007137778A (ja) * | 2005-11-15 | 2007-06-07 | Pola Chem Ind Inc | 低密度リポタンパク受容体の発現促進剤及びそれを含有する食品 |
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JPH11285360A (ja) * | 1998-04-03 | 1999-10-19 | Seiwa Yakuhin Kk | 機能性健康食品 |
-
1999
- 1999-12-15 JP JP35600699A patent/JP2001172190A/ja active Pending
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