【００１０】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は総蛋白質の定量において問題とされていた干渉物質の影響が回避できる総蛋白質測定用キットを提供することにある。[0010]
[Problems to be solved by the invention]
An object of the present invention is to provide a kit for total protein measurement which can avoid the influence of interfering substances which have been a problem in the determination of total protein .
【００１１】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記の課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、干渉物質の影響が回避できる総蛋白質測定用キットを得ることに成功した。[0011]
[Means for Solving the Problems]
As a result of intensive studies to solve the above-mentioned problems, the present inventors succeeded in obtaining a kit for measuring a total protein in which the influence of interfering substances can be avoided .
【００１２】
本発明は以下の通りである。
（１）検体と第１液状試薬を反応させた後、第２液状試薬を反応させることによって検体中の蛋白質を定量する総蛋白質測定用キットであって、
第１液状試薬は銅イオンを含有し、第２液状試薬はアルカリ溶液からなる総蛋白質測定用キット。
（２）前記第２液状試薬が水酸化ナトリウム、水酸化リチウムおよび水酸化カリウムから選択される一以上の物質を含有する上記（１）に記載の総蛋白質測定用キット。
（３）前記第２液状試薬が水酸化リチウムを含有する上記（１）または（２）に記載の総蛋白質測定用キット。
（４）前記第１液状試薬が、硫酸銅、塩化銅および硝酸銅から選択される一以上の物質を含有する上記（１）〜（３）のいずれか１に記載の総蛋白質測定用キット。
（５）前記第１液状試薬のｐＨが１０〜１３の範囲にある上記（１）〜（４）のいずれか１に記載の総蛋白質測定用キット。
（６）前記第１液状試薬がキレート剤を含有する上記（１）〜（５）のいずれか１に記載の総蛋白質測定用キット。
（７）前記第１液状試薬の液量が第２液状試薬の液量より多いことを特徴とする上記（１）〜（６）のいずれか１に記載の総蛋白質測定用キット。 [0012]
The present invention is as follows.
(1) A kit for measuring a total protein, which comprises reacting a sample with a first liquid reagent and then reacting a second liquid reagent to quantify the protein in the sample,
A kit for total protein measurement, wherein the first liquid reagent contains copper ions, and the second liquid reagent is an alkaline solution.
(2) The kit for total protein measurement according to the above (1), wherein the second liquid reagent contains one or more substances selected from sodium hydroxide, lithium hydroxide and potassium hydroxide.
(3) The kit for total protein measurement according to (1) or (2) above, wherein the second liquid reagent contains lithium hydroxide.
(4) The kit for total protein measurement according to any one of the above (1) to (3), wherein the first liquid reagent contains one or more substances selected from copper sulfate, copper chloride and copper nitrate.
(5) The kit for total protein measurement according to any one of the above (1) to (4), wherein the pH of the first liquid reagent is in the range of 10 to 13.
(6) The kit for total protein measurement according to any one of the above (1) to (5), wherein the first liquid reagent contains a chelating agent.
(7) The kit for total protein measurement according to any one of the above (1) to (6), wherein the liquid volume of the first liquid reagent is larger than the liquid volume of the second liquid reagent.
【００１５】
本発明の総蛋白質の定量方法においては、まず最初に銅イオンを含む第１試薬と検体を反応させた後にアルカリ溶液を含む第２試薬と反応させる。銅イオンを含む試薬としては、本発明の目的に適合するものであれば全て用いることが出来る。例えば、硫酸銅溶液、塩化銅溶液、硝酸銅溶液などが例示される。銅イオンの反応液中での最終濃度は通常、例えば硫酸銅を使用した場合３〜３０ｍＭ、好ましくは６〜２０ｍＭ程度である。該溶液はｐＨが１０〜１３であることが好ましい。実施例１および２（図１および２）に示すようにｐＨを１０以上にすることによりヘモグロビン色素、ヘモグロビン蛋白質およびＢＳＰのようなアルカリ側で発色する色素の干渉を回避することができる。しかしながらｐＨが１３よりも高くなると蛋白質が発色し、測定が妨害される。[0015]
In a quantitative method of total protein of the present invention causes firstly reacted with a second reagent containing an alkaline solution after the reaction of the first reagent and the specimen containing copper ions. Any copper ion-containing reagent may be used as long as it meets the purpose of the present invention. For example, a copper sulfate solution, a copper chloride solution, a copper nitrate solution, etc. are illustrated. The final concentration of copper ions in the reaction solution is usually, for example, about 3 to 30 mM, preferably about 6 to 20 mM, when copper sulfate is used. The solution preferably has a pH of 10-13. By setting the pH to 10 or more as shown in Examples 1 and 2 (FIGS. 1 and 2), it is possible to avoid the interference of dyes that develop on the alkali side such as hemoglobin dyes, hemoglobin proteins and BSP. However, when the pH is higher than 13, the protein is colored and the measurement is interrupted.
【００２９】
【発明の効果】
本発明の総蛋白質測定用キットは特定の２試薬を用いて測定を行うので検体盲検の必要性がなくなり、乳びおよび溶血の干渉を回避することができる。はじめに加える第１液状試薬に銅イオンを添加することにより、ビリルビンの干渉、ビウレット反応陽性物質であるアミノ酸、糖類、クレアチニンなどの影響を回避することができる。さらにはじめに加える第１液状試薬のｐＨを１０〜１３に調製することによりヘモグロビン蛋白やＢＳＰなどのアルカリ側で発色する物質の影響も受けない。
また、後で加える第２液状試薬であるアルカリ溶液を水酸化リチウムで調製することにより少ないアルカリ量で感度良く測定できるため粘度を低く抑えることができ、分注時の誤差による再現性の低下が抑えられる。また使用するアルカリ溶液が少量ですむため廃液処理が容易で安全な試薬を供給できる。 [0029]
【Effect of the invention】
Since the kit for total protein measurement of the present invention performs measurement using two specific reagents, the need for sample blinding is eliminated, and interference with chyle and hemolysis can be avoided. By adding copper ions to the first liquid reagent to be added at the beginning, the effects of bilirubin interference, amino acids which are biuret reaction positive substances, saccharides, creatinine and the like can be avoided. Furthermore, by adjusting the pH of the first liquid reagent to be added to 10 to 10 to 13, it is not affected by substances that develop color on the alkali side, such as hemoglobin protein and BSP.
In addition, by preparing an alkaline solution, which is a second liquid reagent to be added later, with lithium hydroxide, it is possible to measure with a small amount of alkali with high sensitivity, so the viscosity can be suppressed low, and the reproducibility decreases due to errors in dispensing. It is suppressed. In addition, since a small amount of alkaline solution is used, waste liquid treatment is easy and safe reagents can be supplied .