JP2001078792A - ホスファチジン酸アルカリ金属塩またはホスファチジン酸アンモニウム塩の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 高純度のホスファチジン酸アルカリ金属塩ま
たはホスファチジン酸アンモニウム塩を高収率で得られ
る生産効率のよい製造方法を提供する。 【解決手段】 レシチンに対してホスホリパーゼＤを作
用させてホスファチジン酸アルカリ金属塩またはホスフ
ァチジン酸アンモニウム塩を得る際、ハロゲン系有機溶
媒をレシチンに対して５〜２００重量倍、アルカリ金属
塩化合物水溶液またはアンモニウム塩化合物水溶液をハ
ロゲン系有機溶媒に対して０．０１〜１０重量倍として
反応を行った後、水層のｐＨを８以下で分層させること
を特徴とするホスファチジン酸アルカリ金属塩またはホ
スファチジン酸アンモニウム塩の製造方法。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、ホスファチジン酸
アルカリ金属塩またはホスファチジン酸アンモニウム塩
の製造方法に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】ホスファチジン酸類は、化粧品、医薬品
等の分野において生化学的機能物質として注目されてい
る。ホスファチジン酸類は分子内に疎水基と親水基とを
併せ持つ両親媒性物質であり、疎水基であるアシル基や
親水基であるリン酸基に結合している陽イオンの種類に
よって界面活性などの特性が異なることから、ホスファ
チジン酸類を高純度化することにより、新しい機能を発
現させることが可能となる。特に、二つのアシル基を構
成する脂肪酸が飽和脂肪酸であるホスファチジン酸類は
空気酸化に対する安定性が高いため、化粧品、医薬品等
の分野において利用が期待されている。

【０００３】ホスファチジン酸類の製造方法としてはホ
スホリパーゼＤによるレシチンの加水分解が一般的であ
り、水、水に対する溶解度の大きい有機溶媒と水からな
る均一な混合溶媒、水に対する溶解度の小さい有機溶媒
と水からなる不均一な混合溶媒などの溶媒を用いること
が知られている。溶媒として水を単独で用いると、水に
対するレシチンの溶解度が低いことから水中に分散した
レシチンとホスポリパーゼＤ水溶液との固液界面におけ
る反応となり、反応性が低い。また、過剰の塩、レシチ
ンの加水分解により副生するコリンなどの水溶性副生成
物の混入が避けられない。水に対する溶解度の大きい有
機溶媒と水からなる均一な混合溶媒を用いると、ホスフ
ァチジン酸類を回収するために溶媒抽出などの繁雑な操
作が必要である。一方、水に対する溶解度の小さい有機
溶媒および水からなる不均一な混合溶媒を用いると、反
応終了後に反応液を静置するかまたは緩やかに攪拌する
ことで、反応液は有機溶媒層と水層とに分層する。有機
溶媒層から減圧条件下で溶媒を除去するなどの方法で容
易にホスファチジン酸類を回収することができるうえ
に、水溶性副生成物が水層に分配されることから、高純
度のホスファチジン酸類を高収率で得られる点で有用で
ある。

【０００４】しかし、得られるホスファチジン酸類がホ
スファチジン酸アルカリ金属塩やホスファチジン酸アン
モニウム塩である場合、水、有機溶媒およびホスファチ
ジン酸類が混和した乳化層を形成しやすい。乳化層から
のホスファチジン酸類の回収には繁雑な操作が必要であ
るうえに、水溶性副生成物の混入が避けられない。ま
た、これらの事情を勘案して乳化層からホスファチジン
酸類を回収しないと、収率が低くなる。ホスホリパーゼ
Ｄを用いるレシチンの加水分解によるホスファチジン酸
類の製造においては、塩化カルシウムのようなアルカリ
土類金属塩化合物を活性化剤として反応に使用するのが
一般的であるが、この場合にはホスファチジン酸アルカ
リ土類金属塩が生成し、水に対する溶解度の小さい有機
溶媒および水からなる不均一な混合溶媒を用いると比較
的分層が容易になる。しかし、ホスファチジン酸アルカ
リ土類金属塩が生成するとホスファチジン酸アルカリ金
属塩またはホスファチジン酸アンモニウム塩の純度が低
くなるうえ、ホスファチジン酸アルカリ金属塩またはホ
スファチジン酸アンモニウム塩自身の特性に影響を及ぼ
すおそれがあるため、高純度のホスファチジン酸アルカ
リ金属塩またはホスファチジン酸アンモニウム塩を得る
ためには生成したホスファチジン酸アルカリ土類金属塩
を除去するか、アルカリ土類金属塩化合物を反応に使用
しない必要がある。ホスファチジン酸アルカリ土類金属
塩を除去する方法としては、例えば塩交換が挙げられ
る。しかし、塩交換を行う場合には繁雑な工程が必要と
なり収率が低くなるうえに、ホスファチジン酸の加水分
解が起こりリゾホスファチジン酸類や脂肪酸などが副生
するため、純度が低くなる。よって、高純度のホスファ
チジン酸アルカリ金属塩またはホスファチジン酸アンモ
ニウム塩を得るためには、アルカリ土類金属塩化合物を
反応に使用しないことが好ましいが、乳化層を形成しや
すい。特に、二つのアシル基を構成する脂肪酸が飽和脂
肪酸であるホスファチジン酸アルカリ金属塩またはホス
ファチジン酸アンモニウム塩を得る場合には強固な乳化
層を容易に形成する。

【０００５】ホスファチジン酸類の製造方法として、以
下の方法が知られている。 （１）水、有機溶媒、リン脂質からなる均一層中でリン
脂質にホスホリパーゼを作用させて加水分解反応を行う
方法（特開昭６３―２４５６８５号公報）。 （２）リン脂質を油糧種子の破砕物または抽出液で処理
する方法（特開平２―１８６９４６号公報、特開平２―
３１２５５０号公報、特開平２―３１２５５２号公報お
よび特開平４―２６６８９２号公報）。 （３）リン脂質をホスファチジン酸と含窒素塩基に加水
分解する酵素と、リン脂質をジグリセリドとホスホリル
塩基に加水分解する酵素とで処理する方法（特開平２―
３１２５５１号公報）。 （４）固定化酵素による方法（特開平４―６６０９１号
公報）。 （５）活性剤存在下で酵素処理する方法（特開平４―１
４５０８８号公報）。 （６）機械的分散力により粉末レシチンの粒径を１００
μｍ以下に制御しつつ酵素処理する方法（特開平４―２
６７８８２号公報）。 （７）酢酸エチルやヘキサンなど水に対する溶解度の小
さい有機混合溶媒と水からなる不均一な混合溶媒を用い
て反応を行い、有機混合溶媒層より回収する方法（特開
平３―４７９５号公報）。

【０００６】（１）の方法は、有機溶媒と水からなる均
一な混合溶媒からホスファチジン酸類を回収するため
に、溶媒抽出などの繁雑な操作が必要である。（２）の
方法は、多価金属塩を使用するためホスファチジン酸多
価金属塩が生成し、ホスファチジン酸アルカリ金属塩ま
たはホスファチジン酸アンモニウム塩の純度が低い。
（３）の方法は、得られるホスファチジン酸類がホスフ
ァチジン酸アルカリ金属塩やホスファチジン酸アンモニ
ウム塩である場合、乳化層を形成しやすい。（４）の方
法は、酵素の固定化などの繁雑な操作が必要である。
（５）の方法は、水溶性副生成物の混入が避けられな
い。（６）の方法は、水溶性副生成物の混入が避けられ
ないうえ、反応中のレシチンの粒径を制御するための機
械的分散力を与える手段が必要である。（７）の方法
は、得られるホスファチジン酸類がホスファチジン酸ア
ルカリ金属塩やホスファチジン酸アンモニウム塩である
場合、乳化層を形成しやすい。このように、高純度のホ
スファチジン酸アルカリ金属塩またはホスファチジン酸
アンモニウム塩を高収率で得られる、生産効率のよい製
造方法は開発されていない。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、上記事情に
鑑み、高純度のホスファチジン酸アルカリ金属塩または
ホスファチジン酸アンモニウム塩を高収率で得られる生
産効率のよい製造方法を提供することを目的としてい
る。

【０００８】

【課題を解決するための手段】すなわち本発明は、レシ
チンに対してホスホリパーゼＤを作用させてホスファチ
ジン酸アルカリ金属塩またはホスファチジン酸アンモニ
ウム塩を得る際、ハロゲン系有機溶媒をレシチンに対し
て５〜２００重量倍、アルカリ金属塩化合物水溶液また
はアンモニウム塩化合物水溶液をハロゲン系有機溶媒に
対して０．０１〜１０重量倍として反応を行った後、水
層のｐＨを８以下で分層させることを特徴とするホスフ
ァチジン酸アルカリ金属塩またはホスファチジン酸アン
モニウム塩の製造方法である。

【０００９】

【発明の実施の形態】本発明に用いるレシチンは、その
二つのアシル基を構成する脂肪酸が炭素数１２〜２２の
飽和または不飽和の脂肪酸であり、例えばラウリン酸、
トリデカン酸、ミリスチン酸、ペンタデカン酸、パルミ
チン酸、マルガリン酸、ステアリン酸、アラキン酸、ベ
ヘン酸などの飽和カルボン酸およびミリストレイン酸、
パルミトレイン酸、オレイン酸、エライジン酸、ペトロ
セリン酸、ゴンドイン酸、リノール酸、リノレン酸、ア
ラキドン酸、エイコサペンタエン酸、エルカ酸、ドコサ
テトラエン酸、ドコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン
酸等の不飽和脂肪酸などの１種または２種以上の混合物
が挙げられ、大豆レシチン、卵黄レシチン、水素添加大
豆レシチン、水素添加卵黄レシチンなどを用いてもよ
い。二つのアシル基を構成する脂肪酸は飽和脂肪酸を用
いることが好ましい。

【００１０】本発明に用いるレシチンの純度は好ましく
は７０％以上であり、さらに好ましくは９０％以上であ
る。レシチンの純度が低いと、得られるホスファチジン
酸アルカリ金属塩またはホスファチジン酸アンモニウム
塩の純度が低くなるうえ、分層性が不良となるおそれが
ある。

【００１１】本発明に用いるホスホリパーゼＤは、好ま
しくは微生物または植物由来のホスホリパーゼＤであ
り、さらに好ましくはストレプトマイセス属由来のホス
ホリパーゼＤであり、例えばストレプトマイセス・クロ
モフオスカス、ストレプトマイセス・ハチジヨウエンシ
ス、ステレプトマイセス・プルニコーラなどのホスホリ
パーゼ生産菌から得られるホスホリパーゼＤが挙げられ
る。ホスホリパーゼＤの使用量は通常レシチン１ｇに対
して５〜１０００国際単位である。

【００１２】本発明に用いるハロゲン系有機溶媒とし
て、例えばクロロホルム、塩化メチレン、塩化メチル、
塩化エチル、塩化エチレンなどが挙げられ、好ましくは
クロロホルムまたは塩化メチレンであり、さらに好まし
くはクロロホルムである。アルコールは塩基交換反応の
基質となるため、アルコールフリーのクロロホルムを用
い、アルコールも使用しないことが好ましい。酢酸エチ
ル、ジエチルエーテル、ヘキサンなど、ハロゲン系有機
溶媒およびアルコール以外の有機溶媒は、ハロゲン系有
機溶媒の５重量％未満なら存在しても本発明の効果を阻
害しないが、使用しないのが好ましい。ハロゲン系有機
溶剤以外の有機溶剤のみを用いたり、ハロゲン系有機溶
媒以外の他の有機溶媒がハロゲン系有機溶媒の５重量％
以上存在する場合、分層性が不良となることがある。ハ
ロゲン系有機溶媒の量はレシチンに対して５〜２００重
量倍であり、好ましくは１０〜１００重量倍である。５
重量倍未満では純度が低くなり、２００重量倍を越える
と純度および生産効率が低くなる。

【００１３】本発明に用いるアルカリ金属塩化合物とし
ては、ナトリウム、カリウム、リチウムなどの水酸化
物、ハロゲン化物、無機塩、有機酸塩などが挙げられ、
アンモニウム塩化合物としてはアンモニアの水酸化物、
ハロゲン化物、無機塩、有機酸塩などが挙げられる。例
えば無機塩としては硝酸、炭酸、リン酸、ケイ酸、硫
酸、ホウ酸などの塩が挙げられ、例えば有機酸塩として
は酢酸、酪酸、クエン酸、ギ酸、グルコン酸、リンゴ
酸、マレイン酸、マロン酸、乳酸、フタル酸、フマル
酸、シュウ酸、コハク酸、酒石酸などの塩が挙げられ、
１種または２種以上を混合して用いる。好ましくはアル
カリ金属またはアンモニアの水酸化物、塩化物、炭酸
塩、リン酸塩、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩であり、
例えば水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アン
モニウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化アンモ
ニウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム、炭酸
水素アンモニウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭
酸アンモニウム、リン酸二水素ナトリウム、リン酸二水
素カリウム、リン酸二水素アンモニウム、リン酸水素二
ナトリウム、リン酸水素二カリウム、リン酸水素二アン
モニウム、リン酸三ナトリウム、リン酸三カリウム、リ
ン酸三アンモニウム、四ホウ酸ナトリウム、四ホウ酸カ
リウム、ホウ酸アンモニウム、酢酸ナトリウム、酢酸カ
リウム、酢酸アンモニウム、クエン酸二水素ナトリウ
ム、クエン酸二水素カリウム、クエン酸二水素アンモニ
ウム、クエン酸水素二ナトリウム、クエン酸水素二カリ
ウム、クエン酸水素二アンモニウム、クエン酸三ナトリ
ウム、クエン酸三カリウム、クエン酸三アンモニウムな
どが挙げられ、特に好ましくは炭酸水素ナトリウム、炭
酸水素カリウム、炭酸水素アンモニウム、炭酸ナトリウ
ム、炭酸カリウム、炭酸アンモニウム、四ホウ酸ナトリ
ウム、四ホウ酸カリウム、ホウ酸アンモニウム、酢酸ナ
トリウム、酢酸カリウム、酢酸アンモニウムである。

【００１４】本発明に用いるアルカリ金属塩化合物また
はアンモニウム塩化合物の水溶液中の濃度は、好ましく
は０．００５〜３Ｍである。本発明に用いる水は、イオ
ン交換水、蒸留水、注射用水などが好ましい。本発明に
用いるアルカリ金属塩化合物水溶液またはアンモニウム
塩化合物水溶液は、緩衝液であることが好ましく、例え
ば酢酸／酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４〜６）、酢酸／
酢酸カリウム緩衝液（ｐＨ４〜６）、酢酸／酢酸アンモ
ニウム緩衝液（ｐＨ４〜６）、リン酸緩衝液（ｐＨ６〜
８）、クエン酸／クエン酸三ナトリウム緩衝液（ｐＨ３
〜６）、アンモニア／塩化アンモニウム緩衝液（ｐＨ８
〜１１）などが挙げられる。反応時のアルカリ金属塩化
合物水溶液またはアンモニウム塩化合物水溶液のｐＨ
は、使用するホスホリパーゼＤの至適ｐＨなどに応じて
任意に決定すればよい。

【００１５】本発明に用いるアルカリ金属塩化合物水溶
液またはアンモニウム塩化合物水溶液の量は、ハロゲン
系有機溶媒に対して０．０１〜１０重量倍である。０．
０１重量倍未満または１０重量倍を越えると純度が低く
なる。好ましくは０．１〜２重量倍である。本発明に用
いるハロゲン系有機溶媒と水溶液との合計量は、好まし
くはレシチンの１０〜３００重量倍であり、さらに好ま
しくは２０〜１００重量倍である。反応温度は、使用す
るホスホリパーゼＤの至適温度付近であり、好ましくは
２０〜６０℃である。さらに好ましくは３０〜５０℃で
ある。反応時間はホスポリパーゼＤの使用量や反応温度
などによって異なるが、通常は１〜４８時間である。

【００１６】本発明において、反応を行った後に水層の
ｐＨを８以下で分層させる。ｐＨ８を越えると分層性が
不良となる。好ましくはｐＨ３〜７であり、さらに好ま
しくはｐＨ５〜６．５である。反応終了時の水層のｐＨ
が８を越える場合、酸または緩衝液などを添加して水層
のｐＨを８以下となるように調整した後分層を行う。添
加する酸としては、例えば酢酸、塩酸、硝酸、硫酸、ギ
酸、リン酸、リンゴ酸、クエン酸、シュウ酸、コハク
酸、フマル酸、マレイン酸、酒石酸、酪酸、乳酸、ホウ
酸、グルコン酸、マロン酸またはその水溶液の１種また
は２種以上が挙げられ、好ましくは酢酸、リン酸、クエ
ン酸またはその水溶液である。添加する緩衝液として
は、例えば酢酸／酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４〜
６）、酢酸／酢酸カリウム緩衝液（ｐＨ４〜６）、酢酸
／酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ４〜６）、リン酸緩衝
液（ｐＨ６〜８）、クエン酸／クエン酸三ナトリウム緩
衝液（ｐＨ３〜６）などが挙げられる。反応終了時の水
層のｐＨが８以下である場合、ｐＨを調整する工程を省
略することができるため好ましい。反応終了後に水層の
ｐＨを８以下にした後、反応液を静置するかまたは緩や
かに攪拌することで、反応液は有機溶媒層と水層とに速
やかに分層する。このときの反応液の温度は、好ましく
は２０〜６０℃であり、さらに好ましくは３０〜５０℃
である。

【００１７】分層した反応液から、有機溶媒層を分取す
る。ホスファチジン酸アルカリ金属塩またはホスファチ
ジン酸アンモニウム塩は有機溶媒層に分配されるため、
分取した有機溶媒層から高純度のホスファチジン酸アル
カリ金属塩またはホスファチジン酸アンモニウム塩を高
収率で得ることができる。有機溶媒層からのホスファチ
ジン酸アルカリ金属塩またはホスファチジン酸アンモニ
ウム塩の回収方法としては、公知の方法を適用すること
ができる。例えば減圧条件下で溶媒を除去する方法、ア
セトンなどを加えて沈殿として回収する方法などが挙げ
られる。

【００１８】

【発明の効果】本発明における製造方法により、高純度
のホスファチジン酸アルカリ金属塩またはホスファチジ
ン酸アンモニウム塩を高収率で得ることができる。特
に、二つのアシル基を構成する脂肪酸が飽和脂肪酸であ
るホスファチジン酸アルカリ金属塩またはホスファチジ
ン酸アンモニウム塩を得るのに好適である。この製造方
法により得られるホスファチジン酸アルカリ金属塩また
はホスファチジン酸アンモニウム塩は、高純度であるの
で化粧品、医薬品分野などの用途に特に有用である。

【００１９】

【実施例】以下、実施例および比較例に基づいて本発明
を具体的に説明する。反応液の分層性については、反応
液の分層状態を目視により観察した。 ○：有機溶媒層と水層とに分層した ×：有機溶媒層と水層との間に乳化層の形成がみられた

【００２０】収率については、分層した有機溶媒層を分
取し、エバポレーターにより有機溶媒を留去して得た乾
固物を秤量することにより求めた。乾固物中のホスファ
チジン酸類含量については、ＴＬＣ（薄層クロマトグラ
フィー）により求めた。プレートとしては２５０μｍシ
リカゲルを用い、クロロホルム：メタノール：２８％ア
ンモニア水＝６０：３５：８（容量比）で展開し、無水
硫酸銅１０ｇと８５％リン酸８ｍＬを蒸留水で１００ｍ
Ｌとした検出試薬を噴霧後加熱する方法により行った。
なお、ホスファチジン酸類とはホスファチジン酸アルカ
リ金属塩、ホスファチジン酸アンモニウム塩、ホスファ
チジン酸アルカリ土類金属塩、ホスファチジン酸の総称
を示す。乾固物中のナトリウム含量、カリウム含量およ
びカルシウム含量については、第十三改正日本薬局方に
準拠した原子吸光光度法により求めた。乾固物中の窒素
含量については、第十三改正日本薬局方に準拠した窒素
定量法により求めた。乾固物中のホスファチジン酸アル
カリ金属塩またはホスファチジン酸アンモニウム塩の純
度は、下記の式に従って求めた。

【００２１】ホスファチジン酸アルカリ金属塩またはホ
スファチジン酸アンモニウム塩の純度（％）＝ホスファ
チジン酸類含量（％）―ホスファチジン酸カルシウム塩
含量（％）^＊ ＊ホスファチジン酸カルシウム塩含量（％）＝（カルシ
ウム含量（％）／４０．０７８）×得られるホスファチ
ジン酸カルシウム塩の分子量 乾固物におけるホスファチジン酸アルカリ金属塩または
ホスファチジン酸アンモニウム塩に対するアルカリ金属
またはアンモニアの中和モル比は、下記の式に従って求
めた。 中和モル比＝（ホスファチジン酸アルカリ金属塩または
ホスファチジン酸アンモニウム塩の分子量／乾固物中の
ホスファチジン酸アルカリ金属塩またはホスファチジン
酸アンモニウム塩の純度（％））×（乾固物中のアルカ
リ金属または窒素の含量（％）／アルカリ金属または窒
素の分子量）

【００２２】実施例１ １０００ｍＬの酵素反応槽に、１０ｇの１、２―ジパル
ミトイル―ｓｎ―グリセロ―ホスフォコリン（純度９
９．９％）を４５０ｇのクロロホルムに混合した溶液を
加えた。これに、１０００国際単位のストレプトマイセ
ス属の微生物由来のホスホリパーゼＤ（旭化成(株)製Ｐ
ＬＤＰ）を含む１Ｍ酢酸／酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ
６．０）１５０ｇを加え、攪拌機にて混合した。反応液
を攪拌しながら４０℃に維持して反応を進行させ、２４
時間後に攪拌を停止した。反応終了時の水層のｐＨは
６．１であった。反応液を４０℃に維持して１時間静置
し、分層させた。有機溶媒層を分取し、エバポレーター
により溶媒を留去して乾固物を得た。分層性、収率、ホ
スファチジン酸類含量、ナトリウム含量、カリウム含
量、カルシウム含量、窒素含量、ホスファチジン酸ナト
リウム塩純度および中和モル比を表１に示す。

【００２３】実施例２ １０００ｍＬの酵素反応槽に、１０ｇの１、２―ジパル
ミトイル―ｓｎ―グリセロ―ホスフォコリン（純度９
９．９％）を４００ｇのクロロホルムに混合した溶液を
加えた。これに、２０００国際単位のストレプトマイセ
ス属の微生物由来のホスホリパーゼＤ（旭化成(株)製Ｐ
ＬＤ）を含む０．０２５Ｍ四ホウ酸ナトリウム／塩酸緩
衝液（ｐＨ８．６）１５０ｇを加え、攪拌機にて混合し
た。反応液を攪拌しながら４０℃に維持して反応を進行
させ、８時間後に攪拌を停止した。反応終了時の水層の
ｐＨは８．５であった。反応液に酢酸を加えて水層のｐ
Ｈを６．０に調整した後、反応液を４０℃に維持して１
時間静置し、分層させた。有機溶媒層を分取し、エバポ
レーターにより溶媒を留去して乾固物を得た。分層性、
収率、ホスファチジン酸類含量、ナトリウム含量、カリ
ウム含量、カルシウム含量、窒素含量、ホスファチジン
酸ナトリウム塩純度および中和モル比を表１に示す。

【００２４】実施例３ １０００ｍＬの酵素反応槽に、１０ｇの１、２―ジミリ
ストイル―ｓｎ―グリセロ―ホスフォコリン（純度９
９．９％）を３００ｇのクロロホルムに混合した溶液を
加えた。これに、２０００国際単位のストレプトマイセ
ス属の微生物由来のホスホリパーゼＤ（旭化成(株)製Ｐ
ＬＤＰ）を含む１Ｍ酢酸／酢酸アンモニウム緩衝液（ｐ
Ｈ６．５）３００ｇを加え、攪拌機にて混合した。反応
液を攪拌しながら４０℃に維持して反応を進行させ、８
時間後に攪拌を停止した。反応終了時の水層のｐＨは
６．５であった。反応液を４０℃に維持して１時間静置
し、分層させた。有機溶媒層を分取し、エバポレーター
により溶媒を留去して乾固物を得た。分層性、収率、ホ
スファチジン酸類含量、ナトリウム含量、カリウム含
量、カルシウム含量、窒素含量、ホスファチジン酸アン
モニウム塩純度および中和モル比を表１に示す。

【００２５】実施例４ １０００ｍＬの酵素反応槽に、１０ｇの水添卵黄レシチ
ン（純度９９．１％）を４５０ｇのクロロホルムに混合
した溶液を加えた。これに、５００国際単位のストレプ
トマイセス属の微生物由来のホスホリパーゼＤ（旭化成
(株)製ＰＬＤ）を含む１Ｍ酢酸／酢酸カリウム緩衝液
（ｐＨ８．６）４５０ｇを加え、攪拌機にて混合した。
反応液を攪拌しながら４０℃に維持して反応を進行さ
せ、２４時間後に攪拌を停止した。反応終了時の水層の
ｐＨは８．５であった。反応液に酢酸を加えて、水層の
ｐＨを５．５に調整した後、反応液を４０℃に維持して
１時間静置し、分層させた。有機溶媒層を分取し、エバ
ポレーターにより溶媒を留去して乾固物を得た。分層
性、収率、ホスファチジン酸類含量、ナトリウム含量、
カリウム含量、カルシウム含量、窒素含量、ホスファチ
ジン酸カリウム塩純度および中和モル比を表１に示す。

【００２６】実施例５ １０００ｍＬの酵素反応槽に、１０ｇの水添卵黄レシチ
ン（純度９９．１％）を６００ｇのクロロホルムに混合
した溶液を加えた。これに、１０００国際単位のストレ
プトマイセス属の微生物由来のホスホリパーゼＤ（旭化
成(株)製ＰＬＤ）および０．６Ｍ塩化ナトリウムを含む
０．１Ｍ炭酸水素ナトリウム水溶液（ｐＨ８．０）２０
０ｇを加え、攪拌機にて混合した。反応液を攪拌しなが
ら４０℃に維持して反応を進行させ、８時間後に攪拌を
停止した。反応終了時の水層のｐＨは８．７であった。
反応液に酢酸を加えて、水層のｐＨを５．０に調整した
後、反応液を４０℃に維持して１時間静置し、分層させ
た。有機溶媒層を分取し、エバポレーターにより溶媒を
留去して乾固物を得た。分層性、収率、ホスファチジン
酸類含量、ナトリウム含量、カリウム含量、カルシウム
含量、窒素含量、ホスファチジン酸ナトリウム塩純度お
よび中和モル比を表１に示す。

【００２７】実施例６ １０００ｍＬの酵素反応槽に、１０ｇの大豆レシチン
（純度９７．６％）を１５０ｇのクロロホルムと１ｇの
酢酸エチルに混合した溶液を加えた。これに、５００国
際単位のストレプトマイセス属の微生物由来のホスホリ
パーゼＤ（旭化成(株)製ＰＬＤＰ）を含む１Ｍ酢酸／酢
酸カリウム緩衝液（ｐＨ６．０）１００ｇを加え、攪拌
機にて混合した。反応液を攪拌しながら４０℃に維持し
て反応を進行させ、２４時間後に攪拌を停止した。反応
終了時の水層のｐＨは６．１であった。反応液を４０℃
に維持して１時間静置し、分層させた。有機溶媒層を分
取し、エバポレーターにより溶媒を留去して乾固物を得
た。分層性、収率、ホスファチジン酸類含量、ナトリウ
ム含量、カリウム含量、カルシウム含量、窒素含量、ホ
スファチジン酸カリウム塩純度および中和モル比を表１
に示す。

【００２８】実施例７ １０００ｍＬの酵素反応槽に、１０ｇの大豆レシチン
（純度９７．６％）を２００ｇの塩化メチレンに混合し
た溶液を加えた。これに、１５００国際単位のストレプ
トマイセス属の微生物由来のホスホリパーゼＤ（旭化成
(株)製ＰＬＤＰ）を含む１Ｍ酢酸／酢酸ナトリウム緩衝
液（ｐＨ５．５）１００ｇを加え、攪拌機にて混合し
た。反応液を攪拌しながら４０℃に維持して反応を進行
させ、８時間後に攪拌を停止した。反応終了時の水層の
ｐＨは５．６であった。反応液を４０℃に維持して１時
間静置し、分層させた。有機溶媒層を分取し、エバポレ
ーターにより溶媒を留去して乾固物を得た。分層性、収
率、ホスファチジン酸類含量、ナトリウム含量、カリウ
ム含量、カルシウム含量、窒素含量、ホスファチジン酸
ナトリウム塩純度および中和モル比を表１に示す。

【００２９】比較例１ １０００ｍＬの酵素反応槽に、１０ｇの１、２―ジパル
ミトイル―ｓｎ―グリセロ―ホスフォコリン（純度９
９．９％）を２５０ｇの酢酸エチルおよび２００ｇのｎ
−ヘキサンに混合した溶液を加えた。これに、１０００
国際単位のストレプトマイセス属の微生物由来のホスホ
リパーゼＤ（旭化成(株)製ＰＬＤＰ）を含む１Ｍ酢酸／
酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．５）３００ｇを加え、
攪拌機にて混合した。反応液を攪拌しながら４０℃に維
持して反応を進行させ、８時間後に攪拌を停止した。反
応終了時の水層のｐＨは６．５であった。反応液を４０
℃に維持して１時間静置したが、有機溶媒層と水層との
間に乳化層が形成されたままであった。有機溶媒層を分
取し、エバポレーターにより溶媒を留去したところ、乾
固物は１％未満であった。そこで乳化層の一部を回収し
て、５０００回転×２０分間遠心分離し、得られたペー
スト状物質からエバポレーターにより溶媒を留去して乾
固物を得た。分層性、収率、ホスファチジン酸類含量、
ナトリウム含量、カリウム含量、カルシウム含量、窒素
含量、ホスファチジン酸ナトリウム塩純度および中和モ
ル比を表２に示す。

【００３０】比較例２ １０００ｍＬの酵素反応槽に、１０ｇの水添卵黄レシチ
ン（純度９９．１％）を２００ｇのクロロホルムおよび
２００ｇの酢酸エチルに混合した溶液を加えた。これ
に、５００国際単位のストレプトマイセス属の微生物由
来のホスホリパーゼＤ（旭化成(株)製ＰＬＤＰ）を含む
１Ｍ酢酸／酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．０）１５０
ｇを加え、攪拌機にて混合した。反応液を攪拌しながら
４０℃に維持して反応を進行させ、２４時間後に攪拌を
停止した。反応終了時の水層のｐＨは６．１であった。
反応液を４０℃に維持して１時間静置したが、有機溶媒
層と水層との間に乳化層が形成されたままであった。有
機溶媒層を分取し、エバポレーターにより溶媒を留去し
て乾固物を得た。分層性、収率、ホスファチジン酸類含
量、ナトリウム含量、カリウム含量、カルシウム含量、
窒素含量、ホスファチジン酸ナトリウム塩純度および中
和モル比を表２に示す。

【００３１】比較例３ １０００ｍＬの酵素反応槽に、１０ｇの１、２―ジパル
ミトイル―ｓｎ―グリセロ―ホスフォコリン（純度９
９．９％）を３００ｇのクロロホルムに混合した溶液を
加えた。これに、１０００国際単位のストレプトマイセ
ス属の微生物由来のホスホリパーゼＤ（旭化成(株)製Ｐ
ＬＤ）を含む０．０２５Ｍ四ホウ酸ナトリウム／塩酸緩
衝液（ｐＨ８．６）２００ｇを加え、攪拌機にて混合し
た。反応液を攪拌しながら４０℃に維持して反応を進行
させ、２４時間後に攪拌を停止した。反応終了時の水層
のｐＨは８．５であった。反応液を４０℃に維持して１
時間静置したが、有機溶媒層と水層との間に乳化層が形
成されたままであった。有機溶媒層を分取し、エバポレ
ーターにより溶媒を留去して乾固物を得た。分層性、収
率、ホスファチジン酸類含量、ナトリウム含量、カリウ
ム含量、カルシウム含量、窒素含量、ホスファチジン酸
ナトリウム塩純度および中和モル比を表２に示す。

【００３２】比較例４ １０００ｍＬの酵素反応槽に、１０ｇの大豆レシチン
（純度９７．６％）を２００ｇの酢酸エチルおよび２０
０ｇのｎ−ヘキサンに混合した溶液を加えた。これに、
１０００国際単位のストレプトマイセス属の微生物由来
のホスホリパーゼＤ（旭化成(株)製ＰＬＤＰ）および１
０００ｍｇの塩化カルシウムを含む１Ｍ酢酸／酢酸ナト
リウム緩衝液（ｐＨ６．５）１５０ｇを加え、攪拌機に
て混合した。反応液を攪拌しながら４０℃に維持して反
応を進行させ、８時間後に攪拌を停止した。反応終了時
の水層のｐＨは６．５であった。反応液を４０℃に維持
して静置し、分層させた。有機溶媒層を分取し、エバポ
レーターにより溶媒を留去して乾固物を得た。分層性、
収率、ホスファチジン酸類含量、ナトリウム含量、カリ
ウム含量、カルシウム含量、窒素含量、ホスファチジン
酸ナトリウム塩純度および中和モル比を表２に示す。

【００３３】比較例５ １０００ｍＬの酵素反応槽に、１０ｇの１、２―ジパル
ミトイル―ｓｎ―グリセロ―ホスフォコリン（純度９
９．９％）を６００ｇのクロロホルムに混合した溶液を
加えた。これに、１０００国際単位のストレプトマイセ
ス属の微生物由来のホスホリパーゼＤ（旭化成(株)製Ｐ
ＬＤＰ）および６００ｍｇの塩化カルシウムを含む１Ｍ
酢酸／酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．０）４５０ｇを
加え、攪拌機にて混合した。反応液を攪拌しながら４０
℃に維持して反応を進行させ、８時間後に攪拌を停止し
た。反応終了時の水層のｐＨは６．１であった。反応液
を４０℃に維持して静置し、分層させた。有機溶媒層を
分取し、エバポレーターにより溶媒を留去して乾固物を
得た。分層性、収率、ホスファチジン酸類含量、ナトリ
ウム含量、カリウム含量、カルシウム含量、窒素含量、
ホスファチジン酸ナトリウム塩純度および中和モル比を
表２に示す。

【００３４】

【表１】

【００３５】

【表２】

【００３６】本発明における製造方法により、高純度の
ホスファチジン酸アルカリ金属塩またはホスファチジン
酸アンモニウム塩を高収率で得ることができる。これに
対して、比較例１はハロゲン系有機溶媒以外の有機溶媒
を用いているため、分層性が不良であり収率が低いうえ
中和モル比が過剰である。比較例２はハロゲン系有機溶
媒に対して５重量％以上のハロゲン系有機溶媒以外の有
機溶媒とハロゲン系有機溶媒との有機混合溶媒を用いて
いるため、分層性が不良であるうえ収率が低い。比較例
３は反応終了時の水層のｐＨが８を越えるため、分層性
が不良であるうえ収率が低い。比較例４および５はアル
カリ土類金属塩化合物を反応に使用するため、純度が低
い。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 レシチンにホスホリパーゼＤを作用させ
   てホスファチジン酸アルカリ金属塩またはホスファチジ
   ン酸アンモニウム塩を得る際、ハロゲン系有機溶媒をレ
   シチンに対して５〜２００重量倍、アルカリ金属塩化合
   物水溶液またはアンモニウム塩化合物水溶液をハロゲン
   系有機溶媒に対して０．０１〜１０重量倍として反応を
   行った後、水層のｐＨを８以下で分層させることを特徴
   とするホスファチジン酸アルカリ金属塩またはホスファ
   チジン酸アンモニウム塩の製造方法。