JP2001000179A - ウィルスの不活化方法 - Google Patents
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 本発明は、血漿タンパク質溶液から被覆およ
び／または非被覆ウィルスを不活化および／または除去
する方法に関する。 【解決手段】 血漿タンパク質溶液を室温にて、そして
１３〜２２重量％の濃度のアンモニウム塩にてインキュ
ベーションし、沈殿を分離して、０.５モル／Ｌ未満の
残留含量までアンモニウム塩を低下させて除去した後
に、約６０℃で数時間低温殺菌し、次いで治療上使用可
能な血漿タンパク質製剤に加工することからなる、アル
カリｐＨでアンモニウム塩を添加することにより血漿タ
ンパク質溶液から被覆および／または非被覆ウィルスを
不活化および／または除去する。
び／または非被覆ウィルスを不活化および／または除去
する方法に関する。 【解決手段】 血漿タンパク質溶液を室温にて、そして
１３〜２２重量％の濃度のアンモニウム塩にてインキュ
ベーションし、沈殿を分離して、０.５モル／Ｌ未満の
残留含量までアンモニウム塩を低下させて除去した後
に、約６０℃で数時間低温殺菌し、次いで治療上使用可
能な血漿タンパク質製剤に加工することからなる、アル
カリｐＨでアンモニウム塩を添加することにより血漿タ
ンパク質溶液から被覆および／または非被覆ウィルスを
不活化および／または除去する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、血漿タンパク質溶
液から被覆（coated）および／または非被覆（noncoate
d）ウィルスを不活化および／または除去する方法に関
する。
液から被覆（coated）および／または非被覆（noncoate
d）ウィルスを不活化および／または除去する方法に関
する。
【０００２】
【従来の技術】周知のように、ヒトの血漿は、多くの近
代治療のための原材料である。これらは、アルブミン、
イムノグロブリン、そして血液凝固因子群を含有してい
る。血液凝固因子の必要性は、個々の凝固因子の先天性
欠損の患者は、これらの因子の代用によってのみ生存可
能であるという必要性に起因する。また、血液凝固因子
の後天性の欠損も存在し、同様に代用の必要性がある。
代治療のための原材料である。これらは、アルブミン、
イムノグロブリン、そして血液凝固因子群を含有してい
る。血液凝固因子の必要性は、個々の凝固因子の先天性
欠損の患者は、これらの因子の代用によってのみ生存可
能であるという必要性に起因する。また、血液凝固因子
の後天性の欠損も存在し、同様に代用の必要性がある。
【０００３】最初は血漿タンパク質の代用は患者にとっ
て危険性がないとみなされたが、直ぐにこのタイプの製
剤を用いた治療の結果として感染病が血漿のドナーから
感染する可能性があり、多くの場合において疾患を誘起
するウィルスによる汚染によって引き起こされるという
ことが明らかになった。従って、課題は、この種のウィ
ルスの不活化および／または除去によって、ウィルスの
感染の危険性なしに患者に使用することができる、高度
に精製された血漿製剤および血液凝固因子製剤を提供す
ることである。これについて多くの方法が既に提案され
ている。
て危険性がないとみなされたが、直ぐにこのタイプの製
剤を用いた治療の結果として感染病が血漿のドナーから
感染する可能性があり、多くの場合において疾患を誘起
するウィルスによる汚染によって引き起こされるという
ことが明らかになった。従って、課題は、この種のウィ
ルスの不活化および／または除去によって、ウィルスの
感染の危険性なしに患者に使用することができる、高度
に精製された血漿製剤および血液凝固因子製剤を提供す
ることである。これについて多くの方法が既に提案され
ている。
【０００４】すなわち、欧州特許第０１２４５０６号
は、硫酸アンモニウムを添加することによって製剤を
０.３モルより高い塩濃度にして加熱し、直ぐに塩を製
剤から除去する、血漿酵素、凝固因子、イムノグロブリ
ンまたは血液中に存在する他のタンパク質を含有する製
剤中の増殖性病原体を不活化する方法を開示している。
この方法において、硫酸アンモニウムは、３０％までの
タンパク質含量を有する製剤に４〜６モル濃度に達する
まで添加される。次いで、加熱処理は１００時間までの
期間で、且つ４０〜１２１℃の温度で実施される。この
種の方法において、当然、用いられるおよび熱処理にお
いてウィルスが不活化および／または除去されるばかり
でなく、この場合においても製剤中に含まれる血漿タン
パク質の生物学的活性をまた可能な限り高い範囲に保持
されるということに注意が払われるべきである。
は、硫酸アンモニウムを添加することによって製剤を
０.３モルより高い塩濃度にして加熱し、直ぐに塩を製
剤から除去する、血漿酵素、凝固因子、イムノグロブリ
ンまたは血液中に存在する他のタンパク質を含有する製
剤中の増殖性病原体を不活化する方法を開示している。
この方法において、硫酸アンモニウムは、３０％までの
タンパク質含量を有する製剤に４〜６モル濃度に達する
まで添加される。次いで、加熱処理は１００時間までの
期間で、且つ４０〜１２１℃の温度で実施される。この
種の方法において、当然、用いられるおよび熱処理にお
いてウィルスが不活化および／または除去されるばかり
でなく、この場合においても製剤中に含まれる血漿タン
パク質の生物学的活性をまた可能な限り高い範囲に保持
されるということに注意が払われるべきである。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】従って、血漿タンパク
質溶液からウィルスを不活化および／または除去する方
法には、さらにこのタイプの血漿製剤によってウィルス
感染の伝染を完全に排除するばかりでなく、さらに血漿
タンパク質、特に凝固因子の生物学的活性が悪影響を受
けないように、穏やかにする必要性が存在する。
質溶液からウィルスを不活化および／または除去する方
法には、さらにこのタイプの血漿製剤によってウィルス
感染の伝染を完全に排除するばかりでなく、さらに血漿
タンパク質、特に凝固因子の生物学的活性が悪影響を受
けないように、穏やかにする必要性が存在する。
【０００６】
【課題を解決するための手段】これらの必要性は、血漿
タンパク質溶液を、室温で且つ１３〜２２重量％のアン
モニウム塩（＝２５〜３９％硫酸アンモニウム飽和）に
おけるアルカリｐＨでインキュベーションし、沈殿によ
る分離およびアンモニウム塩を０.５モル／Ｌ未満の残
留含量まで低下させて除去した後に約６０℃で数時間低
温殺菌して、次いで治療上使用可能な血漿タンパク質製
剤に加工する、血漿タンパク質から被覆および／または
非被覆ウィルスを不活化および／または除去する方法に
よる優れた態様において達成されることが見出された。
タンパク質溶液を、室温で且つ１３〜２２重量％のアン
モニウム塩（＝２５〜３９％硫酸アンモニウム飽和）に
おけるアルカリｐＨでインキュベーションし、沈殿によ
る分離およびアンモニウム塩を０.５モル／Ｌ未満の残
留含量まで低下させて除去した後に約６０℃で数時間低
温殺菌して、次いで治療上使用可能な血漿タンパク質製
剤に加工する、血漿タンパク質から被覆および／または
非被覆ウィルスを不活化および／または除去する方法に
よる優れた態様において達成されることが見出された。
【０００７】本発明の意味において血漿タンパク質は、
損なわれていない（intact）活性タンパク質そのものば
かりでなく、それらの前駆体でもある。血漿タンパク質
は、血漿または他の体液から得ることができる。
損なわれていない（intact）活性タンパク質そのものば
かりでなく、それらの前駆体でもある。血漿タンパク質
は、血漿または他の体液から得ることができる。
【０００８】本方法において、予めアフィニティクロマ
トグラフィーによって精製された血漿タンパク質溶液を
使用するのが好ましく、方法は８〜１１の範囲のｐＨに
て実施される。ウィルスの減少は、除去によって行われ
る、例えばイヌのパルボウイルス（ＣＰＶ）の場合には
２５±１℃の温度が特に好ましく、または例えばウシウ
ィルス性下痢性ウィルス（ＢＶＤＶ）またはＨＩＶの場
合には除去と不活化の組み合わせによって行われる。
トグラフィーによって精製された血漿タンパク質溶液を
使用するのが好ましく、方法は８〜１１の範囲のｐＨに
て実施される。ウィルスの減少は、除去によって行われ
る、例えばイヌのパルボウイルス（ＣＰＶ）の場合には
２５±１℃の温度が特に好ましく、または例えばウシウ
ィルス性下痢性ウィルス（ＢＶＤＶ）またはＨＩＶの場
合には除去と不活化の組み合わせによって行われる。
【０００９】本発明による方法において他の改良点は、
１３〜２２重量％のアンモニウム塩濃度（＝２５〜３９
％硫酸アンモニウム飽和）でのインキュベーション、そ
して遠心分離または濾過による不純物の除去および沈殿
の後に再度アンモニウム塩を添加して、２４〜２７重量
％の濃度（＝４４.５〜５０％硫酸アンモニウム飽和）
まで上昇させることによって達成される。この２番目の
沈殿において、血漿タンパク質を純粋な形態で沈殿さ
せ、次いでアンモニウム塩を０.５モル／Ｌ未満の残留
含量まで減少させるように除去した後に約６０℃で数時
間低温殺菌する。沈殿は次いで加工して治療上使用可能
な血漿タンパク質製剤とされる。１番目および２番目の
インキュベーションの両方に対して、２〜４時間を用い
るべきである。使用するアンモニウム塩は、硫酸アンモ
ニウムが好ましい。
１３〜２２重量％のアンモニウム塩濃度（＝２５〜３９
％硫酸アンモニウム飽和）でのインキュベーション、そ
して遠心分離または濾過による不純物の除去および沈殿
の後に再度アンモニウム塩を添加して、２４〜２７重量
％の濃度（＝４４.５〜５０％硫酸アンモニウム飽和）
まで上昇させることによって達成される。この２番目の
沈殿において、血漿タンパク質を純粋な形態で沈殿さ
せ、次いでアンモニウム塩を０.５モル／Ｌ未満の残留
含量まで減少させるように除去した後に約６０℃で数時
間低温殺菌する。沈殿は次いで加工して治療上使用可能
な血漿タンパク質製剤とされる。１番目および２番目の
インキュベーションの両方に対して、２〜４時間を用い
るべきである。使用するアンモニウム塩は、硫酸アンモ
ニウムが好ましい。
【００１０】可能な限り高い血漿タンパク質の残留活性
を得るために、安定剤の存在下に低温殺菌を実施するこ
とが提案される。好適な安定剤は、ショ糖（１０００ｇ
／Ｌ）とグリシン（１５０ｇ／Ｌ）の混合物であること
が示される。血漿タンパク質の高い残留活性はまた、安
定剤としてショ糖および酢酸カリウムの存在下において
得ることができる。一般的に、本発明による方法は、血
液から得られる血漿タンパク質を用いて実施され、９５
％までの残留活性（アンチトロンビンIIIに基く）を与
える。しかしながら、単細胞生物、または特にトランス
ジェニック動物からも得られる、生物工学的に調製し
た、組換えまたはトランスジェニック血漿タンパク質に
も同様に用いることができる。
を得るために、安定剤の存在下に低温殺菌を実施するこ
とが提案される。好適な安定剤は、ショ糖（１０００ｇ
／Ｌ）とグリシン（１５０ｇ／Ｌ）の混合物であること
が示される。血漿タンパク質の高い残留活性はまた、安
定剤としてショ糖および酢酸カリウムの存在下において
得ることができる。一般的に、本発明による方法は、血
液から得られる血漿タンパク質を用いて実施され、９５
％までの残留活性（アンチトロンビンIIIに基く）を与
える。しかしながら、単細胞生物、または特にトランス
ジェニック動物からも得られる、生物工学的に調製し
た、組換えまたはトランスジェニック血漿タンパク質に
も同様に用いることができる。
【００１１】アルカリｐＨに維持することも、本発明に
よる方法において特に重要である。ｐＨを他の方法で同
じ条件に上昇させる場合、沈殿反応によって達成される
タンパク質の精製においてｐＨが上昇するにつれて、ウ
ィルスの不活化の増加を観察することができる。増大し
たウィルスの減少は、被覆および非被覆ウィルスの両方
について見出すことができ、アンモニウム塩とアルカリ
ｐＨの効果の組み合わせの結果であると考えられる。
よる方法において特に重要である。ｐＨを他の方法で同
じ条件に上昇させる場合、沈殿反応によって達成される
タンパク質の精製においてｐＨが上昇するにつれて、ウ
ィルスの不活化の増加を観察することができる。増大し
たウィルスの減少は、被覆および非被覆ウィルスの両方
について見出すことができ、アンモニウム塩とアルカリ
ｐＨの効果の組み合わせの結果であると考えられる。
【００１２】従って、本発明による方法の特徴は、２つ
のウィルス減少法の工程、即ち水溶液中における低温殺
菌（１０時間、６０℃）および硫酸アンモニウム沈殿を
含むことである。両方のウィルス不活化工程は、ウィル
スの減少において高い減少要因を有する。実に非被覆ウ
ィルスにおいて両方の工程の効果は特に重要である。
のウィルス減少法の工程、即ち水溶液中における低温殺
菌（１０時間、６０℃）および硫酸アンモニウム沈殿を
含むことである。両方のウィルス不活化工程は、ウィル
スの減少において高い減少要因を有する。実に非被覆ウ
ィルスにおいて両方の工程の効果は特に重要である。
【００１３】
【実施例】本発明による方法は、アンチトロンビンIII
（ＡＴ III）により例示されるように以下に記載するこ
とができる：ヒトアンチトロンビンIIIはドナーの血液
から、遠心分離による寒冷沈降法の後、微粒子および血
漿成分に分離して単離される。コーンの分画法において
得られる８％エタノール上澄は、ヘパリンフラクトゲル
［Fractogel］クロマトグラフィーカラムを用いて予備
精製する。この方法において、ＡＴ IIIはカラム上で濃
縮される。カラムに付着したヘパリンは、ＡＴ IIIおよ
び幾つかの他の血漿タンパク質の両方と結合する。緩く
結合した血漿タンパク質の大部分は低いＮａＣｌ濃度を
有する緩衝溶液を用いて洗い落とされるが、次にＡＴ I
IIは、２Ｍ ＮａＣＩ，５０ｍＭ ＮａＨ2ＰＯ4および
７.５ｐＨよりなる緩衝溶液を用いて溶出される。特異
的アフィニティクロマトグラフィーによって既に達成さ
れる高純度のＡＴ IIIは、分画硫酸アンモニウム沈殿に
よって混入するタンパク質を除去することによりさらに
向上する。３１.３％の硫酸アンモニウム飽和の濃度
は、固体硫酸アンモニウムの添加による溶出において達
成される。室温（２５℃±１）における３時間のインキ
ュベーションの間に沈殿が生成し、遠心分離または濾過
によって分離し、そして廃棄される。過度に激しく攪拌
することは、沈殿が微細になり、濾過を妨げることにな
るために、避けるべきである。ｐＨ９.０は、インキュ
ベーションの間維持される。次いで硫酸アンモニウムの
濃度は、透析によって０.５モル／Ｌ未満の残留含量ま
で低下させることによって減少させられ、ショ糖（１０
００ｇ／Ｌ）およびグリシン（１５０ｇ／Ｌ）が安定剤
として添加される。次いで水性の安定化したＡＴ III溶
液は６０℃で１０時間低温殺菌される。
（ＡＴ III）により例示されるように以下に記載するこ
とができる：ヒトアンチトロンビンIIIはドナーの血液
から、遠心分離による寒冷沈降法の後、微粒子および血
漿成分に分離して単離される。コーンの分画法において
得られる８％エタノール上澄は、ヘパリンフラクトゲル
［Fractogel］クロマトグラフィーカラムを用いて予備
精製する。この方法において、ＡＴ IIIはカラム上で濃
縮される。カラムに付着したヘパリンは、ＡＴ IIIおよ
び幾つかの他の血漿タンパク質の両方と結合する。緩く
結合した血漿タンパク質の大部分は低いＮａＣｌ濃度を
有する緩衝溶液を用いて洗い落とされるが、次にＡＴ I
IIは、２Ｍ ＮａＣＩ，５０ｍＭ ＮａＨ2ＰＯ4および
７.５ｐＨよりなる緩衝溶液を用いて溶出される。特異
的アフィニティクロマトグラフィーによって既に達成さ
れる高純度のＡＴ IIIは、分画硫酸アンモニウム沈殿に
よって混入するタンパク質を除去することによりさらに
向上する。３１.３％の硫酸アンモニウム飽和の濃度
は、固体硫酸アンモニウムの添加による溶出において達
成される。室温（２５℃±１）における３時間のインキ
ュベーションの間に沈殿が生成し、遠心分離または濾過
によって分離し、そして廃棄される。過度に激しく攪拌
することは、沈殿が微細になり、濾過を妨げることにな
るために、避けるべきである。ｐＨ９.０は、インキュ
ベーションの間維持される。次いで硫酸アンモニウムの
濃度は、透析によって０.５モル／Ｌ未満の残留含量ま
で低下させることによって減少させられ、ショ糖（１０
００ｇ／Ｌ）およびグリシン（１５０ｇ／Ｌ）が安定剤
として添加される。次いで水性の安定化したＡＴ III溶
液は６０℃で１０時間低温殺菌される。
【００１４】高純度の最終生成物は、ゾーン電気泳動お
よびポリアクリルアミドゲル電気泳動によって確かめら
れる。ウィルスの減少を検査するために、ウィルスを硫
酸アンモニウム処理前に添加する（０.０５容量部）。
この場合において、ウィルスの減少について次の値が見
出された。
よびポリアクリルアミドゲル電気泳動によって確かめら
れる。ウィルスの減少を検査するために、ウィルスを硫
酸アンモニウム処理前に添加する（０.０５容量部）。
この場合において、ウィルスの減少について次の値が見
出された。
【００１５】
【表１】
【００１６】２番目の硫酸アンモニウム沈殿は、固体硫
酸アンモニウムの添加によって４５.９％の硫酸アンモ
ニウム飽和の最終濃度に調整されるが、１番目の硫酸ア
ンモニウム沈殿のあとに続くのが好ましい。室温で３時
間の沈殿時間の後、沈殿したＡＴ IIIを分離する。従っ
て、得られた沈殿は、溶解および透析によって０.８％
（w／v） ＮａＣＩおよび０.８％（w／v） 硫酸アンモ
ニウムの緩衝液に調整される。
酸アンモニウムの添加によって４５.９％の硫酸アンモ
ニウム飽和の最終濃度に調整されるが、１番目の硫酸ア
ンモニウム沈殿のあとに続くのが好ましい。室温で３時
間の沈殿時間の後、沈殿したＡＴ IIIを分離する。従っ
て、得られた沈殿は、溶解および透析によって０.８％
（w／v） ＮａＣＩおよび０.８％（w／v） 硫酸アンモ
ニウムの緩衝液に調整される。
【００１７】低温殺菌によるウィルス不活化の検査のた
めに、感染性ウィルスを低温殺菌の直前の製品に添加
し、次いで試料を６０℃で加熱処理した。調査した全て
のウィルス（ＣＰＶを除く）は６時間未満の加熱処理の
後には完全に不活化されたことが観察された。
めに、感染性ウィルスを低温殺菌の直前の製品に添加
し、次いで試料を６０℃で加熱処理した。調査した全て
のウィルス（ＣＰＶを除く）は６時間未満の加熱処理の
後には完全に不活化されたことが観察された。
【００１８】Committee for Proprietary Medicinal Pr
oducts（ＣＰＭＰ）により発行されている欧州連合のガ
イドラインでは、ヒト血漿タンパク質の調製法を通して
のウィルス除去／不活化の段階的調査が必要とされてい
る。これらのガイドラインに従って、少なくとも３種の
ウィルス、即ち関連リスクウィルスとしてＨＩＶ、およ
びさらに被覆ウィルスおよび非被覆ウィルスがこのタイ
プの調査に用いられるべきである。上記の表１は、全く
異なるタイプのウィルスについて優れた減少率が、本発
明による方法を用いて達成されたことを示している。
oducts（ＣＰＭＰ）により発行されている欧州連合のガ
イドラインでは、ヒト血漿タンパク質の調製法を通して
のウィルス除去／不活化の段階的調査が必要とされてい
る。これらのガイドラインに従って、少なくとも３種の
ウィルス、即ち関連リスクウィルスとしてＨＩＶ、およ
びさらに被覆ウィルスおよび非被覆ウィルスがこのタイ
プの調査に用いられるべきである。上記の表１は、全く
異なるタイプのウィルスについて優れた減少率が、本発
明による方法を用いて達成されたことを示している。
【００１９】ウィルスの安全性に対する調査のために、
本発明により製造されたＡＴ III製剤が臨床研究の対象
となった。以前に輸血も血液製剤をも受けたことがな
く、且つ肝臓病の病歴のない１３人の健康な男性の被検
者がこの研究に加えられた。７人の被検者は、Ｂ型肝炎
に対して予防接種され、故に抗ＨＢタイプの防御抗体を
有する。他の６人の参加者は、Ｂ型肝炎血清マーカーに
対して陰性の結果を有していた。従って、Ｂ型肝炎に対
する安全性は、これら６人の被検者においてのみ監視す
ることができたが、全ての１３人の被検者はＣ型肝炎お
よびＨＩＶ感染に関しては評価可能であった。この調査
において各参加者は、無作為基準において低温殺菌した
ＡＴ III濃縮物の２つの異なるバッチを受容し、２つの
異なる投与量で処理された、即ち８被検者は１０００単
位の固定投与量を受容したが、他の５被検者は体重ｋｇ
当たり５０単位を受容した。平均において、後者の群に
対して投与されたＡＴ IIIの量は、一人当たりおよそ３
６００単位であった。全ての被検者は、最初の６ヶ月間
は２週間おきに、次いで毎４週間ごとにトランスアミナ
ーゼについて検査された。非Ａ型非Ｂ型肝炎の伝染は、
２回の連続した検査において血漿トランスアミナーゼの
レベルが正常閾値の２.５倍を超えた場合、そして全て
の他の肝炎ウィルスが除去された場合に確認されたと見
なされた。後に、各被検者の血漿試料を抗ＨＣＶ抗体お
よび抗ＨＩＶ−２抗体について調査した。Ｂ型肝炎血漿
マーカー（ＨＢｓＳＡｇ、抗−ＨＢｃ、抗−ＨＢｓ）お
よび抗ＨＩＶ１は、２ヶ月ごとに試験した。
本発明により製造されたＡＴ III製剤が臨床研究の対象
となった。以前に輸血も血液製剤をも受けたことがな
く、且つ肝臓病の病歴のない１３人の健康な男性の被検
者がこの研究に加えられた。７人の被検者は、Ｂ型肝炎
に対して予防接種され、故に抗ＨＢタイプの防御抗体を
有する。他の６人の参加者は、Ｂ型肝炎血清マーカーに
対して陰性の結果を有していた。従って、Ｂ型肝炎に対
する安全性は、これら６人の被検者においてのみ監視す
ることができたが、全ての１３人の被検者はＣ型肝炎お
よびＨＩＶ感染に関しては評価可能であった。この調査
において各参加者は、無作為基準において低温殺菌した
ＡＴ III濃縮物の２つの異なるバッチを受容し、２つの
異なる投与量で処理された、即ち８被検者は１０００単
位の固定投与量を受容したが、他の５被検者は体重ｋｇ
当たり５０単位を受容した。平均において、後者の群に
対して投与されたＡＴ IIIの量は、一人当たりおよそ３
６００単位であった。全ての被検者は、最初の６ヶ月間
は２週間おきに、次いで毎４週間ごとにトランスアミナ
ーゼについて検査された。非Ａ型非Ｂ型肝炎の伝染は、
２回の連続した検査において血漿トランスアミナーゼの
レベルが正常閾値の２.５倍を超えた場合、そして全て
の他の肝炎ウィルスが除去された場合に確認されたと見
なされた。後に、各被検者の血漿試料を抗ＨＣＶ抗体お
よび抗ＨＩＶ−２抗体について調査した。Ｂ型肝炎血漿
マーカー（ＨＢｓＳＡｇ、抗−ＨＢｃ、抗−ＨＢｓ）お
よび抗ＨＩＶ１は、２ヶ月ごとに試験した。
【００２０】１２ヶ月の観察期間の後、血漿トランスア
ミナーゼの増加は、１３人の被検者の誰にも観察され
ず、抗−ＨＩＶまたは抗−ＨＣＶに対して陽性の被検者
もいなかった。さらに、Ｂ型肝炎ワクチンで予防接種さ
れなかった６人の被検者の誰にも陽性ＨＩＶマーカーは
現れなかった。
ミナーゼの増加は、１３人の被検者の誰にも観察され
ず、抗−ＨＩＶまたは抗−ＨＣＶに対して陽性の被検者
もいなかった。さらに、Ｂ型肝炎ワクチンで予防接種さ
れなかった６人の被検者の誰にも陽性ＨＩＶマーカーは
現れなかった。
【００２１】International Committee of Thrombosis
and Hemostasis（ＩＣＴＨ）の推奨に従って実施したこ
の臨床研究に基づき、そして本発明による方法によって
製造したＡＴ III濃縮物で治療された患者の遡及的分析
に基づき、本発明による方法によって製造したＡＴ III
濃縮物は、ＨＢＶ、ＨＣＶまたはＨＩＶ汚染の危険性に
冒されなかったと結論付けることができる。
and Hemostasis（ＩＣＴＨ）の推奨に従って実施したこ
の臨床研究に基づき、そして本発明による方法によって
製造したＡＴ III濃縮物で治療された患者の遡及的分析
に基づき、本発明による方法によって製造したＡＴ III
濃縮物は、ＨＢＶ、ＨＣＶまたはＨＩＶ汚染の危険性に
冒されなかったと結論付けることができる。
【００２２】調査したＡＴ III製剤を用いて得られた実
験データは、結果の低温殺菌ＡＴ III製剤が均質性につ
いてほぼ精製され、ウィルスが製造法の種々の段階にお
いて効率的に除去そして不活化されるために、この製品
が安全性の利益を達成していることを示している。沈殿
反応および低温殺菌の組み合わせによって、ウィルスの
減少は、このように製造される血漿タンパク質製剤の非
常に高い安全性基準を保証するこの場合において達成さ
れる。
験データは、結果の低温殺菌ＡＴ III製剤が均質性につ
いてほぼ精製され、ウィルスが製造法の種々の段階にお
いて効率的に除去そして不活化されるために、この製品
が安全性の利益を達成していることを示している。沈殿
反応および低温殺菌の組み合わせによって、ウィルスの
減少は、このように製造される血漿タンパク質製剤の非
常に高い安全性基準を保証するこの場合において達成さ
れる。
【００２３】同時に、本発明による方法は、精製したタ
ンパク質溶液から沈殿反応によってアンモニウム塩を
０.５モル／Ｌ未満の残留含量まで除去するために特に
穏やかであり、そして血漿タンパク質の非常に高い残留
活性が引き続く低温殺菌において維持されることを保証
することを重要視するべきである。表２に述べられる血
漿タンパク質の場合、本発明による方法はそこに述べら
れている高い残留活性を導く。
ンパク質溶液から沈殿反応によってアンモニウム塩を
０.５モル／Ｌ未満の残留含量まで除去するために特に
穏やかであり、そして血漿タンパク質の非常に高い残留
活性が引き続く低温殺菌において維持されることを保証
することを重要視するべきである。表２に述べられる血
漿タンパク質の場合、本発明による方法はそこに述べら
れている高い残留活性を導く。
【００２４】
【表２】
【００２５】表２によると、アンチトロンビンIIIの沈
殿条件は、Ｃ１不活化剤、トロンビンおよびプロトロン
ビン、第Ｖ因子、第VII因子並びに第Ｘ因子にも適用さ
れる。第IX因子については、至適沈殿濃度は２２％（w
／v）硫酸アンモニウム、即ち４０.７％硫酸アンモニウ
ム飽和である。α1−アンチトリプシンについては、至
適沈殿濃度はむしろ１３％（w／v）硫酸アンモニウム、
即ち２４.１％硫酸アンモニウム飽和である。
殿条件は、Ｃ１不活化剤、トロンビンおよびプロトロン
ビン、第Ｖ因子、第VII因子並びに第Ｘ因子にも適用さ
れる。第IX因子については、至適沈殿濃度は２２％（w
／v）硫酸アンモニウム、即ち４０.７％硫酸アンモニウ
ム飽和である。α1−アンチトリプシンについては、至
適沈殿濃度はむしろ１３％（w／v）硫酸アンモニウム、
即ち２４.１％硫酸アンモニウム飽和である。
【００２６】治療上使用可能な血漿タンパク質製剤の製
造について、本発明の方法にて得られるタンパク質沈殿
物は、タンパク質沈殿物に富む血漿画分の形態で乾燥物
質として注射バイアル中に導入される。使用される賦形
剤は、アミノ酢酸、塩化ナトリウムおよびクエン酸ナト
リウムである。注射用の１０mlの水を含有するアンプル
は、発熱物質を含まず、注射バイアルに添加される。
造について、本発明の方法にて得られるタンパク質沈殿
物は、タンパク質沈殿物に富む血漿画分の形態で乾燥物
質として注射バイアル中に導入される。使用される賦形
剤は、アミノ酢酸、塩化ナトリウムおよびクエン酸ナト
リウムである。注射用の１０mlの水を含有するアンプル
は、発熱物質を含まず、注射バイアルに添加される。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ゲーアハルト・クムペ ドイツ連邦共和国デー−35083ヴェター. ペルバーラーヴェーク11 (72)発明者 トーマス・ノヴァーク ドイツ連邦共和国デー−35460シュタウフ ェンベルク．シュタウフェンベルガーシュ トラーセ22
Claims (9)
- 【請求項１】 血漿タンパク質溶液を室温にて、そして
１３〜２２重量％の濃度のアンモニウム塩にてインキュ
ベーションし、沈殿を分離し、そしてアンモニウム塩を
０.５モル／Ｌ未満の残留含量まで低下させて除去した
後に、約６０℃で数時間低温殺菌し、次いで治療上使用
可能な血漿タンパク質製剤に加工することからなる、ア
ルカリｐＨでアンモニウム塩を添加することにより血漿
タンパク質溶液から被覆および／または非被覆ウィルス
を不活化および／または除去する方法。 - 【請求項２】 １３〜２２重量％のアンモニウム塩濃度
でインキュベーションした後に、アンモニウム塩の濃度
を２４〜２７重量％まで上昇させ、混合物を再度インキ
ュベートし、アンモニウム塩を０.５モル／Ｌ未満の残
留含量まで除去した後にこの方法で得られたウィルスを
含まない沈殿物を約６０℃で数時間低温殺菌し、治療上
使用可能な血漿タンパク質製剤に加工する、請求項１に
記載の方法。 - 【請求項３】 使用する血漿タンパク質溶液が、アフィ
ニティクロマトグラフィーにて精製した血漿タンパク質
溶液である、請求項１または２に記載の方法。 - 【請求項４】 方法を、ｐＨ８〜１１にて実施する、請
求項１〜３のいずれかに記載の方法。 - 【請求項５】 第１および第２インキュベーションをい
ずれの場合についても２〜４時間実施する、請求項１〜
４のいずれかに記載の方法。 - 【請求項６】 使用するアンモニウム塩が硫酸アンモニ
ウムである、請求項１〜５のいずれかに記載の方法。 - 【請求項７】 低温殺菌を、安定剤としてショ糖および
グリシンの存在下またはショ糖および酢酸カリウムの存
在下で実施する、請求項１〜６のいずれかに記載の方
法。 - 【請求項８】 天然または生物工学的に製造された血漿
タンパク質を用いて実施する、請求項１〜７のいずれか
に記載の方法。 - 【請求項９】 請求項１〜８のいずれかに記載の方法に
よって得られる血漿タンパク質製剤。
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Cited By (2)
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|---|---|---|---|---|
| JP2009524699A (ja) * | 2005-12-02 | 2009-07-02 | ダウ グローバル テクノロジーズ インコーポレイティド | 新規植物ウイルス粒子及びその不活性化の方法 |
| JP2015500860A (ja) * | 2011-12-20 | 2015-01-08 | ノボザイムス アクティーゼルスカブ | タンパク質溶液からウイルスを除去する方法 |
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| CN100457896C (zh) * | 2005-10-26 | 2009-02-04 | 李法卿 | 灭活生物制品中病毒和去除细菌内毒素的方法 |
| WO2014004103A1 (en) * | 2012-06-29 | 2014-01-03 | Emd Millipore Corporation | Methods for inactivating viruses during a protein purification process |
| DE202020001666U1 (de) | 2020-04-21 | 2020-06-08 | Walther Enßlin | Imprägnierung der Oberfläche von Kleidung, Schutzkleidung, Gewebehandschuhen gegen Viren aus den Tröpfchen der Atemluft |
| DE202020003865U1 (de) | 2020-09-11 | 2021-09-22 | Karin Emde | Einfangen und Vernichten von Viren und andere Mikroorganismen in Raumluft und Raumluftfiltern |
| DE102021001635A1 (de) | 2021-03-27 | 2022-09-29 | Karin Emde | Abfangen und Vernichten von Viren und andere Mikroorganismen auf Oberflächen, in Raumluft, in der Abluft von Staubsaugern und in Raumluftfiltern. |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| JPH08506498A (ja) * | 1993-02-09 | 1996-07-16 | オクタファルマ・アクチエンゲセルシャフト | 非脂質被覆ウイルスの失活方法 |
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| AT376881B (de) * | 1983-05-02 | 1985-01-10 | Immuno Ag | Verfahren zur inaktivierung von vermehrungsfaehigen krankheitserregern |
| ATE36457T1 (de) * | 1983-05-02 | 1988-09-15 | Immuno Ag | Verfahren zur inaktivierung von vermehrungsfaehigen krankheitserregern. |
| US4749783A (en) * | 1986-07-11 | 1988-06-07 | Miles Laboratories, Inc. | Viral inactivation and purification of active proteins |
| AT402788B (de) * | 1993-08-03 | 1997-08-25 | Immuno Ag | Virussichere blutgerinnungsfaktor xiii-präparation |
| HRP940645A2 (en) * | 1993-10-06 | 1996-12-31 | Immuno Ag | Process for virus deactivation in the presence of polyalkylene glycol and the pharmaceutical preparation thus obtained |
| ES2129076T5 (es) * | 1993-12-27 | 2003-05-16 | Zlb Bioplasma Ag | Procedimiento para la preparacion de un concentrado de inmunoglobulina g anti-d y composicion farmaceutica que lo contiene. |
| DE59712322D1 (de) * | 1996-03-20 | 2005-06-30 | Baxter Ag | Pharmazeutisches Präparat zur Behandlung von Blutgerinnungsstörungen |
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1999
- 1999-05-19 DE DE19923027A patent/DE19923027C2/de not_active Expired - Fee Related
-
2000
- 2000-05-09 EP EP00109780A patent/EP1053754B1/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-05-09 ES ES00109780T patent/ES2232345T3/es not_active Expired - Lifetime
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- 2000-05-09 DE DE50008992T patent/DE50008992D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-05-17 US US09/572,471 patent/US6468778B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-05-18 CA CA002308904A patent/CA2308904C/en not_active Expired - Lifetime
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