JP2000072749A - Apoptosis-inducing agent using quinoline derivative - Google Patents
Apoptosis-inducing agent using quinoline derivativeInfo
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Abstract
Description
【発明の詳細な説明】DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
【０００１】[0001]
【発明の属する技術分野】本発明は、癌やリウマチ、全
身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）等の自己免疫疾患、動
脈硬化症、各種腎炎さらにはウイルス感染症等に広範に
みられる細胞増殖を伴う病態に対する新しい治療剤、詳
しくはアポトーシス誘導剤およびアポトーシス誘導増強
剤に関する。The present invention relates to a disease associated with cell proliferation widely observed in autoimmune diseases such as cancer, rheumatism, systemic lupus erythematosus (SLE), arteriosclerosis, various nephritis, and viral infections. The present invention relates to a new therapeutic agent, specifically, an apoptosis inducer and an apoptosis induction enhancer.
【０００２】[0002]
【従来の技術】アポトーシスは、細胞死の１つの形態
で、細胞増殖制御系の中に組み込まれた情報に従って生
理的プロセスとして死んでいく細胞死であり、通常の受
動的な外因性の死であるネクローシスとは区別される。
アポトーシスは、細胞核内の染色体の凝集、染色体ＤＮ
Ａの断片化等の生理的、生化学的変化を伴うことが特徴
である。このアポトーシスは、発生過程での形態、組織
形成時のプログラム細胞死にみられる発生過程の不必要
な細胞の除去機能に関わっている。さらには、生体のホ
メオスタシス維持のための機能は、細胞の増殖とアポト
ーシスの２つの過程によってバランスが取られ、生体の
恒常性が維持されている。また、細胞内外からの侵襲に
よるダメージを受けた細胞の除去を行う生体防御機能も
アポトーシスが有している。このようにアポトーシスは
生物固体の成長と恒常性維持には不可欠で、生体内で
は、非常に複雑な情報伝達系によって制御されている。BACKGROUND OF THE INVENTION Apoptosis is a form of cell death, a death that occurs as a physiological process in accordance with information embedded in the cell growth control system. It is distinguished from certain necrosis.
Apoptosis is caused by chromosomal aggregation in the nucleus, chromosome DN
It is characterized by physiological and biochemical changes such as fragmentation of A. This apoptosis is involved in the elimination of unnecessary cells in the developmental process, such as morphology during development and programmed cell death during tissue formation. Furthermore, the function for maintaining homeostasis in a living body is balanced by two processes of cell proliferation and apoptosis, and homeostasis of the living body is maintained. Apoptosis also has a biological defense function of removing cells damaged by invasion from inside and outside of cells. Apoptosis is thus essential for the growth and homeostasis of biological solids, and is controlled by a very complex signal transduction system in vivo.
【０００３】近年、このアポトーシスの細胞内情報伝達
に関する生体内物質としてスフィンゴ脂質が注目されて
いる。スフィンゴ脂質は、グリセロリン脂質などと共に
細胞膜の構成成分であり、その構造は、セラミドに糖鎖
あるいはホスホコリンなどが結合したものである。最近
の研究において、セラミドがアポトーシス誘導のメッセ
ンジャー物質として中心的な役割を担っていることが判
明した。すなわち、ＴＮＦα、Ｆａｓ、放射線、抗癌剤
などのアポトーシス誘導刺激によりセラミドが増加する
こと、また、このセラミドによりアポトーシスが誘導さ
れることなどが報告されている（Hannun,Y.A.:Science,
Vol.274, p.1885 (1996)、Okazaki,T.etal: J.Biol.Che
m.,Vol.264,p.19076,(1989)、岡崎、他 実験医学,Vol.
15,p.1488,(1997)）。さらには、癌化学療法で大きな問
題となっている多剤耐性の機構の１つとしてもこのセラ
ミド代謝系の関与が云われている。[0003] In recent years, sphingolipids have attracted attention as a substance in the body relating to intracellular signal transmission of apoptosis. Sphingolipids are constituents of cell membranes together with glycerophospholipids and the like, and have a structure in which a sugar chain or phosphocholine is bonded to ceramide. Recent studies have shown that ceramide plays a central role as a messenger substance for inducing apoptosis. That is, it has been reported that ceramide is increased by apoptosis-inducing stimuli such as TNFα, Fas, radiation, and anticancer agents, and that ceramide induces apoptosis (Hannun, YA: Science,
Vol.274, p.1885 (1996), Okazaki, T.etal: J.Biol.Che
m., Vol.264, p.19076, (1989), Okazaki, et al. Experimental Medicine, Vol.
15, p. 1488, (1997)). Furthermore, the involvement of this ceramide metabolic system is also said to be one of the mechanisms of multidrug resistance that has become a major problem in cancer chemotherapy.
【０００４】一方、医療の面からこのアポトーシスをみ
ると、アポトーシス抑制が関わると思われる疾患では、
細胞増殖を伴う各種疾病すなわち癌、リウマチ、ＳＬＥ
等の自己免疫疾患、動脈硬化、各種腎炎、ウィルス感染
症等の疾患が考えられ、反対にアポトーシスの促進が関
わる疾患としては、ＡＩＤＳ等のウィルス疾患、アルツ
ハイマー病やパーキンソン病のような神経変性疾患、脳
虚血、心筋梗塞、貧血等の血液循環器疾患、中毒性また
はアルコール性肝炎等が考えられる。[0004] On the other hand, from the medical point of view, the apoptosis is considered to be related to apoptosis suppression.
Various diseases associated with cell proliferation, ie, cancer, rheumatism, SLE
Diseases such as autoimmune diseases such as arteriosclerosis, various nephritis, and viral infections are considered. On the contrary, diseases associated with promotion of apoptosis include viral diseases such as AIDS and neurodegenerative diseases such as Alzheimer's disease and Parkinson's disease. Blood circulatory diseases such as cerebral ischemia, myocardial infarction, and anemia; toxic or alcoholic hepatitis;
【０００５】上記の概念から多くのアポトーシス誘導剤
の探索が行われている。制癌剤の一部にアポトーシス誘
導作用のあることはよく知られているが、その作用の程
度や薬効との関係は殆ど解明されていない。またこれら
薬剤は毒性が強く、上記した広範な疾患に対しては、実
際には使用困難で、さらに良好な薬剤が望まれている。Many apoptosis-inducing agents have been searched for based on the above concept. It is well known that some anticancer drugs have an apoptosis-inducing effect, but the degree of the effect and the relationship with the drug efficacy are hardly elucidated. Further, these drugs are highly toxic, and are actually difficult to use for the above-mentioned wide range of diseases, and there is a need for better drugs.
【０００６】即ち、これらの制癌剤は上記した広範な疾
患に対しては、実際には使用困難で、現在まで広範な疾
患に適用できる安全で効果の強いアポトーシス誘導体は
知られていない。[0006] That is, these anticancer agents are actually difficult to use for the above-mentioned wide range of diseases, and no safe and effective apoptotic derivatives applicable to a wide range of diseases have been known so far.
【０００７】[0007]
【発明が解決しようとする課題】本発明の課題は、アポ
トーシス誘導作用又はアポトーシス誘導増強作用を有
し、安全で効果の高い医薬組成物を提供することにあ
る。An object of the present invention is to provide a safe and effective pharmaceutical composition having an apoptosis-inducing action or an apoptosis-inducing enhancing action.
【０００８】本発明の目的は、アポトーシス誘導作用ま
たはアポトーシス誘導増強作用を有する医薬組成物を提
供することにあり、該組成物は癌、リウマチ、ＳＬＥ等
の自己免疫疾患、動脈硬化、各種腎炎、ウィルスなどの
各種感染症等の予防または治療剤であり、または、アポ
トーシス誘導作用を持った既存の薬物さらにはＵＶや各
種サイトカインなどのアポトーシス刺激剤と組み合わせ
ることによる上記疾患に対する該薬剤および該刺激剤の
誘導増強剤である。[0008] It is an object of the present invention to provide a pharmaceutical composition having an apoptosis-inducing action or an apoptosis-inducing enhancing action, which is used for autoimmune diseases such as cancer, rheumatism and SLE, arteriosclerosis, various nephritis, It is a prophylactic or therapeutic agent for various infectious diseases such as viruses, or an agent for the above-mentioned diseases by combining with an existing drug having an apoptosis-inducing action, or an apoptosis stimulating agent such as UV or various cytokines, and the stimulant Is an induction enhancer.
【０００９】[0009]
【課題を解決するための手段】選択的なアポトーシスの
誘導は、細胞増殖を伴う各種疾患の予防薬または治療薬
として期待されるが、本発明者等は、このアポトーシス
誘導作用を前に示したように細胞内のセラミド量を測定
すること、また直接核の形態を観察することにより評価
した。すなわち、アポトーシス誘導作用が確実に正確に
評価できるヒト白血病細胞株ＨＬ６０またはその多剤耐
性亜株を用い、アポトーシス刺激剤である、ダウノマイ
シン、アドリアマイシン、タキソール等の制癌剤、サイ
トカインの１つであるＴＮＦαさらには紫外線等で処理
した際の、セラミド量、細胞核の変性を指標に多くの化
合物を鋭意評価検討した。その中で、本発明に係るキノ
リン誘導体が、細胞内セラミドを著明に増進させ、強い
アポトーシス誘導作用を有することを見出し、本発明を
完成させた。Means for Solving the Problems Selective induction of apoptosis is expected as a preventive or therapeutic agent for various diseases accompanied by cell proliferation. The present inventors have previously shown this apoptosis-inducing effect. As described above, evaluation was performed by measuring the amount of ceramide in the cells and directly observing the morphology of the nucleus. That is, using a human leukemia cell line HL60 or a multidrug-resistant substrain thereof that can reliably and accurately evaluate apoptosis-inducing action, apoptosis-stimulating agents such as daunomycin, adriamycin, and taxol, and one of cytokines, TNFα. Of the present invention, many compounds were intensively evaluated and examined based on the amount of ceramide and degeneration of cell nuclei when treated with ultraviolet rays or the like. Among them, they have found that the quinoline derivative according to the present invention markedly enhances intracellular ceramide and has a strong apoptosis-inducing action, and thus completed the present invention.
【００１０】すなわち本発明は、下記一般式（１）（化
１１）That is, the present invention provides a compound represented by the following general formula (1):
【００１１】[0011]
【化１１】 ［式中、Ａは窒素原子、または炭素原子を表し、Ｂは直
接の結合であるＣ＝Ｏまたは−（ＣＨ2）ｍ−（ｍは０
〜３の整数）を表し、Ｃは、式（２）又は式（３）（化
１２）Embedded image [In the formula, A represents a nitrogen atom or a carbon atom, and B represents a direct bond C ＝ O or-(CH 2 ) m- (m is 0
And C is an integer of the formula (2) or the formula (3).
【００１２】[0012]
【化１２】 ｛式中、Ｒ1，Ｒ2，Ｒ3は互いに独立して、水素原子ま
たはフェニル基をＤは−（ＣＨ2）ｎ−（ｎは０〜３の
整数）、−ＣＨ＝ＣＨ−、又は式（４）（化１３） Embedded image In the formula, R 1 , R 2 , and R 3 are each independently a hydrogen atom or a phenyl group, D is — (CH 2 ) n — (n is an integer of 0 to 3), —CH ＝ CH—, or Formula (4)
【００１３】[0013]
【化１３】（式中、Ｒ4、Ｒ5はお互いに独立して、水素
原子またはハロゲン原子を表す。）を表す。｝を表
す。］で示されるキノリン誘導体またはその生物学的に
許容される塩を含有することを特徴とするアポトーシス
誘導剤およびアポトーシス誘導増強剤である。Wherein R 4 and R 5 independently represent a hydrogen atom or a halogen atom. Represents｝. ] The apoptosis-inducing agent and the apoptosis-inducing agent characterized by containing the quinoline derivative or a biologically acceptable salt thereof.
【００１４】[0014]
【発明の実施の形態】以下に本発明をさらに詳しく説明
する。本発明に係るキノリン誘導体は、深澤、鈴木等に
より特開平３−１０１６６２号公報，特開平６−１７６
８号公報、J.Med.Chem.Vol.40,p.2047,(1997).等に開示
された化合物であり、ｐ−糖蛋白の働きを抑制すること
で耐性癌の耐性克服作用を示すことが知られている。し
かし、これら報告にはアポトーシス誘発作用には何ら言
及はなく、対象疾患も癌領域のみで、制癌剤との併用に
よる耐性克服作用であり、本発明とは基本的に概念を異
にするものである。BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION Hereinafter, the present invention will be described in more detail. The quinoline derivative according to the present invention has been disclosed by Fukasawa and Suzuki in JP-A-3-101662 and JP-A-6-176.
No. 8, J. Med. Chem. Vol. 40, p. 2047, (1997). And the like, which has an effect of overcoming the resistance of resistant cancer by suppressing the action of p-glycoprotein. It is known. However, these reports do not mention the apoptosis-inducing action at all, and the target disease is only the cancer area, and it is an action of overcoming resistance by combined use with an anticancer drug, and is basically different in concept from the present invention. .
【００１５】本発明に係るキノリン誘導体は一般式
（１）に示した化合物であり、本発明においてはその生
物学的に許容される塩も効果を有するものとして発明の
範疇に含まれる。The quinoline derivative according to the present invention is a compound represented by the general formula (1). In the present invention, a biologically acceptable salt thereof is included in the scope of the invention as having an effect.
【００１６】本発明に係るキノリン誘導体は一般式
（１）の代表的な化合物は、式（５）（化１４）で表さ
れる化合物（フマル酸塩はＭＳ−２０９と呼ぶこともあ
る）、The quinoline derivative according to the present invention is represented by the following general formula (1): a compound represented by the following formula (5) (the fumarate may be referred to as MS-209):
【００１７】[0017]
【化１４】 又は式（６）（化１５）で表される化合物である。Embedded image Or a compound represented by the formula (6) (Formula 15).
【００１８】[0018]
【化１５】 Embedded image
【００１９】尚、本発明において、ハロゲン原子とは、
フッ素原子、塩素原子、臭素原子またはヨウ素原子を表
し、生物学的に許容される塩としては特に限定はされな
いが、塩酸、硫酸等の無機酸、または酢酸、シュウ酸、
フマル酸、マレイン酸、酒石酸等の有機酸による塩が挙
げられる。また、本発明化合物は不斉炭素を有し、光学
異性体が存在するが、当然これら異性体すべてを本特許
は包含する。In the present invention, the halogen atom is
Represents a fluorine atom, a chlorine atom, a bromine atom or an iodine atom, and is not particularly limited as a biologically acceptable salt; hydrochloric acid, an inorganic acid such as sulfuric acid, or acetic acid, oxalic acid,
Salts with organic acids such as fumaric acid, maleic acid, tartaric acid and the like can be mentioned. Further, the compound of the present invention has an asymmetric carbon and has optical isomers, and all of these isomers are naturally included in the present patent.
【００２０】本発明の組成は臨床適用される場合、それ
単独で誘導剤として、または既存薬剤と併用して誘導増
強剤として投与される。投与方法としては、経口的また
は非経口的に投与する事が可能である。When the composition of the present invention is applied clinically, it is administered alone as an inducer or in combination with an existing drug as an induction enhancer. As an administration method, it is possible to administer orally or parenterally.
【００２１】併用する既存薬剤としては、制癌剤であれ
ば特に制限はないが、アドリアマイシン、ダウノマイシ
ン、アクラシノマイシンＡ等のアンスラサイクリン系抗
生物質、アクチノマイシンＣ、アクチノマイシンＣ等の
アクチノマイシン系抗生物質、ビンクリスチン、ビンブ
ラスチン等のビンカアルカロイド系物質、フルオロウラ
シル、カルモフール、テガフール、フルツロン、メソト
レキセート等の代謝拮抗剤、タキソール、タキソテール
等のタキサン誘導体、シスプラチン、カルボプラチン等
の白金製剤、さらには、エトポシド、ネオカルチノスタ
チン、マイトマイシンＣ、ナベルビン、等広範な制癌剤
が使用される。制癌剤以外にも、アレルギー薬、リウマ
チ薬等の自己免疫疾患治療薬、抗生物質、化学療法剤、
抗ウィルス剤、腎疾患治療薬、抗炎症剤等広範な薬物の
効果増強作用が期待される。The existing drugs to be used in combination are not particularly limited as long as they are anticancer drugs. However, anthracycline antibiotics such as adriamycin, daunomycin and aracinomycin A, and actinomycin antibiotics such as actinomycin C and actinomycin C are used. , Vincristine, vinblastine alkaloids such as vinblastine, fluorouracil, carmofur, tegafur, antimetabolites such as fluturon, methotrexate, taxol derivatives such as taxol and taxotere, cisplatin, platinum preparations such as carboplatin, furthermore, etoposide, neocartino A wide variety of anti-cancer agents are used, such as statins, mitomycin C, navelbine, and the like. In addition to anticancer drugs, drugs for treating autoimmune diseases such as allergic drugs and rheumatic drugs, antibiotics, chemotherapeutics,
It is expected to enhance the effect of a wide range of drugs such as antiviral agents, therapeutic agents for renal diseases, and anti-inflammatory agents.
【００２２】キノリン誘導体としての投与量は投与対象
患者の症状、年齢、性別等により異なるが、成人１日あ
たり１から２０００ｍｇであり、この量を１日に１回ま
たは数回に分けて投与する。The dose of the quinoline derivative varies depending on the condition, age, sex, etc. of the patient to be administered, but it is 1 to 2000 mg per day for an adult, and this dose is administered once or several times a day. .
【００２３】経口的に投与する場合は、錠剤、顆粒剤、
散剤、懸濁剤、カプセル剤、シロップ剤等の剤形が可能
である。例えば、錠剤とする場合には、吸着剤として結
晶性セルロース、軟質無水ケイ酸等を、賦形剤として
は、トウモロコシデンプン、乳糖、リン酸カルシウム、
結晶性セルロース等を、また必要に応じて結合剤、保湿
剤、滑沢剤等を用いることが出来る。When administered orally, tablets, granules,
Dosage forms such as powders, suspensions, capsules, syrups and the like are possible. For example, in the case of a tablet, crystalline cellulose, soft silicic anhydride or the like as an adsorbent, corn starch, lactose, calcium phosphate as an excipient,
Crystalline cellulose and the like, and if necessary, a binder, a humectant, a lubricant and the like can be used.
【００２４】非経口的に投与する場合は、静脈注射剤、
皮下注射剤、筋肉注射剤、座剤、経皮剤等の形態が可能
である。例えば、注射剤とする場合は、化合物を等張
化、無菌化等を施した水溶液または綿実油、トウモロコ
シ油、オリーブ油等を用いた懸濁性水溶液、あるいはＨ
ＣＯ−６０等の界面活性剤を用いた乳濁液として使用さ
れる。また、本発明化合物は急性毒性がラット、イヌで
経口的にＬＤ５０が１０００ｍｇ／ｋｇ以上と極めて低
毒性であり、安全性の高い有用な薬剤である。In the case of parenteral administration, intravenous injection,
Forms such as subcutaneous injections, intramuscular injections, suppositories, transdermals and the like are possible. For example, in the case of an injection, an aqueous solution obtained by making the compound isotonic or sterilized, or a suspension aqueous solution using cottonseed oil, corn oil, olive oil, or H
It is used as an emulsion using a surfactant such as CO-60. Further, the compound of the present invention has a very low toxicity of LD50 of 1000 mg / kg or more orally in rats and dogs and is a highly safe and useful drug.
【００２５】[0025]
【実施例】以下に実施例を用いて本発明を詳しく説明す
るが、本発明はこれに限定されるものではない。The present invention will be described in detail with reference to the following Examples, but it should not be construed that the present invention is limited thereto.
【００２６】実施例１ セラミド増加作用 （１）方法：本発明化合物の代表としてｄｌ−５−［３
−｛４−（２，２−ジフェニルアセチル）ピペラジン−
１−イル｝−２−ヒドロキシプロピル］キノリンのフマ
ル酸塩（ＭＳ−２０９）を用いた。他の化合物において
も以下に示すと同様な結果が得られた。Example 1 Ceramide increasing action (1) Method: dl-5- [3
-{4- (2,2-diphenylacetyl) piperazine-
1-yl {-2-hydroxypropyl] quinoline fumarate (MS-209) was used. Similar results were obtained for the other compounds as shown below.
【００２７】ヒト白血病細胞株ＨＬ６０のビンクリスチ
ン耐性株を１０％牛胎児血清含有ＲＰＭＩ１６４０培地
にて５％ＣＯ2下培養し、実験前日に牛胎児血清を２％
に変更して使用した。本細胞の培地中に最終薬物濃度が
ダウノマイシンは３μＭに、ＭＳ−２０９は１０μＭ濃
度になるよう調製し実験した。薬物添加後６時間での細
胞内セラミド量を以下のように測定した。先ず、遠心分
離した細胞から、BlighとDyerの常法（Can.J.Biochem.P
hysiol.Vol.37,P.911,(1959)）により脂質を抽出した。
次にＥ．ｃｏｌｉのｄｉａｃｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ ｋ
ｉｎａｓｅを用いて、抽出した脂質中のセラミドを32Ｐ
−ＡＴＰでラベルしＴＬＣで分離した。資料中のセラミ
ド含量は既知量のセラミドを同様にラベルした対照と比
較定量し、細胞内リン脂質量で標準化した。 （２）結果：結果を表１（表１）に示す。ダウノマイシ
ンは、一般的にはセラミド量を増加させることが知られ
ているが、ＨＬ６０ビンクリスチン耐性株では細胞内セ
ラミド量に影響を与えなかった。ＭＳ−２０９は、単独
で同細胞株のセラミド量を約３倍に増加させ、ダウノマ
イシンと共存させると約５倍の増加を認めた。A vincristine-resistant human leukemia cell line HL60 was cultured in RPMI1640 medium containing 10% fetal bovine serum under 5% CO 2 , and the fetal bovine serum was reduced to 2% on the day before the experiment.
Changed to used. The final drug concentration in the medium of the cells was adjusted to 3 μM for daunomycin and 10 μM for MS-209, and the experiment was performed. The amount of intracellular ceramide 6 hours after drug addition was measured as follows. First, Bligh and Dyer's standard method (Can. J. Biochem.
Hysiol. Vol. 37, P. 911, (1959)).
Next, E. E. coli diaglycylcerol k
using a inase, extracted the ceramide in the lipid 32 P
-Labeled with ATP and separated by TLC. The ceramide content in the data was quantified by comparing a known amount of ceramide with a similarly labeled control, and standardized by the amount of intracellular phospholipid. (2) Results: The results are shown in Table 1 (Table 1). Daunomycin is generally known to increase ceramide levels, but did not affect intracellular ceramide levels in HL60 vincristine resistant strains. MS-209 alone increased the amount of ceramide in the same cell line about 3-fold, and when co-existed with daunomycin, a 5-fold increase was observed.
【００２８】[0028]
【表１】 [Table 1]
【００２９】実施例２ アポトーシス誘導作用（ＵＶ刺
激時） （１）方法：薬物としてはＭＳ−２０９、刺激剤として
はＵＶを使用して以下の実験を行った。すなわち、ヒト
白血病細胞株ＨＬ６０ｗｉｌｄ株を１０％牛胎児血清含
有ＲＰＭＩ１６４０培地にて５％ＣＯ2下培養し、実験
前日に牛胎児血清を５％に変更して使用した。ＭＳ−２
０９は最終濃度が１０μＭとなるよう調節し、ＵＶ照射
は５秒間とした。それぞれ単独および併用時のＵＶ照射
後１時間後の細胞をグルタールアルデヒド固定し、２μ
ｇ／ｍｌＤＡＰＩ（4'、6-Diamidino-2-phenylindole di
hidorochloride）で核を染色し、蛍光顕微鏡観察により
クロマチン凝集像を示す核の割合を測定した。１回の測
定では１００個の核を観察し、平均で表した。 （２）結果：結果を表２（表２）に示す。ＵＶとＭＳ−
２０９併用群でアポトーシスを起こした細胞数が大いに
増加しており、本発明化合物のアポトーシス誘導作用が
示された。Example 2 Apoptosis Inducing Effect (at UV Stimulation) (1) Method: The following experiment was conducted using MS-209 as a drug and UV as a stimulant. That is, the human leukemia cell line HL60wild was cultured in RPMI1640 medium containing 10% fetal bovine serum under 5% CO 2 , and the fetal bovine serum was changed to 5% on the day before the experiment. MS-2
09 was adjusted to a final concentration of 10 μM, and UV irradiation was for 5 seconds. The cells 1 hour after UV irradiation alone and in combination were fixed with glutaraldehyde, and
g / ml DAPI (4 ', 6-Diamidino-2-phenylindole di
The nucleus was stained with hidorochloride) and the ratio of nuclei showing a chromatin aggregation image was measured by fluorescence microscopy. In one measurement, 100 nuclei were observed and expressed as an average. (2) Results: The results are shown in Table 2 (Table 2). UV and MS-
In the 209 combination group, the number of cells that had undergone apoptosis was greatly increased, indicating the apoptosis-inducing effect of the compound of the present invention.
【００３０】[0030]
【表２】 表２ ＨＬ６０wildによるＵＶ刺激時のアポトーシス作用 ───────────────────────────── 薬物 濃度 アポトーシス誘発細胞数 （μＭ） （％） ───────────────────────────── コントロール ６．３ ＭＳ−２０９ ５μＭ ６．４ ＵＶ（照射） ５秒間 １４．０ ＭＳ−２０９ ５μＭ ３０．０ ＋ＵＶ（照射） ５秒間 ───────────────────────────── Table 2 Apoptotic effect of HL60wild upon UV stimulation ───────────────────────────── Drug concentration Apoptosis-inducing cell number ( μM) (%) ───────────────────────────── Control 6.3 MS-209 5 μM 6.4 UV (irradiation) 5 14.0 seconds MS-209 5 μM 30.0 + UV (irradiation) 5 seconds ─────────────────────────────
【００３１】実施例３ アポトーシス誘導作用（ＴＮＦ
α刺激時） （１）方法：薬物としてはＭＳ−２０９、刺激剤として
はサイトカインの１つであるＴＮＦαを使用して以下の
実験を行った。すなわち、ヒト白血病細胞株ＨＬ６０ｗ
ｉｌｄ株を１０％牛胎児血清含有ＲＰＭＩ１６４０培地
にて５％ＣＯ2下培養し、実験前日に牛胎児血清を５％
に変更して使用した。ＭＳ−２０９は最終濃度が１０μ
Ｍとなるよう、ＴＮＦαは最終濃度が２００ｎｇ／ｍｌ
となるよう調節し、それぞれ単独および併用時の薬剤処
理後３時間後の細胞をグルタールアルデヒド固定し、２
μｇ／ｍｌＤＡＰＩ（4'、6-Diamidino-2-phenylindole
dihidorochloride）で核を染色し、蛍光顕微鏡観察によ
りクロマチン凝集像を示す核の割合を測定した。１回の
測定では１００個の核を観察し、平均で表した。 （２）結果：結果を表３（表３）に示す。ＭＳ−２０９
単独および併用でのアポトーシスを起こした細胞数の増
加が認められており、ＭＳ−２０９のアポトーシス誘導
作用が示された。Example 3 Apoptosis Inducing Effect (TNF)
(At the time of α stimulation) (1) Method: The following experiment was performed using MS-209 as a drug and TNFα as one of cytokines as a stimulant. That is, the human leukemia cell line HL60w
The ld strain was cultured in RPMI1640 medium containing 10% fetal bovine serum under 5% CO 2 , and the fetal bovine serum was reduced to 5% on the day before the experiment.
Changed to used. MS-209 has a final concentration of 10μ
M, the final concentration of TNFα is 200 ng / ml.
Cells were fixed with glutaraldehyde 3 hours after drug treatment alone and in combination with each other.
μg / ml DAPI (4 ′, 6-Diamidino-2-phenylindole
The nucleus was stained with dihidorochloride), and the ratio of nuclei showing a chromatin aggregation image was measured by fluorescence microscopy. In one measurement, 100 nuclei were observed and expressed as an average. (2) Results: The results are shown in Table 3 (Table 3). MS-209
An increase in the number of apoptotic cells was observed both alone and in combination, indicating the apoptosis-inducing effect of MS-209.
【００３２】[0032]
【表３】 表３ ＨＬ６０wildによるＴＮＦα刺激時のアポトーシス作用 ───────────────────────────── 薬物 濃度 アポトーシス誘発細胞数 （μＭ） （％） ───────────────────────────── コントロール ８．１ ＭＳ−２０９ １０μＭ １４．７ ＴＮＦα ２００ｎｇ／ｍｌ ２２．０ ＭＳ−２０９ １０μＭ ３８．９ ＋ＴＮＦα ２００ｎｇ／ｍｌ ───────────────────────────── Table 3 Table 3 Apoptotic Effect of HL60wild upon TNFα Stimulation ───────────────────────────── Drug Concentration Number of Apoptosis Inducing Cells ( μM) (%) ───────────────────────────── Control 8.1 MS-209 10 μM 14.7 TNFα 200 ng / ml 22 MS-209 10 μM 38.9 + TNFα 200 ng / ml
【００３３】[0033]
【発明の効果】本発明のアポトーシス誘導剤は、アポト
ーシス抑制を解除する作用があり、癌、リウマチ、ＳＬ
Ｅ等の自己免疫疾患、動脈硬化、各種腎炎、ウィルス感
染症等の予防薬または治療薬として期待される。本発明
のアポトーシス誘導増強剤は、既存の治療薬または放射
線、各種サイトカイン等のアポトーシス誘導刺激剤に対
する効果増強作用を有する。EFFECT OF THE INVENTION The apoptosis-inducing agent of the present invention has the effect of releasing the suppression of apoptosis, and is effective for cancer, rheumatism and SL.
It is expected as a prophylactic or therapeutic agent for autoimmune diseases such as E, arteriosclerosis, various nephritis, and viral infections. The apoptosis induction enhancer of the present invention has an effect of enhancing the effect on existing therapeutic drugs or apoptosis induction stimulants such as radiation and various cytokines.
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 31/495 ＡＢＸ Ａ６１Ｋ 31/495 ＡＢＸ ＡＣＶ ＡＣＶ ＡＤＵ ＡＤＵ ──────────────────────────────────────────────────続 き Continued on the front page (51) Int.Cl. 7 Identification code FI Theme coat ゛ (Reference) A61K 31/495 ABX A61K 31/495 ABX ACV ACV ADU ADU
Claims (6)
接の結合であるＣ＝Ｏまたは−（ＣＨ2）ｍ−（ｍは０
〜３の整数）を表し、Ｃは、式（２）又は式（３）（化
２） 【化２】 ｛式中、Ｒ1，Ｒ2，Ｒ3は互いに独立して、水素原子ま
たはフェニル基をＤは−（ＣＨ2）ｎ−（ｎは０〜３の
整数）、−ＣＨ＝ＣＨ−、又は式（４）（化３） 【化３】 （式中、Ｒ4、Ｒ5はお互いに独立して、水素原子または
ハロゲン原子を表す。）を表す。｝を表す。］で示され
るキノリン誘導体またはその生物学的に許容される塩を
含有することを特徴とするアポトーシス誘導剤。[Claim 1] The following general formula (1) [In the formula, A represents a nitrogen atom or a carbon atom, and B represents a direct bond C ＝ O or-(CH 2 ) m- (m is 0
And C is an integer of the formula (2) or the formula (3). In the formula, R 1 , R 2 , and R 3 are each independently a hydrogen atom or a phenyl group, D is — (CH 2 ) n— (n is an integer of 0 to 3), —CH ＝ CH—, or Formula (4) (In the formula, R4 and R5 independently represent a hydrogen atom or a halogen atom.) Represents｝. ] Or a biologically acceptable salt thereof.
で表される化合物である請求項１に記載のアポトーシス
誘導剤。 【化４】 2. A quinoline derivative represented by the following formula (5):
The apoptosis-inducing agent according to claim 1, which is a compound represented by the formula: Embedded image
で表される化合物である請求項１に記載のアポトーシス
誘導剤。 【化５】 3. A quinoline derivative represented by the following formula (6):
The apoptosis-inducing agent according to claim 1, which is a compound represented by the formula: Embedded image
接の結合であるＣ＝Ｏまたは−（ＣＨ2）ｍ−（ｍは０
〜３の整数）を表し、Ｃは、式（２）又は式（３）（化
７） 【化７】 ｛式中、Ｒ1，Ｒ2，Ｒ3は互いに独立して、水素原子ま
たはフェニル基をＤは−（ＣＨ2）ｎ−（ｎは０〜３の
整数）、−ＣＨ＝ＣＨ−、又は式（４）（化８） 【化８】 （式中、Ｒ4、Ｒ5はお互いに独立して、水素原子または
ハロゲン原子を表す。）を表す。｝を表す。］で示され
るキノリン誘導体またはその生物学的に許容される塩を
含有することを特徴とするアポトーシス誘導増強剤。4. The following general formula (1): [In the formula, A represents a nitrogen atom or a carbon atom, and B represents a direct bond C ＝ O or-(CH 2 ) m- (m is 0
And C is an integer of the formula (2) or the formula (3). In the formula, R 1 , R 2 , and R 3 are each independently a hydrogen atom or a phenyl group, D is — (CH 2 ) n — (n is an integer of 0 to 3), —CH ＝ CH—, or Formula (4) (In the formula, R4 and R5 independently represent a hydrogen atom or a halogen atom.) Represents｝. ] Or a biologically acceptable salt thereof, the apoptosis induction enhancer.
で表される化合物である請求項４に記載のアポトーシス
誘導増強剤。 【化９】 5. A quinoline derivative represented by the following formula (5):
The apoptosis induction enhancer according to claim 4, which is a compound represented by the formula: Embedded image
０）で表される化合物である請求項４に記載のアポトー
シス誘導増強剤。 【化１０】 6. A quinoline derivative represented by the following formula (6):
The apoptosis induction enhancer according to claim 4, which is a compound represented by 0). Embedded image
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| JP (1) | JP2000072749A (en) |
Cited By (3)
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1998
- 1998-08-24 JP JP10237713A patent/JP2000072749A/en active Pending
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