HU227190B1 - Trpm-2 antisense therapy - Google Patents

Trpm-2 antisense therapy Download PDF

Info

Publication number
HU227190B1
HU227190B1 HU0200093A HUP0200093A HU227190B1 HU 227190 B1 HU227190 B1 HU 227190B1 HU 0200093 A HU0200093 A HU 0200093A HU P0200093 A HUP0200093 A HU P0200093A HU 227190 B1 HU227190 B1 HU 227190B1
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
trpm
antisense
seq
odn
composition
Prior art date
Application number
HU0200093A
Other languages
English (en)
Inventor
Martin Gleave
Paul S Rennie
Hideaki Miyake
Colleen Nelson
Original Assignee
Univ British Columbia
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Univ British Columbia filed Critical Univ British Columbia
Publication of HUP0200093A2 publication Critical patent/HUP0200093A2/hu
Publication of HU227190B1 publication Critical patent/HU227190B1/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C12N15/1135—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against oncogenes or tumor suppressor genes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/337—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having four-membered rings, e.g. taxol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/66—Phosphorus compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
    • A61K31/7034—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin
    • A61K31/704—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin attached to a condensed carbocyclic ring system, e.g. sennosides, thiocolchicosides, escin, daunorubicin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K41/00—Medicinal preparations obtained by treating materials with wave energy or particle radiation ; Therapies using these preparations
    • A61K41/0038—Radiosensitizing, i.e. administration of pharmaceutical agents that enhance the effect of radiotherapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/24—Drugs for disorders of the endocrine system of the sex hormones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/24—Drugs for disorders of the endocrine system of the sex hormones
    • A61P5/28—Antiandrogens
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/775—Apolipopeptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
    • C12N2310/315—Phosphorothioates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/321—2'-O-R Modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/33—Chemical structure of the base
    • C12N2310/334—Modified C
    • C12N2310/3341—5-Methylcytosine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
    • C12N2310/341—Gapmers, i.e. of the type ===---===
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
    • C12N2310/346—Spatial arrangement of the modifications having a combination of backbone and sugar modifications

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)

Description

A találmány tárgyát rákos megbetegedések - elsősorban prosztatarák - antiszensz terápiás kezelése képezi, amely szerint a kezelésre tesztoszteronrepresszált prosztata-mRNS-2-höz (TRPM-2) kötődni képes antiszensz oligonukleotidot alkalmazunk.
A jelen bejelentés igényli a 60/121,726 számú, 1999. február 26-án benyújtott USA-beli ideiglenes szabadalmi bejelentés elsőbbségét, melyet teljes terjedelmében a kitanítás részeként kell tekinteni.
A prosztatarák a leggyakrabban előforduló, férfiakat sújtó rákbetegség, és a második vezető helyen álló, rákbetegségre visszavezethető halálok férfiak esetén a nyugati világban. Mivel a prosztatarák androgénszenzitív tumor, néhány kezelési előirat szerint androgénmegvonást (például kasztráción keresztül) alkalmaznak előrehaladott prosztatarákban szenvedő pácienseken. Az androgénmegvonás a prosztatatumorban kiterjedt apoptózishoz, és ennélfogva a betegség visszafejlődéséhez vezet. Azonban a kasztrációindukált apoptózis nem teljes, és végül a túlélő tumorsejtek továbbfejlődnek androgénfüggetlen állapotba. Ez a továbbfejlődés a legfőbb akadálya a túlélés és az élet minőségének javítására, és ezért az erőfeszítések arra irányultak, hogy célba vegyék az androgénfüggetlen sejteket. Ezek az erőfeszítések olyan nem hormonális terápiákra irányulnak, melyek az androgénfüggetlen tumorsejteket veszik célba [Yagoda és munkatársai, Cancer 71 (Supp.3), 1098-1109 (1993); Oh és munkatársai, J. Ural. 60, 1220-1229 (1998)], azonban eddig nem hormonális ágens még nem javította a túlélést. Ezért alternatív megközelítésekre van szükség.
Megfigyelték, hogy tumorsejtek számos fehérjefajtát expresszálnak fokozott mennyiségben androgénmegvonást követően. Ezen fehérjék közül legalábbis néhányról feltételezték, hogy a megfigyelt apoptotikus sejtpusztulással asszociált, melyet az androgénmegvonás esetén figyeltek meg [Raffo és munkatársai, Cancer Rés. 4445-4448 (1995); Krajewska és munkatársai, Am. J. Pathol. 148, 1567-1576 (1996); McDonell és munkatársai, Cancer Rés. 52, 6940-6944 (1992)]. A fehérjék többségének funkcióit azonban nem tudjuk egyértelműen megmagyarázni. A TRPM-2 (amely szulfátéit glikoprotein-2, azaz SGP-2-ként vagy klaszterinként is ismeretes) ez utóbbi kategóriába tartozik.
TRPM-2 egy mindenütt előforduló fehérje, amelyről feltételezik, hogy különféle aktivitásokat képes kifejteni. Prosztata-epitélsejtben a TRPM-2-expresszió közvetlenül kasztrációt követően fokozódik, patkány-prosztatasejtekben 3-4 nappal a kasztráció után elér egy csúcsot, amely egybeesik erőteljes sejtpusztulás beindulásával. Ezen eredmények alapján néhány kutató arra a következtetésre jutott, hogy TRPM-2 a sejtpusztulás markere, és elősegíti az apoptózist. Másrészt az a megfigyelés, hogy Sertoli-sejtek és bizonyos epitélsejtek nagymértékben expresszálnak TRPM-2-t megnövekedett szintű sejtpusztulás nélkül, kérdéseket vet fel arra vonatkozóan, hogy vajon ez a következtetés helyes-e.
Sensibar és munkatársai [Cancer Research 55, 2431-2437 (1995)] közöltek in vitro kísérleteket, melyeket TRPM-2 prosztatasejt-pusztulásban betöltött szerepének tisztázása céljából végeztek. LNCaP-sejteket alkalmaztak, melyeket TRPM-2-t kódoló génnel transzfektáltak, és azt figyelték, hogy vajon a fehérje expressziója befolyásolja-e tumornekrózis-faktor-a (TNFa) hatásait, amelyre LNCaP-sejtek nagyon érzékenyek, ugyanis ennek hatására normálisan mintegy 12 órán belül bekövetkezik a sejtpusztulás. Kimutatták, hogy TNFa-val transzfektált LNCaP-sejtekkel való kezelés TRPM-2 mennyiségének tranziens növekedését eredményezte néhány óra hosszáig, de ez a mennyiség felszívódott a sejtpusztulást megelőző DNS-fragmentáció idejére. TRPM-2-szekvencia 1-21. bázisainak megfelelő antiszensz molekula alkalmazása (de más TRPM-2 antiszensz oligonukleotid alkalmazása nem) a TRPM-2-expresszió mértékének lényegi csökkenését és apoptotikus sejtpusztulás mértékének növekedését eredményezte TNFa hatásának kitett LNCaP-sejtekben. Ez Sensibart és munkatársait olyan hipotézis felállításához vezette, hogy TRPM-2 túltermelése megvédheti a sejteket TNF citotoxikus hatásától, és hogy TRPM-2 kimerülése felelős a sejtpusztulás kialakulásáért, bár a hatás mechanizmusa tisztázatlan maradt.
Sensibar és munkatársai ugyan közöltek információkat a TRPM-2 lehetséges szerepéről, azonban a közölt eredmények mégiscsak modellrendszerből származtak, amelyben TRPM-2 expressziója transzfektált génre alapult. Továbbá a TRPM-2-expresszió mértéke nagyon alacsony volt vagy nem fordult elő más laborokban növesztett LNCaP-sejtekben. Nagyon bonyolult az a szituáció, amely in vivő alakul ki, ha prosztatatumorsejteket androgénmegvonásnak teszünk ki, amelynek eredményeként számos fehérje expressziójának mértéke megváltozik. Tehát Sensibar és munkatársai által közölt adatokból nem lehet előre jelezni, hogy vajon a TRPM-2 ugyanúgy működne-e akkor is, ha más fehérjékkel lenne kombinációban, vagy androgénmegvonást követően a TRPM-2-mennyiségben bekövetkezett változásnak lenne-e bármilyen in vivő terápiásán jótékony hatása. Valóban, azok alapján, hogy a TRPM-2 lényegi mennyiségekben expresszálódik prosztatatumorsejtekben az androgénmegvonás különböző fázisaiban, beleértve azokat a fázisokat is, amelyekben szignifikáns apoptotikus sejtpusztulás megy végbe, feltételezzük, hogy a TRPM-2 szerepe in vivő összetettebb lehet. Tehát, bár a szakirodalomban közölnek adatokat apoptotikus sejtpusztulás bizonyos vonatkozásairól prosztatatumorsejtekben, nincsen semmiféle kitanítás vagy módszertani javaslat az androgénfüggetlenség kialakulásának késleltetésére.
A találmány szerinti megoldás kidolgozása során célul tűztük ki ilyen eljárás kidolgozását.
A találmány szerinti megoldás kidolgozása során további célul tűztük ki terápiás hatású, antiszensz molekulák előállítását, amelyek késleltetik az androgénfüggetlenség kialakulását prosztatatumorsejtekben.
A találmány szerinti megoldás kidolgozása során további célul tűztük ki eljárás kidolgozását TRPM-2-t expresszáló rákból származó ráksejtek kemoszenzitivi2
HU 227 190 Β1 tásának vagy besugárzásra való érzékenységének növelésére.
A találmány szerinti megoldás kidolgozása során további célul tűztük ki terápiás hatású, antiszensz molekulák előállítását, amelyek TRPM-2-expressziót képesek gátolni.
A találmány szerinti megoldásban meghatároztuk, hogy TRPM-2-expresszió mértékét csökkentő, antiszensz terápia jótékony terápiás hatásokat képes kifejteni rák kezelésében. Ilyen antiszensz terápiát különösen prosztatarák és vesesejtrák kezelésére lehet alkalmazni.
Antiszensz TRPM-2-oligonukleotid (ODN) prosztatatumorsejtekhez való hozzáadása in vivő hatékonyan késlelteti az androgénfüggetlenség kialakulását. Tehát a találmány tárgya egyik vonatkozásában eljárás prosztatarák kezelésére prosztatarákban szenvedő egyénben, amelyben androgénelvonást iniciálunk prosztatatumorsejtek apoptotikus sejtpusztulásának indukálása céljából egyénben, és beadunk az egyénnek TRPM-2 expresszióját gátolni képes készítményt, ezáltal késleltetjük prosztatatumorsejtek kifejlődését androgénfüggetlen állapotba az egyénben. Továbbá antiszensz TRPM-2 és citotoxikus kemoterápia (például taxánok) szinergisztikus alkalmazása fokozza a kemoszenzitivitást hormonhatásra nem érzékeny prosztatarákban. A találmány tárgyát másik vonatkozásában olyan második antiszensz ODN beadása képezi antiszensz TRPM-2-ODN-nel együtt, amely TRPM-2-től eltérő antiapoptotikus fehérje expresszióját képes gátolni.
Azt találtuk, hogy antiszensz TRPM-2 jótékony hatásokat képes kifejteni más ráktípusok esetén is. Konkrétan, antiszensz TRPM-2-ODN 10%-nál nagyobb mértékben fokozza a kemoszenzitivitást (objektív reszponzivitási arányt) humán vesesejtrák esetén, amely normálisan olyan kemorezisztens betegség, amely nem kezelhető aktív kemoterápiás ágenssel. A besugárzásra való érzékenység szintén fokozható, ha TRPM-2-t expresszáló sejteket antiszensz TRPM-2ODN-nel kezelünk. Tehát antiszensz TRPM-2-ODNeket olyan különféle ráktípusok kezelésére lehet alkalmazni, amelyekben megfigyelhető TRPM-2 expressziója.
Az 1. ábrán bemutatjuk az androgénfüggetlenség kialakulásának késleltetését, melyet antiszensz TRPM-2-ODN alkalmazásával érünk el.
A 2. ábrán bemutatjuk a 10 antiszensz oligonukleotid helyzetét, amelyeket arra vizsgáltunk, hogy milyen mértékben képesek TRPM-2expressziót gátolni, és androgénfüggetlenség kialakulását késleltetni.
A 3. ábrán bemutatjuk TRPM-2-mRNS expresszió mértékét különböző antiszensz ODN-ek jelenlétében.
A 4. ábrán bemutatjuk TRPM-2-mRNS mennyiségeit olyan Shionogi-sejtekben, melyeket különböző mennyiségű antiszensz TRPM-2ODN-nel vagy nem párosodó bázist tartalmazó, kontroll ODN-nel in vitro kezeltünk.
Az 5. ábrán dózis-válasz görbe látható taxol és antiszensz TRPM-2-ODN kombinációja esetén.
A 6. ábrán dózis-válasz görbe látható taxol, antiszensz TRPM-2-ODN és antiszensz Bcl-2ODN kombinációja esetén.
A 7A. ábrán bemutatjuk TRPM-2-mRNS mennyiségének csökkenését humán vesesejtrákban, antiszensz TRPM-2-ODN-es kezelés után.
A 7B. ábrán bemutatjuk humán vesesejtrák kemoszenzitivitásának fokozódását taxolra, antiszensz TRPM-2-ODN-es kezelés után.
A 8. ábrán bemutatjuk TRPM-2-expresszió mértékét PC-3-prosztataráksejtekben, különböző dózisú besugárzás után.
A 9A. és 9B. ábrán TRPM-2-t túltermelő (LNCaP/T) és normális mértékben expresszáló (LNCaP/P), humán prosztatasejtvonalak besugárzással szemben mutatott, összehasonlító rezisztenciáját ábrázoljuk.
A 10. ábrán bemutatjuk PC-3-sejtek fokozott érzékenységét besugárzásra, antiszensz TRPM-2-ODN-nel való kezelés után.
A 11 A. és 11B. ábrán bemutatjuk PC-3-sejtek fokozott érzékenységét besugárzásra, antiszensz TRPM-2-ODN-nel való kezelés után.
A 12A. és 12B. ábrán bemutatjuk Shionogi-tumorsejtek fokozott érzékenységét paclitaxel és mitoxantron kemoterápiás ágensekre, antiszensz TRPM-2-ODN beadása után.
A találmány tárgyát antiszensz TRPM-2-ODN-ek, valamint ilyen anyagokat tartalmazó készítmények rák kezelésére történő alkalmazása képezi. A találmány szerinti megoldás olyan rákbetegségek kezelésére alkalmas, ahol a ráksejtek TRPM-2-t expresszálnak. Ráksejtek három jelentős osztálya expresszál TRPM2-t: prosztataráksejtek, humán vesesejtes rákból (RCC) származó sejtek és bizonyos mellráksejtek.
A találmány tárgyát, egyik előnyös megvalósítási módja szerint eljárás képezi kasztrációval indukált tumorsejtpusztulás mértékének növelésére és androgénszenzitív prosztataráksejtek androgénfüggetlenné válásának késleltetésére; terápiás eljárás prosztatarákban szenvedő egyének, például emberek kezelésére; és ilyen eljárásokban hatékonyan alkalmazható terápiás ágensek. A találmány szerinti terápiás eljárást leginkább előrehaladott prosztatarákban szenvedő egyének kezelésére alkalmazzuk.
Kasztrációval indukált tumorsejtpusztulás mértékének növelését és androgénszenzitív prosztataráksejtek androgénfüggetlenné válásának késleltetését a sejtek általi TRPM-2-expresszió gátlásával érjük el. Három modellrendszerben végeztünk kísérleteket, in vivő Shionogi-tumormodellben, humán TRPM-2-vel transzfektéit LNCaP-modellben és humán PC-3-modellben, amelyek együttvéve azt mutatták, hogy ilyen, androgénfüggés késleltetéséhez vezető gátlást úgy lehet elérni, hogy androgénszenzitív prosztatatumorsejteket antiszensz oligodezoxinukleotidokkal (ODN) kezelünk.
HU 227 190 Β1
Az első kísérletben azt elemeztük, hogy egéreredetű TRPM-2 antiszensz molekula (1. azonosító számú szekvencia) Shionogi-tumormodellben milyen mértékben képes késleltetni az androgénfüggetlenség kialakulását. A Shionogi-tumormodell androgénfüggetlen, egéreredetű emlőkarcinóma xenograftja, amely szubkután növekszik hím szingenikus gazdaszervezetben. Shionogi-tumorsejtek nagymértékben tumorkeltőek és lokálisan invazívak (behatolók). Kimutatták, hogy a sejtek úgy adnak választ androgénmegvonásra, hogy prosztatatumorsejtek megfigyelt tulajdonságait mimetizálják, és elfogadott, validált prosztatarákmodellnek számítanak emberekben [Bruchovsky és munkatársai, Cancer Rés. 50, 2275-2282 (1990); Rennie etal., Cancer Rés. 48, 6309-6312 (1988); Bruchovsky és munkatársai, Cell 13, 272-280 (1978); Gleave és munkatársai, „Genitourinary Oncology”, 367-378. oldal, szerk. Lángé és munkatársai, Lippencott (1997); Gleave és munkatársai, J. Urol. 157, 1727-1730 (1997); Bruchovsky és munkatársai, The Prostate 6, 13-21 (1996)]. Tehát az androgénmegvonás apoptózist és tumorregressziót vált ki nagymértékben reprodukálható módon. Továbbá TRPM-2- és Bcl-2-expresszió mértékének változásai kasztrációt követő humán prosztatarákban, és az androgénfüggetlenség kialakulása alatt hasonlóak azokhoz, amelyeket megfigyeltek Shionogitumorsejtekben. Tehát a Shionogi-tumormodell képes mimetizálni prosztataráksejtek sok tulajdonságát. Továbbá a Shionogi-tumormodell nagyon hasznos modellt jelent olyan vegyületek elemzéséhez, amelyek az androgénfüggetlenség kialakulását képesek késleltetni. Kasztráció után a tumor teljes visszafejlődése ellenére gyorsan növekvő, androgénfüggetlen Shionogi-tumorok egységesen kiújulnak egy hónap után, amely megbízható végpontot jelent olyan ágensek elemzésére, amelyek az androgénfüggetlenség kialakulását képesek késleltetni. Általában azok az események, amelyek Shionogi-tumormodellben egy hónap alatt lejátszódnak, humán páciensekben körülbelül két évig tartanak.
Antiszensz ODN-ek TRPM-2-expressziót gátló képességét androgénfüggetlenség kialakulásának késleltetése céljából úgy elemeztük, hogy mértük a tumortérfogatot kasztráció után Shionogi-tumormodellben. Tesztállatokat (n=7) intraperitoneálisan kezeltünk pufferolt sóoldatban lévő, antiszensz TRPM-2-ODN-nel (1. azonosító számú szekvencia) naponta egyszer 12,5 mg/kg ismételt dózisokkal. Kontrollként nem párosodó bázist tartalmazó („mismatch”) ODN-nel (2. azonosító számú szekvencia) kezeltünk állatokat (n=7). Az
1. ábrán bemutatottak szerint mind a tesztcsoportban, mind a kontrollcsoportban, a várakozásnak megfelelően, kasztráció után közvetlenül csökkent a tumor térfogata, de az antiszensz TRPM-2-ODN-nel kezelt egerekben a tumorok gyorsabban fejlődtek vissza, mint a kontrollokban. A kontrollcsoportban a tumortérfogat még növekedett is, a várakozások szerint, amely az androgénfüggetlenség kifejlődésével asszociált. Ezzel ellentétben 49 nappal a kasztráció után kismértékben visszafejlődtek tumorok antiszensz TRPM-2-ODN-nel kezelt egerekben, de az átlagos kiújulási idő körülbelül kétszer annyi volt, mint a kontrollcsoportban. Tehát TRPM-2 gátlása nemcsak közvetlenül az androgénmegvonás után fellépő sejtpusztulás mértékének növelésére hatékony, hanem az androgénfüggetlenség kialakulásának késleltetésére is. A tumortérfogat gyorsabb csökkenése antiszensz TRPM-2-ODN-ekkel kezelt egerekben a kasztrációindukált apoptózis korábbi fellépésének és kiterjedtebb jellegének tulajdonítható. Ezt megerősítették poli(ADP-ribóz)-polimeráz (PARP) hasítási fragmensek detektálásával Shionogi-tumorfajtákban [Miyake és munkatársai, Cancer Rés. 60, 170-176 (2000)].
Annak elemzése céljából, hogy mely humán, antiszensz, TRPM-2-mRNS-szekvenciákkal komplementer ODN-ek a leghatékonyabbak erre a célra, tíz antiszensz foszforotioát-ODN-ből álló sorozatot preparáltunk, amely 2. ábrán bemutatott, különböző mRNS-régiókat ölelt fel. Ezt a tíz ODN-szekvenciát bemutatjuk a mellékelt szekvencialistában, 3-12. azonosító számú szekvenciákként. A tíz humán antiszensz ODN-t TRPM-2-vel transzfektált LNCaP-sejtek és humán prosztatarákból származó PC-3-sejtek alkalmazásával vizsgáltuk arra vonatkozóan, hogy milyen mértékben képesek TRPM-2-mRNS-expressziót gátolni. A 3. ábrán bemutatottak szerint a tesztelt antiszensz ODN-ek különböző mértékben gátoltak TRPM-2-mRNS-expressziót, a legjobb eredményeket a 4., 5. és 12. azonosító számú szekvenciával értük el. Az 5. azonosító számú szekvencia megfelelt Sensibar és munkatársai által alkalmazott szekvenciáknak, amelyek TRPM-2-expressziót gátoltak LNCaP-sejtekben, és komplementer a TRPM-2-mRNS első 21 bázisával. A leghatékonyabb leszabályozás a 4. azonosító szekvenciával fordult elő. A hatékony szekvenciák mindegyikében előfordul egy átfedő részlet a TRPM-2-mRNS iniciációs vagy terminációs helyével. Tehát, általános értelemben, a találmány szerinti eljárást olyan antiszensz oligonukleotidokkal lehet végrehajtani, amelyek komplementerek a TRPM-2-mRNS transzlációs iniciációs helyét vagy terminációs helyét tartalmazó régiójával.
A találmány egy további vonatkozásában prosztatarákban szenvedő egyének, beleértve emberek, terápiás kezelését úgy végezzük, hogy androgénmegvonást iniciálunk az egyénben, prosztatatumorsejtek apoptotikus sejtpusztulásának indukálása céljából, és beadunk az egyénnek olyan készítményt, amely hatékonyan képes tumorsejtek TRPM-2-expresszióját gátolni, ezáltal az egyénben késleltetjük prosztatatumorsejtek kifejlődését androgénfüggetlen állapotba.
Az androgénmegvonást sebészeti (mindkét here eltávolításával) vagy orvosi (tesztoszteron drogindukált szuppressziójával) kasztrálással lehet végrehajtani, ami jelenleg alkalmazott javallat prosztatarák kezelésére. Az orvosi kasztrálást különböző kezelési előiratok szerint lehet elérni, például LHRH-ágensek vagy antiandrogének alkalmazásával [Gleave és munkatársai, CMAJ 160, 225-232 (1999)]. Időszakos terápiában reverzibilis androgénmegvonást Gleave és munkatársai [Eur. Urol. 34 (Supp.3.) 37—41 (1998)] által leírtak szerint végeznek.
HU 227 190 Β1
TRPM-2-expresszió gátlása lehet tranziens, és ideális esetben egybe kell esnie androgénmegvonással. Emberek esetén ez azt jelenti, hogy az expresszié gátlásának egy vagy két nappal az androgénmegvonás után kell hatásosnak lennie, és körülbelül 3-6 hónapig kell tartania. Ehhez több dózisra is szükség lehet. Azonban nyilvánvaló, hogy az időtartam meghosszabbítható, kezdődhet a kasztráció előtt, és azután bármeddig tarthat anélkül, hogy eltérnénk a találmány által igényelt oltalmi körtől.
Azt is meghatároztuk, hogy antiszensz TRPM-2ODN-ek fokozzák a kemoszenzitivitást humán vesesejtrákban (RCC). RCC kemorezisztens betegség, amely nem kezelhető olyan aktív kemoterápiás ágenssel, amely 10%-nál nagyobb mértékben fokozná az objektív reszponzivitási arányt. Megfigyeltük, hogy TRPM-2-expresszió mértékének növekedésére proximális glomerulussejtek különféle stimulusok, például húgyvezeték elzáródása esetén és aminoglükozidázos kezelés hatására apoptózison mennek keresztül. Azonban TRPM-2-expresszió funkcionális jelentősége RCC-ben nincs jól dokumentálva. Azonban teszteredmények azt mutatják, hogy antiszensz TRPM-2-ODN kemoszenzitivitást fokoz humán RCC-CaKi-2-sejtekben (lásd lentebb 6. példát).
Azt találták, hogy antiszensz TRPM-2-ODN-ek besugárzásra való érzékenységet is fokoznak (lásd lentebb 7. példát).
TRPM-2-expresszió gátlását elérhetjük antiszensz ODN-ek, különösen olyan ODN-ek beadásával, amelyek komplementerek a TRPM-2-mRNS transzlációs iniciációs helyét vagy terminációs helyét tartalmazó régiójával. Konkrétan prosztatarák kezelésére emberekben hatásos szekvenciákat bemutatunk 4., 5. és 12. azonosító számú szekvenciaként.
Az alkalmazott ODN-eket módosítani lehet az ODN in vivő stabilitásának fokozása céljából. Például az ODN-eket foszforotioátszármazékok formájában lehet alkalmazni (hidat nem képező foszforil-oxigénatomok helyettesítése kénatommal), amelyek fokozott rezisztenciát mutatnak nukleázos emésztéssel szemben. MOE-módosítás (ISIS-váz) szintén hatékony.
Antiszensz ODN-eket különböző, szakember által ismert mechanizmusok alkalmazásával lehet beadni, például önmagukban vagy gyógyászatilag elfogadható lipidhordozók formájában. Antiszensz ODN célba juttatására alkalmas lipidhordozókat leírnak például az 5,855,911 és 5,417,978 számú USA-beli szabadalmi leírásban, melyet a kitanítás részének tekintünk. Antiszensz ODN-t általában beadhatunk intravénásán, intraperitoneálisan, szubkután vagy orálisan, vagy közvetlenül tumorba injektálva, lokálisan. Egéreredetű Shionogi-modell alkalmazásával végzett kísérletek alapján úgy tűnik, hogy antiszensz ODN elsősorban tumorsejtekben aktív. Valóban, TRPM-2-expresszió nem tumoros szövetekben lényegében változatlan volt, és nem figyeltünk meg mellékhatásokat antiszensz ODNbeadás esetén.
A beadott antiszensz ODN mennyisége akkora, ami hatékonyan képes TRPM-2-expressziót gátolni prosztatasejtekben. Nyilvánvaló, hogy ez a mennyiség változhat az alkalmazott antiszensz ODN hatékonyságától, és az alkalmazott hordozó természetétől függően. A megfelelő mennyiséget szakember képes meghatározni bármelyik adott készítményre nézve, standard tesztsorozatok tervezésén keresztül, a megfelelő terápiás szint becslése céljából.
A találmány szerinti, prosztatarák kezelésére szolgáló eljárásban beadunk továbbá kemoterápiás ágenseket és/vagy további, különböző célpontokra irányuló antiszensz ODN-eket. Például Shionogi-tumormodell alkalmazásával azt találtuk, hogy antiszensz TRPM-2ODN megnövelte a hagyományos kemoterápiás ágensekkel, például taxánokkal (paclitaxel vagy docetaxel) és mitoxantronnal szembeni érzékenységet (12A. és 12B. ábra). A 12A. és 12B. ábrán bemutatottak szerint antiszensz TRPM-2-ODN-kezelés taxol vagy mitoxantron jelenlétében csökkent tumortérfogatot eredményezett olyan kezeléshez képest, amelyben taxoltvagy mitoxantront nem párosodó bázist tartalmazó („mismatch”, MM) ODN-nel kombinációban alkalmaztunk. Más reagensek valószínűleg szinergisztikus aktivitást mutatnak, például más citotoxikus ágensek (például ciklofoszfamid, topoizomerázinhibitor), angiogenezisinhibitorok, differenciálódást elősegítő ágensek és szignál transzdu kciós inhibitorok. Ehhez hasonlóan TRPM-2 antiszensz ODN kombinációi más antiszensz ODN-fajtákkal, például antiszensz Bcl-2-ODN-nel, jobban működnek Shionogi-sejtek in vitro elpusztításában, mint bármelyik ODN egymagában. Tehát TRPM-2 képes együtt működni más antiszensz molekulákkal, például antiszensz Bcl-1-, Bcl-xl- vagy c-myc-ODN-nel, nagyobb mértékű hatékonyság biztosítása céljából.
A találmány szerinti megoldást a továbbiakban az alábbi példákra hivatkozva ismertetjük.
1. példa
Shionogi-tumormodellben kísérleteket végeztünk egéreredetű emlőkarcinómából származó, SC-115 AD, transzplantálható, Toronto-alvonalhoz tartozó sejteket alkalmazva. In vivő kísérletekhez körülbelül 5χ106 Shionogi-karcinómasejtet injektáltunk szubkután kifejlett DD/S-törzshöz tartozó egerekbe. Amint a Shionogitumorok mérete elérte az 1-2 cm átmérőt, rendszerint 2-3 héttel az injektálás után, alhasi metszés alkalmazásával kasztrálást végeztünk, metoxifluránanesztézia alatt. Az egerek és a tumorkészlet fenntartását és az operáció műveletét korábban már leírták [Bruchovsky és munkatársai, Cancer Rés. 50, 2275-2282 (1990); Rennie etal., Cancer Rés. 48, 6309-6312 (1988); Bruchovsky és munkatársai, Cell 13, 272-280 (1978); Gleave és munkatársai, „Genitourinary Oncology”, 367-378. old., szerk. Lángé és munkatársai, Lippencott (1997); Gleave és munkatársai, J. Ural. 157, 1727-1730 (1997); Bruchovsky és munkatársai, The Prostate 6, 13-21 (1996)].
Az egereket random szelektáltuk rágcsálóból származó, antiszensz foszforotioát-TRPM-2-ODN (1. azonosító számú szekvencia) vagy nem párosodó bázist tartalmazó („mismatch”), kontroll ODN alkalmazásával
HU 227 190 Β1 végzett kezeléshez, ez utóbbiban két bázis különbözött az antiszensz TRPM-2-ODN-től. Az egyes kísérleti csoportok 7 egeret tartalmaztak. Egy nappal a kasztráció után foszfátpufferolt sóoldatban feloldott, 12,5 mg/kg antiszensz TRPM-2-t vagy nem párosodó bázist tartalmazó, kontroll ODN-t injektáltunk intraperitoneálisan, naponta egyszer minden egérbe, 40 napig. A tumortérfogatot hetente kétszer mértük, és az alábbi képlet szerint számítottuk: hossz x szélesség x mélység x 0,5236. Az adatok ábrázolása: átlagos tumortérfogat ± standard deviáció.
A kísérlet eredményeit bemutatjuk az 1. ábrán. Amint látható, Shionogi-tumorok gyorsabban visszafejlődtek, és a teljes visszafejlődés korábban bekövetkezett antiszensz TRPM-2-ODN-nel kezelt egerekben. Továbbá antiszensz TRPM-2-ODN-nel való kezelés lényegesen késleltette az androgénfüggetlenség kialakulását, amelyet a megnövekedett tumortérfogat jelzett 21 nap múlva a kontrollállatokban. Nem figyeltünk meg mellékhatásokat, amelyek antiszensz TRPM-2 vagy nem párosodó bázist tartalmazó kontroll beadásával asszociáltak.
Annak vizsgálata céljából, hogy az ODN-kezelés milyen hatásokat képes kifejteni TRPM-2-mRNS mennyiségére, Northern-blot-analízist végeztünk egerekből származó Shionogi-tumorszöveten. Az egereket naponta egyszer kezeltük 12,5 mg/kg antiszensz TRPM-2-ODN (n=6) vagy nem párosodó bázist tartalmazó kontroll intraperitoneális injektálásával, a kasztráció utáni első naptól kezdve. A kasztráció utáni negyedik napon a tumorszöveteket eltávolítottuk, és Northern-blot alkalmazásával analizáltuk TRPM-2mRNS-re. Antiszensz TRPM-2-ODN beadása 75% csökkenést eredményezett TRPM-2-mRNS mennyiségében Shionogi-tumorokban, nem párosodó bázist tartalmazó, kontroll ODN-nel kezelt tumorokhoz képest (3. ábra).
Összehasonlítható analíziseket végeztünk normál egérszerveken. Lépből, veséből, prosztatából és agyból vettünk mintákat Shionigi-tumorban szenvedő, TRPM-2-ODN-nel és nem párosodó bázist tartalmazó, kontroll ODN-nel, ugyanolyan kezelési rend szerint kezelt egerekből, és Northern-blot alkalmazásával kezeltük azokat. Bár TRPM-2-mRNS mennyiségei szignifikánsan alacsonyabbak voltak tumorszövetekben, antiszensz TRPM-2-ODN beadásának nem volt hatása a TRPM-2-mRNS mennyiségére a normálszövetekben.
2. példa
Antiszensz TRPM-2-ODN (1. azonosító számú szekvencia) szekvenciaszelektivitását igazoltuk TRPM-2-mRNS-expresszió mértékének összehasonlításával in vitro fenntartott Shionogi-tumorsejtekben, különböző mennyiségű antiszensz TRPM-2-ODN-nel vagy nem párosodó bázist tartalmazó kontroll ODN-nel (2. azonosító számú szekvencia) való kezelés után. Az ODN-ek sejtek általi felvételének elősegítése céljából az ODN-eket kationos lipidhordozóban (Lipofectin™, Life Technologies, Inc.) szereltük ki. A sejteket kétszer, kétnapos időtartamban kezeltük az alábbi eljárás szerint. A sejteket 20 percig előinkubáltuk 4 pg/ml lipofektinnel, szérummentes OPTI-MEM™-ben (Life Technologies, Inc.), és azután a kiválasztott koncentrációjú ODN-t és lipofektint tartalmazó tápközegben inkubáltuk 4 óra hosszáig. A tápközeget azután standard tenyésztő tápközegre cseréltük.
A sejtekben lévő TRPM-2-mRNS mennyiségét Northern-blot-analízissel értékeltük ki. A 4. ábrán bemutatottak szerint Shionogi-sejtek kezelése TRPM-2-ODN-nel dózisfüggő módon csökkentette a TRPM-2-mRNS mennyiségét. Ezzel ellentétben TRPM-2-mRNS mennyiségét nem befolyásolta nem párosodó bázist tartalmazó („mismatch’’) ODN (2. azonosító számú szekvencia), bármilyen alkalmazott koncentrációban. Tehát az antiszensz TRPM-2-ODN látszólag szekvenciaspecifikus.
3. példa
In vitro fenntartott Shionogi-sejteket különböző mennyiségű taxollal egymagában, vagy kombinációban 500 mM antiszensz TRPM-2-ODN-nel (1. azonosító számú szekvencia) vagy nem párosodó bázist tartalmazó kontrollal (2. azonosító számú szekvencia) kezeltünk. A sejteket kétszer kezeltük a 2. példában leírtak szerint, és meghatároztuk a megmaradt életképes sejtek százalékos arányát. Az eredményeket összefoglaltuk az 5. ábrán. Amint látható, antiszensz TRPM-2ODN alkalmazása eltolta a dózisfüggést ábrázoló görbét balra, 5-10-szeres faktorral csökkentve az IC50-et. Hasonló eredményeket kaptunk paclitaxel helyett mitoxantron alkalmazásával (12A. és 12B. ábra).
4. példa
Megismételtük a 3. példában leírt kísérletet antiszensz Bcl-2-ODN (13. azonosító számú szekvencia) vagy nem párosodó bázist tartalmazó, Bcl-2-ODN (14. azonosító számú szekvencia) hozzáadásával, antiszensz/nem párosodó bázist tartalmazó TRPM-2-ODN és taxol különböző kombinációival. Az eredményeket bemutatjuk a 6. ábrán. Antiszensz TRPM-2-ODN és antiszensz Bcl-2-ODN és taxol kombinációja tovább fokozta a taxol hatásait. Tehát úgy tűnik, hogy további antiapoptotikus ágensek célba juttatása jótékony terápiás hatásokat képes kifejteni.
5. példa
Alkalmas antiszensz TRPM-2-ODN-szekvenciák azonosítása céljából, humán terápiában való alkalmazásra, a humán TRPM-2-gén 10 különböző helyére specifikus (2. ábra, 3-12. azonosító számú szekvenciák), antiszensz ODN-szekvenciát szintetizáltunk, és a
2. példában leírt kezelési eljárást alkalmazva teszteltük arra vonatkozóan, hogy milyen mértékben képesek csökkenteni TRPM-2-gén expressziójának mértékét PC-3 jelű, humán prosztatarákban és olyan transzfektált LNCaP-sejtekben, amelyek túltermelik TRPM-2-t. Az eredményeket összefoglaljuk a 3. ábrán. Amint látható, 4., 5. és 12. aktív TRPM-2-expresszió mértékének csökkentésében. Ez a három szekvencia átfed vagy közvetlenül szomszédos a transzlációs iniciációs vagy terminációs hellyel.
HU 227 190 Β1
6. példa
Immunohisztokémiai festést alkalmaztunk klaszterinexpresszió jellemzésére 17 RCC és normál veseszövetben, melyekhez radiális veseeltávolításból származó mintákból jutottunk. TRPM-2 expressziójának mértékét 5 ACHN, CaKi-1 és CaKi-2 jelű, humán veseráksejtvonalakban Northern- és Western-blot-analízisekkel elemeztük. Northern-blot-analízist TRPM-2-mRNS-expresszió mértékében bekövetkezett változások meghatározására alkalmaztunk antiszensz TRPM-2-ODN-kezelés után. 10 CaKi-2-sejtek TRPM-2-ODN-t és taxolt tartalmazó, kombinált kezelése után a sejtnövekedést MTT vizsgálati eljárás alkalmazásával határoztuk meg.
Az immunofestés megnövekedett mértékű klaszterinexpressziót mutatott 11 RCC-mintában, a szomszé- 15 dós normál veseszövethez viszonyítva. A maradék 6 esetben nem láttunk különbséget malignus és normálszövet között. TRPM-2-mRNS és fehérje expressziója egyaránt detektálható volt mindhárom humán RCC-sejtvonalban, a legnagyobb mértékben CaKi-2- 20 ben. Antiszensz TRPM-2-ODN (1. azonosító számú szekvencia) gátolt (viszont 2. azonosító számú szekvenciája nem párosodó bázist tartalmazó kontroll ODN nem gátolt) TRPM-2-expressziót CaKi-2-sejtekben, dózisfüggő és szekvenciaspecifikus módon (7A. ábra). 25 Továbbá antiszensz TRPM-2-ODN lényegében fokozta a kemoszenzitivitást taxolra, a taxol IC50-értékét 1 lóg nagyságrenddel csökkentve (500 nM-ról 50 nM-ra), nem párosodó bázist tartalmazó kontroll ODN-hez hasonlítva (7B. ábra). Ezek az adatok azt mutatják, hogy 30 TRPM-2 és a neki megfelelő fehérje, a klaszterin RCCben nagyobb mértékben expresszálódik, mint normál veseszövetben, és hogy antiszensz TRPM-2-ODN alkalmas lehet szokásos kemoterápia citotoxikus hatásainak fokozására, előrehaladt állapotú RCC-ben. 35
7. példa
Antiszensz TRPM-2-ODN fokozza TRPM-2-t expresszáló ráksejtek besugárzással szemben mutatott érzékenységét. Northern-analízissel azt találtuk, hogy besugárzást alkalmazó terápia TRPM-2-génexpresszió mértékének dózis- és időfüggő növekedését eredményezte PC-3 jelű, humán prosztataráksejtekben (8. ábra). TRPM-2 túltermelése fokozott rezisztenciát eredményezett besugárzással indukált sejtpusztulásra. Azok a humán LNCaP-prosztatasejtek, amelyek túltermelték TRPM2-t (LNCaP/T1), rezisztensebbek voltak besugárzást alkalmazó terápiára (9A. és 9B. ábra). PC-3 jelű humán prosztataráksejtek kezelése 100 nM és 500 nM antiszensz TRPM-2-ODN-nel (1. azonosító számú szekvencia) szignifikánsan csökkentette a sejtek túlélését egyetlen 4 Gy radioterápiás kezelés után, nem párosodó bázist tartalmazó ODN-nel (2. azonosító számú szekvencia) való kezeléshez viszonyítva (10. ábra). A 11A. és 11B. ábrán bemutatjuk, hogy PC-3 jelű, humán prosztataráksejtek besugárzással szemben dózisfüggő módon érzékenyebbekké váltak 10, 50 és 100 nM antiszensz TRPM-2-oligóval való in vitro kezelés után.
8. példa
Annak meghatározása céljából, hogy vajon humán antiszensz TRPM-2-ODN fokoz-e kemoszenzitivitást PC-3 jelű, humán prosztatarák-sejtvonalban, PC3-tumorokat tartalmazó egereket kezeltünk antiszensz humán TRPM-2-ODN-nel plusz micelláris paclitaxellel vagy mitoxantronnal, és nem párosodó bázist tartalmazó, kontroll ODN-nel plusz micelláris paclitaxellel vagy mitoxantronnal (12A. és 12B. ábra). ODN-t 28 napig adagoltunk, és 0,5 mg micelláris paclitaxelt vagy 0,3 mg mitoxantront két alkalommal adtunk be: a 10. és 14. nap között és a 24. és 28. nap között. Megfigyeltük a tumorméret szignifikáns csökkenését antiszensz ODN-nel kezelt állapotokban, nem párosodó bázist tartalmazó, kontroll ODN-nel kezelt állatokhoz képest. Sőt, ez a hatás még kifejezettebb volt a micelláris paclitaxel vagy mitoxantron második dózisa után.
SZEKVENCIALISTA <210> 1 <211 >21 <212> DNS <213> egér <220>
<223> antiszensz TRPM-2 ODN <400> 1 gcacagcagg agaatcttca t 21 <210> 2 <211 >21 <212> DNS <213> egér <220>
<223> „mismatch”-kontroll <400> 2 gcacagcagc aggatcttca t 21
HU 227 190 Β1 <210> 3 <211 >21 <212> DNS <213> ember <220>
<223> antiszensz TRPM-2 ODN <400> 3 tggagtcttt gcacgcctcg g <210> 4 <211 >21 <212> DNS <213> ember <220>
<223> antiszensz TRPM-2 ODN <400> 4 cagcagcaga gtcttcatca t <210>5 <211 >21 <212> DNS <213> ember <220>
<223> antiszensz TRPM-2 ODN <400> 5 attgtctgag accgtctggt c <210> 6 <211 >21 <212> DNS <213> ember <220>
<223> antiszensz TRPM-2 ODN <400> 6 ccttcagctt tgtctctgat t <210> 7 <211 >21 <212> DNS <213> ember <220>
<223> antiszensz TRPM-2 ODN <400> 7 agcagggagt cgatgcggtc a <210>8 <211 >21 <212> DNS <213> ember <220>
<223> antiszensz TRPM-2 ODN <400> 8 atcaagctgc ggacgatgcg g <210> 9 <211 >21 <212> DNS <213> ember <220>
<223> antiszensz TRPM-2 ODN
HU 227 190 Β1 <400> 9 gcaggcagcc cgtggagttg t <210> 10 <211 >21 <212> DNS <213> ember <220>
<223> antiszensz TRPM-2 ODN <400> 10 ttcagctgct ccagcaagga g <210> 11 <211 >21 <212> DNS <213> ember <220>
<223> antiszensz TRPM-2 ODN <400> 11 aatttagggt tcttcctgga g <210> 12 <211 >21 <212> DNS <213> ember <220>
<223> antiszensz TRPM-2 ODN <400> 12 gctgggcgga gttgggggcc t <210> 13 <211> 18 <212> DNS <213> egér <220>
<223> antiszensz Bcl-2 ODN <400> 13 tctcccggct tgcgccat <210 14 <211> 18 <212> DNS <213> egér <220 <223> „mismatch” Bcl-2 ODN <400 14 tctcccggca tggtgcat

Claims (15)

  1. SZABADALMI IGÉNYPONTOK
    1. Készítmény, amely olyan antiszensz oligonukleotidot tartalmaz, amely gátolja a TRPM-2 tumorsejtek általi expresszióját, prosztatatumorsejtek androgénfüggetlen állapotba történő fejlődésének késleltetésére.
  2. 2. Készítmény ráksejtek kemoszenzitivitásának vagy besugárzásra való érzékenységének fokozására olyan rákban szenvedő egyénben, amely ugyanolyan típusú, normálszövethez viszonyítva eltérő mértékben expresszál TRPM-2-t, amely olyan antiszensz oligonukleotidot tartalmaz, amely képes a ráksejtek TRPM2-expresszióját gátolni.
  3. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti készítmény, amely a TRPM-2-mRNS-nek egy, a transzlációs iniciációs vagy terminációs helyet tartalmazó régiójával komplementer antiszensz oligonukleotidot tartalmaz.
  4. 4. A 3. igénypont szerinti készítmény, amely 4. azonosító számú szekvenciája (SEQ ID NO: 4) antiszensz oligonukleotidot tartalmaz.
    HU 227 190 Β1
  5. 5. A 3. igénypont szerinti készítmény, amely 5. azonosító számú szekvenciájú (SEQ ID NO: 5) antiszensz oligonukleotidot tartalmaz.
  6. 6. A 2. igénypont szerinti készítmény, amely 12. azonosító számú szekvenciájú (SEQ ID NO: 12) antiszensz oligonukleotidot tartalmaz.
  7. 7. Az 1-6. igénypontok bármelyike szerinti készítmény, amely egy, a TRPM-2-től eltérő antiapoptotikus fehérje expresszióját gátolni képes, második antiszensz oligonukleotidot is tartalmaz.
  8. 8. A 7. igénypont szerinti készítmény, ahol a második antiszensz oligonukleotid antiszensz Bcl-2-oligonukleotid.
  9. 9. Oligonukleotid, melynek szekvenciája megegyezik a 4. azonosító számú szekvenciával (SEQ ID NO: 4).
  10. 10. Oligonukleotid, melynek szekvenciája megegyezik a 12. azonosító számú szekvenciával (SEQ ID NO: 12).
  11. 11. Készítmény a TRMP-2 expressziójának csökkentésére alkalmas oligonukleotid emlősbe történő bejuttatására, amely készítmény a TRPM-2 mRNS-ével komplementer, a 4., 5. és 12. azonosító számú szekvenciák (SEQ ID NO: 4, 5 és 12) bármelyikét tartalmazó antiszensz oligonukleotidot és gyógyászatilag elfogadható hordozót tartalmaz, gyógyszerként történő alkalmazásra.
  12. 12. A 11. igénypont szerinti készítmény, amely gyógyászatilag elfogadható hordozóként lipidhordozót tartalmaz.
  13. 13. A 11. vagy 12. igénypont szerinti készítmény, amely tartalmaz egy, a TRPM-2 mRNS-étől eltérő szekvenciához specifikusan kötődni képes további antiszensz oligonukleotidot is.
  14. 14. A 13. igénypont szerinti készítmény, amely további antiszensz oligonukleotidként a következő gének kódolószekvenciái közül választott szekvenciához specifikusan kötődni képes oligonukleotidot tartalmaz: Bd2, Bcl-1 x és c-myc.
  15. 15. A 14. igénypont szerinti készítmény, amely további antiszensz oligonukleotidként 13. azonosító számú szekvenciájú (SEQ ID NO: 13) oligonukleotidot tartalmaz.
HU0200093A 1999-02-26 2000-02-25 Trpm-2 antisense therapy HU227190B1 (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US12172699P 1999-02-26 1999-02-26
PCT/US2000/004875 WO2000049937A2 (en) 1999-02-26 2000-02-25 Trpm-2 antisense therapy

Publications (2)

Publication Number Publication Date
HUP0200093A2 HUP0200093A2 (en) 2002-05-29
HU227190B1 true HU227190B1 (en) 2010-10-28

Family

ID=22398429

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU0200093A HU227190B1 (en) 1999-02-26 2000-02-25 Trpm-2 antisense therapy

Country Status (15)

Country Link
US (7) US7534773B1 (hu)
EP (1) EP1163254B1 (hu)
JP (1) JP4785252B2 (hu)
KR (2) KR100820266B1 (hu)
AT (1) ATE385237T1 (hu)
AU (1) AU767133B2 (hu)
CA (2) CA2371814C (hu)
DE (1) DE60037938T2 (hu)
DK (1) DK1163254T3 (hu)
ES (1) ES2300257T3 (hu)
HU (1) HU227190B1 (hu)
IL (2) IL144975A0 (hu)
NO (1) NO330799B1 (hu)
NZ (1) NZ513757A (hu)
WO (1) WO2000049937A2 (hu)

Families Citing this family (96)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6383808B1 (en) * 2000-09-11 2002-05-07 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense inhibition of clusterin expression
US6900187B2 (en) 1999-02-26 2005-05-31 The University Of British Columbia TRPM-2 antisense therapy using an oligonucleotide having 2′-O-(2-methoxy)ethyl modifications
DE60037938T2 (de) 1999-02-26 2009-01-29 The University Of British Columbia, Vancouver Antisense-therapie für trpm-2
US7569551B2 (en) 2000-02-25 2009-08-04 The University Of British Columbia Chemo- and radiation-sensitization of cancer by antisense TRPM-2 oligodeoxynucleotides
NZ533126A (en) 2002-01-17 2006-04-28 Univ British Columbia Bispecific antisense oligonucleotides that inhibit IGFBP-2 and IGFBP-5 and methods of using same
US7351404B2 (en) 2002-02-04 2008-04-01 Allergan, Inc. Method of enhancing hair growth
US9216183B2 (en) 2002-02-04 2015-12-22 Allergan, Inc. Topical treatment for chemotherapy induced eyelash loss or hypotrichosis using prostamide F2 alpha agonists
US8758733B2 (en) 2002-02-04 2014-06-24 Allergan, Inc. Topical treatment for chemotherapy induced eyelash loss or hypotrichosis using prostamide F2 alpha agonists
US7285541B2 (en) * 2002-08-21 2007-10-23 The University Of British Columbia Treatment of melanoma by reduction in clusterin levels
KR101117673B1 (ko) 2002-08-21 2012-03-07 더 유니버시티 오브 브리티쉬 콜롬비아 암-관련 단백질을 표적으로 하는 알엔에이아이 프로브
CA2507863A1 (en) * 2002-12-04 2004-06-17 Algos Therapeutics, Inc. Methods and materials for modulating trpm2
US20040220131A1 (en) * 2003-04-18 2004-11-04 The University Of British Columbia Method for treatment of cancerous angiogenic disorders
CA2520518A1 (en) * 2003-04-18 2004-10-28 The University Of British Columbia Method for treatment of angiogenic disorders
US7399853B2 (en) 2003-04-28 2008-07-15 Isis Pharmaceuticals Modulation of glucagon receptor expression
US7480382B2 (en) * 2003-09-30 2009-01-20 Microsoft Corporation Image file container
US7879545B2 (en) * 2003-11-05 2011-02-01 H. Lee Moffitt Cancer Center And Research Institute, Inc. Identification of novel targets for radio sensitization using a genomic-based radiation sensitivity classifier
US8710020B2 (en) 2004-04-02 2014-04-29 The University Of British Columbia Clusterin antisense therapy for treatment of cancer
EP1799859B1 (en) 2004-09-17 2014-07-02 Isis Pharmaceuticals, Inc. Enhanced antisense oligonucleotides
JP4980919B2 (ja) * 2004-11-23 2012-07-18 ザ ユニバーシティー オブ ブリティッシュ コロンビア ユニバーシティー−インダストリー リエゾン オフィス Ｅｆｇシグナル伝達経路を混乱させる薬剤とクラステリンレベルを減少させるオリゴヌクレオチドとの併用による癌の治療
WO2007030930A1 (en) 2005-09-13 2007-03-22 National Research Council Of Canada Methods and compositions for modulating tumor cell activity
WO2007087113A2 (en) 2005-12-28 2007-08-02 The Scripps Research Institute Natural antisense and non-coding rna transcripts as drug targets
ES2310434B1 (es) 2006-01-19 2009-11-12 Consejo Superior Investig. Cientificas Un pmto de identificacion de un proceso de fibrosis renal, pmto de identificacion de compuestos inhibidores, uso de los compuestos inhibidores de la expresion del gen del factor de transcripcion snail en la elaboracion de composiciones farmaceuticas, dichas composiciones.....
US8785409B2 (en) 2007-01-30 2014-07-22 Geron Corporation Compounds having anti-adhesive effects on cancer cells
ES2310469B1 (es) 2007-03-08 2009-11-16 Consejo Superior Investig. Cientificas Uso compuestos inhibidores actividad snail1 en elaboracion composiciones farmaceuticas utiles para tratamiento de condrodisplasias, procedimiento identificacion compuestos inhibidores, dichas composiciones farmaceuticas, procedimiento diagnostico condrodisplasias y aplicaciones.
US20080234946A1 (en) * 2007-03-22 2008-09-25 University Of South Florida Predictive radiosensitivity network model
US20090076734A1 (en) 2007-03-22 2009-03-19 Torres-Roca Javier F Gene Signature for the Prediction of Radiation Therapy Response
AU2008298612A1 (en) * 2007-09-14 2009-03-19 University Of South Florida Gene signature for the prediction of radiation therapy response
ES2325779B1 (es) * 2007-12-05 2010-07-06 Consejo Superior De Investigaciones Cientificas Elementos reguladores de la actividad de np1 utiles para la elaboracion de medicamentos para el tratamiento o prevencion de enfermedades humanas neurodegenerativas, medicamentos asi obtenidos y sus aplicaciones.
WO2009126160A1 (en) * 2008-04-10 2009-10-15 University Of Florida Research Foundation Compositions and methods for the treatment of prostate carcinoma
WO2010035231A1 (en) * 2008-09-29 2010-04-01 Universität Regensburg Sense and antisense transcripts of trpm2 and uses thereof
ES2727549T3 (es) * 2008-10-03 2019-10-17 Curna Inc Tratamiento de las enfermedades relacionadas con la apolipoproteína a1 por inhibición del transcrito antisentido natural a la apolipoproteína a1
US20100204335A1 (en) * 2008-12-01 2010-08-12 Allergan, Inc. Kit and composition for eyelash growth
KR101829469B1 (ko) * 2008-12-04 2018-03-30 큐알엔에이, 인크. Ｅｐｏ에 대한 천연 안티센스 전사체의 억제에 의해 에리트로포에틴(ｅｐｏ) 관련된 질환의 치료
JP5923306B2 (ja) 2008-12-04 2016-05-24 クルナ・インコーポレーテッド 腫瘍抑制遺伝子に対する天然アンチセンス転写物の抑制による腫瘍抑制遺伝子関連疾患の治療
ES2600781T3 (es) 2008-12-04 2017-02-10 Curna, Inc. Tratamiento para enfermedades relacionadas con el factor de crecimiento del endotelio vascular (vegf) mediante la inhibición de transcritos antisentido naturales de vegf
WO2010080913A1 (en) * 2009-01-08 2010-07-15 Allergan, Inc. Cyclosporine compositions for enhancing nail growth
WO2010093904A2 (en) 2009-02-12 2010-08-19 Curna, Inc. Treatment of brain derived neurotrophic factor (bdnf) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to bdnf
EP2408919B1 (en) 2009-03-16 2017-10-18 CuRNA, Inc. Treatment of nuclear factor (erythroid-derived 2)-like 2 (nrf2) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to nrf2
ES2627763T3 (es) 2009-03-17 2017-07-31 Curna, Inc. Tratamiento de enfermedades relacionadas con el homólogo tipo delta 1 (dlk1) por inhibición de transcrito antisentido natural a dlk1
CN102459596B (zh) 2009-05-06 2016-09-07 库尔纳公司 通过针对脂质转运和代谢基因的天然反义转录物的抑制治疗脂质转运和代谢基因相关疾病
JP6250930B2 (ja) 2009-05-06 2017-12-20 クルナ・インコーポレーテッド トリステトラプロリン（ｔｔｐ）に対する天然アンチセンス転写物の抑制によるｔｔｐ関連疾患の治療
EP2427554B1 (en) 2009-05-08 2016-11-16 CuRNA, Inc. Treatment of dystrophin family related diseases by inhibition of natural antisense transcript to dmd family
CN102575251B (zh) 2009-05-18 2018-12-04 库尔纳公司 通过抑制针对重编程因子的天然反义转录物来治疗重编程因子相关的疾病
JP2012527248A (ja) 2009-05-22 2012-11-08 クルナ・インコーポレーテッド 転写因子ｅ３（ｔｆｅ３）に対する天然アンチセンス転写物の阻害によるｔｆｅ３およびインスリン受容体基質２（ｉｒｓ２）関連疾患の処置
KR101704988B1 (ko) 2009-05-28 2017-02-08 큐알엔에이, 인크. 항바이러스 유전자에 대한 천연 안티센스 전사체의 억제에 의한 항바이러스 유전자 관련된 질환의 치료
CA2765509C (en) 2009-06-16 2021-08-17 Joseph Collard Treatment of paraoxonase 1 (pon1) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to pon1
WO2010148050A2 (en) 2009-06-16 2010-12-23 Curna, Inc. Treatment of collagen gene related diseases by inhibition of natural antisense transcript to a collagen gene
KR101807323B1 (ko) 2009-06-24 2017-12-08 큐알엔에이, 인크. Ｔｎｆｒ2에 대한 천연 안티센스 전사체의 억제에 의한 종양 괴사 인자 수용체 2(ｔｎｆｒ2) 관련된 질환의 치료
CA2765815A1 (en) 2009-06-26 2010-12-29 Opko Curna, Llc Treatment of down syndrome gene related diseases by inhibition of natural antisense transcript to a down syndrome gene
CA2768947C (en) 2009-07-24 2018-06-19 Opko Curna, Llc Treatment of sirtuin (sirt) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to a sirtuin (sirt)
EP2462229B1 (en) 2009-08-05 2016-05-11 CuRNA, Inc. Treatment of insulin gene (ins) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to an insulin gene (ins)
CN102625841A (zh) 2009-08-11 2012-08-01 欧科库尔纳有限责任公司 通过抑制脂连蛋白(adipoq)的天然反义转录物治疗脂连蛋白(adipoq)相关疾病
US8791087B2 (en) 2009-08-21 2014-07-29 Curna, Inc. Treatment of ‘C terminus of HSP70-interacting protein’ (CHIP)related diseases by inhibition of natural antisense transcript to CHIP
CA2771172C (en) 2009-08-25 2021-11-30 Opko Curna, Llc Treatment of 'iq motif containing gtpase activating protein' (iqgap) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to iqgap
JP6175236B2 (ja) 2009-09-25 2017-08-09 カッパーアールエヌエー，インコーポレイテッド フィラグリン（ｆｌｇ）の発現および活性の調整によるｆｌｇ関連疾患の処置
KR101769637B1 (ko) 2009-11-09 2017-08-18 알러간, 인코포레이티드 모발 성장을 촉진하기 위한 조성물 및 방법
US9149484B2 (en) 2009-11-09 2015-10-06 Allergan, Inc. Compositions and methods for stimulating hair growth
CA2928846A1 (en) 2009-11-24 2011-06-03 Alethia Biotherapeutics Inc. Anti-clusterin antibodies and antigen binding fragments and their use to reduce tumor volume
KR101823702B1 (ko) 2009-12-16 2018-01-30 큐알엔에이, 인크. 막 결합 전사 인자 펩티다제, 부위 １(ｍｂｔｐｓ１)에 대한 천연 안티센스 전사체의 억제에 의한 ｍｂｔｐｓ１ 관련 질환의 치료
RU2619185C2 (ru) 2009-12-23 2017-05-12 Курна, Инк. Лечение заболеваний, связанных с разобщающим белком 2 (ucp2), путем ингибирования природного антисмыслового транскрипта к ucp2
CN102869776B (zh) 2009-12-23 2017-06-23 库尔纳公司 通过抑制肝细胞生长因子(hgf)的天然反义转录物而治疗hgf相关疾病
US8962585B2 (en) 2009-12-29 2015-02-24 Curna, Inc. Treatment of tumor protein 63 (p63) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to p63
WO2011090740A2 (en) 2009-12-29 2011-07-28 Opko Curna, Llc Treatment of nuclear respiratory factor 1 (nrf1) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to nrf1
KR101853511B1 (ko) 2009-12-31 2018-06-20 큐알엔에이, 인크. 인슐린 수용체 기질 2 및 전사 인자 ｅ3(ｔｆｅ3)에 대한 천연 안티센스 전사체의 억제에 의한 ｉｒｓ2 관련된 질환의 치료
KR101878501B1 (ko) 2010-01-04 2018-08-07 큐알엔에이, 인크. 인터페론 조절 인자 8 (ｉｒｆ8)에 대한 자연 안티센스 전사체의 저해에 의한 인터페론 조절 인자 8 (ｉｒｆ8) 관련된 질환의 치료
KR101853509B1 (ko) 2010-01-06 2018-04-30 큐알엔에이, 인크. 췌장 발달 유전자에 대한 천연 안티센스 전사체의 억제에 의한 췌장 발달 유전자와 관련된 질환의 치료
CA2786535C (en) 2010-01-11 2019-03-26 Curna, Inc. Treatment of sex hormone binding globulin (shbg) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to shbg
JP5981850B2 (ja) 2010-01-25 2016-08-31 カッパーアールエヌエー，インコーポレイテッド ＲＮａｓｅＨ１に対する天然アンチセンス転写物の阻害によるＲＮａｓｅＨ１関連疾患の治療
JP5976548B2 (ja) 2010-02-22 2016-08-23 カッパーアールエヌエー，インコーポレイテッド Ｐｙｃｒ１に対する天然アンチセンス転写物の阻害によるピロリン−５−カルボン酸レダクターゼ１（ｐｙｃｒ１）関連疾患の治療
US8980856B2 (en) 2010-04-02 2015-03-17 Curna, Inc. Treatment of colony-stimulating factor 3 (CSF3) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to CSF3
WO2011127337A2 (en) 2010-04-09 2011-10-13 Opko Curna Llc Treatment of fibroblast growth factor 21 (fgf21) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to fgf21
CA2798218A1 (en) 2010-05-03 2011-11-10 Curna, Inc. Treatment of sirtuin (sirt) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to a sirtuin (sirt)
TWI531370B (zh) 2010-05-14 2016-05-01 可娜公司 藉由抑制ｐａｒ４天然反股轉錄本治療ｐａｒ４相關疾病
EP2576783B1 (en) 2010-05-26 2017-11-29 CuRNA, Inc. Treatment of atonal homolog 1 (atoh1) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to atoh1
JP5917497B2 (ja) 2010-05-26 2016-05-18 カッパーアールエヌエー，インコーポレイテッド メチオニンスルホキシドレダクターゼａ（ｍｓｒａ）に対する天然アンチセンス転写物の阻害によるｍｓｒａ関連疾患の治療
CN103025873B (zh) 2010-06-23 2018-05-08 库尔纳公司 通过抑制电压门控钠通道α亚基(SCNA)的天然反义转录物而治疗SCNA相关疾病
JP5998131B2 (ja) 2010-07-14 2016-09-28 カッパーアールエヌエー，インコーポレイテッド Ｄｉｓｃｓｌａｒｇｅｈｏｍｏｌｏｇ（ｄｌｇ）ｄｌｇ１への天然アンチセンス転写物の阻害によるｄｌｇ関連疾患の治療
RU2624048C2 (ru) 2010-10-06 2017-06-30 Курна, Инк. Лечение заболеваний, связанных с геном сиалидазы 4 (neu4), путем ингибирования природного антисмыслового транскрипта гена neu4
WO2012054723A2 (en) 2010-10-22 2012-04-26 Opko Curna Llc Treatment of alpha-l-iduronidase (idua) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to idua
CA2818610C (en) 2010-11-18 2020-02-18 Steven Yoelin Compositions and methods for hair growth
US10000752B2 (en) 2010-11-18 2018-06-19 Curna, Inc. Antagonat compositions and methods of use
KR102010598B1 (ko) 2010-11-23 2019-08-13 큐알엔에이, 인크. Nanog에 대한 자연 안티센스 전사체의 저해에 의한 nanog 관련된 질환의 치료
WO2012080509A1 (en) * 2010-12-17 2012-06-21 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) Nucleic acids targeting tctp for use in the treatment of chemo-or hormone-resistant cancers
US8859616B2 (en) 2011-01-21 2014-10-14 Allergan, Inc. Compounds and methods for enhancing hair growth
BR112013023452A2 (pt) 2011-03-15 2016-12-06 Univ British Columbia combinação de oligonucleotídeo anti-clusterina com inibidor de hsp90 para o tratamento de câncer de próstata
RU2620980C2 (ru) 2011-06-09 2017-05-30 Курна, Инк. Лечение заболеваний, связанных с фратаксином (fxn), путем ингибирования природного антисмыслового транскрипта fxn
EA029151B1 (ru) 2011-09-06 2018-02-28 Курна, Инк. ЛЕЧЕНИЕ ЗАБОЛЕВАНИЙ, СВЯЗАННЫХ С АЛЬФА-СУБЪЕДИНИЦАМИ ПОТЕНЦИАЛЗАВИСИМЫХ НАТРИЕВЫХ КАНАЛОВ (SCNxA), С ПОМОЩЬЮ МАЛЫХ МОЛЕКУЛ
CN103814132B (zh) 2011-09-20 2018-06-05 苏州瑞博生物技术有限公司 Gcgr表达的反义调节
CN103987370A (zh) 2011-10-05 2014-08-13 阿勒根公司 用于增进指甲健康的组合物
BR112014008190A2 (pt) 2011-10-05 2017-04-18 Allergan Inc composições para realce da saúde da unha
CN103906838A (zh) 2011-10-25 2014-07-02 Isis制药公司 Gccr表达的反义调节
CN104159611A (zh) 2012-02-22 2014-11-19 阿莱斯亚生物疗法股份有限公司 共使用簇集蛋白抑制剂和egfr抑制剂以治疗癌症
WO2013138374A2 (en) 2012-03-15 2013-09-19 Curna, Inc. Treatment of brain derived neurotrophic factor (bdnf) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to bdnf
US20150164765A1 (en) 2012-05-17 2015-06-18 Steven G. Yoelin Compositions and methods for hair growth
BR112018011045A2 (pt) * 2015-11-30 2018-11-21 Univ British Columbia inibidores de oligonucleotídeo anti-sentido (aso) de transportador de monocarboxilato 4 (mct4) para uso como terapêutica no tratamento de câncer
US20220288090A1 (en) 2019-08-07 2022-09-15 Aneira Pharma Inc. Methods And Compositions For The Treatment Of Hair Loss

Family Cites Families (44)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6111094A (en) 1990-08-14 2000-08-29 Isis Pharmaceuticals Inc. Enhanced antisense modulation of ICAM-1
US5721237A (en) 1991-05-10 1998-02-24 Rhone-Poulenc Rorer Pharmaceuticals Inc. Protein tyrosine kinase aryl and heteroaryl quinazoline compounds having selective inhibition of HER-2 autophosphorylation properties
US5646042A (en) 1992-08-26 1997-07-08 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. C-myb targeted ribozymes
US5417978A (en) 1993-07-29 1995-05-23 Board Of Regents, The University Of Texas System Liposomal antisense methyl phosphonate oligonucleotides and methods for their preparation and use
US5801154A (en) * 1993-10-18 1998-09-01 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense oligonucleotide modulation of multidrug resistance-associated protein
WO1995017507A1 (en) 1993-12-23 1995-06-29 Biognostik Gesellschaft für Biomolekulare Diagnostik mbH ANTISENSE NUCLEIC ACIDS FOR THE PREVENTION AND TREATMENT OF DISORDERS IN WHICH EXPRESSION OF c-erbB PLAYS A ROLE
US5563255A (en) * 1994-05-31 1996-10-08 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense oligonucleotide modulation of raf gene expression
AUPM672594A0 (en) 1994-07-08 1994-08-04 Royal Children's Hospital Research Foundation A method for the prophylaxis and/or treatment of proliferative and/or inflammatory skin disorders
US5789389A (en) 1995-03-17 1998-08-04 Board Of Trustees Of University Of Illinois BCL2 derived genetic elements associated with sensitivity to chemotherapeutic drugs
US5855911A (en) 1995-08-29 1999-01-05 Board Of Regents, The University Of Texas System Liposomal phosphodiester, phosphorothioate, and P-ethoxy oligonucleotides
CA2749312A1 (en) 1996-02-14 1997-08-21 Novartis Ag Sugar-modified gapped oligonucleotides
US5910583A (en) 1996-11-04 1999-06-08 Duke University Antisense oligonucleotides against ERBB-2
US6383808B1 (en) 2000-09-11 2002-05-07 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense inhibition of clusterin expression
US5877309A (en) * 1997-08-13 1999-03-02 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense oligonucleotides against JNK
DE69935507T2 (de) 1998-04-03 2007-12-06 University Of Iowa Research Foundation Verfahren und produkte zur stimulierung des immunsystems mittels immunotherapeutischer oligonukleotide und zytokine
US5945290A (en) * 1998-09-18 1999-08-31 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of RhoA expression
US6335194B1 (en) 1998-09-29 2002-01-01 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of survivin expression
US6172216B1 (en) 1998-10-07 2001-01-09 Isis Pharmaceuticals Inc. Antisense modulation of BCL-X expression
AU3116800A (en) 1998-12-11 2000-06-26 Research Foundation Of The State University Of New York, The Compositions and methods for altering cell migration
US6900187B2 (en) 1999-02-26 2005-05-31 The University Of British Columbia TRPM-2 antisense therapy using an oligonucleotide having 2′-O-(2-methoxy)ethyl modifications
DE60037938T2 (de) 1999-02-26 2009-01-29 The University Of British Columbia, Vancouver Antisense-therapie für trpm-2
US5998148A (en) 1999-04-08 1999-12-07 Isis Pharmaceuticals Inc. Antisense modulation of microtubule-associated protein 4 expression
WO2001046455A2 (en) 1999-12-21 2001-06-28 Yale University Survivin promotion of angiogenesis
US7569551B2 (en) 2000-02-25 2009-08-04 The University Of British Columbia Chemo- and radiation-sensitization of cancer by antisense TRPM-2 oligodeoxynucleotides
GB0031080D0 (en) 2000-12-20 2001-01-31 Novartis Ag Organic compounds
US20030124513A1 (en) 2001-05-29 2003-07-03 Mcswiggen James Enzymatic nucleic acid treatment of diseases or conditions related to levels of HIV
NZ533126A (en) 2002-01-17 2006-04-28 Univ British Columbia Bispecific antisense oligonucleotides that inhibit IGFBP-2 and IGFBP-5 and methods of using same
AU2003237790A1 (en) 2002-05-14 2003-12-02 Baylor College Of Medicine Small molecule inhibitors of her2 expression
US7285541B2 (en) 2002-08-21 2007-10-23 The University Of British Columbia Treatment of melanoma by reduction in clusterin levels
KR101117673B1 (ko) 2002-08-21 2012-03-07 더 유니버시티 오브 브리티쉬 콜롬비아 암-관련 단백질을 표적으로 하는 알엔에이아이 프로브
US20060024692A1 (en) 2002-09-30 2006-02-02 Oncotherapy Science, Inc. Method for diagnosing non-small cell lung cancers
US20040220131A1 (en) 2003-04-18 2004-11-04 The University Of British Columbia Method for treatment of cancerous angiogenic disorders
CA2520518A1 (en) 2003-04-18 2004-10-28 The University Of British Columbia Method for treatment of angiogenic disorders
US8710020B2 (en) 2004-04-02 2014-04-29 The University Of British Columbia Clusterin antisense therapy for treatment of cancer
US7285511B2 (en) 2004-04-23 2007-10-23 Saudi Basic Industries Corporation Method of modifying zeolite catalyst
EP1789460B1 (en) 2004-09-02 2013-01-09 Isis Pharmaceuticals, Inc. Polymeric beads for oligonucleotide synthesis
JP4980919B2 (ja) 2004-11-23 2012-07-18 ザ ユニバーシティー オブ ブリティッシュ コロンビア ユニバーシティー−インダストリー リエゾン オフィス Ｅｆｇシグナル伝達経路を混乱させる薬剤とクラステリンレベルを減少させるオリゴヌクレオチドとの併用による癌の治療
WO2009155381A1 (en) 2008-06-18 2009-12-23 Abbott Laboratories P/gf-1 companion diagnostic methods and products
CA2830191A1 (en) 2011-03-14 2012-09-20 The University Of British Columiba Combination of anti-clusterin oligonucleotide with androgen receptor antagonist for the treatment of prostate cancer
BR112013023452A2 (pt) 2011-03-15 2016-12-06 Univ British Columbia combinação de oligonucleotídeo anti-clusterina com inibidor de hsp90 para o tratamento de câncer de próstata
WO2012156817A2 (en) 2011-05-19 2012-11-22 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Method for treating non-small cell lung cancer
UY34812A (es) 2012-05-18 2013-12-31 Teva Pharma Método para el tratamiento del cáncer de pulmón de células no pequeñas
US20140275215A1 (en) 2013-03-14 2014-09-18 Teva Pharmaceutical Industries, Ltd. Anti-clusterin monotherapy for cancer treatment
US20140275214A1 (en) 2013-03-14 2014-09-18 Teva Pharmaceutical Industries, Ltd. Custirsen treatment with reduced toxicity

Also Published As

Publication number Publication date
WO2000049937A2 (en) 2000-08-31
JP4785252B2 (ja) 2011-10-05
US20120322850A1 (en) 2012-12-20
US7534773B1 (en) 2009-05-19
NO20014058L (no) 2001-10-22
KR100768109B1 (ko) 2007-10-17
US7732422B2 (en) 2010-06-08
KR20020000145A (ko) 2002-01-04
NZ513757A (en) 2004-12-24
KR20070044032A (ko) 2007-04-26
US9074209B2 (en) 2015-07-07
NO330799B1 (no) 2011-07-18
DK1163254T3 (da) 2008-06-09
US20140100261A1 (en) 2014-04-10
WO2000049937A3 (en) 2000-12-07
JP2003503309A (ja) 2003-01-28
CA2850318A1 (en) 2000-08-31
CA2371814A1 (en) 2000-08-31
US20020128220A1 (en) 2002-09-12
IL144975A0 (en) 2002-06-30
IL144975A (en) 2009-02-11
KR100820266B1 (ko) 2008-04-08
EP1163254A4 (en) 2002-05-15
US8173615B2 (en) 2012-05-08
ATE385237T1 (de) 2008-02-15
EP1163254B1 (en) 2008-01-30
US20110021603A1 (en) 2011-01-27
EP1163254A2 (en) 2001-12-19
US20080064651A1 (en) 2008-03-13
WO2000049937A9 (en) 2002-07-11
US7592323B1 (en) 2009-09-22
NO20014058D0 (no) 2001-08-21
CA2371814C (en) 2014-05-27
US8536149B2 (en) 2013-09-17
ES2300257T3 (es) 2008-06-16
DE60037938T2 (de) 2009-01-29
AU3606400A (en) 2000-09-14
DE60037938D1 (de) 2008-03-20
HUP0200093A2 (en) 2002-05-29
AU767133B2 (en) 2003-10-30
US7368436B2 (en) 2008-05-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US7592323B1 (en) TRPM-2 antisense therapy
IL166657A (en) Pharmaceutical compositions containing an agent effective to reduce the effective amount of clusterin
US20040127441A1 (en) Compositions and Methods for Treatment of Prostate and Other Cancers
EP1200579A2 (en) Antisense therapy for hormone-regulated tumors

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of definitive patent protection due to non-payment of fees