HU214677B - Eljárás piridinszármazékok előállítására és kötőszöveti anyagcsere-rendelleneségek meghatározására - Google Patents
Eljárás piridinszármazékok előállítására és kötőszöveti anyagcsere-rendelleneségek meghatározására Download PDFInfo
- Publication number
- HU214677B HU214677B HU9300108A HU9300108A HU214677B HU 214677 B HU214677 B HU 214677B HU 9300108 A HU9300108 A HU 9300108A HU 9300108 A HU9300108 A HU 9300108A HU 214677 B HU214677 B HU 214677B
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- group
- formula
- compound
- amino
- tert
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D495/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
- C07D495/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
- C07D495/04—Ortho-condensed systems
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
- C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
- C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
- C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
- C07D213/62—Oxygen or sulfur atoms
- C07D213/63—One oxygen atom
- C07D213/65—One oxygen atom attached in position 3 or 5
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/44—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material not provided for elsewhere, e.g. haptens, metals, DNA, RNA, amino acids
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/5308—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for analytes not provided for elsewhere, e.g. nucleic acids, uric acid, worms, mites
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6887—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids from muscle, cartilage or connective tissue
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Pyridine Compounds (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Soft Magnetic Materials (AREA)
- Paper (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
A találmány tárgya eljárás (IB) és (IA) általánős képletűpiridinszármazékők előállítására és diagnősztikai alkalmazására. Azelőállítőtt piridinszármazékőkkal csőntrendellenességeket és máskötőszöveti rendellenességeket lehet kiműtatni emberekben ésállatőkban egyaránt. A (IB) általánős képletben – X, Y és Z jelentése – egymástól függetlenül – 1 – 4 szénatőmős alkilcsőpőrt; – R3 jelentése karbőxilcsőpőrt, 1 – 8 szénatőmős alkőxicsőpőrt vagy (a) általánős képletű csőpőrt; – R1 és R2 jelentése – egymástól függetlenül – megegyezik R3 valamelyikjelentésével; – X1 jelentése hidrőgénatőm vagy hidrőxilcsőpőrt; és – X2 valamilyen aniőn, azzal a megkötéssel, hőgy Y legalább eggyel kevesebb szénatőmőttartalmaz, mint X. ŕ
Description
A találmány tárgya eljárás piridinszármazékok előállítására és diagnosztikai alkalmazására. A találmány szerinti eljárással előállított piridinszármazékokkal csontrendellenességeket és más kötőszöveti rendellenességeket lehet kimutatni emberekben és állatokban egyaránt.
Wu és Eyre [Biochemistiy, 23,1850 (1984)],Robins és munkatársai [Analytical Biochem., 169. 197-203 (1988)], valamint Uebelhart és munkatársai [Boné and Mineral, 8. 87-96 (1990)] cikkeiből kitűnik, hogy az (IA) általános képletű piridinszármazékok jelzik a kollagénleépülést a csontok és a porcok anyagcserebetegségei esetén. A diagnózis megállapításához mennyiségi analízissel meghatározzák egy adott időtartamon belül a (IA) általános képletű vegyületek koncentrációját a kiválasztott vizeletben. Az (IA) általános képletben
- X] jelentése hidrogénatom vagy hidroxilcsoport; és
- X2® jelentése kloridion vagy acetátion.
Az (IA) általános képletű vegyületeket vizeletből vonták ki olyan módon, hogy a vizeletet mintegy 108 °C-on mintegy 24 óra hosszat 6 M sósavoldattal kezelték, és ennek eredményeként hidrolízis ment végbe (Eyre és munkatársai: Ann. Rév. Biochem., 53. 717748 (1984), illetve ecetsavas eluálás alkalmazásával végzett kromatografálással [D. R. Eyre és munkatársai: Anal. Biochem., 137. 380-388 (1984)].
Ezek iránt a vegyületek iránt - amelyekre a szakirodalom piridinolin [X] = OH] és dezoxipiridinolin [X, = H] térhálósítók néven hivatkozik - egyre nő az érdeklődés, minthogy alkalmasak a kötőszövetek anyagcsererendellenességeinek jelzésére, így például embereknél a csontfelszívódás mérésére.
Ezzel kapcsolatban azonban meg kell jegyezni, hogy az (IA) általános képletű vegyületeket mind ez ideig csak természetes forrásokból való kinyeréssel állítják elő, ezért nem alkalmasak standardizált módon reprodukálható, megbízható és nem időigényes vizsgálatok elvégzéséhez.
Nagy szükség van jól definiált, állandó összetételű piridinolin térhálósítókra.
A találmány kidolgozásakor az volt a célunk, hogy szintetikus úton állítsunk elő gyakorlatilag tiszta formában olyan új piridinszármazékokat - beleértve az (IA) általános képletű vegyületeket is -, amelyekkel jól definiált körülmények között lehet megvalósítani a csontanyagcsere mérését.
Részletesebben kifejtve, a találmány olyan piridinszármazékok előállítására és alkalmazására vonatkozik, amelyeknek (IB) általános képletben
- X, Y és Z jelentése egymástól függetlenül 1 -4 szénatomos alkilcsoport,
- R3 jelentése karboxilcsoport, 1-8 szénatomos alkoxicsoport vagy egy (a) általános képletű csoport, ahol
-R5 jelentése -NH2, -NH(C,_8 alkil), -NHYa vagy -NHHZa- Yb általános képletű csoport, ahol -Ya jelentése amino-védőcsoport,
-Za jelentése szukcinilcsoport, β-Ala vagy egy 3-amino-propánsavból, 3-aminoizobutánsavból, 4-amino-butánsavból,
NH2-C(CH3)2-COOH-ból, 6-aminohexánsavból, 1,8-diamino-oktánból, 1,6diamino-hexánból vagy
NH2-(CH2)l_4-CO-NH-(CH2)1_6-NH2 -bői származó kétértékű csoport, és
-Yb jelentése amino-védőcsoport vagy egy antigéncsoport, amely antigéncsoport ökörszérumalbumin, bovalbumin, tiroglobulin vagy tengericsiga-hemocianin lehet,
-lejelentése COOH, (C2_7 alkoxi)-karbonil, CONH2, CONHYa vagy CONH-Za-Yb általános képletű csoport, ahol Ya, Za és Yb jelentése a fenti,
- R| és R2 jelentése egymástól függetlenül megegyezik
R3 valamelyik jelentésével,
- X! jelentése hidrogénatom vagy hidroxilcsoport, és
- X2 jelentése anion, azzal a megkötéssel, hogy Y legalább eggyel kevesebb szénatomot tartalmaz, mint X.
Az (IB) általános képlet értelmezésében szereplő
1-8 szénatomos alkilcsoportok célszerűen 1-6 szénatomos alkilcsoportok, előnyösen 1 -4 szénatomos alkilcsoportok, elsősorban 1-2 szénatomos alkilcsoportok.
Az Ya N-védőcsoportokat választhatjuk például T.
W. Greene könyvéből, amely a szerves szintéziseknél alkalmazható védőcsoportokat ismerteti [Protective Groups in Organic Synthesis, J. Wiley and Sons, New York, 1981, 219-287. oldal]. A nitrogénatom megvédésére például alkalmasak lehetnek a következő csoportok: acilcsoportok - formilcsoportok, acetilcsoport, trifluor-acetil-csoport, metoxi-szukcinil-csoport, hidroxi-szukcinil-csoport stb. -, magban adott esetben helyettesített benzoilcsoport - p-metoxi-benzoil-csoport, p-(metoxi-karbonil)-benzoil-csoport, p-nitro-benzoilcsoport, p-(fenilszulfonamido-karbonil)-benzoil-csoport stb. -, alkoxi-karbonil-csoportok - tercier-butil-oxi-karbonil-csoport, izobutil-oxi-karbonil-csoport, metoxi-karbonil-csoport stb. -, allil-oxi-karbonil-csoport, aril-metoxi-karbonil-csoportok - például 9-fluorenil-metoxi-karbonil- vagy benzil-oxi-karbonilcsoport, amely adott esetben helyettesítve lehet a gyűrűjén p-metoxi-csoporttal, p-nitro-csoporttal, o-klórral, pklórral, m-fenil-csoporttal vagy 3,4-dimetil-csoporttal -, tritilcsoport, aril-metil-csoportok - például benzilcsoport, amely magban helyettesítve lehet p-metoxicsoporttal, p-nitro-csoporttal vagy p-klórral - és aril-szulfonil-csoportok, például fenil-szulfonil-csoport, amely adott esetben helyettesítve lehet p-metil-csoporttal vagy p-metoxi-csoporttal a gyűrűn, illetve naftilszulfonil-csoport, amely adott esetben ugyancsak helyettesítve lehet a gyűrűjén, például aminocsoporttal vagy di(l — 4 szénatomos alkil)-amino-csoporttal.
Funkcionális karbonsavszármazékok lehetnek például a savhalogenidek, a savanhidridek (beleértve a vegyes savanhidrideket is), az aktív észterek és az aktív amidok. A savhalogenidek közül leggyakrabban a savkloridokat alkalmazzuk. A savanhidridekre példaként megemlítjük a ciklusos anhidrideket és a vegyes anhidrideket, így például a dialkil-foszforsavak vegyes an2
HU 214 677 Β hidridjeit és a dialkil-foszforossavak vegyes anhidridjeit. Azokra az aktivált észterekre, amelyekből az Rb az R2, az R3 és az R^ szubsztituensek leszármaztathatók, példaként megemlítjük az 1-8 szénatomos alkil-észtereket - például a metil-észtert és az etil-észtert -, a ciano-metil-észter, a p-nitro-fenil-észtert, az N-hidroxi-szukcinimiddel képzett észtereket, a fenil- vagy benzilésztert (amely magban adott esetben helyettesített lehet) és a fluorenil-metil-észtert. Azokra az aktív karbonsavamidokra, amelyekből az Rb az R2, az R3, valamint az Ré szubsztituensek leszármaztathatók, példaként megemlítjük az imidazol, a dimetil-imidazol és a triazol amidjait. Rb R2, R3, valamint Ré helyén olyan amido-csoportok is lehetnek, amelyeknek -CONH2, -CONHRj, vagy -CONRaRg, általános képletében az általános kémiai szimbólumok jelentése a már megadott.
Az -SO3H és a -PO3H funkcionális származékai közül megemlítjük példaként az 1-6 szénatomos alkil-észtereket, a benzil-észtert, a fenil-észter, az allil-észtert és a trimetil-szilil-észtert, a savhalogenideket - például a savkloridokat - és a rövid láncú dialkil-amidokat, például a dietil-amidot és a diizopropil-amidot. Előnyösek az alkoxi-diamino-foszfinok, például azok, amelyekben az alkoxicsoport metoxicsoport, butoxicsoport, allil-oxi-csoport vagy benzoxicsoport, a diaminocsoport pedig dietil-amino-csoport, dipropil-amino-csoport vagy diizopropil-amino-csoport.
X2® jelentése - többek között - hidroxilion, kloridion, bromidion, acetátion vagy trifluor-acetát-ion.
Za helyén megfelelő „spacer” csoport lehet például a (b) általános képletű csoport, amelyben
- X3 jelentése olyan kétértékű csoport, amely egy - valamilyen védőcsoporthoz vagy antigénhez kovalens kötéssel kapcsolódni képes - funkcionális molekularészből származik; és
- R7 jelentése egy vagy több heteroatommal vagy csoporttal - mégpedig oxigénnel, kénnel, karbonilcsoporttal, -NHCO-csoporttal, -CO-NH-csoporttal, -N(l-4 szénatomos alkil)-CO-csoporttal, -CO-N0-4 szénatomos alkil)-csoporttal, -NHcsoporttal és/vagy -N(l-4 szénatomos alkil)-csoporttal - adott esetben megszakított láncú, 1-6 szénatomos alkiléncsoport, 1-6 szénatomos hidroxi-alkilén-csoport, 2-6 szénatomos alkeniléncsoport, -CH- csoport vagy olyan csoport, amelyI r8 nek (a,) általános képletben
- s és t jelentése - egymástól függetlenül - 0, 1, 2 vagy 3;
- az A gyűrű adott esetben helyettesítve lehet.
A (b) általános képletű csoport értelmezésekor szerepeltetett Rg szubsztituens valamilyen természetes vagy nem természetes alfa-aminosav alfa-szénatomjához csatlakozó, adott esetben védett maradékot jelent, így Rg lehet például nitrogénatomján védett, a lizin alfa-szénatomjához kapcsolódó maradék.
Megfelelő (b) általános képletű csoport lehet például a szukcinilcsoport, a béta-Alfa-csoport, a 2-amino-propánsavból, a 3-amino-izobutánsavból, a 4-amino-butánsavból, az NH2-C(CH3)2- COOH-ból, a 6-amino-hexánsavból, az 1,8-diamino-oktánból, az 1,6diamino-hexánból vagy az NH2-(CH2)i_4-CO-NH-(CH2)]_6-NH2-ből származó kétértékű maradék.
Ya-ként antigénnel vagy védőcsoporttal kovalensen reagálni képes, megfelelő csoport lehet például minden olyan csoport, amelynek (b,) általános képletben
- R7 jelentése a már megadott, és
- X4 jelentése antigénnel vagy védőcsoporttal reagálni képes, funkcionális molekularész.
X4 lehet többek között karboxilcsoport, aminocsoport vagy annak antigénnel vagy védőcsoporttal reagálni képes funkcionális származéka. A (bj) általános képletű csoportban R7 jelentése célszerűen 1-6 szénatomos alkiléncsoport vagy 2-6 szénatomos alkeniléncsoport.
Az „antigéncsoport” valamilyen, például immutestkészítményekben [így marha-szérumalbuminban, tojásfehéqében, tireoglobulinban vagy egy tengeri tapadócsiga (keyhole limpet) hematocianinjában] vagy immunostimuláns lipoaminosavakban, illetve lipopeptidekben levő energiaátvivő molekulából származtatható. Ilyen vegyületek lehetnek például a lipofil molekularészként három palmitoilcsoportot tartalmazó vegyületek, amelyek például G. Jung és társainak leírásunkban referenciaként felhasznált cikkében [Int. J. Peptide Protein Rés., 37. 46-57 (1991)] kerültek ismertetésre. A lipopeptidekre példaként megemlítjük az N-palmitoil-S-[2,3-bisz(palmitoil-oxi)-(2RS)-propil]-(R)-ciszteint (amelyet Pam3Cys-OH-vaí jelölnek), a Pam3Cys-Ser-t, a Pam3Cys-Ser-(Lys)4-et és a Pam3Cys-Ser-(Glu)4-et.
Az (IB) általános képletben az általános kémiai szimbólumokkal jelzett szubsztituensek - külön-külön, illetve bármilyen kombinációban vagy alkombinációban - előnyös esetben a következők.
1. X jelentése -(CH2)n-csoport, amelyben n valamilyen egész szám 2 és 8 között, a határértékeket is beleértve; célszerűen 2.
2. Y jelentése -(CH2)m-csoport, amelyben m = n 1, célszerűen m = 1.
3. Z jelentése -(CH2)p-csoport, amelyben p valamilyen egész szám 1 és 8 között, a határértékeket is beleértve; célszerűen 2.
4. R[ jelentése karboxilcsoport vagy annak valamilyen funkcionális származéka, primer aminocsoport, szekunder aminocsoport vagy - célszerűen - (a) általános képletű csoport.
5. R2 jelentése karboxilcsoport vagy annak valamilyen funkcionális származéka, primer aminocsoport, szekunder aminocsoport vagy - célszerűen - (a) általános képletű csoport.
6. R3 jelentése karboxilcsoport vagy annak valamilyen funkcionális származéka, primer aminocsoport, szekunder aminocsoport vagy (a) általános képletű csoport.
7. Az (a) általános képletű csoport olyan csoport vagy olyan csoportnak a funkcionális származéka, amelynek R5-CH-COOH általános képletében R5 jeI lentése aminocsoport vagy -NHRa - például -NHYa vagy -NHZa-Yb - általános képletű csoport. Funkcio3
HU 214 677 Β nális származék esetében a karboxilcsoport például észterezett vagy amidált lehet.
8. Az (a) általános képletű csoportban Rj jelentése -NHZa-Yb általános képletű csoport.
9. Abban az esetben, ha az (a) általános képletű csoportban Rj jelentése -NHZa-Yb általános képletű csoport, Yb célszerűen valamilyen antigéncsoport, még célszerűbben marha-szérumalbuminból vagy egy tengeri csiga („keyhole limpet”) hematocianinjából származó antigéncsoport.
10. Az (a) általános képletű csoport jelentése Rj-CH-CO-NHRa általános képletű csoport, amelyI ben Rj jelentése aminocsoport vagy -NHYa általános képletű csoport, Ra jelentése pedig célszerűen Za-Yb általános képletű csoport, amelyben Yb célszerűen valamilyen antigéncsoport, még célszerűbben marha-szérumalbuminból vagy egy tengeri csiga („keyhole limpet”) hematocianinjából származó antigéncsoport.
A találmány szerinti eljárás egyik előnyös megvalósítási módja szerint olyan vegyületeket állítunk elő, amelyeknek (IB) általános képletben X jelentése -CH2-CH2-csoport, Y jelentése -CH2-csoport, R] és R2 egyaránt olyan csoport, amelynek (a) általános képletében R5 jelentése aminocsoport vagy -NHY’ általános képletű csoport, amelyben Ya jelentése valamilyen védőcsoport, IU pedig karboxilcsoport vagy 2-7 szénatomos alkoxi-karbonil-csoport; X) jelentése hidrogénatom vagy hidroxilcsoport - célszerűen hidrogénatom -, Z jelentése -CH2-CH2-csoport és R3 jelentése olyan csoport, amelynek (a) általános képletében R5 jelentése aminocsoport vagy -NHYj általános képletű csoport, R6 jelentése pedig -C0NHYa vagy -CONH-Za-Yb általános képletű csoport.
A találmány szerinti eljárás egy másik előnyös megvalósítási módja szerint olyan vegyületeket állítunk elő, amelyeknek (IB) általános képletében X jelentése -CH2 -CH2-csoport, Z jelentése -CH2-CH2-csoport, Rj és R3 egyaránt olyan csoport, amelynek (a) általános képletében R5 jelentése aminocsoport vagy -NHY’ általános képletű csoport, IU jelentése pedig karboxilcsoport vagy 2-7 szénatomos alkoxi-karbonil-csoport; X, jelentése hidrogénatom vagy hidroxilcsoport - célszerűen hidrogénatom -, Y jelentése -CH2-csoport és R2 jelentése olyan csoport, amelynek (a) általános képletében R5 jelentése aminocsoport vagy -NHYa általános képletű csoport, Rg jelentése pedig -CONH-Za-Yb vagy -CONHYa általános képletű csoport.
A találmány szerinti eljárás egy további előnyös megvalósítási módjának megfelelően olyan vegyületeket állítunk elő, amelyeknek (IB) általános képletében Z jelentése -CH2-CH2-csoport, Y jelentése -CH2-csoport, R2 és Rj jelentése egyaránt olyan csoport, amelynek (a) általános képletében R5 jelentése aminocsoport vagy -NHZj általános képletű csoport és R^ jelentése karboxilcsoport vagy 2-7 szénatomos alkoxi-karbonilcsoport; X] jelentése hidrogénatom vagy hidroxilcsoport - célszerűen hidrogénatom -, X jelentése -CH2-CH2-csoport és R] jelentése olyan csoport, amelynek (a) általános képletében R5 jelentése aminocsoport vagy -NHYj általános képletű csoport és R^ jelentése -CONH-Za-Yb vagy -CONHYa általános képletű csoport.
A (IB) és a (IA) általános képletű vegyületek létezhetnek sók formájában is, beleértve a savaddíciós sókat, például a szerves savakkal, a polimer savakkal és a szervetlen savakkal képezett sókat - így a hidrokloridokat és az acetátokat -, valamint a molekulában jelen levő karboxilcsoport, -SO3H- vagy -P03H-csoportok esetében előállítható sókat - így az alkálifémsókat vagy a helyettesített és a nem helyettesített ammóniumsókat -, továbbá az úgynevezett belsősókat, amelyek abban az esetben állíthatók elő, ha a molekula legalább egy (a) általános képletű csoportot tartalmaz.
Az (a) általános képletű csoportban van egy aszimmetrikus szénatom, amely (D) vagy (L) konfigurációjú lehet. Az (IB) és az (IA) általános képletű vegyületeknek ugyancsak lehet egy aszimmetrikus szénatomjuk: abban az esetben, ha Xj jelentése hidroxilcsoport. A találmány szerinti eljárással ennek megfelelően a (IA) és a (IB) általános képletű vegyületek optikai izomerek és diasztereomerek formájában is előállíthatok abban az esetben, ha X] jelentése hidroxilcsoport és 1-33 (a) általános képletű csoport van a molekulában. Hasonló a helyzet az (a) általános képletű csoportot vagy X] helyén hidroxilcsoportot tartalmazó kiindulási vegyületek esetében is.
A találmány szerinti eljárással úgy állíthatók elő az (IB) vagy az (IA) általános képletű vegyületek, hogy
a) olyan vegyületeket, amelyeknek (Π) általános képletében X, Y, R] és R2 jelentése a már megadott, reagáltatunk olyan vegyületekkel, amelyeknek (ΙΠ) általános képletben
- Xb Z és R3 jelentése a már megadott; és
- X5 jelentése valamilyen kilépőcsoport; vagy
b) (IB) vagy (IA) általános képletű vegyületeket átalakítunk más, (IB) vagy (IA) általános képletű vegyületekké; majd az a) vagy a b) eljárásváltozat szerint előállított (IB) vagy (IA) általános képletű vegyületeket
- adott esetben só formájában - kinyerjük.
A (III) általános képletben X5 jelenthet például halogénatomot vagy adott esetben helyettesített amino-, metánszulfonát-, etánszulfonát- vagy tozilátcsoportot. Abban az esetben, ha X5 halogénatom jelent, át lehet alakítani valamilyen Χ2 Θ anionná.
Az a) eljárásváltozatot megfelelően meg lehet valósítani aprotikus oldószerekben, előnyösen olyan hőmérsékleten, amely a környezet hőmérsékletétől a reákcióelegy forráspontjáig terjedő intervallumban van.
A b) eljárásváltozatot meg lehet például valósítani olyan módon, hogy egy védett (IB) általános képletű vegyületből eltávolítunk legalább egy védőcsoportot, illetve olyan módon, hogy beviszünk legalább egy védőcsoportot vagy antigéncsoportot - adott esetben egy „spacer” csoporton keresztül - egy (IB) vagy (IA) általános képletű vegyület molekulájába.
Abban az esetben, ha legalább egy antigéncsoportot tartalmazó (IB) általános képletű vegyületeket állítunk elő, úgy járunk el, hogy antigéneket adott esetben egy „spacer” csoporton keresztül - rea4
HU 214 677 Β gáltatunk olyan vegyületekkel, amelyeknek (IA) vagy (IB) általános képletében R3 és/vagy Rt és/vagy R2 jelentése karboxilcsoport, -SO3H-csoport vagy -PO3H-csoport vagy ezeknek a csoportoknak valamilyen funkcionális származéka, primer aminocsoport, szekunder aminocsoport, tercier aminocsoport vagy antigéntől mentes (a) általános képletü csoport.
Abban az esetben, ha a védőcsoport vagy az antigéncsoport valamilyen „spacer” csoporton keresztül kapcsolódik, a reakciót olyan „spacer” csoporttal is le lehet játszatni, amely már a reakció kezdete előtt hozzá van kapcsolva akár az alkalmazott (IB) vagy (IA) általános képletü vegyülethez, akár a védőcsoportot vagy az antigént szolgáltató vegyülethez. Úgy is eljárhatunk, hogy Ya szubsztituenst tartalmazó (IB) általános képletü vegyületeket reagáltatunk olyan, védőcsoportot vagy antigént szolgáltató vegyületekkel, amelyeknek mindegyike tartalmaz egy olyan „spacer” csoportot, amely kiegészíti Ya-t a kívánt Za „spacer” csoportra.
Ugyanezek a megfontolások érvényesek olyan (IB) általános képletü vegyületek előállítása esetén is, amelyeknél Yb jelentése biotinilcsoport vagy valamilyen hasonló jelzőfunkciójú csoport.
A (II) általános képletü kiindulási vegyületek ugyancsak újak, és az előállításukra szolgáló eljárás is részét képezi a találmánynak.
A találmány szerint úgy állítjuk elő a (II) általános képletü vegyületeket, hogy
i) olyan (II) általános képletü vegyületekből, amelyek - adott esetben valamilyen „spacer” csoport közbeiktatásával - védőcsoportot tartalmaznak egy aminocsoporton vagy egy karboxilcsoporton, eltávolítunk legalább egy védőcsoportot, illetve legalább egy védőcsoportot viszünk be - adott esetben valamilyen „spacer” csoporton keresztül - olyan (II) általános képletü vegyületek molekulájába, amelyek aminocsoportot vagy karboxilcsoportot tartalmaznak; vagy ii) ciklizálunk olyan vegyületeket, amelyeknek (IV) általános képletében
- X, Y, R] és R2 jelentése a már megadott; és
- Z2 valamilyen kilépőcsoport;
és - kívánt esetben - az i) vagy az ii) eljárásváltozat szerint előállított (II) általános képletü vegyületeket adott esetben só formájában - kinyerjük.
Az i) eljárás változatot ismert módszerek alkalmazásával meg lehet valósítani.
Az ii) eljárásváltozat valamilyen inért oldószerben, célszerűen a környezet hőmérsékletén, megfelelő módon megvalósítható. A ciklizálást előnyösen valamilyen bázis - például l,5-diaza-biciklo[4.3.0]non-5-én (DNB) vagy l,8-diaza-biciklo[5.4.0]-undec-7-én (DBU) - jelenlétében lehet végrehajtani.
A leírásban nem foglalkozunk részletesen a kiindulási vegyületek előállításával. Ezeket a vegyületeket a 4. példában ismertetett megoldáshoz hasonló módon lehet előállítani.
A következő példák a találmány részletesebb ismertetését szolgálják.
1. példa
3-Hidroxi-l-[5-(tercier-butoxi-karbonil-amino)-5-(tercier-butoxi-karbonil)-pentil]-4-[l-(tercier-butoxi-karbonil-amino) -l-(tercier-butoxi-karbonil)-2-etil]-5-[3-(tercier-butoxi-karbonil-amino)—3-(tercier-butoxi-karbonil)-propil]-piridinium-jodid előállítása
2,0 g 3-hidroxi-4-[l-(tercier-butoxi-karbonil-amino)-1 -(tercier-butoxi-karbonil-2-etil)]-5-[3-(tercier-butoxi-karbonil-amino)-3-(tercier-butoxi-karbonil-propil)]-piridint és 1,9 g 6-jód-2-(tercier-butoxi-karbonil-amino)-hexánsav-(tercier-butil)-észtert 110 °C-on tartottunk 1 óra hosszat 25 ml dioxánban, majd a reakcióelegy bepárlását követően visszamaradt anyagot szilikagéllel töltött oszlopon szétválasztva kaptuk meg - metilén-klorid, metanol és ammónia 95:5:0,5 arányú elegyének mint eluálószemek az alkalmazása mellett - a cím szerinti vegyületet. MS (FAB): M+ 881.
2. példa
3-Hidroxi-l-(5-amino-5-karboxi-pentil)-4-(l-amino-l-karboxi-2-etil)-5-(3-amino-3-karboxi-propil)-piridinium-hidroklorid előállítása
Az 1. példa szerint előállított vegyületból 206 mg-ot percen át kevertettünk 20 ml 95:5 térfogatarányú trifluor-ecetsav/víz elegyben. A reakcióelegyből ezután dietil-éter hozzáadásával kicsaptuk a cím szerinti vegyület nyerstermékét, amelyet szűréssel elkülönítettünk, majd feloldottunk 2 ml metanolban. Az így kapott oldatot 2N dietil-éteres sósavoldattal pH = 1 értékre savanyítottuk. A megsavanyított oldat bepárlása után keletkezett maradékot preparatív HPLC-módszerrel (preparatív nagy teljesítményű folyadékkromatográfiás módszerrel) tisztítottuk:
- oszlop: Macherey/Nagel SA5/SCX 5 m 4,6x200 mm;
- oldószerek: A) 0,02 M lítium-klorid-oldat
B) 0,2 M lítium-klorid-oldat
- gradiens: A + 0 - 100% B 50 percen belül;
- detektálás: 290 nm-es ultraibolya sugárzás mellett.
A cím szerinti vegyületet tartalmazó frakciókból eltávolítottuk a sót olyan módon, hogy a frakciókat átvezettük egy olyan Bio-Gel P2 oszlopon, amely a milliméterenkénti 2-4 szitaszemnek (50-100 mesh-nek) megfelelő finomságú, vagyis 0,25-0,5 mm-es részecskéket tartalmazott. Eluálószerként vizet alkalmaztunk, majd a tiszta, cím szerinti vegyületet fagyasztva szárítással (liofílizálással) kaptuk meg. MS (FAB): M+ 413.
3. példa
2-(Tercier-butoxi-karbonil-amino)-4-[3-hidroxi-4-[l-(tercier-butoxi-karbonil)-l-amino-2-etil]-5-piridinil]-butánsav-(tercier-butil)-észter előállítása 212 mg l,3-di(tercier-butil)-7-(tercier-butoxi-karbonil-aza)-2,12-di(tercier-butoxi-karbonil-amino)-5,9-dioxo-tridekano-diátot feloldottunk 10 ml tetrahidrofuránban, majd a kapott oldathoz hozzáadtunk 0,26 ml l,8-diaza-bicklo[5.4.0]undec-7-ént. Az így kapott oldatot a környezet hőmérsékletén kevertettük 15 óra hosszat, majd bepároltuk. A visszamaradt ele5
HU 214 677 Β gyet szilikagélen választottuk szét oszlopkromatográfiás módszerrel. Eluálószerként metilén-klorid és metanol 96:4 térfogatarányú elegyét használva kaptuk meg a cím szerinti vegyületet. MS (FAB): MH+ 596.
4. példa
7-(Tercier-butoxi-karbonil-aza)-2,12-di(tercier-but-oxi-karbonil-amino)-5,9-dioxo-tridekano-dikarbon-sav-1,13-di(tercier-butil)-észter előállítása
A cím szerinti vegyületet használtuk fel a 3. példában kiindulási anyagként.
a) 2-(Tercier-butoxi-karbonil-amino)-5,6-epoxihexánsav-(tercier-butil)-észter előállítása
400 ml metilén-kloridban feloldottunk 13,8 g 2-(tercier-butoxi-karbonil-amino)-5-hexánsav-(tercier-butil)-észtert, majd a keletkezett oldathoz hozzáadtunk 13,1 g mennyiségű, 90 m%-os tisztaságú m-(klórperoxij-benzoesavat. A reakcióelegyet 18 óra hosszat kevertettük a környezet hőmérsékletén, majd jég és telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldat elegyével kezeltük. A kapott vizes fázist kétszer extraháltuk metilén-kloriddal, majd a szerves fázisokat egyesítettük, megszárítottuk és bepároltuk. A maradékot szilikagélen kromatografáltuk. Eluálószerként etilacetát és hexán 1:2,5 térfogatarányú elegyét használtuk. Ilyen módon megkaptuk a 4a) cím szerinti vegyületet. MS (FAB): MH+ 286.
b) 7-(N-benzil-aza)-5,9-dihidroxi-2,12-di(tercier-butoxi-karbonil-amino)-tridekano-dikarbonsav-1,13-di(tercier-butil)-észter előállítása g mennyiségű, 4a) cím szerinti vegyületet és 0,18 ml benzil-amint tartalmazó elegyet 70 °C-on kevertettünk 18 óra hosszat. A kapott elegyet szilikagéllel töltött oszlopon kromatográfiás módszerrel választottuk szét. Eluálószerként aceton és hexán 1:2 térfogatarányú elegyét használtuk. így megkaptuk a 4b) cím szerinti vegyületet. MS (FAB): MH+ 710.
c) 7-Aza-5,9-dihidroxi-2,12-di(tercier-butoxi-karbonil-amino)-tridekano-dikarbonsav-1,13 -di(tercierbutil)-észter előállítása
9,48 g 4b) cím szerinti vegyületet feloldottunk 350 ml etanolban, majd a környezet hőmérsékletén és nyomásán hidrogéneztük 1,4 g 10 m%-os szénhordozós palládiumkatalizátor jelenlétében. A reakcióelegyet ezután szűrtük, majd a szűrletet bepároltuk. A 4c) cím szerinti vegyületet a maradékból szilikagélen végzett kromatográfiás tisztítással állítottuk elő. Eluálószerként metilén-klorid és metanol 9:1 térfogatarányú elegyét használtuk. MS (FAB): MH+ 620.
d) 7-(Tercier-butoxi-karbonil-aza)-5,9-dihidroxi-2,12-di(tercier-butoxi-karbonil-amino)-tridekanodikarbonsav-1,13 -di(tercier-butil)-észter előállítása
310 ml tetrahidroíuránban feloldottunk 7,7 g mennyiségű 4c) cím szerinti vegyületet, majd a keletkezett oldathoz gyorsan hozzáadtunk 4,1 g di(tercier-butil)-dikarbonátot. A keletkezett oldatot 3 óra hosszat kevertettük a környezet hőmérsékletén, majd bepároltuk. A 4d) cím szerinti vegyületet oszlopkromatográfiás módszerrel végzett tisztítással állítottuk elő a maradékból. A tisztítást szilikagélen hajtottuk végre, eluálószerként hexán és etil-acetát 6:4 térfogatarányú elegyét használtuk. MS (FAB): MH+ 720.
e) 7-(Tercier-butoxi-karbonil-aza)-2,12-di(tercierbutoxi-karbonil-amino)-5,9-dioxo-tridekano-dikarbonsav-1,13-di(tercier-butil)-észter előállítására
2,4 ml oxalil-klorid 140 ml metilén-kloriddal készített oldatához -70 °C-on cseppenként hozzáadtuk 4,0 ml dimetil-szulfoxid 42 ml metilén-kloriddal készített oldatát. Az így kapott oldathoz 15 perc elteltével lassú ütemben hozzáadtunk -70 °C-on egy olyan elegyet, amely 8,0 g 4d) cím szerinti vegyületet és 80 ml metilén-kloridot tartalmazott. Az így kapott elegyet 3 óra hosszat kevertettük -70 °C-on, majd lassan az elegybe adagoltunk -50 °C-on 15,7 ml trietil-amint. Az így kapott elegyet ezután jég és víz elegyére öntöttük. A fázisok szétválasztása után a vizes fázist dietil-éterrel kétszer extraháltuk. Az összes szerves fázist egyesítettük, majd az egyesített szerves fázist megszárítottuk és bepároltuk. A maradékot szilikagélen végzett oszlopkromatografálással tisztítottuk. Eluálószerként hexán és etil-acetát 6:4 térfogatarányú elegyét használtuk. Ilyen módon tisztán kaptuk meg a 4e) cím szerinti vegyületet. MS (FAB): MH+ 716.
5. példa
3-Hidroxi-l-(2-hidroxi-5-amino-5-karboxi-pentil)-4-(l-amino-l-karboxi-2-etil)-5-(3-amino-3-karboxi-propil)-piridinium-hidroklorid előállítása
Az 1. és a 2. példa szerinti eljárást alkalmaztuk olyan módon, hogy kiindulási anyagként 5-hidroxi-6-jód-2-(tercier-butoxi-karbonil-amino)-hexánsav-(tercier-butil)-észtert használtunk fel. MS (FAB): M+ 429.
3-Hidroxi-1 -[2-hidroxi-5-(tercier-butoxi-karbonil-a mino)-5-(tercier-butoxi-karbonil-pentil)]-4-[l-(tercier-butoxi-karbonil-amino)-1 -(tercier-butoxi-karbonil)-2-etil]-5-[3-(tercier-butoxi-karbonil-amino)-3-(tercier-butoxi-karbonil)-propil]-piridinium-jodid.
MS (FAB): M+ 897.
6. példa
3-Hidroxi-1 -[5-(tercier-butoxi-karbortil-amino)-5-N-(l-metoxi-karbonil-2-etil)-karboxamido-pentil]-4-[l-(tercier-butoxi-karbonil-amino)-l-(tercier-butoxi-karbonil)-2-etil]-5-[3-(tercier-butoxi-karbonil-amino)-3-(tercier-butoxi-karbonil)-propil]-piridinium-jodid előállítása
235 mg 3. példa szerinti vegyületet, valamint 230 mg e-jód-N-(tercier-butoxi-karbonil-amino)-(metil-P-alanil)-lizint 120 °C-on tartottunk 30 percen át 1 ml dioxánban, majd a reakcióelegyet bepároltuk, és a kapott maradékot szilikagélen végzett kromatografálással tisztítottuk. Eluálószerként etil-acetát és metanol 7:3 térfogatarányú elegyét használtuk. Ilyen módon tisztán kaptuk meg a cím szerinti vegyületet.
MS - FAB: M+910.
7. példa
3-Hidroxi-l-[5-(tercier-butoxi-karbonil-amino)-5N-(l-karboxi-2-etil)-karboxamido-pentil]-4-[l-(ter6
HU 214 677 Β cier-butoxi-karbonil-amino)-l-(tercier-butoxi-karbonil)-2-etil]-5-[3-(tercier-butoxi-karbonil-amino)3-(tercier-butoxi-karbonil)-propil]-piridinium-hidroxid előállítása mg mennyiségű 6. példa szerinti vegyületet feloldottunk 5 ml metanol és 2 ml 0,2 N nátrium-hidroxidoldat elegyében, majd a keletkezett elegyet 5 óra hosszat kevertettük a környezet hőmérsékletén. A reakcióelegyhez ezután hozzáadtunk 10 ml vizet és 10 ml metilén-kloridot, majd - erőteljes keverés közben annyi 0,2 N sósavoldatot, amennyivel a pH-értéket 2 és 3 közé lehetett beállítani. A szerves fázist elválasztottuk, nátrium-szulfáton megszárítottuk és bepároltuk. A cím szerinti vegyületet szilikagélen végzett kromatográfiás tisztítással kaptuk meg. Eluálószerként metilén-klorid és metanol 6:4 térfogatarányú elegyét használtuk.
MS-FAB:M+ 896.
8. példa
Az (1) képletűpiridinszármazék előállítása
A 7. példa szerinti vegyületből 45 mg-ot feloldottunk 1 ml Ν,Ν-dimetil-formamidban, majd az így kapott oldathoz hozzáadtunk először 12 mg 1-hidroxibenzotriazolt, majd 13 μΐ diizopropil-etil-amint (Hünigbázist), 32 mg N-biotinil-l,4-diamino-butánt 2 ml N,N-dimetil-formamidban feloldva, valamint 15 mg N,N-diciklohexil-karbodiimidet. A reakcióelegyet 23 óra hosszat kevertettük a környezet hőmérsékletén, majd bepároltuk. A cím szerinti vegyületet a bepárlási maradékból szilikagélen végzett kromatográfiás tisztítással nyertük ki. Eluálószerként metilén-klorid, metanol és ammónia 90:10:1 arányú elegyét használtuk.
MS-FAB:M+ 1192.
9. példa
A (2) képletű piridinszármazék előállítása
A 8. példa szerinti vegyületből 128 mg-ot feloldottunk egy olyan elegy 25 ml-ében, amely 95:5 térfogatarányban tartalmazott trifluor-ecetsavat és vizet. Az oldatot 1 óra hosszat a környezet hőmérsékletén kevertettük, majd a maradékot nagy teljesítményű folyadékkromatográfiás (HPLC) módszerrel tisztítottuk:
- oszlop: Hypersil ODS 4,6x250 mm;
- oldószerek: A) 100 térfogatrész víz + 1 térfogatrész trifluor-ecetsav B) 80 térfogatrész metanol + térfogatrész víz + 1 térfogatrész trifluor-ecetsav;
- gradiens: A + 20 v% B 20 percen keresztül;
- MS - FAB: M+ 780.
10. példa
Dezoxi-piridinoIin-l-$-alanil-BSA-konjugátum előállítása
A 7. példa szerinti vegyületből 14 mg-ot feloldottunk 0,4 ml Ν,Ν-dimetil-formamidban, majd a kapott oldathoz először 3,3 mg N-etil-N-[3-(dimetil-amino)-propilj-karbodiimid-hidrokloridot, majd 2,3 mg N-hidroxi-szukcinimidet adtunk. Az így kapott oldatot két óra hosszat kevertettük a környezet hőmérsékletén, majd hozzáadtunk - 2 ml 8-as pH-jú foszfátos pufferoldatban - 65 mg marha-szérumalbumint (BSA), és a keverést tovább folytattuk még 6 órán keresztül. Az oldószereket ezt követően elpárologtattuk, a maradékot feloldottuk egy olyan elegy 10 ml-ében, amely 95:5 térfogatarányban tartalmazott trifluor-ecetsavat és vizet, és az oldatot 90 percen át kevertettük a környezet hőmérsékletén. Az oldat bepárlása után visszamaradt anyagot 0,125-0,25 mm-es szemcsékből álló Bio-Gel P 6-tal töltött oszlopon kromatografálással tisztítottuk. Eluálószerként víz és ecetsav 98:2 térfogatarányú elegyét használtuk. A „nagy” molekulatömegű frakciót összegyűjtöttük, és felhasználtuk immunizálásra.
11. példa
Dezoxipiridionolin-l-(f>-alanil)-KHL-konjugátum előállítása
A 7. példa szerinti vegyületből 2,5 mg-ot feloldottunk 2,5 ml dimetil-formamidban, majd a keletkezett oldathoz hozzáadtunk először 0,7 mg N-etil-N-[3-(dimetil-amino)-propil]-karbodiimid-hidrokloridot, ezt követően 0,5 mg N-hidroxi-szukcinimidet. Az így kapott elegyet 90 percen át kevertettük a környezet hőmérsékletén, majd az elegyhez hozzáadtunk - 0,5 ml 50 v%-os glicerinben - 34,2 mg mennyiségű, tengericsigából (keyhole limpets) származó hematocianint (KHL), és a keverést a környezet hőmérsékletén még 36 órán keresztül folytatjuk. A reakcióelegyhez ezután hozzáadtuk egy olyan elegy 5 ml-ét, amely 95:5 térfogatarányban tartalmazott trifluor-ecetsavat és vizet. A kapott oldatot 75 percen át kevertettük a környezet hőmérsékletén, majd bepárlással eltávolítottuk az oldatból a trifluor-ecetsavat és a vizet. A maradékot centrifugálás közben mostuk néhányszor vízzel, ezután felhasználtuk immunizálásra.
12. példa
3-Hidroxi-4-[2-(tercier-butoxi-karbonil-amino)-2karboxi-etil]-5-[3-(tercier-butoxi-karbonil-amino)3-(tercier-butoxi-karbonil)-propil]-piridin előállítása
A 3. példa szerinti vegyületből 0,5 g-ot feloldottunk 10-10 ml vizet és metanolt tartalmazót elegyben, majd a keletkezett oldathoz hozzáadtunk 1 g nátrium-hidroxidot, és a kapott oldatot a környezet hőmérsékletén 3 óra hosszat kevertük, ezt követően a 8. példában ismertetett módon feldolgoztuk.
MS - FAB: MH+ 540.
13. példa
3-Hidroxi-4-[l-(tercier-butoxi-karbonil-amino)-lN-(l-etil-metoxi-karbonil)-karboxamido-2-etil]-5-[3-(tercier-butoxi-karbonil-amino)-3-(tercier-butoxi-karbonil)-propil]-piridin előállítása ml tetrahidrofuránban feloldottunk 320 mg 12.
példa szerinti vegyületet, 200 mg 1-hidroxi-benztriazolt, 300 mg Ν,Ν-diciklohexil-karbodiimidet és 200 mg β-alanin-metil-észtert, majd a keletkezett oldatot egy éjszakán át kevertettük a környezet hőmérsékle7
HU 214 677 Β tén. Az oldószer elpárologtatósa után kapott maradékot szilikagélen tisztítottuk. Eluálószerként metilén-klorid és metanol 95:5 térfogatarányú elegyét használtuk.
MS - FAB: MH+ 625.
14. példa
3-Hidroxi-l-[5-(tercier-butoxi-karbonil-amino)-5-(tercier-butoxi-karbonil)-pentil]-4-[l-(tercier-butoxi-karbonil-amino)-l-N-[l-(metoxi-karbonil)-2-etil]-karboxamido-2-etil]-5-[3-(tercier-butoxi-karbonil-amino)-3-(tercier-butoxi-karbonil)-propil]-piridinium-jodid előállítása
Ezt a vegyületet az 1. példában ismertetett módon állítottuk elő. MS - FAB: M+ 910.
75. példa
3-Hidroxi-l-[5-(tercier-butoxi-karbonil-amino)-5(tercier-butoxi-karbonil)-pentil]-4-[l-(tercier-butoxi-karbonil-amino)-l-N-(l-karboxi-2-etil)-karboxamido-2-etil]-5-[3-(tercier-butoxi-karbonil-amino)-3-(tercier-butoxi-karbonil)-propil]-piridinium-hidroxid előállítása
Ezt a vegyületet a 7. példában ismertetett módon állítottuk elő. MS - FAB: M+ 896.
16. példa
A 15. példa szerinti eljárással előállított vegyületet a 10., illetve all. példában leírt módon BSA-hoz, illetve KLH-hoz kapcsoltuk. Az így keletkezett vegyületeket attól függetlenül, hogy a kapcsolást BSA-val vagy KLH-val hajtottuk-e végre - az oldalláncon a hidroxilcsoportot a piridingyűrűtől számított 4-es helyzetben tartalmazzák.
7. példa
2-Amino-4-[3-hidroxi-4-(l-karboxi-l-amino-2etil)-5-piridinil]-butánsav előállítása A 3. példa szerint előállított vegyület 200 mg-ját 90 percen át kezeltük egy olyan elegy 20 ml-ével, amely 95:5 térfogatarányban tartalmazott trifluor-ecetsavat és vizet, majd bepároltuk az elegyet.
MS - FAB: MH+ 284.
Az (IB) és az (IA) általános képletű vegyületeket fel lehet használni a biológiai eredetű folyadékokban - például a vizeletben vagy a végsavóban - végbemenő kollagéndegradáció következményeként a piridinolin vagy a dezoxi-piridinolin részvételével bekövetkező térhálósodás mértékének megállapításához. Ez a folyamat emberekben és állatokban egyaránt végbemegy olyan állapotok esetén, amelyeket fokozott mértékű csontfelszívódás vagy a csontképződés és a csontfelszívódás közötti normális egyensúly megbomlása jellemez. Ilyen állapot áll be például csontritkulás, Pagetkór, jóindulatú vagy rosszindulatú csontdaganatok kifejlődése, áttételes rákok, csontlágyulás, súlyos mellékpajzsmirigy-daganat (primer), csontfelszívódást növelő hatóanyagokkal (például glükokortikoidokkal) végzett gyógykezelések alkalmazása, valamint csont-ízületi gyulladás és reumaszerű ízületi gyulladás esetén.
A térhálósodás mértékének mennyiségi meghatározását el lehet végezni például immunológiai módszerekkel, elektrokémiai titrálással, természetes fluoreszcens sugárzás alkalmazásával végrehajtott spektroszkópiai méréssel vagy az ultraibolya sugarak abszorpciójának mérése alapján. Ezekkel a módszerekkel a mennyiségi meghatározást közvetlenül - minden tisztítás nélkül - is lehet végezni a testfolyadékokon, de - amennyiben például túlzottan nagy koncentrációban vannak jelen szennyező anyagok - a testfolyadékokat meg is lehet tisztítani a meghatározás végrehajtása előtt. A biológiai folyadékokban jelen levő szabad térhálóelemeket vagy a testfolyadékban jelen levő, a kollagén degradálódásakor keletkező peptidek hidrolizálódása eredményeként felszabadult térhálóelemeket a találmány szerinti eljárással lehet mennyiségileg meghatározni. Az összes térhálóelem a szabad térhálóelemek teljes mennyiségének vagy koncentrációjának és a hidrolizáláskor létrejött térhálóelemek teljes mennyiségének vagy koncentrációjának az összege a testfolyadékban.
A piridinolinhoz vagy dezoxi-piridinolinhoz kapcsolódó térhálóelemeket a biológiai folyadékokban immunológiai módszerekkel célszerű mennyiségileg meghatározni. Az immunológiai meghatározáshoz speciális antitesteket állítunk elő az (IB) általános képletű vegyületekhez, amelyek legalább egy, a továbbiakban immunogénnek nevezett antigéncsoportot hordoznak. Elő lehet állítani - akár poliklonális, akár monoklonális változatban - olyan antitesteket, amelyek képesek immunreakcióba lépni olyan vegyületekkel, amelyeknek (IB) általános képletében X] jelentése hidrogénatom és amelyeknek molekulájában ugyanakkor legalább egy antigéncsoport van, és/vagy olyan helyettesített vegyületekkel, amelyeknek (IB) általános képletében X[ jelentése hidroxilcsoport. A találmány szerinti eljárás egyik előnyös változatának megvalósításakor olyan speciális antitesteket állítunk elő, amelyek képesek immunreakcióba lépni olyan, legalább egy antigéncsoportot tartalmazó vegyületekkel, amelyeknek (IB) általános képletében X] jelentése hidrogénatom.
Amint már említettük, az (IB) általános képletű vegyületekben az antigéncsoport közvetlenül vagy közvetetten kapcsolódhat az adott helyzetben: például jelen lehet az Rj, az R2 vagy az R3 - elsősorban és előnyösen az R3 vagy az R2 - szubsztituensekben, és előnyösen egy „spacer” csoporton keresztül kapcsolódik. Az ugyancsak a találmány szerinti eljárással előállítható (IA) általános képletű vegyületeket fel lehet használni amint erről már volt szó - egy, kettő vagy három antigéncsoportot hordozó, megfelelő szerkezetű (IB) általános képletű vegyületek előállítására is.
Az antitestek előállítását hagyományos módon lehet megoldani: például olyan módon, hogy a legalább egy antigéncsoportot tartalmazó, (IB) általános képletű vegyületet a szakterületen általánosan ismert immunológiai eljárások valamelyikének alkalmazásával injekciós úton bejuttatjuk megfelelő emlősállatok - például egerek, nyulak vagy juhok - szervezetébe (Laboratory Techniques in Biochemistry and Molacular Biology, 73. Elsevier, 1986). Szérumokat titráltunk meg, hogy
HU 214 677 Β meghatározzuk az immunizáló hatással összefüggő antitestképződést. Össze lehet gyűjteni lépsejteket vagy perifériás vérből limfocitákat, amelyeket - homogenizálás után - egyesíteni lehet például rákos sejtekkel, hogy létrehozzunk olyan fúziós sejthibrideket, amelyek a találmány szerinti eljárással előállított, (IB) általános képletű, térhálósodásra képes kívánt vegyülettel immunreakcióra képes, monoklonális antitesteket termelnek. A monoklonális antitestek előállítását a G. Galffe és C. Milstein által ismertetett eljárások alkalmazásával lehet megvalósítani [Meth. Enzymol., 73. 1. (1981],
Az előbb ismertetett eljárásokkal vagy azokhoz hasonló eljárásokkal előállított poliklonális vagy - elsősorban - monoklonális antitesteket vagy fragmentumokat fel lehet használni különböző immunometriás analízisekhez, amelyekkel meg lehet állapítani biológiai folyadékokban a kollagén degradálódásából származó, piridinolint vagy dezoxi-piridinolint tartalmazó térhálós vegyületek koncentrációját. Ezekben az immunometriás analízisekben szerepet játszanak olyan monoklonális antitestek vagy antitest-fragmentumok, amelyek hozzá vannak kapcsolva valamilyen kimutatható jelzőanyaghoz (markerhez). Megfelelő kimutatható jelzőanyagok lehetnek például az enzimek, a társenzimek, az enzimek működését gátló anyagok, a színhordó vegyületek, a fluorofor vegyületek, a kemilumineszcens anyagok, a paramágneses fémek, a szpinjelző anyagok és a radionuklidok. A csontfelszívódás jelzésére szabványos immunometriás módszerek alkalmasak, amelyek közül példaként megemlítjük az enzimek alkalmazásával végzett immunoszorbens analízist (ELISA), a radioimmunizációs analízist (RIA) és az immunoradiometriás „szendvics” analízist (IRMA).
A találmány szerinti eljárással előállított, antigéncsoportot nem tartalmazó (IB) általános képletű vegyületeket, illetve (LA) általános képletű vegyületeket - ha X] = H vagy OH - standard referenciaanyagként fel lehet használni arra, hogy biológiai folyadékokban mennyiségileg meghatározzuk a kollagén degradálódása révén piridinolinból vagy dezoxi-piridinolinból keletkezett térhálós molekulákat, például az eddig említett kvantitatív módszerek bármelyikével, illetve olyan felszerelésekkel, amelyeket ilyen kvantitatív módszerek alapján dolgoztak ki.
Az eddigiekkel összhangban a találmányból eredően a következők állnak rendelkezésre:
1. A kötőszöveti anyagcsere rendellenességeinek például a csont- vagy porcfelszívódás - meghatározására szolgáló módszer, amely szerint meghatározzuk mennyiségileg valamilyen biológiai folyadékban a kollagén degradálódása révén a piridinolinból vagy a dezoxi-piridinolinból létrejött összes térhálós vegyület vagy szabad térhálós vegyület koncentrációját valamilyen (IB) általános képletű vegyület felhasználásával.
2. A kötőszöveti anyagcsere rendellenességeinek például a csont- vagy a porcfelszívódás - meghatározására szolgáló módszer, amely szerint meghatározzuk mennyiségileg valamilyen biológiai folyadékban a kollagén degradálódása révén a piridinolinból vagy a dezoxi-piridinolinból létrejött összes térhálós vegyület vagy szabad térhálós vegyület koncentrációját valamilyen (IA) általános képletű, a találmány szerinti eljárással előállított vegyület felhasználásával.
3. Kvantitatív módszer, amellyel meg lehet határozni biológiai folyadékokban a piridinolinból vagy a dezoxi-piridinolinból a kollagén degradálódása révén keletkezett összes vagy szabad térhálós vegyület koncentrációját olyan módon, hogy a biológiai folyadékot olyan, speciális monoklonális vagy poliklonális antitestekkel érintkeztetjük, amelyek képesek immunreakcióba lépni olyan, legalább egy antigéncsoportot tartalmazó vegyületekkel, amelyeknek (IB) általános képletében X] hidrogénatomot vagy hidroxilcsoportot jelent.
4. A találmány szerinti eljárással előállítható (IA) általános képletű vegyületek vagy az antigéncsoportot nem tartalmazó, (IB) általános képletű vegyületek standardkénti alkalmazása a piridinolinból vagy a dezoxi-piridinolinból biológiai folyadékokban a kollagén degradálódása révén keletkezett összes vagy szabad térhálós vegyület koncentrációjának meghatározására.
5. Poliklonális vagy monoklonális antitestek, amelyeket a már ismertetett módon lehet előállítani.
6. Az 5. pontban említett monoklonális antitesteket képző sejtvonal.
7. Eljárás az 5. pontban említett monoklonális antitestek előállítására.
8. Immunológiai elemzéshez használható felszerelés, amellyel meg lehet határozni biológiai folyadékokban a piridinolinból vagy a dezoxi-piridinolinból a kollagén degradálódása révén keletkezett összes vagy szabad térhálós vegyület mennyiségét vagy koncentrációját. Ez a felszerelés magában foglal egy olyan kompozíciót, amelyben vagy egy, korábban már ismertetett antitest vagy annak valamely, immunológiai szempontból reakcióképes fragmentuma, valamint egy további reagens és használati utasítás az adott immunológiai vizsgálat elvégzéséhez, amelyhez standardként valamilyen, a találmány szerinti eljárással előállított (IA) általános képletű vegyületet vagy olyan, antigéncsoporttól mentes vegyületet használunk fel, amelynek (IB) általános képletében X] jelentése hidrogénatom vagy hidroxilcsoport, előnyösen hidrogénatom.
Claims (8)
1. Eljárás (IB) általános képletű piridinszármazékok előállítására, ahol
- X, Y és Z jelentése egymástól függetlenül 1 -4 szénatomos alkilcsoport,
- R3 jelentése karboxilcsoport, 1 -8 szénatomos alkoxicsoport vagy egy (a) általános képletű csoport, ahol
- R5 jelentése -NH2, -NH(Ci_8 alkil), -NHYa vagy JtHZ,- ]_N
-Yb általános képletű csoport, ahol
-Ya jelentése amino-védőcsoport, —Za jelentése szukcinilcsoport, β-Ala vagy egy 3-amino-propánsavból, 3-aminoizobutánsavból, 4-amino-butánsavból, NH2-C(CH3)2-COOH-ból, 6-aminohexánsavból, 1,8-diamino-oktánból, 1,69
HU 214 677 Β diamino-hexánból vagy NH2-(CH2)!_4-CO-NH-(CH2)i_6-NH2-ből származó kétértékű csoport, és
-Yb jelentése amino-védócsoport vagy egy antigéncsoport, amely antigéncsoport ökörszérumalbumin, bovalbumin, tiroglobulin vagy tengericsiga-hemocianin lehet,
-lejelentése -COOH, (C2_7 alkoxij-karbonil, -CONH2, -CONHYa vagy -CONH-Za-Yb általános képletű csoport, ahol Ya, Za és Yb jelentése a fenti,
- R, és R2 jelentése egymástól függetlenül megegyezik
R3 valamelyik jelentésével,
- Xj jelentése hidrogénatom vagy hidroxilcsoport, és
- X2®jelentése anion, azzal a megkötéssel, hogy Y legalább eggyel kevesebb szénatomot tartalmaz, mint X -, azzal jellemezve, hogy egy (HA) általános képletű vegyület - ahol X, Y, Rj és R2 jelentése a fenti - egy (III) általános képletű vegyülettel - ahol Xb Z és R3 jelentése a fenti, míg X5 jelentése kilépő csoport - reagáltatunk, kívánt esetben az így kapott, (IB) általános képletű vegyületet egy másik (IB) általános képletű vegyületté alakítjuk át.
és az így kapott vegyületet szabad alakban vagy só alakjában kinyerjük.
2. Eljárás egy (IA) általános képletű vegyület előállítására - ahol
- X[ jelentése hidrogénatom vagy hidroxilcsoport és
- X2a®jelentése kloridion vagy acetátion -, azzal jellemezve, hogy egy (IIB) általános képletű vegyület - ahol Ya jelentése amino-védőcsoport - egy (ΙΠΑ) általános képletű vegyülettel reagáltatunk - ahol Ya jelentése amino-védőcsoport, X, jelentése hidrogénatom vagy hidroxilcsoport, míg X5 jelentése kilépőcsoport -, majd a védőcsoportokat eltávolítjuk, és az így kapott vegyületet szabad alakban vagy só alakjában kinyerjük.
3. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy olyan piridinszármazékokat állítunk elő, ahol az (IB) általános képletben X jelentése -CH2-CH2-csoport, Y jelentése -CH2-csoport, R[ és R2 jelentése egyaránt olyan csoport, amelynek (a) általános képletében R5 jelentése aminocsoport vagy olyan csoport, amelynek NHY’a általános képletében Y’a valamilyen védőcsoport, Rh karboxilcsoport vagy 2-6 szénatomos alkoxi-karbonil-csoport, X! hidrogénatom vagy hidroxilcsoport, Z jelentése -CH2-CH2-csoport és R3 olyan csoport, amelynek (a) általános képletében R5 aminocsoport vagy olyan csoport, amelynek -NHY’a általános képletében Y’a amino-védőcsoport, R^ jelentése karboxilcsoport vagy C2_7 alkoxi-karbonil-csoport, X, jelentése hidrogénatom vagy hidroxilcsoport, Z jelentése -CH2-CH2-csoport és R3 jelentése (a) általános képletű csoport, amelyben R5 jelentése -NH2 vagy NHY’a képletű csoport, míg IU jelentése -CONH-Za-Yb általános képletű csoport, amelyben
Yb jelentése antigéncsoport, míg Za jelentése az 1. igénypontban megadott.
4. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy olyan piridinszármazékokat állítunk elő, ahol az (IB) általános képletben X jelentése -CH2-CH2-csoport, Y jelentése -CH2-csoport, Z jelentése -CH2-CH2-csoport, R, és R3 jelentése egyaránt olyan csoport, amelynek (a) általános képletében R5 jelentése aminocsoport vagy olyan csoport, amelynek -NHY’a általános képletében Y’a jelentése amino-védőcsoport, R^ jelentése pedig karboxilcsoport vagy 2-7 szénatomos alkoxi-karbonil-csoport, X] jelentése hidrogénatom vagy hidroxilcsoport és R2 jelentése olyan csoport, amelynek (a) általános képletében R5 jelentése aminocsoport vagy olyan csoport, amelynek -NHY’a általános képletében Y’a jelentése amino-védőcsoport, R6 jelentése pedig olyan csoport, amelynek -CONH-Za-Yb általános képletében Yb valamilyen antigéncsoport, Za pedig az 1. igénypontban megadott.
5. Eljárás kötőszöveti anyagcsere-rendellenességek meghatározására biológiai folyadékokban a kollagéndegradálódás révén piridinolinból vagy dezoxipiridinolinból keletkezett összes vagy szabad térhálós vegyület koncentrációjának mérésével, azzal jellemezve, hogy standardként valamely (IA) általános képletű, a 2. igénypont szerinti eljárással előállított piridinszármazékot használunk.
6. Eljárás kötőszöveti anyagcsere-rendellenességek - például csont- vagy porcfelszívódás - meghatározására biológiai folyadékokban a kollagén-degradálódás révén piridinolinból vagy dezoxi-piridinolinból keletkezett összes vagy szabad térhálós vegyület koncentrációjának mérésével, azzal jellemezve, hogy standardként egy (IB) általános képletű, az 1. igénypont szerinti eljárással előállított piridinszármazékot használunk.
7. Eljárás piridinolinból vagy dezoxi-piridinolinból biológiai folyadékokban végbemenő kollagén-degradálódás révén keletkezett összes vagy szabad térhálós vegyület koncentrációjának meghatározására, azzal jellemezve, hogy a biológiai folyadékot olyan, specifikus poliklonális vagy monoklonális antitestekkel érintkeztetjük, amelyek képesek immunreakcióba lépni legalább egy antigéncsoportot hordozó, az 1. igénypont szerinti eljárással előállított, (IB) általános képletű vegyülettel.
8. Immunológiai reagenskészlet biológiai folyadékokban a kollagén degradálódása révén piridinolinból vagy dezoxi-piridinolinból keletkezett összes vagy szabad térhálós vegyület mennyiségének vagy koncentrációjának meghatározására, azzal jellemezve, hogy magában foglal egy olyan kompozíciót, amely egy antitestet vagy egy immunreaktív olyan fragmentumot tartalmaz, amely az 1. igénypont szerinti eljárással kapott, legalább egy antigéncsoportot hordozó (IB) általános képletű vegyülettel immunreakcióra képes, és egy további reagenst tartalmaz az adott immunológiai vizsgálat elvégzéséhez egy használati utasítással együtt, ahol standardként egy 2. igénypont szerinti eljárással kapott, (IA) általános képletű vegyületet használunk.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB929202139A GB9202139D0 (en) | 1992-01-31 | 1992-01-31 | Improvements in or relating to organic compounds |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU9300108D0 HU9300108D0 (en) | 1993-04-28 |
| HUT70276A HUT70276A (en) | 1995-09-28 |
| HU214677B true HU214677B (hu) | 1998-04-28 |
Family
ID=10709643
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU9300108A HU214677B (hu) | 1992-01-31 | 1993-01-15 | Eljárás piridinszármazékok előállítására és kötőszöveti anyagcsere-rendelleneségek meghatározására |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0556152B1 (hu) |
| JP (1) | JP3544549B2 (hu) |
| AT (1) | ATE210645T1 (hu) |
| AU (1) | AU663909B2 (hu) |
| CA (1) | CA2088396A1 (hu) |
| CZ (1) | CZ288038B6 (hu) |
| DE (1) | DE69331293T2 (hu) |
| DK (1) | DK0556152T3 (hu) |
| ES (1) | ES2169723T3 (hu) |
| FI (1) | FI104896B (hu) |
| GB (1) | GB9202139D0 (hu) |
| HU (1) | HU214677B (hu) |
| NO (1) | NO180779C (hu) |
| PT (1) | PT556152E (hu) |
| SG (1) | SG43065A1 (hu) |
| SK (1) | SK281137B6 (hu) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5620861A (en) * | 1992-07-31 | 1997-04-15 | Metra Biosystems, Inc. | Method and kit for pyridinium crosslink assay |
| US5756361A (en) * | 1992-12-17 | 1998-05-26 | Metra Biosystems, Inc. | Screening method for periodontal disease |
| US5736344A (en) * | 1992-12-17 | 1998-04-07 | Metra Biosystems, Inc. | Serum pyridinium crosslinks assay |
| US5661039A (en) * | 1995-03-01 | 1997-08-26 | Metra Biosystems, Inc. | Perspiration assay for bone resorption |
| US5723619A (en) * | 1997-01-13 | 1998-03-03 | Bayer Corporation | Method for the synthesis of deoxypyridinoline |
| US5834610A (en) * | 1997-05-06 | 1998-11-10 | Johnson; Gary M. | Conversion of pyridinoline to deoxypyridinoline |
| CN105801688A (zh) * | 2016-04-14 | 2016-07-27 | 苏州博源医疗科技有限公司 | 脱氧吡啶酚免疫原、抗体和检测试剂及制备方法 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS59148766A (ja) * | 1983-02-10 | 1984-08-25 | Otsuka Pharmaceut Co Ltd | ピリジン誘導体 |
| US4973666A (en) * | 1987-11-06 | 1990-11-27 | Washington Research Foundation | Peptide fragments containing HP and LP cross-links |
| GB8929366D0 (en) * | 1989-12-30 | 1990-02-28 | Rowett Research Inst | Method to detect connective tissue disorder in humans and animals |
-
1992
- 1992-01-31 GB GB929202139A patent/GB9202139D0/en active Pending
-
1993
- 1993-01-15 HU HU9300108A patent/HU214677B/hu not_active IP Right Cessation
- 1993-01-26 SG SG1996003175A patent/SG43065A1/en unknown
- 1993-01-26 DK DK93810049T patent/DK0556152T3/da active
- 1993-01-26 PT PT93810049T patent/PT556152E/pt unknown
- 1993-01-26 ES ES93810049T patent/ES2169723T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1993-01-26 EP EP93810049A patent/EP0556152B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1993-01-26 AT AT93810049T patent/ATE210645T1/de not_active IP Right Cessation
- 1993-01-26 DE DE69331293T patent/DE69331293T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1993-01-28 SK SK42-93A patent/SK281137B6/sk unknown
- 1993-01-28 FI FI930367A patent/FI104896B/fi active
- 1993-01-28 NO NO930284A patent/NO180779C/no unknown
- 1993-01-29 AU AU32105/93A patent/AU663909B2/en not_active Ceased
- 1993-01-29 JP JP01341493A patent/JP3544549B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1993-01-29 CZ CZ1993106A patent/CZ288038B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1993-01-29 CA CA002088396A patent/CA2088396A1/en not_active Abandoned
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU663909B2 (en) | 1995-10-26 |
| JPH0641078A (ja) | 1994-02-15 |
| SK281137B6 (sk) | 2000-12-11 |
| NO180779B (no) | 1997-03-10 |
| AU3210593A (en) | 1993-08-05 |
| DE69331293D1 (de) | 2002-01-24 |
| GB9202139D0 (en) | 1992-03-18 |
| HU9300108D0 (en) | 1993-04-28 |
| DK0556152T3 (da) | 2002-04-08 |
| NO180779C (no) | 1997-06-18 |
| CA2088396A1 (en) | 1993-08-01 |
| EP0556152A1 (en) | 1993-08-18 |
| PT556152E (pt) | 2002-05-31 |
| HUT70276A (en) | 1995-09-28 |
| CZ288038B6 (cs) | 2001-04-11 |
| SG43065A1 (en) | 1997-10-17 |
| FI930367A (fi) | 1993-08-01 |
| FI930367A0 (fi) | 1993-01-28 |
| ATE210645T1 (de) | 2001-12-15 |
| FI104896B (fi) | 2000-04-28 |
| JP3544549B2 (ja) | 2004-07-21 |
| EP0556152B1 (en) | 2001-12-12 |
| NO930284L (no) | 1993-08-02 |
| DE69331293T2 (de) | 2002-07-18 |
| NO930284D0 (no) | 1993-01-28 |
| SK4293A3 (en) | 1993-11-10 |
| CZ10693A3 (en) | 1993-12-15 |
| ES2169723T3 (es) | 2002-07-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5359093A (en) | Reagents and methods for the detection and quantification of thyroxine in fluid samples | |
| US5593896A (en) | Reagents and methods for the detection and quantification of thyroxine in fluid samples | |
| CA2769998C (en) | Imatinib immunoassay | |
| JPS61204135A (ja) | 発癌遺伝子生成物阻害剤 | |
| JP2009533339A (ja) | Ｃ−反応性タンパク質についての結合剤 | |
| HU214677B (hu) | Eljárás piridinszármazékok előállítására és kötőszöveti anyagcsere-rendelleneségek meghatározására | |
| US6262265B1 (en) | Non-hydrolyzable analogs of heroin metabolites suitable for use in immunoassay | |
| USRE33188E (en) | Peptides for assaying human parathyroid hormone | |
| JP3714942B2 (ja) | 生物体液中のバンコマイシンの検出および定量化用試薬および方法 | |
| GB2056459A (en) | Pterin derivatives and an assay method for determining pterins | |
| JP2002514766A (ja) | ヒトクロモグラニンＡ（ＣｇＡ）のイムノアッセイ、このアッセイのために使用されるであろう抗体、試薬及びキット | |
| EP0043285A1 (en) | Method for determination of valproic acid and reagents therein | |
| US6175016B1 (en) | Pyridine derivatives | |
| US5824786A (en) | Synthesis of galactosylhydroxylysine | |
| JPS59138958A (ja) | 抗血清 | |
| JPS60246322A (ja) | ヒトインタ−ロイキン−２に対する抗体 | |
| JPH05213994A (ja) | 抗 体 | |
| Liu | Modification of proteins by lysine-directed bifunctional aldehydes derived from lipid peroxidation | |
| JPH07504271A (ja) | ジアルキルチオカルバモイルハライドを用いるｎ末端ペプチド分解 | |
| JPH04264069A (ja) | ビリルビン誘導体 | |
| JPH11279200A (ja) | ジチロシンポリクローナル抗体とその製造方法並びにこれに用いる抗原及びその製造方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| DGB9 | Succession in title of applicant |
Owner name: NOVARTIS AG., CH |
|
| MM4A | Lapse of definitive patent protection due to non-payment of fees |