HU190129B - Process for the isolation of carboxypeptidase b enzyme from mammal pancreas - Google Patents

Process for the isolation of carboxypeptidase b enzyme from mammal pancreas Download PDF

Info

Publication number
HU190129B
HU190129B HU832469A HU246983A HU190129B HU 190129 B HU190129 B HU 190129B HU 832469 A HU832469 A HU 832469A HU 246983 A HU246983 A HU 246983A HU 190129 B HU190129 B HU 190129B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
centrifuged
suspension
supernatant
carboxypeptidase
precipitate
Prior art date
Application number
HU832469A
Other languages
German (de)
English (en)
Other versions
HUT34234A (en
Inventor
Laszlo Boross
Bela Szajani
Jozsefne Dala
Arpad Tetzli
Nee Deer Aranka Kiss
Original Assignee
Reanal Finomvegyszergyar,Hu
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Reanal Finomvegyszergyar,Hu filed Critical Reanal Finomvegyszergyar,Hu
Priority to HU832469A priority Critical patent/HU190129B/hu
Priority to CS853128A priority patent/CS252482B2/cs
Priority to CS842361A priority patent/CS252472B2/cs
Priority to US06/595,767 priority patent/US4650762A/en
Priority to DE19843412669 priority patent/DE3412669A1/de
Priority to RO84114181A priority patent/RO88619A/ro
Priority to DD84270845A priority patent/DD222632A5/de
Priority to DD84261731A priority patent/DD220334A5/de
Priority to SU843731150A priority patent/SU1487817A3/ru
Priority to CU832469/83A priority patent/CU21674A3/es
Publication of HUT34234A publication Critical patent/HUT34234A/hu
Publication of HU190129B publication Critical patent/HU190129B/hu
Priority to SU874028800A priority patent/RU1769763C/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
    • C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
    • C12N11/04—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier entrapped within the carrier, e.g. gel or hollow fibres
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/814—Enzyme separation or purification
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/814—Enzyme separation or purification
    • Y10S435/816—Enzyme separation or purification by solubility

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Description

A találmány tárgya új eljárás karboxipeptidáz B enzim elkülönítésére emlősök (elsősorban sertések) hasnyálmirigyéből.
A kereskedelmi forgalomba kerülő karboxipeptídáz B enzimet sertés hasnyálmirigyéből izolálják, de a szakirodalomból ismeretesek eljárások más emlősök (pl. marha, kecske) hasnyálmirigy karboxipeptidáz B enzimjének elkülönítésére is.
A J. Bioi. Chem. 235, 2272 (1960) közlemény szerint a sertés hasnyálmirigyet felszeletelik, majd szobahőmérsékleten autolízisnek teszik ki. Ezután a hasnyálmirigy zsírtartalmát acetonnal, aceton-éter eleggyel és végül éterrel eltávolítják, a zsírmentesített szervet szárítják, porítják. Az acetonport vízzel extrahálják, az extraktumot ammónium-szulfátlal frakcionálják. Sómentesítés után a fehérje oldatot bekeveréses DEAE-cellulóz ioncserének vetik alá. Elúció után a karboxipeptidáz B-t tartalmazó frakciót ammónium-szulfáttal frakcionálják tovább. Sómentesítés után újabb DEAE-cellulóz ioncsere következik, ezúttal oszlopkromatográfia formájában, majd ismét kicsapás ammóniura-szulfáttal. A csapadékot dialízissel vagy gélszüréssel sómentesítik. Tárolás fagyasztott állapotban történik, mivel a liofilezés 25-45%-os inakválódást okoz.
A termék fajlagos aktivitása hippuril-L-arginin szubsztráttal, 25 ’C-on mérve
184,2 egység/mg, ami az autolizált szövetből készült extraktumhoz képest 16-17-szeres tisztulásnak felel meg.
Jelenleg a fentiekben vázolt eljárási alkalmazzák a legszélesebb körben.
A Biochemistry 1, 1069 (1962) közlemény szerint a marha hasnyálmirigy karboxipeptidáz B kristályos formában állítható elő, a tisztított zimogén, a prokarboxipeptidáz B aktiválásával. Ennél az eljárásnál a zimogén izolálásához ugyancsak a hasnyálmirigy acetonporának vizes extraktumát használják. A vizes extraktum tartalmazza a prokarboxipeptidáz B-t, amelyet kromatográfiásan tisztítanak először DEAE-cellulózon, majd DEAE-Sephadexen. A prokarboxipeptidáz B-t tripszinnel alakítják át aktív karboxipeptidáz B-vé, amelyet végül kristályosítanak.
A Biochem. J. 163, 253 (1977) közlemény a karboxipeptidáz B enzimnek emberi hasnyálmirigyből való izolálását ismerteti. Az acetonpor készítés, az ammónium-szulfáttal történő kicsapás és a DEAE-cellulóz kromatográfia lényegében a J. Bioi. Chem. 235, 2272 (1960) közleményben leírtak szerint történik. Eltérés csak a DEAE-cellulóz kromatográfiánál alkalmazott puffer koncentrációban éa az elúciós gradiensben van. Ezután a karboxipeptidáz B-t két frakcióra, Bi- és Bj-re választják szót Whatman CM-cellulóz 32 ioncserélőn végzett kromatográfiával. A Bi frakció fajlagos aktivitása 37 ’C-on, hippuril-L-argininsav szubsztráttal mérve 1192 egység/mg, a Bj frakció aktivitása 862 egység/mg, ami
108-szoros, illetve 78-szoros tisztulásnak felel meg a vizes extraktumhoz viszonyítva.
Kecske hasnyálmirigyből az Indián J. Biochem. Biophys. 12, 24 (1975), illetve 13, 106 (1976) közlemények alapján lehet karboxipeptidáz B-L izolálni. Az ismertetett eljárás lényege a következő:
A kecske hasnyálmirigyet -20 °C-on lefagyasztják, majd fagyasztott állapotban felszeletelik és a +4 ’C-ra való visszaengedtetés során kicsorgó sejtnedvet összegyűjtik. Az összegyűjtött nedvet autolizálni hagyjak. Ezután az oldat pH-ját 4,6-ra állítják, majd tízszeres térfogatra hígítják desztillált vízzel és +4 ’C-on 2-3 óra hosszat állni hagyják a keletkező szuszpenziót. Az aktív karboxipeptidáz zöme ezalatt kicsapódik. A csapadékot báríum-hídroxiddal extrahálják pll=l 0,0-10,4-en, majd az extraktumból pH=6,5 értéken kristályosítják az enzimet, amelyet ezután még négyszer átkristélyosítanak. Az ily módon nyert készítmény további tisztítását az Indián J. Biochem. Biophys. 13, 106 (1976) közlemény írja le. Eszerint a pH=6,5-nél kicsapódó anyagot 0,2 M Ba{0H)2-ben oldják, pH-ját ecotsavval pH=7,0-re állítják és ammónium-szulfátos frakcionálással, illetve ismételt ioncserével - DEAE-cellulózon - tisztítják tovább. A sómentesitett enzim-oldatot -20 ’C-on tárolják.
A termék specifikus aktivitása hippurilL-arginin szubsztráttal mérve 102,66 egység/mg volt, ami 44-szeres tisztulásnak felel meg.
A J. Mól. Catal. 10, 253 (1981) közleményben leírtak szerint a keceke hasnyálmirigy acetonporának vizes extraktumát anunónium-szulfáttal frakcionálják, majd a 0,3-0,8 telítésnél kapott frakciót CM-Sephadex C-50 és DEAE-cellulóz kromatográfiának vetik alá. Az igy előállított termék specifikus aktivitása hippuril-L-arginin szubsztráttal mérve -82,9 egység/mg volt, ami 18,2-szeres tisztulásnak felel meg.
Mindezen eljárásoknak az a közös hátránya, hogy vagy a hasnyálmirigy sejtnedvből, vagy a szerv ac.etonporából indulnak ki. A sejtnedv összegyűjtése nehézkes és sertés hasnyálmirigy esetében - a szerv magas zsír- és nyálkatartahna miatt - gyakorlatilag megoldhatatlan. Az acetonpor készítés drága, tűz- és robbanásveszélyes oldószereket (éter, aceton) igényel, továbbá a helyi melegedés következtében károsíthatja az enzimet, csökkentve a kitermelést és a specifikus aktivitást. További hátrány, hogy a megfelelően tiszta termék csak bonyolult, nagyszámú lépésből álló műveletsorral állítható elő.
A találmány értelmében az ismert módszerek hátrányait kiküszöbölve, olyan eljárást kívánunk biztosítani a karboxipeptidáz B elkülönítésére, amely a sejtnedv gyűjtését, illetve az acetonpor készítést kiküszöbölve, egyszerűen végrehajtható műveleti lépések-24 kel biztosít megfelelő fajlagos aktivitású terméket.
Kísérleteink során azt tapasztaltuk, hogyha a sertés hasnyálmirigy homogenizátumát aulolízis után hőkezelésnek vetjük alá, majd centrifugáljuk vagy szűrjük, a felülúszót valamely egyértékű kation szervetlen savval képezett sójával két lépésben telítjük és a második telítési lépés során kapott szuszpenzióból elkülönítjük a csapadékot, majd a csapadék oldatát vízzel szemben dializáljuk, hippuril-L-arginin szubsztráttal 25 “C-on mérve minimum 70 egyaég/mg fajlagos aktivitású enzimoldathoz jutunk, amely további tisztítás nélkül, közvetlenül felhasználható immobilizált karboxipeptidáz B előállítására.
A találmány tárgya tehát új eljárás karboxipeptidáz B enzim elkülönítésére emlősök hasnyálmirigyéből. A találmány értelmében úgy járunk el, hogy az emlős hasnyálmirigy önmagában ismert módon előállított homogenizátumát 37 °C-on, 1 óra hosszat vagy 25 ’C-on 16 óra hosszat autolizáljuk, majd pH=5,0-8,5 pH-jú pufferrel 1:1 arányban hígítva 5-30 percig 50-75 ’C-on hőkezeljűk, a hőkezelt elegyet centrifugáljuk vagy szűrjük, a felüluszóhoz literenként 10-80 g aramónium-szulfáttal kicsapjuk a karboxipeptidáz B enzimet tartalmazó aktív frakciót. A centrifugálással elkülönített enzimet vízben vagy pufferoldatban oldjuk és vízzel vagy pufferoldattal szemben dializáljuk, majd lefagyasztva tároljuk.
A találmány szerinti eljárásban az emlős hasnyálmirigy autolizált homogenizátumát 1:1 arányban hígítjuk pH=5,0-8,5 (célszerűen pH=6,0) pH-jú pufferrel, majd 5-30 percig 50-75 ’C-on (előnyösen 60 ’C-on 20 percig) hőkezeljük. Ezzel a hőkezelési művelettel az elkülönítendő enzimet kísérő fehérjék nagy részét denaturáljuk. A denaturált fehérje nagyfelületű csapadék formájában válik ki a vizes oldatból és derítő hatása révén az oldatban maradt szennyezőanyagok nagy részét is magával ragadja. Ezáltal kiküszöbölhető a hasnyálmirigy acetonpor készítés nehézkes, költséges művelete.
A denaturált fehérje elkülönítése után kapott pufferes oldatból 200-320 g/1 (előnyösen 310-320 g/1) ammónium-szulfáttal kicsapjuk a szennyező fehérjék egy jelentős részét. A szennyező fehérjéket tartalmazó csapadék eltávolítása után visszamaradó felülúszóból 10-80 g/1 (célszerűen 30 g/1) ammónium-szulfáttal kicsapjuk az enzimtartalmú terméket. A kivált csapadékot vízben vagy pufferoldatban oldjuk és az oldatot önmagában ismert módon vízzel szemben dializáljuk. Az így kapott enzimtartalmú termék 25 ’C-on mért aktivitása minimálisan 70 egyaég/mg, ami körülbelül 120-szoros tisztítási hatásfoknak felel meg. Ez a termék további tisztítás nélkül, közvetlenül felhasználható például immobilizált enzimkészítmények előállításához.
A találmány szerinti eljárást az oltalmi kör korlátozása nélkül az alábbi példákban részletesen ismertetjük.
1. példa
0,25 kg sertés hasnyálmirigyet húsdarálón ledaráltunk, hozzáadtunk 250 ml 0,05 mólos Tris-HCl puffért (pH=7,0), és egy éjszakán át +4 ’C-on állni hagytuk. Másnap a szuszpenziót 37 ’C-ra melegítettük fel és 1 óra hosszat ezen a hőmérsékleten tartottuk. Ezután a szervszuszpenziót centrifugáltuk, a felülúszót 50 ’C-ra melegítettük és ezen a hőmérsékleten inkubáltuk további 30 percig, majd hozzáadtunk 2 térfogat jeges puffért és centrifugáltuk. A felülúszóhoz 42,2 g ammónium-szulfátot adtunk. Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk, a csapadékot eldobtuk, a felülúszóhoz - a pH=7,0-7,2-re állítása után - 36,1 g ammónium-szulfátol adtunk. Egy éjszakai állás után a szuszpenzíót centrifugáltuk. A csapadékot kevés hideg (+4 ’C-os) Tris-HCl pufferben (pH=7,0) feloldottuk és desztillált vízzel szemben sómenlesre dializaltuk. Dialízis után az oldatot szűrtük, majd lefagyasztottuk. Kitermelés: 343 mg karboxipeptidáz B. Specifikus aktivitás: 17,5 μπιόΐ hippuril-L-arginin hidrolízise(perc)mg fehérje.
2. példa
0,25 kg sertés hasnyálmirigyet húsdarálón ledaráltunk, hozzáadtunk 250 ml 0,05 mólos Tris-HCl puffért (pH=7,0) és egy éjszakán át +4 ’C-on állni hagytuk. Másnap a szuszpenziót 37 ’C-ra melegítettük fel és egy óra hosszat ezen a hőmérsékleten tartottuk. Ezután a szervszuszpenziót centrifugáltuk, a felülúszót 60 ’C-ra melegítettük ás ezen a hőmérsékleten inkubáltuk további 10 percig, majd hozzáadtunk 2 térfogat jeges puffért és centrifugáltuk. A felülúszóhoz 92 g ammónium-szulfátot adtunk. Mivel egy éjszakai állás alatt csapadék nem vált ki, az oldathoz a pH=7,0-7,2-re állítása után - további 78,7 g ammónium-szulfátot adtunk. Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk. A csapudékot kevés hideg (+4 ’C-os) Tris-HCl pufferben (pH=7,0) feloldottuk és desztillált vízzel szemben sómentesre dializáltuk. Dialízis után az oldatot szűrtük, majd lefagyasztottuk. Kitermelés: 295 g karboxipeptidáz B. Specifikus aktivitás: 53,1 jumól hippuril-L-arginin hidrolizise(perc)rng fehérje.
3. példa
0,25 kg sertés hasnyálmirigyet húsdarálón ledaráltunk, hozzáadtunk 250 ml 0,05 mólos Tris-HCl puffért (pH=7,0) és egy éjszakán át +4 °C-on állni hagytuk. Másnap a szuszpenziót 37 °C-ra melegítettük fel és 1 óra hosszat ezen a hőmérsékleten tartottuk. Ezután a ezervszuszpenziót centrifugáltuk, a felülúszót 60 °C-ra melegítettük és ezen a hőmérsékleten inkubálluk további 20 percig, majd hozzáadtunk 2 térfogat jeges puffért és centrifugáltuk. A felülúszóhoz 98,2 g ammónium-szulfátot adtunk. Mivel egy éjszakai állás alatt csapadék nem vált ki, az oldathoz - a pH=7,0-7,2-re állítása után - további
86,9 g ammónium-szulfátot adtunk. Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk. A csapadékot kevés hideg (+4 °C-os) Tris-HCl pufferben (pH=7,0) feloldottuk és desztillált vízzel szemben sómentesre dializáltuk. Dialízis után az oldatot szűrtük, majd lefagyasztottuk. Kitermelés: 266 mg karboxipeptidáz B. Specifikus aktivitás: 63,2 pírtól hippuril-L-arginin hidrolízise(perc)mg fehérje.
4. példa
0,25 kg sertés hasnyálmirigyet húsdarálón ledaráltunk, hozzáadtunk 250 ml 0,05 mó5 los Tris-HCl puffért (pH-7,0) és egy éjszakán át +4 “R-οπ állni hagytuk. Másnap a szuszpenziót 37 °C-ra melegítettük fel és 1 óra hosszat ezen a hőmérsékleten tartottuk. Ezután a szuszpenziót centrifugáltuk, a felül10 úszót 75 °C-ra melegítettük és ezen a hőmérsékleten inkubáltuk további 5 percig, majd hozzáadtunk 2 térfogat jeges puffért és centrifugáltuk. A felülúszóhoz 66,9 g ammónium-szulfátot adtunk. Mivel egy éjszakai állás alatt csapadék nem vált ki, az oldathoz - a pH=7,0-7,2-re állítása után - további
55,8 g ammónium-szulfátot adtunk. Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk. A csapadékot kevés hideg (+4 °C-os)
Tris-HCl pufferben (pH=7,0) feloldottuk és desztillált vízzel szemben sómentesre dializáltuk. Dialízis után az oldatot szűrtük, majd lefagyasztottuk. Kitermelés: 34 mg karboxipeptidáz B. Specifikus aktivitás: 21,6 pmól hippuril-L-arginin hidrolízise{perc)mg fehérje.
1. Táblázat
Sertés hasnyálmirigy homogenizátum hőkezelési hőmérsékletének és idejének hatása a karboxipeptidáz B aktivitására
Hőmérséklet CC) Idő (perc) Összaktivitás (*egység/kg hasnyálmirigy) ÖBSzfehérje (nig/kg hasnyálmirigy) Specifikus aktivitás (egység/mg)
50 30 23 968 1 372 17.5
60 10 62 660 1 180 53.1
20 67 260 1 064 63.2
75 5 2 932 136 21.6
* Egy egység az az enziminennyiség, amely 1,0 μ mól hippuril-L-arginin hidrolízisét katalizálja percenként pH=7,65-ön, 25 °C-on mérve.
5. példa
0,25 kg sertés hasnyálmirigyet húsdarálón ledaráltunk és egy éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagytuk. Másnap hozzáadtunk 250 ml 0,05 mólos acetát puffért (pH=5,0) és a szuszpenziót 60 °C-ra melegítettük fel és 20 percig ezen a hőmérsékleten tartottuk, majd hozzáadtunk 2 térfogat jeges vizet és centrifugáltuk. A felülúszóhoz
274,8 g ammónium-szulfátot adtunk. Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk, a csapadékot eldobtuk, a felülúszóhoz a pH=7,0-7,2-re állítása után -232,9 g ammónium-szulfátot adtunk. Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk. A csapadékot kevés hideg (+4 °C-os) Tris-HCl pufferben (pH=7,0) feloldottuk és desztillált vízzel szemben sómentesre dializáltuk. Dialízis után az oldatot szűrtük, majd lefagyasztottuk. Kitermelés: 360 mg karboxipeptidáz B. Specifikus aktivitás: 14,8 pmól hippuril-I,-arginin hidrolízise(perc)mg fehérje.
6. példa
0,25 kg sertés hasnyálmirigyet húsdará55 lón ledaráltunk és egy éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagytuk. Másnap hozzáadtunk 250 ml 0,05 mólos acetát puffért (pHz.5,5), a szuszpenziót 60 °C-ra melegítettük fel és 20 percig ezen a hőmérsékleten tartottuk, majd hozzáadtunk 2 térfogat jeges vizet és centrifugáltuk. A felülúszóhoz
261,2 g ammónium-szulfátot adtunk. Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk, a csapadékot eldobtuk, a felülúszóhoz a pH =7,0-7,2-re állítása után - 228 g ammó-48 nium-szulfátot adtunk. Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk. A csapadékot kevés hideg (+4 ’C-os) Tris-HCl pufferben (pHc7,0) feloldottuk és desztillált vízzel szemben sómentesre dializáltuk. Dialízis után az oldatot szűrtük, majd lefagyasztottuk. Kitermelés: 317 mg karboxipeptidáz B. Specifikus aktivitás: 20,3 mól hippuril-L-arginin hidrolizise(perc)mg fehérje.
7. példa
0,3 kg sertés hasnyálmirigyet húsdarálón ledaráltunk és egy éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagytuk. Másnap hozzáadtunk 300 ml 0,05 mólos foszfát puffért (pH=6,0), a szuezpenziót 60 ’C-ra melegítettük fel és 20 percig ezen a hőmérsékleten tartottuk, majd hozzáadtunk 2 térfogat jeges vizet és centrifugáltuk. A felülúszóhoz 301 g ammóniumszulfátot adtunk. Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk, a csapadékot eldobtuk, a felülúszóhoz - a pH=7,0-7.2-re állítása után - 252,6 g aminónium-szulfátot adtunk. Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk. A csapadékot kevés hideg (+4 ’C-os) Tris-HCl pufferben (pH=7,0) feloldottuk és desztillált vízzel szemben sómentesre dializáltuk. Dialízis után az oldatot szűrtük, majd lefagyasztottuk. Kitermelés: 517 mg karboxipeptidáz B. Specifikus aktivitás: 57 μ mól hippuril-L-arginin hidrolízise(perc)mg fehérje.
8. példa
0,3 kg sertés hasnyálmirigyet húsdarálón ledaráltunk és egy éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagytuk. Másnap hozzáadtunk 300 ml 0,05 mólos foszfát puffért (pH=6,5), a szuszpenziót 60 ’C-ra melegítettük fel és 20 percig ezen a hőmérsékleten tartottuk, majd hozzáadtunk 2 térfogat jeges vizet és centrifugáltuk. A felülúszóhoz 326 g aminónium-szulfátot adtunk. Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk, a csapadékot eldobtuk, a felülúszóhoz - a pH=7,0-7,2-re állítás után - 275,5 g ammónium-szulfátot adtunk. Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk. A csapadékot kevés hideg (+4 ’C-os) Tris-HCl pufferben (pH=7,0) feloldottuk és desztillált vízzel szemben sómentesre dializáltuk. Dialízis után az oldatot szűrjük, majd lefagyasztottuk. Kitermelés: 361 mg karboxipeptidáz B. Specifikus aktivitás: 43,8 pmól hippuril-L-arginin hidrolízise(perc)mg fehérje.
9. példa
0,3 kg sertés hasnyálmirigyet húsdarálón ledaráltunk és egy éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagytuk. Másnap hozzáadtunk 300 ml 0,05 mólos foszfát puffért (pH=7,0), n szuszpenziót 60 ’C-ra melegítettük fel és 20 percig ezen a hőmérsékleten turtotluk, majd hozzáadtunk 2 térfogaL jeges vizet és centrifugáltuk. A felülúszóhoz 326 g animónium-szulfátot adtunk. Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk, a csapadékot eldobtuk, a felülúszóhoz - a pH=7,0-7,2-re állítása után -272 g ammónium-szulfátot adtunk. Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk. A csapadékot kevés hideg (+4 ’C-os) Tris-HCl pufferben (pH=7,0) feloldottuk ós desztillált vízzel szemben sómentésre dializáltuk. Dialízis után az oldatot szűrtük, majd lefagyasztottuk. Kitermelés: 488 mg karboxipeptidáz B. Specifikus aktivitás:
39,9 pmól hippuril-L-arginin hidrolízise(porc)mg fehérje.
10. példa
0,25 kg sertés hasnyálmirigyet húsdarálón ledaráltunk és egy éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagytuk. Másnap hozzáadtunk 250 ml 0,05 mólos Tris-HCl puffért (pH=7,5), a szuszpenziót 60 ’C-ra melegítettük fel és 20 percig ezen a hőmérsékleten tartottuk, majd hozzáadtunk 2 térfogat jeges vizet és centrifugáltuk. A felülúszóhoz 247 g ammónium-szulfátot adtunk. Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk, a csapadékot eldobtuk, a felülúszóhoz - a pH=7,0-7,2-re állítása után -202 g ammónium-szulfátot adtunk. Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk. A csapadékot kevés hideg (+4 ’C-os) Tris-HCl pufferben (pH-'7,0) feloldottuk és desztillált vízzel szemben sómentesre dializáltuk. Dialízis után az oldatot szűrtük, majd lefagyasztottuk. Kitermelés: 695 mg karboxipeptidáz B. Specifikus aktivitás: 17,4 pmól hippuril-L-arginin hidrolízise (perc) mg fehérje.
11. példa
0,25 kg sertés hasnyálmirigyet húsdarálón ledaráltunk és egy éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagytuk. Másnap hozzáadtunk 250 ml 0,05 mólos Tris-HCl puffért (pH=8,0), a szuszpenziót 60 “C-ra melegítettük fel és 20 percig ezen a hőmérsékleten tartottuk, majd hozzáadtunk 2 térfogat jeges vizet és centrifugáltuk. A felülúszóhoz 255 g ammónium-szulfátot adtunk. Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk, a csapadékot eldobtuk, a felülúszóhoz - a pH=7,0-7,2-re állítása után - 198 g ammónium-szulfátot adtunk. Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk. A csapadékot kevés hideg (+4 ’C-os) Tris-HCl pufferben (pH=7,0) feloldottuk és desztillált, vízzel szemben sómentesre dializáltuk. Dialízis után
-510 az oldatot szűrtük, majd lefagyasztottuk. Kitermelés: 552 mg knrboxipeplidúz B. Specifikus aktivitás: 14,3 pmól hippuril-L-arginin hidrolizise(perc)mg fehérje.
12. példa
0,25 kg sertés hasnyálmirigyet húsdarálón ledaráltunk és egy éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagytuk. Másnap hozzáadtunk 250 ml 0,05 mólos Tris-HCl puffért (pH=8,5), a szuszpenziót 60 ’C-ra melegítettük fel és 20 percig ezen a hőmérsékleten tartottuk, majd hozzáadtunk 2 térfogat jeges vizet és centrifugáltuk. A felüluszóhoz 217 g ammónium-szulfálot adtunk. Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk, a csapadékot eldobtuk, a felühiszóhoz - a pH-7,0-7,2-re állítása után - 197 g ammónium-szulfátot adtunk. Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk. A csapadékot kevés hideg (+4 ’C-os) Tris-HCl pufferben (pH=7,0) feloldottuk és desztillált vízzel szemben sómentesre dializáltuk. Dialízis után az oldatot szűrtök, majd lefagyasztottuk. Kitermelés: 1209 mg karboxipeptidáz B. Specifikus aktivitás: 6,4 ptnól hippuril-L-arginin hidrolízÍ8e(perc)mg fehérje.
2. Táblázat
Sertés hasnyálmirigy homogenizátum hőkezelésénél (60 ’C, 20 porc) alkalmazott puffer pH-jának hutása a karboxipeptidáz B aktivitására
pH Összaktivitás (egység/kg hasnyálmirigy) Összfehérje (mg/kg hasnyálmirigy) Specifikus aktivitás (egység/mg)
5.0 21 348 1 440 14.8
5.5 25 808 1 268 20.3
6.0 98 333 1 724 57.0
6.5 52 767 l 204 43.8
7.0 64 882 1 625 39.9
7.5 48 400 2 780 17.4
8.0 · 31 632 2 210 14.3
8.5 30 753 4 836 6.4
13. példa
0,25 kg sertés hasnyálmirigyet húsdarálón ledaráltunk és egy éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagytuk. Másnap hozzáadtunk 250 ml 0,05 mólos foszfát puffért (pH=6,0), a szuszpenziót 60 ’C-ra melegítettük fel és 20 percig ezen a hőmérsékleten tartottuk, majd hozzáadtunk 2 térfogat jeges vizet és centrifugáltuk. A felülúszót ammónium-szulfáttal 340 g/1 koncentrációig telítettük (408 g). Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk, a csapadékot eldobtuk, a felülúszót ammónium-szulfáttal 370 g/1 koncentrációig telítettük (41,1 g). Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk. A csapadékot kevés hideg (+4 ’C-os) TrisHCl pufferben (pH=7,0) feloldottuk és desztillált vízzel szemben sómentesre dializáltuk. Dialízis után az oldatot szűrtük, majd lefagyasztottuk. Kitermelés: 95 mg karboxipeptidáz B. Specifikus aktivitás: 56,2 mól hippuril-L-arginin hidrolízise) perc/tng fehérje.
14. példa
0,2 kg sertés hasnyálmirigyet húsdarálón ledaráltunk és egy éjszakán át állni hagytuk. Másnap hozzáadtunk 200 ml 0,05 mólos foszfát puffért (pH=6,0), a szuszpenziót
60 ’C-ra melegítettük fel és 20 percig ezen a hőmérsékleten tartottuk, majd hozzáadtunk 2 térfogat jeges vizet és centrifugáltuk. A felülúszót ammónium-szulfáttal 330 g/1 koncentrációig telítettük (330 g). Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk, a csapadékot eldobtuk, a felülúszót ammónium-szulfáttal 370 g/1 koncentrációig telítettük (44,8 g). Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk. A csapadékot kevés hi50 deg ( + 4 ’C-os) Tris-HCl pufferben (pH=7,0) feloldottuk és desztillált vízzel szemben sómentesre dializáltuk. Dialízis után az oldatot szűrtük, majd lefagyasztottuk. Kitermelés: 62 mg karboxipeptidáz B. Specifikus aktivi55 tás.- 89,0 Aimól hippuril-L-arginin hidrolízise'perc)mg fehérje.
15. példa
0,25 kg sertés hasnyálmirigyet húsdarálón ledaráltunk és egy éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagytuk. Másnap hozzáadtunk 250 ml 0,05 mólos foszfát puffért (pH=6,0), a szuszpenziót 60 ’C-ra melegitet-612 lük fel éa 20 percig ezen a hőmérsékleten tartottuk, majd hozzáadtunk 2 térfogat jeges vizet éa centrifugáltuk. A felülúszót ammónium-szulfáttal 320 g/1 koncentrációig telítettük (386 g). Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk, a csapadékot eldobtuk, a felülúszót ammónium-szulfáttal 370 g/1 koncentrációig telítettük (65 g). Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk. A csapadékot kevés hideg (+4 °C-os) Tris-HCÍ pufferben (pH=7,0) feloldottuk és desztillált vízzel szemben sómentesre dializáltuk. Dialízis után az oldatot szűrtük, majd lefagyasztottuk. Kitermelés: 106,5 mg karboxipeptidáz B. Specifikus aktivitás: 95,5 pmól hippuril-Larginin hidrolízise(perc)mg fehérje.
16. példa
0,2 kg sertés hasnyálmirigyet húsdarálón ledaráltunk és egy éjszakán ót szobahőmérsékleten állni hagytuk. Másnap hozzáadtunk 200 ml 0,05 mólos foszfát puffért (pH=6,0), a szuszpenziót 60 °C-ra melegítettük fel ée 20 percig ezen a hőmérsékleten tartottuk, majd hozzáadtunk 2 térfogat jeges vizet és centrifugáltuk. A felülúszót ammónium-szulfáttal 310 g/1 koncentrációig telítettük (310 g). Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk, a csapadékot eldobtuk, a felülúszót ammónium-szulfáttal 370 g/1 koncentrációig telítettük (67,2 g). Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk. A csapadékot kevés hideg (+4 °C-os) Tris-HCÍ pufferben (pH=7,0) feloldottuk és desztillált vízzel szemben sómentesre dializáltuk. Dialízis után az oldatot szűrtük, majd lefagyasztottuk. Kitermelés: 135 mg karboxipeptidáz B. Specifikus aktivitás: 44,3 μ mól hippuril-L-arginin hidrolízise(perc)mg fehérje.
17. példa
0,25 kg sertés hasnyálmirigyet húsdarálón ledaráltunk és egy éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagytuk. Másnap hozzáadtunk 250 ml 0,05 mólos foszfát puffért (pH=6,0), a szuszpenziót 60 °C-ra melegítettük fel és 20 percig ezen a hőmérsékleten tartottuk, majd hozzáadtunk 2 térfogai jeges vizet és centrifugáltuk. A felülúszót ammónium-szulfáttal 320 g/1 koncentrációig telítettük (386,4 g). Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk, a csapadékot eldobtuk, a felülúszót ammónium-szulfáttal 360 g/1 koncentrációig telítettük (52 g). Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk. A csapadékot kevés hideg (+4 °C-oe) Tris-HCÍ pufferben (pH=7,0) feloldottuk és desztillált vízzel szemben sómentesre dializáltuk. Dialízis után az oldatot szűrtük, majd lefagyasztottuk. Kitermelés: 76 mg karboxipeptidáz B. Specifikus aktivitás: 123,8 íj mól hippuril-I,-nrginin hidrolízise(perc)mg fehérje.
18. példa
0,25 kg sertés hasnyálmirigyet húsdarálón ledaráltunk és egy éjszakán ót szobahőmérsékleten állni hagytuk. Másnap hozzáadtunk 250 ml 0,05 mólos foszfát puffért (pH=6,0), a szuszpenziót 60 °C-ra melegítettük fel és 20 percig ezen a hőmérsékleten tartottuk, majd hozzáadtunk 2 térfogat jeges vizet és centrifugáltuk. A felülúezót ammónium-szulfáttal 320 g/1 koncentrációig telítettük (386,4 ). Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk, a csapadékot eldobtuk, a felülúszót ammónium-szulfáttal 350 g/1 koncentrációig telítettük (39 g). Egy éjszakai állás után a szuszpenziói centrifugáltuk. A csapadékot kevés hideg (+4 °C-os) Tris-HCl pufferben (pH=7,0) feloldottuk és desztillált vízzel szemben sómentesre dlalizáltuk. Dialízis után az oldatot szűrtük, majd lefagyasztottuk. Kitermelés: 45 mg karboxipeptidáz B. Specifikus aktivitás: 286,7 μ mól hippuril-L-arginin hidrolízise(perc)mg fehérje·
19. példa
0,25 kg sertés hasnyálmirigyet húsdarálón ledaráltunk és egy éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagytuk. Másnap hozzáadtunk 250 ml 0,05 mólos foszfát puffért (pH=6,0), a szuszpenziót 60 °C-ra melegítettük fel és 20 percig ezen a hőmérsékleten tartottuk, majd hozzáadtunk 2 térfogat jeges vizet és centrifugáltuk. A felülúszót ammónium-szulfáttal 320 g/1 koncentrációig telítettük (386,4 g). Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk, a csapadékot eldobtuk, a felülúszót ammónium-szulfáttal 340 g/1 koncentrációig telítettük (26 g). Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk. A csapadékot kevés hideg (+4 °C-os) Tris-HCl pufferben (pH=7,0) feloldottuk és desztillált vízzel szemben sómentesre dializáltuk. Dialízis után az oldatot szűrtük, majd lefagyasztottuk. Kitermelés: 25,5 mg karboxipeptidáz B. Specifikus aktivitás: 195,8 pmól hippuril-L-urginln hidrolízise(perc)mg fehérje.
-714
3. Táblázni
Az ammónium-szulfáttal történő frakcionálás hatása a karboxipoptidáí B aktivitására
Ammónium-szulfát. Összaktiv itás Összfehér je Specifikus aktivitás
koncentráció (egység/kg (mg/kg (egység/mg)
<g/D hasnyálmirigy) haanyálmirigy)
1. telítés 2. telítés
340 370 21 373 380 56.2
330 370 27 670 310 89.0
320 370 40 697 426 95.5
310 370 29 914 675 44.3
320 360 37 629 304 123.8
320 350 51 610 180 286.7
320 340 19 977 102 195.8

Claims (1)

  1. Szíjbariiilnii igértyporit
    1 kg marha hasnyálmirigyet húsdarálón ledaráltunk és egy éjszakán át szobahőmér- 25 eékleten állni hagytuk. Másnap hozzáadtunk 1 liter 0,05 mólos foszfát puffért (pH=6,0), a szuszpenziót 60 ’C-ra melegítettük fel, és 20 percig ezen a hőmérsékleten tartottuk, majd hozzáadtunk 2 térfogalrész (3,8 liter) jeges 30 vizet és centrifugáltuk. A felűlúszót ammónium-szulfáttal 320 g/1 koncentrációig telítettük (1,6 kg). Egy éjszakai állás után a szuszpenziói centrifugáltuk, a csapadékot eldobtuk, a felűlúszót atumónium-szulfáttal 35 350 g/1 koncentrációig telítettük (165 g). Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk. A csapadékot kevés hideg (+4 °C-os) Tris-HCl pufferben (pH=7,0) feloldottuk és desztillált vízzel szemben sómentesre dializál- 40 tűk. Dialízis után az oldatot szűrtük, majd 406 mg nátrium-kloridot adtunk hozzá és lefagyasztottuk. Kitermelés: 238,7 mg karboxipeptidáz B. Specifikus aktivitás: 15,4 pmól hippuril-L-arginin hidrolízíse(perc)mg fehér- 45 je·
    Eljárás karboxipeptidáz B enzim elkülönítésére emlősök hasnyálmirigyéből, homogenizátum-készít.és és autolízis után, azzal jellemezve, hogy az autolízótumot 5,0-8,5, célszerűen 6,0-7,0 pll-ju pufferrel 1:1 arányban hígítjuk és 50-75 ’C-on célszerűen 50-65 ’Con 5-30 percig, célszerűen 15-25 percig hőkezeljük, majd az így nyert elegyet centrifugáljuk vagy szűrjük, a felülúszóhoz literenként 200-320 g, célszerűen 300-320 g ammónium-szulfátot adunk, az adott esetben kapott szuszpenziót centrifugáljuk, a nyert folyadékhoz literenként 10-80 g, célszerűen 25-35 g ammónium-szulfátot adva kicsapjuk az aktív karboxipeptidáz B enzimet tartalmazó frakciót, majd ezt a csapadékot centrifugáljuk, az így nyert enzimet vízben vagy pufferoldatban oldjuk és vízzel vagy pufferoldattal szemben dializáljuk, végül a nyert terméket lefagyasztjuk.
    ábra nélkül
HU832469A 1983-07-11 1983-07-11 Process for the isolation of carboxypeptidase b enzyme from mammal pancreas HU190129B (en)

Priority Applications (11)

Application Number Priority Date Filing Date Title
HU832469A HU190129B (en) 1983-07-11 1983-07-11 Process for the isolation of carboxypeptidase b enzyme from mammal pancreas
CS853128A CS252482B2 (cs) 1983-07-11 1984-03-29 Způsob imobilizace enzymu karboxypeptidázy
CS842361A CS252472B2 (en) 1983-07-11 1984-03-29 Method of b-carboxypeptidase's enzyme insulation
US06/595,767 US4650762A (en) 1983-07-11 1984-04-02 Isolation of carboxypeptidase B enzyme
DE19843412669 DE3412669A1 (de) 1983-07-11 1984-04-04 Verfahren zur isolierung von carboxypeptidase b aus dem pankreas von saeugetieren und zur immobilisierung derselben
RO84114181A RO88619A (ro) 1983-07-11 1984-04-05 Procedeu pentru izolarea carboxipeptidazei
DD84270845A DD222632A5 (de) 1983-07-11 1984-04-06 Verfahren zur immobilisierung von carboxypeptidase-b-enzym
DD84261731A DD220334A5 (de) 1983-07-11 1984-04-06 Verfahren zur isolierung des carboxypeptidase b enzyms aus dem pankreas von saeugetieren
SU843731150A SU1487817A3 (ru) 1983-07-11 1984-04-16 Способ выделения карбоксипепти|дазы в из поджелудочной железы млекопитающих животных
CU832469/83A CU21674A3 (en) 1983-07-11 1984-07-11 Procedure for the carboxipeptidase b enzymes isolation of mamals pancreas and its immovilization
SU874028800A RU1769763C (ru) 1983-07-11 1987-01-13 Cпocoб пoлучehия иmmoбилизobahhoй kapбokcипeпtидaзы - b

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
HU832469A HU190129B (en) 1983-07-11 1983-07-11 Process for the isolation of carboxypeptidase b enzyme from mammal pancreas

Publications (2)

Publication Number Publication Date
HUT34234A HUT34234A (en) 1985-02-28
HU190129B true HU190129B (en) 1986-08-28

Family

ID=10959530

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU832469A HU190129B (en) 1983-07-11 1983-07-11 Process for the isolation of carboxypeptidase b enzyme from mammal pancreas

Country Status (9)

Country Link
US (1) US4650762A (hu)
CS (1) CS252472B2 (hu)
CU (1) CU21674A3 (hu)
DD (2) DD220334A5 (hu)
DE (1) DE3412669A1 (hu)
HU (1) HU190129B (hu)
RO (1) RO88619A (hu)
RU (1) RU1769763C (hu)
SU (1) SU1487817A3 (hu)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5278284A (en) * 1992-05-14 1994-01-11 Miller Brewing Company Protein purification method
IL116696A (en) * 1995-01-25 1999-08-17 Bio Technology General Corp Production of enzymatically active recombinant carboxypeptidase b
PL325017A1 (en) * 1995-08-16 1998-07-06 Zeneca Ltd Chemical compounds

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3260654A (en) * 1963-03-22 1966-07-12 Ormonoterapia Richter Spa Method for the preparation of a pancreas extract having a high proteolytic activity
FR3071M (fr) * 1963-10-18 1965-01-18 Centre Nat Rech Scient Nouvelles protéases pancréatiques, utilisables notamment en gastro-entérologie.
DK124483B (da) * 1967-12-04 1972-10-23 Bayer Ag Fremgangsmåde til rensning af carboxypeptidase B.
JPS57150384A (en) * 1981-03-12 1982-09-17 Eisai Co Ltd Carboxypeptidase ar and its preparation
US4532214A (en) * 1982-06-03 1985-07-30 Reanal Finomvegyszergyar Method for isolation of aminoacylase

Also Published As

Publication number Publication date
US4650762A (en) 1987-03-17
DD222632A5 (de) 1985-05-22
RO88619A (ro) 1986-02-28
CS252472B2 (en) 1987-09-17
DD220334A5 (de) 1985-03-27
CS236184A2 (en) 1987-01-15
CU21674A3 (en) 1987-10-12
DE3412669A1 (de) 1985-01-24
SU1487817A3 (ru) 1989-06-15
RU1769763C (ru) 1992-10-15
HUT34234A (en) 1985-02-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US3389133A (en) Process for isolating and purifying soluble ribonucleic acid
KR20190139633A (ko) 어류 정액 및 정소에서 피디알엔을 추출하는 방법
US4400471A (en) Preparation and crystallization of Fraction I protein from plant sources
US3451996A (en) Method for the preparation of heparin
US5061622A (en) Process for the production of κ-casein glycomacropeptide
US4334024A (en) Preparation and crystallization of fraction I protein from plant sources
US4793996A (en) Method of making soybean extract inhibitor
US4526717A (en) Polypeptide having an action on the immunological system, processes for its isolation and purification, its use, agents containing this compound, and its cleavage products, their use and agents containing these products
US2808362A (en) Preparation of hyaluronidase
HU190129B (en) Process for the isolation of carboxypeptidase b enzyme from mammal pancreas
US3813289A (en) Orgotein from red blood cells
US3677901A (en) Process for the production of glycerokinase
US4762792A (en) Cholesterol-rich fraction useful in culture media and process of producing same
US4495096A (en) Process for producing and obtaining anaphylatoxin-and cocytotaxin-containing leucotaxine preparations and of anaphylatoxin and cocytotaxin proteins in molecularly homogeneous, biologically active form
US6121421A (en) Methods for isolating recombinant β-casein
US2954321A (en) Process for preparing heparin
US3016331A (en) Purification of heparin
US2769749A (en) Method of extracting and purifying acylase
US2587924A (en) Methods of producing heparin
US3627642A (en) Lysozyme salts
SU578836A3 (ru) Способ получени орготеина
US2794800A (en) Preparation of antitryptic substance from soybean
US2459139A (en) Process for extraction and purification of subtilin
US3511755A (en) Synthesis of l-asparaginase
Powning et al. Studies on the digestive proteinase of clothes moth larvae (Tineola bisselliella)—I: Partial purification of the proteinase

Legal Events

Date Code Title Description
HU90 Patent valid on 900628
HMM4 Cancellation of final prot. due to non-payment of fee