FR3012978A1 - BIOCOMPATIBLE FILTER AND METHOD FOR MANUFACTURING BIOCOMPATIBLE FILTER - Google Patents

Abstract

Filtre (4) biocompatible, notamment pour isoler et cultiver des cellules contenues dans un échantillon liquide, comprenant une membrane de filtration (8) s'étendant sensiblement selon un plan d'extension et comportant une face d'entrée de liquide, une face de sortie de liquide et une pluralité de pores de filtration traversants. La membrane de filtration (8) est formée en une composition biocompatible réticulée. Le filtre (4) comporte un support de rigidification (15) sur lequel est montée la membrane de filtration (8).Biocompatible filter (4), in particular for isolating and culturing cells contained in a liquid sample, comprising a filtration membrane (8) extending substantially in an extension plane and having a liquid inlet face, a face of liquid outlet and a plurality of through filtration pores. The filtration membrane (8) is formed of a crosslinked biocompatible composition. The filter (4) comprises a stiffening support (15) on which the filtration membrane (8) is mounted.

Description

L'invention concerne le domaine des filtres biocompatible pour isoler des cellules contenues dans un échantillon liquide et des procédés pour fabriquer de tels filtres biocompatibles. Plus précisément, l'invention concerne le domaine des filtres biocompatibles, notamment pour isoler et cultiver des cellules contenues dans un échantillon liquide, comprenant une membrane de filtration s'étendant sensiblement selon un plan d'extension et comportant une face d'entrée de liquide et une face de sortie de liquide, et une pluralité de pores de filtration traversants reliant chacun la face d'entrée de liquide à la face de sortie de liquide au moyen d'une surface intérieure de pore, les pores de filtration comportant chacun une ouverture d'entrée à l'endroit de la face d'entrée de liquide et une ouverture de sortie à l'endroit de la face de sortie de liquide, le filtre comprenant en outre un support de rigidification sur lequel est montée la membrane de filtration. L'invention est tout spécialement destinée à isoler et cultiver des cellules rares contenues dans un échantillon de liquide biologique, tel que du sang, du liquide céphalo-rachidien ou un autre épanchement ou liquide biologique. Elle s'applique ainsi particulièrement à l'isolement de cellules rares dans un échantillon sanguin, par exemple des cellules tumorales ou des cellules foetales en général et trophoblastiques en particulier présentes dans un échantillon sanguin prélevé sur un individu. L'échantillon sanguin peut auparavant avoir été dilué dans un tampon liquide approprié comme cela est connu de l'état de l'art. Du fait de leur rareté particulière de telles cellules rares sont présentes en quantités extrêmement faibles dans les échantillons sanguins étudiés, typiquement seulement quelques cellules par échantillon voir une cellule unique, et ce malgré les volumes importants des échantillons sanguins en question, compris entre un et cinquante millilitres. 25 II est donc souhaitable de pouvoir cultiver les cellules isolées sur le filtre, en particulier dans des milieux adaptés et en présence de facteurs de croissance adéquats, de sorte à pouvoir étudier lesdites cellules et/ou amplifier la quantité de matériau cellulaire récupéré. Il est également souhaitable de minimiser le plus possible les bruits de mesure lors de l'analyse ultérieure du résidu de filtration accumulé sur le filtre. 30 Par « étudier lesdites cellules », on entend en particulier la réalisation d'examen de laboratoires de routine ainsi que l'observation des cellules sous microscope, par exemple suite à l'application de techniques de biologie moléculaire, de cytogénétique ou de FISH (acronyme de « Fluorescence In Situ Hybridization »), pour le diagnostic d'anomalies génétiques dans des cellules tumorales ou trophoblastiques. 35 Le document FR 2 883 488 dévoile un filtre poreux permettant l'isolation de cellules rares qui comporte une membrane en polycarbonate microporeuse montée dans un support rigide en PVC. Ce filtre ne permet cependant pas la culture des cellules isolées de sorte à pouvoir les étudier. Selon un premier aspect, l'invention a pour objet un filtre biocompatible, notamment pour isoler et cultiver des 40 cellules contenues dans un échantillon liquide, comprenant une membrane de filtration s'étendant sensiblement selon un plan d'extension et comportant une face d'entrée de liquide et une face de sortie de liquide, et une pluralité de pores de filtration traversants reliant chacun la face d'entrée de liquide à la face de sortie de liquide au moyen d'une surface intérieure de pore, les pores de filtration comportant chacun une ouverture d'entrée à l'endroit de la face d'entrée de liquide et une ouverture de sortie à l'endroit de la face de sortie de liquide, la 45 membrane de filtration étant formée en une composition biocompatible réticulée, et le filtre comportant un support de rigidification sur lequel est montée la membrane de filtration. 20 Selon une réalisation, le support de rigidification est formé en une composition biocompatible réticulée. Selon une réalisation, la membrane de filtration et le support de rigidification sont une unique pièce formée en une composition biocompatible réticulée, de sorte à constituer un ensemble rigide autoporteur. Selon une réalisation, la composition biocompatible réticulée comprend au moins un composant biocompatible photoréticulé de manière covalente.The invention relates to the field of biocompatible filters for isolating cells contained in a liquid sample and methods for making such biocompatible filters. More specifically, the invention relates to the field of biocompatible filters, in particular for isolating and culturing cells contained in a liquid sample, comprising a filtration membrane extending substantially in an extension plane and having a liquid inlet face. and a liquid outlet face, and a plurality of through-filtering pores each connecting the liquid inlet face to the liquid outlet face by means of an inner pore surface, the filtration pores each having an opening inlet to the location of the liquid inlet face and an outlet opening at the location of the liquid outlet face, the filter further comprising a stiffening support on which the filtration membrane is mounted. The invention is especially intended to isolate and cultivate rare cells contained in a sample of biological fluid, such as blood, cerebrospinal fluid or other effusion or biological fluid. It is thus particularly applicable to the isolation of rare cells in a blood sample, for example tumor cells or fetal cells in general and trophoblastic cells in particular present in a blood sample taken from an individual. The blood sample may previously have been diluted in a suitable liquid buffer as is known from the state of the art. Because of their particular rarity, such rare cells are present in extremely small amounts in the blood samples studied, typically only a few cells per sample or single cell, despite the large volumes of the blood samples in question, ranging from one to fifty. milliliters. It is therefore desirable to be able to grow the isolated cells on the filter, especially in suitable media and in the presence of adequate growth factors, so that the cells can be studied and / or the amount of cellular material recovered can be increased. It is also desirable to minimize the measurement noise during subsequent analysis of the filter residue accumulated on the filter. By "studying said cells" is meant in particular the carrying out of routine laboratory examination as well as the observation of the cells under a microscope, for example following the application of molecular biology, cytogenetics or FISH techniques ( acronym for "Fluorescence In Situ Hybridization"), for the diagnosis of genetic abnormalities in tumor or trophoblastic cells. FR 2 883 488 discloses a porous filter for the isolation of rare cells which comprises a microporous polycarbonate membrane mounted in a rigid PVC support. This filter, however, does not allow the culture of isolated cells so that they can be studied. According to a first aspect, the subject of the invention is a biocompatible filter, in particular for isolating and cultivating cells contained in a liquid sample, comprising a filtration membrane extending substantially in an extension plane and comprising a surface of a liquid inlet and a liquid outlet face, and a plurality of through-filtering pores each connecting the liquid inlet face to the liquid outlet face by means of an inner pore surface, the filtration pores comprising each having an inlet opening at the location of the liquid inlet face and an outlet opening at the location of the liquid outlet face, the filter membrane being formed of a cross-linked biocompatible composition, and the filter comprising a stiffening support on which is mounted the filtration membrane. In one embodiment, the stiffening support is formed of a crosslinked biocompatible composition. According to one embodiment, the filtration membrane and the stiffening support are a single piece formed of a crosslinked biocompatible composition, so as to constitute a self-supporting rigid assembly. In one embodiment, the crosslinked biocompatible composition comprises at least one biocompatible component covalently photocrosslinked.

Selon une réalisation, le composant biocompatible photoréticulé de manière covalente est un polyéthylène glycol. Selon une réalisation, la composition biocompatible réticulée comprend au moins un composant biocompatible réticulé ioniquement.In one embodiment, the biocompatible component covalently photocrosslinked is a polyethylene glycol. In one embodiment, the crosslinked biocompatible composition comprises at least one biocompatible ionically crosslinked component.

Selon une réalisation, le composant biocompatible réticulé ioniquement est choisi parmi un oligosaccharide, un polysaccharide et un collagène réticulé. Selon une réalisation, le composant biocompatible réticulé ioniquement est choisi parmi de l'alginate et du saccharose.According to one embodiment, the biocompatible ionically crosslinked component is chosen from an oligosaccharide, a polysaccharide and a crosslinked collagen. In one embodiment, the biocompatible ionically crosslinked component is selected from alginate and sucrose.

Selon une réalisation, le support de rigidification entoure circonférentiellement la membrane de filtration dans le plan d'extension. Selon une réalisation, la face d'entrée de liquide et la face de sortie de liquide de la membrane de filtration présentent chacune une forme générale surfacique plate, sont sensiblement parallèles entre elles et sont séparées par une épaisseur de la membrane, mesurée selon une direction axiale perpendiculaire à la face d'entrée de liquide et la face de sortie de liquide et le support de rigidification présente un encombrement axial, mesuré selon la direction axiale, supérieur à l'épaisseur de la membrane.In one embodiment, the stiffening support circumferentially surrounds the filtration membrane in the extension plane. According to one embodiment, the liquid inlet face and the liquid outlet face of the filtration membrane each have a generally planar surface shape, are substantially parallel to each other and are separated by a thickness of the membrane, measured in one direction. axial axis perpendicular to the liquid inlet face and the liquid outlet face and the stiffening support has an axial size, measured in the axial direction, greater than the thickness of the membrane.

Selon une réalisation, l'encombrement axial du support est sensiblement compris entre cent micromètres et un millimètre et de préférence de l'ordre de cinq cent micromètres. Selon une réalisation, l'épaisseur de la membrane est sensiblement comprise entre vingt et soixante-cinq micromètres et de préférence entre vingt et trente micromètres.According to one embodiment, the axial size of the support is substantially between one hundred microns and one millimeter and preferably of the order of five hundred micrometers. In one embodiment, the thickness of the membrane is substantially between twenty and sixty-five microns and preferably between twenty and thirty microns.

Selon une réalisation, le support de rigidification présente une forme générale en anneau circulaire ou polygonal ayant un encombrement transversal intérieur sensiblement compris entre cinq et dix millimètres et un encombrement transversal extérieur sensiblement compris entre dix et vingt millimètres.According to one embodiment, the stiffening support has a general shape in circular or polygonal ring having an internal transverse bulk substantially between five and ten millimeters and an outer transverse bulk substantially between ten and twenty millimeters.

Selon une réalisation, la face d'entrée de liquide et la face de sortie de liquide de la membrane de filtration présentent chacune une forme générale de disque ou de polygone ayant un encombrement transversal sensiblement compris entre cinq et dix millimètres. Selon une réalisation, le support de rigidification comporte un revêtement adhésif inactif, en particulier une colle activable par pression ou une colle recouverte d'une membrane de protection détachable, de façon à permettre un encollage ultérieur du support de rigidification sur un support d'observation.According to one embodiment, the liquid inlet face and the liquid outlet face of the filtration membrane each have a general disc or polygon shape having a transverse bulk substantially between five and ten millimeters. According to one embodiment, the stiffening support comprises an inactive adhesive coating, in particular a pressure-activatable adhesive or an adhesive coated with a detachable protective membrane, so as to allow a subsequent sizing of the stiffening support on an observation support .

Selon une réalisation, une dimension maximale de l'ouverture de sortie de chaque pore de filtration est supérieure à une dimension maximale de l'ouverture d'entrée dudit pore.According to one embodiment, a maximum dimension of the outlet opening of each filter pore is greater than a maximum dimension of the inlet opening of said pore.

Selon un deuxième premier aspect, l'invention a pour objet un dispositif de filtration, notamment pour isoler des cellules contenues dans un échantillon liquide, comportant un filtre tel que décrit ci-avant, dans lequel le filtre est monté, par son support de rigidification, dans le dispositif de filtration, entre un moyen de fourniture de liquide du dispositif de filtration, apte à fournir du liquide d'un échantillon de liquide à l'endroit de la face d'entrée de liquide de la membrane de filtration, d'une part, et un moyen d'absorption de liquide du dispositif de filtration, apte à absorber du liquide d'un échantillon de liquide à l'endroit de la face de sortie de liquide de la membrane de filtration, d'autre part. Selon un deuxième premier aspect, l'invention a pour objet un procédé de fabrication d'un filtre autoporteur biocompatible dans lequel : - on dispose d'un masque plan transparent comportant un réseau de motifs optiques, - on dispose une résine photosensible fluide sur le masque, - on forme un moule primaire comportant des motifs en creux par une illumination inclinée/rotative de la résine photosensible sur le masque, - on dispose sur le moule primaire un polymère à haute perméabilité au gaz fluide, - on forme un moule secondaire comportant des motifs en saillie par une réticulation du polymère à haute perméabilité au gaz sur le moule primaire, - on dispose le moule secondaire dans une enceinte d'aspiration en regard d'un contre moule, - on applique une dépression de gaz à l'enceinte d'aspiration et on injecte dans l'enceinte d'aspiration, entre le moule secondaire et le contre moule, une composition biocompatible réticulable, de sorte à disposer la composition biocompatible réticulable en contact intime avec les motifs en saillie du moule secondaire, - on forme une membrane de filtration d'un filtre biocompatible par réticulation de la composition biocompatible réticulable entre le moule secondaire et le contre moule, et - on forme un support de rigidification du filtre biocompatible sur lequel est montée la membrane de filtration.According to a second first aspect, the subject of the invention is a filtration device, in particular for isolating cells contained in a liquid sample, comprising a filter as described above, in which the filter is mounted, by its stiffening support. in the filtration device, between a liquid supply means of the filtration device, adapted to supply liquid from a liquid sample at the location of the liquid inlet face of the filtration membrane, a part, and a liquid absorption means of the filtration device, adapted to absorb liquid from a liquid sample at the location of the liquid outlet face of the filtration membrane, on the other hand. According to a second first aspect, the subject of the invention is a method of manufacturing a biocompatible self-supporting filter in which: a transparent plane mask comprising an array of optical patterns is available; mask, - a primary mold is formed comprising recessed patterns by an inclined / rotational illumination of the photosensitive resin on the mask, - a polymer with a high permeability to the fluid gas is placed on the primary mold, - a secondary mold comprising protruding patterns by a crosslinking of the high gas permeability polymer on the primary mold, - the secondary mold is arranged in a suction chamber opposite a counter mold, - a vacuum is applied to the enclosure suction and injected into the suction chamber, between the secondary mold and the counter mold, a crosslinkable biocompatible composition, so as to have the bioco composition crosslinkable mpatible in intimate contact with the projecting patterns of the secondary mold, - is formed a filter membrane of a biocompatible filter by crosslinking the crosslinkable biocompatible composition between the secondary mold and the counter mold, and - a stiffening support is formed biocompatible filter on which is mounted the filtration membrane.

Selon une réalisation, on forme la membrane de filtration et le support de rigidification du filtre biocompatible en une unique pièce constituant un ensemble rigide autoporteur, par réticulation de la composition biocompatible réticulable entre le moule secondaire et le contre moule. Selon une réalisation, on forme le contre moule par réticulation d'un polymère à haute perméabilité au gaz fluide.According to one embodiment, forming the filter membrane and the stiffening support of the biocompatible filter in a single piece constituting a self-supporting rigid assembly, by crosslinking the crosslinkable biocompatible composition between the secondary mold and the counter mold. According to one embodiment, the counter mold is formed by crosslinking a polymer with a high permeability to the fluid gas.

Selon une réalisation, le polymère à haute perméabilité au gaz fluide est un siloxane. Selon une réalisation, le siloxane est le polydiméthylsiloxane.In one embodiment, the polymer with high permeability to the fluid gas is a siloxane. In one embodiment, the siloxane is polydimethylsiloxane.

Selon une réalisation, la composition biocompatible réticulable comprend au moins un composant biocompatible photoréticulable de manière covalente. Selon une réalisation, le composant biocompatible photoréticulable de manière covalente est un polyéthylène glycol.45 Selon une réalisation, on réticule la composition biocompatible réticulable par une illumination par rayonnements ultraviolets. Selon une réalisation, la composition biocompatible réticulable comprend au moins un composant biocompatible réticulable ioniquement. Selon une réalisation, le composant biocompatible réticulable ioniquement est choisi parmi un oligosaccharide, un polysaccharide ou un collagène réticulé.In one embodiment, the crosslinkable biocompatible composition comprises at least one biocompatible component covalently photocurable. In one embodiment, the covalently photocurable biocompatible component is a polyethylene glycol. In one embodiment, the crosslinkable biocompatible composition is crosslinked by ultraviolet radiation illumination. In one embodiment, the crosslinkable biocompatible composition comprises at least one ionically crosslinkable biocompatible component. According to one embodiment, the ionically crosslinkable biocompatible component is chosen from an oligosaccharide, a polysaccharide or a crosslinked collagen.

Selon une réalisation, le composant biocompatible réticulable ioniquement est choisi parmi de l'alginate et du saccharose. Selon une réalisation, chaque motif optique présente une forme générale circulaire ou ovale.In one embodiment, the ionically crosslinkable biocompatible component is selected from alginate and sucrose. In one embodiment, each optical pattern has a generally circular or oval shape.

Selon une réalisation, les motifs optiques sont disposés dans le réseau en un arrangement hexagonal. Selon une réalisation, les motifs optiques présentent une densité surfacique de l'ordre de 1 x 105 motif/cm2. Selon un mode de réalisation, les motifs optiques sont des motifs transparents séparés par des zones opaques, et dans lequel la résine photosensible est une résine photosensible positive. Selon un autre mode de réalisation, les motifs optiques sont des motifs opaques séparés par des zones transparentes, et dans lequel la résine photosensible est une résine photosensible négative.In one embodiment, the optical patterns are arranged in the array in a hexagonal arrangement. In one embodiment, the optical patterns have a surface density of the order of 1 × 10 5 pattern / cm 2. According to one embodiment, the optical patterns are transparent patterns separated by opaque areas, and wherein the photosensitive resin is a positive photosensitive resin. In another embodiment, the optical patterns are opaque patterns separated by transparent areas, and wherein the photosensitive resin is a negative photosensitive resin.

Selon une réalisation, le contre moule comporte un plateau central entouré d'une dépression, le plateau central présentant une face d'extension sensiblement plane, la dépression présentant une profondeur axiale, mesurée selon une direction axiale perpendiculaire à la face d'extension, sensiblement comprise entre cent micromètres et un millimètre et de préférence de l'ordre de cinq cent micromètres.According to one embodiment, the counter mold comprises a central plate surrounded by a depression, the central plate having a substantially flat extension face, the depression having an axial depth, measured in an axial direction perpendicular to the extension face, substantially between one hundred microns and one millimeter and preferably of the order of five hundred micrometers.

Selon une réalisation, la dépression présente une forme générale en anneau circulaire ou polygonal ayant un encombrement transversale intérieure sensiblement compris entre cinq et dix millimètres et un encombrement transversale extérieure sensiblement compris entre dix et vingt millimètres. On décrit maintenant brièvement les figures des dessins.According to one embodiment, the depression has a generally circular or polygonal ring shape having an internal transverse bulk substantially between five and ten millimeters and an outer transverse bulk substantially between ten and twenty millimeters. The figures of the drawings are now briefly described.

La figure 1A est un schéma correspondant à une coupe transversale d'un dispositif de filtration selon l'invention. La figure 1B est un schéma de détail illustrant un détail d'une variante du dispositif de filtration de la figure 1A. La figure 2A est une illustration en élévation d'un filtre selon un mode de réalisation de l'invention. La figure 2B est une vue de dessus du filtre de la figure 2A.Figure 1A is a diagram corresponding to a cross section of a filtration device according to the invention. Fig. 1B is a detail diagram illustrating a detail of a variant of the filter device of Fig. 1A. Figure 2A is an elevational illustration of a filter according to one embodiment of the invention. Figure 2B is a top view of the filter of Figure 2A.

La figure 2C est une vue de coupe transversale selon l'axe II-II du filtre de la figure 2B. La figure 3A est une vue de dessus d'un masque utilisé dans une première étape d'un procédé de fabrication d'un filtre selon un mode de réalisation de l'invention. La figure 3B est une vue de coupe transversale selon l'axe du masque de la figure 3A. La figure 4 illustre une deuxième étape d'un procédé de fabrication d'un filtre selon un mode de réalisation de l'invention.Figure 2C is a cross-sectional view along the line II-II of the filter of Figure 2B. Figure 3A is a top view of a mask used in a first step of a method of manufacturing a filter according to one embodiment of the invention. Figure 3B is a cross-sectional view along the axis of the mask of Figure 3A. FIG. 4 illustrates a second step of a method of manufacturing a filter according to one embodiment of the invention.

La figure 5 illustre une troisième étape d'un procédé de fabrication d'un filtre selon un mode de réalisation de l'invention. La figure 6 illustre un moule primaire obtenu lors d'une troisième étape d'un procédé de fabrication d'un filtre selon un mode de réalisation de l'invention.Figure 5 illustrates a third step of a method of manufacturing a filter according to an embodiment of the invention. FIG. 6 illustrates a primary mold obtained during a third step of a method of manufacturing a filter according to one embodiment of the invention.

La figure 7 illustre une quatrième et une cinquième étape d'un procédé de fabrication d'un filtre selon un mode de réalisation de l'invention. La figure 8 illustre un moule secondaire obtenu au cours d'une cinquième étape d'un procédé de fabrication d'un filtre selon un mode de réalisation de l'invention. La figure 9 illustre un contre moule d'un procédé de fabrication d'un filtre selon un mode de réalisation de l'invention, et La figure 10 illustre des sixième, septième et huitième étapes d'un procédé de fabrication d'un filtre selon un mode de réalisation de l'invention. Ci-après un exposé détaillé de plusieurs modes de réalisation de l'invention assorti d'exemples et de référence aux dessins. On notera que les dessins ne sont pas à l'échelle et en particulier que les proportions et les dimensions des pores de filtration du filtre ainsi que les épaisseurs des éléments du filtre et des masques, moules et contre moules du procédé de fabrication ont été considérablement agrandies pour permettre une représentation schématique des éléments du dispositif selon l'invention.Figure 7 illustrates a fourth and a fifth step of a method of manufacturing a filter according to an embodiment of the invention. FIG. 8 illustrates a secondary mold obtained during a fifth step of a method of manufacturing a filter according to one embodiment of the invention. FIG. 9 illustrates a counter mold of a method of manufacturing a filter according to one embodiment of the invention, and FIG. 10 illustrates sixth, seventh and eighth steps of a method of manufacturing a filter according to an embodiment of the invention. Hereinafter a detailed discussion of several embodiments of the invention with examples and reference to the drawings. It should be noted that the drawings are not to scale and in particular that the proportions and the dimensions of the filtration pores of the filter as well as the thicknesses of the filter elements and the masks, molds and counter molds of the manufacturing process have been considerably enlarged to allow a schematic representation of the elements of the device according to the invention.

Les figures 1A et 1B illustrent un dispositif de filtration 1, notamment destiné à isoler des cellules 2 contenues dans un échantillon liquide 3. L'échantillon liquide 3 peut avoir un volume nettement supérieur à une centaine de microlitres, par exemple de quelques millilitres, par exemple entre un et cinquante millilitres.FIGS. 1A and 1B illustrate a filtration device 1, in particular intended to isolate cells 2 contained in a liquid sample 3. The liquid sample 3 can have a volume much greater than a hundred microliters, for example a few milliliters, example between one and fifty milliliters.

Ce dispositif 1 comporte un filtre 4, un moyen de fourniture de liquide 5 et un moyen d'absorption de liquide 6. Le filtre 4 est monté dans le dispositif de filtration 1 entre le moyen de fourniture de liquide 5 et le moyen d'absorption de liquide 6. La figure 1A illustre un mode de réalisation dans lequel le filtre 4 est directement monté entre le moyen de fourniture de liquide 5 et le moyen d'absorption de liquide 6. La figure 1B illustre une variante de réalisation dans laquelle le filtre 4 est monté respectivement entre le moyen de fourniture de liquide 5 et le moyen d'absorption de liquide 6 par l'intermédiaire de deux joints intermédiaires respectifs 7 permettant d'assurer l'étanchéité du montage. Notamment, à l'état assemblé du dispositif 1, le filtre 4 est maintenu flottant entre les deux joints intermédiaires 7 à l'équilibre, ce qui assure un lissage des contraintes exercées sur la partie mécanique du filtre 4. On se réfère à présent également aux figures 2A, 2B et 2C qui illustrent plus précisément un filtre 4 selon l'invention, destiné en particulier à isoler et cultiver des cellules 2 rares contenues dans un échantillon de liquide 3.This device 1 comprises a filter 4, a liquid supply means 5 and a liquid absorption means 6. The filter 4 is mounted in the filtration device 1 between the liquid supply means 5 and the absorption means of liquid 6. FIG. 1A illustrates an embodiment in which the filter 4 is directly mounted between the liquid supply means 5 and the liquid absorbing means 6. FIG. 1B illustrates a variant embodiment in which the filter 4 is respectively mounted between the liquid supply means 5 and the liquid absorbing means 6 by means of two respective intermediate seals 7 for sealing the assembly. In particular, in the assembled state of the device 1, the filter 4 is kept floating between the two intermediate joints 7 in equilibrium, which ensures a smoothing of the stresses exerted on the mechanical part of the filter 4. We now also refer to FIGS. 2A, 2B and 2C, which more specifically illustrate a filter 4 according to the invention, intended in particular to isolate and cultivate rare cells 2 contained in a sample of liquid 3.

Un tel filtre 4 comprend une membrane de filtration 8 s'étendant sensiblement selon un plan d'extension P et comportant une face d'entrée de liquide 9 et une face de sortie de liquide 10. Comme illustré sur la figure 2C, la membrane de filtration 8 comporte en outre une pluralité de pores de filtration 11 traversants reliant chacun la face d'entrée de liquide 9 à la face de sortie de liquide 10 au moyen d'une surface intérieure de pore 12. Les pores de filtration 11 comportent chacun une ouverture d'entrée 13 à l'endroit de la face d'entrée de liquide 9 et une ouverture de sortie 14 à l'endroit de la face de sortie de liquide 10. Du liquide de l'échantillon de liquide peut ainsi circuler à travers la membrane de filtration 8, et en particulier à travers les pores de filtration 11 de la membrane de filtration 8. L'ouverture d'entrée 13 de chaque pore traversant est adaptée pour retenir les cellules 2 rares recherchées dans l'échantillon liquide 3. Ainsi, une dimension maximale de l'ouverture d'entrée 13 de chaque pore traversant peut avantageusement être choisie de façon à être inférieure à une dimension minimale moyenne des cellules 2 rares recherchées et, autant que possible, supérieure aux dimensions des constituants de l'échantillon de liquide qu'il n'est pas souhaitable d'isoler (par exemple des micro-organismes, cellules ou éléments du plasma sanguin non recherchés). En outre, une dimension maximale de l'ouverture de sortie 14 de chaque pore de filtration 11 traversant peut être supérieure à la dimension maximale de l'ouverture d'entrée 13 dudit pore traversant. La surface intérieure 12 de chaque pore de filtration 11 traversant peut ainsi présenter une forme générale de tronc, en particulier une forme générale tronconique. Dans l'ensemble de la description, on entend par « dimension maximale » d'un élément considéré, la plus grande distance séparant deux points de l'élément. Ainsi, si l'élément considéré est un disque, une « dimension maximale » est par exemple un diamètre de ce disque. Si l'élément est un cube, une « dimension maximale » est par exemple une diagonale de ce cube. De cette façon, dès lors que les constituants de l'échantillon de liquide 3 qu'il n'est pas souhaitable d'isoler ont franchi l'ouverture d'entrée 13 du pore, la section de ce dernier va en s'agrandissant en direction de l'ouverture de sortie 14 réduisant ainsi fortement la probabilité de voir lesdits constituants se bloquer et s'accumuler dans le pore. Plus précisément, la circonférence de l'ouverture d'entrée 13 de chaque pore de filtration traversant 11 est par exemple apte à s'inscrire entre un premier et un second cercle concentriques ayant respectivement un diamètre de trois micromètres et de dix micromètres. Dans un mode de réalisation avantageux, lesdits premier et second cercles concentriques peuvent avoir respectivement un diamètre de quatre micromètres et de neuf micromètres. La circonférence de l'ouverture de sortie 14 de chaque pore de filtration traversant 11 peut-être, quant à elle, apte à s'inscrire entre un premier et un second cercle concentriques ayant respectivement un diamètre de huit micromètres et de vingt-cinq micromètres et ayant avantageusement respectivement un diamètre de treize micromètres et de vingt micromètres. L'ouverture d'entrée 13 de chaque pore traversant 11 présente une forme générale circulaire ou ovale, de façon à être adaptée aux cellules à isoler et à pouvoir être réalisée de façon simple et peu couteuse. L'ouverture de sortie 14 de chaque pore traversant 11 peut également présenter une forme générale circulaire, ovale ou une forme générale de polygone convexe, en particulier un hexagone pour les raisons détaillées ci-après. On comprend ainsi que le moyen de fourniture de liquide 5 est ainsi apte à fournir du liquide de l'échantillon de liquide 3 à l'endroit de la face d'entrée de liquide 9 de la membrane de filtration 8 tandis que le moyen d'absorption de liquide 6 est apte à absorber du liquide d'un échantillon de liquide 3 à l'endroit de la face de sortie de liquide 10 de la membrane de filtration 8. Le moyen de fourniture de liquide 5 peut par exemple être un tube d'arrivée de liquide ou un réservoir de stockage de l'échantillon liquide. Le moyen d'absorption de liquide 6 peut être une pompe absorbant le liquide par dépression ou mise sous vide ou un dispositif d'absorption par capillarité absorbant le liquide par capillarité. Le filtre 4 comporte encore un support de rigidification 15 sur lequel est montée la membrane de filtration 8.Such a filter 4 comprises a filtration membrane 8 extending substantially along an extension plane P and having a liquid inlet face 9 and a liquid outlet face 10. As illustrated in FIG. filtration 8 further comprises a plurality of filtering through pores 11 each connecting the liquid inlet face 9 to the liquid outlet face 10 by means of an inner surface of pore 12. The filtration pores 11 each comprise a inlet opening 13 at the location of the liquid inlet face 9 and an outlet opening 14 at the location of the liquid outlet face 10. Liquid of the liquid sample can thus flow through the filtration membrane 8, and in particular through the filtration pores 11 of the filtration membrane 8. The inlet opening 13 of each through pore is adapted to retain the desired rare cells 2 in the liquid sample 3. Thus, a dimension maximum of the inlet opening 13 of each through pore may advantageously be chosen so as to be less than a mean minimum dimension of the desired rare 2 cells and, as far as possible, greater than the dimensions of the constituents of the liquid sample qu it is undesirable to isolate (eg, undesired microorganisms, cells, or blood plasma elements). In addition, a maximum dimension of the outlet opening 14 of each filtering pore 11 may be greater than the maximum dimension of the inlet opening 13 of said pore through. The inner surface 12 of each filtering pore 11 through can thus have a general shape of trunk, in particular a frustoconical general shape. Throughout the description, the term "maximum dimension" of a considered element, the largest distance separating two points of the element. Thus, if the element considered is a disk, a "maximum dimension" is for example a diameter of this disk. If the element is a cube, a "maximum dimension" is for example a diagonal of this cube. In this way, since the constituents of the liquid sample 3 which it is undesirable to isolate have crossed the inlet opening 13 of the pore, the section of the latter becomes larger in size. direction of the exit aperture 14 thus greatly reducing the likelihood of said constituents becoming clogged and accumulating in the pore. More specifically, the circumference of the inlet opening 13 of each through-filtering pore 11 is, for example, able to fit between a first and a second concentric circle having a diameter of three micrometers and ten micrometers, respectively. In an advantageous embodiment, said first and second concentric circles may have a diameter of four micrometers and nine micrometers, respectively. The circumference of the outlet opening 14 of each filtering pore 11 may, for its part, fit between a first and a second concentric circle having a diameter of eight micrometers and twenty-five micrometers, respectively. and advantageously respectively having a diameter of thirteen micrometers and twenty micrometers. The inlet opening 13 of each through pore 11 has a generally circular or oval shape, so as to be adapted to the cells to be isolated and can be realized in a simple and inexpensive way. The outlet opening 14 of each through pore 11 may also have a generally circular, oval shape or a general shape of a convex polygon, in particular a hexagon for the reasons detailed below. It is thus understood that the liquid supply means 5 is thus able to supply liquid of the liquid sample 3 at the location of the liquid inlet face 9 of the filtration membrane 8 while the means liquid absorption 6 is able to absorb liquid from a liquid sample 3 at the location of the liquid outlet face 10 of the filtration membrane 8. The liquid supply means 5 may for example be a tube of liquid arrival of liquid or a storage tank of the liquid sample. The liquid absorbing means 6 may be a pump that absorbs the liquid by vacuum or evacuation or a capillary absorption device that absorbs the liquid by capillarity. The filter 4 further comprises a stiffening support 15 on which the filtration membrane 8 is mounted.

Le filtre 4 peut en particulier être monté par son support de rigidification 15, dans le dispositif de filtration 1, entre le moyen de fourniture de liquide 5 et le moyen d'absorption de liquide 6 comme illustré sur les figures 1A et 1B. La membrane de filtration 8 est formée en une composition biocompatible réticulée.The filter 4 can in particular be mounted by its stiffening support 15, in the filtration device 1, between the liquid supply means 5 and the liquid absorption means 6 as illustrated in FIGS. 1A and 1B. The filtration membrane 8 is formed of a crosslinked biocompatible composition.

Dans le mode de réalisation de l'invention illustré sur les figures 3A, 3B et 3C, la membrane de filtration 8 et le support de rigidification 15 sont une unique pièce formée en une composition biocompatible réticulée, de sorte à constituer un ensemble rigide autoporteur. Par « biocompatible », on entend que la composition biocompatible est apte à être en contact avec des cellules biologiques sans dégrader lesdites cellules, en particulier de sorte à fournir un support d'adhésion, de multiplication et de croissance cellulaire. La composition biocompatible peut en outre présenter une auto-fluorescence faible ou négligeable de sorte à permettre l'observation des cellules 2 sous microscope en minimisant le bruit de mesure. Un composant biocompatible présentant une auto-fluorescence faible est par exemple le polyéthylène glycol (PEG) tel que détaillé ci-après. Dans la suite de la description, on utilise les expressions « réticulé » et « réticulable », étant entendu que « composition réticulable » ou « composant réticulable » désigne la composition ou le composant avant ou après réticulation, et « composition réticulée » ou « composant réticulé » désigne la composition ou le composant après réticulation. Il est également entendu qu'une composition réticulée, respectivement un composant réticulé, est une composition réticulable, respectivement composant réticulable. Dans un premier mode de réalisation, la composition biocompatible réticulée comprend au moins un composant biocompatible réticulé de manière covalente. De façon générale, un oxyde de polyalkylène ayant au moins un groupe fonctionnel capable de subir une polymérisation par voie radicalaire convient comme composant biocompatible réticulé de manière covalente. Un exemple d'oxyde de polyalkylène est un polyéthylène glycol modifié avec au moins un groupe acrylate pour le rendre polymérisable ou réticulable. Un acrylate de polyéthylène glycol, comme le diacrylate de polyéthylène glycol, est apte à subir une polymérisation par voie radicalaire. Divers groupes fonctionnels comme des groupes acrylate, des groupe vinyle, des groupes méthacrylate, et similaires peuvent également être utilisés pour modifier le polyéthylène glycol de sorte à le rendre réticulable.In the embodiment of the invention illustrated in FIGS. 3A, 3B and 3C, the filtration membrane 8 and the stiffening support 15 are a single piece formed of a crosslinked biocompatible composition, so as to constitute a self-supporting rigid assembly. By "biocompatible" it is meant that the biocompatible composition is capable of being in contact with biological cells without degrading said cells, in particular so as to provide support for adhesion, multiplication and cell growth. The biocompatible composition may further exhibit a low or negligible auto-fluorescence so as to allow observation of the cells 2 under a microscope by minimizing the measurement noise. A biocompatible component exhibiting a weak auto-fluorescence is, for example, polyethylene glycol (PEG) as detailed below. In the rest of the description, the terms "crosslinked" and "crosslinkable" are used, it being understood that "crosslinkable composition" or "crosslinkable component" refers to the composition or component before or after crosslinking, and "crosslinked composition" or "component crosslinked "refers to the composition or the component after crosslinking. It is also understood that a crosslinked composition, respectively a crosslinked component, is a crosslinkable composition, respectively crosslinkable component. In a first embodiment, the crosslinked biocompatible composition comprises at least one biocompatible component crosslinked covalently. In general, a polyalkylene oxide having at least one functional group capable of undergoing radical polymerization is suitable as a covalently cross-linked biocompatible component. An example of polyalkylene oxide is a polyethylene glycol modified with at least one acrylate group to make it polymerizable or crosslinkable. A polyethylene glycol acrylate, such as polyethylene glycol diacrylate, is capable of undergoing radical polymerization. Various functional groups such as acrylate groups, vinyl groups, methacrylate groups, and the like can also be used to modify the polyethylene glycol so as to make it crosslinkable.

Diverses façons de modifier le polyéthylène glycol pour le rendre polymérisable ou réticulable peuvent être mises en oeuvre. Une manière possible consiste à le traiter avec un halogénure d'acryloyle tel qu'un chlorure d'acryloyle. Une réaction d'estérification entre le polyéthylène glycol et un acide acrylique peut être conduite dans un solvant organique comme le toluène pour rendre le polyéthylène glycol polymérisable. Un acide méthacrylique, un méthacrylate d'alkyle ou un halogénure d'acryloyle peut réagir de façon similaire avec le PEG de sorte à obtenir un dérivé réticulable de PEG comme décrit par exemple dans Fukui, S. and Tanaka, A., 1976; FEBS. Letters 66:179. De façon alternative, un alkoxide de PEG peut réagir avec un gaz d'acétylène de sorte à produire un éther vinylique de PEG pour obtenir un dérivé réticulable de PEG comme décrit dans Mathias, L.J., Canterberry, J.B., and South, M., 1982; J. Polym. Sci., Polym. Lett. Ed. 23:473. Le PEG peut réagir avec de l'anhydride méthacrylique pour donner du diméthacrylate de PEG. Une réaction entre le PEG et un chlorure d'allyle dans un solvant à sec, catalysée par une petite quantité de chlorure stannique peut également résulter en un PEG réticulable. De façon générale, d'autres techniques connues du domaine pourront être utilisées pour obtenir un dérivé de polyéthylène glycol réticulable. Des polyéthylènes glycol ou PEG avec une grande variété de poids moléculaires peuvent être modifiés pour être utilisés dans la présente invention. Par exemple des polyéthylènes glycol réticulables ou des dérivés de polyéthylène glycol réticulable ayant un poids moléculaire allant de 200 à 100,000 peuvent être utilisés. Des polyéthylènes glycol réticulables ou des dérivés de polyéthylène glycol réticulable ayant un poids moléculaire compris dans une gamme intermédiaire allant de 1,000 à 38,000 peuvent avantageusement être utilisés et modifiés avec un groupement acrylate comme décrit ci-avant, par exemple par réaction avec un chlorure d'acryloyle. En particulier, la composition biocompatible réticulée peut comprendre un composant biocompatible photoréticulé de manière covalente.Various ways of modifying the polyethylene glycol to make it polymerizable or crosslinkable can be implemented. One possible way is to treat it with an acryloyl halide such as acryloyl chloride. An esterification reaction between the polyethylene glycol and an acrylic acid may be conducted in an organic solvent such as toluene to render the polyethylene glycol polymerizable. Methacrylic acid, alkyl methacrylate or acryloyl halide may react similarly with PEG so as to obtain a crosslinkable derivative of PEG as described for example in Fukui, S. and Tanaka, A., 1976; FEBS. Letters 66: 179. Alternatively, a PEG alkoxide can react with an acetylene gas to produce a PEG vinyl ether to obtain a crosslinkable PEG derivative as described in Mathias, LJ, Canterberry, JB, and South, M., 1982. ; J. Polym. Sci., Polym. Lett. Ed. 23: 473. PEG can react with methacrylic anhydride to give PEG dimethacrylate. A reaction between PEG and an allyl chloride in a dry solvent catalyzed by a small amount of stannic chloride may also result in a crosslinkable PEG. In general, other techniques known in the art may be used to obtain a crosslinkable polyethylene glycol derivative. Polyethylene glycol or PEG with a wide variety of molecular weights can be modified for use in the present invention. For example crosslinkable polyethylene glycol or crosslinkable polyethylene glycol derivatives having a molecular weight of from 200 to 100,000 can be used. Cross-linkable polyethylene glycols or crosslinkable polyethylene glycol derivatives having a molecular weight in the range of from about 1,000 to about 38,000 can advantageously be used and modified with an acrylate group as described above, for example by reaction with a sodium chloride. acryloyl. In particular, the crosslinked biocompatible composition may comprise a biocompatible component covalently photocrosslinked.

Ainsi un polyéthylène glycol peut être modifié de sorte à le rendre photoréticulable de manière covalente, en particulier par polymérisation par voie radicalaire, par illumination avec une radiation électromagnétique comme une lumière visible, ultraviolette ou laser. Le composant biocompatible photoréticulable de manière covalente est par exemple le diacrylate de polyéthylène glycol (PEG-DA). Le diacrylate de polyéthylène glycol (PEG-DA) est un polyéthylène glycol modifié avec au moins un groupe acrylate de sorte à le rendre réticulable ou polymérisable. Pour photoréticuler le diacrylate de polyéthylène glycol, un initiateur radicalaire peut être ajouté, par exemple une combinaison d'un photoinitiateur tel qu'une éosine éthylique, un cocatalyseur comme le triéthanolamine et, optionnellement d'un comonomère comme une 1-vinyl 2-pyrrolidinone. D'autres photoinitiateurs, cocatalyseurs et comonomères pourront être utilisés pour photoréticuler le diacrylate de polyéthylène glycol. Ainsi par exemple si le PEG-DA est photoréticulé par une illumination par des rayonnements ultraviolets0 (UV), des photoinitiateurs possibles comprennent entre autre une 2,2-diméthoxy-2-phényl acétophénone, un éther éthylique de benzoïne, une 2,2-diméthyl phénoxy-acétophénone, des benzophénones. D'autres cocatalyseurs possibles comprennent par exemple la triéthanolamine, la diéthanolamine de méthyl, la triéthylamine et l'arginine. Il est à noter que la quantité et le type de comonomère utilisé pourra varier. Dans un second mode de réalisation de l'invention, la composition biocompatible réticulée comporte au moins un composant biocompatible réticulé ioniquement. Le second mode de réalisation peut être combiné avec le premier mode de réalisation auquel cas la composition biocompatible réticulée pourra comporter au moins un composant biocompatible réticulé ioniquement et au moins un composant biocompatible réticulé de manière covalente, en particulier au moins un composant biocompatible photoréticulé de manière covalente. Le composant biocompatible réticulé ioniquement peut être choisi parmi un oligosaccharide, un polysaccharide et un collagène réticulé. Ainsi en particulier le composant biocompatible réticulé ioniquement peut être choisi parmi de l'alginate et du saccharose. Par alginate, on entend ici en particulier des sels d'acide alginique. Plus généralement, des composants biocompatibles réticulés ioniquement convenables peuvent par exemple être choisit parmi des polysaccharides comme l'alginate, des polysaccharides naturels comme le chitosan, la gomme gellane, la gomme xanthane, l'acide hyaluronique, l'héparine, la pectine et le carraghénane, les oligosaccharides comme le saccharose ou des collagènes réticulables. On entend ici par collagènes tout peptide de nature collagénique, dont notamment la gélatine. Un exemple de collagène réticulable est par exemple décrit dans la demande de brevet européen publiée sous le numéro EP0575273. Comme illustré sur les figures 2A, 2B et 2C, le support de rigidification 15 présente une forme générale en anneau circulaire ou polygonal. Le support de rigidification 15 entoure circonférentiellement la membrane de filtration 8 dans le plan d'extension P.Thus a polyethylene glycol can be modified so as to make it photocurable covalently, in particular by radical polymerization, by illumination with electromagnetic radiation such as visible, ultraviolet or laser light. The biocompatible component covalently photocrosslinkable is, for example, polyethylene glycol diacrylate (PEG-DA). Polyethylene glycol diacrylate (PEG-DA) is a polyethylene glycol modified with at least one acrylate group so as to make it crosslinkable or polymerizable. For photocrosslinking polyethylene glycol diacrylate, a radical initiator may be added, for example a combination of a photoinitiator such as an ethyl eosin, a cocatalyst such as triethanolamine and optionally a comonomer such as a 1-vinyl 2-pyrrolidinone . Other photoinitiators, cocatalysts and comonomers may be used to photocreat the polyethylene glycol diacrylate. Thus, for example, if PEG-DA is photocrosslinked by illumination with ultraviolet (UV) radiation, possible photoinitiators include, inter alia, 2,2-dimethoxy-2-phenyl acetophenone, benzoyl ethyl ether, 2,2-dimethoxy-2-phenyl acetophenone, dimethylphenoxyacetophenone, benzophenones. Other possible cocatalysts include, for example, triethanolamine, methyl diethanolamine, triethylamine and arginine. It should be noted that the quantity and type of comonomer used may vary. In a second embodiment of the invention, the crosslinked biocompatible composition comprises at least one ionically crosslinked biocompatible component. The second embodiment may be combined with the first embodiment in which case the crosslinked biocompatible composition may comprise at least one ionically crosslinked biocompatible component and at least one covalently crosslinked biocompatible component, in particular at least one biocompatible component photocured accordingly. covalent. The biocompatible ionically crosslinked component may be selected from an oligosaccharide, a polysaccharide and a crosslinked collagen. Thus, in particular, the ionically crosslinked biocompatible component may be chosen from alginate and sucrose. By alginate is meant here in particular salts of alginic acid. More generally, ionically suitable crosslinked biocompatible components may for example be chosen from polysaccharides such as alginate, natural polysaccharides such as chitosan, gellan gum, xanthan gum, hyaluronic acid, heparin, pectin and the like. carrageenan, oligosaccharides such as sucrose or crosslinkable collagens. Collagen is understood here to mean any peptide of collagenic nature, in particular gelatin. An example of crosslinkable collagen is for example described in the European patent application published under the number EP0575273. As illustrated in Figures 2A, 2B and 2C, the stiffening support 15 has a generally circular or polygonal ring shape. The stiffening support 15 circumferentially surrounds the filtration membrane 8 in the extension plane P.

Le support de rigidification 15 peut par exemple présenter un encombrement transversal extérieur, également mesuré selon le plan d'extension P, sensiblement compris entre dix et vingt millimètres. L'encombrement transversal extérieur définit l'encombrement maximal du support de rigidification 15 dans le plan d'extension P.The stiffening support 15 may for example have an external transverse size, also measured along the extension plane P, substantially between ten and twenty millimeters. The external transverse bulk defines the maximum bulk of the stiffening support 15 in the extension plane P.

Le support de rigidification 15 peut en outre présenter un encombrement transversal intérieur, mesuré selon le plan d'extension P, sensiblement compris entre cinq et dix millimètres. L'encombrement transversal intérieur définit la dimension de la surface intérieure entourée circonférentiellement par le support de rigidification 15. L'encombrement transversal intérieur du support de rigidification 15 est ainsi sensiblement similaire à l'encombrement transversal de la membrane de filtration 8.The stiffening support 15 may further have an internal transverse bulk, measured along the extension plane P, substantially between five and ten millimeters. The internal transverse space defines the dimension of the inner surface circumferentially surrounded by the stiffening support 15. The internal transverse space requirement of the stiffening support 15 is thus substantially similar to the transverse space requirement of the filtration membrane 8.

La face d'entrée de liquide 9 et la face de sortie de liquide 10 de la membrane de filtration 8 peuvent présenter chacune une forme générale de disque ou de polygone ayant un encombrement transversal, mesuré selon le plan d'extension P, sensiblement compris entre cinq et dix millimètres.The liquid inlet face 9 and the liquid outlet face 10 of the filtration membrane 8 may each have a general disk or polygon shape having a transverse bulk, measured according to the extension plane P, substantially between five and ten millimeters.

La face d'entrée de liquide 9 et la face de sortie de liquide 10 de la membrane de filtration 8 présentent chacune une forme générale surfacique plate. La face d'entrée de liquide 9 et la face de sortie de liquide 10 sont sensiblement parallèles entre elles et sont séparées par une épaisseur de la membrane, mesurée selon une direction axiale D perpendiculaire à la face d'entrée de liquide 9 et la face de sortie de liquide 10.The liquid inlet face 9 and the liquid outlet face 10 of the filtration membrane 8 each have a generally flat surface shape. The liquid inlet face 9 and the liquid outlet face 10 are substantially parallel to each other and are separated by a thickness of the membrane, measured along an axial direction D perpendicular to the liquid inlet face 9 and the face liquid outlet 10.

L'épaisseur de la membrane est par exemple sensiblement comprise entre vingt et soixante-cinq micromètres et de préférence entre trente et cinquante micromètres. Une telle épaisseur de la membrane peut en particulier permettre un élargissement appréciable de l'ouverture de sortie 14 des pores par rapport à l'ouverture d'entrée 13 des pores.45 Le support de rigidification 15 présente un encombrement axial, mesuré selon la direction axiale D perpendiculaire au plan d'extension P, sensiblement compris entre cent micromètres et un millimètre et de préférence de l'ordre de cinq cent micromètres.The thickness of the membrane is for example substantially between twenty and sixty-five micrometers and preferably between thirty and fifty micrometers. Such a thickness of the membrane may in particular allow an appreciable widening of the outlet opening 14 of the pores with respect to the inlet opening 13 of the pores. The stiffening support 15 has an axial size, measured according to the direction axial D perpendicular to the plane of extension P, substantially between one hundred microns and one millimeter and preferably of the order of five hundred micrometers.

L'encombrement axial du support est ainsi supérieur à l'épaisseur de la membrane. L'encombrement axial du support de rigidification 15 peut en particulier être supérieur à dix fois l'épaisseur de la membrane. De cette façon, le support de rigidification 15 est apte à maintenir la membrane tendue en évitant que celle-ci se replie sur elle-même, et permet de la sorte de constituer un ensemble rigide autoporteur.The axial size of the support is thus greater than the thickness of the membrane. The axial size of the stiffening support 15 may in particular be greater than ten times the thickness of the membrane. In this way, the stiffening support 15 is able to maintain the membrane taut avoiding that it folds on itself, and allows to form a self-supporting rigid assembly.

Dans une variante de réalisation de l'invention, le support de rigidification 15 peut être renforcé par ajout d'une pièce de renfort externe non représentée sur les figures de sorte à augmenter encore la rigidité du filtre. Une telle pièce de renfort externe peut par exemple être un anneau métallique ou polymère monté sur un côté axial ou des deux côtés axiales du support de rigidification 15.In an alternative embodiment of the invention, the stiffening support 15 may be reinforced by adding an external reinforcement piece not shown in the figures so as to further increase the rigidity of the filter. Such an external reinforcement piece may for example be a metal or polymer ring mounted on an axial side or on both axial sides of the stiffening support 15.

Dans une variante de réalisation, le support de rigidification 15 peut comporter un revêtement adhésif 16 inactif, en particulier une colle activable par pression ou une colle recouverte d'une membrane de protection détachable, de façon à permettre un encollage ultérieur du support de rigidification 15 sur un support d'observation non illustré sur les figures. Un tel support d'observation peut par exemple être introduit dans un microscope optique et permettre une observation et un examen des cellules 2 isolées sur le filtre 4. On va maintenant décrire un procédé de fabrication d'un filtre 4 selon un mode de réalisation de l'invention en référence aux figures 3A, 3B et 4 à 10.In an alternative embodiment, the stiffening support 15 may comprise an inactive adhesive coating 16, in particular a pressure-activatable adhesive or an adhesive coated with a detachable protective membrane, so as to allow subsequent sizing of the stiffening support 15 on an observation support not shown in the figures. Such an observation support may for example be introduced into an optical microscope and allow observation and examination of the cells 2 isolated on the filter 4. A method of manufacturing a filter 4 according to an embodiment of the invention will now be described. the invention with reference to FIGS. 3A, 3B and 4 to 10.

En références aux figures 3A et 3B, dans une première étape du procédé, on dispose d'un masque 17 plan transparent comportant un réseau 18 de motifs optiques 19. Ce réseau est par exemple disposé sur une surface supérieure du masque. Le masque 17 peut par exemple être une lame de verre 20 sur laquelle le réseau 18 de motifs est dessiné par lithographie d'une couche mince de chrome 21. Dans un mode de réalisation de l'invention, chaque motif optique 19 peut présenter une forme générale circulaire ou polygonée.With reference to FIGS. 3A and 3B, in a first step of the method, there is a transparent plane mask 17 comprising an array 18 of optical patterns 19. This network is for example disposed on an upper surface of the mask. The mask 17 may for example be a glass slide 20 on which the array 18 of patterns is drawn by lithography of a thin layer of chromium 21. In one embodiment of the invention, each optical pattern 19 may have a shape general circular or polygonal.

Dans un mode de réalisation de l'invention, chaque motif optique 19 peut présenter des formes, dimensions et caractéristiques similaires à celles décrites ci-dessus pour les ouvertures d'entrée 13 de chaque pore traversant 11. Dans un autre mode de réalisation, chaque motif optique 19 peut présenter des formes, dimensions et caractéristiques similaires à celles décrites ci-dessus pour les ouvertures de sortie 14 de chaque pore de filtration traversant 11.In one embodiment of the invention, each optical pattern 19 may have shapes, dimensions, and features similar to those described above for the inlet openings 13 of each through pore 11. In another embodiment, each Optical pattern 19 may have shapes, dimensions, and features similar to those described above for outlet openings 14 of each through filtering pore 11.

Une dimension maximale de chaque motif optique 19 peut être comprise entre deux micromètres et dix micromètres, de préférence comprise entre trois micromètres et sept micromètres. Dans le mode de réalisation des figures 3A et 3B, les motifs optiques 19 sont disposés dans le réseau 18 en un arrangement de réseau triangulaire.A maximum dimension of each optical pattern 19 may be between two micrometers and ten micrometers, preferably between three micrometers and seven micrometers. In the embodiment of Figures 3A and 3B, the optical patterns 19 are disposed in the array 18 in a triangular array arrangement.

De cette façon il est possible d'avoir une dimension maximale de l'ouverture de sortie 14 de chaque pore traversant la plus grande possible. Dans un mode de réalisation de l'invention plus particulièrement adapté à retenir des cellules 2 rares telles que des cellules 2 tumorales ou des trophoblastes contenues dans un échantillon liquide 3, les motifs optiques 19 peuvent présenter une densité surfacique de l'ordre de 1 x 105 motif/cm2. En référence à la figure 4, dans une deuxième étape du procédé, on dispose une résine photosensible 22 sur le masque 17. En particulier, on dispose la résine photosensible sur la face supérieure du masque.In this way it is possible to have a maximum dimension of the outlet opening 14 of each pore crossing the largest possible. In one embodiment of the invention more particularly adapted to retain rare 2 cells such as tumor cells or trophoblasts contained in a liquid sample 3, the optical patterns 19 may have a surface density of the order of 1 × 105 pattern / cm2. With reference to FIG. 4, in a second step of the method, a photoresist 22 is placed on the mask 17. In particular, the photosensitive resin is placed on the upper face of the mask.

Dans un premier mode de réalisation d'un procédé de fabrication de filtre 4 selon l'invention, les motifs optiques 19 sont des motifs transparents 23 séparés par des zones opaques 24. Dans ce mode de réalisation, la résine photosensible est une résine photosensible positive, par exemple une résine telle que la résine l'AZ® 40XT.In a first embodiment of a filter manufacturing method 4 according to the invention, the optical patterns 19 are transparent patterns 23 separated by opaque zones 24. In this embodiment, the photosensitive resin is a positive photosensitive resin. for example a resin such as AZ® 40XT resin.

Dans un second mode de réalisation d'un procédé de fabrication de filtre 4 selon l'invention, les motifs optiques 19 sont des motifs opaques 25 séparés par des zones transparentes 26. Dans ce mode de réalisation, la résine photosensible est une résine photosensible négative, par exemple une résine telle que la résine SU-3050. Dans une troisième étape du procédé illustrée figure 5, on forme un moule primaire 27 comportant des motifs en creux 28 par une illumination inclinée/rotative de la résine photosensible sur le masque 17. La figure 6 représente plus particulièrement un exemple d'un moule primaire 27 formé sur le masque 17 par photolithographie de la résine photosensible et présentant une première face 29 en contact avec le masque 17 ainsi qu'une seconde face 30, libre, en regard de la première face 29. Les motifs en creux 28 s'étendent selon un axe sensiblement perpendiculaire à la première face 29 et au masque 17, entre une extrémité de première face 31 et une extrémité de seconde face 32. L'illumination est par exemple une illumination par rayonnement 33 ultraviolet, visible ou laser.In a second embodiment of a filter manufacturing method 4 according to the invention, the optical patterns 19 are opaque patterns 25 separated by transparent areas 26. In this embodiment, the photosensitive resin is a negative photoresist for example a resin such as SU-3050 resin. In a third step of the method illustrated in FIG. 5, a primary mold 27 is formed comprising recessed patterns 28 by inclined / rotational illumination of the photosensitive resin on the mask 17. FIG. 6 more particularly represents an example of a primary mold 27 formed on the mask 17 by photolithography of the photosensitive resin and having a first face 29 in contact with the mask 17 and a second face 30, free, facing the first face 29. The recessed patterns 28 extend along an axis substantially perpendicular to the first face 29 and the mask 17, between a first-face end 31 and a second-end end 32. The illumination is for example an ultraviolet radiation 33, visible or laser.

L'illumination inclinée/rotative de la résine photosensible peut en particulier être une illumination par une face arrière 34 du masque 17 transparent opposée à la face sur laquelle est disposée la résine photosensible, communément appelée illumination par la face arrière 34. Par illumination rotative, on entend que le masque 17 avec la résine photosensible sur le masque 17 pivotent autour d'un axe sensiblement perpendiculaire à la première face 29 et au masque 17 pendant l'illumination. Par illumination inclinée, on entend que l'illumination de la résine photosensible est réalisée avec un certain angle d'illumination 35 par rapport à l'axe sensiblement perpendiculaire à la première face 29 et au masque 17. Ledit angle d'illumination 35 est par exemple un angle d'illumination 35 compris entre dix et quatre-vingt-cinq degrés.The inclined / rotational illumination of the photosensitive resin may in particular be an illumination by a rear face 34 of the transparent mask 17 opposite to the face on which the photosensitive resin, commonly called illumination by the rear face 34, is placed. By rotary illumination, it is understood that the mask 17 with the photosensitive resin on the mask 17 pivot about an axis substantially perpendicular to the first face 29 and the mask 17 during illumination. By inclined illumination, it is meant that the illumination of the photosensitive resin is carried out with a certain illumination angle 35 with respect to the axis substantially perpendicular to the first face 29 and to the mask 17. Said illumination angle 35 is by for example, an illumination angle of between ten and eighty-five degrees.

De cette façon, les surfaces intérieures des motifs en creux 36 du moule primaire 27 peuvent présenter avec la première face 29 un angle non perpendiculaire, en particulier un angle défini par l'angle d'illumination 35. Les motifs en creux 28 du moule primaire 27 peuvent présenter des formes et dimensions similaires aux formes et dimensions des pores de la membrane filtrante d'un filtre 4 selon l'invention. Ainsi les motifs en creux 28 du moule primaire 27 peuvent présenter une dimension transversale maximale à leur extrémité de seconde face 32 supérieure à une dimension transversale maximale à leur extrémité de première face 31. La surface intérieure des motifs en creux 28 peut ainsi présenter une forme générale de tronc, en particulier une forme générale tronconique. Dans une quatrième étape du procédé illustrée figure 7, on dispose sur le moule primaire 27 un polymère à haute perméabilité au gaz fluide 37. Le polymère à haute perméabilité au gaz fluide 37 est en particulier disposé en contact intime avec les surfaces intérieures des motifs en creux 36 du moule primaire 27. Dans un mode de réalisation, le polymère à haute perméabilité au gaz fluide 37 est un siloxane, en particulier le polydiméthylsiloxane (PDMS).In this way, the inner surfaces of the recessed patterns 36 of the primary mold 27 may have a non-perpendicular angle with the first face 29, in particular an angle defined by the illumination angle 35. The recessed patterns 28 of the primary mold 27 may have shapes and dimensions similar to the shapes and dimensions of the pores of the filter membrane of a filter 4 according to the invention. Thus, the recessed patterns 28 of the primary mold 27 may have a maximum transverse dimension at their second face end 32 greater than a maximum transverse dimension at their first face end 31. The inner surface of the recessed patterns 28 may thus have a shape general trunk, in particular a frustoconical general shape. In a fourth step of the method illustrated in FIG. 7, a polymer with a high fluid gas permeability 37 is placed on the primary mold 27. The polymer with a high permeability for the fluid gas 37 is in particular arranged in intimate contact with the inner surfaces of the patterns. In one embodiment, the high fluid gas permeability polymer 37 is a siloxane, particularly polydimethylsiloxane (PDMS).

Dans une cinquième étape du procédé, on forme un moule secondaire 38 comportant des motifs en saillie 39 par une réticulation du polymère à haute perméabilité au gaz fluide 37 sur le moule primaire 27. Les motifs en saillie 39 sont en particulier obtenus par réticulation du polymère disposé dans les motifs en creux 28 du moule primaire 27. Les motifs en saillie 39 du moule secondaire 38 peuvent ainsi présenter des formes et dimensions similaires et inversées par rapport aux formes et dimensions des pores de la membrane filtrante d'un filtre 4 selon l'invention. Ainsi en particulier chaque motif en saillie peut s'étendre selon un axe sensiblement perpendiculaire à une face de moulage 40 du moule secondaire 38, entre une extrémité de face de moulage 41 et une extrémité libre 42. Chaque motif en saillie peut présenter une dimension transversale maximale à son extrémité de face de moulage 41 supérieure à une dimension transversale maximale à son extrémité libre 42. Une surface extérieure des motifs en saillie 43 peut ainsi présenter une forme générale de tronc, en particulier une forme générale tronconique.In a fifth step of the process, a secondary mold 38 having projecting patterns 39 is formed by a crosslinking of the high fluid gas permeability polymer 37 on the primary mold 27. The projecting patterns 39 are in particular obtained by crosslinking the polymer disposed in the recessed patterns 28 of the primary mold 27. The protruding patterns 39 of the secondary mold 38 may thus have shapes and dimensions similar and inverted with respect to the shapes and dimensions of the pores of the filter membrane of a filter 4 according to the invention. 'invention. Thus, in particular, each projecting pattern may extend along an axis substantially perpendicular to a molding face 40 of the secondary mold 38, between a molding face end 41 and a free end 42. Each projecting pattern may have a transverse dimension maximum at its molding face end 41 greater than a maximum transverse dimension at its free end 42. An outer surface of the projecting patterns 43 may thus have a generally trunk shape, in particular a generally frustoconical shape.

Pour réaliser la réticulation du polymère à haute perméabilité au gaz, on peut par exemple mélanger le polymère à haute perméabilité au gaz fluide 37 avec un agent de réticulation 44 sur le moule primaire 27 puis chauffer ledit mélanger sur le moule primaire 27. Dans une sixième étape du procédé illustrée figure 10, on dispose le moule secondaire 38 dans une enceinte d'aspiration 45 en regard d'un contre moule 46. Dans un mode de réalisation du procédé selon l'invention, le contre moule 46 peut être formé par réticulation d'un polymère à haute perméabilité au gaz fluide 37 de façon similaire à celle qui vient d'être décrite pour le moule secondaire 38.To achieve the crosslinking of the high gas permeability polymer, it is possible, for example, to mix the high permeability polymer with the fluid gas 37 with a crosslinking agent 44 on the primary mold 27 and then to heat said mixture on the primary mold 27. In a sixth step of the method illustrated in FIG. 10, the secondary mold 38 is placed in a suction enclosure 45 opposite a counter mold 46. In one embodiment of the method according to the invention, the counter mold 46 may be formed by crosslinking. a polymer with a high permeability to the fluid gas 37 in a manner similar to that just described for the secondary mold 38.

Dans un autre mode de réalisation, le contre moule 46 peut être fabriqué par action mécanique, par exemple par retrait de matière d'une pièce de polymère, par des procédés d'usinage, ou par dépôt de matière, par exemple par impression tridimensionnelle de polymère.In another embodiment, counter mold 46 may be manufactured by mechanical action, for example by removing material from a piece of polymer, by machining methods, or by deposition of material, for example by three-dimensional printing of polymer.

La figure 9 illustre un mode de réalisation d'un contre moule 46 dans lequel le contre moule 46 comporte un plateau central 47 entouré d'une dépression 48. La dépression 48 constitue alors en particulier une forme inversée du support de rigidification 15 d'un filtre 4 selon l'invention. Ainsi en particulier, le plateau central 47 peut présenter une face d'extension 49 sensiblement plane et la dépression 48 présenter une profondeur axiale, mesurée selon une direction axiale D perpendiculaire à la face d'extension 49, sensiblement comprise entre cent micromètres et un millimètre et de préférence de l'ordre de cinq cent micromètres. La dépression 48 peut présenter une forme générale en anneau circulaire ou polygonal ayant un encombrement transversal intérieur sensiblement compris entre cinq et dix millimètres et un encombrement transversal extérieur sensiblement compris entre dix et vingt millimètres. Le moule secondaire 38 et le contre moule 46 peuvent être placés en regard l'un de l'autre et en contact intime sur une portion au moins de leur faces en regard. La face d'extension 49 du contre moule 46 et la face de moulage 40 du moule secondaire 38 définissent entre elles un espace intérieur creux de moulage 50. Plus particulièrement, l'extrémité libre 42 des motifs en saillie 39 du moule secondaire 38 peut venir en contact intime avec la face d'extension 49 du contre moule 46. Un écartement entre la face d'extension 49 du contre moule 46 et la face de moulage 40 du moule secondaire 38 est par exemple sensiblement compris entre vingt et soixante-cinq micromètres et de préférence entre trente et cinquante micromètres. Dans une septième étape du procédé illustrée figure 10, on applique une dépression du gaz contenu dans l'enceinte d'aspiration 45 et on injecte dans l'enceinte d'aspiration 45, entre le moule secondaire 38 et le contre moule 46, une composition biocompatible réticulable à l'aide de moyens d'injection 51.FIG. 9 illustrates an embodiment of a counter mold 46 in which the counter mold 46 comprises a central plate 47 surrounded by a depression 48. The depression 48 then constitutes in particular an inverted shape of the stiffening support 15 of a filter 4 according to the invention. Thus, in particular, the central plate 47 may have a substantially flat extension face 49 and the depression 48 may have an axial depth, measured in an axial direction D perpendicular to the extension face 49, substantially between one hundred microns and one millimeter and preferably of the order of five hundred micrometers. The depression 48 may have a generally circular or polygonal ring shape having an internal transverse bulk substantially between five and ten millimeters and an external transverse bulk substantially between ten and twenty millimeters. The secondary mold 38 and the counter mold 46 may be placed facing each other and in intimate contact on at least a portion of their facing faces. The extension face 49 of the counter mold 46 and the molding face 40 of the secondary mold 38 define between them a hollow molded interior space 50. More particularly, the free end 42 of the projecting patterns 39 of the secondary mold 38 may come in intimate contact with the extension face 49 of the counter mold 46. A spacing between the extension face 49 of the counter mold 46 and the molding face 40 of the secondary mold 38 is for example substantially between twenty and sixty-five micrometers and preferably between thirty and fifty micrometers. In a seventh step of the process illustrated in FIG. 10, a vacuum of the gas contained in the suction enclosure 45 is applied and injected into the suction enclosure 45, between the secondary mold 38 and the counter mold 46, a composition biocompatible crosslinkable using injection means 51.

L'enceinte d'aspiration 45 est ainsi en particulier munie de moyens d'aspiration 52 aptes à créer une dépression du gaz dans ladite enceinte. Le moule secondaire 38, et le cas échéant le contre moule 46, étant constitué(s) en polymère à haute perméabilité au gaz, la dépression appliquée à l'enceinte d'aspiration 45 est en particulier apte à disposer la composition biocompatible réticulable en contact intime avec les motifs en saillie 39 du moule secondaire 38. Plus généralement, la composition biocompatible réticulable peut ainsi être disposée en contact intime avec la face d'extension 49 du contre moule 46 et la face de moulage 40 du moule secondaire 38 et peut remplir l'espace intérieur creux de moulage 50. La composition biocompatible réticulable est telle que décrite ci-avant et n'est pas décrite à nouveau ici. Enfin, dans une huitième étape du procédé, on forme une membrane de filtration 8 et un support de rigidification 15 d'un filtre 4 autoporteur biocompatible en une unique pièce rigide autoporteuse par une réticulation de la composition biocompatible réticulable entre le moule secondaire 38 et le contre moule 46. La réticulation de la composition biocompatible réticulable peut être mise en oeuvre des différentes façons détaillées ci-avant.The suction enclosure 45 is thus in particular provided with suction means 52 able to create a depression of the gas in said enclosure. The secondary mold 38, and if necessary the counter mold 46, consisting of polymer with high gas permeability, the vacuum applied to the suction enclosure 45 is in particular adapted to have the crosslinkable biocompatible composition in contact intimate with the protruding patterns 39 of the secondary mold 38. More generally, the curable biocompatible composition can thus be disposed in intimate contact with the extension face 49 of the counter mold 46 and the molding face 40 of the secondary mold 38 and can fill the hollow mold interior space 50. The crosslinkable biocompatible composition is as described above and is not described again here. Finally, in an eighth step of the process, a filtration membrane 8 and a stiffening support 15 of a biocompatible self-supporting filter 4 are formed into a single, self-supporting rigid part by crosslinking the crosslinkable biocompatible composition between the secondary mold 38 and the against mold 46. The crosslinking of the crosslinkable biocompatible composition can be carried out in the various ways detailed above.

Ainsi en particulier, dans un mode de réalisation dans lequel la composition biocompatible réticulable comprend au moins un composant biocompatible photoréticulable de manière covalente, par exemple un polyéthylène glycol, on peut réticuler la composition biocompatible réticulable par une illumination par rayonnements ultraviolets 53.45 Dans une étape ultérieure du procédé, on peut procéder à une oxydation par plasma de la membrane de filtration (8) et/ou du support de rigidification (15). L'oxydation par plasma peut être réalisée sur la face d'entrée de liquide (9) et/ou la face de sortie de liquide (10) de la membrane de filtration (8) et/ou la surface intérieure de pore (12) des pores de filtration (11). Une telle oxydation par plasma permet en particulier de conférer un caractère hydrophile aux faces et surfaces traitées. Dans une autre étape ultérieure, on peut greffer une couche de poly-D-Lysine ou poly-L-Lysine sur la membrane de filtration (8) et/ou le support de rigidification (15). On peut de la sorte obtenir par exemple une couche de copolymère greffé de poly-L-Lysine et de polyéthylène glycol (PLL-g-PEG). La greffe de poly-D-Lysine ou poly-L- Lysine peut être réalisée sur la face d'entrée de liquide (9) et/ou la face de sortie de liquide (10) de la membrane de filtration (8) et/ou la surface intérieure de pore (12) des pores de filtration (11). Une telle greffe permet en particulier d'augmenter l'attachement de cellules aux faces et surfaces traitées. Une telle greffe peut en outre permettre d'améliorer l'adsorption de sérum ou de protéines de matrice extracellulaire sur un substrat de culture.Thus, in particular, in one embodiment in which the crosslinkable biocompatible composition comprises at least one biocompatible component which is covalently photocrosslinkable, for example a polyethylene glycol, the crosslinkable biocompatible composition can be crosslinked by ultraviolet radiation illumination 53.45 In a subsequent step of the process, plasma oxidation of the filtration membrane (8) and / or the stiffening support (15) can be carried out. The plasma oxidation can be carried out on the liquid inlet face (9) and / or the liquid outlet face (10) of the filtration membrane (8) and / or the inner pore surface (12). filtration pores (11). Such plasma oxidation makes it possible in particular to confer a hydrophilic character to the treated faces and surfaces. In another subsequent step, a layer of poly-D-Lysine or poly-L-Lysine can be grafted onto the filtration membrane (8) and / or the stiffening support (15). For example, a graft copolymer layer of poly-L-Lysine and polyethylene glycol (PLL-g-PEG) can be obtained. The poly-D-Lysine or poly-L-Lysine graft can be performed on the liquid inlet face (9) and / or the liquid outlet face (10) of the filtration membrane (8) and / or the inner pore surface (12) of the filtration pores (11). Such a graft makes it possible in particular to increase the attachment of cells to the treated faces and surfaces. Such a graft may furthermore make it possible to improve the adsorption of serum or extracellular matrix proteins on a culture substrate.

Dans la description qui est faite ci-avant d'un mode de réalisation d'un procédé de fabrication selon l'invention, les étapes du procédé sont numérotées en « première étape », « deuxième étape », « troisième étape », etc. Cette numérotation vise à clarifier la lecture du procédé mais ne doivent pas être comprises comme ayant un caractère limitatif concernant le nombre et la position précise des étapes dans un procédé de fabrication selon l'invention. Ainsi on comprend que des étapes intercalaires pourront être rajoutées au procédé décrit ci-avant, des étapes pourront également être échangées ou conduite simultanément dans des variantes du procédé.In the description which is made above of an embodiment of a manufacturing method according to the invention, the process steps are numbered in "first step", "second step", "third step", etc. This numbering is intended to clarify the reading of the process but should not be understood as having a limiting character concerning the number and the precise position of the steps in a manufacturing method according to the invention. Thus it is understood that intermediate steps may be added to the process described above, steps may also be exchanged or conducted simultaneously in variants of the method.

Claims (35)

REVENDICATIONS1. Filtre (4) biocompatible, notamment pour isoler et cultiver des cellules (2) contenues dans un échantillon liquide (3), comprenant une membrane de filtration (8) s'étendant sensiblement selon un plan d'extension et comportant o une face d'entrée de liquide (9) et une face de sortie de liquide (10), et o une pluralité de pores de filtration (11) traversants reliant chacun la face d'entrée de liquide (9) à la face de sortie de liquide (10) au moyen d'une surface intérieure de pore (12), les pores de filtration (11) comportant chacun une ouverture d'entrée (13) à l'endroit de la face d'entrée de liquide (9) et une ouverture de sortie (14) à l'endroit de la face de sortie de liquide (10), caractérisé en ce que - la membrane de filtration (8) est formée en une composition biocompatible réticulée, et - le filtre (4) comporte un support de rigidification (15) sur lequel est montée la membrane de filtration (8).REVENDICATIONS1. Biocompatible filter (4), in particular for isolating and cultivating cells (2) contained in a liquid sample (3), comprising a filtration membrane (8) extending substantially in an extension plane and comprising a face of liquid inlet (9) and a liquid outlet face (10), and o a plurality of filtering pores (11) each connecting the liquid inlet face (9) to the liquid outlet face (10). ) by means of an inner pore surface (12), the filtering pores (11) each having an inlet opening (13) at the location of the liquid inlet face (9) and an opening of outlet (14) at the location of the liquid outlet face (10), characterized in that - the filtering membrane (8) is formed of a crosslinked biocompatible composition, and - the filter (4) comprises a carrier of stiffening (15) on which is mounted the filtration membrane (8). 2. Filtre (4) selon la revendication 1, dans lequel le support de rigidification (15) est formé en une composition biocompatible réticulée.The filter (4) of claim 1, wherein the stiffening support (15) is formed of a crosslinked biocompatible composition. 3. Filtre (4) selon la revendication 2, dans lequel la membrane de filtration (8) et le support de rigidification (15) sont une unique pièce formée en une composition biocompatible réticulée, de sorte à constituer un ensemble rigide autoporteur.3. Filter (4) according to claim 2, wherein the filtration membrane (8) and the stiffening support (15) are a single piece formed of a crosslinked biocompatible composition, so as to constitute a self-supporting rigid assembly. 4. Filtre (4) selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans lequel la composition biocompatible réticulée comprend au moins un composant biocompatible photoréticulé de manière covalente.4. Filter (4) according to any one of claims 1 to 3, wherein the crosslinked biocompatible composition comprises at least one biocompatible component photocured covalently. 5. Filtre (4) selon la revendication 4, dans lequel le composant biocompatible photoréticulé de manière covalente est un polyéthylène glycol.5. Filter (4) according to claim 4, wherein the biocompatible component covalently photocrosslinked is a polyethylene glycol. 6. Filtre (4) selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, dans lequel la composition biocompatible réticulée comprend au moins un composant biocompatible réticulé ioniquement.The filter (4) according to any one of claims 1 to 5, wherein the crosslinked biocompatible composition comprises at least one biocompatible ionically crosslinked component. 7. Filtre (4) selon la revendication 6, dans lequel le composant biocompatible réticulé ioniquement est choisi parmi un oligosaccharide, un polysaccharide et un collagène réticulé.The filter (4) of claim 6 wherein the biocompatible ionically crosslinked component is selected from an oligosaccharide, a polysaccharide and a crosslinked collagen. 8. Filtre (4) selon la revendication 7, dans lequel le composant biocompatible réticulé ioniquement est choisi parmi de l'alginate et du saccharose.The filter (4) of claim 7, wherein the biocompatible ionically crosslinked component is selected from alginate and sucrose. 9. Filtre (4) selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, dans lequel le support de rigidification (15) entoure circonférentiellement la membrane de filtration (8) dans le plan d'extension.9. Filter (4) according to any one of claims 1 to 8, wherein the stiffening support (15) circumferentially surrounds the filtration membrane (8) in the extension plane. 10. Filtre (4) selon la revendication l'une quelconque des revendications 1 à 9, dans lequel - la face d'entrée de liquide (9) et la face de sortie de liquide (10) de la membrane de filtration (8) présentent chacune une forme générale surfacique plate, sont sensiblement parallèles entre elles et sont séparées par une épaisseur de la membrane, mesurée selon une direction axiale perpendiculaire à la face d'entrée de liquide (9) et la face de sortie de liquide (10) et - le support de rigidification (15) présente un encombrement axial, mesuré selon la direction axiale, supérieur à l'épaisseur de la membrane.The filter (4) according to claim any one of claims 1 to 9, wherein - the liquid inlet face (9) and the liquid outlet face (10) of the filtration membrane (8) each have a generally planar surface shape, are substantially parallel to each other and are separated by a thickness of the membrane, measured in an axial direction perpendicular to the liquid inlet face (9) and the liquid outlet face (10) and - the stiffening support (15) has an axial size, measured in the axial direction, greater than the thickness of the membrane. 11. Filtre (4) selon la revendication 10, dans lequel l'encombrement axial du support est sensiblement compris entre cent micromètres et un millimètre et de préférence de l'ordre de cinq cent micromètres.11. Filter (4) according to claim 10, wherein the axial size of the support is substantially between one hundred microns and one millimeter and preferably of the order of five hundred micrometers. 12. Filtre (4) selon l'une quelconque des revendications 10 et 11, dans lequel l'épaisseur de la membrane est sensiblement comprise entre vingt et soixante-cinq micromètres et de préférence entre vingt et trente micromètres.12. Filter (4) according to any one of claims 10 and 11, wherein the thickness of the membrane is substantially between twenty and sixty-five microns and preferably between twenty and thirty microns. 13. Filtre (4) selon l'une quelconque des revendications 1 à 12, dans lequel le support de rigidification (15) présente une forme générale en anneau circulaire ou polygonal ayant un encombrement transversal intérieur sensiblement compris entre cinq et dix millimètres et un encombrement transversal extérieur sensiblement compris entre dix et vingt millimètres.13. Filter (4) according to any one of claims 1 to 12, wherein the stiffening support (15) has a generally circular or polygonal ring shape having an internal transverse bulk substantially between five and ten millimeters and a footprint outer transverse substantially between ten and twenty millimeters. 14. Filtre (4) selon l'une quelconque des revendications 1 à 13, dans lequel la face d'entrée de liquide (9) et la face de sortie de liquide (10) de la membrane de filtration (8) présentent chacune une forme générale de disque ou de polygone ayant un encombrement transversal sensiblement compris entre cinq et dix millimètresThe filter (4) according to any one of claims 1 to 13, wherein the liquid inlet face (9) and the liquid outlet face (10) of the filtration membrane (8) each have a general shape of disc or polygon having a transverse bulk substantially between five and ten millimeters 15. Filtre (4) selon l'une quelconque des revendications 1 à 14, dans lequel le support de rigidification (15) comporte un revêtement adhésif (16) inactif, en particulier une colle activable par pression ou une colle recouverte d'une membrane de protection détachable, de façon à permettre un encollage ultérieur du support de rigidification (15) sur un support d'observation.The filter (4) according to any one of claims 1 to 14, wherein the stiffening support (15) comprises an inactive adhesive coating (16), in particular a pressure activatable adhesive or a membrane-covered adhesive. detachable protection, so as to allow subsequent gluing of the stiffening support (15) on an observation support. 16. Filtre (4) selon l'une quelconque des revendications 1 à 15, dans lequel une dimension maximale de l'ouverture de sortie (14) de chaque pore de filtration est supérieure à une dimension maximale de l'ouverture d'entrée (13) dudit pore.The filter (4) according to any one of claims 1 to 15, wherein a maximum dimension of the outlet opening (14) of each filter pore is greater than a maximum dimension of the inlet opening ( 13) of said pore. 17. Dispositif de filtration (1), notamment pour isoler des cellules (2) contenues dans un échantillon liquide (3), comportant un filtre (4) selon l'une quelconque des revendications 1 à 16, dans lequel le filtre (4) est monté, par son support de rigidification (15), dans le dispositif de filtration (1), entre un moyen de fourniture de liquide (5) du dispositif de filtration (1), apte à fournir du liquide d'un échantillon de liquide à l'endroit de la face d'entrée de liquide (9) de la membrane de filtration (8), d'une part, et un moyen d'absorption de liquide (6) du dispositif de filtration (1), apte à absorber du liquide d'un échantillon de liquide à l'endroit de la face de sortie de liquide (10) de la membrane de filtration (8), d'autre part.17. Filtration device (1), in particular for isolating cells (2) contained in a liquid sample (3), comprising a filter (4) according to any one of claims 1 to 16, wherein the filter (4) is mounted, by its stiffening support (15), in the filtering device (1), between a liquid supply means (5) of the filtering device (1), capable of supplying liquid from a sample of liquid at the location of the liquid inlet face (9) of the filtering membrane (8), on the one hand, and liquid absorbing means (6) of the filtering device (1), suitable for absorbing liquid from a sample of liquid at the location of the liquid outlet face (10) of the filter membrane (8), on the other hand. 18. Procédé de fabrication d'un filtre (4) autoporteur biocompatible dans lequel : - on dispose d'un masque (17) plan transparent comportant un réseau (18) de motifs optiques (19), - on dispose une résine photosensible fluide (22) sur le masque (17), - on forme un moule primaire (27) comportant des motifs en creux (28) par une illumination inclinée/rotative de la résine photosensible sur le masque (17), - on dispose sur le moule primaire (27) un polymère à haute perméabilité au gaz fluide (37), - on forme un moule secondaire (38) comportant des motifs en saillie (39) par une réticulation du polymère à haute perméabilité au gaz sur le moule primaire (27), - on dispose le moule secondaire (38) dans une enceinte d'aspiration (45) en regard d'un contre moule (46), - on applique une dépression de gaz à l'enceinte d'aspiration (45) et on injecte dans l'enceinte d'aspiration (45), entre le moule secondaire (38) et le contre moule (46), une composition biocompatibleréticulable, de sorte à disposer la composition biocompatible réticulable en contact intime avec les motifs en saillie (39) du moule secondaire (38), - on forme une membrane de filtration (8) d'un filtre (4) biocompatible par réticulation de la composition biocompatible réticulable entre le moule secondaire (38) et le contre moule (46), et - on forme un support de rigidification (15) du filtre (4) biocompatible sur lequel est montée la membrane de filtration (8).18. A method of manufacturing a biocompatible self-supporting filter (4) in which: - a transparent plane mask (17) having a network (18) of optical patterns (19) is present, - a fluid photosensitive resin ( 22) on the mask (17), - a primary mold (27) is formed with recessed patterns (28) by inclined / rotational illumination of the photosensitive resin on the mask (17), - is provided on the primary mold (27) a high fluid gas permeability polymer (37), a secondary mold (38) having protruding patterns (39) is formed by crosslinking the high gas permeability polymer on the primary mold (27), the secondary mold (38) is placed in a suction enclosure (45) facing a counter-mold (46); a vacuum is applied to the suction enclosure (45) and injected into the suction enclosure (45), between the secondary mold (38) and the counter mold (46), a biocompatibly crosslinkable composition e, so as to have the crosslinkable biocompatible composition in intimate contact with the protruding patterns (39) of the secondary mold (38), - a filter membrane (8) of a biocompatible filter (4) is formed by cross-linking the biocompatible composition crosslinkable between the secondary mold (38) and the mold against (46), and - a stiffening support (15) is formed of the biocompatible filter (4) on which is mounted the filtration membrane (8). 19. Procédé selon la revendication 18, on forme la membrane de filtration (8) et le support de rigidification (15) du filtre (4) biocompatible en une unique pièce constituant un ensemble rigide autoporteur, par réticulation de la composition biocompatible réticulable entre le moule secondaire (38) et le contre moule (46).19. The method of claim 18, forming the filter membrane (8) and the stiffening support (15) of the biocompatible filter (4) in a single piece constituting a self-supporting rigid assembly, by crosslinking the crosslinkable biocompatible composition between the secondary mold (38) and counter mold (46). 20. Procédé selon l'une quelconque des revendications 18 et 19, dans lequel on forme le contre moule (46) par réticulation d'un polymère à haute perméabilité au gaz fluide (37).20. A method according to any one of claims 18 and 19, wherein the counter mold (46) is formed by crosslinking a polymer with high permeability to the fluid gas (37). 21. Procédé selon la revendication 20, dans lequel le polymère à haute perméabilité au gaz fluide (37) est un siloxane.The method of claim 20, wherein the high fluid gas permeability polymer (37) is a siloxane. 22. Procédé selon la revendication 21, dans lequel le siloxane est le polydiméthylsiloxane.22. The method of claim 21, wherein the siloxane is polydimethylsiloxane. 23. Procédé selon l'une quelconque des revendications 18 à 22, dans lequel la composition biocompatible réticulable comprend au moins un composant biocompatible photoréticulable de manière covalente.The method of any one of claims 18 to 22, wherein the crosslinkable biocompatible composition comprises at least one biocompatible component covalently photocrosslinkable. 24. Procédé selon la revendication 23, dans lequel le composant biocompatible photoréticulable de manière covalente est un polyéthylène glycol.The method of claim 23, wherein the biocompatible component covalently photocrosslinkable is a polyethylene glycol. 25. Procédé selon l'une quelconque des revendications 23 et 24, dans lequel on réticule la composition biocompatible réticulable par une illumination par rayonnements ultraviolets (53).25. The method according to claim 23, wherein the crosslinkable biocompatible composition is crosslinked by ultraviolet radiation illumination (53). 26. Procédé selon l'une quelconque des revendications 18 à 25, dans lequel la composition biocompatible réticulable comprend au moins un composant biocompatible réticulable ioniquement.The method of any one of claims 18 to 25, wherein the crosslinkable biocompatible composition comprises at least one ionically crosslinkable biocompatible component. 27. Procédé selon la revendication 26, dans lequel le composant biocompatible réticulable ioniquement est choisi parmi un oligosaccharide, un polysaccharide ou un collagène réticulé.27. The method of claim 26, wherein the ionically crosslinkable biocompatible component is selected from a cross-linked oligosaccharide, polysaccharide or collagen. 28. Procédé selon la revendication 27, dans lequel le composant biocompatible réticulable ioniquement est choisi parmi de l'alginate et du saccharose.The method of claim 27, wherein the ionically crosslinkable biocompatible component is selected from alginate and sucrose. 29. Procédé selon l'une quelconque des revendications 18 à 28, dans lequel chaque motif optique (19) présente une forme générale circulaire ou ovale.29. A method according to any one of claims 18 to 28, wherein each optical pattern (19) has a generally circular or oval shape. 30. Procédé selon l'une quelconque des revendications 18 à 29, dans lequel les motifs optiques (19) sont disposés dans le réseau (18) en un arrangement hexagonal.30. A method according to any one of claims 18 to 29, wherein the optical patterns (19) are arranged in the array (18) in a hexagonal arrangement. 31. Procédé selon l'une quelconque des revendications 18 à 30, dans lequel les motifs optiques (19) présentent une densité surfacique de l'ordre de 1 x 105 motif/cm2.31. A method according to any one of claims 18 to 30, wherein the optical units (19) have a surface density of the order of 1 x 105 pattern / cm2. 32. Procédé selon l'une quelconque des revendications 18 à 31, dans lequel les motifs optiques (19) sont des motifs transparents (23) séparés par des zones opaques (24), et dans lequel la résine photosensible (22) est une résine photosensible positive.The method of any one of claims 18 to 31, wherein the optical patterns (19) are transparent patterns (23) separated by opaque areas (24), and wherein the photosensitive resin (22) is a resin positive photosensitive. 33. Procédé selon l'une quelconque des revendications 18 à 31, dans lequel les motifs optiques (19) sont des motifs opaques (25) séparés par des zones transparentes (26), et dans lequel la résine photosensible (22) est une résine photosensible négative.The method of any one of claims 18 to 31, wherein the optical patterns (19) are opaque patterns (25) separated by transparent areas (26), and wherein the photosensitive resin (22) is a resin negative photosensitive. 34. Procédé selon l'une quelconque des revendications 18 à 33, dans lequel le contre moule (46) comporte un plateau central (47) entouré d'une dépression (48), le plateau central (47) présentant une face d'extension (49) sensiblement plane, la dépression (48) présentant une profondeur axiale, mesurée selon une direction axiale (D) perpendiculaire à la face d'extension (49), sensiblement comprise entre cent micromètres et un millimètre et de préférence de l'ordre de cinq cent micromètres.34. A method according to any one of claims 18 to 33, wherein the counter mold (46) comprises a central plate (47) surrounded by a depression (48), the central plate (47) having an extension face (49) substantially planar, the depression (48) having an axial depth, measured in an axial direction (D) perpendicular to the extension face (49), substantially between one hundred micrometers and one millimeter and preferably of the order five hundred micrometers. 35. Procédé de fabrication d'un filtre (4) selon la revendication 34, dans lequel la dépression (48) présente une forme générale en anneau circulaire ou polygonal ayant un encombrement transversale intérieure sensiblement compris entre cinq et dix millimètres et un encombrement transversale extérieure sensiblement compris entre dix et vingt millimètres.35. A method of manufacturing a filter (4) according to claim 34, wherein the depression (48) has a generally circular or polygonal ring shape having an internal transverse bulk substantially between five and ten millimeters and an external transverse bulk substantially between ten and twenty millimeters.