FR2920300A1 - Utilisation d'une association hesperidine et microorganisme pour agir sur la fonction barriere de la peau. - Google Patents

Abstract

La présente invention concerne l'utilisation cosmétique d'au moins une quantité efficace d'hespéridine ou de l'un de ses dérivés en association avec au moins une quantité efficace d'au moins un microorganisme, notamment probiotique, l'une de ses fractions ou l'un de ses métabolites, comme agent pour prévenir une diminution de et/ou pour renforcer la fonction barrière de la peau.

Description

La présente invention concerne l'utilisation, notamment cosmétique, d'une association, ladite association étant destinée à prévenir une diminution de et/ou renforcer la fonction barrière de la peau. La présente invention concerne également la prévention et/ou le traitement des signes cutanés du vieillissement et/ou du photovieillissement, notamment de ceux induits ou exacerbés par la pollution. La peau humaine est constituée de deux compartiments, à savoir un compartiment profond, le derme et un compartiment superficiel, l'épiderme. Elle constitue une barrière contre les agressions extérieures, notamment chimiques, mécaniques ou infectieuses, et à ce titre un certain nombre de réactions de défense contre les facteurs environnementaux (climat, rayons ultraviolets, tabac,

.) et/ou les xénobiotiques, comme par exemple les micro-organismes, se produisent à son niveau. Cette propriété, appelée fonction barrière, est principalement assurée par la couche la plus superficielle de l'épiderme, à savoir la couche cornée, appelée le stratum corneum...DTD: Les cellules constituant l'épiderme (majoritairement les kératinocytes, mais aussi les mélanocytes et les cellules de Langerhans) sont délimitées par une structure lipidique intercellulaire. Chacun de ces types cellulaires contribue par ses fonctions propres au rôle essentiel joué dans l'organisme par la peau. En particulier, les kératinocytes subissent un processus de maturation continu et orienté qui, des kératinocytes se trouvant dans la couche basale de l'épiderme, aboutit à la formation de cornéocytes, qui sont des cellules mortes totalement kératinisées constituées de kératinocytes au stade terminal de leur différenciation. Au cours de la différenciation, les phospholipides dont le rôle consiste à élaborer la structure fluide des membranes cellulaires des couches vivantes de l'épiderme, sont peu à peu remplacés par un mélange composé en majeure partie d'acides gras, de cholestérol et de sphingolipides (céramides). Ces lipides, qui sont organisés en phases cristal liquide lamellaires spécifiques, forment le ciment intracellulaire du stratum corneum et sont essentiels pour les échanges en eau et la fonction barrière de l'épiderme. Ainsi, la structure lamellaire des lipides du domaine lipidique de l'épiderme et les cornéocytes participent à la fonction barrière épidermique. Il est manifeste que la qualité de la barrière cutanée et des muqueuses est dépendante de mécanismes biologiques endogènes complexes faisant intervenir de nombreux facteurs de croissance, des molécules d'adhésion, des hormones et des enzymes du métabolisme lipidique. Ainsi une altération de la barrière cutanée peut se produire en présence d'agressions externes de type agents irritants (détergents, acides, bases, oxydants, réducteurs, solvants concentrés, gaz ou fumées toxiques), sollicitations mécaniques (frottements, chocs, abrasion, arrachement de la surface, projection de poussières, de particules, rasage ou épilation), déséquilibres thermiques ou climatiques (froid, sécheresse, radiations), xénobiotiques (micro-organismes indésirable, allergènes) ou d'agressions internes de type stress psychologique.

Cette altération de la barrière cutanée peut notamment se traduire par un inconfort cutané, des phénomènes sensoriels et notamment des phénomènes désagréables. L'homme peut alors éprouver une sensation d'inconfort cutané qui peut se manifester notamment par des picotements, des tiraillements, des échauffements, des démangeaisons. Ces sensations d'inconfort cutané sont plus fréquentes dans les zones les plus exposées de l'organisme, à savoir les mains, les pieds, le visage, et le cuir chevelu. Elles peuvent survenir notamment sur des zones soumises à certains gestes d'hygiène quotidienne ou fréquemment renouvelés tels que le rasage, l'épilation, la détersion par des produits de toilette ou des produits ménagers, l'application d'adhésifs (pansements, patchs, fixation de prothèses) ou dans le cas de gestes sportifs, professionnels ou simplement liés au mode de vie et à l'utilisation de vêtements, d'outils ou d'équipements générant des frottements localisés. Elles peuvent également être amplifiées par le stress psychologique. Ces sensations d'inconfort cutané concernent toutes les personnes, et en particulier : - les personnes à peau dite fragile ou délicate et vulnérable se déséquilibrant rapidement lors de variations de la température ou de l'humidité relative de grande amplitude (cas des peaux de bébé par exemple) ; - les personnes à peau dite `fragilisée', regroupant notamment - les personnes dont le film hydro-lipidique protecteur composé de sueur, de sébum et de facteurs d'hydratation naturelle se raréfie, comme c'est le cas pour les personnes âgées de plus de 60 ans et notamment dans le cadre du grand âge (au moins 75 ans) ; - les personnes dont la composition du film hydro-lipidique est modifiée, comme c'est le cas des personnes diabétiques, ou dialysées, ou atteintes de certaines maladies. On pourra également parler de personnes à peau agressée pour les peaux 5 rasées par exemple. On recherche donc à prévenir une diminution de et/ou renforcer la fonction barrière cutanée pour : - prévenir et/ou diminuer les sensations d'inconfort cutané, de picotements, tiraillements, échauffements et démangeaisons, en particulier chez les personnes à peau 10 fragile ou délicate (par exemple les bébés) ; ou les personnes à peau fragilisée (telles que les personnes âgées d'au moins 60 ans et en particulier les personnes d'au moins 75 ans), ou les personnes dont la composition du film hydro-lipidique est modifiée, comme c'est le cas des personnes diabétiques, ou dialysées, ou atteintes de certaines maladies, - et/ou améliorer la fonction barrière cutanée de peaux atopiques et/ou 15 prolonger les phases de rémission entre des crises aiguës de ce type d'affection. Par ailleurs, au cours du temps, il apparaît différents signes sur la peau, très caractéristiques du vieillissement intrinsèque, se traduisant notamment par une modification de la structure et des fonctions cutanées. Une autre composante du vieillissement est d'origine exogène (Yaar et 20 Gilchrest, J Invest Dermatol, 1998). En effet, le vieillissement peut-être accéléré par des facteurs environnementaux tels qu'une exposition répétée de la peau à la lumière solaire, et notamment aux rayonnements ultraviolets A et B, ou à la pollution. Ainsi, différents types de produits chimiques, xénobiotiques et particules composent la pollution urbaine. Parmi ces composés, trois grandes catégories de polluants peuvent exercer des effets 25 délétères sur la peau : les gaz, les métaux lourds et les particules, qui sont les résidus de combustion sur lesquelles sont adsorbés de très nombreux composés organiques. Qui plus est, dans la pollution urbaine, l'exposition concomitante à 03 et aux UV peut causer un stress oxydatif synergique. De même, on peut penser qu'il existe une synergie d'action entre l'ozone et les 30 composés organiques issus de la combustion. Pour des raisons évidentes, on cherche donc de manière permanente à améliorer la résistance de la peau contre les gaz, les métaux lourds, les composés organiques résidus de combustion et leurs effets délétères ù maximalisés par les UV ù rencontrés notamment dans la pollution urbaine, agissant de manière isolés ou combinés, et de fait pour ralentir les signes d'irritation, de vieillissement et/ou du photovieillissement, notamment induits par l'altération tissulaire induite par lesdits polluants. Aussi, l'utilisation de substances qui auraient la capacité de protéger les cellules de la peau et la matrice extracellulaire à l'égard des agressions précitées pourrait également réduire les signes et altérations liés au vieillissement et/ou au photovieillissement, notamment ceux induits ou exacerbés par la pollution.

Dans ce cadre, les inventeurs ont découvert que l'association d'hespéridine ou de l'un de ses dérivés et d'au moins un microorganisme, notamment probiotique, de l'une des ses fractions ou de l'un de ses métabolites était capable de prévenir une diminution de et/ou de renforcer la fonction barrière de la peau. L'utilisation de flavonoïdes, dont l'hespéridine, pour augmenter la prolifération cellulaire, et traiter notamment les cicatrices, est déjà connue de WO 03/057210. WO 2005/058255 décrit par ailleurs l'action de flavanones particuliers, dont l'hespéridine, pour traiter les désordres de la peau et des cheveux, en particulier via les propriétés cytoprotectives et anti-inflammatoires de ceux-ci.

Enfin, le document EP 0 774 249 tire profit d'un effet synergique constaté d'une combinaison de flavanones spécifiques, d'une part, ou d'une combinaison de flavanones spécifiques avec une céramide particulière, d'autre part, sur la différenciation des kératinocytes. Toutefois, l'association d'une quantité efficace d'hespéridine ou de l'un de ses dérivés et d'une quantité efficace d'au moins un microorganisme, notamment probiotique, de l'une de ses fractions ou de l'un de ses métabolites, n'avait jusqu'à présent jamais être utilisée pour prévenir une diminution de et/ou pour renforcer la fonction barrière de la peau. De par la prévention d'une diminution et/ou le renforcement de la fonction barrière cutanée induite par l'administration d'une association selon l'invention, toutes les peaux et en particulier les peaux fragiles ou fragilisées (par exemple les peaux de bébé, de personnes d'au moins 60 ans, de préférence d'au moins 75 ans, de personnes diabétiques, ou dialysées), sont mieux protégées des agressions extérieures, chimiques, mécaniques, ou infectieuses. Les inventeurs ont en particulier démontré sur un modèle de peau reconstruite une amélioration de la fonction barrière de la peau après traitement de ladite peau par l'association selon l'invention.

L'invention concerne ainsi selon un premier de ses aspects, l'utilisation cosmétique d'au moins une quantité efficace d'hespéridine ou de l'un de ses dérivés en association avec au moins une quantité efficace d'au moins un microorganisme, notamment probiotique, l'une de ses fractions ou l'un de ses métabolites, comme agent pour prévenir une diminution de et/ou renforcer la fonction barrière de la peau. Au sens de la présente invention, le terme prévenir entend le fait de diminuer le risque de survenue d'un phénomène. Au sens de l'invention, l'expression prévenir une diminution de la fonction barrière de la peau signifie prévenir toute altération de ladite fonction barrière en deçà de son niveau d'efficacité naturelle et qui aurait pour conséquence d'initier la manifestation d'un ou plusieurs troubles cutanés tels que définis précédemment. L'association considérée selon l'invention permet ainsi d'assurer le maintien de la fonction barrière de la peau à son niveau d'efficacité normale, c'est-à-dire le niveau auquel elle assure sa fonction de protection de l'organisme. Au sens de l'invention, l'expression renforcer la fonction barrière de la peau signifie améliorer la fonction barrière de la peau. Cette amélioration est en particulier déterminante lorsque la fonction barrière de la peau est altérée et qu'il est nécessaire de la rétablir.

Elle peut être également avantageuse lorsque l'on souhaite consolider la fonction barrière native de la peau, afin de conférer notamment à l'organisme une meilleure résistance aux agressions extérieures vis-à-vis desquelles il est susceptible d'être exposé. L'invention concerne également, selon un autre de ses aspects, l'utilisation cosmétique d'au moins une quantité efficace d'hespéridine ou de l'un de ses dérivés en association avec au moins une quantité efficace d'au moins un microorganisme, notamment probiotique, l'une de ses fractions ou l'un de ses métabolites, comme agent pour renforcer la protection de la peau vis-à-vis d'agressions extérieures. En particulier, ladite association et/ou une composition contenant une telle association peuvent être destinées à prévenir et/ou diminuer un inconfort cutané d'une peau, en particulier induit par un stress exogène d'origine chimique, environnementale, mécanique et/ou un stress endogène, en particulier d'une peau fragile et/ou fragilisée, telles que définies précédemment. L'inconfort cutané peut être notamment caractérisé par des tiraillements, des picotements, des échauffements et/ou des démangeaisons.

Selon un autre mode de réalisation, ladite association et/ou une composition contenant une telle association peuvent être destinées à prévenir une diminution de et/ou renforcer la fonction barrière d'une peau choisie parmi une peau fragile, une peau fragilisée et/ou une peau agressée. Dans le cadre de l'invention, l'association selon l'invention peut être utilisée pour l'application sur la peau saine, soumise ou pouvant être soumise à l'influence d'agents tels que des agents climatiques et de ce fait susceptible de manifester un inconfort cutané. Dans d'autres cas particuliers, l'association de l'invention peut être appliquée sur la peau lorsqu'elle présente des signes cliniques de déficit de la barrière cutanée, par exemple les peaux atopiques.

Ainsi l'invention a pour objet l'utilisation d'au moins une quantité efficace d'hespéridine ou de l'un de ses dérivés en association avec au moins une quantité efficace d'au moins un microorganisme, notamment probiotique, l'une de ses fractions ou l'un de ses métabolites, pour la préparation d'une composition notamment dermatologique destinée à prévenir une diminution de et/ou renforcer la fonction barrière de la peau.

Un autre aspect de la présente invention est donc l'utilisation d'au moins une quantité efficace d'hespéridine ou de l'un de ses dérivés en association avec au moins une quantité efficace d'au moins un microorganisme, notamment probiotique, l'une de ses fractions ou l'un de ses métabolites, pour la préparation d'une composition notamment dermatologique destinée à prévenir une diminution de et/ou renforcer la fonction barrière d'une peau lésée, en particulier d'une peau atopique.

L'association selon l'invention ou une composition contenant une telle association selon l'invention peuvent notamment être destinées à prolonger les phases de rémission entre des crises aiguës d'affections dermatologiques, par exemple de type atopie. Qui plus est, cette prévention d'une diminution de et/ou ce renforcement de la fonction barrière cutanée permet de la rendre plus résistante, notamment aux polluants et aux rayonnements solaires, et, de fait, de protéger les tissus vivants de la peau contre les effets délétères ù maximalisés par les UV ù des gaz, des métaux lourds et des composés organiques résidus de combustion. Les inventeurs ont ainsi découvert que l'association considérée selon l'invention pouvait manifester avantageusement une activité protectrice au niveau de la fonction barrière cutanée et permettre ainsi de limiter la pénétration des divers polluants et augmenter la résistance de la peau aux agressions. Il a ainsi également été constaté qu'une composition comprenant au moins une quantité efficace d'hespéridine ou de l'un de ses dérivés en association avec une quantité efficace d'au moins un microorganisme, notamment probiotique, l'une de ses fractions ou l'un de ses métabolites permet de préserver et de protéger la peau contre les effets nocifs de la pollution. Les inventeurs ont en outre également constaté que l'utilisation de l'association considérée selon l'invention s'avère tout particulièrement efficace, en particulier chez l'adulte, pour le traitement des signes cutanés du vieillissement et/ou du photovieillissement de la peau provoqués par une déficience de la fonction barrière, et, notamment induits ou exacerbés par la pollution, en protégeant la fonction barrière de la peau. Ainsi la présente invention concerne, selon un autre de ses aspects, une composition cosmétique et/ou dermatologique, notamment utile pour prévenir une diminution de et/ou renforcer la fonction barrière de la peau, et en particulier pour prévenir et/ou traiter les signes cutanés du vieillissement et/ou du photovieillissement, en particulier ceux induits ou exacerbés par la pollution, comprenant, dans un support physiologiquement acceptable, au moins une quantité efficace d'hespéridine ou de l'un de ses dérivés en association avec au moins une quantité efficace d'au moins un microorganisme, notamment probiotique, l'une de ses fractions ou l'un de ses métabolites.

La présente invention concerne également l'utilisation cosmétique d'au moins une quantité efficace d'hespéridine ou de l'un de ses dérivés en association avec au moins une quantité efficace d'au moins un microorganisme, notamment probiotique, l'une de ses fractions ou l'un de ses métabolites, comme agent pour prévenir et/ou traiter les signes cutanés du vieillissement et/ou du photovieillissement, en particulier induits ou exacerbés par la pollution. Elle concerne aussi, selon un autre de ses aspects, l'utilisation cosmétique d'au moins une quantité efficace d'hespéridine ou de l'un de ses dérivés en association avec au moins une quantité efficace d'au moins un microorganisme, notamment probiotique, l'une de ses fractions ou l'un de ses métabolites, à titre d'agent anti-pollution. La présente invention concerne également, selon un autre de ses aspects, l'utilisation d'au moins une quantité efficace d'hespéridine ou de l'un de ses dérivés en association avec au moins une quantité efficace d'au moins un microorganisme, notamment probiotique, l'une de ses fractions ou l'un de ses métabolites, pour la préparation d'une composition, notamment cosmétique et/ou dermatologique, destinée à prévenir et/ou traiter les signes cutanés du vieillissement et/ou du photovieillissement, notamment induits ou exacerbés par la pollution. La présente invention concerne également, selon un autre des ses aspects, un procéde de traitement cosmétique de la peau destiné à prévenir une diminution de et/ou renforcer la fonction barrière de la peau, comprenant l'administration d'au moins une quantité efficace d'hespéridine ou de l'un de ses dérivés en association avec au moins une quantité efficace d'au moins un microorganisme, notamment probiotique, l'une de ses fractions ou l'un de ses métabolites. La présente invention concerne également, selon un autre de ses aspects, un procédé de traitement cosmétique des signes cutanés du vieillissement et/ou du photovieillissement, notamment des signes induits ou exacerbés par la pollution, comprenant l'administration d'au moins une quantité efficace d'hespéridine ou de l'un de ses dérivés en association avec au moins une quantité efficace d'au moins un microorganisme, notamment probiotique, l'une de ses fractions ou l'un de ses métabolites.

Un procédé selon l'invention peut notamment comprendre au moins une étape consistant à appliquer sur la peau de personnes présentant une peau fragile ou délicate et/ou sur la peau de personnes présentant une peau fragilisée, en particulier la peau de personnes d'au moins 60 ans, voire d'au moins 75 ans, et/ou sur la peau de personnes présentant une peau ou une zone de peau agressée, en particulier la peau rasée du visage ou du corps au moins une quantité efficace d'hespéridine ou de l'un de ses dérivés en association avec au moins une quantité efficace d'au moins un microorganisme, notamment probiotique, l'une de ses fractions ou l'un de ses métabolites.

Sauf indication contraire, dans le cadre de l'invention, par peau, on entend toute surface cutanée du corps incluant la peau et élargie au cuir chevelu et aux muqueuses et semi-muqueuses.

Par quantité efficace , on entend au sens de la présente invention une quantité suffisante pour obtenir l'effet attendu. Par signes cutanés du vieillissement et/ou du photovieillissement de la peau provoqués par une déficience de la fonction barrière , on entend au sens de la présente invention les altérations du tissu dermique et/ou épidermique, une peau terne, non souple, relâchée par l'altération des fibres élastiques, un aspect flasque de la peau, une perte de tonicité, une altération du microrelief de la peau, de l'ovale du visage, des dyschromies ... L'association selon l'invention peut être formulée dans des compositions cosmétiques ou dermatologiques. Selon un mode de réalisation, l'utilisation ou le procédé selon l'invention peut 20 comprendre l'administration de l'association selon l'invention par voie topique, orale ou parentérale, de préférence par voie topique ou orale. Par voie topique, on entend une administration de l'association selon l'invention ou des compositions qui la comprennent par application sur la peau telle que définie ci-dessus. 25 Selon un autre mode de réalisation, l'utilisation ou le procédé selon l'invention peut comprendre l'administration de l'association selon l'invention par voie aérienne ou en sous-cutanée. L'administration en sous cutanée peut notamment être effectuée au moyen d'une seringue. 30 Microorganismes, et notamment microorganismes probiotiques Les microorganismes convenant à l'invention sont des microorganismes qui peuvent être administrés sans risques à l'animal ou l'homme. En particulier, on utilise dans la présente invention au moins un 5 microorganisme dit de type probiotique. Au sens de la présente invention, on entend par microorganisme probiotique , un microorganisme vivant qui, lorsqu'il est consommé en quantité adéquate, a un effet positif sur la santé de son hôte ( Joint FAO/WHO Expert Consultation on Evaluation of Health and Nutritional Properties of Probiotic in Food 10 Including Powder Milk with Live Lactic Acid Bacteria, 6 octobre 2001 ), et qui peut en particulier améliorer l'équilibre microbien intestinal. Selon une variante de l'invention, ce microorganisme est mis en oeuvre sous une forme isolée, c'est-à-dire non mélangée à un ou des composé(s) susceptible(s) de lui être associé(s) dans son milieu d'origine. 15 Au sens de l'invention, le terme métabolite désigne toute substance issue du métabolisme des microorganismes considérés selon l'invention et dotée également d'une efficacité pour le traitement des peaux sèches. Au sens de l'invention, le terme fraction désigne plus particulièrement un fragment dudit microorganisme doté d'une efficacité pour le traitement des peaux sèches 20 par analogie audit microorganisme entier. Les microorganismes convenant à l'invention peuvent être choisis notamment parmi les ascomycètes telles que Saccharomyces, Yarrowia, Kluyveromyces, Torulaspora, Schizosaccharomyces pombe, Debaromyces, Candida, Pichia, Aspergillus et Penicillium, des bactéries du genre Bifidobacterium, Bacteroides, Fusobacterium, Melissococcus, 25 Propionibacterium, Enterococcus, Lactococcus, Staphylococcus, Peptostrepococcus, Bacillus, Pediococcus, Micrococcus, Leuconostoc, Weissella, Aenococcus, Oenococcus, Lactobacillus et leurs mélanges. Comme ascomycètes convenant tout particulièrement à la présente invention, on peut en particulier citer Yarrowia lipolitica et Kluyveromyces lactis, de même que 30 Saccharomyces cereviseae, Torulaspora, Schizosaccharamyces pombe, Candida et Pichia. En ce qui concerne les microorganismes probiotiques, ce sont les genres bactériens et de levure suivants qui sont généralement utilisés : - les bactéries lactiques : qui produisent par fermentation du sucre de l'acide lactique. Suivant leur morphologie on les divise en deux groupes : • Lactobacillus species : Lactobacillus acidophilus ; amylovorus, casei, rhamnosus, brevis, crispatus, delbrueckii (subsp bulgaricus, lactis), fermentum, helveticus, gallinarum, gasseri johnsonii, paracasei, plantarum, reuteri, salivarius, alimentarius, curvatus, casei subsp. casei, sake • Gocci : Enterococcus (faecalis, faecium), Lactococcus lactis (subsp lactis ou cremoris), Leuconstoc mesenteroides subsp dextranicum, Pediococcus acidilactici, Sporolactobacillus inulinus, Streptococcus salvarius subsp. Thermophilus, Streptococcus thermophilus, Staphylococccus carnosus, Staphylococcus xylosus - les bifidobactéries ou Bifidobacterium species : Bifidobacterium adolescentis, animalis, bifidum, breve, lactis, longum, infantis, pseudocatenulatum, 15 - les levures : Saccharomyces (cerevisiae ou encore boulardii), - les autres bactéries sporulées : Bacillus (cereus var toyo ou subtilis), Bacillus coagulans, Bacillus licheniformis, Escherichia coli strain nissle, Propionibacterium freudenreichii, - et leurs mélanges. 20 Les bactéries lactiques et les bifidobactéries sont les probiotiques le plus souvent utilisés. Des exemples spécifiques de microorganismes probiotiques sont Bifidobacterium adolescentis, Bifidobacterium animalis, Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium breve, Bifidobacterium lactis, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium infantis, 25 Bifidobacterium pseudocatenulatum, Lactobacillus acidophilus (NCFB 1748) ; Lactobacillus amylovorus, Lactobacillus casei (Shirota), Lactobacillus rhamnosus (souche GG), Lactobacillus brevis, Lactobacillus crispatus, Lactobacillus delbrueckii (subsp bulgaricus, lactis), Lactobacillus fermentum, Lactobacillus helveticus, Lactobacillus gallinarum, Lactobacillus gasseri, Lactobacillus johnsonii (CNCM I-1225), 30 Lactobacillus paracasei, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus reuteri, Lactobacillus salivarius, Lactobacillus alimentarius, Lactobacillus curvatus, Lactobacillus casei subsp. casei, Lactobacillus sake, Lactococcus lactis, Enterococcus (faecalis, faecium), 10 Lactococcus lactis (subspp lactis ou cremoris), Leuconstoc mesenteroides subsp dextranicum, Pediococcus acidilactici, Sporolactobacillus inulinus, Streptococcus salvarius subsp. Thermophilus, Streptococcus thermophilus, Staphylococccus carnosus, Staphylococcus xylosus, Saccharomyces (cerevisiae ou encore boulardii), Bacillus (cereus var toyo ou subtilis), Bacillus coagulans, Bacillus licheniformis, Escherichia coli strain nissle, Propionibacterium freudenreichii et leurs mélanges. De préférence, le microorganisme probiotique peut être choisi parmi : Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus alimentarius, Lactobacillus curvatus, Lactobacillus delbruckii (subsp bulgaricus lactis), Lactobacillus gasseri, Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus reuteri, Lactobacillus rhamnosus (souche GG), Lactobacillus sake, Lactococcus lactis, Streptococcus thermophilus, Staphylococccus carnosus et Staphylococcus xylosus et leurs mélanges. Ces microorganismes peuvent être formulés à l'état de poudres, c'est-à-dire sous une forme sèche, ou sous forme de suspensions ou de solutions.

Plus particulièrement, il s'agit de microorganismes probiotiques issus du groupe des bactéries lactiques, comme notamment les Lactobacillus et/ou les Bifidobacterium. A titre illustratif de ces bactéries lactiques, on peut plus particulièrement citer les Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus reuteri, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus paracasei, Lactobacillus casei ou Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium breve, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium animalis, Bifidobacterium lactis, Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium adolescentis ou Bifidobacterium pseudocatenulatum et leurs mélanges, et de préférence les Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus reuteri, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus paracasei, et leurs mélanges.

Les espèces convenant tout particulièrement sont les Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus paracasei, Bifidobacterium adolescentis, Bifidobacterium longum et Bifidobacterum lactis NCC 2818 respectivement déposées suivant le traité de Budapest avec l'Institut Pasteur (28 rue du Docteur Roux, F-75024 Paris cedex 15) les 30/06/92, 12/01/99, 15/04/99, 15/04/99, 07/06/05 sous les désignations suivantes CNCM I-1225, CNCM I-2116, CNCM I-2168 et CNCM I-2170 et CNCM I-3446, et le genre Bifidobacterium longum (BB536) et leurs mélanges.

Selon un mode de réalisation particulier, l'association met en oeuvre avec l'hespéritine ou avec l'un des ses dérivés au moins un microorganisme probiotique du genre Lactobacillus species, et plus particulièrement de l'espèce Lactobacillus paracasei, l'une de ses fractions ou l'un de ses métabolites.

Selon un mode de réalisation, le microorganisme probiotique est la souche Lactobacillus paracasei déposée suivant le traité de Budapest avec l'Institut Pasteur (28 rue du Docteur Roux, F-75024 Paris cedex 15) le 12/01/99 sous la désignation CNCM I-2116.

Selon un mode de réalisation particulier, l'association selon l'invention peut comprendre au moins deux microorganismes, notamment probiotiques et/ou métabolites et/ou fractions de ceux-ci, différents.

Le ou les microorganisme(s) peu(ven)t être inclus dans la composition selon l'invention sous une forme vivante, semi-active ou inactivée, morte. I1(s) peu(ven)t également être inclus sous forme de fractions de composants cellulaires ou sous la forme de métabolites. Le ou le(s) microorganisme(s), métabolite(s) ou fraction(s) peu(ven)t également être introduit(s) sous la forme d'une poudre lyophilisée, d'un surnageant de culture et/ou le cas échéant sous une forme concentrée.

D'une manière générale, les compositions selon l'invention peuvent comprendre de 0,00001 à 20 % en poids, en particulier de 0,001 à 20 % en poids et plus particulièrement de 0,01 à 10 % en poids de microorganisme(s), notamment probiotique(s), par rapport au poids total de la composition.

Il peut être avantageux de mettre en oeuvre ces microorganismes sous forme inactivée, voire morte, et plus particulièrement sous forme d'un lysat. Un tel lysat peut être obtenu à partir de la lyse cellulaire du microorganisme concerné, selon une méthode conventionnelle. Le(s) microorganisme(s) probiotique(s) sous forme de lysat en suspension désintégré peu(ven)t être formulé(s) dans un support approprié à raison de moins de 20 % en poids, en particulier à raison de 0,0001 à 20 % en poids, et plus particulièrement à raison de 0,01 à 10 % en poids par rapport au poids total dudit support.

Lorsqu'ils sont vivants, les microorganismes et/ou leurs fractions et/ou métabolites peuvent être formulés dans un support approprié en une quantité équivalente à au moins 103 ufc/g, en particulier à des doses variant de 105 à 1015 ufc/g, et plus particulièrement de 10' à 1012 ufc/g de support.

Aussi, les compositions selon l'invention comprennent généralement de 103 à 1012 ufc, en particulier de 105 à 1010 ufc et plus particulièrement de 10' à 109 ufc de microorganismes vivants notamment probiotiques par gramme de support. Lorsque la composition comprend des métabolites, les teneurs en métabolites dans les compositions correspondent sensiblement aux teneurs susceptibles d'être produites par 103 à 1015 ufc, en particulier 105 à 1015 ufc, et plus particulièrement 10' à 1012 ufc de microorganismes vivants par gramme de support.

Hespéridine L'hespéridine appartient à la famille des flavanones, qui sont des composés glucosides naturels retrouvés principalement dans les agrumes, c'est-à-dire les fruits du genre Citrus, tels que par exemple les oranges, les citrons, les oranges amères ou encore les raisins. Elles sont présentes majoritairement dans la peau des agrumes mais sont également retrouvées en grandes quantités dans la pulpe, et donc dans le jus des agrumes.

L'hespéridine est un composé glucosylé comprenant un noyau flavanone d'hespéritine (3',5',5-trihydroxy-4'-méthoxyflavanone) auquel est liée de manière covalente une partie glucosidique de rutinose L-rhamnosyl-(a 1-*6)-glucose) fixée sur le groupe hydroxyle présent sur le carbone en position 7 de l'hespéritine. Par hespéridine, on entend ainsi le composé (S)-7[[6-0-(6-deoxy-a-L-25 mannopyranosyl)-(3-D-glucopyranosyl]oxy]-2,3-dihydro-5-hydroxy-2- (3-hydroxy-4-méthoxyphenyl)-4H-1-benzopyran-4-one. Les dérivés de l'hespéridine peuvent être choisis parmi ses formes aglycones, ses formes chalcones, ses formes glycolysées et ses formes méthylées, ainsi que ses formes sulfatées ou glucuronidées qui sont retrouvées comme produits du métabolisme 30 dans la circulation sanguine. Les dérivés d'hespéridine peuvent être obtenus par divers procédés connus de l'homme du métier, à l'image par exemple des traitements enzymatiques ou encore être obtenus par synthèse. Le glucose-7-hespéritine peut ainsi être préparé par un traitement par la rhamnosidase ou l'hespéridinase. A titre de dérivé de l'hespéridine, on peut notamment citer les composés suivants: - le composé hespérétine, constitué du noyau flavanone non glycosylé de l'hespéridine, qui a la formule suivante: (S)-2,3-dihydro-5,7-dihydroxy-2-(3-hydroxy-4-méthoxyphényl)-4H- 1 -benzopyran-4-one ;3 ',5 ,7-trihydroxy- 4'-méthoxy flavanone; -l'a-glucosyl-hespéridine, qui comporte une chaîne de 1 à 20 résidus de glucose liés entre eux par une liaison 1,4, la chaîne de résidus glucose étant liée elle-même par une liaison de type 1,4 en position 4 du résidu glucose de l'hespéridine; ces dérivés de l'hespéridine et leur procédé de préparation sont décrits notamment dans la demande de brevet EP 0 825 196 et dans le brevet US 6048712; - les composés méthyl-hespéridine, notamment le composé 3'-méthyl-7-(rhamnosyl-2-méthyl-glucosyl)hespéridine et le composé 3'-méthylhespéridine, ces composés, ainsi que leur procédé de préparation étant décrits dans le brevet US 858 784; - les conjugués d'hespérétine et de sulfate ou de glucuronide, qui sont retrouvés, avec 1' hespérétine, comme produits de la métabolisation de l'hespéridine dans la circulation sanguine.

Selon un mode de réalisation, l'hespéridine et ses dérivés peuvent être choisis parmi l'hespéritine et le glucuronide d'hespéritine. D'une manière générale, la quantité efficace d'hespéridine ou de l'un de ses dérivés peut être mise en oeuvre à raison de 0,00001 à 20 % en poids, par exemple de 0,001 à 10 % en poids par rapport au poids total d'une composition en contenant.

Les compositions selon l'invention peuvent se présenter sous toutes les formes galéniques normalement disponibles pour le mode d'administration retenu. Le support peut être de nature diverse selon le type de composition considérée. En ce qui concerne plus particulièrement les compositions destinées à une administration par voie topique externe c'est-à-dire sur la peau, il peut s'agir de solutions aqueuses, hydroalcooliques ou huileuses, de dispersions du type des solutions ou dispersions du type lotion ou sérum, d'émulsions de consistance liquide ou semi-liquide du type lait, de suspensions ou émulsions, du type crème, de gel aqueux ou anhydre, de microémulsions, de microcapsules, de microparticules, ou de dispersions vésiculaires de type ionique et/ou non ionique. Ces compositions sont préparées selon les méthodes usuelles.

De façon connue, les formes galéniques dédiées à une administration topique peuvent contenir également des adjuvants habituels dans le domaine cosmétique, pharmaceutique et/ou dermatologique, tels que les gélifiants hydrophiles ou lipophiles, les actifs hydrophiles ou lipophiles, les conservateurs, les antioxydants, les solvants, les parfums, les charges, les filtres, les bactéricides, les absorbeurs d'odeur et les matières colorantes. Les quantités de ces différents adjuvants sont celles classiquement utilisées dans le domaine considéré, et par exemple de 0,01 à 20 % du poids total de la composition. Ces adjuvants, selon leur nature, peuvent être introduits dans la phase grasse et/ou dans la phase aqueuse. Comme matières grasses utilisables dans l'invention, on peut citer les huiles minérales comme par exemple le polyisobutène hydrogéné et l'huile de vaseline, les huiles végétales comme par exemple une fraction liquide du beurre de karité, huile de tournesol et d'amandes d'abricot, les huiles animales comme par exemple le perhydrosqualène, les huiles de synthèse notamment l'huile de Purcellin, le myristate d'isopropyle et le palmitate d'éthyl hexyle, les acides gras insaturés et les huiles fluorées comme par exemple les perfluoropolyéthers. On peut aussi utiliser des alcools gras, des acides gras comme par exemple l'acide stéarique et comme par exemple des cires notamment de paraffine, carnauba et la cire d'abeilles. On peut aussi utiliser des composés siliconés comme les huiles siliconées et par exemple les cyclométhicone et diméthicone, les cires, les résines et les gommes siliconées.

Comme émulsionnants utilisables dans l'invention, on peut citer par exemple le stéarate de glycérol, le polysorbate 60, le mélange alcool cétylstéarylique/alcool cétylstéarylique oxyéthyléné à 33 moles d'oxyde d'éthylène vendu sous la dénomination Sinnowax AO par la société HENKEL, le mélange de PEG-6/PEG-32/Glycol Stéarate vendu sous la dénomination de Tefosé 63 par société GATTEFOSSE, le PPG-3 myristyl éther, les émulsionnants siliconés tels que le cétyldiméthicone copolyol et le mono-ou tristéarate de sorbitane, le stéarate de PEG-40, le monostéarate de sorbitane oxyéthyléné (200E).

Comme solvants utilisables dans l'invention, on peut citer les alcools inférieurs, notamment l'éthanol et l'isopropanol, le propylène glycol. La composition de l'invention peut également contenir de façon avantageuse une eau thermale et/ou minérale, notamment choisie parmi l'eau de Vittel, les eaux du 5 bassin de Vichy et l'eau de la Roche Posay.

Dans le cas d'une utilisation conforme à l'invention par voie orale, on privilégie l'utilisation d'un support ingérable. Le support ingérable peut être de nature diverse selon le type de composition 10 considérée. Conviennent ainsi notamment comme supports alimentaires ou pharmaceutiques des comprimés ou des tablettes, des suppléments oraux sous forme sèche et des suppléments oraux sous forme liquide. Il peut par exemple s'agir de compléments alimentaires, dont la formulation 15 peut être réalisée par les procédés usuels pour produire notamment des dragées, gélules, gels, émulsions, comprimés, capsules et hydrogels permettant une libération contrôlée. En particulier, l'association selon l'invention peut être incorporée dans toutes autres formes de compléments alimentaires ou d'aliments enrichis, par exemple des barres alimentaires ou des poudres, compactées ou non. Les poudres peuvent être diluées dans de 20 l'eau, du soda, des produits laitiers ou dérivés du soja, ou être incorporées dans des barres alimentaires. L'association selon l'invention peut être par ailleurs formulée avec les excipients et composants usuels pour de telles compositions orales ou compléments alimentaires, à savoir notamment composants gras et/ou aqueux, agents humectants, 25 épaississants, conservateurs, agents de texture, de saveur et/ou d'enrobage, antioxydants, conservateurs et colorants usuels dans le domaine de l'alimentaire. Les agents de formulation et excipients pour composition orale, et notamment pour compléments alimentaires, sont connus dans ce domaine et ne font pas ici l'objet d'une description détaillée. 30 Conviennent notamment comme supports alimentaires ou pharmaceutiques, le lait, le yaourt, le fromage, les laits fermentés, les produits fermentés à base de lait, des glaces, des produits à base de céréales ou des produits à base de céréales fermentées, des poudres à base de lait, des formules pour enfants et nourrissons, des produits alimentaires de type confiserie, chocolat, céréales, des aliments pour animaux en particulier domestiques, des comprimés, gélules ou tablettes, des suspensions de bactéries liquides, des suppléments oraux sous forme sèche et des suppléments oraux sous forme liquide.

Quelque soit le mode d'administration considéré, l'association selon l'invention peut également être avantageusement associée à au moins un autre actif. A titre d'actifs utilisables, on peut citer, les vitamines A, B3, B5, B6, B8, C, D, E, ou PP, les curcuminoïdes, les caroténoïdes, les composés polyphénols et minéraux, les sucres, les acides aminés, les acides aminés soufrés, les acides gras polyinsaturés 3 et 6, la taurine et les phytostérols. En particulier, on peut utiliser un complexe anti-oxydant comprenant les vitamines C et E, et au moins un caroténoïde, notamment un caroténoïde choisi parmi le 13-caroténe, le lycopène, l'astaxanthine, la zéaxanthine et la lutéine, des flavonoïdes telles que les catéchines, des proanthocyanidines, des anthocyanines, des ubiquinones, des extraites de café contenant des polyphénols et/ou des diterpènes, des extraits de chicorés, des extraits de ginkgo biloba, des extraits de raisins riches en proanthocyanidines, des extraits de piment, des extraits de soja, d'autres sources de flavonoïdes possédant des propriétés antioxydantes, des acides gras, des prébiotiques, de la taurine, du resveratrol, des acides aminés du sélénium, des précurseurs de glutathion. Parmi les flavonoïdes, on choisit de préférence les catéchines et les OPC (oligomères procynidoliques). Dans les formes galéniques topiques, on peut utiliser plus particulièrement comme actifs hydrophiles les protéines ou les hydrolysats de protéine, les acides aminés, les polyols notamment en C2 à C10 comme les glycérine, sorbitol, butylène glycol et polyéthylène glycol, l'urée, l'allantoïne, les sucres et les dérivés de sucre, les vitamines hydrosolubles, l'amidon, des extraits bactériens ou végétaux comme ceux d'Aloe Vera. Pour ce qui est des actifs lipophiles, on peut utiliser le rétinol (vitamine A) et ses dérivés, le tocophérol (vitamine E) et ses dérivés, les céramides, les huiles essentielles et les insaponifiables (tocotriènol, sésamine, gamma oryzanol, phytostérols, squalènes, cires, terpènes).

Comme actifs également susceptibles d'être associés à l'association selon l'invention, convenants à la voie topique mais plus particulièrement adaptés à une formule galénique orale, on peut également considérer tous les ingrédients communément utilisés et/ou autorisés, notamment les agents actifs destinés à la prévention et/ou au traitement des affections cutanées. A titre illustratif, on peut citer les vitamines, les minéraux, les lipides essentiels, les oligoéléments, les polyphénols, les flavonoïdes, les phytoestrogènes, les antioxydants tels que l'acide lipoïque et le coenzyme Q10, les caroténoïdes, les prébiotiques, les protéines et les acides aminés, les mono et polysaccharides, les amino-sucres, les phytostérols et alcools triterpéniques d'origine végétale. Il s'agit, en particulier, des vitamines A, C, D, E, PP et du groupe B. Parmi les caroténoïdes, on choisit de préférence, le béta-carotène, le lycopène, la lutéine, la zéazanthine et l'astaxanthine. Les minéraux et oligo-éléments particulièrement mis en oeuvre sont le zinc, le calcium, le magnésium, le cuivre, le fer, l'iode, le manganèse, le sélénium, le chrome (III). Parmi les composés polyphénols, on retient aussi en particulier les polyphénols de raisin, de thé, d'olive, de cacao, de café, de pomme, de myrtille, de sureau, de fraise, de canneberge, et d'oignon. De préférence parmi les phytoestrogènes, on retient les isoflavones sous la forme libre ou glycosylée, telles que la génistéine, la daidzéine, la glycitéine ou encore les lignanes, en particulier ceux du lin et du schizandra chinensis. Les acides aminés ou les peptides et les protéines les contenant, tels que la taurine, la thréonine, la cystéine, le tryptophane, la méthionine. Les lipides appartiennent de préférence au groupe des huiles contenant des acides gras mono et polyinsaturés tels que les acides oléique, linoléique, alpha-linolénique, gamma-linolénique, stearidonique, les acides gras oméga-3 de poisson à longue chaîne tels que l'EPA et le DHA, les acides gras conjugués issus de végétaux ou d'animaux tels que les CLA (Conjugated Linoleic Acid). Ainsi, en particulier lorsque l'association selon l'invention est destinée à une administration par voie orale, elle peut être associée en outre à au moins un actif nutritionnel choisi parmi le lycopène, la vitamine C, la vitamine E et les composés polyphénols. L'association selon l'invention peut également être associée à d'autres actifs nutritionnels choisis parmi : - les actifs nutritionnels anti-âge, tels que les antioxydants alimentaires, les nutriments aux propriétés anti-radicalaires et les cofacteurs des enzymes endogènes antioxydants, les vitamines A, C, E, les caroténoïdes, les xantophyles, les isoflavones, certains minéraux tels que le zinc, le cuivre, le magnésium, le sélénium, l'acide lipoïque, le co-enzyme Q10, la superoxyde dismutase (SOD) ou encore la taurine. Parmi les actifs anti-âges, on peut notamment citer les fractions insaponifiables extraits de lipides d'origine végétale, aloe vera, le collagène marin natif ou hydrolysé, les huiles végétales ou marines riches en acides gras oméga-3, en oméga-6 (y compris l'acide gamma-linolénique), - les actifs nutritionnels photoprotection tels que : les antioxydants et les antiradicalaires, : les vitamines A, C, E, caroténoïdes, xantophyles, certains minéraux tels que le zinc, le cuivre, le magnésium, le sélénium, la co-enzyme Q10, la superoxyde dismultase (SOD), - les ingrédients nutritionnels présentant des propriétés d'hydratation ou encore immunomodulatrices tels que l'extrait de polypodium leucotomos, les huiles végétales ou marines riches en acides gras oméga-3, en oméga-6, y compris l'acide gamma-linolénique, -les actifs nutritionnels actifs sur les signes cliniques de la ménopause (par exemple bouffées de chaleur, ...), tels que les isoflavones, les lignanes, la DHEA, les extraits de yam, de sauge, de houblon, le calcium, le magnésium, les hydrolysats de protéines, les huiles végétales ou marines riches en acides gras oméga-3, - les ingrédients nutritionnels mis en oeuvre dans le domaine de la minceur, tels que les extraits de thé vert, maté, marron d'inde, kola, caféine, théobromine, synéphrine, bromelaïne, éphédra, citrus aurantium, calcium, hoodia, garcinia, chitosan, fibres végétales (cactus, pommes, ananas, ...), fenouil, cassis, reine des près, radis noir.

L'invention se rapporte encore à un procédé de traitement cosmétique pour prévenir une diminution de et/ou renforcer la fonction barrière de la peau, et en particulier pour le soin des peaux âgées, comprenant au moins une étape d'administration de l'association selon l'invention. Le procédé de traitement cosmétique de l'invention peut être mis en oeuvre notamment en administrant par voie orale et/ou topique au moins une association selon 30 l'invention.

L'administration par voie topique consiste à l'application de compositions cosmétiques et/ou dermatologiques ou associations telles que définies ci-dessus, selon la technique d'utilisation habituelle de ces compositions. Le procédé cosmétique selon l'invention peut être mis en oeuvre par administration topique, journalière par exemple, de compositions cosmétiques et/ou dermatologiques, ou de l'association selon l'invention qui peut être par exemple formulée sous forme de gels, lotions, émulsions. L'administration par voie orale consiste à ingérer en une ou plusieurs prises une composition orale telle définie ci-dessus.

Selon une variante, le procédé cosmétique comprend au moins une étape d'administration orale de l'association selon l'invention et au moins une étape d'administration topique de l'association selon l'invention. Le procédé selon l'invention peut comprendre une administration unique. Selon un autre mode de réalisation, l'administration est répétée par exemple 2 à 3 fois quotidiennement sur une journée ou plus et généralement sur une durée prolongée d'au moins 4 semaines, voire 4 à 15 semaines, avec le cas échéant une ou plusieurs périodes d'interruption.

Dans la description et dans les exemples suivants, sauf indication contraire, les 20 pourcentages sont des pourcentages en poids et les plages de valeurs libellées sous la forme entre ... et ... inclut les bornes inférieure et supérieure précisées. Les ingrédients sont mélangés, avant leur mise en forme, dans l'ordre et dans des conditions facilement déterminées par l'homme de l'art. Les exemples ci-après sont présentés à titre illustratif et non limitatif du 25 domaine de l'invention.

Exemple 1 - Évaluation de l'effet d'une association selon l'invention sur la fonction barrière de peaux reconstruites La transformation d'un agent nutritionnel (appelé ci-après milieu conditionné 30 probiotique) après ingestion est tout d'abord stimulée, en vue d'une utilisation consécutive directement sur un modèle de peau (étape A).

Le milieu des co-cultures stimulées avec le Lactobacillus paracasei, issu du compartiment baso-lateral est ensuite prélevé et ses effets en association avec le métabolite le plus important de l'hespéridine, l'hesperitine 7 glucuronide (Hes7Glu) sur la fonction barrière dans le modèle EPISKIN sont ensuite testés in vitro (étape B).

A ù Préparation du milieu conditionné probiotique Un modèle de barrière intestinale (comprenant des enterocytes humains en lignés (CaCO-2) co-cultivés avec des leucocytes humains dans un système de co-culture cellulaire 'transwell' [Haller D, 2000]) a été développé.

Ce modèle consiste à cultiver séparément : - une lignée de cellules intestinales CaCO-2 sur des inserts trans-well qui sont ensuite placés dans une plaque de 12 puits (Nunc) où les cellules sont cultivées durant 21 jours ; et - des cellules mono-nucléaires de sang périphérique (leucocytes) humain qui 15 sont purifiées puis resuspendues dans un milieu de culture approprié. Cette suspension de leucocytes est alors ajoutée dans le compartiment basolatérale des cultures trans-well lorsque celles-ci présentent une couche confluente de cellules CaCO-2. Les co-cultures ainsi établies sont stimulées en ajoutant 1 x 10' CFU/mL de 20 microorganisme probiotique au niveau de la surface apicale de la mono-couche de cellules épithéliales (CaCO-2). Le systéme est ensuite incubé durant 16h à 37°C/5%CO2. En fin d'incubation (16h) le milieu se trouvant dans le compartiment basolatéral est prélevé pour être testé. Ce modèle de coculture de cellules intestinales et de leucocyte permet de 25 simuler les interactions cellulaires présentent lors de l'ingestion par voie orale d'un ingrédient nutritionnel et de mimer in vitro, la situation in vivo. L'interaction des enterocytes activés ou non avec des agents nutritionnels, tels que des probiotiques, agissant au niveau apical entraîne une stimulation des leucocytes sous-jacents et la production de médiateurs (cytokines). Sous l'effet d'une stimulation par 30 des microorganismes probiotiques, ces médiateurs ou autres molécules immuno-régulatrices produites au niveau de la muqueuse intestinale sont véhiculés par le sang jusqu'à la peau au niveau de laquelle ils contribuent à son renforcement et/ou à contre-balancer une réaction inflammatoire locale.

B ù Mesure de l'effet de plusieurs agents nutritionnels sur un modèle de peau reconstruite Les kits Episkiri ont été reçus à J6, puis cultivés pendant la phase proliférative jusqu'à J13 selon cinq conditions

1. Condition classique d'Episkin (condition A) Traités de J6 à J13 avec le milieu de différenciation d'Episkin

2. Contrôle négatif (condition B) Traités de J6 à J13 avec 30% de milieu de contrôle négatif (milieu conditionné issu de 16h00 de culture CaCO2/PBMC) 3. Contrôle positif (condition C) Traités de J6 à J13 avec 20% de milieu conditionné probiotique.

4. Contrôle positif (condition D) 20 Traités de J6 à J13 avec 20% de milieu conditionné probiotique + Hes7Glu 10 M

5. Contrôle positif (condition E) Traités de J6 à J13 avec Hes7Glu 10 M 25 Les conditions A, B, C, D et E ont été étudiés sur 6 puits pour chaque lot EPISKIN , en mesurant la pénétration d'un composé de référence non pénétrant (anthraquinone cationique) formulé dans un milieu simplex. Le taux de pénétration de l'anthraquinone cationique permet de caractériser l'influence des différentes conditions de 30 culture sur la fonction barrière du tissu reconstruit. Avant l'application, le milieu de culture est retiré et remplacé par 1,5 ml de milieu d'essai Episkin, et les kits sont mis pendant 30 minutes dans une étuve à 37 °C, 5 %15 CO2. Une 2e fois, le milieu est retiré et remplacé par du milieu frais, et les kits sont remis pendant 30 minutes en étuve. Enfin, le milieu d'essai Episkin est remplacé par 1,5 ml de PBS+Tween 0,25 % (p/p) et les kits sont placés dans une enceinte thermostatée à 32 °C sous agitation (Certomat).

Le colorant de référence non pénétrant (anthraquinone cationique) a été utilisé. 250 l d'une formulation simplex tamponnée à pH 7 à une concentration de 1 mM, sont appliqués pendant 4 heures. Le liquide récepteur (LR) est collecté puis dosé directement en fin d'application, par HPLC. Chaque point est analysé en duplicate.

Lors de la mise au point de la méthode analytique, la spécificité a été vérifiée à partir de blancs LR (liquides récepteurs obtenus après application dans les mêmes conditions de formulation sans colorant).

La concentration est déterminée à l'aide d'une gamme d'étalonnage faite le jour même. Les taux de pénétration sont calculés en effectuant le rapport de la quantité dans le LR sur la quantité appliquée, les résultats suivants ayant fait en outre l'objet d'une étude statistique en utilisant les tests de Wilcoxon.

La condition A utilise le milieu de différenciation d'EPISKIN comme milieu 20 de culture, qui est optimal pour la différenciation du modèle. La condition B utilise un milieu dans lequel a été incorporé 30 % de milieu conditionné non stimulé (apparenté à un milieu de culture classique de différenciation EPISKIN diminué de 30 %). Aussi, la fonction barrière présentée par la condition B a donc été retrouvée plus faible que celle de la condition A. 25 La figure 1 indique les taux de pénétration du composé de référence anthraquinone cationique dans le liquide récepteur pour chaque condition étudiée. Il est constaté que les milieux conditionnés issus de la stimulation par 20% Lactobacillus paracasei donnent des résultats significativement différents de ceux obtenus dans la condition B contrôle négatif utilisant le milieu non stimulé. 30 Alors que l'Hes7Glu introduit à une concentration de 10 M n'a pas d'effet significatif sur la fonction barrière, cette même concentration ajoutée à 20 % de milieux conditionnés probiotique permet de retrouver une aussi bonne efficacité de la fonction barrière que celle obtenue avec le milieu de différentiation classique EPISKIN . En conséquence, ces résultats montrent clairement une synergie d'activité pour l'Hespéritine 7 glucuronide en association avec le milieu conditionné stimulé avec le probiotique Lactobacillus paracasei. L'introduction de 10M d'Hespéritine 7 glucuronide au milieu de culture supplémentée avec 20 % de milieux conditionnés stimulés par le probiotique Lactobacillus paracasei permet de retrouver une fonction barrière efficace et comparable à celle obtenue dans les conditions de références standard EPISKIN .

Exemple 2 : Gel unidose Principe actif % pds Hespéridine OBC commercialisée par la société 10 Nutrafur (hespéridine sous forme micronisée pure à 93 %) Lycopène 10 Lactobacillus johnsonii (CNCMI-1225) 1010 cfu Exci s lent Sirop de sucre 50 Maltodextrine 17 Gomme Xanthane 0, 8 Benzoate de sodium 0,2 Eau qsp 100 On peut prendre une dose de 200 à 400 ml par jour. Exemple 3 : Capsule mg/capsule Hespéridine commercialisée par la société 10 SELECTCHEMIE (hespéridine sous forme micronisée pure à 93%) Lactobacillus paracasei (CNCMI-2116) 1010cfu Glycérine 150 Stéarate de magnésium 0,02 Arôme naturel qsp 100 On peut prendre une à trois de ces capsules par jour.

Exemple 4 On adjoint à la formulation de l'exemple 1 un complexe vitaminique 5 comportant 60 mg de vitamine C, 100 g de vitamine E et 6 mg de 13-carotène. Exemple 5 On adjoint à la formulation de l'exemple 1 un complexe vitaminique comportant 100 mg de vitamine C, 100 g de vitamine E et 6 mg de lycopène par capsule.

10 Exemple 6 : Crème pour le soin du visage (% en poids) Hespéritine 5,00 Lactobacillus paracasei (CNCMI-2116) 10,00 Antioxydant 0,05 15 Isopropanol 40,00 Stéarate de glycérol 1,00 Alcool cétylstéarylique/alcool cétylstéarylique oxyéthyléné à 33 moles OE (Sinnowax AO vendu par la société Henkel) 3,00 Alcool cétylique 1,00 20 Diméthicone (DC 200 Fluid vendu par la société Dow Corning) 1,00 Huile de vaseline 6,00 Myristate d'isopropyle (Estol IPM 1514 vendu par Unichema) 3,00 Antioxydant 0,05 Glycérine 20,00 25 Conservateur 0,30 Eau qsp 100,00 Exemple 7 : Lotion pour le soin du corps (% en poids) Glucuronide d'hespéritine 5,00 30 Lactobacillus paracasei (CNCMI-2116) 10,00 Antioxydant 0,05 Isopropanol 40,00 Conservateur 0,30 Eau qsp 100,00

Claims (27)

REVENDICATIONS

1. Utilisation cosmétique d'au moins une quantité efficace d'hespéridine ou de l'un de ses dérivés en association avec au moins une quantité efficace d'au moins un microorganisme, notamment probiotique, l'une de ses fractions ou l'un de ses métabolites, comme agent pour prévenir une diminution de et/ou renforcer la fonction barrière de la peau.

2. Utilisation cosmétique d'au moins une quantité efficace d'hespéridine ou de l'un de ses dérivés en association avec au moins une quantité efficace d'au moins un microorganisme, notamment probiotique, l'une de ses fractions ou l'un de ses métabolites, comme agent pour renforcer la protection de la peau vis-à-vis d'agressions extérieures.

3. Utilisation selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce que ladite association est destinée à prévenir et/ou diminuer l'inconfort cutané d'une peau, en particulier induit par un stress exogène d'origine chimique, environnementale, mécanique et/ou un stress endogène.

4. Utilisation selon la revendication 3, caractérisée en ce que l'inconfort cutané est caractérisé par des tiraillements, des picotements, des échauffements et/ou des démangeaisons.

5. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que ladite association est destinée à prévenir une diminution de et/ou renforcer la fonction barrière d'une peau choisie parmi une peau fragile, une peau fragilisée et/ou une peau agressée.

6. Utilisation d'au moins une quantité efficace d'hespéridine ou de l'un de ses dérivés en association avec au moins une quantité efficace d'au moins un microorganisme, notamment probiotique, l'une de ses fractions ou l'un de ses métabolites, pour la préparation d'une composition destinée à prévenir une diminution de et/ou renforcer la fonction barrière d'une peau lésée, en particulier d'une peau atopique.

7. Utilisation selon la revendication 6, dans laquelle ladite composition est destinée à prolonger les phases de rémission entre des crises aiguës d'affections dermatologiques.

8. Utilisation cosmétique d'au moins une quantité efficace d'hespéridine ou de l'un de ses dérivés en association avec au moins une quantité efficace d'au moins unmicroorganisme, notamment probiotique, l'une de ses fractions ou l'un de ses métabolites, comme agent pour prévenir et/ou traiter les signes cutanés du vieillissement et/ou du photovieillissement.

9. Utilisation d'au moins une quantité efficace d'hespéridine ou de l'un de ses dérivés en association avec au moins une quantité efficace d'au moins un microorganisme, notamment probiotique, l'une de ses fractions ou l'un de ses métabolites, pour la préparation d'une composition destinée à prévenir et/ou traiter les signes cutanés du vieillissement et/ou du photovieillissement.

10. Utilisation selon la revendication 9 ou 10 pour prévenir et/ou traiter les 10 signes cutanés du vieillissement et/ou du photovieillissement induits ou exacerbés par la pollution.

11. Utilisation cosmétique d'au moins une quantité efficace d'hespéridine ou de l'un de ses dérivés en association avec au moins une quantité efficace d'au moins un microorganisme, notamment probiotique, l'une de ses fractions ou l'un de ses métabolites, 15 à titre d'agent anti-pollution.

12. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que ledit microorganisme est choisi parmi les ascomycètes telles que Saccharomyces, Yarrowia, Kluyveromyces, Torulaspora, Schizosaccharomyces pombe, Debaromyces, Candida, Pichia, Aspergillus et Penicillium, des bactéries du genre 20 Bifidobacterium, Bacteroides, Fusobacterium, Melissococcus, Propionibacterium, Enterococcus, Lactococcus, Staphylococcus, Peptostrepococcus, Bacillus, Pediococcus, Micrococcus, Leuconostoc, Weissella, Aerococcus, Oenococcus, Lactobacillus et leurs mélanges.

13. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, 25 caractérisée en ce que le microorganisme est choisi parmi Bifidobacterium adolescentis, Bifidobacterium animalis, Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium breve, Bifidobacterium lactis, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium pseudocatenulatum, Lactobacillus acidophilus (NCFB 1748) ; Lactobacillus amylovorus, Lactobacillus casei (Shirota), Lactobacillus rhamnosus 30 (souche GG), Lactobacillus brevis, Lactobacillus crispatus, Lactobacillus delbrueckii (subsp bulgaricus, lactis), Lactobacillus fermentum, Lactobacillus helveticus, Lactobacillus gallinarum, Lactobacillus gasseri, Lactobacillus johnsonii (CNCM I-1225),Lactobacillus paracasei, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus reuteri, Lactobacillus salivarius, Lactobacillus alimentarius, Lactobacillus curvatus, Lactobacillus casei subsp. casei, Lactobacillus sake, Lactococcus lactis, Enterococcus (faecalis, faecium), Lactococcus lactis (subspp lactis ou cremoris), Leuconstoc mesenteroides subsp dextranicum, Pediococcus acidilactici, Sporolactobacillus inulinus, Streptococcus salvarius subsp. Thermophilus, Streptococcus thermophilus, Staphylococccus carnosus, Staphylococcus xylosus, Saccharomyces (cerevisiae ou encore boulardii), Bacillus (cereus var toyo ou subtilis), Bacillus coagulans, Bacillus licheniformis, Escherichia coli strain nissle, Propionibacterium freudenreichii et leurs mélanges.

14. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que le microorganisme est issu du groupe des bactéries lactiques.

15. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que le microorganisme est de l'espèce Lactobacillus paracasei, l'une de ses fractions ou l'un de ses métabolites, et en particulier la souche Lactobacillus paracasei déposée le 12/01/99 sous la désignation CNCM I-2116.

16. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle ledit microorganisme est mis en oeuvre à raison de 0,00001 à 20 % en poids, en particulier de 0,001 à 20 % en poids et plus particulièrement de 0,01 à 10 % en poids par rapport au poids total d'une composition en contenant.

17. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que les dérivés de l'hespéridine sont choisis parmi ses formes aglycones, ses formes chalcones, ses formes glycosylées et ses formes méthylées, ainsi que ses formes sulfatées ou glucuronidées qui sont retrouvées comme produits du métabolisme dans la circulation sanguine.

18. Utilisation selon la revendication précédente, dans laquelle les dérivés sont obtenus par des traitements enzymatiques ou encore sont obtenus par synthèse.

19. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que l'hespéridine et ses dérivés sont choisis parmi l'hespéritine et le glucuronide d'hespéritine.

20. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle la quantité efficace d'hespéridine ou de l'un de ses dérivés est mise en oeuvre àraison de 0,00001 à 20 % en poids, par exemple de 0,001 à 10 % en poids par rapport au poids total d'une composition en contenant.

21. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, comprenant l'administration de ladite association par voie topique, orale ou parentérale, de 5 préférence par voie topique ou orale.

22. Composition cosmétique et/ou dermatologique, notamment utile pour prévenir une diminution de et/ou renforcer la fonction barrière de la peau, et en particulier pour prévenir et/ou traiter les signes cutanés du vieillissement et/ou du photovieillissement comprenant, dans un support physiologiquement acceptable, au moins 10 une quantité efficace d'hespéridine ou de l'un de ses dérivés en association avec au moins une quantité efficace d'au moins un microorganisme, notamment probiotique, l'une de ses fractions ou l'un de ses métabolites.

23. Composition selon la revendication 22, caractérisée en ce que le microorganisme est tel que défini en revendications 12 à 16. 15

24. Composition selon l'une quelconque des revendications 22 et 23, caractérisée en ce que l'hespéridine et/ou ses dérivés sont tels que définis en revendications 17 à 19.

25. Procédé de traitement cosmétique des signes cutanés du vieillissement et/ou du photovieillissement, notamment des signes induits ou exacerbés par la pollution, 20 comprenant l'administration d'au moins une quantité efficace d'hespéridine ou de l'un de ses dérivés en association avec au moins une quantité efficace d'au moins un microorganisme, notamment probiotique, l'une de ses fractions ou l'un de ses métabolites.

26. Procédé selon la revendication 25, caractérisé en ce que le microorganisme est tel que défini en revendications 12 à 16. 25

27. Procédé selon la revendication 25 ou 26, caractérisé en ce que l'hespéridine et/ou ses dérivés sont tels que définis en revendications 17 à 19.