FR2902656A1 - Active agent for cosmetic skin treatment, having e.g. protecting, repair promoting, moisturizing, antiaging and anti-wrinkle effects, comprises extract of Withania somnifera - Google Patents

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Abstract

The use of extract(s) (I) of Withania somnifera (Ashwagandha; Indian ginseng) is claimed as a skin treatment active agent, for protecting the skin and/or combating factors adversely affecting its activity and appearance. Independent claims are included for: (1) the production of a Withania somnifera extract (I') suitable for use as above, involving (i) dissolving Withania somnifera root powder in water in an amount of at least 100 g/l (preferably in a basic medium), (ii) carrying out one or more enzymatic hydrolysis steps, successively or simultaneously, (iii) separating the soluble and insoluble phases by decantation, (iv) thermally treating to deactivate the enzymes, (v) filtering to concentrate the active fraction and (vi) sterile filtering; and (2) an active agent (I') obtained by the process, having dry solids content 30-300 g/l, pH 3-7 and total sugars content 18-213 g/l.

Description

UTILISATION COSMETIQUE D'UN EXTRAIT DE WITHANIA SOMNIFERACOSMETIC USE OF AN EXTRACT OF WITHANIA SOMNIFERA

La présente invention concerne l'utilisation d'un extrait de Withania somnifera en tant que principe actif pour une application cosmétique. L'invention se rapporte aussi à toute composition cosmétique contenant un extrait de Withania somnifera.  The present invention relates to the use of an extract of Withania somnifera as an active ingredient for a cosmetic application. The invention also relates to any cosmetic composition containing an extract of Withania somnifera.

L'invention couvre également un procédé d'obtention d'un extrait particulier de Withania somnifera et l'extrait obtenu. Withania somnifera, encore appelée Ashwagandha ou Ginseng indien , est une plante appartenant à la famille des Solanacées. Ses racines sont épaisses et charnues, ses feuilles sont simples, ovales, lisses et dépourvues de poils, et elle possède des fleurs à peine visibles, de couleur vert clair ou jaune pâle. Withania somnifera, originaire d'Inde, est utilisée depuis plus de 2000 ans dans la médecine traditionnelle ayurvédique en tant que tonique général et fortifiant. L'utilisation de cette plante dans le domaine cosmétique n'a pas été envisagée. Or, de façon étonnante, Withania somnifera présente des propriétés notables au niveau cutané. La peau est un organe complexe qui couvre la surface totale du corps et exerce de nombreuses fonctions vitales. Elle est organisée en trois couches principales l'épiderme, le derme et l'hypoderme. La peau est constamment soumise à des agressions, tant externes qu'internes, 20 qui peuvent menacer son équilibre et son aspect.  The invention also covers a process for obtaining a particular extract of Withania somnifera and the extract obtained. Withania somnifera, also called Ashwagandha or Indian Ginseng, is a plant belonging to the Solanaceae family. Its roots are thick and fleshy, its leaves are simple, oval, smooth and hairless, and it has barely visible flowers, light green or pale yellow. Withania somnifera, native to India, has been used for more than 2000 years in traditional Ayurvedic medicine as a general and invigorating tonic. The use of this plant in the cosmetic field has not been considered. However, surprisingly, Withania somnifera has significant properties at the cutaneous level. The skin is a complex organ that covers the entire surface of the body and has many vital functions. It is organized into three main layers the epidermis, the dermis and the hypodermis. The skin is constantly subjected to both external and internal aggression which may threaten its balance and appearance.

C'est pourquoi on recherche des actifs capables de protéger la peau contre ces agressions susceptibles d'altérer son bon fonctionnement et son aspect, et de lutter contre les manifestations qui en découlent. Pour répondre à cette problématique, la présente invention vise à utiliser au 5 moins un extrait de Withania somnifera en tant qu'actif au sein d'une composition cosmétique destinée au traitement de la peau. L'extrait de Withania somnifera susceptible d'être utilisé selon l'invention peut être obtenu au moins par un procédé comprenant au moins une extraction enzymatique ou une décoction. 10 De manière préférentielle, les compositions selon l'invention peuvent contenir de 0,1 à 20 % d'un extrait de Withania somnifera. L'administration d'une composition contenant un extrait de Withania somnifera selon l'invention est de préférence effectuée par voie topique. La composition peut se présenter sous toutes les formes permettant l'application 15 par voie topique. L'utilisation d'un extrait issu de Withania somnifera selon l'invention permet de protéger la peau et/ou de lutter contre toutes manifestations perturbant son activité et/ou son apparence. En particulier, l'utilisation d'un extrait issu de Withania somnifera selon la 20 présente invention permet de régulariser les fonctionnalités naturelles cutanées notamment de contribuer à l'homéostasie dermique et de réparer et restructurer la fonction barrière. On peut noter ses capacités à, notamment - dynamiser le développement cellulaire, - maintenir et stimuler les systèmes naturels de défense de la peau, et 25 - maintenir et stimuler les systèmes naturels de protection de la peau. Il peut être utilisé pour de multiples applications cosmétiques par exemple pour augmenter le renouvellement cellulaire, prévenir et diminuer l'apparition des rides ou encore hydrater et protéger la couche cornée.  This is why we are looking for assets capable of protecting the skin against these attacks likely to alter its proper functioning and appearance, and to fight against the resulting manifestations. To meet this problem, the present invention aims to use at least one extract of Withania somnifera as an active ingredient in a cosmetic composition intended for the treatment of the skin. The extract of Withania somnifera that can be used according to the invention can be obtained at least by a process comprising at least one enzymatic extraction or a decoction. Preferably, the compositions according to the invention may contain from 0.1 to 20% of an extract of Withania somnifera. The administration of a composition containing a Withania somnifera extract according to the invention is preferably carried out topically. The composition may be in any form for topical application. The use of an extract from Withania somnifera according to the invention makes it possible to protect the skin and / or to fight against all manifestations that disturb its activity and / or its appearance. In particular, the use of an extract derived from Withania somnifera according to the present invention makes it possible to regulate natural cutaneous functionalities, in particular to contribute to dermal homeostasis and to repair and restructure the barrier function. It can be noted its ability to, in particular - boost cell development, - maintain and stimulate the natural systems of defense of the skin, and 25 - maintain and stimulate the natural systems of skin protection. It can be used for multiple cosmetic applications, for example to increase cellular renewal, prevent and reduce the appearance of wrinkles or moisturize and protect the stratum corneum.

Avantageusement, l'extrait de Withania somnifera est particulièrement efficace dans des conditions extrêmes d'agression de la peau. Les agressions de la peau (soleil, pollution, stress, chocs thermiques, climatisation...) accumulées et répétées entraînent progressivement une baisse de l'activité cellulaire. Les cellules perdent progressivement leur capacité à se diviser, le cycle cellulaire des cellules dermiques est ralenti et leur viabilité amoindrie. L'extrait de Withania somnifera selon l'invention est capable de stimuler et de restaurer la capacité des cellules de la peau à proliférer. Il revitalise les cellules 10 soumises à un stress et dynamise le développement cellulaire. Cette caractéristique permet notamment à l'extrait de Withania somnifera selon l'invention d'être utile en tant qu'actif pour la préparation d'une composition cosmétique destinée à favoriser le renouvellement cellulaire de la peau. Par ailleurs, lorsque les cellules cutanées sont soumises à des conditions 15 stressantes, la protection naturelle des cellules cutanées disparaît et laisse la peau sans défense. Au niveau du derme, ce sont les fibroblastes qui sont responsables de la sauvegarde de l'intégrité et de la fonctionnalité du tissu. En particulier, ils assurent le renouvellement et le remodelage de la matrice extracellulaire en 20 régulant l'équilibre existant entre la synthèse des protéines matricielles et leur dégradation par les métalloprotéinases (MMP). L'activité des MMP est régulée par l'intermédiaire d'inhibiteurs spécifiques, les TIMP (Tissue Inhibitor of MetalloProteinases). Les TIMP constituent un des systèmes naturels de défense de la peau pour limiter et contrôler la dégradation 25 des fibres de collagène de la matrice. Dans une peau non stressée, un équilibre existe entre l'expression des MMP et des TIMP.  Advantageously, the extract of Withania somnifera is particularly effective in extreme conditions of aggression of the skin. Aggression of the skin (sun, pollution, stress, thermal shocks, air conditioning ...) accumulated and repeated gradually lead to a decrease in cellular activity. The cells gradually lose their ability to divide, the cell cycle of the dermal cells is slowed down and their viability diminished. The extract of Withania somnifera according to the invention is capable of stimulating and restoring the ability of skin cells to proliferate. It revitalizes stressed cells and boosts cellular development. This characteristic makes it possible in particular for the Withania somnifera extract according to the invention to be useful as an active ingredient for the preparation of a cosmetic composition intended to promote the cellular renewal of the skin. On the other hand, when the skin cells are subjected to stressful conditions, the natural protection of the skin cells disappears and leaves the skin defenseless. In the dermis, fibroblasts are responsible for safeguarding the integrity and functionality of the tissue. In particular, they ensure the renewal and remodeling of the extracellular matrix by regulating the equilibrium existing between the synthesis of matrix proteins and their degradation by metalloproteinases (MMPs). The activity of MMPs is regulated via specific inhibitors, TIMPs (Tissue Inhibitor of MetalloProteinases). TIMPs are one of the natural skin defense systems for limiting and controlling the degradation of collagen fibers in the matrix. In unstressed skin, a balance exists between the expression of MMPs and TIMPs.

Dans des conditions de stress, l'expression des MMP est fortement augmentée alors que celle des TIMP n'est que faiblement stimulée. L'induction insuffisante des TIMP pour neutraliser l'activité induite des MMP conduit à un déséquilibre responsable de la dégradation excessive des composants matriciels du derme.  Under stress conditions, the expression of MMPs is strongly increased while that of TIMPs is only weakly stimulated. The insufficient induction of TIMPs to neutralize the induced activity of MMPs leads to an imbalance responsible for excessive degradation of matrix components of the dermis.

L'extrait de Withania somnifera selon l'invention est également capable de renforcer les systèmes naturels de défense cutanés. En particulier, il est capable de réguler la dégradation matricielle de la peau et de rétablir l'équilibre TIMP/MMP pour protéger le tissu dermique. En outre, on sait que le vieillissement cutané et l'apparition des rides peuvent être limités par régulation de la dégradation de la matrice extracellulaire. Ainsi, l'extrait de Withania somnifera peut donc être utile en tant qu'actif pour la préparation d'une composition cosmétique destinée à prévenir et/ou à traiter les signes du vieillissement cutané, en particulier destinée à prévenir et/ou lutter contre l'apparition des rides.  The extract of Withania somnifera according to the invention is also capable of reinforcing the natural skin defense systems. In particular, it is able to regulate the matrix degradation of the skin and restore the TIMP / MMP balance to protect the dermal tissue. In addition, it is known that skin aging and the appearance of wrinkles can be limited by regulating the degradation of the extracellular matrix. Thus, the extract of Withania somnifera may therefore be useful as an active ingredient for the preparation of a cosmetic composition intended to prevent and / or to treat the signs of cutaneous aging, in particular intended to prevent and / or fight against appearance of wrinkles.

L'épiderme est la couche superficielle de la peau en contact avec l'extérieur. Sa couche supérieure, la couche cornée, assure la protection de l'organisme vis-à-vis de son environnement extérieur. La formation de la couche cornée résulte du processus de différenciation pendant lequel les kératinocytes exercent une activité dynamique : leur renouvellement est rapide et leur activité métabolique importante. La synthèse de nombreuses protéines impliquées dans les différentes étapes du processus de différenciation est assurée et permet la formation d'une barrière cutanée efficace et fonctionnelle. Dans des conditions de stress, les kératinocytes perdent leur vitalité et leur dynamisme : le renouvellement de l'épiderme ralentit, le métabolisme décline et la machinerie cellulaire s'épuise. Le taux de renouvellement des protéines diminue et induit un vieillissement précoce des constituants cellulaires.  The epidermis is the superficial layer of the skin in contact with the outside. Its upper layer, the stratum corneum, ensures the protection of the body vis-à-vis its external environment. The formation of the stratum corneum results from the differentiation process during which the keratinocytes exert a dynamic activity: their renewal is rapid and their metabolic activity important. The synthesis of many proteins involved in the various stages of the differentiation process is ensured and allows the formation of an effective and functional skin barrier. In stressful conditions, keratinocytes lose their vitality and dynamism: the renewal of the epidermis slows down, the metabolism declines and the cellular machinery runs out. The rate of protein turnover decreases and induces an early aging of cellular constituents.

Les cellules ne peuvent plus générer une couche cornée cohésive et intègre. Le film hydrolipidique s'appauvrit et la barrière cutanée se fragilise. La peau ne peut plus assurer sa fonctionnalité première et essentielle de protection. Elle est sujette à la déshydratation et sa résistance aux agressions 5 extérieures est amoindrie. L'extrait de Withania somnifera selon l'invention est aussi capable de dynamiser l'activité métabolique des cellules de l'épiderme pour stimuler le processus de différenciation épidermique. Il renforce les systèmes de protection cutanés, en stimulant la formation d'une fonction barrière intègre et efficace. 10 L'utilisation de l'extrait de Withania somnifera selon l'invention en tant qu'actif est donc également avantageuse pour la préparation d'une composition cosmétique destinée à protéger la couche cornée et à lutter contre une déshydratation de la peau. La présente invention est maintenant décrite en détail en s'appuyant sur un 15 exemple particulier non limitatif d'extrait et sur des exemples non limitatifs de compositions, ainsi que sur des résultats d'essais illustrant certaines actions d'un extrait de Withania somnifera.  The cells can no longer generate a cohesive and cohesive layer. The hydrolipidic film is impoverished and the skin barrier is weakened. The skin can no longer ensure its primary and essential protection function. It is prone to dehydration and its resistance to external aggression is diminished. The extract of Withania somnifera according to the invention is also capable of boosting the metabolic activity of the cells of the epidermis to stimulate the process of epidermal differentiation. It strengthens the skin protection systems, stimulating the formation of an integrated and effective barrier function. The use of the Withania somnifera extract according to the invention as an active ingredient is therefore also advantageous for the preparation of a cosmetic composition intended to protect the stratum corneum and to combat dehydration of the skin. The present invention is now described in detail with reference to a particular non-limiting example of an extract and non-limiting examples of compositions, as well as test results illustrating certain actions of an extract of Withania somnifera.

1. EXEMPLE D'UN EXTRAIT DE WITHANIA SOMNIFERA 20 I.1/ Procédé de préparation de l'extrait Le procédé de préparation de l'extrait de Withania somnifera comprend les étapes suivantes : - solubilisation de poudre de racines de Withania somnifera dans l'eau avec au moins 100g/I, de préférence en milieu basique, 25 - une ou plusieurs hydrolyse(s) enzymatique(s) successive(s) ou simultanée(s), - séparation des phases soluble et insoluble par décantation, - traitement thermique pour inactiver les activités enzymatiques, - filtration pour concentrer la fraction active, et - filtration stérilisante. I.2/ Caractérisation de l'extrait I.2-1/ Matières sèches : On mesure le taux de matières sèches par passage à l'étuve à 105 C en présence de sable d'un échantillon de poids initial donné jusqu'à obtention d'un poids constant. Le taux de matières sèches est compris entre 30 et 300 g/I, plus particulièrement entre 48 et 65 g/I.  EXAMPLE OF A EXTRACT OF WITHANIA SOMNIFERA I.1 / Process for the preparation of the extract The process for the preparation of the Withania somnifera extract comprises the following steps: - solubilization of Withania somnifera root powder in the water with at least 100 g / l, preferably in basic medium, - one or more successive or simultaneous enzymatic hydrolysis (s), - separation of the soluble and insoluble phases by decantation, - heat treatment to inactivate enzymatic activities, - filtration to concentrate the active fraction, and - sterilizing filtration. I.2 / Characterization of the extract I.2-1 / Dry matter: The rate of solids is measured by passing in an oven at 105 ° C. in the presence of sand of a sample of initial weight given until obtaining of a constant weight. The solids content is between 30 and 300 g / l, more particularly between 48 and 65 g / l.

I.2-2/ Mesure du pH : Le pH mesuré par la méthode potentiométrique à température ambiante conduit à des valeurs comprises entre 3 et 7, plus particulièrement entre 3 et 4. I.2-3/ Détermination de la teneur en sucres totaux On utilise la méthode de DUBOIS (DUBOIS M. & al [1956], Analytical chemistry, 28, n 3 p 350-356). En présence d'acide sulfurique concentré et de phénol, les sucres réducteurs donnent un composé jaune-orangé. A partir d'une gamme étalon, on peut déterminer le taux de sucres totaux d'un échantillon. Le taux de sucres totaux de l'extrait selon la présente invention est de 18 à 213 g/I, préférentiellement de 30 à 46 g/I. I.2-4/ Caractérisation des carbohydrates a. Dosage de sucres simples Le taux de sucres simples correspond à 100% de glucose. b. Degré de polymérisation Le tableau ci-dessous montre que la fraction glucidique de l'extrait selon la présente invention comprend du glucose essentiellement sous forme d'oligosaccharides possédant un degré de polymérisation inférieur ou égal à 5. Degré de polymérisation Taux de (DP) carbohydrates Oligosaccharides DP 5 76,5% Oligosaccharides 5 < DP < 10 5,3% Oligosaccharides 10 < DP < 50 11,6% Oligosaccharides DP > 200 6,6% I.2-5/ Identification de la fraction active Dans le but d'identifier la ou les fractions actives, on fractionne les sucres de l'extrait selon l'invention par chromatographie gel filtration. L'efficacité de la fraction obtenue est évaluée par l'activité prolifératrice de fibroblastes humains soumis à un stress UV répété.  I.2-2 / pH measurement: The pH measured by the potentiometric method at room temperature leads to values between 3 and 7, more particularly between 3 and 4. I.2-3 / Determination of the total sugar content The DUBOIS method (DUBOIS M. et al [1956], Analytical Chemistry, 28, No. 3, 350-356) is used. In the presence of concentrated sulfuric acid and phenol, the reducing sugars give a yellow-orange compound. From a standard range, the total sugar content of a sample can be determined. The total sugar content of the extract according to the present invention is from 18 to 213 g / l, preferably from 30 to 46 g / l. I.2-4 / Characterization of carbohydrates a. Determination of simple sugars The level of simple sugars corresponds to 100% glucose. b. Degree of Polymerization The table below shows that the carbohydrate fraction of the extract according to the present invention comprises glucose essentially in the form of oligosaccharides having a degree of polymerization of less than or equal to 5. Degree of polymerization Rate of (DP) carbohydrates Oligosaccharides DP 5 76.5% Oligosaccharides 5 <DP <10 5.3% Oligosaccharides 10 <DP <50 11.6% Oligosaccharides DP> 200 6.6% I.2-5 / Identification of the active fraction For the purpose of To identify the active fraction or fractions, the sugars of the extract according to the invention are fractionated by gel filtration chromatography. The effectiveness of the fraction obtained is evaluated by the proliferative activity of human fibroblasts subjected to repeated UV stress.

L'analyse des résultats montre que l'efficacité de l'extrait réside dans une fraction oligosaccharidique riche en glucosides.  The analysis of the results shows that the efficiency of the extract lies in a glucoside-rich oligosaccharide fraction.

II. EXEMPLES DE COMPOSITIONS COSMETIQUES INCLUANT UN EXTRAIT DE WITHANIA SOMNIFERA SELON L'INVENTION : La présente invention couvre aussi les compositions cosmétiques et/ou dermopharmaceutiques incluant un extrait Withania somnifera dans différentes formes galéniques, adaptées à l'administration par voie topique cutanée. Ces compositions peuvent se présenter notamment sous forme de crèmes, émulsions huile-dans-eau, émulsions eau-dans-huile, émulsions multiples, solutions, suspensions ou poudres. Elles peuvent être plus ou moins fluides et avoir l'aspect d'une crème, d'une lotion, d'un lait, d'un sérum, d'une pommade, d'un gel, d'une pâte ou d'une mousse, ou sous forme solide.  II. EXAMPLES OF COSMETIC COMPOSITIONS INCLUDING AN EXTRACT OF WITHANIA SOMNIFERA ACCORDING TO THE INVENTION: The present invention also covers cosmetic and / or dermopharmaceutical compositions including a Withania somnifera extract in different galenic forms, adapted for topical administration to the skin. These compositions may especially be in the form of creams, oil-in-water emulsions, water-in-oil emulsions, multiple emulsions, solutions, suspensions or powders. They can be more or less fluid and have the appearance of a cream, a lotion, a milk, a serum, an ointment, a gel, a paste or a foam, or in solid form.

Ces compositions contiennent entre 0,01 et 20% en poids d'un extrait de Withania somnifera. Il convient alors d'analyser la stabilité des formes galéniques incluant un extrait de Withania somnifera selon l'invention, la stabilité étant caractérisée par une absence de précipitation de l'extrait, une absence de crémage et une absence de déphasage. On peut citer des formulations ayant montré une stabilité physique incluant 5% de l'extrait de Withania somnifera selon l'invention obtenu par la mise en oeuvre du procédé décrit en I.1 Gel limpide : - Carbopol : 0,5% avec Triéthanolamine : qsp pl-I=6,5 - Phénonip : 0,7% - Principe actif : 5,0% -Eau:93,8% Gel opaque : - Sépigel 305: 2,0% - Phénonip : 0,7% - Principe actif : 5,0% - Eau:92,3% Gel émulsionné : - Montanov 202 : 3,0% -Isopropyl palmitate : 12,0% - Phénonip : 0,7% - Viscolam AT 64 : 2,0% -Principe actif : 5,0% - Eau : 77,3% Emulsion non ionique : - Montanov 202 : 3,0% Simulsol 165: 2,0% - Isopropyl palmitate : 20,0% - Phénonip : 0,7% Principe actif : 5,0% - Eau : 69,3% Emulsion anionique : - Acide stéarique : 7,0% - Triethanolamine : 3,5% - Isopropyl palmitate : 20,0% -Phénonip : 0,7% - Principe actif : 5,0% - Eau:63,8% Emulsion cationique : Quaternium-82 : 5,0% - Alcool cétylique : 2,0% - Isopropyl palmitate : 15,0% - Alcool cétéarylique : 1% - PEG 100 stéarate : 1% - Phénonip : 0,7% - Principe actif : 5,0% - Eau:70,3% De plus, des tests ont montré la compatibilité de l'extrait avec les matières premières utilisées en cosmétique.  These compositions contain between 0.01 and 20% by weight of an extract of Withania somnifera. It is then necessary to analyze the stability of the galenic forms including an extract of Withania somnifera according to the invention, the stability being characterized by a lack of precipitation of the extract, an absence of creaming and absence of phase shift. It may be mentioned formulations having shown a physical stability including 5% of the extract of Withania somnifera according to the invention obtained by the implementation of the method described in I.1 Clear gel: Carbopol: 0.5% with triethanolamine: qsp pl-I = 6.5 - Phenonip: 0.7% - Active ingredient: 5.0% - Water: 93.8% Opaque gel: - Sepigel 305: 2.0% - Phenonip: 0.7% - Principle active: 5.0% - Water: 92.3% Emulsified gel: - Montanov 202: 3.0% -Isopropyl palmitate: 12.0% - Phenonip: 0.7% - Viscolam AT 64: 2.0% -Principle active: 5.0% - Water: 77.3% Nonionic emulsion: - Montanov 202: 3.0% Simulsol 165: 2.0% - Isopropyl palmitate: 20.0% - Phenonip: 0.7% Active principle: 5.0% - Water: 69.3% Anionic emulsion: - Stearic acid: 7.0% - Triethanolamine: 3.5% - Isopropyl palmitate: 20.0% - Phenonip: 0.7% - Active ingredient: 5, 0% - Water: 63.8% Cationic emulsion: Quaternium-82: 5.0% - Cetyl alcohol: 2.0% - Isopropyl palmitate: 15.0% - Cetearyl alcohol: 1% - PEG 100 st arate: 1% - Phenonip: 0.7% - Active ingredient: 5.0% - Water: 70.3% In addition, tests have shown the compatibility of the extract with the raw materials used in cosmetics.

20 III. EVALUATION DE L'EFFET D'UN EXTRAIT DE WITHANIA SOMNIFERA Les différentes études ont été réalisées pour l'extrait de Withania somnifera selon l'invention obtenu par la mise en oeuvre du procédé décrit en I.1. III.1 Etude de l'effet sur la régénération cellulaire dans des conditions extrêmes 25 Cette étude a pour objectif de déterminer l'effet de l'extrait de Withania somnifera obtenu selon l'invention sur la régénération des cellules cutanées exposées à différents stress : froid, chaud, H202 ou UV. 10 15 L'étude est réalisée sur fibroblastes humains par mesure de la viabilité cellulaire à l'aide d'une coloration au M.T.T. (méthyle thiazolyl tetrazolium). a - Stress au froid Le protocole opératoire est le suivant.  III. EVALUATION OF THE EFFECT OF AN EXTRACT OF WITHANIA SOMNIFERA The different studies were carried out for the extract of Withania somnifera according to the invention obtained by the implementation of the method described in I.1. III.1 Study of the effect on cell regeneration under extreme conditions This study aims to determine the effect of the extract of Withania somnifera obtained according to the invention on the regeneration of cutaneous cells exposed to various stresses: cold, hot, H202 or UV. The study is performed on human fibroblasts by measuring cell viability using M.T.T. staining. (methyl thiazolyl tetrazolium). a - Cold stress The operating procedure is as follows.

A JO, les fibroblastes sont ensemencés en plaques à une densité de 25000 cellules par puits dans un milieu de culture complet. A J1, le milieu de culture est éliminé et remplacé - par du milieu de culture pour deux séries témoin (témoin à 37 C, témoin à 20 C), - par du milieu de culture contenant l'extrait de Withania somnifera selon l'invention à 0, 5% et à 2% pour deux autres séries. Les cellules sont ensuite incubées dans une étuve : - à 37 C pour une série témoin, -à 20 C pour l'autre série témoin et les deux séries traitées avec l'extrait selon l'invention. A J4, les cellules sont récupérées et on étudie la croissance cellulaire par mesure de la coloration au M.T.T.. Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau suivant : Activité Activité Récupération prolifératrice (%) prolifératrice / cellulaire (%) Témoin 37 C (%) Témoin 37 C 100 Témoin 20 C 72 -28 Extrait de Withania 85 -15 +46 somnifera 0,5% Extrait de Withania 91 -9 +68 somnifera 2% 20 Ces résultats montrent que la viabilité cellulaire des fibroblastes est réduite de 28% après un stress au froid et que testé à 2%, l'extrait de Withania somnifera selon l'invention stimule la récupération de ces fibroblastes stressés par le froid de 68%. b -Stress au chaud Le protocole opératoire est le suivant. A JO, les fibroblastes sont ensemencés en plaques à une densité de 25000 cellules par puits dans un milieu de culture complet.  At 0, the fibroblasts are seeded in plates at a density of 25,000 cells per well in a complete culture medium. On D1, the culture medium is removed and replaced by culture medium for two control series (control at 37 ° C., control at 20 ° C.), by culture medium containing the extract of Withania somnifera according to the invention. at 0, 5% and 2% for two other series. The cells are then incubated in an oven: at 37 ° C. for a control series, at 20 ° C. for the other control series and the two series treated with the extract according to the invention. On day 4, the cells are recovered and cell growth is studied by measurement of the MTT staining The results obtained are presented in the following table: Activity Proliferative (%) proliferative / cellular recovery (%) Control 37 C (%) Control 37 C 100 Control 20 C 72 -28 Withania extract 85 -15 +46 somnifera 0.5% Withania extract 91 -9 +68 somnifera 2% These results show that fibroblast cell viability is reduced by 28% after a cold stress and that tested to 2%, the extract of Withania somnifera according to the invention stimulates the recovery of these fibroblasts stressed by the cold by 68%. b -Stress warm The operating protocol is as follows. At 0, the fibroblasts are seeded in plates at a density of 25,000 cells per well in a complete culture medium.

A J1, le milieu de culture est éliminé et remplacé - par du milieu de culture pour deux séries témoin (témoin à 37 C, témoin à 41 C), - par du milieu de culture contenant l'extrait de Withania somnifera selon l'invention à 0,5% et à 2% pour deux autres 15 séries. Les cellules sont ensuite incubées dans une étuve : - à 37 C pour une série témoin, - à 41 C pour l'autre série témoin et les deux séries traitées. A J4, les cellules sont récupérées et on étudie la croissance 20 cellulaire par mesure de la coloration au M.T.T.. Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau suivant : Activité Activité Récupération prolifératrice (%) prolifératrice / cellulaire (%) Témoin 37 C (%) Témoin 37 C 100 Témoin 41 C 71 -29 Extrait de Withania 79 -21 +27 somnifera 0,5% Extrait de Withania 86 -14 +52 somnifera 2% Ces résultats montrent que la viabilité cellulaire des fibroblastes est réduite de 29% après un stress au chaud et que testé à 2%, l'extrait de Withania somnifera selon l'invention stimule la récupération de ces fibroblastes stressés par le chaud de 52%. c -Stress au H202 Le protocole opératoire est le suivant. A JO, les fibroblastes sont ensemencés en plaques à une densité de 70000 cellules par puits dans un milieu de culture complet. A J1, le milieu de culture est éliminé et remplacé - par du milieu de culture sans ou avec H202 à 30pM, - par du milieu de culture contenant l'extrait de Withania somnifera selon l'invention à 0,5% et à 2% avec H202 30PM. A J4, les cellules sont récupérées et on étudie la croissance cellulaire par mesure de la coloration au M.T.T..  On day 1, the culture medium is removed and replaced by culture medium for two control series (control at 37 ° C., control at 41 ° C.), by culture medium containing the extract of Withania somnifera according to the invention. at 0.5% and 2% for two other series. The cells are then incubated in an oven: at 37 ° C. for a control series, at 41 ° C. for the other control series and the two series treated. On day 4, the cells are recovered and cell growth is studied by measurement of MTT staining The results obtained are presented in the following table: Activity Activity Proliferative (%) proliferative / cellular recovery (%) Control 37 C (%) ) Control 37 C 100 Control 41 C 71 -29 Withania extract 79 -21 +27 somnifera 0.5% Withania extract 86 -14 +52 somnifera 2% These results show that fibroblast cell viability is reduced by 29% after a heat stress and that tested to 2%, the extract of Withania somnifera according to the invention stimulates the recovery of these fibroblasts stressed by the heat of 52%. c -Stress with H202 The operating protocol is as follows. At 0, the fibroblasts are seeded in plates at a density of 70000 cells per well in a complete culture medium. On D1, the culture medium is removed and replaced by culture medium without or with H 2 O 2 at 30 μM, by culture medium containing the extract of Withania somnifera according to the invention at 0.5% and 2%. with H202 30PM. At day 4, the cells are recovered and cell growth is studied by measurement of M.T.T. staining.

Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau suivant : Activité Activité Récupération prolifératrice (%) prolifératrice / cellulaire (%) Témoin (%) Témoin 100 Témoin H202 (30pM) 61 -39 Extrait de Withania 83 -17 +56 somnifera 0,5% Extrait de Withania 104 0 +100 somnifera 2% Ces résultats montrent que la viabilité cellulaire des fibroblastes est réduite de 39% après un stress au chaud et que testé à 2%, l'extrait de Withania somnifera selon l'invention stimule la récupération 20 de ces fibroblastes stressés par H202 de 100%. d - Stress UV Le protocole opératoire est le suivant. A JO, les fibroblastes sont ensemencés en plaques à une densité de 25000 cellules par puits dans un milieu de culture complet.  The results obtained are presented in the following table: Activity Proliferative (%) proliferative / cellular recovery (%) Control (%) Control 100 Control H202 (30 μM) 61 -39 Withania extract 83 -17 +56 somnifera 0.5% These results show that the fibroblast cell viability is reduced by 39% after heat stress and that tested at 2%, the Withania somnifera extract according to the invention stimulates the recovery of the fibroblasts. of these fibroblasts stressed by H202 by 100%. d - UV stress The operating protocol is as follows. At 0, the fibroblasts are seeded in plates at a density of 25,000 cells per well in a complete culture medium.

A J1, à 8heures, 12heures et 16 heures, les cellules sont traitées comme suit - le milieu de culture est éliminé, - les cellules sont irradiées aux UVA (4J/cm2), sauf une série de plaques qui constitue le témoin non irradié, - les cellules sont ensuite distribuées dans des puits avec un milieu de culture contenant l'extrait de Withania somnifera selon l'invention à 0,5% et à 2% pour deux séries, et - toutes les séries de plaques sont incubées à 37 C. A J2, les cellules subissent le même traitement qu'à J1.  At day 1, at 8 hours, 12 hours and 16 hours, the cells are treated as follows - the culture medium is removed, - the cells are irradiated with UVA (4J / cm 2), except a series of plates which constitutes the non-irradiated control, the cells are then distributed in wells with a culture medium containing the extract of Withania somnifera according to the invention at 0.5% and at 2% for two series, and all the series of plates are incubated at 37 ° C. At D2, the cells undergo the same treatment as at D1.

A J4, les cellules sont récupérées et on étudie la croissance cellulaire par mesure de la coloration au M.T.T.. Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau suivant : Activité Activité prolifératrice / Récupération prolifératrice (%) Témoin non irradié (%) cellulaire (%) Témoin non irradié 100 Témoin irradié UVA 62 -38 Extrait de Withania 71 -29 +24 somnifera 0,5% Extrait de Withania 77 -23 +39 somnifera 2% Ces résultats montrent que la viabilité cellulaire des fibroblastes est réduite de 38% après un stress UVA et que testé à 2%, l'extrait de Withania somnifera selon l'invention stimule la récupération de ces fibroblastes stressés par le chaud de 39%.  At day 4, the cells are recovered and the cell growth is studied by measuring the MTT staining The results obtained are presented in the following table: Activity Proliferative activity / Proliferative recovery (%) Unirradiated control (%) cell (%) Non-irradiated control 100 UVA irradiated control 62 -38 Withania extract 71 -29 +24 somnifera 0.5% Withania extract 77 -23 +39 somnifera 2% These results show that fibroblast cell viability is reduced by 38% after UVA stress and that tested to 2%, the extract of Withania somnifera according to the invention stimulates the recovery of these fibroblasts stressed by the hot 39%.

L'extrait de Withania somnifera selon l'invention est donc capable de revitaliser les cellules stressées par le froid, le chaud, H202 ou les UVA et dynamise ainsi le développement cellulaire. III.2 Etude de l'effet sur la protection de la matrice dermique soumise à un stress solaire Le but de cette étude est de déterminer l'effet de l'extrait de Withania somnifera selon l'invention sur la dégradation de la matrice dermique par les MMP-1 après un stress solaire, les MMP-1 étant les métalloprotéinases matricielles responsables de la dégradation des fibres de collagène I et III. L'étude est réalisée sur fibroblastes humains soumis à une exposition aux UVA induisant une augmentation importante du taux de MMP au niveau de la matrice extracellulaire. A J1, les cellules sont ensemencées en plaques puis incubées à 37 C.  The extract of Withania somnifera according to the invention is therefore able to revitalize the cells stressed by cold, heat, H202 or UVA and thus boosts cell development. III.2 Study of the effect on the protection of the dermal matrix subjected to a solar stress The purpose of this study is to determine the effect of the extract of Withania somnifera according to the invention on the degradation of the dermal matrix by MMP-1 after solar stress, MMP-1 being the matrix metalloproteinases responsible for the degradation of collagen I and III fibers. The study is performed on human fibroblasts subjected to UVA exposure inducing a significant increase in the level of MMP at the level of the extracellular matrix. On day 1, the cells are seeded into plates and then incubated at 37 ° C.

A J4, les cellules sont cultivées pendant 48 heures en présence ou non de l'extrait selon l'invention à 0,5%, 1% ou 2%. Elles sont ensuite irradiées à l'aide d'une lampe UV avec des intensités UVA de 15J/cm2. Après irradiation, les cellules sont maintenues à l'étuve à 37 C pendant 48 heures. A J6, les surnageants cellulaires sont récupérés.  At D4, the cells are cultured for 48 hours in the presence or absence of the extract according to the invention at 0.5%, 1% or 2%. They are then irradiated with a UV lamp with UVA intensities of 15J / cm2. After irradiation, the cells are kept in an oven at 37 ° C. for 48 hours. On D6, cell supernatants are recovered.

Le dosage des MMP-1 est réalisé à l'aide d'un kit de dosage ELISA. Les résultats obtenus, exprimés en pourcentage de variation du taux de MMP-1 par rapport au témoin sont présentés dans le tableau qui suit : Taux de MMP-1 (ng/ml) Variation de MMP-1 (%) Témoin non irradié 7 Témoin irradié UVA 33 Extrait de Withania 28 -15 somnifera 0,5% Extrait de Withania 20 -40 somnifera 1% Extrait de Withania 12 -64 somnifera 2% Ces résultats confirment que le taux de MMP-1 augmente considérablement lorsque les cellules sont soumises à un stress solaire. On constate que l'extrait de Withania somnifera selon l'invention dosé à 2% inhibe de 64% l'expression des MMP-1 induite par un stress UVA. En outre, l'effet inhibiteur de l'extrait selon l'invention est dose-dépendant. III.3 Etude de l'effet sur la différenciation épidermique Cette étude a pour but d'évaluer l'effet de l'extrait selon l'invention sur sa capacité à dynamiser l'activité métabolique des cellules épidermiques, en étudiant l'expression de l'involucrine, protéine impliquée dans la différenciation des kératinocytes. L'étude est réalisée sur des kératinocytes humains normaux selon le protocole opératoire suivant. A JO, les cellules sont ensemencées puis incubées à 37 C.  The MMP-1 assay is performed using an ELISA assay kit. The results obtained, expressed as a percentage of variation of the level of MMP-1 relative to the control, are presented in the following table: MMP-1 level (ng / ml) MMP-1 variation (%) Non-irradiated control 7 Control irradiated UVA 33 Withania extract 28 -15 somnifera 0.5% Withania extract 20 -40 somnifera 1% Withania extract 12 -64 somnifera 2% These results confirm that the level of MMP-1 increases considerably when cells are subjected to a solar stress. It is found that the extract of Withania somnifera according to the invention assayed at 2% inhibits the expression of MMP-1 induced by UVA stress by 64%. In addition, the inhibitory effect of the extract according to the invention is dose-dependent. III.3 Study of the effect on epidermal differentiation This study aims to evaluate the effect of the extract according to the invention on its ability to boost the metabolic activity of epidermal cells, by studying the expression of involucrine, a protein involved in the differentiation of keratinocytes. The study is performed on normal human keratinocytes according to the following operating protocol. At 0, the cells are inoculated and then incubated at 37 ° C.

A J3, les cellules sont traitées avec l'extrait de Withania somnifera selon l'invention à 0,5% et 1%, puis sont de nouveaux incubées à 37 C. A J5, les cellules sont récupérées et on extrait les ARN totaux qui sont reverses-transcripts. Les ADN complémentaires obtenus sont ensuite analysés par PCR (Polymerase Chain Reaction) quantitative.  On D3, the cells are treated with the extract of Withania somnifera according to the invention at 0.5% and 1%, then are incubated again at 37 C. At day 5, the cells are recovered and the total RNAs are extracted. are reverse-transcripts. The complementary DNAs obtained are then analyzed by quantitative PCR (Polymerase Chain Reaction).

Les résultats obtenus, exprimés en pourcentage d'ARNm d'involucrine par rapport au témoin de référence, sont présentés dans le tableau suivant Taux d'ARNm d'involucrine (%) Témoin 100 Extrait de Withania somnifera 0,5% 116 Extrait de Withania somnifera 1% 155 Ces résultats montrent que l'extrait de Withania somnifera selon l'invention augmente la synthèse des ARNm de l'involucrine. Dosé à 1% sur kératinocytes humains normaux, il augmente de 55% la synthèse de l'involucrine. III.4 Etude de l'effet sur le renouvellement cellulaire Cette étude a pour objectif de quantifier in vivo l'effet de l'extrait selon l'invention formulé à 4% contre placebo sur le renouvellement cellulaire après 14 jours d'applications biquotidiennes.  The results obtained, expressed as a percentage of involucrin mRNA relative to the reference control, are presented in the following table. Involucin mRNA level (%) Control 100 Withania somnifera extract 0.5% 116 Withania extract These results show that the extract of Withania somnifera according to the invention increases the synthesis of involucrine mRNA. Dosed at 1% on normal human keratinocytes, it increases by 55% the synthesis of involucrine. III.4 Study of the effect on cell renewal This study aims to quantify in vivo the effect of the extract according to the invention formulated at 4% against placebo on cell renewal after 14 days of twice-daily applications.

L'étude est réalisée sur 21 volontaires sains de sexe féminin, âgés de 20 à 41 ans, après coloration de la peau à l'aide de dihydroxyacétone (DHA) et par mesure régulière de la couleur de la peau au chromamètre. La coloration de la peau au DHA est réalisée par application d'un patch contenant 4% de DHA pendant 24 heures. La mesure de la couleur obtenue est effectuée 48 heures après le retrait du patch afin de laisser la coloration se développer. Les mesures sont réalisées sur des zones symétriques au niveau du ventre. Les zones de mesures après application du patch DHA sont les suivantes - une zone non traitée, - une zone traitée biquotidiennement par une formule placebo, et - une zone traitée biquotidiennement par une formule contenant 4% de l'extrait de Withania somnifera selon l'invention. La couleur de la peau est mesurée à l'aide d'un chromamètre qui convertit les couleurs situées dans la plage de perception humaine en un code numérique composé de trois paramètres : L*, qui représente la clarté, a*, qui correspond à la gamme des verts aux rouges, et b*, qui correspond à la gamme des bleus aux jaunes. Pour cette étude, deux éléments sont évalués - le paramètre b*, caractéristique de la pigmentation jaune mélanique cutanée ; plus b* diminue, plus la peau s'éclaircit ; et - AE (Aa*+Ab*+AL*)1/'2, caractéristique de la variation de la couleur ; plus AE augmente, plus la peau s'éclaircit. L'éclaircissement de la peau, dans le cadre de cette étude, est significatif d'un renouvellement des cellules de la peau.  The study is conducted on 21 healthy female volunteers, aged 20 to 41, after skin staining using dihydroxyacetone (DHA) and by regular measurement of the color of the skin to the chromameter. Skin staining with DHA is performed by applying a patch containing 4% DHA for 24 hours. The measurement of the color obtained is carried out 48 hours after the removal of the patch in order to allow the color to develop. The measurements are performed on symmetrical areas at the belly. The measurement zones after application of the DHA patch are as follows: one untreated zone, one treated zone twice daily with a placebo formula, and one treated zone twice daily with a formula containing 4% of the extract of Withania somnifera according to invention. The color of the skin is measured using a chromameter that converts the colors in the human perception range into a numerical code composed of three parameters: L *, which represents the clarity, a *, which corresponds to the range of greens to red, and b *, which corresponds to the range of blue to yellow. For this study, two elements are evaluated - the parameter b *, characteristic of melanic yellow skin pigmentation; the more b * diminishes, the clearer the skin becomes; and - AE (Aa * + Ab * + AL *) 1/2, characteristic of the variation of the color; As AE increases, the skin becomes lighter. The lightening of the skin, as part of this study, is indicative of a renewal of skin cells.

Le protocole opératoire de l'étude est le suivant. A J-3, on détermine les trois zones cutanées au niveau du ventre de chaque volontaire et on y applique des patchs contenant 4% de bHA. A J-2, on retire les patchs. A JO, on mesure la couleur de la peau sur chaque zone.  The operating protocol of the study is as follows. At D-3, the three cutaneous zones are determined at the level of the belly of each volunteer and patches containing 4% of bHA are applied thereto. At D-2, the patches are removed. At OJ, we measure the color of the skin on each zone.

Entre JO et J14, on applique biquotidiennement sur une zone une formule placebo, et sur une autre zone une formule contenant l'extrait de Withania somnifera selon l'invention. La couleur de la peau au niveau des trois zones est mesurée tous les deux jours. Les résultats obtenus pour le paramètre b* sont présentés dans le tableau ci-dessous : J2-JO J4-JO J7JO J9-JO J11-JO J14-JO Zone non traitée 0,09 -0,50 -1,67 -1,77 -2,28 -2,96 Zone traitée placebo -0,51 -0,67 -1,32 -2,54 -2,94 -3,21 Zone traitée Withania -0,45 -1,01 -2,41 -3,15 -3,46 -4,21 somnifera On constate que l'application biquotidienne de Withania somnifera selon l'invention, comparé au placebo, permet de diminuer le paramètre b*, caractéristique de la pigmentation jaune mélanique cutanée. Il y a donc un éclaircissement de la peau correspondant à une accélération du renouvellement des cellules cutanées. Les résultats obtenus pour le paramètre AE sont récapitulés dans le 5 tableau suivant : J2-JO J4-JO J7-JO J9-JO J11-JO J14-JO Zone non traitée 2,11 2,03 3,47 3,70 4,73 5,04 Zone traitée placebo 2,33 2,62 3,06 4,35 5,05 5,35 Zone traitée Withania 1,85 2,59 4,04 4,82 5,53 6,04 somnifera On constate que l'application biquotidienne de Withania somnifera selon l'invention, comparé au placebo, permet d'augmenter le paramètre AE, caractéristique de la variation de la couleur de la peau. Il y a donc un 10 éclaircissement de la peau correspondant à une accélération du renouvellement des cellules cutanées. Cette étude montre donc que l'application de Withania somnifera selon l'invention formulé à 4% comparé au placebo accélère le renouvellement cellulaire. 15 III.5 Etude de l'effet sur la perte insensible en eau L'objectif est de quantifier in vivo l'effet de l'extrait selon l'invention formulé à 4% contre placebo sur la perte insensible en eau (PIE) de la peau après 14 jours d'applications biquotidiennes, afin d'évaluer l'effet barrière de la peau. 20 La barrière cutanée joue un rôle régulateur dans l'équilibre en eau de la peau. Si la peau est lésée, il apparaît des dérèglements dans la régulation des échanges en eau. L'eau migre alors plus facilement vers le milieu extérieur, ce qui augmente la PIE. Par contre, si l'état de la barrière cutanée s'améliore, les valeurs de PIE diminuent car la régulation des échanges en eau sera assurée de façon correcte. L'étude est réalisée sur 20 volontaires sains de sexe féminin, âgés de 24 à 40 ans présentant une peau normale au niveau des bras.  Between OJ and D14, a placebo formula is applied to one zone twice a day, and in another zone a formula containing the extract of Withania somnifera according to the invention. Skin color in all three areas is measured every other day. The results obtained for parameter b * are given in the table below: J2-OJ J4-JO J7JO J9-JO J11-JO J14-JO Untreated zone 0,09 -0,50 -1,67 -1, 77 -2.28 -2.96 Zone treated with placebo -0.51 -0.67 -1.32 -2.54 -2.94 -3.21 Zone treated Withania -0.45 -1.01 -2, 41 -3,15 -3,46 -4,21 somnifera It is found that the twice-daily application of Withania somnifera according to the invention, compared to placebo, makes it possible to reduce the parameter b *, characteristic of melanic yellow skin pigmentation. There is therefore a lightening of the skin corresponding to an acceleration of the renewal of the cutaneous cells. The results obtained for parameter AE are summarized in the following table: J2-OJ J4-OJ J7-JO J9-JO J11-JO J14-JO Untreated zone 2,11 2,03 3,47 3,70 4, 73 5.04 Area treated with placebo 2.33 2.62 3.06 4.35 5.05 5.35 Treated area Withania 1.85 2.59 4.04 4.82 5.53 6.04 somnifera It can be seen that the twice-daily application of Withania somnifera according to the invention, compared to placebo, makes it possible to increase the parameter AE, characteristic of the variation of the color of the skin. There is therefore a lightening of the skin corresponding to an acceleration of the renewal of the cutaneous cells. This study shows that the application of Withania somnifera according to the invention formulated at 4% compared to placebo accelerates cell renewal. III.5 Study of the effect on insensitive water loss The objective is to quantify in vivo the effect of the extract according to the invention formulated at 4% against placebo on the insensible loss of water (PIE) of skin after 14 days of twice-daily application, to evaluate the barrier effect of the skin. The cutaneous barrier plays a regulating role in the water balance of the skin. If the skin is damaged, it appears disturbances in the regulation of water exchanges. The water then migrates more easily to the outside environment, which increases the PIE. On the other hand, if the state of the cutaneous barrier improves, the values of PIE decrease because the regulation of the exchanges in water will be ensured in a correct way. The study is conducted on 20 healthy female volunteers aged 24 to 40 years with normal skin in the arms.

La mesure de la PIE est effectuée avec un Tewamètre, appareil muni d'une sonde qui mesure le gradient de vapeur d'eau se mettant en place entre la surface cutanée et l'air ambiant. Cette mesure permet d'apprécier les échanges d'eau entre la surface cutanée et le milieu environnant, et par conséquent la qualité de la fonction barrière de la peau.  The measurement of the PIE is carried out with a Tewameter, apparatus equipped with a probe which measures the gradient of water vapor settling between the cutaneous surface and the ambient air. This measurement makes it possible to appreciate the exchanges of water between the cutaneous surface and the surrounding environment, and consequently the quality of the barrier function of the skin.

A JO, on détermine sur chaque volontaire trois zones de mesure au niveau du haut des bras : - une zone non traitée, - une zone traitée avec une formule placebo, et - une zone traitée avec une formule contenant 4% de l'extrait de Withania somnifera selon l'invention. On effectue une première mesure au Tewamètre. Entre JO et J13, biquotidiennement on lave les zones étudiées avec un savon irritant SLS (Lauryl Sulfate de Sodium) et on applique le placebo et la formule contenant l'extrait de Withania somnifera. L'application de SLS permet d'augmenter les pertes en eau. A J14, une mesure au Tewamètre est réalisée sur chaque zone. Les résultats obtenus pour la PIE sont présentés ci-dessous : JO J14 Zone non traitée 11,1 17,1 Zone traitée placebo 11,0 16,6 Zone traitée Withania somnifera 10,8 14,7 Variation Withania somnifera / Placebo (%) -10,4 % On constateque dans les conditions de cette étude et en comparaison au placebo, l'extrait de Withania somnifera selon l'invention formulé à 4% entraîne une diminution de la PIE engendrée par des applications répétées de SLS.  At OJ, three measurement zones are determined on each volunteer at the level of the upper arms: - an untreated zone, - a zone treated with a placebo formula, and - a zone treated with a formula containing 4% of the extract of Withania somnifera according to the invention. A first measurement is made at the Tewameter. Between OJ and D13, once daily the areas under study are washed with an irritating soap SLS (Lauryl Sodium Sulfate) and the placebo and the formula containing the extract of Withania somnifera are applied. The application of SLS increases the water losses. At J14, a Tewameter measurement is performed on each zone. The results for the PIE are presented below: OJ J14 Untreated area 11.1 17.1 Placebo treated area 11.0 16.6 Treated area Withania somnifera 10.8 14.7 Withania somnifera / Placebo variation (%) -10.4% It is noted that under the conditions of this study and in comparison with placebo, the extract of Withania somnifera according to the invention formulated at 4% causes a decrease in the PIE generated by repeated applications of SLS.

Claims (10)

REVENDICATIONS 1. Utilisation d'au moins un extrait de Withania somnifera en tant qu'actif pour une application au traitement de la peau en vue de la protéger et/ou de lutter contre toutes manifestations perturbant son activité et son apparence.  1. Use of at least one extract of Withania somnifera as an active ingredient for an application to the treatment of the skin for the purpose of protecting it and / or against any manifestations disturbing its activity and appearance. 2. Utilisation d'au moins un extrait de Withania somnifera selon la revendication 1, pour la préparation d'une composition cosmétique destinée à régulariser les fonctionnalités naturelles cutanées.  2. Use of at least one extract of Withania somnifera according to claim 1, for the preparation of a cosmetic composition intended to regulate the cutaneous natural functionalities. 3. Utilisation d'au moins un extrait de Withania somnifera selon la revendication 1 ou 2, pour la préparation d'une composition cosmétique capable de dynamiser le développement cellulaire.  3. Use of at least one extract of Withania somnifera according to claim 1 or 2, for the preparation of a cosmetic composition capable of stimulating cell development. 4. Utilisation d'au moins un extrait de Withania somnifera selon l'une des revendications 1 à 3, pour la préparation d'une composition cosmétique capable de maintenir et stimuler les systèmes naturels de défense et de protection de la peau.  4. Use of at least one extract of Withania somnifera according to one of claims 1 to 3, for the preparation of a cosmetic composition capable of maintaining and stimulating the natural systems of defense and protection of the skin. 5. Utilisation d'au moins un extrait de Withania somnifera selon l'une des précédentes revendications, pour la préparation d'une composition cosmétique destinée à maintenir l'homéostasie dermique et à réparer et restructurer la fonction barrière cutanée.  5. Use of at least one Withania somnifera extract according to one of the preceding claims, for the preparation of a cosmetic composition intended to maintain dermal homeostasis and to repair and restructure the cutaneous barrier function. 6. Utilisation d'au moins un extrait de Withania somnifera selon l'une des précédentes revendications, pour la préparation d'une composition cosmétique destinée à hydrater et à protéger la couche cornée de la peau, à prévenir et lutter contre l'apparition des rides, ou à favoriser le renouvellement cellulaire de la peau.  6. Use of at least one extract of Withania somnifera according to one of the preceding claims, for the preparation of a cosmetic composition intended to moisturize and protect the stratum corneum of the skin, to prevent and fight against the appearance of wrinkles, or to promote cellular renewal of the skin. 7. Composition cosmétique adaptée pour l'utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisée en ce qu'elle contient comme 25 actif entre 0,01 et 20% d'au moins un extrait de Withania somnifera.  7. Cosmetic composition adapted for use according to any one of claims 1 to 6, characterized in that it contains as active between 0.01 and 20% of at least one extract of Withania somnifera. 8. Composition cosmétique et/ou dermopharmaceutique selon la revendication 7, caractérisée en ce qu'elle se présente sous forme de crème, émulsion huile-dans-eau, émulsion eau-dans-huile, émulsion multiple, solution, suspension ou poudre.  8. Cosmetic and / or dermopharmaceutical composition according to claim 7, characterized in that it is in the form of cream, oil-in-water emulsion, water-in-oil emulsion, multiple emulsion, solution, suspension or powder. 9. Procédé d'obtention d'un extrait de Withania somnifera adapté pour l'utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé en ce qu'il comprend la succession des étapes suivantes : - solubilisation de poudre de racines de Withania somnifera dans l'eau avec au moins 100g/I, de préférence en milieu basique, - une ou plusieurs hydrolyse(s) enzymatique(s) successive(s) ou simultanée(s), - séparation des phases soluble et insoluble par décantation, - traitement thermique pour inactiver les activités enzymatiques, - filtration pour concentrer la fraction active, et - filtration stérilisante.  9. Process for obtaining an extract of Withania somnifera suitable for use according to any one of claims 1 to 6, characterized in that it comprises the succession of the following steps: - solubilization of Withania root powder water-soluble with at least 100 g / l, preferably in basic medium, - one or more successive or simultaneous enzymatic hydrolysis (s), - separation of the soluble and insoluble phases by decantation, - heat treatment to inactivate enzymatic activities, - filtration to concentrate the active fraction, and - sterilizing filtration. 10. Principe actif obtenu par la mise en oeuvre du procédé selon la revendication 9, caractérisé par : - un taux de matières sèches compris entre 30 et 300 g/I, - un pH compris entre 3 et 7, - une teneur en sucres totaux comprise entre 18 et 213 g/I.  10. Active ingredient obtained by the implementation of the process according to claim 9, characterized by: - a solids content of between 30 and 300 g / l, - a pH of between 3 and 7, - a total sugar content between 18 and 213 g / I.
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