FR2883563A1 - Nouveaux vecteurs cationiques bolaformes hemifluorocarbones et leurs applications - Google Patents

Abstract

Nouveaux vecteurs cationiques bolaformes hémifluorocarbonés répondant à la formule (I), leur synthèse et leur utilisation pour la vectorisation de molécules :

Description

CH2

n Y \ R1 CH2 C F2 m (I) La présente invention a pour objet de nouveaux vecteurs cationiques bolaformes hémifluorocarbonés, leur synthèse et leur utilisation pour la vectorisation de molécules.

L'invention concerne la synthèse de nouvelles molécules cationiques hydroperfluorocarbonées bifonctionnalisées et leurs applications potentielles dans le domaine médical.

Les molécules de l'invention sont synthétisées à partir de perfluorocarbures. Elles sont munies de deux extrémités polaires différentes, l'une cationique et l'autre neutre, et permettent la formation en milieu aqueux de nouveaux vecteurs synthétiques particulaires de type lipoplexe dissymétrique qu'on appellera bolaplexes . Elles peuvent être utilisées pour le transport de molécules d'intérêt biologique chargées négativement telles que ADN, ARN ou leurs fragments, notamment en thérapie génique.

La thérapie génique consiste à corriger une déficience ou une anomalie telle qu'une mutation, une expression aberrante, ou à assurer l'expression d'une protéine d'intérêt thérapeutique. Le principe de la thérapie génique consiste à introduire une information génétique dans l'organe ou la cellule concerné. Cette information génétique peut soit être introduite in vitro dans une cellule extraite de l'organe, et la cellule modifiée est ensuite réintroduite dans l'organisme, soit elle peut être introduite directement in vivo dans le tissu approprié.

L'invention concerne plus particulièrement la vectoration de molécules bioactives chargées négativement, cette vectorisation étant plus particulièrement destinée aux domaines de la vaccination humaine et animale et de l'oncologie. Les molécules amphiphiles bifonctionnalisées de façon dissymétrique selon l'invention sont destinées à permettre le transfert de molécules d'intérêt biologique chargées négativement au sein de la cellule. Les molécules de l'invention sont mono ou polycationiques et cette partie de leur structure permet de fixer l'ADN ou l'ARN à acheminer vers sa cible. Elles sont également munies d'une partie polaire non ionique qui confère au vecteur sa neutralité de charge. Cette partie non-ionique peut en outre être à l'origine de la furtivité du vecteur visà-vis du système réticuloendothelial et elle peut être fonctionnalisée par des agents de ciblage ou de pénétration cellulaire.

Le succès de la thérapie génique est largement dépendant de la mise au point d'un vecteur d'ADN qui puisse véhiculer sélectivement et efficacement un gène vers une cellule cible sans entraîner d'effets toxiques secondaires. En effet les rendements de transfection par de l'ADN nu sont extrêmement faibles en raison de la dégradation enzymatique rapide de ces macromolécules et de leur difficulté à franchir les membranes cellulaires chargées comme eux négativement. En raison de cette très faible biodisponibilité de l'ADN nu, il est devenu évident qu'une encapsulation dans des systèmes de vectorisation adaptés permettrait de résoudre ces deux problèmes.

Les vecteurs connus à l'heure actuelle se divisent en deux catégories: les vecteurs viraux d'origine naturelle qui ont été les premiers testés en raison de leur capacité naturelle à transfecter le matériel génétique vers les cellules eucaryotes. Les taux de transfection in vitro du matériel génétique par ces vecteurs sont extrêmement élevés mais leur mise en oeuvre dans un traitement thérapeutique se heurte actuellement à des obstacles pour l'instant non surmontés: d'une part la limitation en taille du matériel transfecté et d'autre part la faculté de ces vecteurs à provoquer des réactions allergiques, mutagènes et immunitaires très fortes (McCoy et al., 1995, Human Gene Therapy, 6, 1553-1560; Yang et al., 1996, Immunity, 1, 433-442). Ces réactions secondaires importantes excluent à priori ce type de vecteur des champs d'application pharmaceutiques.

- Ces difficultés ont conduit au développement de nouveaux vecteurs synthétiques. Ceux-ci présentent la particularité d'être munis d'une ou de plusieurs charges positives qui leur permettent de complexer le matériel génétique par l'intermédiaire d'interactions électrostatiques pour former des complexes appelés polyplexes ou lipoplexes.

Les polyplexes sont constitués de polymères polycationiques. Parmi ceuxci on trouve les polyéthylèneimines (brevet WO 96/02655), les polylysines (brevets US 5595897 et FR 2719316), les polyamidoamines (Haensler et Szoka, 1993, Bioconjugate Chem, 4, 372-379) ou des dendrimères polycationiques (brevet WO 95/24221).

Les lipoplexes sont constitués de lipides cationiques synthétiques. Certains d'entre eux sont devenus des molécules de référence dans le domaine de la transfection: Le DOTMA (Felgner et al., 1987, PNAS, 84, 7413-7417), Le Transfectam (Behr et al., 1989, PNAS, 86, 6982-6986), le DC-Chol (Gao et Huang, 1991, BBRC, 179, 280-285), le DOTAP (McLachlan et al., 1995, Gene Therapy, 2, 674-682) ou la Lipofectamine (brevet WO 91/16024).

Les charges de surface positives de ces vecteurs induisent des liaisons particulières à la surface des membranes chargées négativement ce qui facilite leur pénétration dans la cellule. Il est admis que ces composés polyaminés provoquent une sortie rapide du compartiment lysosomal lors de l'acidification de l'endosome par un effet de tamponnage qui conduit à un choc osmotique de ce compartiment cellulaire (Sonawane et al., 2003, J. Biol. Chem., 278, 44826-44831).

Une fois libéré dans le cytoplasme après avoir franchi les barrières plasmatiques, plasmiques et lysosomales le vecteur doit relarguer l'ADN afin qu'il puisse pénétrer la membrane nucléaire. La décomplexation de l'ADN peut se faire par lyse acide de tensioactifs pH-sensibles constitutifs du lipoplexe (Guo et Szoka, 2003, Ace. Chem. Res., 36, 335341).

Cependant, si les résultats in vitro de ces vecteurs se sont montrés particulièrement encourageants, leur mise en oeuvre sur des organismes vivants a démontré les limites de leurs utilisations potentielles. En effet la taille importante de ces complexes et leur charge globale positive conduit à leur élimination rapide du flux sanguin par le système réticuloendothélial (Zelphati et al, 1998, Biochim. Biophys. Acta, 1390, 119-133; Moret et al., 2001, J. Controll. Rel., 76, 169-181). De plus ces molécules polycationiques présentent une toxicité très élevée qui limite leur utilisation in vivo (Toussignant et al., 2000, Hum. Gene Ther., 11, 2493-2513; Loisel et al., 2001, Hum. Gene Ther., 12, 685-696; Morgan et al., 1989, J. Cell Sei., 94, 553-559; Hill et al., 1999, Biochim. Biophys.

Acta, 1427, 161-174).

L'invention a pour objectifs de mettre au point des molécules nouvelles susceptibles de véhiculer dans la cellule des composés bioactifs chargés négativement, tels qu'ADN et ARN, et qui soient dépourvus des problèmes de charge, de taille et de toxicité des vecteurs de l'art antérieur.

Les molécules de l'invention doivent en outre permettre de véhiculer dans la cellule de manière efficace d'autres molécules d'intérêt thérapeutique telles que des protéines, des peptides et des molécules organiques de synthèse.

Les molécules de l'invention permettent de favoriser la transfection de molécules d'intérêt thérapeutique, notamment de molécules chargées négativement, dans la 20 cellule, in vitro ou in vivo.

L'invention concerne des composés bolaformes hydroperfluorocarbonés bifonctionnalisés munis d'au moins une première tête polaire cationique ou polycationique et d'au moins une seconde tête polaire neutre.

Les composés bolaformes connus sont des molécules constituées d'un coeur hydrophobe polycarboné linéaire simple ou double brin, portant à leurs extrémités deux têtes polaires hydrophiles (Fuhrhop et Wang, 2004, Chem. Rev., 104, 2901-2938). Cette structure confère à la molécule des propriétés amphiphiles particulières et favorise par exemple dans certaines conditions la formation de vésicules monolamellaires très stables, structures trouvées notamment dans les archéabactéries (bactéries qui peuvent se développer dans des conditions drastiques: sous haute pression et à haute température au fond des océans).

Des molécules bolaformes hydrocarbonées symétriques (Weissig et Torchilin, 2001, Adv. Drug Deliver. Rev., 49, 127-149; Yoshimura et al., 2001, Bioorg. Med. Chem. Lett., 11, 2897-2901; Iwaura et al., 2003, Angew. Chem. Int. Ed., 42, 1009- 1012) et disymétriques (Ren et al., 2001, Bioorg. Med. Chem., 9, 2969-2978; Fabio et al., 2003, Bioconjugate Chem., 14, 358367; Gaucheron et al., 2001, Bioconjugate Chem., 12, 569-575; Eaton et al. , 2000, Angew. Chem. Int. Ed., 39, 4063-4067; Miramon et al., 2004, J. Org. Chem., 69, 6949-6952) ont déjà été étudiés dans le champ d'application de l'invention mais les résultats en terme de transfection se sont avérés négatifs.

Les composés de l'invention se distinguent de ceux de l'art antérieur en ce qu'ils possèdent un coeur polycarboné perfluoré qui favorise les interactions hydrophobes intermoléculaires entre les molécules de l'invention et forme autour de l'ADN une coque hydrophobe protectrice. Ils sont munis d'une deuxième tête polaire non-ionique qui permet d'assurer par une fonctionnalisation adaptée le ciblage, la furtivité ou la translocation du vecteur à travers la membrane cellulaire.

La présente invention a pour objet les composés répondant à la formule (I) ci-dessous: CH2,

W

n Y 2R1 CH2 CF2 dans laquelle: - l'un de X et de Y représente un groupement NHCO- tandis que l'autre représente un groupement -CONH - ; W et Z identiques ou différents représentent un groupement choisi parmi: 0-CO-, -CO-O-, -CO-NH-, -NH-CO-NH-, -NH-CO-O-, -O-CO-NH-, -NH-CO-, O-CO-O, -0-, -S-, -SO- , -S02-, -CH2- et une simple liaison; - n et o identiques ou différents représentent un entier allant de 2 à 12; - m représente un entier allant de 2 à 10; - l'un de RI et de R3 est un groupement cationique tandis que l'autre est un groupement non-ionique; Parmi les groupements cationiques parmi lesquels RI ou R3 peuvent être choisis, on peut citer en particulier: un groupement cationique aminé cyclique ou non cyclique, une alkyl amine ou une polyalkyl amine. Plus particulièrement, on peut citer un groupement amine, primaire secondaire ou tertiaire, un groupement imidazole, benzimidazole, pyridine, quinoline, guanidine, spermine, spermidine ou polyspermine.

Parmi les groupements non ioniques qui apportent au vecteur la neutralité de charge indispensable à sa furtivité biologique parmi lesquels RI ou R3 peuvent être choisis, on peut citer en particulier: -les molécules simples polyhydroxylées, ou polyéthoxylées, les polyéthers ou des télomères du tris(hydroxyméthyl)aminométhane.

Notamment parmi les composés polyhydroxylés, on peut citer les sucres, les dérivés aminés de sucre, les polysaccharides comme par exemple le galactose, le glucose, le fructose, le mannose, le ribose, l'acide sialique, le lactose, le maltose, le cellobiose, la glucosamine, la galactosamine, le saccharose, le lactobionamide.

Parmi les polyéthers, on peut citer le polyoxyde d'éthylène. Lorsque R1 ou R3 est constitué d'une chaîne polyoxyde d'éthylène, celle-ci comprend avantageusement de 10 à 50 unités oxyde d'éthylène.

- un agent de ciblage, c'est-à-dire une molécule favorisant l'acheminement de l'ensemble de la molécule de formule (I) jusqu'à sa cible. Une telle molécule est choisie parmi les mono et les disaccharides, les dérivés aminés de sucres, les polysaccharides, les peptides, les hormones naturelles ou synthétiques, les anticorps, et de façon générale, toute molécule susceptible d'être reconnue par la cible de la molécule complexée. On peut citer, par exemple, parmi les peptides utilisables dans la présente invention: la séquence RGD, connue pour son affinité pour les intégrines aV(33, l'acide folique.

L'agent de ciblage (R1 ou R3) peut être une chaîne peptidique telle qu'un anticorps spécifique, un fragment d'anticorps ou un épitope ayant une affinité prononcée pour la cible biologique du vecteur.

Lorsque l'un de R1 et de R3 est une chaîne peptidique, il peut comporter ou être constitué de résidus tyrosine permettant le suivi in vivo de la molécule de formule (I) après marquage à 125I.

R1 ou R3 peut également être une séquence peptidique permettant la translocation membranaire du vecteur. Ces peptides de pénétration peuvent être des séquences TAT, KALA ou plus généralement toute molécule connue pour favoriser la translocation membranaire du vecteur (Gupta et al., 2004, Adv. Drug Deliver. Rev., 58) L'agent de ciblage (R1 ou R3) peut être de nature saccharidique. Dans ce cas il peut être choisi pour cibler des lectines membranaires spécifiques qui se retrouvent dans des tissus particuliers. C'est le cas en particulier du galactose reconnu spécifiquement par les lectines du foie, des os, de certaines tumeurs cancéreuses; du mannose reconnu spécifiquement par les macrophages et le coeur. De façon plus générale lorsque l'agent de ciblage est de nature saccharidique, il peut être choisi parmi les sucres, les dérivés aminés de sucre, les polysaccharides comme par exemple le galactose, le glucose, le fructose, le mannose, le ribose, l'acide sialique, le lactose, le maltose, le cellobiose, la glucosamine, la galactosamine, le saccharose, le lactobionamide.

L'agent de ciblage (R1 ou R3) peut être de nature hormonale et peut être par exemple choisi parmi les stéroïdes.

L'agent de ciblage (RI ou R3) peut être de nature synthétique tel que le gleevek qui permet de cibler les kinases ou un autre substrat synthétique ou naturel dont la reconnaissance par la cible est spécifique.

La fixation des groupements RI et R3 sur le groupement hydrocarbonéfluorocarboné central se fait à l'aide d'une liaison chimique (Z et W) adaptée à la nature du substituant RI et R3.

R2 représente un groupement choisi parmi: les radicaux hydrocarbonés en C4-C24; les radicaux hydrocarbonés fluorés en C4-C24. Le groupement R2 peut notamment être choisi parmi les radicaux suivants: -Le radical thiooctyl - Les radicaux hydrocarbonés en C4-C24 tels que le n-butyle, le ter-butyle, l'isobutyle, le n-pentyle, l'isopentyle, le n-hexyle, le nheptyle, le n-octyle, le nnonyle, le n-décyle, le n-undécyle, le ndodécyle, le n-tridécyle, le n-tétradécyle, le npentadécyle, le nhexadécyl, le n- heptadécyle, le n-octadécyle, le radical phytyl (CH3[CH(CH3)(CH2)3]3CH(CH3)CH2CH2), - Les radicaux hydrocarbonés fluorés en C4-C24 tels que ceux répondant à la formule (CH2)1-(CF2)rF, dans laquelle r et t représentent deux entiers avec: 24 r+t >_ 4, comme par exemple: - (CF2)4F; -(CF2)5F; -(CF2)6F; -(CF2)-jF; -(CF2)8F; -(CF2)9F; (CF2)IOF; -(CF2)11F; -(CF2)12F; -(CF2)13F; -(CF2)14F; -CH2-(CF2)3F; -CH2(CF2)4F; - CH2-(CF2)5F; -CH2-(CF2)6F; -CH2-(CF2)7F; -CH2-(CF2)8F; -CH2(CF2)9F; -CH2-(CF2)10F; -CH2-(CF2)11F; -CH2-(CF2)12F; -CH2-(CF2)13F; (CH2)2-(CF2)2F; -(CH2)2- (CF2)3F; -(CH2)2-(CF2)4F; -(CH2)2-(CF2)5F; -(CH2) 2-(CF2)6F; -(CH2)2-(CF2)7F; -(CH2)2- (CF2)8F; -(CH2)2-(CF2)9F; -(CH2)2(CF2)10F; -(CH2)2-(CF2)11F; -(CH2)2-(CF2)12F; - (CH2)3-(CF2)1F; -(CH2)13(CF2)F; -(CH2)4(CF2)6F; -(CH2)4(CF2)8F; (CH2)4(CF2)10F; - (CH2)1o(CF2)6F; -(CH2)1o(CF2)8F; -(CH2)1o(CF2)10F, -(CH2)2-(CF2)8CH2CH31-(CH2)2- (CF2) 8(CH2)3CH3, -(CH2)2-(CF2)8(CH2)10CH3, -(CH2)3-(CF2)8CH2CH3, ,-(CH2)3-(CF2) 8(CH2)3CH3, -(CH2)3-(CF2)8(CH2)10CH3, -(CH2)2-(CF2)6CH2CH3, ,-(CH2)3-(CF2) 6(CH2)3CH3, -(CH2)2-(CF2)6(CH2)1oCH3....

De préférence R2 représente une chaîne hydrocarbonée en C12-C24 ou une chaîne hydrocarbonée fluorée en C8-C24.

Lorsque l'on indique que l'un de X et de Y représente un groupement NHCO- tandis que l'autre représente un groupement -CONH -, cela signifie que l'atome de carbone situé entre X et Y est relié d'un côté à la fonction NH- du groupement NH-CO- et de l'autre côté à la fonction COdu groupement CO-NH-.

La structure des composés de l'invention peut être résumée dans la Figure 1. Sur la figure 1 sont illustrées trois structures possibles pour les composés bolaformes de l'invention. Mais d'autres structures sont possibles, dès lors que les limtations de la formule (I) sont respectées.

Les molécules de l'invention peuvent être synthétisées facilement par des méthodes bien connues de l'homme du métier qui sont illustrées dans les exemples.

Dans les problèmes de transfection des biomolécules, les composés de l'invention présentent les avantages suivants: - La tête cationique ou polycationique permet de complexer et de compacter les principes pharmaceutiques anioniques ou polyanioniques tels que l'ADN ou l'ARN.

- Le coeur polycarboné favorise les interactions hydrophobes intermoléculaires entre les molécules de tensioactifs et forme autour du principe actif anionique une coque hydrophobe protectrice.

- Le segment fluorocarboné rigide, qui peut être doublé par une autre chaîne hydro ou fluorocarbonée, a pour fonction essentielle de renforcer les interactions hydrophobes intermoléculaires. Ces interactions particulières entre les chaînes perfluorocarbonées présentent l'avantage de compacter d'avantage l'agrégat et de limiter le nombre de charges positives nécessaires à la complexation des molécules anioniques ou polyanioniques. Cette limitation des charges positives permet alors une décomplexation plus aisée de ces molécules dans le cytoplasme. Le rapport entre le nombre de charge et le nombre d'atomes de fluor peut jouer un rôle important dans les propriétés de relargage de la molécule d'intérêt pharmaceutique transportée. Le positionnement et le nombre de chaînes fluorées dans la molécule permettent de moduler le degré de complexation et de relargage de la molécule anionique.

- Enfin la deuxième tête polaire permet d'assurer par une fonctionnalisation adaptée le ciblage, la furtivité ou la translocation du vecteur à travers la membrane cellulaire. Cette tête polaire hydrophile assure également à l'ensemble du bolaplexe l'hydrosolubilité nécessaire. C'est elle qui en recouvrant la surface du vecteur permet d'assurer les différentes fonctions évoquées précédemment. La particularité de cette fonctionnalisation de surface du vecteur est l'absence de charges positives, ce qui évite les phénomènes liés à leur présence: agrégation rapide par les protéines circulantes et toxicité cellulaire. La difonctionnalisation de ces composés permet également de contrôler la taille des associations en complexant un nombre très limité de molécules anioniques.

Un autre objet de l'invention est l'association d'une ou de plusieurs molécules de formule (I) avec un composé biologiquement actif de type polynucléotide. Ces composés biologiquement actifs peuvent alors être véhiculés dans le cytoplasme en quantité thérapeutique. Parmi les composés de type nucléotide utilisables dans la présente invention, on peut citer en particulier: des polynucléotides tels que de l'acide désoxyribonucléique (ADN) simple-brin ou double brin, de l'acide ribonucléique (ARN), de l'ARN ribosomal (ARNr), de l'ARN catalytique (ARNc), de petits ARN nucléaires (ARNpn), des ARN messagers (ARNm), des ARN de transfert (ARNt), des oligonuclétides ou oligomères d'ADN ou d'ARN, simple brin ou double brin, oligonucléotides anti-sens, acides nucléiques peptidiques (PNA) et produits de substitution d'oligonucléotides d'acides nucléiques, des plasmides, gènes et fragments de gènes. De façon préférentielle, on utilise de a) l'ADNc et de l'ARNm qui codent pour des protéines pharmaceutiques connues, b) de l'ARN ribosomal, c) des polynucléotides antisens de type ADN ou ARN qui peuvent être utilisées pour réguler ou bloquer la croissance de cellules cancéreuses d) des molécules polynucléotidiques à usage vaccinal.

De façon préférentielle, le nombre de composés de formule (I) associés ou complexés avec la substance biologiquement active est compris entre 1 et 5 molécules pour chaque groupement phosphate porté par la substance biologiquement active, préférentiellement entre 2 et 3.

La formulation de bolaplexes peut être constituée de un ou plusieurs composés de formule (1). L'utilisation de composés de formule (I) de fonctionnalités distinctes permet d'apporter au vecteur des propriétés complémentaires, comme les propriétés de furtivité, de ciblage ou de pénétration nécessaires à l'efficacité de transfection ou d'activité pharmaceutique de la molécule transportée. On peut ainsi envisager de réaliser une formulation de 3 composés de formules générales (I) distinctes dans laquelle un composé (I) est muni d'une partie polaire R, (ou R3) saccharidique afin d'assurer un ciblage du vecteur, un autre composé (I) est muni d'un groupement polyoxyéthylène afin d'assurer sa furtivité, et enfin un troisième composé (I) est spécialisé dans le passage transmembranaire grâce à la fonctionnalisation du groupe polaire RI (ou R3) par une séquence peptidique TAT.

Un autre objet de l'invention est un médicament, ou composition pharmaceutique, caractérisé en ce qu'il comprend au moins une association ou un complexe d'un ou plusieurs composés de formule (1) avec au moins un principe actif pharmaceutique, ou molécule biologiquement active, dans un véhicule pharmaceutiquement acceptable. De telles compositions peuvent être sous forme de vésicules monolamellaires.

Les composés de formule (I) peuvent être utilisés pour acheminer un principe actif pharmaceutique ou une molécule biologiquement active jusqu'à un organe choisi au sein de l'organisme. Les composés de formule (I) peuvent être utilisés aussi bien pour l'acheminement local d'une molécule ou pour une administration systémique, en fonction de la nature des substituants qui les composent. Les composés de l'invention peuvent aussi bien faciliter l'acheminement d'une molécule vers sa cible que faciliter sa transfection dans la cellule.

Les voies d'administration peuvent être de toute nature: orale, ou parentérale, telle que intramusculaire, intraveineuse, intradermale, péritonéale, subcutanée et topique. Les autres constituants de la formule pharmaceutique sont sélectionnés et adaptés par l'homme du métier en fonction de la voie d'administration choisie.

Les composés de formule (I) sont particulièrement adaptés aux domaines de la thérapie génique et des vaccins pour lesquels le ciblage de matériel génétique vers son site d'action et sa transfection dans la cellule sont des étapes particulièrement importantes du mécanisme thérapeutique.

La présente invention a donc encore pour objet l'utilisation d'un composé de formule (I) pour la préparation d'un médicament de thérapie génique. En particulier, elle a pour objet l'utilisation d'une association d'au moins un composé de formule (I) et d'un composé biologiquement actif tel que défini ci-dessus pour la préparation d'un médicament de thérapie génique.

La présente invention a également pour objet l'utilisation d'un composé de formule (I) pour la préparation d'un vaccin. En particulier, elle a pour objet l'utilisation d'une association d'au moins un composé de formule (1) et d'un composé biologiquement actif tel que défini ci-dessus pour la préparation d'un vaccin.

EXEMPLES

Exemple 1: Synthèse du bolaplexe la

H F F F F F F F F

Bolaplexe la

OH

La synthèse du composé (Ia) est résumée sur la figure 2 et décrite de façon détaillée ci-dessous.

Molécule 1 d'acide undécylénique (1,53 mmol, 1 éq), 2 g de 1,8diiodoperfluorooctane (3,06 mmol, 2

F F FF FF FF

Dans un ballon bicol de 50 mL surmonté d'un réfrigérant, 0,282 g

HO

éq) et 0,4 g de zinc dust sont dissous dans 10 mL de CH2C12 fraîchement distillé et dégazé sous argon. Le milieu réactionnel est porté à reflux et laissé sous forte agitation et flux d'argon durant 2 heures. L'avancement de la réaction est suivi par CCM avec l'éluant cHex- AcOEt 7:3.

Une fois le couplage terminé, 20 mL de CH2Cl2 sont ajoutés à froid et le milieu réactionnel est filtré sur célite. Le solvant est alors évaporé sous pression réduite et le brut est chromatographié sur gel de silice avec l'éluant cHex-AcOEt 9:1.

900 mg de composé racémique sont ainsi obtenus sous forme d'une poudre blanche.

Rendement: 70 MM: 838 g.mol-' Rf: 0,5 dans cHex-AcOEt 7:3 Pf: 65,5-67,8 C RMN 1H (CDC13) : d (ppm) = 1,29-1,45 (10H, s, CH2 chaîne linéaire) ; 1,66 (2H, m, HO2C-CH2-CH2) ; 1,80 (2H, m, CH2-CH2-CHI) ; 2,38 (2H, t, HO2C-CH2, J3 = 7,5 Hz) ; 2,85 (2H, m, CH -CF2) ; 4,34 (1H, m, CHI).

RMN 13C (CDC13) : d (ppm) = 20,9 (HO2C-CH2-CH2) ; 24,6 (CHI) ; 20 28,4-29, 4 (CH2 chaîne linéaire) ; 34,0 (HO2C-CH2) ; 40,0 (CH2-CHI) ; 41,9 (CH2CF2) ; 106,9-117,9 (CF2) ; 180,3 (CO).

RMN 19F (CDC13) : d (ppm) = -60 (2F, s, CF2I) ; -111,05 à -115,33 (4F, m, CH2-CF2, CF -CF2I) ; -120,89 à -123,56 (10F, m, 5 CF2).

Molécule 2 10 15

HO

Dans un ballon de 100 mL, 2 g de composé 1 (2,38 mmol, 1 éq) et 1, 5 g de N- t-butyloxycarbonyl allylamine (9,55 mmol, 4 éq) sont dissous dans 15 mL de CH3CN fraîchement distillé. 0,414 g de dithionite de sodium Na2S2O4 (2,38 mmol, 1 éq) et 0,4 g d'hydrogénocarbonate de sodium NaHCO3 (4,76 mmol, 2éq) préalablement solubilisés dans 5 mL d'H20 distillée sont ajoutés au milieu réactionnel.

Après 16 heures d'agitation à température ambiante, le pH est amené à 3 avec du HC1 2N. Le CH3CN est alors évaporé sous pression réduite et le composé est Il extrait avec AcOEt, puis lavé avec deux fractions de HC1 IN et une fraction de H2O. Après séchage de la phase organique sur sulfate de sodium et évaporation des solvants, le brut est chromatographié sur gel de silice avec l'éluant cHex-AcOEt 8:2.

1,9 g de composé racémique sont ainsi obtenus sous forme d'une poudre 5 blanche.

Rendement: 80 % MM: 995 g.mol-' Rf: 0,51 dans cHex-AcOEt 6:4 Pf: 91,8-94, 8 C RMN 1H (CDC13) : d (ppm) = 1,27-1,40 (10H, s, CH2 chaîne linéaire) ; 1,47 (9H, s, C(CH3)3) ; 1,63 (2H, m, HO2C-CH2-CH2) ; 1,79 (2H, m, CH2-CH2CHI) ; 2,35 (2H, t, HO2C-CH2, J3 = 7,5 Hz) ; 2,83 (4H, m, 2 CH2-CF2) ; 3, 58 (2H, m, CH2-NH) ; 4,37 (2H, m, 2 CHI) ; 5,09 (1H, s, NH).

RMN 13C (CDC13) : d (ppm) = 18,8 (CHI-CH2-NH) ; 20,9 (HO2C-CH2-CH2) ; 24, 6 (CHI-CH2-CF2) ; 26,9-33,9 (CH2 chaîne linéaire, C(CH3)3) ; 33,9 (HO2CCH2) ; 38,6 (CF2- CH2) ; 40,3 (CH2-CHI) ; 41,7 (CH2-CF2) ; 49,0 (CH2-NH) ; 81,1 (C(CH3)3) ; 106,1-121,9 (CF2) ; 155,7 (NH-CO) ; 179,1 (CO2H).

RMN '9F (CDCI3) : d (ppm) _ -112,19 à -114,10 (4F, m, 2 CH2-CF2) ; - 120, 89 à -123,56 (12F, m, 6 CF2).

Molécule 3

HO NHy0

O

Dans un ballon bicol de 100 mL surmonté d'un réfrigérant, 1,85 g de composé 2 (1,86 mmol, 1 éq) sont dissous dans 20 mL de CH3CN fraîchement distillé et dégazé sous argon. Le milieu réactionnel est porté à reflux et 1,10 mL d'hydrure de tributylétain (4,09 mmol, 2,2 éq) ainsi que 0,34 g d'AIBN (2,04 mmol, 1,1 éq) dissout dans un minimum de CH3CN sont introduits par l'intermédiaire d'une seringue.

La réaction est laissée sous agitation et flux d'argon durant 16 heures. Après évaporation du solvant sous pression réduite, le brut est chromatographié sur gel de silice avec l'éluant cHex-AcOEt 8:2. Après élimination des résidus d'étain, le composé est précipité dans du nheptane.

830 mg de composé sont ainsi obtenus sous forme d'une poudre blanche. Rendement: 60 % MM: 743 g.mol-' Rf: 0,53 dans cHex-AcOEt 6:4 RMN (CDC13) : d (ppm) = 1,23-1,39 (12H, m, CH2 chaîne linéaire) ; 1,47 (9H, s, C(CH3) 3) ; 1,61 (4H, m, HO2C-CH2-CH2, CH2-CHZ-CF2) ; 1,80 (2H, m, CH2-CH2- NH(Boc)) ; 2,15 (4H, m, 2 CH2-CF2) ; 2,35 (2H, t, HO2C-CH2, J3 = 7,5 Hz) ; 3,24 (2H, m, CH2-NH) ; 4,67 (1H, s, NH).

RMN 13C (CDCl3) : d (ppm) = 20,1-21,3 (CH2-CH2-NH, HO2C-CH2-CH2) ; 24,831,2 (CH2 chaîne linéaire, C(CH3)3, 2 CH2-CF2) ; 34,0 (HO2C-CH2) ; 39,6 (CH2-NH) ; 79,6 (C(CH3)3) ; 106,5-122,4 (CF2) ; 156,0 (NH-CO) ; 179, 7 (CO2H).

RMN 19F (CDC13) : d (ppm) = -114,27 (4F, s, 2 CH2-CF2) ; -121,86 à - 123, 59 (12F, m, 6 CF2). OAc

Dans un ballon bicol de 250 mL, 4 g de N-benzyloxycarbonyl éthanolamine (20,51 mmol, 1 éq) et 7,77 g de cyanure de mercure Hg(CN)2 (30,76 mmol, 1, 5 éq) sont dissous dans 50 mL de CH3CN fraîchement distillé et dégazé sous argon. Deux spatules de tamis moléculaire sont alors introduites dans le milieu réactionnel. Après 15 minutes d'agitation sous flux d'argon, 12,64 g de 1-bromo-2,3,4,6-tétra-O-acéthyl-a-D-galactopyranose (30,76 mmol, 1,5 éq) sont ajoutés. L'avancement de la réaction est suivi par CCM avec l'éluant AcOEt-cHex 6:4.

Après 24 heures d'agitation sous flux d'argon, le milieu réactionnel est filtré sur fritté puis le solvant est évaporé sous pression réduite. Le brut est alors repris dans 100 mL d'AcOEt puis lavé successivement avec une solution saturée de NaHCO3, une solution de KI 10 % et une solution saturée de Na2S2O3. Après séchage de la phase organique sur sulfate de sodium, le composé est chromatographié sur gel de silice avec l'éluant AcOEt-cHex 4:6.

6,78 g de composé sont ainsi obtenus sous forme d'une poudre blanche. Rendement: 63 % MM: 525 g.mol-' Rf: 0,46 dans cHex-AcOEt 4:6 Pf: 45,6-47, 8 C [ ]n20: +20,7 (C, 1, CH2C12) RMN 'H (CDC13) : d (ppm) = 1,95-2,13 (12H, m, CH3CO) ; 3,38 (2H, m, CH2NH) ; 3,89 (2H, t, OCH2, J3 = 6 Hz) ; 4, 11 (3H, m, CH(5), CH2(6 ; 4,45 (1H, d, CH(1)a, J3 = 7,5 Hz) ; 4,96-5,49 (6H, m, CH(2), CH(3), CH(4), CH2-F, NH) ; 7,31 (5H, s, CH arom.)É RMN 13C (CDC13) : d (ppm) = 20,6 (CH3CO) ; 61,3-70,6 (CH(2), CH(3), CH(4), CH(5), CH(6)) ; 90,5 (CH(1)a) ; 128,3 (CH arom.) ; 136,4 (C arom.) ; 156, 4 (CO- CH2-F) ; 169,7-170,5 (CO-CH3).

Molécule 5 AcO OAc AcO

NH

Dans un réacteur à hydrogénation, 604 mg de composé 4 (1,15 mmol, 1,2 éq) sont dissous dans 10 mL d'éthanol. 69 mg de palladium sur charbon (60 mg. mmol-l) sont additionnés délicatement fraction par fraction. Le réacteur est placé dans une bombe à hydrogénation sous une pression de 8 bars. Après 12 heures de réaction, le milieu est filtré sur célite et le solvant est éliminé sous pression réduite.

L'amine, ainsi obtenue sous forme d'une poudre blanche, est placée dans un ballon bicol de 25 mL puis dissoute dans 5 mL de CH2C12 fraîchement distillé et dégazé sous argon. 713 mg de composé 3 (0,96 mmol, 1 éq) et 508 mg de réactif BOP (1,15 mmol, 1,2 éq) sont alors ajoutés. Afin de ramener le pH à 8, 1,2 équivalents de N,N-diisopropyléthylamine sont additionnés au mélange réactionnel. L'avancement de la réaction est suivi par CCM avec l'éluant AcOEt-cHex 6:4.

Après 12 heures d'agitation sous flux d'argon, le solvant est évaporé sous pression réduite et le brut est chromatographié sur gel de silice avec un gradient d'élution 35 allant de AcOEt-cHex 5:5 à AcOEt-cHex 8:2.

514 mg de composé sont ainsi obtenus sons forme d'une poudre jaune Rendement: 48 % MM: 1116 g.mol-' Rf: 0,62 dans AcOEt 0,26 dans AcOEt-cHex 6:4 Pf: 45,2-47,3 C RMN 'H (CDC13) : d (ppm) = 1,35 (12H, m, CH2 chaîne linéaire) ; 1,46 (9H, s, C(CH3)3) ; 1,61 (4H, m, NH-CO-CH2-CH2, CHZ-CH2CF2) ; 1,76 (2H, m, CF2-CH2-CH -CH2-NH(Boc)) ; 1,96-2,30 (18H, m, CH3CO, 2 CH2-CF2, NH-CO-CH2) ; 3,15 (2H, t, CH2-NH(Boc), J3 = 6,5 Hz) ; 3,37 (2H, m, CH2NH) ; 3,70 (1H, m, OCH2) ; 3,86 (1H, m, OCH2) ; 4,15 (3H, m, CH2(6) , CH(5)) ; 4,68 (1H, d, CH(I)a, J3 = 7,25 Hz) ; 4,91-5,51 (4H, m, CH(2), CH(3), CH(4), NH).

RMN13C (CDC13) : d (ppm) = 19,1-20,7 (CH3-CO, CH2-CH2-NH(Boc), NH-CO-CH2CH2) ; 25,6-29,1 (CH2 chaîne linéaire, 2 CH2-CF2, C(CH3)3, NH-CO-CH2) ; 35,7 (CH2-NH(Boc)) ; 38,9 (OCH2-CH2-NH) ; 61,2 (CH2(6 ; 67,4-71,0 (OCH2CH2-NH, CH(2), CH(3), CH(4), CHAS)) ; 78,7 (C(CH3)3) ; 100,8 (CH(I) a) ; 105,3-122,5 (CF2) ; 157,1 (CO BOC) ; 170,1-170,6 (CO-CH3) ; 175,1 (NH-COCH2).

RMN 19F (CDCI3) : d (ppm) = -115,33 (4F, s, 2 CH2-CF2) ; -122,83 à - 124, 56 (12F, m, 6 CF2).

Molécule 6 pâle.

NH

Dans un ballon de 100 mL, 0,640 g de H-His(Trt)OH (1,61 mmol, 1 éq) et 0, 109 g de HOBT (0,81 mmol, 0,5 éq) sont dissous dans 10 mL d'un mélange acétone/H2O distillée 1:1. Afin d'amener le pH à 8-9, 4 équivalents de triéthylamine sont ajoutés au milieu réactionnel. Par l'intermédiaire d'une ampoule à brome, 1,165 g de composé 8 (1,77 mmol, 1, 1 éq) préalablement solubilisés dans un minimum d'acétone sont additionnés goutte à goutte.

Après 24 heures de réaction à température ambiante, le pH est ramené à 4 grâce à une solution de HC1 3N. L'acétone est évaporée sous pression réduite et le milieu réactionnel est extrait avec de l'AcOEt. La phase aqueuse est acidifiée avec HC1 3N puis extraite à nouveau avec AcOEt 3N. Les phases organiques sont rassemblées et lavées successivement avec deux fractions de HCl IN et une fraction de H2O. Après séchage sur sulfate de sodium, le solvant est évaporé sous pression réduite et le brut est chromatographié sur gel de silice avec un gradient d'élution allant de AcOEt-cHex 9:1 à AcOEt-MeOH 9:1.

Après cristallisation dans AcOEt/n-Heptane, 1,15 g de composé sont ainsi obtenus sous forme de cristaux blancs.

Rendement: 82 % MM: 871 g.mo1-' Rf: 0,33 dans AcOEt-MeOH 9:1 Pf: 108,1110,9 C [a]D-0: +14,03 (C: 1, CH2C12) RMN 'H (DMSO à 45 C) : d (ppm) = 2, 34-2,51 (4H, m, CH2-CH2- CF2) ; 2,88 (2H, m, CH2-CH) ; 4,52 (1H, m, CHCH2) ; 6,9-7,4 (17H, m, CH arom., CH histidine) ; 8,04 (1H, s, OH) ; 8,37 (1H, d, NH, J3 = 8 Hz).

RMN 13C (DMSO) : d (ppm) = 26,1-28,8 (CO-CH2-CH2-CF2) ; 39,6 (CH-CH2) ; 52,2 (CH-CH2) ; 76,4 (C(F)3) ; 105,8-119,3 (CF2, CF3) ; 120,6 (N-CH=C histidine) ; 128,8- 130,1 (CH arom.) ; 134,0 (C histidine) ; 137,6 (N-C=N histidine) ; 141,7 (C arom.) ; 169,7 (NH-CO) ; 172,9 (CO-OH).

RMN 19F (DMSO) : d (ppm) = -80,23 (3F, s, CF3) ; -113,31 (2F, s, CH2-CF) ; -121,47 à -122,97 (10F, m, 5 CF2) ; -125,56 (2F, s, CF2-CF3).

Molécule 7 Dans un ballon de 50 mL, 226 mg de composé 5 (0,20 mmol, 1 éq) sont dissous dans 5 mL d'un mélange TFA/CH2C12 2:8. La déprotection est suivie par CCM avec l'éluant AcOEt. Lorsque le composé est totalement déprotégé, il est repris plusieurs fois dans de l'éther afin d'éliminer les traces de TFA. Le solvant est évaporé sous pression réduite et 226 mg de composé (0,119 mmol, 1 éq) sont ainsi obtenus sous forme de sels de triflate avec un rendement de 98 %.

Le composé est alors placé dans un ballon de 100 mL. 209 mg de composé 6 (0,24 mmol, 1,2 éq) et 83,5 mg de TBTU (0,26 mmol, 1,3 éq) sont ajoutés. Le milieu réactionnel est ensuite solubilisé dans du CH2C12 fraîchement distillé et dégazé sous argon. Afin d'amener le pH à 8-9, 1,5 équivalents de DIEA sont introduits dans le ballon. L'avancement de la réaction est suivi par CCM avec l'éluant AcOEt-MeOH 9,5:0,5.

Après 16 heures d'agitation sous flux d'argon, le solvant est évaporé sous pression réduite et le brut est chromatographié sur gel de silice avec l'éluant AcOEt, puis sur Séphadex LH2O avec l'éluant MeOH-CH2C12 1:1.

277 mg de composé sont ainsi obtenus sous forme d'une poudre blanche. Rendement: 73 % MM: 1869 g.mol-' Rf: 0,7 dans AcOEt-MeOH 9,5:0,5 Pf: 72,274,5 C [a]D20: +2,76 (C: 1, CH2C12) Spectrométrie de masse (FAB+) : [M+1]+ m/z = 1870 [M+23]+ m/z = 1892 RMN'H (CDC13 à 45 C) : d (ppm) = 1,25-1,32 (12H, m, CH2 chaîne linéaire) ; 1,62 (4H, m, NH-CO-CH2-CH2, CH -CH2-CF2) ; 1,82 (2H, m, CF2-CH2-CH2-CH2- NH) ; 2,00-2,22 (18H, m, CH3CO, 2 CH -CF2, NH-CO-CH2) ; 2,55 (4H, m, C8FI7-CH2- CH2) ; 2,89 (1H, m, CH-CH2) ; 3,05 (1H, m, CH-CH2) ; 3,31 (2H, m, CF2-(CH2)2-CH2- NH) ; 3,50 (2H, m, OCH2-CH -NH) ; 3,72 (1H, m, OCH2-CH2-NH) ; 3,92 (2H, m, OCH2- CH2-NH, CH(5 ; 4, 16 (2H, d, CH2(6), J3 = 6,75 Hz) ; 4,50 (1H, d, CH(1)a, J3= 7, 85 Hz) ; 4, 60 (1H, td, CH-CH2, J3 = 5,15 Hz) ; 5,05 (1H, dd, CH(2), J3 = 3,35 Hz, J3 = 10,45 Hz) ; 5,21 (1H, dd, CH(3), J3 = 2,55 Hz, J3 = 10,4 Hz) ; 5,43 (1H, m, CH(4 ; 5,86 (1H, m, NH- CO-CH) ; 6,70 (1H, s, N-CH=C histidine) ; 7, 10-7,16 (6H, m, N-CH=N histidine, CH arom.) ; 7,29-7,38 (10H, m, CH arom.) ; 7,61 (1H, d, CH-NH, J3 = 6,25 Hz) ; 7,69 (1H, s, NH).

RMN 13C (CDC13) : d (ppm) = 20,1-20,8 (CF2-CH2-CH2-CH2-NH, CH2-CH2-CF2, CH3CO) ; 25,7-30,9 (CH2 chaîne linéaire, NH-CO-CH2-ÇH2, 2 CH2-CF2, C8F17CH2-CH2, CH-CH2) ; 36,7 (NH-CO-CH2) ; 38,5-39,1 (CF2-(CH2)2-CH2-NH, OCH2CH2-NH) ; 53,5 (CH-CH2) ; 61,3 (ÇH2(6)) ; 67,0-70,8 (OCH2-CH2-NH, CH(2), CH(3), CH(4), CH(s ; 75,5 (Ç(F)3) ; 101,5 (CH(I)a) ; 106,2-118,9 (CF2, CF3) ; 119,7 (N-CH=C histidine) ; 128,1- 129,7 (CH arom.) ; 136,8 (N-CH=N histidine) ; 138,2 (CH2-C histidine) ; 142,1 (Carom.) ; 169,7-173,2 (CH3CO, NH-CO-CH2, NH-CO-CH, CH-NH-CO).

RMN 19F (CDC13) : d (ppm) = -80,74 (3F, s, CF3) ; -114,22 à -114, 66 (6F, m, CH2-CF2, CF2) ; -121,90 à-123,56 (22F, m, CF2) ; -126,13 (2F, s, CF2CF3).

Molécule la OH n F F F F F F F F F NH N OzCCF3 F F F\J ^<' 1 H

H

Dans un ballon de 100 mL, 267 mg de composé 7 (0,143 mmol, 1 éq) sont dissous dans 10 mL de MeOH fraîchement distillé. Une quantité catalytique de MeONa est alors ajoutée. L'avancement de la réaction est suivi par CCM avec l'éluant AcOEt-MeOH-H20 7:2:1.

Après 6 heures de réaction, le MeONa est neutralisé par de la résine 25 acide IRC50. Après filtration sur fritté et évaporation du solvant sous pression réduite, le composé est purifié sur Séphadex LH2O avec l'éluant MeOH.

228 mg de composé sont ainsi obtenus sous forme d'une poudre blanche (Rendement: 94 %) Dans un ballon de 100 mL, 213 mg du composé précédent (0,125 mmol, 30 1 éq) sont dissous dans un minimum d'éthanol. 15 mL d'un mélange CH2C12/TFA 8:2 ainsi que 1 équivalent de Et3SiH sont alors additionnés délicatement au milieu réactionnel.

Après 48 heures de réaction sous forte agitation, les solvants sont éliminés sous pression réduite. Le composé est repris plusieurs fois avec de l'éther afin d'éliminer les traces de TFA, puis purifié sur Séphadex LH2O avec l'éluant MeOH.

mg de composé sont ainsi obtenus sous forme de poudre de couleur crème.

Rendement: 89 % MM: 1573 g.mol-' Pf: 144,9-158,7 C [a]DZ0: +2,61 C: 1, CH2C12) Spectrométrie de masse (FAB+) : [M]+ m/z = 1460 (sans -02CCF3) Analyse élémentaire: -valeurs calculées: C = 37,38 %, H = 3,50 %, N=4,45 % - valeurs réelles: C = 37,79 %, H = 3,74 %, N = 4,38 % RMN'H (CD3OD) : d (ppm) = 1,23 (12H, m, CH2 chaîne linéaire) ; 1,50 (4H, m, NH-CO-CH2-CH, CH2-CH2-CF2) ; 1,70 (2H, m, CF2-CH2-CH -CH2-NH) ; 2,07-2,13 (6H, m, 2 CH2CF2, NH-CO-CH) ; 2,39-2,46 (4H, m, C$F17-CH2-CH2) ; 2,89-3, 85 (14H, m, CH-CH2, CF2-CH2-CH2-CH -NH, OCH2-CH2-NH, CH(2), CH(3), CH(4), CH(s), CH2(6 ; 4,17 (1H, d, CH(1)a, J3 = Hz) ; 4,52 (1H, m, CH-CH2) ; 7, 21 (1H, s, N-CH=C histidine) ; 8,62 (1H, s, N-CH=N histidine).

RMN13C (CD3OD) : d (ppm) = 19,9 (CF2-CH2-CH2-CH2-NH, CH2-CH2-CF2) ; 25,639,1 (CH2 chaîne linéaire, NH-CO-CH2-CH2, 2 CH2-CF2, C,F17-CH2-ÇH2, CHCH2) ; 35,7 (NH-CO-CH2) ; 38,0-39,2 (CF2-(CH2)2-CH2-NH, OCH2-CH2-NH) ; 52, 8 (CH-CH2) ; 61,1 (CH2(6 ; 68,2-75,4 (OCH2-CH2-NH, CH(2), CH(3), CH(4) , CH(5),) ; 103,7 (CH(t)a) ; 106,1-119,2 (CF2) ; 117,9 (N-CH=C histidine) ; 130,2 (N-CH=N histidine) ; 133,8 (CH2-C histidine) ; 171,0-175,4 (NH-COCH2, NH-CO-CH, CH-NH-CO).

RMN 19F (CD3OD) : d (ppm) _ -76,89 (3F, s, CF3-CO2-) ; -82,33 (3F, s, CF3) ; -115,46 à -115,84 (6F, s, CF2) ; -122,87 à -124,60 (22F, m, CF2) ; 127,29 (2F, s, CF2).

Exemple 2: Synthèse du bolaplexe Ib La synthèse de ce compose est réumée sur la figure 3 et décrite de façon détaillée ci-dessous.

Molécule 8 Dans un ballon de 100 mL, 2 g de composé 1 (2,386 mmol, 1 éq) et 1,37 g de composé N-benzyloxy carbonyl allylainine (7,158 mmol, 3 éq) sont dissous dans 15 mL de CH3CN fraîchement distillé. 0,415 g de dithionite de sodium Na2S2O4 (2,386 mmol, 1 éq) et 0,4 g d'hydrogénocarbonate de sodium NaHCO3 (4,772 mmol, 2éq) préalablement solubilisés dans 5 mL d'H2O distillée sont ajoutés au milieu réactionnel. Au bout de 8 heures de réaction, 0,5 équivalent de Na2S2O4 est à nouveau ajouté au milieu réactionnel.

Après 16 heures d'agitation à température ambiante, le pH est amené à 3 avec du HCI 2N. Le CH3CN est alors évaporé sous pression réduite et le composé est extrait avec AcOEt, puis lavé avec deux fractions de HCI 1N et une fraction de H2O. Après séchage de la phase organique sur sulfate de sodium et évaporation des solvants sous pression réduite, le brut est chromatographié sur gel de silice avec l'éluant cHex-AcOEt 9:1.

1,6 g de composé racémique sont ainsi obtenus sous forme d'une poudre blanche (Rendement: 65 %) Dans un ballon bicol de 100 mL surmonté d'un réfrigérant, 1,5 g de composé précédent (1,46 mmol, 1 éq) sont dissous dans 20 mL de THF fraîchement distillé et dégazé sous argon. Le milieu réactionnel est porté à reflux et 863 L d'hydrure de tributylétain (3,21 mmol, 2,2 éq) ainsi que 0,263 g d'AIBN (1,60 mmol, 1, 1 éq) dissout dans un minimum de THF sont introduits par l'intermédiaire d'une seringue.

La réaction est laissée sous agitation et flux d'argon durant 16 heures. Après évaporation du solvant sous pression réduite, le brut est chromatographié sur gel de silice avec l'éluant cHex-AcOEt 8:2. Après élimination des résidus d'étain, le composé est précipité dans du nheptane.

610 mg de composé sont ainsi obtenus sous forme d'une poudre blanche. Rendement: 54 % MM: 777 g.mol-' Rf: 0,36 dans cHex-AcOEt 6:4 RMN'H (CDCI3) : d (ppm) = 1,32 (12H, m, CH2 chaîne linéaire) ; 1,63 (4H, m, CH2-CH2CO2H, CH -CH2-CF2) ; 1,86 (2H, m, CH2-CH2-NH) ; 2,07 (4H, m, 2 CH2-CF2) ; 2,35 (2H, t, HO2C-CH2, J3 = 7,5 Hz) ; 3,31 (2H, t, CH2-NH, J3 = 6 Hz) ; 4, 88 (1H, s, NH) ; 5,14 (2H, s, CH2-F) ; 7, 36 (5H, s, CH arum.) .

RMN 13C (CDC13) : d (ppm) = 20,1-30,6 (CH2 chaîne linéaire, 2 CH2-CF2, CH2-CH2-NH(Z)) ; 34,0 (HO2C-CH2) ; 40,2 (CH2-NH(Z)), 66,9 (CH2-F) : 106,5123,1 (CF2) ; 128,1-128,6 (CH arom.) ; 136,1 (C arom.) ; 156,9 (NH-CO-O) ; 179,4 (HO2C).

RMN 19F (CDC13) : d (ppm) = -114,35 (4F, s, 2 CH2-CF2) ; -121,80 (8F, m, 4 CF2) ; -123,52 (4F, s, 2 CF2)..

Molécule 9 Dans un ballon de 100 mL, 1 g de Z-Lys(Boc)OH (2,63 mmol, l éq) sont dissous dans 20 mL de CH2C12 fraîchement distillé et dégazé sous argon. 0,651 g de DCC (3,16 mmol, 1,2 éq) et 0,427 g de HOBT (3,16 mmol, 1,2 éq) sont alors ajoutés. Lorsque le milieu réactionnel est totalement homogène, 0,532 g de dodécylamine (2,89 mmol, 1,1 éq) sont additionnés.

Après 48 heures de réaction sous flux d'argon et à température ambiante, le mélange réactionnel est filtré sur fritté afin d'éliminer la DCU formée. Le solvant est ensuite évaporé sous pression réduite et le brut est chromatographié sur gel de silice avec l'éluant AcOEt-cHex 4:6.

1,3 g de composé sont ainsi obtenus sous forme d'une poudre blanche. Rendement: 90 % MM: 547 g.mol"' Rf: 0,49 dans AcOEt-cHex 4:6 Pf: 83,2-85, 3 C [a]p20: +2,77 (C, 1, CH2C12) RMN 1H (CDC13) : d (ppm) = 0,90 (3H, t, CH3, J3 = 6,77 Hz) ; 1,14-30 1,37 (20H, m, CH2 chaine linéaire, CH-CH2CH2) ; 1,44 (9H, m, C(CH3)3) ; 1,59-1,91 (6H, m, 2 CH2-CH2-NH, Ch-CH) ; 3, 10 (2H, m, CO-NH-CH2) ; 3,24 (2H, m, CH2-NH(Boc)) ; 4,15 (1H, m, CH-CH2) ; 4,65 OH, s, NH) ; 5,12 (2H, s, CH2-F) ; 5,55 (1H, s, NH) ; 6,19 (1H, s, NH) ; 7, 31 (5H, s, CH arum.).

RMN 13C (CDC13) : d (ppm) = 14,14 (CH3) ; 22,46-31,10 (CH2 chaîne linéaire, CH-CH2-(CH2)2, C(CH3)3) ; 33,97 (CO-NH-CH2) ; 39,61 (CH2-NH(Boc) ) ; 49,13 (CH-CH2) ; 54,93 C(CH3)3) ; 67,04 (CH2-F) ; 128,09-128,54 (CH arum.) ; 132,20 (C arum.) 156,23 (HN-CO-O) ; 171,52 (CH-CO-NH).

Molécule 10

NH

Dans un réacteur à hydrogénation, 300 mg de composé 9 (0,548 mmol, 1,3 éq) sont dissous dans 10 mL d'éthanol. 33 mg de palladium sur charbon (60 mg. mmol-1) sont additionnés délicatement fraction par fraction. Le réacteur est placé dans une bombe à hydrogénation sous une pression de 8 bars. Après 6 heures de réaction, le milieu est filtré sur célite et le solvant est éliminé sous pression réduite. 224,2 mg d'une poudre blanche sont ainsi obtenus avec un rendement de 99 %.

L'amine est alors placée dans un ballon bicol de 25 mL et dissoute dans 5 mL de CH2Cl2 fraîchement distillé et dégazé sous argon. 327,8 mg de composé 8 (0,422 mmol, 1 éq) et 176 mg de TBTU (0,548 mmol, 1,3 éq) sont alors ajoutés. Afin de ramener le pH à 8, 2 équivalents de DIEA sont additionnés au mélange réactionnel. L'avancement de la réaction est suivi par CCM avec l'éluant AcOEt-cHex 5:5.

Après 12 heures d'agitation sous flux d'argon, le solvant est évaporé sous pression réduite et le brut est chromatographié sur gel de silice avec un gradient d'élution allant de AcOEt-cHex 4:6 à AcOEt-cHex 5:5.

415,3 mg de composé sont ainsi obtenus sons forme d'une poudre. Rendement: 84 % MM: 1172 g.mol-' Rf: 0,5 dans AcOEt-cHex 5:5 RMN 1H (CDC13) : d (ppm) = 0,89 (3H, t, CH3, J3 = 6,82 Hz) ; 1,17-1,35 (32H, m, CH2 chaîne linéaire, CH-CH2-CH2) ; 1,45 (9H, s, C(CH3)3) ; 1,51-1,70 (10H, m, 3 CH2-CH2-NH, CF2-CH2-CH, CH2-CH2-CO-NH) ; 1,82-2,24 (8H, m, CH-CH2, 2 CH2-CF2, CH2-CO-NH) ; 3,09 (2H, m, CH2-NH-CO-CH) ; 3,18-3,32 (4H, m, CH2-NH(Boc), (Z)NH- CH2) ; 4,41 (1H, td, CH-CH2, J3 = 6,42 Hz, J3 = 7,37 Hz) ; 4,71 (1H, s, NH) ; 5,00 (1H, s, NH) ; 5,12 (2H, s, CH2-F) : 6,43 (1H, d, NH-CH-CH2, J3 = 7,35 Hz) ; 6,60 (1H, s, NH) ; 7,35 (5H, s, CH arom.)É RMN 13C (CDC13) : d (ppm) = 14,0 (CH3) ; 20,1-31,1 (CH2 chaînes linéaires, CH-CH2-CH2, C(CH3)3, 3 CH2-CH2-NH, CH2-CH2-CO-NH, 2 CH2-CF2) ; 36,6-40,2 (CH2-NH-CO-CH, CH2-NH(Boc), NH-CH2-(CH2)2-CF2) ; 52,3 (CH-CH2) ; 66,9 (CH2-F) : 79,1 (C(CH3)3) ; 106,9-119,0 (CF2) ; 128,1-128,6 (CH arom. ) ; 136,4 (C arom.) ; 156,2 (NH-CO-0) ; 156,5 (NH-CO-0) ; 171,7 (CO-NH) ; 173,4 (CO-NH).

RMN 19F (CDCl3) : d (ppm) _ -114,11 à -114,37 (4F, d, 2 CH2-CF2) ; - 121, 80 (8F, m, 4 CF2) ; -123,50 (4F, s, 2 CF2).

Molécule Ib Dans un réacteur à hydrogénation, 375 mg de composé 10 (0,320 mmol, 1,02 éq) sont dissous dans 10 mL d'éthanol. 70 mg de palladium sur charbon (220 mg.mmol-1) sont additionnés. Le réacteur est placé dans une bombe à hydrogénation sous une pression de 8 bars. Après 48 heures de réaction, le milieu est filtré sur célite et le solvant est éliminé sous pression réduite. 327 mg d'une poudre blanche sont ainsi obtenus avec un rendement de 98,4 %.

Parallèlement, dans un ballon de 100 mL, 168 mg d'acide lactobionique (4, 705 mmol, 1,5 éq) sont dissous dans 20 mL d'un mélange toluène/2méthoxyéthanol 1:1. Après addition de quelques gouttes de TFA, le milieu réactionnel est évaporé sous vide. L'opération est effectuée plusieurs fois jusqu'à évaporation complète de l'eau formée lors de l'élimination. Après séchage, la lactobionolactone ainsi formée peut être mise directement en réaction.

Une fois ces étapes terminées, les deux composés sont introduits dans un ballon bicol de 100 mL, puis dissous dans 20 mL de méthanol fraîchement distillé et dégazé sous argon. Afin d'amener le pH à 8, deux équivalents de TEA sont ajoutés. Après 12 heures d'agitation à reflux et sous flux d'argon, le solvant est évaporé sous vide, puis le brut est acétylé avec 20 mL d'un mélange anhydride acétique/pyridine 1:1.

Au bout de 12 heures, l'ensemble est versé dans 50 mL d'HCl IN glacé. Le brut est alors extrait avec de l'AcOEt. La phase organique est lavée successivement avec deux fractions de HC1 IN, une fraction de NaHCO3 saturée, deux fractions de H2O, puis séchée sur Na2SO4. Après évaporation des solvants sous pression réduite, le brut est chromatographié sur gel de silice avec un gradient d'élution allant de AcOEt-cHex 5:5 jusqu'à AcOEt-cHex 8:2.

370 mg de composé sont ainsi obtenus sons forme d'une poudre (Rendement: 67,5 %.) Dans un ballon de 100 mL, 320 mg de composé précédent (0,187 mmol, 1 éq) sont dissous dans 10 mL de MeOH fraîchement distillé. Une quantité catalytique de MeONa est alors ajoutée. L'avancement de la réaction est suivi par CCM avec l'éluant AcOEt-MeOH-H20 7:2:1.

Après 12 heures de réaction, le MeONa est neutralisé par de la résine acide IRC50. Après filtration sur fritté et évaporation du solvant sous pression réduite, le composé est purifié sur Séphadex LH2O avec l'éluant MeOH.

237 mg de composé desacétylé sont ainsi obtenus sous forme d'une poudre blanche. Rendement: 92 % Dans un ballon de 50 mL, 200 mg de composé précédent (0,145 mmol, 1 éq) sont dissous dans 8 mL de CH2C12 fraîchement. Par l'intermédiaire d'une ampoule à brome, 2 mL de TFA sont joutés au milieu réactionnel.

Après 48 heures d'agitation à température ambiante, les solvants sont éliminés sous pression réduite. Le composé est alors repris plusieurs fois avec de l'éther afin d'éliminer les traces de TFA résiduelles, puis purifié sur Séphadex LH2O avec l'éluant MeOH.

184 mg de composé 14 sont ainsi obtenus sous forme de poudre (Rendement: 91 %).

MM: 1392,6 g.mol-' Décomposition: 109,3-151,5 C [a]D20: +1,06 (C: 1, MeOH) Spectrométrie de masse (ESI-MS) : [M]+ m/z = 1279,8 (sans -02C-CF3) Analyse élémentaire: -valeurs calculées (+1 H2O) : C = 45,96 %, H = 6,36 %, N = 3,97 % -valeurs réelles (+1 H2O) : C = 45,97 %, H = 6,44 %, N = 4, 20 RMN 'H, (CD3OD) : d (ppm) = 0,92 (3H, t, CH3, J3 = 6,84 Hz) ; 1,31-1, 35 (32H, m, CH2 chaînes linéaires, CH-CH2-CH2) ; 1,46-1,73 (10H, m, 3 CH2CH2-NH, CF2-CH2-CH2, CH2-CH2-CO-NH) ; 1,83 (2H, m, CH-CH2) ; 2,14-2, 30 (6H, m, 2 CH2-CF2, CH2-CO-NH) ; 2,94 (2H, t, CH2-NH3+, J3 = 7,60 Hz) ; 3, 19-3,93 (1H, m, CH2-NH-CO-CH, NH-CH -(CH2)2-CF2, CH(4), CH(5), CH2(6), CH 2'), CH 3'), CH(4'), CH(s>), CH2(6')) ; 4,25-4,38 (3H, m, CH-CH2, CH(2) , CH3)) ; 4,51 (1H, d, CHAI '), J3 = 7,10 Hz).

RMN13C (CD3OD) : d (ppm) = 12,7 (CH3) ; 29,9-31,7 (CH2 chaînes linéaires, CH-CH2-CH2, 3 CH2-CH2-NH, CH2-CH2-CO-NH, 2 CH2-CF2) ; 35,4-39, 1 (CH2- NHCO-CH, CH2-NH3+, NH-CH2-(CH2)2-CF2) ; 53,0 (CH-CH2) ; 61,2 (CH2(6')) ; 62, 3 (CH2(6)) ; 69,0-75,8 (CH(2), CH(3), CH(5), CH(2'), CH(3') , CH(4'), CH(5')) ; 81,9 (CH(4)) ; 104,4 (CHI,')) ; 106,8-122,9 (CF2) ; 172,7-174,1174,9 (3 CO-NH).

RMN 19F (CD3OD) : d (ppm) = -76,85 (3F, s, -O2C-CF3) ; -115,34 (4F, 20 s, 2 CH2-CF) ; 122,79 (8F, m, 4 CF2) ; -124,48(4F, s, 2 CF2). %

Claims (14)

REVENDICATIONS

1. Composé répondant à la formule (I) ci-dessous: R2 X CH2

W

n Y \R1 CH2 o CF2

- M

dans laquelle: - l'un de X et de Y représente un groupement NHCO-tandis que l'autre représente un groupement -CONH - ; - W et Z identiques ou différents représentent un groupement choisi 10 parmi: -0-CO-, -CO-O-, CO-NH-, -NH-CO-NH-, -NH-CO-O-, -O-CO-NH-, -NH-CO-, O-CO-O-, -0-, -S-, -SO, -SO2-, -CH2- et une simple liaison; - n et o identiques ou différents représentent un entier allant de 2 à 12; - m représente un entier allant de 2 à 10; - l'un de R1 et de R3 est un groupement cationique tandis que l'autre est 15 un groupement non-ionique; - R2 représente un groupement choisi parmi: les radicaux hydrocarbonés en C4-C24; les radicaux hydrocarbonés fluorés en C4-C24.

2. Composé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le groupement R2 représente une chaîne hydrocarbonée en C12-C24 ou une chaîne hydrocarbonée fluorée en C8-C24.

3. Composé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que le groupement cationique, R1 ou R3, est choisi parmi: un groupement cationique aminé cyclique ou non cyclique, une alkyl amine ou une polyalkyl amine.

4. Composé selon la revendication 3, caractérisé en ce que le groupement cationique, R1 ou R3, est choisi parmi: un groupement amine, primaire secondaire ou tertiaire, un groupement imidazole, benzimidazole, pyridine, quinoline, guanidine, spermine, spermidine ou polyspermine.

5. Composé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que le groupement non ionique, R1 ou R3, est choisi parmi: - les molécules simples polyhydroxylées, ou polyéthoxylées, les polyéthers ou des télomères du tris(hydroxyméthyl)aminométhane, les peptides, les hormones naturelles ou synthétiques, les anticorps. (I)

6. Composé selon la revendication 5, caractérisé en ce que le groupement non ionique, RI ou R3, est choisi parmi: le galactose, le glucose, le fructose, le mannose, le ribose, l'acide sialique, le lactose, le maltose, le cellobiose, la glucosamine, la galactosamine, le saccharose, le lactobionamide, le polyoxyde d'éthylène, la séquence RGD, l'acide folique, une séquences TAT, ou KALA, les stéroïdes, le gleevek.

7. Composé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il est choisi parmi l'une des deux formules cidessous: Molécule (la)

NH

a NH 3 O2CCF3

O NH

Molécule (lb)

8. Association d'une ou plusieurs molécules de formule (I) selon l'une quelconque des revendications 1 à 7 avec un composé biologiquement actif de type polynucléotide.

9. Association selon la revendication 8, caractérisée en ce que le composé biologiquement actif est choisi parmi: des polynucléotides tels que de l'acide désoxyribonucléique (ADN) simple-brin ou double brin, de l'acide ribonucléique (ARN), de l'ARN ribosomal (ARNr), de l'ARN catalytique (ARNc), de petits ARN nucléaires (ARNpn), des ARN messagers (ARNm), des ARN de transfert (ARNt), des oligonuclétides ou oligomères d'ADN ou d'ARN, simple brin ou double brin, oligonucléotides anti-sens, acides nucléiques peptidiques (PNA) et produits de substitution d'oligonucléotides d'acides nucléiques, les plasmides, les gènes et les fragments de gènes.

10. Association selon la revendication 8 ou la revendication 9, caractérisée en ce que le nombre de composés de formule (I) associé ou complexé avec la substance biologiquement active est compris entre 1 et 5 molécules pour chaque groupement phosphate porté par la substance biologiquement active, préférentiellement entre 2 et 3.

11. Association selon la revendication 8, caractérisée en ce qu'elle comporte trois composés de formules générales (I) distinctes dans laquelle un composé (I) est muni d'une partie polaire RI (ou R3) saccharidique, un autre composé (I) est muni d'un groupement polyoxyéthylène, et enfin un troisième composé (I) comporte un groupe polaire RI (ou R3) qui est une séquence peptidique TAT.

12. Composition pharmaceutique, caractérisée en ce qu'elle comprend au moins une association selon l'une quelconque des revendications 8 à 11.

13. Utilisation d'une association selon l'une quelconque des revendications 8 à 1 l pour la préparation d'un médicament de thérapie génique.

14. Utilisation d'une association selon l'une quelconque des revendications 8 à 11 pour la préparation d'un vaccin.