FR2685956A1 - METHOD AND DEVICE FOR TESTING BY AGGLUTINATION OF PARTICLES. - Google Patents
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- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
Abstract
Le dispositif comprend un boîtier (20) contenant un milieu poreux (10) et comportant au moins une ouverture (21) qui expose à l'extérieur une zone d'échantillon (2) du milieu poreux pour application d'un échantillon de l'agent à détecter, le milieu poreux contenant des particules auxquelles est attaché un réactif spécifique de l'agent à détecter, ces particules étant susceptibles de migration au travers du milieu poreux. Les particules sont contenues dans une zone de particules (4) géométriquement distincte de la zone d'échantillon, ou bien sont contenues dans la zone d'échantillon. Elles possèdent une couleur différente de la couleur du milieu poreux.The device comprises a housing (20) containing a porous medium (10) and having at least one opening (21) which exposes to the exterior a sample area (2) of the porous medium for application of a sample of the. agent to be detected, the porous medium containing particles to which is attached a reagent specific for the agent to be detected, these particles being capable of migration through the porous medium. The particles are contained in a particle area (4) geometrically distinct from the sample area, or are contained within the sample area. They have a different color from the color of the porous medium.
Description
Procédé et dispositif de test par agglutination de particules La présenteMethod and device for particle agglutination testing The present
invention concerne un procédé et un dispositif pour détecter un agent à reconnaître par analyse (ci-après dénommé simplement "agent") dans The invention relates to a method and a device for detecting an agent to be recognized by analysis (hereinafter simply referred to as "agent") in
un échantillon, sur la base d'une réaction de forma- a sample, based on a training reaction
tion d'un complexe au sein de la matrice d'un milieu tion of a complex within the matrix of a medium
fibreux La présence ou l'absence d'un agent spéci- fibrous The presence or absence of a specific agent
fique est déterminée par la présence ou l'absence d'une réaction de type agglutination d'un réactif attaché à des particules, qui est spécifique à fique is determined by the presence or absence of an agglutination-type reaction of a reagent attached to particles, which is specific to
l'agent à détecter.the agent to be detected.
On a déjà proposé des procédés de dosage d'agent basés sur des réactions de formation de complexes, par exemple de formation d'un complexe anticorps/ antigène et l'immobilisation de ces complexes dans un milieu support Par exemple, un dispositif de test analytique est décrit dans la demande de brevet internationale WO-A-88/08534, o un réactif marqué devient lié à un support poreux dans une certaine Agent assay methods have already been proposed based on complex formation reactions, for example the formation of an antibody / antigen complex and the immobilization of these complexes in a support medium. For example, an analytical test device is described in international patent application WO-A-88/08534, where a labeled reagent becomes bound to a porous support in a certain
zone de celui-ci lorsque l'agent recherché est pré- area thereof when the agent sought is pre-
sent.smells.
L'un des critères importants, lorsque l'on déve- One of the important criteria, when you
loppe de tels procédés et de tels dispositifs, est la taille des pores et diverses autres propriétés du milieu poreux à utiliser en liaison avec le type de fluide ou d'échantillon fluide à étudier Une taille de pore plus fine du milieu poreux conviendrait à la The scope of such methods and devices, is the pore size and various other properties of the porous medium to be used in conjunction with the type of fluid or fluid sample to be studied. A finer pore size of the porous medium would be suitable for
détection d'antigènes ou d'anticorps dans des flui- detection of antigens or antibodies in fluids
des fins tels que l'urine, tandis que des échantil- purposes such as urine, while
lons visqueux tels qu'un sérum ou des échantillons alimentaires nécessiteraient un milieu présentant viscous lons such as serum or food samples would require a medium with
une taille de pore plus importante.a larger pore size.
Il serait intéressant de pouvoir développer des procédés de test qui soient moins dépendants de l'aptitude du fluide échantillon à traverser le milieu Il serait également intéressant de pouvoir It would be interesting to be able to develop test methods which are less dependent on the ability of the sample fluid to pass through the medium. It would also be interesting to be able to
disposer d'un procédé et d'un dispositif plus uni- have a more uniform process and device
versels, capables de détecter différents types d'agents, par exemple des bactéries, des virus, des Versels, capable of detecting different types of agents, for example bacteria, viruses,
antigènes, des haptènes ou un matériel génétique. antigens, haptens or genetic material.
L'un des buts de la présente invention est de pro- One of the aims of the present invention is to pro-
poser un procédé simple et rapide pour détecter un set up a simple and quick method to detect a
agent dans un échantillon Un autre but de la pré- agent in a sample Another purpose of the pre-
sente invention est de proposer un dispositif plus universel permettant de détecter des agents dans une sente invention is to provide a more universal device for detecting agents in a
gamme variée d'échantillons, en particulier vis- varied range of samples, especially vis-
queux, qui soit fiable et peu coûteux à fabriquer. which is reliable and inexpensive to manufacture.
La présente invention propose un procédé et un The present invention provides a method and a
dispositif pour détecter un agent dans un échantil- device for detecting an agent in a sample
lon Le procédé comprend les étapes consistant à appliquer un échantillon à tester à une zone d'échantillon d'un milieu poreux et à faire migrer des particules auxquelles est attaché un réactif spécifique à l'agent à détecter au travers du The method comprises the steps of applying a test sample to a sample area of a porous medium and migrating particles to which is attached a specific reagent to the agent to be detected through the
milieu Lors de la migration, les particules traver- medium During migration, the particles pass through
sent la zone d'échantillon et, si l'agent recherché feels the sample area and, if the agent sought
est présent, il va se produire une réaction de for- is present, there will be a reaction for-
mation d'un complexe entre le réactif et l'agent Le complexe, s'il s'en forme un, est immobilisé dans la mation of a complex between the reagent and the agent The complex, if it forms one, is immobilized in the
zone d'échantillon Une surface contenant les parti- sample area A surface containing the parts
cules immobilisées est alors observée dans la zone immobilized cules is then observed in the area
d'échantillon Si l'agent recherché n'est pas pré- If the agent sought is not pre-
sent, les particules vont continuer à migrer au tra- feels, the particles will continue to migrate through
vers de la zone d'échantillon et il ne se formera aucune surface que l'on puisse distinguer Il est possible de rendre la surface distinguable par le fait que les complexes rendent eux-mêmes la surface optiquement observable, ou bien qu'ils la rendent towards the sample area and there will be no surface which can be distinguished It is possible to make the surface distinguishable by the fact that the complexes themselves make the surface optically observable, or else they make it
optiquement observable par une réaction ultérieure. optically observable by a subsequent reaction.
Dans un mode de mise en oeuvre préféré, on donne aux particules une couleur, de sorte que les complexes piégés comprenant les particules rendent la surface observable. L'un des avantages du procédé tient au fait que le fluide échantillon, en tant que tel, n'a pas besoin de présenter une très grande aptitude à la diffusion au travers du milieu poreux; il est simplement nécessaire que l'échantillon puisse passer à travers la petite surface de la zone d'échantillon De ce fait, on peut étudier de très nombreux types de In a preferred embodiment, the particles are given a color, so that the trapped complexes comprising the particles make the surface observable. One of the advantages of the method is due to the fact that the sample fluid, as such, does not need to have a very great ability to diffuse through the porous medium; it is simply necessary that the sample can pass through the small area of the sample area. Therefore, there are many types of
fluides échantillon.sample fluids.
La migration des particules est de préférence opé- The migration of the particles is preferably carried out
rée en appliquant tout d'abord les particules à une first by applying the particles to a
seconde zone du milieu poreux, géométriquement dis- second zone of the porous medium, geometrically
tincte de la zone d'échantillon On applique ensuite une solution de lavage au milieu, qui entraîne les particules hors de cette seconde zone sur toute l'étendue du milieu poreux Lorsqu'elles passent à l'endroit de la zone d'échantillon, les particules sont immobilisées en raison de l'agglutination ou de la réaction de formation d'un complexe, ou bien tincture of the sample zone A washing solution is then applied to the medium, which entrains the particles out of this second zone over the entire extent of the porous medium When they pass at the place of the sample zone, the particles are immobilized due to agglutination or the complexing reaction, or
continuent à migrer au travers de la zone d'échan- continue to migrate through the trading area
tillon avec la solution de lavage lorsqu'aucun agent wash with washing solution when no agent
n'est présent.is not present.
Dans l'une des formes de mise en oeuvre, les par- In one form of implementation, the par-
ticules sont appliquées au milieu poreux dans la zone d'échantillon avant d'appliquer l'échantillon lui-même La solution de lavage traverse alors la the particles are applied to the porous medium in the sample area before applying the sample itself. The washing solution then passes through the
zone d'échantillon et élimine par lavage les parti- sample area and wash away particles
cules lorsque l'agent n'est pas présent, ou sinon cules when the agent is not present, or otherwise
les piège après agglutination.traps them after agglutination.
Le présent procédé présente les avantages d'être rapide et simple L'utilisateur peut se contenter The present process has the advantages of being quick and simple The user can be satisfied
d'observer s'il se développe ou non une surface dis- to observe whether or not a surface is developing
cernable Par exemple, lorsque l'on utilise des par- traceable For example, when using par-
ticules colorées, une surface colorée se forme dans colored tiles, a colored surface forms in
la zone o l'échantillon a été appliqué. the area where the sample was applied.
Le dispositif de la présente invention comprend un boîtier contenant un milieu poreux Le boîtier est de préférence en un matériau résistant à l'humidité ou non absorbant, tel qu'une matière plastique Le boîtier comporte en outre au moins une ouverture qui expose à l'extérieur une zone du milieu poreux pour l'application d'un échantillon Le milieu poreux contient également des particules revêtues d'un The device of the present invention comprises a housing containing a porous medium The housing is preferably made of a moisture-resistant or non-absorbent material, such as a plastic material The housing further comprises at least one opening which exposes to the outside an area of the porous medium for the application of a sample The porous medium also contains particles coated with a
réactif spécifique à l'agent à détecter Les parti- reagent specific to the agent to be detected
cules sont capables de migration au travers du milieu Dans un mode de réalisation préféré, les cules are capable of migration through the medium In a preferred embodiment, the
particules sont contenues dans une zone de particu- particles are contained in a particle area
les géométriquement distincte de la zone d'échantil- the geometrically distinct from the sample area-
lon, quoique les particules puissent l'être dans la lon, although the particles may be in the
zone d'échantillon proprement dite Très avantageu- Sample area proper Very advantageous
sement, les particules ont une couleur qui contraste the particles have a contrasting color
avec la couleur du milieu poreux.with the color of the porous medium.
Le boîtier du dispositif de l'invention comprend en outre des moyens d'alimentation en communication The housing of the device of the invention further comprises communication supply means
avec une partie de la membrane poreuse, pour l'ap- with part of the porous membrane, for the app-
plication d'une solution de lavage Ces moyens d'a- plication of a washing solution These means of
limentation comprennent, dans l'une des formes de réalisation, une seconde ouverture formée dans le boîtier, qui expose à lrextérieur la partie du milieu à laquelle on peut appliquer la solution de lavage De préférence, les moyens d'alimentation comprennent une chambre susceptible d'écrasement, the supply comprises, in one of the embodiments, a second opening formed in the housing, which exposes to the outside the part of the medium to which the washing solution can be applied. Preferably, the supply means comprise a chamber capable of 'crushing,
formée d'une seule pièce avec le boîtier et qui con- formed in one piece with the housing and which
tient la solution de lavage Lorsque l'on écrase une holds the washing solution When crushing a
paroi interne de cette chambre, la partie d'alimen- inner wall of this chamber, the feeding part
tation du milieu poreux communique avec la solution tation of the porous medium communicates with the solution
de lavage.of washing.
Le dispositif peut être conditionné et entreposé au laboratoire de façon simple Pour l'utilisation il peut être tenu à la main, l'échantillon à tester pouvant être appliqué par l'ouverture de la zone The device can be packaged and stored in the laboratory in a simple way. For use, it can be held by hand, the sample to be tested can be applied by opening the zone.
d'échantillon par exemple avec une pipette. sample for example with a pipette.
Dans un autre mode de réalisation, le dispositif comporte une pluralité de bandes de milieu poreux, chaque bande possédant des particules revêtues d'un In another embodiment, the device comprises a plurality of strips of porous medium, each strip having particles coated with a
réactif différent spécifique d'un anticorps diffé- different reagent specific for a different antibody
rent De cette manière, on peut tester pour le même échantillon la présence d'agents différents, par rent In this way, we can test for the same sample the presence of different agents, by
exemple différentes bactéries ou autres microorga- example different bacteria or other microorganisms
nismes. D'autres détails de l'invention apparaîtront à la nisms. Other details of the invention will appear on
lecture de la description ci-dessous, faite en réfé- reading of the description below, made in reference to
rence aux dessins annexés.Refer to the accompanying drawings.
La figure 1 est un dessin schématique illustrant le principe de base d'un procédé selon la présente invention. La figure 2 montre une forme de réalisation du Figure 1 is a schematic drawing illustrating the basic principle of a method according to the present invention. Figure 2 shows an embodiment of the
dispositif de la présente invention. device of the present invention.
La figure 3 montre un autre mode de réalisation du Figure 3 shows another embodiment of the
dispositif, comprenant une pluralité de bandes po- device, comprising a plurality of bands for
reuses. L'invention est, de façon très large, applicable à la détection de bactéries, d'antigènes, d'anticorps, de virus ou d'autres microorganismes Le réactif spécifique à l'agent particulier sera normalement un anticorps ou un antigène On trouve dans le commerce reuses. The invention is very broadly applicable to the detection of bacteria, antigens, antibodies, viruses or other microorganisms. The reagent specific to the particular agent will normally be an antibody or an antigen. trade
des antigènes ou anticorps monoclonaux et/ou poly- monoclonal and / or poly-
clonaux utilisables avec la présente invention. clonal usable with the present invention.
Le procédé de la présente invention peut être ex- The process of the present invention can be ex-
pliqué à l'aide de l'illustration de la figure 1 Un échantillon 1, par exemple un échantillon bactérien à tester, est appliqué à une zone d'échantillon 2 d'un milieu poreux 10 Selon la viscosité de l'échantillon fluide, celui-ci pénètre plus ou moins plicated using the illustration of Figure 1 A sample 1, for example a bacterial sample to be tested, is applied to a sample area 2 of a porous medium 10 Depending on the viscosity of the fluid sample, that -this penetrates more or less
profondément dans le milieu 10 Une pénétration com- deep in the middle 10
plète n'est pas nécessaire; il est seulement impor- full is not necessary; it is only important
tant qu'au moins une partie de la matrice du milieu as long as at least part of the middle matrix
dans la zone d'échantillon contienne l'échantillon. in the sample area contains the sample.
Des particules 3 revêtues d'un réactif spécifique Particles 3 coated with a specific reagent
migrent alors au travers du milieu 10 Dans l'exem- then migrate through the medium 10 In the example
ple de la figure 1, les particules migreraient dans une direction allant d'une première extrémité 5 à ple of Figure 1, the particles would migrate in a direction from a first end 5 to
une seconde extrémité 6 du milieu 10. a second end 6 of the medium 10.
Lorsqu'elles traversent la zone d'échantillon 2, When they pass through sample area 2,
les particules 3, avec le réactif qui leur est rat- particles 3, with the reagent which is rat-
taché, vont réagir avec l'agent de l'échantillon 1 lorsque cet agent est présent Cette réaction de formation d'un complexe produit des complexes incluant les particules, qui sont alors piégées dans le milieu poreux 10 ou au voisinage de la zone d'échantillon 2 Une surface se développe alors à cet endroit, que l'on peut distinguer du reste du milieu poreux Les complexes constituent eux-mêmes la surface optiquement observable, par exemple en prévoyant des particules avec une matière qui est optiquement active, ou bien ils peuvent être rendus optiquement actifs, par exemple par des réactions de fluorescence ou de chimioluminescence Dans une forme de mise en oeuvre préférée, on utilise des particules qui possèdent par elles-mêmes une couleur autre que celle du milieu poreux Il est également possible de rendre la surface optiquement observable par réaction ultérieure des complexes formés avec une substance additionnelle, par exemple une matière fluorescente ou chimioluminescente ou une enzyme qui stained, will react with the agent of sample 1 when this agent is present This reaction of formation of a complex produces complexes including the particles, which are then trapped in the porous medium 10 or in the vicinity of the zone of sample 2 A surface then develops at this location, which can be distinguished from the rest of the porous medium. The complexes themselves constitute the optically observable surface, for example by providing particles with a material which is optically active, or else they can be made optically active, for example by fluorescence or chemiluminescence reactions. In a preferred embodiment, particles which by themselves have a color other than that of the porous medium are used. It is also possible to make the optically observable surface by subsequent reaction of the complexes formed with an additional substance, for example a fluorescent or chemical material oluminescent or an enzyme that
engendre ensuite une fluorescence ou une chimiolumi- then generates fluorescence or chemilumi-
nescence.nescence.
Dans la forme de mise en oeuvre illustrée figu- In the embodiment illustrated figu-
re 1, on applique des particules colorées à une se- re 1, we apply colored particles to a se-
conde zone 4 du milieu poreux géométriquement dis- conde zone 4 of the geometrically porous porous medium
tincte de la zone d'échantillon 2 La migration des particules est réalisée en appliquant une solution tincture of the sample area 2 The migration of the particles is carried out by applying a solution
de lavage au milieu poreux, par exemple à la pre- washing in a porous medium, for example at the first
mière extrémité 5 du milieu poreux ou directement à la seconde zone 4 Les particules colorées sont alors emportées avec la solution de lavage lorsque celle-ci, par effet de mèche, se déplace le long du milieu en direction de la zone d'échantillon 2 Les particules colorées sont de préférence appliquées au milieu poreux avant application de l'échantillon à tester. Dans une autre forme de mise en oeuvre, il est first end 5 of the porous medium or directly to the second zone 4 The colored particles are then removed with the washing solution when the latter, by wicking effect, moves along the medium in the direction of the sample zone 2 The colored particles are preferably applied to the porous medium before application of the sample to be tested. In another form of implementation, it is
également possible d'appliquer tout d'abord les par- also possible to apply first the
ticules colorées dans la zone d'échantillon 2, puis d'appliquer ensuite l'échantillon à tester sur cette même zone La solution de lavage ou tampon de lavage est alors appliquée de manière à laver complètement la zone d'échantillon 2 Comme précédemment, si colored particles in the sample area 2, then apply the test sample to this same area The washing solution or washing buffer is then applied so as to completely wash the sample area 2 As above, if
l'agent est présent il se forme des complexes agglu- the agent is present it forms agglomerated complexes
tinés qui vont être retenus dans la zone d'échantil- which will be retained in the sample area
lon et produire une surface colorée visible Si l'agent n'est pas présent, la zone d'échantillon est lon and produce a visible colored surface If the agent is not present, the sample area is
entièrement lavée par la solution tampon, ne lais- completely washed with the buffer solution, do not leave
sant aucune couleur se développer et indiquant ainsi sant no color developing and thus indicating
un résultat négatif.a negative result.
On peut également appliquer à la seconde zone 4 We can also apply to the second zone 4
des particules colorées de deux couleurs différen- colored particles of two different colors
tes Dans cette forme de mise en oeuvre, on peut appliquer un réactif spécifique d'un premier agent à des billes d'une première couleur et un second réac- tif spécifique d'un second agent à des billes d'une In this embodiment, a reagent specific for a first agent can be applied to beads of a first color and a second reagent specific for a second agent to beads of a first color.
seconde couleur Lors du lavage de la zone d'échan- second color When washing the sample area
tillon, plusieurs situations peuvent se produire Si There are several situations that can arise If
l'un seulement des agents est présent dans l'échan- only one of the agents is present in the sample
tillon, seules les billes possédant la couleur asso- furrow, only the balls having the associated color
ciée à cet agent seront piégées et produiront une ciée to this agent will be trapped and will produce a
surface colorée observable Il est également possi- observable colored surface It is also possible
ble que les deux agents soient présents, auquel cas les deux couleurs de billes seront piégées dans la zone d'échantillon On a également représenté sur la figure 1 des moyens d'absorption 7 placés de manière à communiquer avec le milieu poreux 10 à l'extrémité 6 Dans cette forme de mise en oeuvre, les moyens ble that the two agents are present, in which case the two colors of beads will be trapped in the sample area FIG. 1 also shows absorption means 7 placed so as to communicate with the porous medium 10 at the end 6 In this form of implementation, the means
d'absorption renforcent l'effet de mèche de la solu- absorption reinforce the wicking effect of the solu-
tion de lavage au travers de la zone d'échantillon 2 En général, les moyens d'absorption, qui sont de préférence constitués d'un tampon absorbant, sont situés à l'opposé de la zone d'échantillon 2 par rapport à la seconde zone 4 contenant les particules colorées De cette manière, lorsque l'on applique la solution de lavage, par exemple dans la seconde zone washing through the sample area 2 In general, the absorption means, which preferably consist of an absorbent pad, are located opposite the sample area 2 with respect to the second zone 4 containing the colored particles In this way, when the washing solution is applied, for example in the second zone
4 ou au voisinage de celle-ci, un écoulement direc- 4 or in the vicinity thereof, a direct flow
tionnel de la solution de lavage s'établit en direc- of the washing solution is established in the direction
tion des moyens d'absorption 7 et de ce fait au tra- tion of the absorption means 7 and therefore through
vers de la zone d'échantillon 2.to sample area 2.
La solution de lavage ou tampon de lavage peut The washing solution or washing buffer can
être une solution saline tamponnée par des phospha- be a phosphate buffered saline
tes, un soluté physiologique salin ou tout autre a physiological saline solution or any other
tampon physiologique approprié On utilise de préfé- suitable physiological buffer Preference is given to using
rence une solution saline tamponnée par des phospha- contains a phosphate buffered saline solution
tes On a également constaté que l'on pouvait in- We also found that we could in-
clure de façon appropriée des détergents tels que le Triton (marque déposée) X 705 à 0,2 %, le Tween 20 à appropriately closes detergents such as Triton (trademark) X 705 at 0.2%, Tween 20 at
0,3 % et le Triton X 100 à 0,1 %.0.3% and Triton X 100 at 0.1%.
Parmi les particules qui conviennent à la présente invention, on trouve les billes de latex, également Among the particles which are suitable for the present invention are latex beads, also
désignées "microsphères" ou "microbilles" On a uti- designated "microspheres" or "microbeads" We used
lisé des billes d'un diamètre de 0,2 à 3 pm, bien que l'on ait constaté que des billes d'un diamètre d'environ 0,5 à environ 0,8 gm se soient révélées particulièrement appropriées Ces particules sont beads of 0.2 to 3 µm in diameter, although beads of about 0.5 to about 0.8 µm in diameter have been found to be particularly suitable These particles are
disponibles en diverses couleurs.available in various colors.
Les particules ou billes peuvent être revêtues par le réactif de toute manière appropriée Le matériau réactif, formé de protéines ou de molécules, peut être soit adsorbé sur la bille de latex ou lié de façon covalente par couplage chimique Le procédé de The particles or beads can be coated with the reagent in any suitable manner. The reactive material, formed of proteins or molecules, can either be adsorbed on the latex bead or covalently bonded by chemical coupling.
couplage covalent est utilisé de façon préférentiel- covalent coupling is used preferentially-
le Les billes sont tout d'abord lavées par mise en suspension dans une solution saline tamponnée aux the The beads are first washed by suspension in a saline solution buffered with
phosphates (PBS: Phosphate-Buffered Saline) et cen- phosphates (PBS: Phosphate-Buffered Saline) and cen-
trifugées Les billes lavées sont alors remises en The washed beads are then put back in
suspension dans le PBS et une solution de glutaral- suspension in PBS and a solution of glutaral-
déhyde contenant l'anticorps, que l'on incube en- dehyde containing the antibody, which is incubated
suite.after.
Le milieu poreux 10 de la présente invention pré- The porous medium 10 of the present invention pre-
sentera la propriété que les particules peuvent migrer librement au travers des pores du matériau will feel the property that particles can freely migrate through the pores of the material
lors de l'application de la solution de lavage. when applying the washing solution.
D'autre part, si l'agent à détecter, par exemple une On the other hand, if the agent to be detected, for example a
bactérie, est présent dans l'échantillon, les com- bacteria, is present in the sample, the com-
plexes agglutinés vont être piégés dans la matrice. agglutinated plexes will be trapped in the matrix.
Le milieu poreux est de préférence un matériau hydrophile fibreux d'une fibre polymère Dans une forme de réalisation préférée, le matériau est une The porous medium is preferably a hydrophilic fibrous material of a polymeric fiber. In a preferred embodiment, the material is a
polyoléfine, de préférence le polyéthylène, le poly- polyolefin, preferably polyethylene, poly-
propylène ou un copolymère éthylène-oléfine inféri- propylene or a lower ethylene-olefin copolymer
eure Un LLDPE (Linear Low Density Poly Ethylene: polyéthylène linéaire à faible densité) est préféré entre tous Parmi les polymères qui, de façon géné- A LLDPE (Linear Low Density Poly Ethylene) is preferred among all of the polymers which, generally
rale, conviennent, on trouve ceux des oléfines com- rale, agree, we find those of olefins
prenant de 2 à 10 atomes de carbone Très préféren- taking from 2 to 10 carbon atoms Very preferen-
tiellement, il s'agit d'un copolymère d'éthylène et de 0,5 à 8 % en poids, de préférence de 1 à 7 % en tially, it is an ethylene copolymer and from 0.5 to 8% by weight, preferably from 1 to 7% by weight.
poids, d'un comonomère Les comonomères préféren- weight, of a comonomer The preferred comonomers
tiels sont des oléfines avec 4 à 10 atomes de car- tiels are olefins with 4 to 10 carbon atoms
bone, très préférentiellement 4 à 8 atomes de car- bone, very preferably 4 to 8 carbon atoms
bone Le copolymère préféré entre tous est un copo- bone The most preferred copolymer is a copo-
lymère d'éthylène et de 1-octène. lymer of ethylene and 1-octene.
Lorsque l'on utilise le polyéthylène, on le rend mouillable à l'eau ou hydrophile par addition d'une When polyethylene is used, it is made wettable with water or hydrophilic by the addition of a
quantité appropriée d'un produit mouillant ou ten- appropriate amount of wetting or tensing product
sioactif Les produits mouillants peuvent compren- wetting agent Wetting agents may include
dre:dre:
a) un alkyl-phénol alkoxylé, avec un monoglycé- a) an alkoxylated alkylphenol, with a monoglyc-
ride, diglycéride et/ou triglycéride en mé- wrinkle, diglyceride and / or triglyceride in me-
lange, ou b) un ester d'acide gras de polyoxyalkylène, ou diaper, or b) a polyoxyalkylene fatty acid ester, or
c) une combinaison de (b) et d'une fraction quel- c) a combination of (b) and some fraction
conque de (a).conch of (a).
De tels produits mouillants sont décrits dans le Such wetting products are described in the
US-A-4 578 414 L'alkyl-phénol alkoxylé est de pré- US-A-4,578,414 The alkoxylated alkyl phenol is pre-
férence un de ceux dont le groupe alkyle possède de 1 à 20 atomes de carbone, très préférentiellement environ 6 à environ 12 atomes de carbone Une chaîne ference one of those in which the alkyl group has from 1 to 20 carbon atoms, very preferably about 6 to about 12 carbon atoms A chain
polyéthoxy constitue la chaîne polyalkoxy préférée. polyethoxy is the preferred polyalkoxy chain.
Le glycéride mélangé est de préférence un glycéride d'un acide gras L'acide gras peut être saturé ou insaturé et il s'agit de préférence d'un mélange The mixed glyceride is preferably a glyceride of a fatty acid The fatty acid can be saturated or unsaturated and it is preferably a mixture
d'acides gras présentant une longueur de chaîne car- fatty acids with a chain length of car-
il bonée comprise dans la plage allant d'environ 12 à environ 18 atomes de carbone Parmi les produits mouillants particulièrement préférés, on trouve le Atmer 645, qui est un glycéride mélangé complexe avec adduction d'un acide gras à longue chaîne, dis- ponible auprès de ICI America, Inc Un autre produit il bonée in the range from about 12 to about 18 carbon atoms Among the particularly preferred wetting products is Atmer 645, which is a complex mixed glyceride with adduction of a long chain fatty acid, available from ICI America, Inc Another product
mouillant est un monoester d'acide Z-9-octadécénoï- wetting agent is a monoester of Z-9-octadecenoic acid
que et de 1,2,3-propanetriol, disponible auprès de that and 1,2,3-propanetriol, available from
Dow Chemical sous la référence XU 61518 10. Dow Chemical under the reference XU 61518 10.
Les substances décrites ci-dessus peuvent être traitées de toute manière appropriée pour former le milieu poreux de la présente invention Le matériau hydrophile fibreux préférentiel peut être réalisé The substances described above can be treated in any suitable way to form the porous medium of the present invention. The preferred hydrophilic fibrous material can be produced.
par exemple à partir de fibres, de préférence à par- for example from fibers, preferably from
tir de fibres filées, en particulier de fibres filées fondues La forme préférée entre toutes du matériau de la présente invention est celui produit shooting of spun fibers, in particular molten spun fibers The most preferred form of the material of the present invention is that produced
par soufflage-fusion du copolymère d'éthylène préfé- by meltblowing of the preferred ethylene copolymer
rentiel mentionné plus haut avec un produit mouil- above mentioned with a wet product
lant.lant.
Le matériau fibreux ainsi formé peut se présenter sous la forme d'un tissu ou d'un tampon et peut être calandré On a cependant constaté qu'un matériau non The fibrous material thus formed can be in the form of a fabric or a tampon and can be calendered. It has however been observed that a material not
calandré était plus efficace, et c'est donc ce der- calendered was more effective, so this is the last
nier matériau que l'on utilisera de préférence. deny material that will be used preferably.
Le matériau hydrophile fibreux préférentiel selon la présente invention possède une ou plusieurs des propriétés suivantes prises en combinaison, avec les The preferred hydrophilic fibrous material according to the present invention has one or more of the following properties taken in combination with the
plages larges et préférentielles mentionnées ci-des- wide and preferential ranges mentioned above
sous.under.
Propriété Plage large Plage préférentielle Teneur en produit mouillant dans la composition de polyéthylène (% en poids) Diamètre de fibre (pm) Property Wide range Preferred range Content of wetting product in the polyethylene composition (% by weight) Fiber diameter (pm)
0,5 à 5,00.5 to 5.0
1,0 à 151.0 to 15
0,6 à 3,0,0.6 to 3.0,
en part env 1,0in part approx 1.0
2 à 112 to 11
CWST des fibres soufflées fondues (x 10-5 N/cm) Taille des pores du matériau de la fibre, selon ASTM F 316-80 (pm) Volume d'eau retenue/ volume de matériau CWST of melt blown fibers (x 10-5 N / cm) Pore size of the fiber material, according to ASTM F 316-80 (pm) Volume of water retained / volume of material
0,6 à 0,950.6 to 0.95
0,7 à 0,9,0.7 to 0.9,
en part env 0,85 Poids spécifique du matériau (g/m 2) lg/pied carrél Traitement (calandré ou non) de préférence non calandré Épaisseur (cm) in part approx 0.85 Specific weight of the material (g / m 2) lg / tiled foot Treatment (calendered or not) preferably not calendered Thickness (cm)
0,01 à 0,070.01 to 0.07
0,02 à 0,06,0.02 to 0.06,
en part env 0,03 Les particules revêtues de réactif peuvent être in part approx 0.03 The particles coated with reagent can be
appliquées au milieu poreux de toute manière appro- applied to the porous medium in any suitable way
priée Lorsque le milieu doit être conservé avant utilisation, les particules peuvent être appliquées required When the medium must be kept before use, the particles can be applied
à 120to 120
à 120to 120
3 à 3003 to 300
à 20 à 90 l 2 à 8 l à 40 l 3 à 4 l at 20 to 90 l 2 to 8 l at 40 l 3 to 4 l
dans une solution de sucrose On va donner ci-des- in a sucrose solution We will give below
sous un exemple d'application des particules. under an example of particle application.
On applique au milieu une solution de sucrose à A sucrose solution is applied to the medium.
à 300 mg/ml au moyen d'un applicateur chromato- at 300 mg / ml using a chromatographic applicator
graphique à couche mince Camag, ou à la main au moyen d'une pipette Dans cet exemple, on a appliqué sous forme d'une bande au milieu poreux environ 2 à Jl/cm d'une solution de sucrose à 200 mg/ml Le Camag thin-layer graphic, or by hand using a pipette In this example, about 2 to Jl / cm of a sucrose solution at 200 mg / ml was applied in the form of a strip in the porous medium.
milieu a été ensuite étuvé à 400 C pendant 1 heure. medium was then baked at 400 C for 1 hour.
Les billes sont appliquées à la bande dans une solution de sucrose à 20 à 100 mg/ml Dans l'exemple o l'on utilisait une pipette, on a appliqué à la bande de sucrose les billes de latex dans du sucrose à 50 mg/ml On a utilisé approximativement 5 à 10 gl de billes de latex/cm Le milieu a été alors laissé The beads are applied to the strip in a sucrose solution at 20 to 100 mg / ml. In the example where a pipette was used, the latex beads in sucrose at 50 mg / ml were applied to the sucrose strip. ml Approximately 5-10 g of latex beads / cm were used The medium was then left
à sécher à l'air à la température ambiante. air dry at room temperature.
Comme on peut le voir d'après cet exemple, les particules peuvent être appliquées en surface du milieu poreux ou, comme illustré figure 1, sur toute la profondeur du milieu Lorsque la solution de lavage est appliquée au voisinage des billes fixes, elle migre aisément hors de la zone de fixation et As can be seen from this example, the particles can be applied to the surface of the porous medium or, as illustrated in FIG. 1, over the entire depth of the medium. When the washing solution is applied in the vicinity of the fixed balls, it migrates easily outside the attachment area and
le long du milieu poreux.along the porous medium.
Sur la figure 2, on a illustré un mode de réalisa- In FIG. 2, an embodiment has been illustrated.
tion d'un dispositif selon la présente invention Le dispositif comprend un boîtier 20, de préférence en tion of a device according to the present invention The device comprises a housing 20, preferably in
un matériau résistant à l'humidité ou non absorbant. a moisture-resistant or non-absorbent material.
Le boîtier contient le milieu poreux 10 et possède au moins une ouverture 21 qui expose à l'extérieur The housing contains the porous medium 10 and has at least one opening 21 which exposes to the outside
une zone 2 du milieu poreux pour application de l'é- zone 2 of the porous medium for application of the
chantillon à analyser Le milieu poreux possède une sample to be analyzed The porous medium has a
zone 4 contenant des particules revêtues d'un réac- zone 4 containing particles coated with a reagent
tif spécifique à l'agent à détecter Comme indiqué plus haut, la zone contenant les particules 4 peut, tif specific to the agent to be detected As indicated above, the area containing the particles 4 can,
si on le désire, coïncider avec la zone d'échantil- if desired, coincide with the sample area
ion 2.ion 2.
* Comme on l'a mentionné précédemment, les particu-* As previously mentioned, the particu-
les peuvent porter un matériau additionnel qui leur can wear additional material that
est fixé et qui rend, lorsqu'il est formé, le com- is fixed and which makes, when formed, the com-
plexe optiquement discernable ou observable, soit optically discernible or observable plex, either
directement soit à la suite d'une réaction subsé- directly either as a result of a subsequent reaction
quente Les particules peuvent posséder par elles- quente The particles can possess by them-
mêmes une couleur distincte de la couleur du milieu poreux, ce qui permet d'observer visuellement les same color distinct from the color of the porous medium, which makes it possible to visually observe the
complexes piégés Ces particules colorées consti- trapped complexes These colored particles are
tuent la forme préférentielle.kill the preferential form.
Il est également possible de prévoir pour les par- It is also possible to plan for the par-
ticules au moins deux couleurs différentes, l'une at least two different colors, one
des couleurs de bille possédant un réactif spécifi- ball colors with a specific reagent
que de l'un des agents et l'autre couleur de bille that of one of the agents and the other ball color
possédant un réactif spécifique d'un second agent. having a specific reagent of a second agent.
De cette manière, on peut tester simultanément dans un échantillon la présence ou l'absence de deux In this way, we can simultaneously test in a sample the presence or absence of two
agents différents.different agents.
Le boîtier comporte en outre des moyens d'alimen- The housing also includes means for supplying
tation en communication avec une partie du milieu poreux, permettant d'appliquer une solution de lavage Comme illustré sur le mode de réalisation de la figure 2, ces moyens d'alimentation comprennent une seconde ouverture 22 formée dans le logement, qui expose à l'extérieur une partie d'extrémité 5 du tation in communication with a part of the porous medium, making it possible to apply a washing solution As illustrated in the embodiment of FIG. 2, these supply means comprise a second opening 22 formed in the housing, which exposes to the exterior an end portion 5 of the
milieu poreux En variante, les moyens d'alimenta- porous medium As a variant, the means of feeding
tion peuvent comprendre un tampon absorbant tel qu'un tampon d'alimentation (non illustré sur la figure 2) Le tampon d'alimentation contenant une solution tampon peut être situé dans le boîtier et placé en contact direct avec l'extrémité 5 de la tion may include an absorbent pad such as a feed pad (not shown in Figure 2) The feed pad containing a buffer solution may be located in the housing and placed in direct contact with the end 5 of the
bande 10.band 10.
Dans un autre mode de réalisation (non repré- In another embodiment (not shown
senté), les moyens d'alimentation peuvent comprendre une chambre susceptible d'écrasement contenant la solution de lavage, formée d'une seule pièce avec le boîtier 20 La chambre est configurée par exemple de manière à entourer la première extrémité 5 du milieu poreux Sous l'effet de l'application externe d'une pression, une paroi interne de la chambre s'écrase, sensed), the supply means may include a chamber susceptible to crushing containing the washing solution, formed in one piece with the housing 20 The chamber is configured for example so as to surround the first end 5 of the porous medium the effect of the external application of pressure, an internal wall of the chamber crashes,
permettant à la solution de lavage de venir en con- allowing the washing solution to come into con-
tact avec la partie d'extrémité 5 du milieu poreux. tact with the end portion 5 of the porous medium.
Dans ce mode de réalisation, le dispositif ne com- In this embodiment, the device does not include
porte qu'une ouverture vers l'extérieur. door that an opening to the outside.
Le milieu poreux du dispositif de la figure 2 a été illustré sous forme d'une bande allongée de matériau Il est également possible de prévoir pour The porous medium of the device of FIG. 2 has been illustrated in the form of an elongated strip of material. It is also possible to provide for
ce dispositif une pièce circulaire en forme de dis- this device a circular piece in the form of dis-
que du milieu poreux enfermée dans un boîtier circu- that porous medium enclosed in a circular housing
laire (non représentée) Dans un tel mode de réali- area (not shown) In such an embodiment
sation, l'ouverture 22 d'application de la solution sation, the opening 22 of application of the solution
de lavage se trouverait au centre du boîtier circu- in the center of the circular housing
laire, de manière à exposer une partie centrale du milieu fibreux La zone 4 contenant les billes est alors configurée circonférentiellement autour de laire, so as to expose a central part of the fibrous medium Zone 4 containing the beads is then configured circumferentially around
l'ouverture centrale 22 et comprend une région annu- the central opening 22 and includes an annular region
laire La zone d'échantillon 2 est alors présentée radialement encore plus à l'extérieur, en direction radiale, par rapport à la zone des billes 4 La périphérie externe du milieu poreux circulaire est alors placée en contact avec une partie de matériau absorbant en forme d'anneau 7 afin de jouer le rôle de promoteur de la migration des billes radialement laire The sample zone 2 is then presented radially even more to the outside, in a radial direction, relative to the zone of the balls 4 The external periphery of the circular porous medium is then placed in contact with a part of absorbent material in the form ring 7 in order to play the role of promoter of the migration of the balls radially
vers l'extérieur, au travers de la zone d'échantil- outward through the sample area
lon 2.lon 2.
Comme illustré sur la figure 2, le milieu poreux se présente sous forme d'une bande allongée avec une première extrémité 5 et une seconde extrémité 6 On peut utiliser toute dimension appropriée pour la bande, par exemple 1 cm sur 6 cm L'épaisseur est As illustrated in FIG. 2, the porous medium is in the form of an elongated strip with a first end 5 and a second end 6 Any dimension suitable for the strip can be used, for example 1 cm by 6 cm The thickness is
typiquement comprise entre 0,02 et 0,06 cm. typically between 0.02 and 0.06 cm.
La zone 4 des particules est située adjacente à la Zone 4 of the particles is located adjacent to the
première extrémité 5, tandis que la zone d'échantil- first end 5, while the sample area
lon est située en une position intermédiaire entre it is located in an intermediate position between
la zone des particules 4 et une seconde extrémité 6. the particle area 4 and a second end 6.
Comme on peut également le voir sur la figure 2, des As can also be seen in Figure 2,
moyens d'absorption, en particulier un tampon absor- absorption means, in particular an absorption pad
bant 7, sont placés dans le boîtier en contact avec la seconde extrémité 6 de la bande La suction du tampon absorbant aide au flux directionnel des billes au travers du milieu poreux dans la direction longitudinale vers la seconde extrémité 6 Le milieu bant 7, are placed in the housing in contact with the second end 6 of the strip The suction of the absorbent pad assists in the directional flow of the balls through the porous medium in the longitudinal direction towards the second end 6 The medium
poreux 10 est situé, ici encore, de façon préféren- porous 10 is located here again preferably
tielle sur une partie de base non absorbante 23 du on a non-absorbent base part 23 of the
boîtier 20.housing 20.
Dans certaines situations, il peut être avantageux de pourvoir le dispositif d'une zone de contrôle In certain situations, it may be advantageous to provide the device with a control zone
positif x située au voisinage de la seconde extré- positive x located near the second end
mité 6 de la bande allongée 10, ou à l'endroit de mite 6 of the elongated strip 10, or at the place of
cette extrémité (voir figure 1) La zone témoin per- this end (see figure 1) The control zone per-
met de vérifier que les billes 3 ont effectivement traversé par migration la zone d'échantillon 3 La zone témoin x peut contenir l'agent bactérien recherché, qui va produire la réaction de formation d'un complexe avec les billes et indiquer donc un résultat positif dans la zone x En variante, on peut placer du glutaraldéhyde dans la zone x, qui viendrait alors se lier au moins à une partie des billes de latex lorsque celles-ci traversent par checks that the beads 3 have effectively migrated through the sample area 3 The control area x may contain the desired bacterial agent, which will produce the reaction for forming a complex with the beads and therefore indicate a positive result in zone x As a variant, glutaraldehyde can be placed in zone x, which would then bind at least to part of the latex beads when they pass through
migration cette zone.migration this area.
Le dispositif de la présente invention peut être également réalisé sous forme d'un dispositif pour tests multiples Une telle forme de réalisation est illustrée figure 3 Le milieu poreux se présente sous forme d'une pluralité de bandes allongées The device of the present invention can also be produced in the form of a device for multiple tests. Such an embodiment is illustrated in FIG. 3. The porous medium is in the form of a plurality of elongated strips.
enfermées dans un boîtier 201 Les bandes sont pla- cées à l'intérieur du boîtier de manière à éviter enclosed in a housing 201 The strips are placed inside the housing so as to avoid
tout contact de fluide entre les bandes Une ouver- any fluid contact between the bands An open
ture ou puits commun 221 expose une première extré- ture or common well 221 exhibits a first
mité 51 de chacune des bandes allongées pour l'ap- mite 51 from each of the elongated bands for the ap-
plication de la solution de lavage Les zones de particules 41 des bandes contiennent des particules washing solution plication Particle areas 41 of the strips contain particles
colorées, les particules de chaque bande étant revê- colored, the particles of each strip being coated
tues d'un réactif spécifique d'un agent différent. killed with a specific reagent from a different agent.
Comme dans le mode de réalisation précédent, cha- As in the previous embodiment, each
cune des diverses bandes est disposée de manière à se trouver en communication avec un tampon absorbant 71 Le boîtier est également pourvu d'une ouverture 212 pour exposer la zone d'échantillon du milieu poreux de chaque bande Comme illustré sur la figure 3, le dispositif de tests multiples comporte cinq bandes allongées distinctes du milieu poreux Le même échantillon peut ainsi être testé simultanément afin de détecter cinq types d'agent différents, par one of the various strips is arranged so as to be in communication with an absorbent pad 71 The housing is also provided with an opening 212 for exposing the sample area of the porous medium of each strip As illustrated in FIG. 3, the device of multiple tests has five separate elongated strips of the porous medium. The same sample can thus be tested simultaneously in order to detect five different types of agent, by
exemple cinq bactéries différentes On peut égale- example five different bacteria We can also
ment tester la présence d'un même agent particulier, ment test the presence of the same particular agent,
par exemple Listeria, dans cinq échantillons diffé- for example Listeria, in five different samples
rents. Le mode de réalisation à tests multiples de la présente invention peut être également configuré sous forme circulaire (non représenté) Le milieu rents. The multi-test embodiment of the present invention can also be configured in circular form (not shown) The medium
poreux se présente sous forme d'une couche circu- porous is in the form of a circular layer
laire enfermée dans un boîtier, avec une ouverture au centre pour l'application de la solution de lair enclosed in a housing, with an opening in the center for the application of the solution
lavage Une pluralité de zones de particules conte- washing A plurality of zones of particles contained
nant des particules colorées sont disposées dans la couche circulaire en une pluralité de positions colored particles are arranged in the circular layer in a plurality of positions
angulaires, à une première distance radiale du cen- angular, at a first radial distance from the center
tre La solution de lavage migre ensuite radialement vers l'extérieur depuis le centre, en traversant les tre The washing solution then migrates radially outwards from the center, crossing the
zones de particules Une zone d'échantillon est dis- particle areas A sample area is available
posée radialement, à l'extérieur de chaque zone de particules, à une seconde distance radiale du centre qui est supérieure à la première distance radiale. Des ouvertures sont formées dans le boîtier afin laid radially, outside each zone of particles, at a second radial distance from the center which is greater than the first radial distance. Openings are formed in the housing to
d'exposer chacune des zones d'échantillon Les mo- to expose each of the sample areas The mo-
yens d'absorption de cette forme de réalisation cir- absorption yen of this circ
culaire du dispositif comprennent un matériau d'ab- device ring include an ab-
sorption en contact avec la périphérie externe de la sorption in contact with the outer periphery of the
couche circulaire du milieu poreux.circular layer of porous medium.
L'exemple ci-dessous va permettre d'illustrer la The example below will illustrate the
mise en oeuvre de la présente invention. implementation of the present invention.
Exemple Cet exemple illustre la détection d'une bactérie dans un échantillon, le réactif étant un anticorps spécifique de la bactérie L'échantillon bactérien contenait une souche HB 101 d'Escherichia Coli Pour Example This example illustrates the detection of a bacterium in a sample, the reagent being an antibody specific for the bacterium The bacterial sample contained a strain HB 101 of Escherichia Coli Pour
un essai témoin, on a utilisé la bactérie Micrococ- a control test, the Micrococ- bacteria were used
cus Sp On a utilisé des anticorps anti-E Coli de cus Sp We used anti-E Coli antibodies
lapin, disponibles auprès de Dako Ltd, Buckinghams- rabbit, available from Dako Ltd, Buckinghams-
hire, Royaume-Uni.hire, United Kingdom.
L'anticorps a été lié à des billes de latex de The antibody was bound to latex beads of
0,55 pm de diamètre, qui ont été colorées en bleu. 0.55 µm in diameter, which were colored blue.
Les billes ont été obtenues auprès de Polysciences Ltd, Northhampton, Royaume-Uni Un volume de 1 ml de billes de latex ( 2,5 % en poids) à 2, 5 % en volume a The beads were obtained from Polysciences Ltd, Northhampton, United Kingdom A volume of 1 ml of latex beads (2.5% by weight) at 2.5% by volume a
été transféré dans un tube de centrifugation Eppen- transferred to an Eppen- centrifuge tube
dorf Le tube a été rempli d'un soluté salin tam- dorf The tube was filled with tamine saline
ponné aux phosphates (PBS) présentant un p H de 7,2 et contenant 150 m M de Na Cl, 50 m M de Na 2 HPO 4 et 8 m M de Na H 2 PO 4 La suspension de billes a été centrifugée phosphated (PBS) with a p H of 7.2 and containing 150 m M of Na Cl, 50 m M of Na 2 HPO 4 and 8 m M of Na H 2 PO 4 The suspension of beads was centrifuged
et le surnageant a été jeté Les billes ont été en- and the supernatant has been discarded The beads have been
suite lavées deux fois en les remettant en suspen- immediately washed twice, resuspending them
sion dans du PBS et en les centrifugeant à nouveau. sion in PBS and centrifuging them again.
Le granule de billes de latex a été remis en sus- The granule of latex beads has been refilled
pension dans 1 ml de glutaraldéhyde à 8 % (en volu- board in 1 ml of 8% glutaraldehyde (in volu-
me) de qualité "microscopie électronique" dans du me) of "electron microscopy" quality in
PBS Les billes de latex remises à nouveau en sus- PBS Latex beads re-added
pension ont été ensuite laissées incuber une nuit à pension were then incubated overnight at
la température de la salle, avec agitation modérée. room temperature, with moderate agitation.
Après incubation, les billes ont été lavées par sus- After incubation, the beads were washed by sus-
pension à nouveau dans du PBS et centrifugation à nouveau Les billes de latex lavées ont été remises en suspension dans 1 ml de PBS et 400 Fg de solution again in PBS and centrifugation again The washed latex beads were resuspended in 1 ml of PBS and 400 Fg of solution
d'anticorps La suspension a été mise à incuber pen- antibody The suspension was incubated for
dant 4 heures à la température de la salle, avec for 4 hours at room temperature, with
agitation modérée.moderate agitation.
Après incubation des billes de latex avec la solu- After incubation of the latex beads with the solution
tion d'anticorps, les billes ont été centrifugées et le surnageant a été jeté Le granule de billes de latex a été alors remis en suspension dans 1 ml de sérumalbumine bovine et incubé pendant 10 mn à la température de la salle Les billes de latex ont été ensuite centrifugées et le granule de billes a été antibody, the beads were centrifuged and the supernatant was discarded The latex bead granule was then resuspended in 1 ml of bovine serum albumin and incubated for 10 min at room temperature The latex beads were was then centrifuged and the bead granule was
remis en suspension dans 1 ml de soluté PBS Le gra- resuspended in 1 ml PBS solution The gra-
nule de billes de latex a été remis en suspension no latex beads were resuspended
dans 1 ml de solution contenant 10 mg/ml de sérumal- in 1 ml of solution containing 10 mg / ml of serumal-
bumine bovine, 0,1 % de Na N 3 et 5 % (en volume) de glycérol. On a préparé le milieu poreux sous forme d'une bande de 1,5 cm sur 5 cm de matériau de membrane "h HDC" disponible auprès de Pall Corporation sous la référence P/N HHDC 4 G 5 Le matériau est un milieu hydrophile fibreux à base de copolymère d'éthylène, comme décrit dans le US-A-4 578 414 On a dilué une culture d'une nuit de souche HB 101 d'Escherichia Coli bovine bumine, 0.1% Na N 3 and 5% (by volume) of glycerol. The porous medium was prepared in the form of a 1.5 cm by 5 cm strip of membrane material "h HDC" available from Pall Corporation under the reference P / N HHDC 4 G 5 The material is a hydrophilic fibrous medium based on ethylene copolymer, as described in US-A-4,578,414 An overnight culture was diluted of HB 101 strain from Escherichia Coli
dans du PBS afin de donner une concentration cellu- in PBS to give a cell concentration
laire approximative de 106 bactéries/ml On a appli- approximate area of 106 bacteria / ml We applied
qué directement 10 ml de cette suspension bacté- that directly 10 ml of this bacterial suspension
rienne (approximativement 104 bactéries) à une zone d'échantillon de la bande h HDC Un certain nombre de bandes ont été préparées de cette manière, qui représentaient les bandes de test Des bandes témoin ont été préparées en utilisant du PBS ne contenant bot (approximately 104 bacteria) to a sample area of the HDC h band A number of bands were prepared in this manner, which represented the test bands Control bands were prepared using PBS containing no
pas de bactérie, ou contenant Micrococcus. no bacteria, or containing Micrococcus.
Après avoir ainsi chargé les bandes h HDC, on a appliqué 10 Al de la suspension de billes de latex, contenant des billes couplées à l'anticorps, à 1 cm de l'extrémité de chaque bande opposée à celle o l'échantillon avait été appliqué On a placé des After having thus loaded the HDC bands, 10 μl of the suspension of latex beads, containing beads coupled to the antibody, were applied 1 cm from the end of each strip opposite to that where the sample had been applied We have placed
tampons absorbants en contact avec les bandes immé- absorbent pads in contact with the immersion bands
diatement derrière l'extrémité à laquelle l'échan- diat behind the end at which the sample
tillon a été chargé On a appliqué 200 ml de soluté PBS en tant que solution de lavage à chaque bande au voisinage du point o la suspension des billes avait été chargée Le PBS s'est alors déplacé par effet de mèche le long des bandes en direction de la zone tillon was loaded 200 ml of PBS solution was applied as washing solution to each strip in the vicinity of the point where the suspension of the beads had been loaded The PBS then moved by wicking along the strips in the direction of the area
d'échantillon On a enregistré la présence ou l'ab- The presence or absence of
sence d'une surface colorée se développant après la sence of a colored surface developing after
migration des billes.migration of the beads.
Les bandes d'essais chargées par E Coli ont réagi Test strips loaded by E Coli reacted
avec les billes bleues de 0,55 gm revêtues de l'anti- with 0.55 gm blue beads coated with anti
corps anti-E Coli, produisant ainsi une zone d'ag- anti-E Coli body, thus producing an ag-
glutination observable de façon distincte Une sur- glutination distinctly observable An over-
face colorée en bleu, résultant de l'immobilisation des complexes comprenant les billes bleues, était visible dans la zone o l'échantillon de E Coli blue colored side, resulting from the immobilization of the complexes comprising the blue beads, was visible in the area where the sample of E Coli
avait été appliqué, ainsi qu'autour de cette zone. had been applied, as well as around this area.
Lorsque l'on a testé des bandes témoin chargées de When testing control strips loaded with
PBS ou par Micrococcus, aucune réaction d'agglutina- PBS or by Micrococcus, no agglutina-
tion n'a été observée, c'est-à-dire qu'aucune sur- tion was observed, that is to say that no sur-
face bleue ne s'est développée Pour l'essai selon blue side has only developed For the test according to
les enseignements de l'invention, une surface colo- the teachings of the invention, a colo-
rée en bleu, observable de façon distincte, s'est développée en 1 à 3 mn Pour les essais témoin, les billes avaient complètement migré au travers de la zone d'échantillon et jusqu'au tampon absorbant sans rée en bleu, distinctly observable, developed in 1 to 3 min. For the control tests, the beads had completely migrated through the sample zone and up to the absorbent pad without
formation d'un complexe en 1 à 3 mn. formation of a complex in 1 to 3 min.
De nombreux essais selon les enseignements de l'invention ont été effectués pour détecter E Coli, avec des essais témoin et d'autres bactéries, sans donner aucun faux positif ni faux négatif Tous les Numerous tests according to the teachings of the invention were carried out to detect E Coli, with control tests and other bacteria, without giving any false positive or false negative.
résultats positifs ou négatifs ont pu être claire- positive or negative results could be clear-
ment distingués comme étant des positifs ou des négatifs La procédure de test illustre bien que ce procédé est rapide et simple, et qu'il est capable Mentioned as positive or negative The test procedure clearly illustrates that this process is quick and simple, and that it is capable
de détecter de façon fiable des quantités relative- reliably detect relative quantities
ment faibles de bactéries (environ 104 E Coli). slightly weak bacteria (about 104 E Coli).
Claims (26)
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB9200046A GB2262986A (en) | 1992-01-03 | 1992-01-03 | Particle agglutination assay |
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| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FR2685956A1 true FR2685956A1 (en) | 1993-07-09 |
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ID=10708063
Family Applications (1)
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| ER | Errata listed in the french official journal (bopi) |
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