FR2459801A1 - Nouveaux derives de l'acide 6-amino-spiro (penam-2,4'-piperidine)-3-carboxylique, procede de preparation et compositions pharmaceutiques - Google Patents

Abstract

1.SUBSTANCES APPARENTEES AUX PENICILLINES. 2.NOUVEAUX DERIVES DE L'ACIDE 6-AMINO-SPIRO PENAM-2,4-PIPERIDINE-3-CARBOXYLIQUE DE FORMULE: (CF DESSIN DANS BOPI) DANS LAQUELLE R REPRESENTE UN GROUPE METHYLE, PHENYLE OU BENZYLE, Z REPRESENTE DE L'HYDROGENE ET Z REPRESENTE UN RADICAL CHOISI PARMI LES RADICAUX 2-PHENYL-ACETYLE, 2-AMINO-2-PHENYLACETYLE, 5-METHYL-3-PHENYL-4-ISOXAZOLECARBONYLE ET 2,6-DIMETNOXYBENZOYLE, OU BIEN Z ET Z REPRESENTENT ENSEMBLE UN RADICAL BIVALENT Z, DE PREFERENCE LE RADICAL (HEXAHYDRO-1H-AZEPIN-1-YL) METHYLENE, AINSI QUE LEURS SELS NON TOXIQUES PHARMACEUTIQUEMENT ACCEPTABLES. 3.MEDICAMENTS POUR LE TRAITEMENT DES MALADIES INFECTIEUSES PROVOQUEES PAR LES BACTERIES; ADDITIFS POUR ALIMENTS DESTINES AUX ANIMAUX.

Description

La présente invention a pour objet de nouveaux dérivés de l'acide 6-

amino-spiro/_énam-2,4'-pipéridine/-3-carboxylioue répondant à la formule générale:

Z S CH 2-CH 2\

/ N-Cg -iCH1 4'j,, i'N-R I)

2 7-- - -N CH CH2-CH2

O COOH

dans laquelle R représente un groupe méthyle, phényle ou benzyle, Z1 représente de l'hydrogène et Z2 représente un radical choisi parmi les radicaux connus en chimie des pénicillines, de prféérence parmi les

radicaux 2-phénylacétyle, 2-amino-2-p-hénylacétyle, 5-méthyl-3-phényl-4-

isoxazolecarbonyle et 2,6-diméthoxybenzoyle, ou bien Z1 et Z2 représentent ensemble un radical bivalent Z3, de préférence le radical (hexahydro-lH-azépin-l-yl)méthylène,

ainsi que leurs sels non toxiques pharmaceutiquement acceptables.

La présente invention a également pour objet les procédés de préparation

et les applications de ces nouveaux dérivés.

On rappellera que, d'une manière générale, les pénicillines constituent une famille de composés qui répondent à la formule suivante: O

X-C-NH- 3

C00H

' COOH

dans laquelle X représente une grande diversité de substituants dont les plus couramment utilisés sont cités dans ULLMANNS ENCYKLOPAEDIE der TECHNISCHEN

CHEMIE, 4e éd., volume 7,(1974),p.651-652.

La majorité des travaux effectués à ce jour en vue d'étendre ce domaine étaient axés sur la recherche de nouveaux substituants X, le noyau de base de la molécule restant inchangé. Quelques tentatives ont néanmoins été faites pour étudier l'influence de certaines variations dans la molécule sur l'activité des composés ainsi obtenus. C'est ainsi que l'on a proposé de nouveaux composés, analogues aux pénicillines, mais dans lesquels le groupe

gem-diméthyle situé en position 2 était remplacé par d'autres groupements.

On a succeivement proposé les groupements suivants: /H (brevet belge nO 738.131)

CH O

3 "i

CH2-0-C-CH3 (D.H.R. BARTON & coll., Chem.Commun.

13,(1970),p.1683-1684) Cependant on a conclu, à l'époque de ces différentes tentatives, que la nature des substituante sur l'atome de carbone en position 2 n'était pas essentielle pour l'activité antibactérienne des pénicillines ou des composés analogues (voir par exemple à ce sujet R.J. STOODLEY dans "Progress in Organic Chemistry" (8, (1973),p.106). Encore plus récemment, on a proposé les groupements suivants:

H CH3 (P.J. CLAES & coll., Eur.J.

et\ H v\ Med.Chem.-Chimica Therapeutica, ICH letI 10,(1975),o.573 à 577) CH3

La conclusion quant à l'activité antibactérienne était identique.

Or, les travaux de la demanderesse dans ce domaine ont permis de montrer qu'en substituant de manière appropriée l'atome de carbone en position 2, il est possible d'obtenir des composés qui, non seulement ont des

activités antibactériennes supérieures à celles des pénicillines correspon-

dantes, mais qui, en outre, sont particulièrement intéressants dans le traitement des infections causées par les bactéries résistantes aux pénicillines par la production de bgta-lactamases, c'est-à-dire d'enzymes

supprimant l'activité de l'antibiotique par hydrolyse de son cycle lactame.

Ce sont ces nouveaux composés, leur procédé de préparation et leurs applica-

tions qui font l'objet de la présente invention.

Dans la présente spécification, la nomenclature utilisée est celle présentée par R.J. STOODLEY, loc.cit. 102-103. En particulier on désigne par "pénam" le noyau suivant: ON

Les nouveaux composés de la présente invention sont des acides 6-amino-

spiro/énam-2,4'-pipéridine/-3-carboxyliques dans lesquels le groupe amino en

position 6 est substitué par un substituant connu en chimie des pénicillines.

Ce sont des composés analogues aux pénicillines dans lesquels l'atome de carbone en position 2 du noyau pénam est substitué par une chaîne bivalente

3-aza-pentaméthylène, qui forme avec cet atome de carbone un hétérocycle.

Ces nouveaux composés comportent donc un hétérocycle spirannique

constitué par le noyau pénam et par l'htérocycle monocycliaue saturé possé-

dant un atome d'azote.

Parmi les substituants connus en chimie des pénicillines dont il est fait mention ci-dessus, on peut citer en particulier ceux présentés dans

ULLMANNS ENCYKLOPAEDIE der TECHNISCHEN CHEMIE, loc.cit.

A titre d'exemple, lorsque Z1 est H et que le substituant Z2 est le radical 2-phénylacétyle, les composés de l'invention sont analogues à la benzylpénicilline (pénicilline G); lorsque Z1 est H et que Z2 est le radical 2-amino-2-phénylacétyle, les composés de l'invention sont analogues à

l'ampicilline; lorsque Z1 est Het que Z2 est le radical 5-m6thyl-3-phényl4-

isoxazolecarbonyle, les composés de l'invention sont analogues à l'oxacilline et lorsque Z1 est H et que le radical Z2 est le radical 2,6diméthoxybenzoyle,

les composes de l'invention sont analogues à la méthicilline.

Lorsque Z1 et Z2 représentent ensemble le radical (hexahydro-lH-azéoin-

l-yl)methylène, les composés de l'invention sont analogues aux pénicillines qui font l'objet du brevet britannique n0 1.293.590. On a dans ce cas des chaînes latérales reliées au noyau pénam par un groupe NC=N- et l'on H qualifie ces composés d"'amidino-ponicillines". Ce type de chaîne latérale a été introduit récemment dans la chimie des pénicillines et il conduit à des composés dont l'activité au niveau de la paroi bactérienne procède d'un mécanisme différent de celui des pénicillines comportant les chaînes latérales traditionnelles, telles que définies précédemment. La différence de leur mode d'action sur les bactéries confère aux amidinopénicillines un

spectre anti-bactérien original.

En ce qui concerne la stéréochimie, l'existence de trois centres asymétriques en C3, C5 et C6 devrait conduire à la formation de 8 isomères pouvant se grouper en 4 diastéréoisomères racémiques. La cinétique des réactions conduit en fait à la formation seulement des isomères alpha,bgta et gamma. De préférence, on isole de ce mélange le racémique alpha, dont l'un des antipodes optiques possède la configuration correspondant à celle de la pénicilline; c'est un mélange d'isomères (dl), c'est-à-dire de

configurations (3S, 5R, 6R) + (3R, 5S, 6S).

Les composés de formule (I) conformes à l'invention, dans lesquels Z1 représente un atome d'hydrogène et Z2 un radical choisi parmi les radicaux

connus en chimie des pénicillines, de préférence parmi les radicaux 2-

phénylacétyle, 2-amino-2-phénylacétyle, 5-méthyl-3-phényl-4-isoxazole-

carbonyle et 2,6-diméthoxybenzoyle, sont obtenus en faisant réagir un ester,

de préférence l'ester benzylique, d'un acide 6-amino-spiro/pénam-2,4'-

pipéridine/-3-carboxyliaue de formule

/--S,,, " CH2-CH^N.

HN-CH CH C2 i N-R (II)

21 J J CH2-CH (J)

O COOH

dans laquelle R a la signification donnée ci-dessus, avec un composé de formule Z2Y (III) dans laquelle Z2 a la signification donnée ci-dessus et Y représente un atome d'halogène ou un groupe hydroxyle, et en transformant

l'ester ainsi obtenu en l'acide correspondant par hydrogénolyse.

Les composés de formule (II), utilisés comme produits de départ pour la préparation des composés de formule (I) conformes à l'invention, sont

utilisés de préférence sous la forme de leurs sels avec de l'acide -otoluène-

sulfonique.

Les composés de formule (III), servant d'agents d'acylation pour le groupe amino en position 6, peuvent être des halogenures d'acide (Y = halogEne) ou un acide libre (Y = OH); dans cette dernière éventualité l'opération d'acylation se fait en présence d'un agent de couplage, par exemple un carbodiimide tel que le diisopropylcarbodiimide. En outre, lorsque les composés de formule (III) contiennent un groupe amino, ce dernier peut être

protégé de manière connue en soi, par exemple par un groupement benzyloxy-

carbonyle, lequel est éliminé ensuite pendant l'opération d'hydrogénolyse.

Les acides 6-amino-spirofrénam-2,4'-pipéridine7-3-carboxyliques de formule (II) et en particulier leurs esters benzyliques utilisés comme produits de départ, ainsi que leur procédé de préparation font l'objet de la demande de brevet déposée conjointement par la demanderesse et à laquelle

on renvoie le lecteur pour une description plus détaillée.

Les composés de formule (II) sont préparés de la manière suivante: (1) on fait réagir du 2-formyl-2-phtalimido-acétate de tert.butyle de formule (IV) avec un acide alpha-amino-4-mercapto-l-R-4-p-oipéridineacétique

de formule (V) pour obtenir l'isomère gamma d'un 4-carboxy-alpha-phtalimi-

do-8-R-l-thia-3,8-diazaspiro/.57/décane-2-acétate de tert.butyle de formule (VI), selon l'équation: ou

KC HS CH- CH2

/C 5>1 \/ 2 \2

N + H2 CH/\>

/C)* CHF-CH2

I O-tert.ChH9 COOH

(IV) (V)

o T,,t f n -' 'o \ c

--' O\N--CH

0 I H COOH

tert C4H9 (VI) (2) on épimérise l'isomère gamma de formule (VI) en isomère alpha de formule (VII) par chauffage avec de la pyridine ou de la diéthylamine, selon l'équation: pyridine isomère gammna - - isomère alpha diéthylamine

(VI) (VII)

(3) on prépare le 4-benzyloxycarbonyl-alpha-phtalimido-8-R-l-thia-3,8-

diazaspiro/4.5/décane-2-acétate de tert.butyle de formule (VIII) par réaction de l'isomère alpha de formule (VII) avec du diazoph6nylméthane ou un halogénure de benzyle, selon l'équation: (vii) + H=N C\/i2 0 / \

N- H * O-CH

aJ j Cf0 \NI-"\"_ < C0 O tert.C4H9 (VII) + \ -CH2Hal (VIII) (4) on effectue ensuite la déphtalimidation du composé de formule (VIII) par

hydrazinolyse, ce qui donne 1'alpha-amino-4-benzyloxycarbonyl-8-R-l-thia-

3,8-diazaspiro/h.5/décane-2-acétate de tert.butyle de formule (IX), selon l'équation:

NH2_NH HN /

22 2 C \ c 0(IX) (5) on dVsatkyle sélectivement le groupement ester tert. butylique du composé (IX) par traitement de celui-ci en solution dans du nitrométhane avec de l'acide chlorhydrique gazeux, ce qui donne le dichlorhydrate de l'acide alpha-amino-4-ben zyloxye arbonyl-8-R-l-thia-3, 8-diazaspiro/. 5/dScane-2- acétique de formule (X) selon l'équation: HC1 E2Nw\ 2 S. 2HC1

C0 N-_ CH-H

CH H C=O 2 < (X) (6) on bdsalkyle slectivement le groupement alphaamester tert.butyliqueno du composé (X) au moyen de chlorure (deIX) par trityle, obtenant ainsde celui-'cide 4-benzyloxycarbonyl-8-R-alpométhane avec de l'acide chlorhydrique gazeux, ce qui donne le dichlorhydrate de l'acide tritylalpha-amino--benzyloxycarbony-8-R--thia-3,8-diazaspiro/I. 5d/décane-2-actique de formule (XI), acétique de formule (X) selon l'équation: (C6H5) 3-C-NH tC^ (Ix) (C6H)3- CH C 2HCl

COOH N 2

\---C-

H C=0

I

(XI -

CH - (X) (7) on cyblise ensuitoque le groupement aompha-aminoos de formule (XI), de prfmoyren de chloraud, parre

de trityle, obtenant ainsi l'acide (-benzyl abrg CI), pour obtenir le '-R6-

tritylamino--thia-3,8-diazaspiro/nam-2,4'-pipridécane-3-carboxylatactique de formbenzyle de(XI), formule (XII), selon l'équation:

(C6H5)3=C-NH

(X) + (C6H5)3=C-Cl CH I

COOH \ IN.C

N-C

H C=0

(XI) (7) on cyclise ensuite le composé de formule (XI), de préférence à chaud,-par

réaction avec un carbodiinmide (en abrégé CI), -pour obtenir le 1'-B-6-

tritylamino-spiro/pnm2,h'ppriie--carboxylate de benzyle de formule (XII), selon l'équation:

CI (C6H5)3-C-NH-CH-- CH'-\ xCH2-CH2>N-

c.- N XH_ N-R

(XI) CC NC\/ H 2-CH2

C=O !

CH22-\

(XII)

(8) on traite finalement le composé de formule (XII) avec de l'acide ptoluéne-

sulfonique (p-TS) pour obtenir le 6-amino-l'-R-spirof/énam-2,h'-

pipéridine/-3-carboxylate de benzyle de formule (II), sous forme de di-ptoluénesulfonate, selon 1' équation:

H N-CH- CH -CH

p-TS 2 7 CH2_CH22

(XII) > C-N /P CH-CH | N-R

1/ drCH 2 2 C=0. 2p-TS

CH2 X

dans ces formules R représentant un groupe méthyle, phényle ou benzyle.

La préparation du 2-fornmyl-2-phtalimido-acétate de tert.butyle de

formule (IV) est décrite dans la littérature (J. SHEERN et al., J.Am.Chem.

Soc.76,(1954),158-160).

La préparation de l'acide alpha-amino-4-mercapto-l-R-4-pipéridine-

acétique de formule (V) Mpeut se faire conformément aux stades suivants: (a) réaction de 2-isocyanoacétate d'éthyle avec une l-R-4-pipéridone en présence d'une suspension d'hydrure de sodium dans du tétrahydrofuranne pour obtenir l'alpha-formamido-l-R-i-oéridine- ' 4' e-acétate d'éthyle selon l'équation: 0 j'0 O =N-CH -C + R 2 -- = C-NH C-o-C H

0-C2H5 H C

Il - Q R (b) chauffage à reflux de 1' aloha-formamido-l-R-Dipéridine-A 4'0 -acétate d'éthyle avec du pentasulfure de phosphore en solution dans l'acétonitrile, pour obtenir le 8-R-l-thia-3,8-diazasniro/l. 57déc-2-ène4-carboxylate d'éthyle selon l'équation:

0 0 S

C-O-C H + 'yo

C 'N

A C2H5

R (c) décyclisation du 8-R-l-thia-3,8-diazasoiro/]. 5/d6c-2-ène-4carboxylate d'éthyle par chauffage avec de l'acide chlorhydrique aqueux, ce qui donne l'acide alpha-amino-4-mercapto-l-R-4-pipéridineacétique de formule (V) désiré, sous forme de dichlorhydrate, suivant l'équation: XoR NC \lH | -R. 2H01 HOHS 2 ' H2o Xc_. COH C--O O\H t (V) C2H5

dans toutes ces formules R étant un groupe méthyle, phényle ou benzyle.

On peut séparer, le cas échéant, les deux formes énantiomères des composés de formule (V), ce qui permet d'obtenir directement la

diastéréoisomère (VI) optiquement pur.

Dans le cadre de la présente invention, on entend par "sels non toxiques pharmaceutiquement acceptables" notamment les sels de métaux, comme le sodium, le potassium, le calcium et l'aluminium, les sels d'ammonium et les sels d'amines comme les trialkylamines, notamment la triéthylamine, la procaine,

la dibenzylamine, la N-benzyl-bêta-phéngthylamine, la l-6phgnamine, la N, N'-

dibenzyl-éthylènediamine, la déhydroabiétylamine, la N,N'-bisdéhydroabiétyl-

éthylènediamine, les N-(alkyle inférieur)pipéridines, comme la Néthylpipéri-

dine, et de manière générale les sels déjà connus pour les pénicillines G et

V (voir ULLMANNS ENCYKLOPAEDIE, loc.cit. p.653).

Ces sels peuvent etre préparés à partir des acides correspondants Dar

des méthodes connues en elles-memes.

Dans le cas particulier o Z2 représente le radical 2-amino-2-phenyl-

acétyle, les produits de l'invention peuvent etre convertis en leurs sels

d'addition d'acides, par exemple avec des acides non toxiques pharmaceutique-

ment acceptables comme l'acide acétique, l'acide citrique, l'acide succinique, l'acide ascorbique,l'acide chlorhydrique, l'acide bromhydrique, l'acide

sulfurique ou l'acide phosphorique.

Les composés de formule (I) dans lesquels Z1 et Z2 représentent ensemble un radical bivalent Z3, de préférence le radical (hexahydro-lH-az6Din-lyl)

méthylène, sont oréparés en faisant réagir un acide 6-anino-spiro/rénam-2, 4'-

pipéridine/-3-carboxylique de formule (II) ou un de ses esters avec un dérivé

activé d'un composé de formule Z3=0, de préférence un dérive activé de l'hexa-

hydro-lH-azépine-l-carboxaldéhyde. Le dérivé activé du composé Z3=0 est par exemple et préférentiellement le chlorure d'amide correspondant obtenu par l'action du chlorure d'oxalyle, ou encore le complexe obtenu par l'action du sulfate de dim6thyle. De préférence, on utilise les composés suivants, oui sont des dérivés activés de l 'hexahydro-lHazépine-l-carboxaldehyde, respectivement les composés de formules !

o. 15Cl(chlorure de l-(chlorom/thylène)-

D C hexahydro-lH-azépinium)

H I

- 0CH3S04CH3 G (méthylsulfate de 1-

O ICH3 4 3 (méthoxyméthylène)-hexahydro-

I =CM. azépinium) La présente invention a également pour objet l'utilisation des composés de formule (I), ainsi que de leurs sels non toxiques pharmaceutiquement acceptables, en tant qu'agents antibactériens, en tant que supléments diététiques pour la nourriture des animaux et comme agents thérapeutiques pour les animaux, de même que pour l'homme dans le traitement des maladies

infectieuses provoquées par les bactéries Gram-positives ou Gramnégatives.

Les composés de la présente invention possèdent en effet un spectre

très vaste d'activité antibactérienne, à la fois contre les bactéries Gram-

positives et Gram-negatives, mais ils sont tout particulièrement efficaces

pour combattre les souches de bactéries résistantes productrices de bêta-

lactamases.

Les exemples qui suivent illustrent la présente invention.

Exemple I. Proéparation des acides 6-(2-nhenylacetamido)-spiro/noénam-2, 4'-

pipgridine7-3-carboxyliques.

I.1. Préparation de l'acide 1 '-méthyl-6-(2-phénylac6tamido)-spiro/n6nam2,4 '-

pipgridine7-3-carboxylique. a) 1 '-Mthyl-6- ( 2-phénylacétamido)-spiro/Onam-2,4'-pipfiridine/-3-carboxylate

de benzyle.

Le di-p-toluénesulfonate de 6-amino-1'-méthyl-spiro/nénam-2,4'-

pipéridine/-3-carboxylate de benzyle (8,5 g = 0,012 mole) (préparé selon la méthode décrite à l'exemple 1.8.1 de la demande de brevet déposée conjointement par la demanderesse) est converti en la base libre par dissolution dans 200 ml de dichlorométhane et addition de 2,44 g (0,024 mole) de triéthylamine, on refroidit la solution à -10 C et on la traite simultanément avec une solution de 1,86 g (0,012 mole) de chlorure de phénylacétyle dans 40 ml de dichlorométhane et avec une solution de 1,24 g (0,012 mole) de triéthylamine dans 40 ml de dichlorométhane; la

durée de l'addition est d'environ 1 heure.

On continue à agiter pendant 2 heures en laissant la température revenir à 0oC, on lave la solution successivement avec de l'eau, une solution saturée d'hydrogénocarbonate de sodium et de nouveau avec de

l'eau. Après évaporation à sec, on obtient 4,4 g de l'-méthyl-6-(2-

phénylacétamido)-spiro/penam-2,4 '-piuéridine/-3-carboxylate de benzyle.

Rendement: 76,2%. P.F.: 124-5 C.

-l -1 Spectre infrarouge (KBr): 3318 cm (NH); 1800 cm (bêta-lactame); 1740 cm1 (ester); 1670 cm-1 (amide); 690, 740 cm-1 (phényle monosubtitué) Spectre RMN (CDC1 3-TMS): H3: singulet à 4,52 ppm H5: doublet à 5,47 ppm H6: doublet à 5,65 nppm H5 et H6 sont couplés, J = 4,1 Hz Spectre de masse: M* m/e = 479

b) Acide l'-méthyl-6-(2-phénylacétamido)-spiro/pénam-2,4'-pipéridine/-3-

carboxylique. Sous une pression d'hydrogène de 3,2 kg/cm en presence de 4, 4 g de charbon palladié à 10%, on hydrogénolyse dans un appareil de Parr pendant

1 heure une solution de 4,4 g (0,091 mole) de l'-méthyl-6-(2phénylacétami-

do)-spiro/énamr-2,4'-pipéridine/-3-carboxylate de benzyle (Oréparé en I.l. a)) dans 800 ml d'éthanol. Puis on filtre et on laisse digérer le

précipité dans 1,5 litre d'un mélange méthanol-eau 9/1 pendant 1 heure.

L'évaporation à sec du filtrat fournit 1,6 g de l'acide l'-méthyl-6-(2-

phénylacétamido)-spiro/pénam-2,4 '-pipéridine/-3-carboxylique.

Rendement: 44,8%. P.F.: 189-190 C (décomposition).

Spectre infrarouge (KBr): 1770 cm1 (beta-lactame).

Spectre de masse: M - 44 (C02): m/e = 345.

il Analyse pour C19H23N304S (P.M. 389,483): calculé (%): C 58,59 H 5,95 N 10,78 S 8,23 trouva (%): 56,7 6,1 10,20 7,20

I.2. Preparation de l' acide l'-benzyl-6-(2-phenylacetamido)-spiro/penam2,4'-

nipéridine7-3-carboxylioue. a) l'-Benzyl-6-(2-nhénylacetamido)spiro/pénam-2,4 '-i-oo6ridine/-3-carboxylate

de benzyle.

Le di-p-toluènesulfonate de 6-amino-1 '-benzyl-spiro_/penam-2,4'-

pipéridine/-3-carboxylate de benzyle (7,82 g = 0,01 mole) (oréparé selon la méthode décrite à l'exemple 1.8.2 de la demande de brevet déposée conjointement par la demanderesse) est converti en la base libre par dissolution dans 120 ml de dichlorométhane et addition de 2,023 g (0,02 mole) de triéthylamine, on refroidit la solution à -10 C et on la traite lentement et simultanément avec une solution de 1,55 g (0,01 mole) de chlorure de phénylac9tyle dans 40 ml de dichlorométhane et avec une

solution de 1,01 g (0,01 mole) de triéthylamine dans 40 ml de dichloro-

méthane. On continue à agiter pendant 2 heures en laissant la température revenir à 0 C, on lave la solution successivement avec de l'eau, une solution saturée d'hydrogénocarbonate de sodium et de nouveau avec de l'eau. Après évaporation à sec et cristallisation du r6sidu dans le

cyclohexane, on obtient le 1 '-benzyl-6-(2-phénylacetamido)-spiro/_nam-

2,4'-piperidine/-3-carboxylate de benzyle, que l'on soumet tel quel au

stade I.2.b). Rendement: 71%. P.F.: 130-1 C.

Spectre infrarouge (KBr): 1792 cm- (beta-lactame); 1750 cm-1 (ester); 701740 cm-1 (phényle monosubstitué) Spectre de masse: M+ m/e = 555 M - 33 (SH): m/e = 522 M- 91 (C7H7): m/e = 464

(+ -CH2- O

H COOCH2-:m/e = 381 H Analyse pour C32H33N304S (P.M. 555,706) calculé (%) : C 69,16 H 5,99 N 7,56 trouvé (%): 71,72 5,87 8,01

b) Acide 1'-benzyl-6-(2-phénylacétamido)-spiro/p6nam-2,4 '-oipéridine/-3-

carboxylique.

Sous une pression d'hydrogène de 3,2 kg/cm en presence deh g de charbon palladié à 10%, on hydrogénolyse dans un appareil de Parr pendant

i 1/2 heure une solution du l'-benzyl-6-(2-phénylac6tamido)-spiro/o6nam-

2,4'-pipéridine/-3-carboxylate de benzyle préparé en I.2.a) dans 800 ml d'éthanol. Puis on filtre, on évapore à sec sous vide le filtrat et on triture le résidu dans de l'alcool isopropylique. On obtient ainsi l'acide l'-benzyl-6- ( 2-phénylacetamido)-spiro5enam-2,4' -pipéridine7-3carboxylique

avec un rendement de 71%.

P.F.: 170-1 C (décomposition) Spectre RMN (DMSO-TMS): H3: singulet à 4,2 ppm )N-CH2: singulet à 3,87 nom O-CH2CONH-: singulet à 5,81 popm Spectre de masse: pas de M M - 18 (H20): m/e = 447 M- 44 (C02): m/e = 421 Analyse pour C25H27N304S (P.M. 465,581) calculé (%): C 64,49 H 5,84 N 9,02 trouvé (%): 62,19 6,03 8,57

I.3. Préparation de 1' aide 1 '-ohényl-6-(2-ohénylacétamido)-spiro/oénam2,4 '-

pipéridine/-3-carboxylique.

a) 1 '-Phényl-6-(2-phénylacétamido)-spirobénam-2,4 '-pipridine7-3carboxylate

de benzyle.

A une suspension de 1,53 g (0,002 mole) de di-p-toluenesulfonate de 6amino-1'-phényl-spiroi/enam-2,4' -pip6ridine/-3-carboxylate de benzyle (préparé selon la méthode décrite à l'exemple 1.8.3 de la demande déposée conjointement par la demanderesse) dans 100 ml de dichlorométhane anhydre, on ajoute en une fois 404 mg (o,oo4 mole) de triéthylamine dans 10 ml de dichlorométhane. On refroidit la solution entre O et -5 C et on ajoute, goutte à goutte,

simultanément une solution de 340 mg (0,022 mole) de chlorure de phényl-

acétyle dans 30 ml de dichlorométhane et une solution de 220 mg (0,022 mole) de triéthylamine dans 30 ml de dichlorométhane. La durée de l'addition est d'environ une heure. On continue à agiter pendant 3 heures à 15 C. Puis, on lave la solution successivement avec de l'eau, avec une solution saturée

d'hydrog6nocarbonate de sodium et de nouveau avec de l'eau.

Après évaporation à sec et recristallisation du résidu dans un mélange

acétate d'éthyle-hexane (1:3), on obtient 950 mg de 1'-phényl-6-(2-phényl-

acétamido)-spiro/_énam-2,4 '-ipéridine/-3-carboxylate de benzyle.

Rendement: 88%. ?.F.: 120-121 C.

Spectre infrarouge (KBr): 3300 cm 1 (NH); 1754, 1728, 1635 cm-1 (CO). Spectre RMN (CDC!3-TMS): 3 phényles multiplet à 7,55 à 6,65 pm H6: doublet à 5,78 ppm H5: doublet à 5,45 ppm -COOCH2 -j: singulet à 5,18 ppm H3: singulet à 4,57 ppm Q -CH2CONH-: singulet à 3,64 ppm Analyse pour C31H31N304S (P.M. 541,65) calculé (%): C 68,74 H 5,77 N 7,76 trouvé (%): 68,80 5,59 7,50

b) Acide 1 '-phényl-6-(2-phénylacétamido)-spiro/éenam-2,4'-pipéridine/-3-

carboxylique.

On hydrogénolyse une solution de 470 mg (0,000869 mole) de l'-ohényl-6-

(2-phénylacétamido)-spiro/pénam-2,4 '-pipéridine/-3-carboxylate de benzyle préparé en 1.3. a), dans 200 ml d'éthanol absolu, dans un appareil de Parr pendant 2 heures, en présence de 500 mg de charbon palladié à 10%, à la

température ambiante et sous une pression d'hydrogène de 3,5 kg/cm2.

Puis on filtre, on évapore à sec le filtrat et on reprend le résidu

par de l'éther. Le précipité est filtré et lavé à l'éther.

On obtient ainsi 310 mg d'acide l'-phényl-6-(2-phénylacétamido)-spiro-

/pénam-2,4'-pipéridine/-3-carboxylique. Rendement: 79%. P.F.: 153-154 C (déc.) Spectre infrarouge (KBr): 1770 cm-1 (CO beta-lactame); 1645 cm-1 (CO amide) Spectre RMN (DMSO-TMS): NH: multiplet à 8,95 à 8,70 ppm 2 phényles: multiplet à 7,5 à 6,6 ppm H5 et H6: multiplet à 5,6 à 5,3 ppm H3: singulet à 4,46 ppm C -CH2CONH-: singulet à 3,57 ppm Analyse pour C24H25N304S (P.M. 451,53) calculé (%): C 63,84 H 5,58 N 9,31 trouvé (%): 61,60 5,36 8,52

Exemple II. Préparation des acides 6-(2,6-dimé thoxybenzamido)-sDiro/énam-

2,4 '-pipéridine7-3-carboxyliques.

II.1. Préparation de l'acide 6-(2,6-diméthoxybenzamido)-l'-méthyl-spiro-

/pénam-2,4 '-pipéridine/-3-carboxylique.

a) 6-(2,6-Diméthoxybenzamido)-l '-méthyl-spiro/nénam-2,4 '-piéridine_/-3-

*carboxylate de benzyle.

Le di-p-toluènesulfonate de 6-amino-1'-méthyl-spiro'/énam-2,4'-

pipéridine/-3-carboxylate de benzyle (4,94 g = 0,007 mole) (préparé comme indiqué à l'exemple I.l.a)) est converti en la base libre par dissolution dans 80 ml de dichlorométhane et addition de 1,42 g (0,014 mole) de triéthylamine, on refroidit à -10 C et on la traite goutte à goutte et simultanément avec une solution de 1,40 g (0,007 mole) de chlorure de 2,6diméthoxybenzoyle dans 20 ml de dichlorométhane et avec une solution de 0, 71 g (0,007 mole) de triéthylamine dans 20 ml de dichlorométhane; la

durée de l'addition est d'environ 1 heure.

On continue à agiter pendant 2 heures en laissant la température revenir à 0 C, on lave la solution successivement avec de l'eau, une solution d'hydrogénocarbonate de sodium et de nouveau avec de l'eau. Après évaporation à sec et cristallisation du résidu dans l'acétate d'éthyle, on

obtient 2,5 g de 6-(2,6-diméthoxybenzamido)-1'-méthyl-spiroFerénam-2,46'-

pipéridine/-3-carboxylate de benzyle. Rendement: 68%. P.F.:97 C (décomno-

sition).

Spectre infrarouge (KBr): 1792 cm -1 (beta-lactame) Spectre RMN (CDC13TMS) H: H3 singulet à 4,61 ppm H5: doublet à 5,25 ppm H6:2 doublets à 5, 96 ppm NH: doublet à 6,60 ppm H etH H5 et H6 sont couplés, J = 4,1 Hz H aminé et H6 sont couplés, J = 8 Hz M+ Spectre de masse: M m/e = 525 Analyse pour C27H31N306S (P.M. 525,635) calculé (%): C 61,70 H 5,94 N 7, 99 trouvé (%): 60,85 *6,29 7,38

b) Acide 6-(2,6-diméthoxybenzamido)-l'-méthyl-spiro/pénam-2,4 'ipéridine/-

3-carboxylique. Sous une pression d'hydrogène de 3,2 kg/cm en présence de 1,5 g de

2459801

charbon palladié à 10%, on hydrogénolyse dans un appareil de Parr pendant

i heure une solution de 2 g (0,0038 mole) de 6-(2,6-diméthoxybenzamido)1'-

m6thyl-spiro/_6nam-2,4-pipéridine/-3-carboxylate de benzyle (préparé en II.l.a)) dans 700 ml d'éthanol. Puis on filtre, on évapore le filtrat à sec et rince le r6sidu avec un peu d'éthanol. On obtient ainsi 1,2 g de

l'acide 6-(2,6-dimethoxybenzamido)-1 '-méthyl-spiro/_énam-2,4 'popéridine/- 3-carboxylique. Rendement: 60,4%. P.F.: 193-4 C (décomposition).

Spectre infrarouge (KBr): 1779 cm-1 (bêta-lactame) Spectre RMN (DMSO-TMS) : H3: singulet à 3,96 ppm NH: doublet à 8,92 ppm H aminé et H6 sont couplés, J = 7,3 Hz Analyse pour C20H25N306S (P.M. 435,510) calcul6 (%): C 55,16 H 5,18 N 9,64 trouvé (%): 51,06 6,51 8,92

II.2. Préparation de l'acide l'-benzyl-6-(2,6-dim6thoxybenzamido)-spiro-

/pénam-2,4 '-pinperidine/-3-carboxyliaue.

On a prépar6 de la meme manière qu'en II.1 les composés suivants:

a)1 '-benzyl-6-(2,6-diméthoxybenzamido)-spiro/pénam-2,4'-péperidine/-3-

carboxylate de benzyle;

b) Acide l'-benzyl-6-(2,6-diméthoxybenzamido)-spiro/p6nam-2,4'pipéridine7-

3-carboxylique.

Exemple III. Pr9paration des acides 6-/D(-)-(2-amino-2-ohénylacetamido)7spiro-

/péenam-2,4 '-nirridine/-3-carboxylique.

III.1. Preparation de l'acide 6-/D(-)-(2-amino-2-nhénylacetamido)7-1 'méthyl-

spiro /Pnamr-2,4 '-oipridine/-3-carboxyligue.

a) 6-/D(-)-2-Benzyloxycarbonylamino-2-phénylacétamido)7-1 ' -méthylspiro/_ènam-

2,4'-pipéridine/-3-carboxylate de benzyle.

Le di-p-toluènesulfonate de 6-amino-l'-méthyl-spiroLp6nam-2,4'-

pipéridine7-3-carboxylate de benzyle (9 g = 0,0127 mole) (préparé comme indiqué à l'exemple I.l.a)) est converti en la base libre par dissolution dans 120 ml de dichlorométhane et addition de 2,57 g (0,025 mole) de triéthylamine, et on ajoute à la solution ainsi obtenue 3,71 g (0,013 mole)

de N-(benzyloxycarbonyl)-D(---4-2-phényl-glycine et 4 g de diisopropylcarbo-

diimide. Après 24 heures, on filtre et on évapore sous vide l'excès de solvant et de réactif. On fait passer le résidu de l'évaporation à travers une colonne de Kieselgel 60 Merck en éluant d'abord au chloroforme, puis à l'acétone. Ensuite, on évapore à sec la solution acétonique ainsi obtenue, on reprend le résidu par du chloroforme, on filtre la solution obtenue et on l'évapore à nouveau à sec. Après cristallisation du résidu dans de

l'acétonitrile, on obtient 0,9 g de 6-/D(-)-(2-benzyloxycarbonylamino-2-

phénylacétamido)/-1 '-méthyl-spiro/_énam-2,4 '-pipéridine7-3-carboxylate de

benzyle contamin6 par un peu de 1,3-diisopropylurée.

P.F.: 141-141,5 C.

-l -l-

Spectre infrarouge (KBr): 3325 cm- (NH); 1790 cm (beta-lactame); 695, 745 cm- (phényle monosubstitué) Spectre RMN (CDC13-TMS): >N-CH3: singulet à 2, 21 ppm

-COOCH2- -

-C00CH2-Q

: singulet à 5,08 ppm : singulet à 5,15 ppm H3 H3: singulet à 4,54 ppm H5: doublet à 5,2 ppm H6: ddublet à 5,7 pDm

b) Acide 6-/D(-)-(2-amino-2-phénylacétamido)7-1'-méthyl-spiro/pénam-2,4'-

pipéridine/-3-carboxylique.

Sous une pression d'hydrogène de 3,2 kg/cm en presence de 1,2 g de charbon palladié à 10%, on hydrogénolyse dans un appareil de Parr pendant

3 heures une solution de 1,15 g (0,0018 mole) de 6-/D(-)-(2-benzyloxy-

carbonylamino-2-phenylac6tamido)/-1'-methyl-spiro/penam-2,4 '-piperidine/-

3-carboxylate de benzyle (préparé en III.l.a)) dans 600 ml d'éthanol.

Après évaporation à sec et cristallisation du résidu dans de l'alcool

isopropylique, on obtient 0,5 g de l'acide 6-/D(-)-(2-amino-2-phényl-

acétamido)7-l'-méthyl-spiro/-oénam-2,4'-pipéridine/-3-carboxyliaque. Rendement: 67,9%. P.F.: 185 C Spectre infrarouge (KBr): 3412 Spectre RMN (DMS0-TMS): 2H2,, 2H3,, 2H5, et 2H6, H3

H5 + H6

H du groupe phényle NH (décomposition). cm-1 (NH2); 1780 cm-1 (bêtalactame); cm- (amide); 1615 cm-1 (COo-) :multiplet à 1,5 à 3,8 ppm :singulet à 3,96 ppm : multiplet à 5,1 a 5,7 ppm multiplet à 7,35 ppm :large à 9,05 ppm

III.2. Préparation de l'acide 6-/D(-) - ( 2-amino-2-ohenylacétamido)7-1 benzyl-

spiro/pénam-2 4 '-piperidine/-3-carboxylique.

a) 1'-Benzyl-6-/D(-)-(2-benzyloxycarbonylamino-2-phenylacétamido)/-spiro

ipenam-2,4 '-pipéridine/-3-carboxylate de benzyle.

Le di-o-toluènesulfonate de 6-amino-1 '-benzyl-spiro/enan-2,4 '-

pipéridine/-3-carboxylate de benzyle (9,93 g = 0,0127 mole) (préparé comme indique à l'exemple I.2,a)) est converti en la base libre par dissolution dans 200 ml de dichlorométhane et addition de 2,57 g (0,025h mole) de trifthylamine, et on ajoute à la solution ainsi obtenue 3,70 g (0,013 mole) de:l-(benzyloxycarbonyl)-D-)-2-phenylglycine et 7 g de diisopropylcarbodiimide. Après 24 heures, on filtre et on évanore sous vide le filtrat. On fait passer le rés'du à travers une colonne de

Kieselge! 60 Merck en utilisant du chloroforme conmre Aluant A7.i' de-

passages, la concentration à siccit de "'luant donne 1,2 g de l'-berzyI-

6-/D( --( (2-benzyloxrjcarbonylanino-2-pnphrnylactariido)7-spiro/enam -2, 4' -

uipéridini/-3-2arboyylate de benzyle. PF.: Spectre infrarouge (3-r) 1793 cm1 (b7ta-lactame); 1737, 1749 cm (ester);

1685 cm- (am.ide); 698, 742 cm1 (phényl mono-

substitu5 Spectre RN (CDC13-TMS): \N-CH2-: singulet à 3,41 ppm H3 singulet à 4,46 ppm -COOCH: singulet à 5,05 ppm

-COCH2 %D//

-CO OCH2-: singulet à 5,15 ppm :CH-CO- singulet à 5,43 ppm Spectre de masse: m/e = 704

-CH2-O

c : m/e = 381

H COOCH2 /

[',- \N-CH2 C: m/e = 380

COOCH2-G

idem - 33 (SH) : m/e = 347 Analyse pour C40H40NhO06S (P.M. o04,858) calculé ('): C 68,27 H 5,72 p 7,94 trouvé (%): 68,17 5,60 8,26

b) Acide 6-/D(-)-(2-amino-2-phenylacétamido)7-1 '-benzyl-spiro/pnnam-2,4'-

pipéridine/-3-carboxylique. Sous une pression d'hydrocène de 3 kg/cm en présence de 1 g de charbon palladié à 10%, on hydrogénolyse dans un appareil de Parr pendant environ

3 heures une solution de 1,2 g (0,0017 mole) de l'-benzyl-6-/D(-)-(2-

benzyloxycarbonylamino-2-phénylac6-tamido)7-spiropénam-2,4'-pipéridino/-

3-carboxylate de benzyle (préparé en III.2.a)) dans 250 mi d'éthanol.

Puis on filtre, on évapore à sec le filtrat et on obtient 0,3 g de l'acide

6-/D(-) - ( 2-amino-2-phénylacétamido)/-1'-benzyl-spiro/3pnam--2,4'pipéridinei/-

3-carboxylique. P.F.: >195 C (décomposition).

Spectre infrarouge (KBr): 3415 cm- (NH2); 1785 cm- (bêta-lactame); 1680 cm1 (amide); 1615 cm1 (COO-); 700, 750 cm1 (phényle monosubstitué) Spectre de masse de l'ester méthyliaue (après estérification avec le diazométhane): M': m/e = 494 /M + 7: m/e = 495 /M-H7': e = 493 M - 33(SH) : m/e = 461 M - 59 (COOCH3): m/e = 435 -2N- O cCH 2 N/ N -H: m/e = 361

C00OCH3

Ir CH 2-: m/e = 305 N

H COOCH3

Analyse pour C2H2.N> _0S (P.M. 480,597) calculé (4): C 62,47 H 5,87 N 11, 66 trouvé (%): 56,76 5,90 9,40

III.3. Préparation de l'acide 6-/D(-)-(2-amino-2-ohénylac6tamido)7-l'phényl-

spir o/nnam-2,4 '-pipéridine/-3-carboxyligue.

a) 6-/DH--(-2-BenzyloxycarbonylamIno-2-phénylacétamido)7-l'-nhényl-sniro-

/pénam-2,4'-gigéridine/-3-carboxylate de benzyle.

A une suspension de 1,53 g (0,002 mole) de di-p-toluénesulfonate de 6amino-1 '-phényl-spiro/penam-2,4 '-pipéridine/-3-carboxylate de benzyle (préparé comme indiqué à l'exemple I.3.a)) dans 50 ml de dichlorométhane, on ajoute à la température ambiante 0,40o' g (0,004 mole) de triéthylamine

dans 5 ml de dichlorométhane.

On refroidit la solution entre O et -5 C et on y ajoute successivement 0, 630 g (0,002 mole) de N-(benzyloxycarbonyl)-D(-)-2-phénylglycine dans

10 ml de dichlorométhane, puis une solution de 0,460 g de dicyclohexyl-

carbodiimide dans 30 ml de dichlorométhane. On agite vers 5 C pendant une heure, puis encore pendant une nuit à la température ambiante. On filtre le précipitf et on lave le filtrat successivement avec de l'eau, avec une solution saturée d'hydrogénocarbonate de sodium et puis de nouveau

avec de l'eau. On sèche et on 6vapore à sec. Le résidu, après recristal-

lisation dans un mélange acétate d'éthyle-hexane (1:3) fournit 1,36 g de

6-/D(-)-(2-benzyloxycarbonylamino-2-phénylacétamido)7-1 ' -phényl-spiro-

/pénam-2,4'-pipéridine/-3-carboxylate de benzyle. Rendement: 99%.

P.F.: 167-168 C.

Spectre infrarouge (KBr): 3320 cm-1 (NH); 1765, 1730, 1664 cm- (CO) Spectre RMN (CDC13-M.IS): 4 phényles: multiplet à 7,55 à 6,55 ppm H5, H6 et 2 -COOCH2 Q: multiplet à 5,55 à 5,00 ppm H3: singulet à 4,56 ppm Analyse pour C39H38N406S (P.M. 690,79) calculé (): C 67,80 H 5,54 N 8,11 trouvé (%): 67,36 5,93 8,23

b) Acide 6-/D(-)-(2-amino-2-phénylacétamido)7-1' -phnyl-sniro/énam-2,4'-

pipéridine/-3-carboxylique. On hydrogénolyse à la température ordinaire pendant h heures dans un appareil de Parr, sous une pression d'hydrogène de 3,5 kg/cm et en présence de 1 g de charbon palladié à 10%, une solution de 690 mg de

6-/D(- -(2-benzyloxycarbonylamino-2-phénylacétamido)7-1 '-phenyl-spiro-

/nenam-2,4'-pipéridine/-3-carboxylate de benzyle (préparé en III.3.a))

dans 200 ml d'éthanol absolu. Puis, on filtre, on lave le filtrat à l'étha-

nol et on l'évapore à sec. Le résidu est repris Dar de l'éther. Après

filtration, on isole 120 mg d'acide 6-/D(---(2-amino-2-phénylacétamido)/-

1 '-phényl-spiro/vénam-2,4 '-pipéridine/--3-carboxylique. Rendement: 26%. P.F.: 187-189 C (décomposition)

Spectre infrarouge (KBr): 1765 cm- (CO bêta-lactame), 1675 cm-1 (amide).

Analyse pour C24H26N404S (P.M. 466,55) calculé (%): C 61,78 H 5,62 N 12, 01 trouvé (%): 57,90 5,81 10,07

Propriétés pharmacologiques.

On a effectué divers essais comparatifs concernant l'activité biologique intrinsèque des composés de formule (I) vis-à-vis de diverses souches bactériennes du type Gram-positif ou Gram-négatif. Les produits de référence sont respectivement la pénicilline G, l'amnicilline et la méthicilline. On

commence par donner quelques renseignements sur l'origine et les caractéristi-

ques des souches bactériennes utilisées.

A. Souches bactériennes GRAM.

- STAPHYLOCOCCUS AUREUS 6538.

Il s'agit d'une coque Gram-positive particulièrement sensible aux

pénicillines et qui présente un mécanisme de résistance peu important.

Cette souche de staphylocoque est donc représentative d'une sensibilité

maximum de l'espèce.

- STAPHYLOCOCCUS AUREUS 52149.

Il s'agit d'une coque Gram-positive dont la sensibilité intrinsèque du récepteur est équivalente à celle de la souche précédente, mais qui produit une beta-lactamase typique de l'espèce qui la rend résistante à

toutes les pénicillines sensibles à l'hydrolyse.

B. Souches bactériennes GRAM-.

- ESCHERICHIA COLI B.

Il s'agit d'une souche classique de collection d'Escherichia Coli, qui produit très peu de bSta-lactamase (de type I) et est donc très sensible aux pénicillines. En ce qui concerne la classification des bêtalactamases, on utilise ici celle proposée par M.H. RICHMOND et R.B. SYKES dans

Advances in Microbial Physiology,9,(1973),pages 43 et 45.

- ESCHERICHIA COLI B-AMPI R.

Il s'agit d'un mutant de la souche précédente, créé par la demanderesse.

Cette souche, par contre, est hyper-productrice de la beta-lactamase de type I déjà produite par la souche-mère E. Coli B. Elle présente une résistance accrue aux pénicillines, oui est liée semble-t-il directement

à la production de la beta-lactamase.

- ESCHERICHIA COLI K 12.

Il s'agit d'une souche classique de collection, qui produit très ueu

de beta-lactamase de type I et qui est donc très sensible aux péicillines.

- ESCHERICHIA COLI K 12-44-S.

Il s'agit d'un mutant pleiotropique de l'E. Coli K 12-44 (qui est a son

tour un mutant de l'E. Coli K 12). Ce mutant n'est ras producteur de bêta-

lactamase et est très sensible aux penicillines Dar hyper-perm6abilitf.

- ESCIERICHIA COLI K 12-44-S-TEM.

Cette souche est obtenue à partir d'une souche de E. Coli K 12-44-S, dans laquelle on a transféré l'épisome TE4, responsable notamment de la

production d'une bta-lactamase du type III.

- ESCHERICHIA COLI K 12-44-S-RP o Cette souche est obtenue à partir d'une souche de E. Coli K 12-44-S dans laquelle on a transféré l'épiseme RPl responsable d'un facteur de

résistance aux pénicillines par imperméabilité de la paroi bactérienne.

C. Résultats des essais comoaratifs d'activité.

Selon la procédure décrite ci-après, on a déterminé, pour un certain nombre de composés de formule (I), la concentration minimum inhibitrice

(en abrégé MIC) de la croissance des bactéries.

Les produits à tester sont introduits, en concentrations croissantes, dans un milieu de culture gélosé en boîtes de Petri. Un inoculateur multiple est utilisé pour déposer, à la surface du milieu, simultanément des gouttes (en tout 10 microlitres) d'inoculum (suspension à environ 105 bactéries par ml). Après incubation à 37 C pendant 24 heures, la croissance des bactéries est observée. Par définition, la MIC est exprimée par la concentration minimum (exprimée en micromoles par millilitre) inhibant la multiplication des bactéries. Toutefois, dans les résultats qui suivent, la MIC est posée égale à 1 pour les produits de référence, et les chiffres d'activité indiqués pour les composés de formule (I) testés sont donc des valeurs relatives. Cette présentation des résultats est la plus correcte et la plus reproductible, car pour une même souche bactérienne, on peut observer des valeurs de MIC différentes selon qu'elles ont été mesurées à des moments différents. Ceci est lié aux variations "saisonnières" des

souches et de leur milieu nutritif.

Les composés qui ont été testés sont les suivants: Composé A: Composé B: Comoosé C: Composé D: Composé E: Composé F: Composé G:

acide l -méthyrl-6-2-phénylae'étamido)-spiro/réenam-2,4'-'ipéridine/-

3-carboxyliaue,

acide 1 '-benzyl-6-(2-phénylacéta mido)-spiro/r/énam-2,4'-nipéridine/-

3-carboxylique,

acide L-phényl-6-(2-Dhénylacétamidoj-soiro/rénam-2,4' --ipéridine/-

3-carboxylique,

acide 6-(2,6-diméthoxybenzamido)-l'-méthyl-spiro/Dénam-2,4' -

pipéridine/-3-carboxylique,

acide 6-/D(-)-(2-amino-2-phénylacétamido)/-1'-méthyl-spiro/pénam-

2,4 '-pipéridine/-3-carboxylique,

acide 6-/D(---(2-amino-2-phénylaceétamido)/-1'-benzyl-spiro/pénam-

2,4 '-pipéridine/-3-carboxylique.

acide 6-/D(-)-(2-amino-2-phénylacétamido)7/-1'-phényl-spiro/_énam-

2,4'-pipéridine/-3-carboxyliaue. a) Essais comparatifs avec la pénicilline G. Souche bactérienne

S.AUREUS 6538

S.AUREUS 52149

E.COLI B-AMPI R

E.COLI K 12-44-S-TEM

E.COLI K 12-44-S-RP1

Pénicilline G Composé A

1 0,5

b) Essais comparatifs avec la methicilline.

Souche bactérienne

S.AUREUS 6538

S.AUREUS 52149

E.COLI K 12-44-S-TEM

Méthicilline Comnosé D

-1 0,1

1 0,1

1 0,5

c) Essais comparatifs avec l'ampicilline.

Souche bactérienne

S.AUREUS 6538

S.AUREUS 52149

E.COLI B-AMPI R

E.COLI K 12-44-S-TEM

E.COLI K 12-44-S-RP*

Ampicilline Composé E 0,5 0,5 0,25 Composé F Composé G

1 1

1 2

- 0,3

0,5 0,12

0,25 0,25

I1 découle de ces résultats que les composés de formule (I) conformes à l'invention ont des activités supérieures à celles des nénicillines Composé B 0,3 0,5 Composé C 0,2 0,5 0,3 0,3 0,5

traditionnelles correspondantes, aussi bien envers les bactéries Gram-

positives qu'envers les bactéries Gram-négatives. En outre, cette

supériorité d'action est très nette envers les souches de bactéries résistan-

tes aux pénicillines (S.aureus 52149, E.coli B-AMPI R, E.coli K 12-44-STEM et E.coli K 12-44-S-RP1).

D. Activité "in vivo".

Celle-ci est démontrée par un essai classique de septicémie induite chez

la souris par DIPLOCOCCUS PNEUMONIAE. On produit une infection expérimenta-

le chez les souris, par injection intranpéritonéale d'une culture diluée

d'une souche de DIPLOCOCCUS PNEUMONIAE (53 145 de l'Institut Pasteur Paris.

Le nombre de bactéries injecté correspond à environ 100 DL50. On dissout le produit à tester dans une solution physiologique salée et on l'administre par voie souscutanée aux souris, une première fois au moment de l'infection

et une seconde fois, 5 heures plus tard.

Le tableau suivant donne les résultats obtenus avec le composé A selon l'invention et avec la pénicilline G correspondante. La dose est exprimée en micromole/kg et le rapport indique, à la dose indiquée, le nombre d'animaux survivants par rapport au nombre total d'animaux soumis à l'essai: Dose Pénicilline G Composé A

0,50 0/10 8/10

1,00 0/10 9/10

2,00 9/10 10/10

Il ressort de ce tableau, qu'à une dose de 0,50 micromole/kg du composé A, sur 10 souris infectées, 8 ont survécu, alors qu'aucune des

souris auxquelles on a administré la même dose de pénicilline G n'a survécu.

Pour obtenir un nombre similaire de survivants, il faut quadrupler la dose de pénicilline G. Dans ce test, le composé A s'avère donc environ 4 fois plus actif que la pénicilline G.

E. Posologie et utilisation.

L'administration des composés de formule (I) se fait, comme pour les

pénicillines, par voie orale ou parentérale.

D'une manière générale, la posologie est comprise entre 0,2 g et 8 g de produit par jour, ces doses étant bien entendu susceptibles d'adaptation en

fonction du malade, de la maladie à traiter et du mode d'administration.

Revend i cat i on s

1. Dérivés nouveaux de l'acide 6-amino-spiro/Dénam-2,4'-pipéridine7-3-

carboxylique répondant à la formule générale Zl1\ S CH2-CH2N

N-CH- C H N-R

Z ' Il I CH -CH.

2 C N _CH 2

1/ /

0 COOH

dans laquelle R représente un groupe méthyle, phényle ou benzyle, E1 représente de l'hydrogène et Z2 représente un radical choisi parmi les radicaux connus en chimie des pénicillines, de préférence parmi les

radicaux 2-phénylacétyle, 2-amino-2-phénylacétyle, 5-méthyl-3-phényl-

4-isoxazolecarbonyle et 2,6-diméthoxybenzoyle, ou bien Z1 et Z2 représentent ensemble un radical bivalent Z3, de préférence le radical 3, (hexahydro-lH-azépin-l-yl)méthylène,

ainsi que leurs sels non toxiques pharmaceutiquement acceptables.

2. En tant que composés nouveaux:

- acide 1'-méthyl-6- ( 2-phénylacétamido)-spiro/énam-2,4 '-pipéridine/7-3-

carboxylique,

- acide l'-benzyl-6-(2-phénylacétamido)-spirobénam-2,4' -pipéridine/-3-

carboxylique,

- acide 1 '-phényl-6-(2-phénylacétamido)-spiroFénam-2,4'-pipéridine/-3-

carboxylique,

- acide 6- (2,6-diméthoxybenzamido)-l'-méthyl-spiro/_énam-2,4'pipéridine7-

3-carboxylique,

- acide 6-/D(--(2-amino-2-phénylacétamido)/-1'-méthyl-spiro/Dénam-2,4'-

pipéridine/-3-carboxylique,

- acide 6-/D(-)-(2-amino-2-phénylacétamido)7-1'-benzyl-spiro/_énam-2,4'-

pipéridine/-3-carboxylique,

- acide 6-/D(-)-(2-amino-2-phénylacétamido_)7-1'-phényl-spiro/_énam-2,4'-

pipéridine7-3-carboxylique. 3. Procédé de préparation des composés répondant à la formule générale de la revendication 1 dans laquelle Z est un atome d'hydrogène et Z un radical choisi parmi les radicaux connus en chimie des pénicillines, caractérisé

* en ce que l'on fait réagir un ester d'un acide 6-amino-spiro5/énam-2,4'-

pipéridine7-3-carboxylique de formule

S /CH2-CH2N

H2N-CH -CH C N-R

i I H'CH -CH -

CN -CH 2 2

-, I

COOH dans laquelle R représente un groupe méthyle, phényle ou benzyle, avec un composé de formule Z2Y dans laquelle Z2 a la signification donnée ci-dessus et Y représente un atome d'halogène ou un groupe hydroxyle, et en ce que l'on transforme l'ester obtenu en l'acide correspondant par hydrog'nolyse. 4. Procédé selon la revendication 3, caractérisé en ce que l'ester de l'acide

6-amino-spiro/Denam-2,4 '-piéridine/-3-carboxylique est un ester benzylique.

5. Application des composés selon l'une quelconque des revendications 1 et 2,

comme agents antibactériens, comme suppléments diététiques pour la nourriture des animaux et comme agents thérapeutiques pour les animaux et pour l'homme dans le traitement des maladies infectieuses provoquées par

les bactéries Gram-positives et Gram-nègatives.

6. Composition pharmaceutique contenant une quantité thérapeutiquement

efficace d'un composé selon l'une quelconque des revendications 1 et 2,

en association avec un excipient pharmaceutiquement acceptable.