FI93840C - Process for the preparation of novel therapeutically useful 7,8-dihydroxy-1,2,5-oxa, thia and selenediazolo / 3,4-f / quinoxaline derivatives - Google Patents

Description

9384093840

Menetelmä uusien terapeuttisesti käyttökelpoisten 7,8-dihydroksi-l,2,5-oksa-, tia- ja seleenidiatsolo[3,4-f]-kinoksaliinijohdannaisten valmistamiseksi 5 Jakamalla erotettu hakemuksesta 893170 (patentti 91259)Process for the preparation of new therapeutically useful 7,8-dihydroxy-1,2,5-oxa-, thia- and selenidiazolo [3,4-f] quinoxaline derivatives 5 Partitioned from application 893170 (patent 91259)

Keksintö koskee uusien 7,8-dihydroksi-l,2,5-ok-sa-, tia- ja seleenidiatsolo[3,4-fJkinoksaliinijohdannaisten valmistusta, joiden kaava on 10The invention relates to the preparation of new 7,8-dihydroxy-1,2,5-oxa-, thia- and selenidiazolo [3,4-f] quinoxaline derivatives of the formula

Y-NY-N

(I) 15 jossa R2 on vety, N02 tai halogeeni ja -Y- on Se, 0 tai S. Nämä yhdisteet ovat käyttökelpoisia eksitatoristen aminohappojen hyperaktiivisuuden aiheuttamien indikaatioiden ,. hoidossa.(I) wherein R 2 is hydrogen, NO 2 or halogen and -Y- is Se, O or S. These compounds are useful in indications for excitatory amino acid hyperactivity. in trust.

·* 20 FI-patenttijulkaisusta 88 718 tunnetaan substituoi- tuja kinoksaliinidioneja. Julkaisussa ei kuitenkaan kuvata substituoituja trisyklisiä aromaattisia yhdisteitä, joissa osa aromaattisesta rakenteesta muodostuisi kinoksaliinidi-onista. Mainitut tunnetut yhdisteet eroavat siten raken- ... 25 teeltaan selvästi nyt kuvatuista kaavan I mukaisista yh- ( disteistä.· * 20 FI patent publication 88 718 discloses substituted quinoxaline diones. However, the publication does not describe substituted tricyclic aromatic compounds in which part of the aromatic structure would consist of quinoxaline dione. Said known compounds thus differ clearly in structure from the compounds of the formula I now described.

Kaavan I mukaisia yhdisteitä voidaan valmistaa siten, että a) yhdiste, jonka kaava on 30Compounds of formula I may be prepared by a) a compound of formula 30

Y— MY— M

f n Δ • N S5')xv.NHC0C00lf I II (iii) nhcocooi^ jossa Y ja R2 tarkoittavat samaa kuin edellä ja R4 on alempi alkyyli, refluksoidaan mineraalihapossa, tai 35 2 93840 b) yhdiste, jonka kaava on NHj NH2 RV^ikN^0H (VIII) jossa R2 tarkoittaa samaa kuin edellä, saatetaan reagoimaan 10 seleenidioksidin kanssa, jolloin saadaan kaavan I mukainen yhdiste, jossa Y on Se, tai c) yhdiste, jonka kaava on no2fn Δ • N S5 ') xv.NHCO000lf I II (iii) nhcocooi ^ wherein Y and R2 are as defined above and R4 is lower alkyl, refluxed in mineral acid, or 35 2 93840 b) a compound of formula NHj NH2 RV ^ ikN (OH) wherein R 2 is as defined above is reacted with selenium dioxide to give a compound of formula I wherein Y is Se, or c) a compound of formula no 2

15 N3NX\I/N^>t/0H15 N3NX \ I / N ^> t / 0H

(IX) <· · **20 jossa R2 tarkoittaa samaa kuin edellä, refluksoidaan ksy-leenissä ja syklisoidaan, minkä jälkeen saatu yhdiste, jonka kaava on oh (X) 30 jossa R2 tarkoittaa samaa kuin edellä, deoksigenoidaan di-metyylifozrmamidissa ja trietyylifosfiitissa, jolloin saadaan kaavan I mukainen yhdiste, jossa Y on O; ja haluttaessa saatu kaavan I mukainen yhdiste, jossa R2 on 35 vety, nitrataan, jolloin saadaan kaavan I mukainen yhdiste, jossa R2 on N02.(IX) wherein R 2 is as defined above is refluxed in xylene and cyclized, after which the resulting compound of formula oh (X) wherein R 2 is as defined above is deoxygenated in dimethylphosphamide and triethyl phosphite, to give a compound of formula I wherein Y is O; and optionally nitrating the resulting compound of formula I wherein R 2 is hydrogen to give a compound of formula I wherein R 2 is NO 2.

3 93840 L-glutaamihapolla, L-aspartiinihapolla ja useilla muilla niiden läheisillä aminohapoilla on yhteistä kyky aktivoida hermosoluja keskushermostossa (CNS). Biokemialliset, elektrofysiologiset ja farmakologiset kokeet ovat 5 osoittaneet tämän ja todistaneet, että happamet aminohapot toimivat välittäjinä suurelle enemmistölle ärsytyshermoso-luja nisäkkäiden CNS:ssä.3,93840 L-glutamic acid, L-aspartic acid and several other related amino acids share the ability to activate neurons in the central nervous system (CNS). Biochemical, electrophysiological and pharmacological experiments have shown this and proved that acidic amino acids act as mediators for the vast majority of irritant nerve cells in the CNS of mammals.

Vuorovaikutus glutaamihappovälitteisen neurotransmission kanssa katsotaan käyttökelpoiseksi lähtökohdaksi 10 neurologisten ja psykiatristen sairauksien hoidossa. Siten tunnetut ärsytyshermoaminohappojen antagonistit ovat osoittaneet voimakkaita antiepileptisiä ja lihaksia rentouttavia ominaisuuksia [Jones, A. et ai., Neurosci. Lett. 45, 157-161 (1984) ja Turski, L. et ai., Neurosci. Lett. 15 53, 321-326 (1985)].Interaction with glutamic acid-mediated neurotransmission is considered a useful starting point in the treatment of neurological and psychiatric disorders. Thus, known antagonists of irritant nerve amino acids have shown potent antiepileptic and muscle relaxant properties [Jones, A. et al., Neurosci. Lett. 45, 157-161 (1984) and Turski, L. et al., Neurosci. Lett. 15 53, 321-326 (1985)].

On ehdotettu, että solun ulkopuolisten hermoärsy-tys- ja neurotoksisten aminohappojen kasautuminen ja sitä seuraava hermosolujen hyperstimuloituminen saattavat se-. littää hermostollisen rappeutumisen, joka havaitaan neuro- *’ 20 logisissa sairauksissa kuten Huntingtonin tanssitaudissa, parkinsonismissa, epilepsiassa, vanhuuden tylsistymisessä ja mentaalisen ja motorisen toimintakyvyn vajavuuksissa, jotka havaitaan aivoiskemian, anoksian ja hypoglykemian jälkeen (McGeer, E.G. et ai.. Nature, 263, 517 - 519 ...25 (1976) ja Simon, R. et ai., Science, 226, 850 - 852 (1984).It has been suggested that the accumulation of extracellular nerve irritant and neurotoxic amino acids and the consequent hyperstimulation of neurons may. neurological degeneration seen in neurological diseases such as Huntington's disease, parkinsonism, epilepsy, senile dementia, and mental and motor impairment seen after cerebral ischemia, anoxia, and hypoglycemia (McGeer, EG et al., et al. 517-519-25 (1976) and Simon, R. et al., Science, 226, 850-852 (1984).

Hermoärsytysaminohapot toimivat spesifisten reseptorien kautta, jotka reseptorit sijaitsevat synapsin jälkeen tai sitä ennen. Tällaiset reseptorit jaetaan nykyään 30 sopivasti kolmeen ryhmään elektrofysiologisen ja neuroke-.· miallisen osoituksen perusteella: (1) NMDA (N-metyyli-D-aspartaatti)-reseptorit, (2) kiskvalaattireseptorit ja (3) kainaattireseptorit.Nerve-irritating amino acids act through specific receptors located after or before synapse. Such receptors are currently suitably divided into three groups based on electrophysiological and neurochemical detection: (1) NMDA (N-methyl-D-aspartate) receptors, (2) cisqualate receptors, and (3) kainate receptors.

4 93840 L-glutaamihappo ja L-asparagiinihappo luultavasti aktivoivat kaikki edellä mainitut ärsytysaminohapporeseptori-tyypit ja mahdollisesti myös muita tyyppejä.4,93840 L-glutamic acid and L-aspartic acid probably activate all of the above-mentioned types of irritant amino acid receptors and possibly other types as well.

Seurauksena ärsytysaminohappojen vuorovaikutukses-5 ta synapsin jälkeisten reseptorien kanssa on solun sisäisten cGMP-tasojen suureneminen [Foster, G.A. et ai., Life Sei.27, 215 - 221 (1980)] ja Na+-kanavien avautuminen A. etal., Proc. Natl. Acad. Sei. 78, 3250 - 3254 (1981)]. Na+-virta hermosoluihin depolarisoi hermosolumembraanit, ini-10 tioi mahdollisen toiminnan ja lopuksi johtaa välittäjäaineen vapautumiseen hermopäätteestä. Tutkittavien yhdisteiden vaikutuksia edellä mainittuihin reseptorivuorovai-kutuksen sekundaarisiin vasteisiin voidaan tutkia yksinkertaisilla in vitro -järjestelmillä.As a result of the interaction of irritating amino acids with post-synaptic receptors, there is an increase in intracellular cGMP levels [Foster, G.A. et al., Life Sci. 27, 215-221 (1980)] and the opening of Na + channels in A. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 78, 3250-3254 (1981)]. Na + current into neurons depolarizes neuronal membranes, initiates potential action, and finally results in the release of a neurotransmitter from the nerve terminal. The effects of test compounds on the aforementioned secondary responses of receptor interaction can be studied using simple in vitro systems.

15 Edellä mainittu ärsytysaminohapporeseptorien luo kittelu NMDA-, kiskvalaatti- ja kainaattireseptoreihin perustuu ensisijaisesti seuraaviin elektrofysiologisiin ja neurokemiallisiin havaintoihin.The above-mentioned classification of irritant amino acid receptors into NMDA, squalate and kainate receptors is based primarily on the following electrophysiological and neurochemical findings.

1) N-metyyli-D-aspartaatti (NMDA) -reseptoreilla •*20 on suuri selektiivisyys stimuloivaa NMDA:ta kohtaan. Ibo-teenihapolla, L-homokysteiinihapolla, D-glutaamihapolla ja trans-2,3-piperidiinidikarboksyylihapolla (trans-2,3-PDA) on voimakkaasta kohtalaiseen agonistinen vaikutus näihin reseptoreihin. Tehokkaimpia ja selektiivisimpiä antagonis-25 teja ovat 2-amino-5-fosfonokarboksyylihappojen D-isomee- rit, esim. 2-amino-5-fosfonovaleriaanahappo (D-APV) ja 2-amino-7-fosfonoheptaanihappo (D-APH), kun taas pitkä-ketjuisten 2-aminodikarboksyylihappojen D-isomeereillä (esim. D-2-aminoadipiinihapolla)ja pitkäketjuisilla diami-30 nodikarboksyylihapoilla (esim. diaminopimeliinihapolla) on ,· keskinkertainen antagonistinen aktiivisuus. NMDA-indusoi- • · tuja synaptisia vasteita on tutkittu laajalti nisäkkäiden CNS:ssä, erityisesti selkäytimessä (Davies, J. et 10a 1 . , J. Physiol. 297, 621 - 635 (1979) ja vasteet ovat osoit 5 93840 tautuneet voimakkaasti inhiboituviksi Mg2*:n vaikutuksesta.1) N-methyl-D-aspartate (NMDA) receptors • * 20 have high selectivity for stimulatory NMDA. Ibo-teic acid, L-homocysteic acid, D-glutamic acid and trans-2,3-piperidinedicarboxylic acid (trans-2,3-PDA) have a strong to moderate agonistic effect on these receptors. The most potent and selective antagonists are the D-isomers of 2-amino-5-phosphonocarboxylic acids, e.g. 2-amino-5-phosphonoovaleric acid (D-APV) and 2-amino-7-phosphonoheptanoic acid (D-APH), when whereas the D-isomers of long-chain 2-aminodicarboxylic acids (e.g. D-2-aminoadipic acid) and long-chain diamin-nodicarboxylic acids (e.g. diaminopimelic acid) have moderate antagonistic activity. NMDA-induced synaptic responses have been extensively studied in the mammalian CNS, particularly in the spinal cord (Davies, J. et 10a 1., J. Physiol. 297, 621-635 (1979)) and the responses have been shown to be highly inhibitory. Under the influence of Mg2 *.

On hyvin tunnettua, että NMDA-antagonisteilla on kouristuksia ehkäisevä aktiivisuus erilaista alkuperää 5 olevissa taudinkohtauksissa [Jones et ai., Neurosci. Lett. 45, 157 - 161 (1984)], ja että aineiden kyvyt taudinkoh-tauskokeissa vastaavat hyvin yhdisteiden kykyä inhiboida NMDA-vasteita elektrofysiologisissa in vivo- ja in vitro -kokeissa [Watkins et ai., Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 10 21, 165 - 204 (1981)].It is well known that NMDA antagonists have anticonvulsant activity in disease episodes of various origins [Jones et al., Neurosci. Lett. 45, 157-161 (1984)], and that the abilities of the agents in disease assays correspond well to the ability of the compounds to inhibit NMDA responses in electrophysiological in vivo and in vitro experiments [Watkins et al., Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 10 21, 165-204 (1981)].

NMDA-antagonistit ovat sen vuoksi käyttökelpoisia antikonvulsiivisia aineita erityisesti epilepsiaa vastaan.NMDA antagonists are therefore useful anticonvulsants, especially against epilepsy.

2) Kiskvalaattireseptorit aktivoituvat selektiivisesti kiskvaalihapolla; muita tehokkaita agonisteja ovat 15 AMPA(2-amino-3-hydroksi-5-metyy1i-4-i soksatsoiipropropio- nihappo) ja L-glutaamihappo. Glutaamihapon dietyyliesteri (GDEE) on selektiivinen, mutta hyvin heikko antagonisti tässä tapauksessa. Kiskvalaattireseptorit ovat suhteellisen epäherkkiä Mg2*:lie.2) Kisqualate receptors are selectively activated by whiskey acid; other potent agonists are AMPA (2-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-ioxazolepropionic acid) and L-glutamic acid. Glutamic acid diethyl ester (GDEE) is a selective but very weak antagonist in this case. Kisqualate receptors are relatively insensitive to Mg2 *.

*20 On hyvin tunnettua, että on olemassa ärsytysamino- happojen siirtyminen otsapuolen aivokuoresta nucleus accumbensiin (erityinen etuaivojen osa, jossa on dopamii-nineuroneja) [Christie et ai., J. Neurochem. 45, 477 - 482 (1985)]. Edelleen on hyvin tunnettua, että glutamaatti 25 moduloi dopaminergista siirtymistä aivojuoviossa [Rudolph et ai., Neurochem. int. 5, 479 - 486 (1983)] sekä hyperak-tiivisuutta, joka on yhteydessä dopamiinijärjestelmän preynaptiseen stimulaatioon AMPA:n kanssa nucleus accum-bensissä [Arnt. Life Sei. 28, 1597 - 1603 (1981)].20 * It is well known that there is a ärsytysamino- acids transition from the front side of the cortex to nucleus accumbens (a special part of the forebrain having dopamii-nineuroneja) [Christie et al., J. Neurochem. 45, 477-482 (1985)]. It is further well known that glutamate 25 modulates dopaminergic transition in the striatum [Rudolph et al., Neurochem. int. 5, 479-486 (1983)] and hyperactivity associated with preynaptic stimulation of the dopamine system with AMPA in the nucleus accumens [Arnt. Life Sci. 28, 1597-1603 (1981)].

30 Kiskvalaattiantagonistit ovat sen vuoksi käyttökel- .· poisia uutena neuroleptityyppinä.Cisqualate antagonists are therefore useful as a new type of neuroleptic.

* 3) Kainaattireseptorit. Ärsytysvasteet kainiiniha- polle ovat suhteellisen epäherkkiä NMDA-antagonistien ja GDEE:n antagonismille, ja on ehdotettu, että kainiinihappo 35 aktivoi kolmannen happamien aminohappojen reseptorien ala- 6 93840 luokan. Kainiinihapon tietyt laktonisoidut johdannaiset ovat selektiivisiä antagonisteja (Goldberg, O. et ai., Neuroscl. Lett. 23, 187 - 191 (1981) ja dipeptidi-3-gluta-myyliglysiinillä on myös jonkin verran selektiivisyyttä 5 kainaattireseptoreja kohtaan. Ca2*, mutta ei Mg2*, on vahva kainiinihappositoutumisen inhibiittori.* 3) Price receptors. Irritation responses to carnic acid are relatively insensitive to antagonism of NMDA antagonists and GDEE, and it has been suggested that carnic acid 35 activates a third class of acidic amino acid receptors. Certain lactonized derivatives of cainic acid are selective antagonists (Goldberg, O. et al., Neuroscl. Lett. 23, 187-191 (1981)) and dipeptide-3-glutamylglycine also has some selectivity for kainate receptors. Ca2 * but not Mg2 *, is a potent inhibitor of carnic acid binding.

Aineen affiniteettia yhtä tai useampaa ärsytysami-nohapporeseptorien erilaista tyyppiä kohtaan voidaan tutkia yksinkertaisilla sitoutumiskokeilla. Olennaisesti me-10 netelmä käsittää tietyn spesifisen radioleimatun ligandin ja kyseisen tutkittavan spesifisen aineen inkuboinnin reseptoria sisältävän aivohomogenaatin kanssa. Reseptorin varautuminen mitataan määrittämällä homogenaattiin sitoutunut radioaktiivisuus ja vähentämällä ei-spesfinen sitou- 15 tuminen.The affinity of a substance for one or more different types of irritating amino acid receptors can be examined by simple binding experiments. Essentially, the method comprises incubating a specific radiolabeled ligand and that specific test substance with a receptor-containing brain homogenate. Receptor charge is measured by determining the radioactivity bound to the homogenate and reducing non-specific binding.

Glutaamihappoanalogien vaikutusta glutamaattiresep-torien reaktioiden sekundäärisiin vaikutuksiin, kuten c-GMP:n muodostukseen ja Na*:n ulosvirtaukseen, voidaan - tutkia in vitro käyttäen aivoliuskapreparaatteja. Tällai- ’ 20 set kokeet antavat informaatiota tutkittavien aineiden tehoista (agonisti/antagonisti). Tämä eroaa sitoutumis-kokeista, jotka antavat informaatiota ainoastaan yhdisteiden affiniteetista reseptorien suhteen.The effect of glutamic acid analogs on the secondary effects of glutamate receptor reactions, such as c-GMP formation and Na * efflux, can be studied in vitro using brain strip preparations. Such experiments provide information on the efficacy of the test substances (agonist / antagonist). This differs from binding experiments, which provide information only on the affinity of compounds for receptors.

Nyt on todettu, että kaavan I mukaisilla hetero-25 syklisillä yhdisteillä on affiniteetti glutamaattiresepto- reita kohtaan ja ne ovat antagonisteja tämän tyyppisten reseptorien yhteydessä, mikä tekee ne käyttökelpoisiksi minkä tahansa ärsytysaminohappojen hyperaktiivisuuden aiheuttamien lukuisten indikaatioiden hoidossa.It has now been found that the heterocyclic compounds of formula I have an affinity for glutamate receptors and are antagonists at this type of receptor, making them useful in the treatment of a variety of indications for hyperactivity of any irritating amino acid.

30 Kaavan I mukaisten yhdisteiden kiskvalaattiresep- torien sitomisaktiivisuutta voidaan havainnollistaa määrittämällä niiden kyky syrjäyttää radioaktiivisesti leimattu 2-amino-3-hydroksi-5-metyy1i-4-isoksatsolepropioni-happo (AMPA) kiskvalaattityyppisistä reseptoreista.The binding activity of the cisqualate receptors of the compounds of formula I can be illustrated by determining their ability to displace radiolabeled 2-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazolepropionic acid (AMPA) from cisqualate-type receptors.

7 938407 93840

Yhdisteiden kiskvalaattiantagonistiset ominaisuudet osoitetaan niiden kyvyllä antagonisoida kiskvalaat-tihappo-stimuloitua Na*-virtausta rotan aivojuoviolius-koista.The cisqualate antagonistic properties of the compounds are demonstrated by their ability to antagonize cisqualate-diacid-stimulated Na * flux from rat brainstem cells.

5 Yhdisteiden NMDA-antagonistisia ominaisuuksia ha vainnollistetaan määrittämällä niiden kyky antagonisoida NMDA-stimuloitua 3H-GABA:n vapautumista viljellyistä hiiren aivokuoren hermosoluista.The NMDA antagonistic properties of the compounds are illustrated by determining their ability to antagonize NMDA-stimulated 3 H-GABA release from cultured mouse cortical neurons.

Yhdisteiden syrjäytysaktiivisuus voidaan osoittaa 10 määrittämällä IC50-arvo, joka tarkoittaa pitoisuutta (pg/ml), joka aiheuttaa 3H-AMPA:n spesifisen sitoutumisen 50-prosenttisen syrjäytymisen.The displacement activity of the compounds can be demonstrated by determining the IC50 value, which is the concentration (pg / ml) that causes 50% displacement of the specific binding of 3H-AMPA.

Kiskvalaattiantagonismi mitataan määrittämällä EC50-arvo, joka tarkoittaa pitoisuutta, joka vähentää 15 kiskvalaattihappostimuloitua natriumvirtausta 50 prosen tilla.Chisqualate antagonism is measured by determining the EC50 value, which is the concentration that reduces 15 chisqualic acid-stimulated sodium flux by 50%.

Yhdisteiden NMDA-antagonistinen aktiivisuus voidaan osoittaa määrittämällä IC50-arvo, joka tarkoittaa pitoisuutta (μ/g/ml), joka estää NMDA-indusoidun 3H-GABA:n va-* 20 pautumisen 50-prosenttisesti.The NMDA antagonistic activity of the compounds can be demonstrated by determining the IC50 value, which is the concentration (μ / g / ml) that inhibits the 50% release of NMDA-induced 3 H-GABA.

3H-AMPA-sitoutuminen (Koe 1) 500 pg sulatettua rotan aivokuorimembraanihomoge-naattia Tris-HCl:ssä (30 mM), CaCl2:ssa (2,5 mM) ja KSCN:ssä (100 mM), pH 7,1, inkuboitiin 0 °C:ssa 30 minuut-25 tia käyttäen mukana 25 μΐ 3H-AMPA:ta (5 nM:n loppupitoi-suus) ja tutkittavaa yhdistettä sekä puskuria. Ei-spesifi-nen sitoutuminen määritettiin inkuboimalla L-glutamiini hapon kanssa (600 μΜ:η loppupitoisuus). Sitoutumisreaktio lopetettiin lisäämällä 5 ml jääkylmää puskuria ja sen jäl-30 keen suodatettiin Whatman GF/C -lasikuitujen läpi ja pestiin 2x5 ml:11a jääkylmää puskuria. Sitoutunut radio-' * aktiivisuus mitattiin tuikelaskimella. IC50 määritettiin3 H-AMPA Binding (Experiment 1) 500 pg of thawed rat cortical membrane homogenate in Tris-HCl (30 mM), CaCl 2 (2.5 mM) and KSCN (100 mM), pH 7.1, was incubated At 0 ° C for 30 minutes-25 minutes using 25 μΐ 3H-AMPA (5 nM final concentration) and test compound and buffer. Non-specific binding was determined by incubation with L-glutamine acid (600 μΜ: η final concentration). The binding reaction was stopped by the addition of 5 ml of ice-cold buffer and then filtered through Whatman GF / C glass fibers and washed with 2x5 ml of ice-cold buffer. Bound radio activity was measured with a scintillation counter. The IC50 was determined

Hill-analyysillä ainakin neljälle tutkittavan yhdisteen pitoisuudelle.Hill analysis for at least four concentrations of test compound.

8 938408 93840

Kiskvaliinihapon indusoiman 22Na*:n vapautumisen antagonismi (Koe 2)Antagonism of cisqualic acid-induced 22Na * release (Experiment 2)

Rotan aivo j uovioliusko j a esi-inkuboitiin 22Na*:n kanssa 30 minuuttia. 22Na+-kuormi tus jakson jälkeen liuskat 5 vietiin peräkkäin ja kerran minuutissa koeputkisarjan läpi, jossa sarjassa jokainen putki sisälsi 1,5 ml ei-radio-aktiivista fysiologista liuosta, joka oli kyllästetty 02:n avulla, korin muotoisen seulan avulla. Viimeisessä viidessä putkessa oli mukana kiskvaliinihappoa (2 pg/ml), ja 10 tutkittavaa yhdistettä oli samoissa viidessä putkessa ja niitä edeltävissä kolmessa putkessa. Kussakin pesuputkessa oleva sekä liuskoihin kokeen lopussa jäänyt radioaktiivisuuden määrä mitattiin tuikelaskimella. EC50-arvot laskettiin Hill-analyysillä ainakin kolmesta erilaisesta tutkit-15 tavan yhdisteen pitoisuudesta tutkittavan yhdisteen pitoisuutena, joka pienentää 22Na+-ionien ulosvirtausnopeuden 50 %:iin niiden ulosvirtausnopeudesta ilman tutkittavaa yhdistettä.The rat brain and streak were preincubated with 22 Na * for 30 minutes. After the 22Na + loading period, the strips 5 were passed successively and once a minute through a series of test tubes, each set containing 1.5 ml of non-radioactive physiological saline impregnated with O 2 using a basket-shaped sieve. The last five tubes contained cisqualic acid (2 pg / ml), and 10 test compounds were present in the same five tubes and the three preceding tubes. The amount of radioactivity in each wash tube and remaining on the strips at the end of the experiment was measured with a scintillation counter. EC50 values were calculated by Hill analysis from at least three different concentrations of test compound as the concentration of test compound that reduces the efflux rate of 22Na + ions to 50% of their efflux rate without test compound.

NMDA-stimuloidun 3H-GABA:n vapautumisen estyminen 20 viljellyistä hiiren aivokuoren interneuroneista (Koe 3)Inhibition of NMDA-stimulated 3H-GABA release from 20 cultured mouse cortical interneurons (Experiment 3)

Vapautumiskokeet suoritetaan käyttäen koemallia, jonka ovat kuvanneet Drejer et ai. [Life Sei. 38 (1986) s. 2077]. Petrimaljoissa (30 mm) viljeltyihin aivokuoren 25 interneuroneihin lisätään 100 pg/ml 3-vinyyli-GABA:aa tuntia ennen koetta GABA:n hajoamisen estämiseksi neuroneissa. 30 minuuttia ennen koetta jokaiseen viljelmään lisätään 5 pCi 3H-GABA:aa ja tämän esikuormi tus jakson jälkeen solut pestään kahdesti HEPESillä (N-2-hydroksietyylipipe-30 ratsiini-N'-2-etaanisulfonihapolla) puskuroidulla suola liuoksella (HBS), joka sisältää 10 mM HEPESiä, 135 mM NaCl, 5 mM KC1, 0,6 mM MgS04, 1,0 mM CaCl2 ja 6 mM D-glu-koosia, pH 7, ja ne sijoitetaan superfuusiosysteemiin. Tämä systeemi koostuu peristalttisesta pumpusta, joka 35 syöttää jatkuvasti termostoitua 37-celsiusasteista super- 9 93840Release experiments are performed using the experimental model described by Drejer et al. [Life Sci. 38 (1986) p. 2077]. Cortical interneurons cultured in petri dishes (30 mm) are supplemented with 100 pg / ml 3-vinyl-GABA one hour before the experiment to prevent GABA degradation in neurons. Thirty minutes before the experiment, 5 pCi 3 H-GABA is added to each culture, and after this preload period, the cells are washed twice with HEPES (N-2-hydroxyethylpiper-30-racin-N'-2-ethanesulfonic acid) buffered saline solution (HBS) containing 10 mM HEPES, 135 mM NaCl, 5 mM KCl, 0.6 mM MgSO 4, 1.0 mM CaCl 2, and 6 mM D-Gluose, pH 7, and placed in a superfusion system. This system consists of a peristaltic pump 35 which continuously supplies a thermostated 37 ° C super-9 93840

fuusiovällainetta säiliöstä lievästi kallistetun petri-maljan yläreunaan. Maljan pohjalla oleva solujen monomole-kulaarinen kerros on peitetty nailonverkkopalalla; tällä helpotetaan väliaineen dispergoitumista solukerroksen 5 päälle. Väliaine kerätään jatkuvasti maljan alemmasta osasta ja siirretään fraktionkerääjään. Aluksi soluja su-perfuusioidaan HBS:llä 15 minuuttia (virtausnopeus 2 ml/min). Sen jälkeen soluja stimuloidaan 30 sekuntia joka neljäs minuutti vaihtamalla superfuusioväliaine HBS:stä 10 vastaavaan väliaineeseen, joka sisältää NMDA:ta ja antagonisteja, seuraavan kaavion mukaisesti: stimulaatio nro 1: 3 μ/g/ml NMDAfusion medium from the container to the top of the slightly tilted Petri dish. The monomolar layer of cells at the bottom of the dish is covered with a piece of nylon mesh; this facilitates the dispersion of the medium on the cell layer 5. The medium is continuously collected from the lower part of the dish and transferred to a fraction collector. Initially, the cells are perfused with HBS for 15 minutes (flow rate 2 ml / min). The cells are then stimulated every 30 minutes for 30 seconds by changing the superfusion medium from HBS to 10 corresponding media containing NMDA and antagonists according to the following scheme: Stimulation No. 1: 3 μ / g / ml NMDA

stimulaatio nro 2: 3 μ/g/ml NMDA + 0,3 pg/ml antagonistia stimulaatio nro 3: 3 μg/g/ml NMDA + 3 pg/ml antagonistia 15 Koeaineet liuotettiin veteen tai 48-prosenttiseen etanoliin. Lopullinen etanolipitoisuus kokeessa ei saa ylittää 0,1 prosenttia.Stimulation No. 2: 3 μg / g / ml NMDA + 0.3 pg / ml antagonist Stimulation No. 3: 3 μg / g / ml NMDA + 3 pg / ml antagonist The test substances were dissolved in water or 48% ethanol. The final ethanol content of the test must not exceed 0,1%.

3H-GABA:n vapautuminen NMDA:n läsnä ollessa (stimu-... loitu vapautuminen cpm:ssä) korjataan keskimääräistä pe- -·* 20 rusvapautumista varten (cpm) ennen stimulointia ja sen jälkeen.The release of 3H-GABA in the presence of NMDA (stimulated release in cpm) is corrected for the mean release of color (cpm) before and after stimulation.

Stimuloitu vapautuminen antagonistien läsnä ollessa ilmaistaan suhteen stimuloituun vapautumiseen pelkästään NMDA:11a ja lasketaan antagonistin IC50-arvo (koeaineen . 25 pitoisuus (pg/ml), joka estää NMDA-indusoidun 3H-GABA:n vapautumisen 50-prosenttisesti) joko annos/vaste-käyrästä * tai kaavasta: 30 ID50 * käytetty koeainepitoisuus x----------pg/kg ·' [ C„ _ 1 ] «Stimulated release in the presence of antagonists is expressed relative to stimulated release of NMDA alone and the IC50 of the antagonist (concentration of test substance (pg / ml) that inhibits NMDA-induced 3 H-GABA release by 50%) is calculated as either dose / response. from the curve * or formula: 30 ID50 * test substance content x ---------- pg / kg · '[C „_ 1]«

Cx jossa CD on stimuloitu vapautuminen vertailukokeissa ja C, 35 on stimuloitu vapautuminen varsinaisessa kokeessa (laske- 10 93840 mlnen edellyttää normaalia massavaikutusreaktiota). Ennen IC50-arvon laskemista täytyy aikaansaada 25 - 75 -prosenttinen NMDA-stimulaation estyminen.Cx where CD is the stimulated release in the comparative experiments and C, 35 is the stimulated release in the actual experiment (the calculation requires a normal mass effect reaction). Before calculating the IC50, 25 to 75% inhibition of NMDA stimulation must be achieved.

Kaavan I mukaisilla yhdisteillä saadut tulokset 5 ilmenevät seuraavasta taulukosta 1.The results obtained with the compounds of formula I 5 are shown in Table 1 below.

Taulukko 1table 1

Yhdiste Koe 1 Koe 3 10 esimerkistä XC50 pg/ml IC*, pg/mlCompound Experiment 1 Experiment 3 from Example 10 XC50 pg / ml IC *, pg / ml

Esim. 3 0,23 0,13Eg 3 0.23 0.13

Esim. 5 1,8Example 5 1.8

Esim. 7 0,13 0,09 15Eg 7 0.13 0.09 15

Seuraavat esimerkit valaisevat keksintöä.The following examples illustrate the invention.

Esimerkki 1 4-kloori-7,8-dihydroksi-l,2,5-seleenidiatsolo-[3,4-f]kinoksaliini --- 20 Liuos, jossa oli seleenidioksidia (0,22 g, 2 mmol) 20 ml:ssa vettä, lisättiin suspensioon, jossa oli 5,6-di-amino-7-kloori-2,3-dihydroksikinoksaliinia (0,45 g, 2 mmol) 20 ml:ssa etanolia, ja seosta refluksoitiin öljy-hauteella 1,5 h. Jäähdyttämisen jälkeen saostunut kiinteä , 25 aine otettiin talteen suodattamalla ja pestiin vedellä ja etanolilla. Raakatuotetta kiehutettiin 200 ml:ssa 2 N nat-riumhydroksidia, suodatettiin kuumana ja saostettiin uudelleen 4 M vetykloridihapolla, jolloin saatiin 0,46 g (76 %) keltaista otsikon yhdistettä, s.p. > 300 eC, ^-NMR 30 (DMS0-d6): 7,90 (s, 1H, H-5), 11,93 ja 12,10 (2 leveää singlettiä, 2H, 2 OH).Example 1 4-Chloro-7,8-dihydroxy-1,2,5-selenodiazolo [3,4-f] quinoxaline --- Solution of selenium dioxide (0.22 g, 2 mmol) in 20 mL water, was added to a suspension of 5,6-diamino-7-chloro-2,3-dihydroxyquinoxaline (0.45 g, 2 mmol) in 20 mL of ethanol, and the mixture was refluxed in an oil bath for 1.5 h. After cooling, the precipitated solid was collected by filtration and washed with water and ethanol. The crude product was boiled in 200 mL of 2 N sodium hydroxide, filtered hot and reprecipitated with 4 M hydrochloric acid to give 0.46 g (76%) of the yellow title compound, m.p. > 300 ° C, 1 H-NMR δ (DMSO-d 6): 7.90 (s, 1H, H-5), 11.93 and 12.10 (2 broad singlets, 2H, 2 OH).

Esimerkki 2 a. 4,5-dietoksalyyliaminobentsofuratsaani Liuokseen, jossa oli 3,6 g (24 mmol) 4,5-diamino-35 bentsofuratsaania 200 ml:ssa kuivaa tetrahydrofuraania, 11 93840 lisättiin 6,8 ml (48,8 mmol) kuivaa trietyyliamiinia. Lisättiin tipoittain liuos, jossa oli 5,4 ml (48 mmol) etok-salyylikloridia 50 ml:ssa kuivaa tetrahydrofuraania, ja reaktioseosta sekoitettiin 20 °C:ssa 3 h. Seos suodatet-5 tiin ja haihdutettiin öljyksi. Raakatuotetta sekoitettiin metanolin kanssa, jolloin saatiin 3,4 g (81 %) 4,5-dietok-salyyliaminobentsofuratsaania, s,p. 175,0 °C.Example 2a. 4,5-Diethoxalylaminobenzofurazan To a solution of 3.6 g (24 mmol) of 4,5-diamino-35 benzofurazane in 200 mL of dry tetrahydrofuran was added 6.8 mL (48.8 mmol) of dry. triethylamine. A solution of 5.4 ml (48 mmol) of ethoxalyl chloride in 50 ml of dry tetrahydrofuran was added dropwise, and the reaction mixture was stirred at 20 ° C for 3 h. The mixture was filtered and evaporated to an oil. The crude product was mixed with methanol to give 3.4 g (81%) of 4,5-diethoxalylaminobenzofurazan, m.p. 175.0 ° C.

b. 7,8-dihydroksi-l,2,5-oksadiatsolo(3,4-f)kinok-saliini 10 Seosta, jossa oli 2,5 g (7,1 mmol) 4,5-dietoksalyy- liaminobentsofuratsaania ja 20 ml 1 N vetykloridihappoa, 5 refluksoitiin 3 h. Jäähdytettiin O °C:seen ja sen jälkeen sakka suodatettiin ja pestiin vedellä, jolloin saatiin 1,4 g (97 %) 7,8-dihydroksi-l,2,5-oksadiatsolo- 15 (3,4-f)kinoksaliinia, s.p. > 300 °C. NMR (DMS0-d6): 12,8 (1H, leveä s), 12,3 (1H, leveä s), 7,70 (1H, d), 7,37 (1H, d).b. 7,8-Dihydroxy-1,2,5-oxadiazolo (3,4-f) quinoxaline A mixture of 2.5 g (7.1 mmol) of 4,5-diethoxalylaminobenzofurazan and 20 ml 1N hydrochloric acid, refluxed for 3 h. Cooled to 0 ° C and then the precipitate was filtered and washed with water to give 1.4 g (97%) of 7,8-dihydroxy-1,2,5-oxadiazolo-15 3,4-f) quinoxaline, m.p. > 300 ° C. NMR (DMSO-d 6): 12.8 (1H, broad s), 12.3 (1H, broad s), 7.70 (1H, d), 7.37 (1H, d).

Esimerkki 3 7,8-dihydroksi-4-nitro-l, 2,5-oksadiatsolo(3,4-f) -20 klnoksaliiniExample 3 7,8-Dihydroxy-4-nitro-1,2,5-oxadiazolo (3,4-f) -20 quinoxaline

Liuos, jossa oli 0,4 g (2 mmol) 7,8-dihydroksi- l,2,5-oksadiatsolo(3,4-f)kinoksaliinia 20 ml:ssa väkevää rikkihappoa (95 - 97 %), jäähdytettiin jäällä ja sen jälkeen siihen lisättiin 0,2 g (2 mmol) kaliumnitraattia.A solution of 0.4 g (2 mmol) of 7,8-dihydroxy-1,2,5-oxadiazolo (3,4-f) quinoxaline in 20 ml of concentrated sulfuric acid (95-97%) was cooled with ice and its then 0.2 g (2 mmol) of potassium nitrate was added.

, 25 Sekoitusta jatkettiin 0 °C:ssa 30 min ja sen jälkeen.25 Stirring was continued at 0 ° C for 30 min and thereafter

25 °C:ssa 3 h. Reaktioseos kaadettiin 100 ml:aan jäävettä. Lisättiin 10 N natriumhydroksidia niin, että pH-arvoksi tuli 2-3, jolloin saatiin sakka (0,44 g). Raakatuote uudelleen kiteytettiin (metanoli-asetoni-vesi), jolloin 30 saatiin 0,38 g (78 %) 7,8-dihydroksi-4-nitro-l,2,5-oksa-·· diat solo (3,4-f )kinoksaliinia, s.p. > 300 *C. NMRAt 25 ° C for 3 h. The reaction mixture was poured into 100 ml of ice water. 10 N sodium hydroxide was added to bring the pH to 2-3 to give a precipitate (0.44 g). The crude product was recrystallized (methanol-acetone-water) to give 0.38 g (78%) of 7,8-dihydroxy-4-nitro-1,2,5-oxadia Solo (3,4-f ) quinoxaline, m.p. > 300 ° C. NMR

(DMSO-d6): 12,4 (2H, leveä s), 8,47 (1H, s).(DMSO-d 6): 12.4 (2H, broad s), 8.47 (1H, s).

12 9384012 93840

Esimerkki 4 a. 6-atsido-7-kloori-2,3-dihydroksikinoksaliiniExample 4 a. 6-Azido-7-chloro-2,3-dihydroxyquinoxaline

Liuokseen, jossa oli 2 g (9,6 nunol) 6-amino-7-kloo-ri-2,3-dihydroksikinoksaliinia 40 ml:ssa fluoriboorihap-5 poa, lisättiin 100 ml vettä, suodatettiin ja sen jälkeen jäähdytettiin jäällä. Lisättiin liuos, jossa oli 0,68 g (9,9 mmol) natriumnitriittiä 20 ml:ssa vettä ja sekoitettiin 0 °C:ssa 15 min, minkä jälkeen lisättiin 0,68 g (1,0 mmol) natriumatsidia liuotettuna 20 ml:aan vettä. Sekoi-10 tusta jatkettiin 25 °C:ssa 2 h. Sakka suodatettiin ja pestiin vedellä, jolloin saatiin 1,8 g (80 %) 6-atsido-7-kloori-2,3-dihydroksikinoksaliinia. IR (KBr): 2100 cm"1 (N3). NMR (DMS0-d6): 11,7 (2H, leveä s), 7,03 (1H, s), 6,93 (1H, s ).To a solution of 2 g of (9.6 nunol) 6-amino-7-chloro-2,3-dihydroxyquinoxaline in 40 ml of fluoroboric acid-5a was added 100 ml of water, filtered and then cooled with ice. A solution of 0.68 g (9.9 mmol) of sodium nitrite in 20 ml of water was added and stirred at 0 ° C for 15 min, after which 0.68 g (1.0 mmol) of sodium azide dissolved in 20 ml of water was added. of water. Stirring was continued at 25 ° C for 2 h. The precipitate was filtered and washed with water to give 1.8 g (80%) of 6-azido-7-chloro-2,3-dihydroxyquinoxaline. IR (KBr): 2100 cm -1 (N 3). NMR (DMSO-d 6): 11.7 (2H, broad s), 7.03 (1H, s), 6.93 (1H, s).

15 b. 6-atsido-7-kloori-2,3-dihydroksi-5-nitroki- noksaliini 15 ml 89-prosenttista typpihappoa jäähdytettiin jäällä ja sen jälkeen lisättiin asteittain 1 g (4,2 mmol) 6-atsido-7-kloori-2,3-dihydroksikinoksaliinia. Kun reak-20 tioseosta oli sekoitettu O °C:ssa 15 min, se kaadettiin 100 ml:aan jäävettä. Raakatuote uudelleen kiteytettiin (asetoni-metanoli-vesi), jolloin saatiin 0,95 g (80 %) 6-atsido-7-kloori-2,3-dihydroksi-5-nitrokinoksaliinia.15b. 6-Azido-7-chloro-2,3-dihydroxy-5-nitroquinoxaline 15 ml of 89% nitric acid was cooled with ice and then 1 g (4.2 mmol) of 6-azido-7-chloro was gradually added. -2,3-dihydroxyquinoxaline. After stirring at 0 ° C for 15 min, the reaction mixture was poured into 100 ml of ice water. The crude product was recrystallized (acetone-methanol-water) to give 0.95 g (80%) of 6-azido-7-chloro-2,3-dihydroxy-5-nitroquinoxaline.

IR (KBr): 2450 cm"1 (N3). NMR (DMS0-d6): 12,3 (2H, leveä s), 25 7,07 (1H, s).IR (KBr): 2450 cm -1 (N 3). NMR (DMSO-d 6): 12.3 (2H, broad s), δ 7.07 (1H, s).

c. 4-kloori-7,8-dihydroksi-l,2,5-oksadiatsolo- (3,4-f)kinoksaliini-l-oksidic. 4-Chloro-7,8-dihydroxy-1,2,5-oxadiazolo (3,4-f) quinoxaline-1-oxide

Seosta, jossa oli 1 g (3,5 mmol) 6-atsido-7-kloori- 2,3-dihydroksi-5-nitrokinoksaliinia ja 15 ml ksyleeniä, 30 palautusjäähdytettiin 3 h. Jäähdytettiin 25 °C:seen, minkä jälkeen sakka suodatettiin ja pestiin tolueenilla ja eetterillä, jolloin saatiin 0,86 g (96 %) 4-kloori-7,8-dihyd-roksi-1,2,5-oksadiatsolo(3,4-f)kinoksaliini-l-oksidia,sp.A mixture of 1 g (3.5 mmol) of 6-azido-7-chloro-2,3-dihydroxy-5-nitroquinoxaline and 15 ml of xylene was refluxed for 3 h. After cooling to 25 ° C, the precipitate was filtered off. and washed with toluene and ether to give 0.86 g (96%) of 4-chloro-7,8-dihydroxy-1,2,5-oxadiazolo (3,4-f) quinoxaline-1-oxide, m.p.

> 300 eC. NMR (DMS0-d6): 12,6 (1H, leveä s), 12,0 (1H, le-35 veä s), 7,10 (1H, s).> 300 eC. NMR (DMSO-d 6): 12.6 (1H, broad s), 12.0 (1H, broad 35 s), 7.10 (1H, s).

13 9384013 93840

Esimerkki 5 a. 4-kloori-7,8-dihydroksi-l,2,5-oksadiatsolo- (3,4-f)kinoksaliiniExample 5 a. 4-Chloro-7,8-dihydroxy-1,2,5-oxadiazolo- (3,4-f) quinoxaline

Liuokseen, jossa oli 0,6 g (2,4 mmol) 4-kloori7,8-5 dihydroksi-1,2,5-oksadiatsolo(3,4-f)kinoksaliini1-oksidia etanolin (14 ml) ja dimetyyliformamidin (3 ml) seoksessa, lisättiin 0,9 ml (5,3 mmol) trietyylifosfiittia. Seosta refluksoitiin 4 h ja sen jälkeen haihdutettiin tyhjössä. Jäännöstä sekoitettiin veden kanssa ja sen jälkeen eet-10 terietyyliasetaatin (5:1) kanssa, jolloin saatiin 0,4 g (71 %) 4-kloori-7,8-dihydroksi-l,2,5-oksadiatsolo(3,4-f)-kinoksaliinia, sp. > 300 eC. NMR (DMS0-d6 + D20): 7,40 (1H, s ).To a solution of 0.6 g (2.4 mmol) of 4-chloro-7,8-5 dihydroxy-1,2,5-oxadiazolo (3,4-f) quinoxaline-1-oxide in ethanol (14 mL) and dimethylformamide (3 mL) ), 0.9 ml (5.3 mmol) of triethyl phosphite were added. The mixture was refluxed for 4 h and then evaporated in vacuo. The residue was mixed with water and then with ethyl 10 ethyl acetate (5: 1) to give 0.4 g (71%) of 4-chloro-7,8-dihydroxy-1,2,5-oxadiazolo (3,4- f) -quinoxaline, m.p. > 300 eC. NMR (DMSO-d 6 + D 2 O): 7.40 (1H, s).

Esimerkki 6 15 a. 4,5-dietoksalyyliamino-l,2,5-bentsotiadiatsoliExample 6 15 a. 4,5-Diethoxalylamino-1,2,5-benzothiadiazole

Seokseen, jossa oli 2,0 g (12,0 mmol) 4,5-diamino- 1,2,5-bentsotiadiatsolia ja 5,0 ml (32 mmol) kuivaa tri-etyyliamiinia 100 ml:ssa kuivaa tetrahydrofuraania, lisättiin tipoittain liuos, jossa oli 3,0 ml (27 mmol) etoksa-20 lyylikloridia 35 ml:ssa kuivaa tetrahydrof uraania. Sekoitusta jatkettiin 25 °C:ssa 2 h. Reaktioseos suodatettiin ja haihdutettiin tyhjössä. Jäännös sekoitettiin veteen ja seosta uutettiin etyyliasetaatilla (2 x 50 ml). Yhdistetyt ja kuivatut etyyliasetaattifaasit haihdutettiin, jol-. 25 loin saatiin 3,0 g (68 %) 4,5-dietoksialyyliamino-l,2,5- bentsotiadiatsolia, sp. 168,5 °C. NMR (DMS0-d6): 10,8 (1H, leveä s), 10,6 (1H, leveä s), 8,03 (2H, s), 4,3 (4H, q), 1,33 (6H, t).To a mixture of 2.0 g (12.0 mmol) of 4,5-diamino-1,2,5-benzothiadiazole and 5.0 ml (32 mmol) of dry triethylamine in 100 ml of dry tetrahydrofuran was added dropwise a solution. containing 3.0 ml (27 mmol) of ethoxa-20yl chloride in 35 ml of dry tetrahydrofuran. Stirring was continued at 25 ° C for 2 h. The reaction mixture was filtered and evaporated in vacuo. The residue was stirred in water and the mixture was extracted with ethyl acetate (2 x 50 ml). The combined and dried ethyl acetate phases were evaporated to give. 3.0 g (68%) of 4,5-diethoxyallylamino-1,2,5-benzothiadiazole, m.p. 168.5 ° C. NMR (DMSO-d 6): 10.8 (1H, broad s), 10.6 (1H, broad s), 8.03 (2H, s), 4.3 (4H, q), 1.33 (6H , t).

b. 7,8-dihydroksi-l,2,5-tiadiatsolo(3,4-f)kinok- 30 saliinib. 7,8-Dihydroxy-1,2,5-thiadiazolo (3,4-f) quinoxaline

Seosta, jossa oli 1,0 g (2,73 mmol) 4,5-dietoksa-lyyliamino-1,2,5-bentsotiadiatsolia ja 5 ml etanolia Ja 20 ml 1 N vetykloridihappoa, refluksoitiin 2 h. Reaktio-seokseen lisättiin 10 ml vettä, jäähdytettiin 25 °C:seen 35 ja suodatettiin, jolloin saatiin 0,57 g (95 %) 7,8-dihyd- 14 93840 roksi-l,2,5-tiadiatsolo(3,4-f)kinoksaliinia, sp. >300 °C. NMR (DMS0-d6): 12,5 (1H, leveä s), 12,2 (1H, leveä s), 7,73 (1H, d), 7,47 (1H, d).A mixture of 1.0 g (2.73 mmol) of 4,5-diethoxylamino-1,2,5-benzothiadiazole and 5 ml of ethanol and 20 ml of 1N hydrochloric acid was refluxed for 2 h. To the reaction mixture was added 10 ml of water, cooled to 25 ° C and filtered to give 0.57 g (95%) of 7,8-dihydro-14,93840 roxy-1,2,5-thiadiazolo (3,4-f) quinoxaline, m.p. > 300 ° C. NMR (DMSO-d 6): 12.5 (1H, broad s), 12.2 (1H, broad s), 7.73 (1H, d), 7.47 (1H, d).

Esimerkki 7 5 7,8-dihydroksi-4-nitro-l,2,5-tiadiatsolo(3,4-f)- kinoksal i iniExample 7 7,8-Dihydroxy-4-nitro-1,2,5-thiadiazolo (3,4-f) -quinoxaline

Liuokseen, jossa oli 0,4 g (1,8 mmol) 7,8-dihydrok-si-l,2,5-tiadiatsolo(3,4-£)kinoksaliinia 20 ml:ssa väkevää rikkihappoa, lisättiin 0 °C:ssa 0,19 g (1,9 nunol) kalium-10 nitraattia. Sekoitusta jatkettiin O °C:ssa 30 min ja 25 °C:ssa 24 h. Reaktioseos kaadettiin 100 ml:aan jäävet-tä, jolloin saatiin 0,34 g (71 %) 7,8-dihydroksi-4-nitro- 1,2,5-tiadiatsolo(3,4-f)kinoksaliinia sakkana, s.p. > 300 eC. NMR (DMS0-d6): 12,3 (1H, leveä s), 11,6 (1H, leveä 15 s), 8,43 (1H, s).To a solution of 0.4 g (1.8 mmol) of 7,8-dihydroxy-1,2,5-thiadiazolo (3,4-E) quinoxaline in 20 mL of concentrated sulfuric acid was added at 0 ° C. 0.19 g (1.9 nunol) of potassium 10 nitrate. Stirring was continued at 0 ° C for 30 min and at 25 ° C for 24 h. The reaction mixture was poured into 100 mL of ice water to give 0.34 g (71%) of 7,8-dihydroxy-4-nitro-1, 2,5-thiadiazolo (3,4-f) quinoxaline as a precipitate, m.p. > 300 eC. NMR (DMSO-d 6): 12.3 (1H, broad s), 11.6 (1H, broad 15 s), 8.43 (1H, s).

t ' «t '«

Claims (2)

1. Förfarande för framställning av nya terapeutiskt användbara 7,8-dihydroxi-l,2,5-oxa-, tia- och selendiazo-5 lo[3,4-f]kinoxallnderivat med formeln /-N 10 (I) där R2 är väte, N02 eller halogen och Y är Se, O eller S, kännetecknat därav, att 15 a) en förenlng med formeln /"N NHC0C00R* rr<2° R2'^^S'NHC0C00I^ (III) där Y och R2 betecknar samma som ovan och R4 är lägre alkyl, refluxeras 1 en mineralsyra, eller 25 b) en förenlng med formeln HHj HHj 30 2JL (VIII) IT N OH • I där R2 betecknar samma som ovan, omsätts med selendioxld, varvid erhälls en förenlng med formeln I, där Y är Se, 35 eller 93840 c) en förening med formeln no2 Η3\^νΝΝί/0Η (IX) där R2 betecknar sanuna som ovan, refluxeras i xylen och 10 cykliseras, varefter den erhällna föreningen med formeln Sir R N OH där R2 betecknar samma som ovan, deoxlgeneras i dimetyl-. r formamid och trietylfosfit, varvid erhälls en förening med ••20 formeln I, där Y är O; och, om sä önskas, nitreras en erhällen förening med formeln I, där R2 är väte, varvid erhälls en förening med formeln I, där R2 är N02.A process for the preparation of novel therapeutically useful 7,8-dihydroxy-1,2,5-oxa, thia and selenediazo [5,4-f] quinoxalin derivatives of the formula / -N 10 (I) wherein R 2 is hydrogen, NO2 or halogen and Y is Se, O or S, characterized in that a) a compound of the formula / "N NHCO0C00R * rr <2 ° R 2 denotes the same as above and R 4 is lower alkyl, 1 is refluxed with a mineral acid, or b) a compound of the formula HHj HHj 2JL (VIII) IT N OH c) a compound of formula no2 Η3 \ νΝΝί / 0Η (IX) wherein R 2 OH where R 2 is the same as above is deoxygenated in dimethylformamide and triethylphosphite to give a compound of formula I wherein Y is O; and, if as desired, a obtained compound of formula I wherein R 2 is hydrogen is nitrated, whereby a compound of formula I wherein R 2 is NO 2 is obtained. 2. Förfarande enligt patentkravet 1, k ä n n e -25 tecknat därav, att man framställer 7,8-dihydroxi- 4-nitro-l,2,5-tiadiazolo[3,4-f]kinoxalin.2. A process according to claim 1, characterized in that 7,8-dihydroxy-4-nitro-1,2,5-thiadiazolo [3,4-f] quinoxaline is prepared.