FI79614B - Testfoerpackning och foerfarande foer bestaemning av streptococcus a - Google Patents

Testfoerpackning och foerfarande foer bestaemning av streptococcus a Download PDF

Info

Publication number
FI79614B
FI79614B FI844676A FI844676A FI79614B FI 79614 B FI79614 B FI 79614B FI 844676 A FI844676 A FI 844676A FI 844676 A FI844676 A FI 844676A FI 79614 B FI79614 B FI 79614B
Authority
FI
Finland
Prior art keywords
streptococcus
antigen
antibody
test
latex
Prior art date
Application number
FI844676A
Other languages
English (en)
Swedish (sv)
Other versions
FI79614C (fi
FI844676L (fi
FI844676A0 (fi
Inventor
Robert Rosenstein
Kim P Aspden
Peter Stopa
Original Assignee
Becton Dickinson Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Becton Dickinson Co filed Critical Becton Dickinson Co
Publication of FI844676A0 publication Critical patent/FI844676A0/fi
Publication of FI844676L publication Critical patent/FI844676L/fi
Publication of FI79614B publication Critical patent/FI79614B/fi
Application granted granted Critical
Publication of FI79614C publication Critical patent/FI79614C/fi

Links

Classifications

    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56911Bacteria
    • G01N33/56944Streptococcus
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/04Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
    • C12Q1/14Streptococcus; Staphylococcus
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/24Methods of sampling, or inoculating or spreading a sample; Methods of physically isolating an intact microorganisms
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/195Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria
    • G01N2333/315Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria from Streptococcus (G), e.g. Enterococci
    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10STECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/961Chemistry: molecular biology and microbiology including a step of forming, releasing, or exposing the antigen or forming the hapten-immunogenic carrier complex or the antigen per se
    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10STECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/975Kit

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Air Bags (AREA)

Description

1 79614
Testipakkaus ja menetelmä Streptococcus A:n määrittämiseksi
Keksintö koskee testipakkausta Streptococcus A:n 5 määrittämiseksi. Keksintö koskee myös menetelmää Streptococcus A:n toteamiseksi biologisesta näytteestä.
Streptokokkien monista ryhmistä ryhmään A kuuluva streptokokki (S. pyogenes) ensisijaisesti vastaa patologisten tilojen syntymisestä ihmisillä, kuten esimerkiksi 10 B-hemolyyttisestä pneumoniasta, tulirokosta, reumakuumees-ta, sydämen jälkitaudista, munuaiskerästulehduksesta, verenmyrkytystä synnyttävästä kurkkutulehduksesta sekä lap-sivuodeverenmyrkytyksestä. Muiden ryhmien streptokokit ovat täysin vaarattomia, ja ne esiintyvät normaalisti esi-15 merkiksi kurkussa. Streptokokki A:n mahdollisesti aiheuttamien infektioiden vakavan luonteen vuoksi on tärkeää määrittää tauti infektion aikaisessa vaiheessa, niin että voidaan valita sopiva hoito-ohjelma. Streptokokkia voidaan viljellä tavanomaisesti sopivassa elatusaineessa; kuiten-20 kaan ei streptokokin identifiointi tyypin mukaan ole yksinkertainen tehtävä. Streptokokki A:n suhteen selektiiviset elatusaineet eivät ole täydellisiä siinä suhteessa, että ne eivät ole täysin selektiivisiä, se on, ne eivät eliminoi kaikkia muita streptokokin tyyppejä antaen strep-25 tokokki A:n kasvaa. On huomattava, että viljelymenetelmät streptokokki A:n identifioimiseksi edellyttävät yleensä 18 tunnin inkubointiaikaa, usein niinkin kauan kuin 48 tuntia, streptokokki A:n läsnäolon varmistamiseksi. Sellaiset aikaavievät testit viivyttävät ratkaisun tekemistä 30 parhaan sairaanhoito-ohjelman suhteen. Luotettavan, yksinkertaisen ja nopean testi tarve streptokokki A:n suhteen on selvästi osoitettu.
Streptokokki A:n läsnäolon tutkiminen biologisesta näytteestä, kuten esimerkiksi kurkun sylkinäytteestä, on 35 nopea ja luotettava, kun käytetään hyväksi esillä olevan 2 79614 keksinnön mukaista testipakkausta.
Keksintö koskee testipakkausta Streptococcus A:n määrittämiseksi. Testipakkaukselle on tunnusomaista, että se käsittää näytteenottovälineen mahdollisesti Streptococ-5 cus A:ta sisältävän biologisen näytteen keräämiseksi, jolloin näytteenottoväline käsittää synteettistä materiaalia olevan puikon, jonka toisessa päässä on tuppo, joka on muodostettu Streptococcus A-antigeeniä keräävästä regeneroidusta selluloosakuidusta; säiliön, jossa on uuttorea-10 genssia, joka sisältää organismin S.albus tuottamia entsyymejä Streptococcus A-antigeenin vapauttamiseksi tuposta; ja säiliön, jossa on indikaattorireagenssia, joka sisältää Streptococcus A-antigeenin suhteen reaktiivista vasta-ainetta.
15 Keksintö koskee myös menetelmää Streptococcus A:n toteamiseksi. Menetelmälle on tunnusomaista, että näytteenottoväline, joka käsittää synteetistä materiaalia olevan puikon, jonka toisessa päässä on tuppo, joka on muodostettu Streptococcus A-antigeenia keräävästä regeneroi-20 dusta selluloosakuidusta, saatetaan kosketukseen Streptococcus A:ta mahdollisesti sisältävän biologisen näytteen kanssa; tuppo kastetaan uuttoreagenssiin, joka sisältää organismin S. albus tuottamia entsyymejä Streptococcus A-antigeenin vapauttamiseksi tuposta; uuttoreagensissa oleva 25 tuppo inkuboidaan niin kauan, että antigeeni vapautuu tuposta; osa uuttoreagenssista lisätään indikaattorireagens-siin, joka sisältää antigeenin suhteen reaktiivisesti vasta-ainetta; ja mahdollinen vasta-aineantigeeni-reaktio todetaan.
30 Esillä olevan keksinnön on havaittu edistävän luo tettavien tulosten saantia. Regeneroitu selluloosakuitu, joka yleisesti tunnetaan viskoosina, on tehokkain streptokokki A-antigeenin kokoamisessa ja vapauttamisessa (entsyymien läsnäollessa), sitä vastoin luonnon selluloosakui-35 dut, esim. puuvilla, eivät toimi yhtä hyvin. On suotavaa, 3 79614 että puikko on huokosetonta ainetta, mieluiten synteettistä, huokosetonta ainetta, kuten esimerkiksi puuta. Uutta-misreagenssi sisältää entsyymiseoksen, jota bakteeri Streptomyces albus valmistaa. Edullinen indikaattorirea-5 genssi on agglutinaatioreagenssi, jossa vasta-aine reagoi streptokokki A-antigeenin kanssa, joka on sidottu lateksi-partikkeleihin, niin että partikkelit agglutinoivat antigeeni -vasta-ainereaktion tuloksena.
Keksinnön mukainen menetelmä voidaan suorittaa hy-10 vin lyhyessä ajassa, se on, nopeammin kuin 70 minuutissa, ja käyttämättä monimutkaista laitteistoa. Koe on täten mahdollista suorittaa lääkärin vastaanotolla, ja se antaa lääkärille mahdollisuuden määrätä hoito-ohjelma testitulosten perusteella samana päivänä. Kokeen perusteella ha-15 vaitaan streptokokki A-antigeenin läsnäolo biologisessa näytteessä, kuten esimerkiksi nielun penslausnäytteessä, pikemmin kuin streptokokki A-organismin itsensä kasvu, kuten on tehty viljetytesteissä. Sen tähden oleellisesti poistuu pitkä inkubointiaika, joka tarvitaan selektiivi-20 siin viljelytesteihin. Keksinnön etuja ei kuitenkaan saavuteta herkkyyden tai tarkkuuden kustannuksella, koska tutkimukset ovat osoittaneet, että keksinnön mukaisen testin sekä herkkyys että tarkkuus lähestyvät 100 %.
Esillä oleva keksintö antaa käyttöön materiaalit 25 ja reagenssit, joilla streptokokki A-antigeenin läsnäolo biologisessa näytteessä havaitaan tarkasti. Näyte kerätään näytteenottoajan avulla, johon kuuluvat näytteenottopuikko sekä kuitutuppo, joka sijaitsee puikon toisessa päässä. Infektioalue penslataan kuitutukolla, jolloin kuidut ko-30 koavat streptokokki A-antigeenin. Tämän jälkeen tuppo kastetaan vettä sisältävään uuttamisreagenssiln, jossa on Streptomyces albuksen tuottamia entsyymejä ja jotka vapauttavat Streptococcus A-antigeenin vanutuposta. Muodostetaan indikaattorireagenssi, joka sisältää vasta-ainetta, 35 joka reagoi spesifisesti Streptococcus A-antigeenin kans- 4 79614 sa. Kun uuttamisreagenssi, joka sisältää Streptococcus A-antigeenin (jos Streptococcus A-antigeenia on läsnä biologisessa näytteessä), lisätään indikaattorireagenssiin, niin havaittavissa oleva vasta-aine-antigeeni-reaktio ta-5 pahtuu.
Keksinnön tärkeä piirre on uuttamisreagenssin käyttö, joka sisältää entsyymejä, jotka vapauttavat Streptococcus A-antigeenin vanutuposta. On havaittu, etteivät yksinomaan infektoituneen alueen penslaus vanutupolla ja 10 vanutupon asettaminen entsyymittömään liuokseen anna luotettavia tuloksia. On luultavaa, että Streptococcus A-an-tigeenillä on taipumus tarttua vanutupon säikeisiin pikemmin kuin liueta vettä sisältävään väliaineeseen, joka ei sisällä entsyymejä. Kuitenkin havaitaan, että entsyymi-15 seoksen, joka on saatu Streptomyces albukselta, läsnäollessa Streptococcus A-antigeeni vapautuu vettä sisältävään väliaineeseen. Antigeenin vapautumismekanismi on tuntematon; uskotaan, että entsyymit vapauttavat sen osan Streptococcus A-antigeenimolekyylistä, joka sisältää vasta-ai-20 neen kanssa reagoivan determinantin (regoivat determinantit) siitä osasta molekyyliä, jolla on taipumus tarttua vanutupon kuituihin.
Uuttamisreagenssi, joka sisältää Streptomyces al-bus-entsyymejä, valmistetaan seuraavasti: 25 Streptomyces albusta (NCTC/^07807) kasvatetaan 25°C:ssa seuraavasti 5 päivän ajan Mycophil (kauppanimi)-agarissa, joka saadaan BBL Microbiology Division of Becto-nilta, Dickinson and Commpany, Cockeysville, Maryland. Sitten organismit siirretään 40 ml:aan nestemäistä elatus-30 ainetta ja niiden annetaan kasvaa 5 päivän ajan 25°C:ssa samalla ravistellen. Nestemäinen elatusaine sisältää hii-vauutetta, polypeptonia, dekstroosia, polysorbaatti 80 (Tween) sekä yksiemäksistä kaliumfosfaattia.
Viiden päivän kuluttua 40 ml:n erä nestemäistä ela-35 tusainetta siirretään 400 ml:aan samaa elatusainetta ja 5 79614
Inkuboidaan 25°C:ssa samalla ravistellen. 5-14 päivän välisenä aikana otetaan elatusalneessa eriä ja arvioidaan niiden kyvyn suhteen liuottaa Streptococcus pyogenes (ATCC//8135) -soluja.
5 Elatusalneen neste kootaan sentrlfugolmalla 10 000 - 13 000 x g:llä 30 minuutin ajan. Sitten supernatanttl suodatetaan juustoliinan läpi ja dialysoldaan 0,05 M Trls, pH 8,0, vastaan. Sitten erät lyofilisoidaan ja niitä säilytetään 4°C:ssa.
10 Lisäksi havaitaan, että näytteenottajan oikea va linta on tärkeä tekijä, joka vaikuttaa testin luotettavuuteen. Monet yleiset näytteenottajatyypit, joita on käytetty näytteiden saamiseen, eivät toimi hyvin kyseessä olevan keksinnön mukaisessa testissä. Erityisesti luonnon 15 selluloosamateriaalin on havaittu toimivan hyvin huonosti. Keksinnön erään tärkeän näkökohdan mukaisesti on erittäin suotavaa, että viljelmänäytteenottotuppo koostuu uudistetuista selluloosa (viskoosi) -kuiduista. Viskoosi on edullinen, ei ainoastaan puuvillaan nähden, vaan muihin syn-20 teettisiin kuituihin nähden, jotka muuten ovat käyttökelpoisia viljelmänäytteenottotuppoja valmistettaessa.
Eräs toinen tärkeä havainto kyseessä olevan keksinnön suhteen on, että näytteenottopuikot, jotka on tehty luonnon materiaalista, kuten esimerkiksi puusta, eivät 25 sovellu hyvien tulosten saamiseen. Keksinnön erään toisen näkökohdan mukaan on edullista, että näytteenottopuikot on tehty synteettisestä materiaalista, erityisesti huokoset-tomasta materiaalista, huokosettomat muovit, kuten esimerkiksi polystyreeni, polykarbonaatti, polypropyleeni, poly-30 etyleeni, polytetrafluorieteleeni, polyamidit ja polyak-ryylit mukaanluettuina.
On yllättävää, että regeneroitu selluloosakuitu on tehokkainta Streptococcus A-antigeenia koottaessa, kun taas luonnon selluloosamateriaalit, kuten esimerkiksi puu-35 villa ja puu ovat sopimattomia. Tämä havainto ilmaisee, 6 79614 että järjestelmä on hyvin herkkä aineille, joita on läsnä luonnonmateriaaleissa selluloosan kanssa. Mekanismia tai mekanismeja, jotka tämän herkkyyden aiheuttavat, ei ole vielä määritetty; kuitenkin saattaa kytkeytyä useita teki-5 jöitä. Saattaa olla, että luonnon selluloosamateriaalit sisältävät aineita, jotka inhiboivat entsyymejä, joita käytetään vapauttamaan Streptococcus A-antigeeni kuiduista. Eräs toinen mahdollisuus on, että luonnon selluloosa-kuidut sisältävät aineita, jotka reagoivat Streptococcus 10 A-antigeenin antigeenisesti aktiivisten kohtien kanssa tehden antigeenin sellaiseksi, ettei vasta-aine voi sitä tunnistaa. Huokoinen materiaali, kuten esimerkiksi puu, saattaa edelleen häiritä selviä tuloksia absorboimalla antigeeniä, entsyymejä tai muita reagensseja. Mahdolliset 15 mekanismit, joilla luonnon selluloosamateriaalit häiritsevät Streptococcus A-antigeenin havaitsemista, esitetään mahdollisina selityksinä yllättävän ylivoimaisille tuloksille, jotka on saavutettu synteettisiä materiaaleja käyttämällä; kuitenkin, koska mahdollisia selityksiä ei ole 20 läheisesti tutkittu, patentinhakijat eivät sitoudu sellaisiin mahdollisiin selityksiin tulosten suhteen.
Keksinnön mukaisen edullisen suoritusmuoton mukaisesti Streptococcus A-antigeenin läsnäolo uuttamisreagens-sissa havaitaan agglutinaation osoitusreagenssilla, joka 25 sisältää lietettyjä lateksipartikkeleita, joihin antigeenin suhteen reagoiva vasta-aine on sidottu. Antigeenimole-kyylien sitoutuminen erilaisiin lateksipartikkeleihin kytkettyihin vasta-aineisiin saa aikaan lateksipartikke-leiden ristiinliittymisen aiheuttaen niiden agglutinoitu-30 misen ja saostumisen suspensiosta. Agglutinaatio voidaan havaita paljain silmin, mutta mieluummin sitä tutkitaan mikroskoopilla.
Sopivia lateksipartikkeleita voidaan ostaa karbok-siloidussa muodossa Polysciences, Inc.:Itä, Warrington, 35 Pennsylvania. Partikkeleiden kokoalue on noin 0,2 mikro- 7 79614 nista noin 1,0 mikroniin, ja tyypillisesti vasta-ainemole-kyylejä on noin 1 x 1010 Ja noin 1 x 1012 molekyylia partikkelin pinta-alan cm2 kohti. Indikaattorireagenssissa on noin 1 x 10'3 ja noin 10 x 10'3 gm vasta-aineeseen sidot-5 tua lateksipartikkelia millilitraa kohti. Partikkeleiden valmistamiseen käytettävä vasta-aine saadaan mieluummin immunisoimalla kaniineja ryhmän A beetahemolyyttisen streptokokin kannalla T-23. Aktiivinen vasta-aine saadaan näiden kaniinien seerumista yhdistelmällä, jossa käytetään 10 50 %:isesti kyllästettyä (NH^jSO^ sekä ioninvaihtokroma- tografiaa DEAE-selluloosan (DE-52, Whatman) avulla, joka tasapainotetaan Tris-puskurilla, 0,01 M, pH 8,0. Aktiivinen vasta-ainejae eluoidaan DEAE-selluloosapylväästä käyttäen NaCl-gradienttia. Aktiiviset vasta-ainejakeet eluoi-15 daan pylväästä 0,04-0,09 M NaClilla.
Lateksi-vasta-aine-reagenssi valmistetaan kytkemällä kaniinin anti-ryhmä A Streptococcus-vasta-aine karbok-siloituun lateksiin käyttäen kondensoivana aineena 1-etyy-li-3-(3-dimetyyli-aminopropyyli)karbodi-imidiä (EDC).
20 Tulisi olla selvää, ettei keksintö rajoitu Strep tococcus A:n havaitsemiseen vasta-aineeseen sidottujen lateksipartikkeleiden agglutinaation avulla ja monia muita sopivia menetelmiä vasta-aine-antigeeni-reaktioiden havaitsemiseksi voitaisiin käyttää, radioimmunologinen 25 määritys sekä immunofluoroivat tekniikat mukaanlukien, mutta ei niihin rajoittuen. Eräs immunoagglutinaatiotek-niikan etu on, että se on yksinkertainen suorittaa, se antaa tulokset minuuttien sisällä ja se on selvästi luettavissa.
30 Entsyymiä sisältävä uuttamisreagenssi on tyypilli sesti lyofilisoidussa muodossa uudelleen liuottamista varten. Liuottamisen jälkeen uuttamisreagenssia saatetaan säilyttää jääkaapissa (noin 2-8°C) noin 10 päivän ajan. Indikaattorireagenssi annetaan käyttöön stabiilina suspen-35 siona, ja sitä voidaan säilyttää jääkaapissa noin 12 kuu- 8 79614 kauden ajan. Suspensiota ravistellaan ennen käyttöä. Koe-tarvikkeet tarjoavat myös paremmin lisävarusteita kokeen suorittamista varten sen seikan varmistamiseksi, että käytetään sopivimpia tarvikkeita ja estetään materiaalien 5 käyttö, joka saattaa häiritä testiä. Sellaisiin tarvikkeisiin saattaa kuulua sopivan kokoisia koeputkia, joissa antigeeni uutetaan vanutupoista, monikammioisia koelevyjä agglutinaatioreaktion suorittamista varten, puikkoja käsin suoritettavaa sekoitusta varten, siirtopipettien kärkiä 10 jne. Koetarvikkeiden tulisi myös sisältää positiivisia (Streptococcus A-antigeenia sisältäviä) sekä negatiivisia kontrollinäytteitä. On myös edullista, että lisäkontrol-lina koetarvikkeet sisältävät lateksisuspension, joka ei sisällä mitään vasta-aineita, suoraan vertailua varten 15 (pitäen mielessä, että vieläpä agglutinoitumaton suspensio näyttää jonkin verran samealta).
Uudelleen muodostettu uuttamisreagenssi pipetoidaan puhtaisiin koeputkiin (tyypillisesti noin 0,5 ml putkea kohti). Näytteenottajia käytetään infektoituneiden aluei-20 den, esim. nielun, penslaukseen ja sitten kunkin puikon päässä oleva tuppo asetetaan kukin yhteen koeputkista. Putkia inkuboidaan ainakin 30 minuutin ajan ja mieluummin tunnin ajan noin kehonlämpötilassa (37°C), jotta entsyymi vapauttaa Streoptococcus A:n kuidusta. Inkuboinnin aikana 25 on edullista, että koeputki peitetään jollain sopivalla tavalla haihtumisen estämiseksi. Inkubointiajan jälkeen näytteenottovanutuppoa puristetaan putken seinämiä vasten, jotta neste poistuu siitä, kun näytteenottaja vedetään pois. Sitten näytteenottaja heitetään pois. Erä, 30 esim. 50 μΐ kutakin näytettä pannaan kumpaankin näytelevyn kahdesta kammiosta, siten että erät edustavat positiivisia ja negatiivisia kontrolleja, jolloin saadaan käyttöön kolme sarjaa parillisia kammioita. Yhteen parillisista kammioista lisätään vasta-ainetta sisältävää lateksisuspen-35 siota, ja toiseen kahdesta kammiosta lisätään vasta-ainee- 9 79614 tonta lateksisuspensiota. Käyttämällä yksityisiä, muovisia sekoituspuikkoja sekoitetaan reagenssit kussakin kammiossa. Näytelevy peitetään ja asetetaan mekaaniseen pyörijään 4 minuutiksi. Tulokset ovat välittömästi luettavissa.
5 Vaikka paljain silmin on nähtävissä voimakas agglutinaa-tio-reaktio, on edullista, että kammioissa olevia seoksia tarkastellaan mikroskoopin alla. Ero, joka on havaittavissa vasta-ainetta sisältävän lateksisuspensiokammion ja lateksisuspensiokammion välillä, jossa ei ole vasta-ainet-10 ta, ilmaisee Streptoccus A:n läsnäolon penslatulla alueella. Jos eroa ei ole havaittavissa kahden kammion välillä, voidaan päätellä, että Streptococcus A:a ei ole läsnä.
Esimerkki 1 4,0 ml karboksHoitua lateksia, jossa on 2,5 paino-15 prosenttia kiinteitä aineita ja joka on saatu Polyscien-ces, Inc.:Itä, Warrington, PA, pestään kolme kertaa tislatulla vedellä. Viimeisen pesun jälkeen partikkelit lle-tetään 4,0 ml:aan tislattua vettä. Lisätään yksi millilit-ra 0,05 M KH2 P04, pH 4,5. Lateksin suspensio pannaan mag-20 neettisekoittajaan ja sitä pidetään 22°C:ssa. Lisätään 5,0 ml liuosta, jossa on 2 painoprosenttia EDC (saatu Sigma Chemical Companyltä, St. Louis, MO), ja annetaan reagoida 3,5 tunnin ajan. Karbodi-imidilateksi pestään kerran keittosuolaliuoksella (0,9 % NaCl) sekä lietetään 5,0 ml:aan 25 keittosuolaliuosta (0,9 % NaCl).
1,2 mg kaniinista saatua vasta-ainetta liuotetaan 5,0 ml:aan boraattia, pH 8,5, ja lisätään 5,0 ml aktivoitua lateksisuspensiota, joka on keittosuolaliuoksessa. Lateksin ja kaniinista saadun vasta-aineen annetaan rea-30 goida 20 tunnin ajan 22°C:ssa. Pinnassa sijaitsevien kar-boksyyliryhmien neutraloimiseksi, jotka eivät ole sitoneet vasta-ainetta, lisätään 5 mM etanoliamiinin liuosta, ja sen jälkeen härän seerumin albumiinia 2 painoprosentin konsentraationa. Vasta-aine-lateksi pestään ja otetaan 0,1 35 M glysiiniin, pH 8,2, joka sisältää 0,9 % NaCl, 0,2 % 10 7961 4
NaN3, 0,2 % BSA sekä 0,05 % Tween-20, ja jota säilytetään 4°C:ssa.
Esimerkki 2
Edellä kuvatun A-ryhmän streptokokin agglutinaatio-5 testin suoritus määritettiin monikeskuksisen kliinisen koetulosten arvostelun perusteella. Lateksi-agglutinaatio-kokeen tuloksia verrattiin viljelytuloksiin.
Nielun penslaukseen käytetyt vanutupot koottiin 1440 aikuiselta sekä lapselta, joilla oli nielutulehduksen 10 oireita. Näytteet koottiin viskoosivanutuppoon ja kuljetettiin laboratorioon modifioidussa Stuartin elatusainees-sa (Marion Culturette). Ennen keksinnön mukaisen määrityksen suorittamista kutakin vanutuppoa käytettiin lampaan-veri agar-levyn siirrostamiseen viljelyä varten. 18-24 15 tunnin pituisen inkuboinnin jälkeen beetahemolyyttiset pesäkkeet ryhmiteltiin kapillaarisaostuskokeen perusteella. Keksinnön mukainen lateksi-agglutinaatio-koemenetelmä täsmää vlljelytulosten kanssa 95 %:ssa (1366/1440) tapauksessa vanutupponäytteitä. Tulokset on koottu yhteen tau-20 lukossa 1.
Taulukko 1
Agglutinaatiotestin ja vlljelytulosten välinen yhteensopivuus
Viljelytulokset Agglutinaatio Agglutinaatio 25 positiivinen negatiivinen
Positiivinen ryhmän A streptokokille - 309 281 28 30
Negatiivinen ryhmän A streptokokille - 1131 46 1085 35 il 7961 4
Esimerkki 3 A-ryhmän streptokokin lateksi-agglutlnaatio-kokeen herkkyys määritettiin 309 nielunpenslausnäytteestä, joiden oli todettu olevan positiivisia beetahemolyyttisen strep-5 tokokin viljelyn perusteella, Ja jotka varmistettiin ryhmä A:ksi kapillaarisaostuskokeen perusteella. Kaksisataakah-deksankymmentäyksi (281) näistä näytteistä (91 %) oli positiivisia keksinnön mukaisen lateksl-agglutinaatio-kokeen perusteella. Kokeen herkkyys oli 95 %, jos hylättiin ne 10 vanutupot, joista viljelmällä kasvoi vähemmän kuin 10 A-ryhmän streptokokin pesäkettä.
Esimerkki 4
Ryhmän A streptokokin lateksi-agglutlnaatio-kokeen spesifisyys määritettiin 1067 nielunpenslaustuposta, jotka 15 tuottivat beetahemolyyttisen streptokokin suhteen negatiivisia viljelmiä, sekä 64 nielunpenslaustuposta, jotka tuottivat viljelmiä, joilla kasvoi beetahemolyyttistä streptokokkia, jonka kapillaarisaostumakokeen perusteella varmistettiin olevan muuta kuin ryhmää A. Näistä 1085 näy-20 tettä oli agglutinaation suhteen negatiivisia tuottaen 96 %:n spesifisyyden.

Claims (8)

1. Testipakkaus Streptococcus A:n määrittämiseksi, tunnettu siitä, että se käsittää näytteenottoväli-5 neen mahdollisesti Streptococcus A:ta sisältävän biologisen näytteen keräämiseksi, jolloin näytteenottoväline käsittää synteettistä materiaalia olevan puikon, jonka toisessa päässä on tuppo, joka on muodostettu Streptococcus A-antigeeniä keräävästä regeneroidusta selluloosakuidusta; 10 säiliön, jossa on uuttoreagenssia, joka sisältää organismin S.albus tuottamia entsyymejä Streptococcus A-antigee-nin vapauttamiseksi tuposta; ja säiliön, jossa on indi-kaattorireagenssia, joka sisältää Streptococcus A-antigee-nin suhteen reaktiivista vasta-ainetta.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen testipakkaus, tunnettu siitä, että puikko on muodostettu ei-huo-koisesta materiaalista.
3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen testipakkaus, tunnettu siitä, että tuppo on muodostettu regene- 20 roidusta selluloosakuidusta ja puikko on muodostettu muovista.
4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen testipakkaus, tunnettu siitä, että indikaattorireagenssi sisältää vasta-ainetta, joka on sidottu suspendoituihin lateksi- 25 hiukkasiin, jotka agglutinoituvat, kun vasta-aine sitoutuu antigeeniin.
5. Menetelmä Streptococcus A:n toteamiseksi, tunnettu siitä, että näytteenottoväline, joka käsittää synteetistä materiaalia olevan puikon, jonka toi- 30 sessa päässä on tuppo, joka on muodostettu Streptococcus A-antigeenia keräävästä regeneroidusta selluloosakuidusta, saatetaan kosketukseen Streptococcus A:ta mahdollisesti sisältävän biologisen näytteen kanssa; tuppo kastetaan uuttoreagenssiin, joka sisältää organismin S. albus tuot- 35 tamia entsyymejä Streptococcus A-antigeenin vapauttamisek- i3 79614 si tuposta; uuttoreagensissa oleva tuppo inkuboldaan niin kauan, että antigeeni vapautuu tuposta; osa uuttoreagens-sista lisätään indikaattorireagenssiin, joka sisältää antigeenin suhteen reaktiivisesti vasta-ainetta; ja mahdol-5 linen vasta-aineantigeeni-reaktio todetaan.
6. Patenttivaatimuksen 5 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että puikko on muodostettu ei-huo-koisesta materiaalista.
7. Patenttivaatimuksen 5 mukainen menetelmä, 10 tunnettu siitä, että tuppo on muodostettu regeneroidusta selluloosakuidusta ja puikko on muodostettu muovista.
8. Patenttivaatimuksen 5 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että indikaattorireagenssi sisältää 15 vasta-ainetta, joka on sidottu suspendoituihin lateksi-hiukkasi in, jotka agglutinoituvat, kun vasta-aine sitoutuu antigeeniin. i4 7961 4
FI844676A 1984-02-27 1984-11-28 Testfoerpackning och foerfarande foer bestaemning av streptococcus a FI79614C (fi)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US58417584 1984-02-27
US06/584,175 US4618576A (en) 1984-02-27 1984-02-27 Diagnostic test for Streptococcus A

Publications (4)

Publication Number Publication Date
FI844676A0 FI844676A0 (fi) 1984-11-28
FI844676L FI844676L (fi) 1985-08-28
FI79614B true FI79614B (fi) 1989-09-29
FI79614C FI79614C (fi) 1990-01-10

Family

ID=24336209

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI844676A FI79614C (fi) 1984-02-27 1984-11-28 Testfoerpackning och foerfarande foer bestaemning av streptococcus a

Country Status (9)

Country Link
US (1) US4618576A (fi)
EP (1) EP0153477B1 (fi)
JP (1) JPS60188847A (fi)
AU (1) AU580971B2 (fi)
CA (1) CA1227131A (fi)
DE (1) DE3465110D1 (fi)
DK (1) DK161219C (fi)
FI (1) FI79614C (fi)
MY (1) MY101456A (fi)

Families Citing this family (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB8414273D0 (en) * 1984-06-05 1984-07-11 Oxoid Ltd Identifying streptococcal grouping
US4673639A (en) * 1985-09-09 1987-06-16 Allegheny-Singer Research Institute Dry form micronitrous acid streptococci extraction-agglutination test
US4794076A (en) * 1985-09-23 1988-12-27 Vxr, Inc. Simultaneous extraction of a ligand from a sample and capture by anti-ligands therefor in ligand/anti-ligand assays
US4851337A (en) * 1986-01-08 1989-07-25 Hygeia Sciences, Inc. Extraction of test substances
CA1291032C (en) * 1986-02-05 1991-10-22 Hamish Mckenzie Method of detecting urinary tract infection or inflammation
GB8618443D0 (en) * 1986-07-29 1986-09-03 Univ London Monoclonal antibodies
EP0285649A4 (en) * 1986-10-08 1990-06-27 David Bernstein METHOD FOR EXPOSING ANTIGENS OF GROUP A STREPTOCOCCUS AND IMPROVED DIAGNOSTIC TEST FOR THE IDENTIFICATION OF GROUP A STREPTOCOCCUS
US4847199A (en) * 1987-02-27 1989-07-11 Eastman Kodak Company Agglutination immunoassay and kit for determination of a multivalent immune species using a buffered salt wash solution
US4997772A (en) * 1987-09-18 1991-03-05 Eastman Kodak Company Water-insoluble particle and immunoreactive reagent, analytical elements and methods of use
US4812414A (en) * 1987-09-18 1989-03-14 Eastman Kodak Company Immunoreactive reagent particles having tracer, receptor molecules and protein of pI less than 6
USRE33850E (en) * 1987-09-18 1992-03-17 Eastman Kodak Company Test kit and method for the determination of Streptococcus A antigen
US4746614A (en) * 1987-09-18 1988-05-24 Eastman Kodak Company Extraction device
US5084005A (en) * 1988-07-13 1992-01-28 Becton, Dickinson And Company Swab for collection of biological samples
JPH02170053A (ja) * 1988-12-23 1990-06-29 Meiji Seika Kaisha Ltd 微生物の検出方法及び装置
GB2255561B (en) * 1991-04-20 1995-06-21 Agricultural & Food Res Lysins from bacteriophages
IES58662B2 (en) * 1993-02-23 1993-11-03 Trinity Res Ltd Device for the processing of saliva for use in an immunoassay
WO1994018891A1 (en) * 1993-02-23 1994-09-01 Trinity Research Limited Apparatus for the collection and recovery of saliva for use in diagnostic assays
FI101809B1 (fi) * 1996-06-11 1998-08-31 Valtion Teknillinen Menetelmä näytteen analysoimiseksi hiilihydraattimatriisista
US6790661B1 (en) 1999-07-16 2004-09-14 Verax Biomedical, Inc. System for detecting bacteria in blood, blood products, and fluids of tissues
CA2511372C (en) * 2002-12-26 2014-07-08 Jeff D. Debad Methods, compositions and kits for biomarker extraction
GB0417601D0 (en) * 2004-08-06 2004-09-08 Inverness Medical Switzerland Assay device & method
US20080166701A1 (en) * 2005-07-25 2008-07-10 Arkray, Inc. Immunoassay Method and Immunoassay Kit to Be Used Therein
ES2761654T3 (es) * 2010-07-20 2020-05-20 Becton Dickinson Co Procedimiento para vincular resultados de pruebas diagnósticas rápidas de punto de atención con procedimientos basados en laboratorio
IN2014DN09302A (fi) 2012-04-13 2015-07-10 Becton Dickinson Co
CN104644693B (zh) * 2015-02-16 2018-08-14 国药集团鲁亚(山东)制药有限公司 注射用a群链球菌药物的制备方法

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3368549A (en) * 1964-10-19 1968-02-13 S E Massengill Company Diagnostic swabs
US3790447A (en) * 1972-07-05 1974-02-05 Abbott Lab Streptococci diagnostic method
US4203724A (en) * 1976-08-16 1980-05-20 Mitsubishi Chemical Industries Limited Method and apparatus for the measurement of antigens and antibodies
JPS5742634A (en) * 1980-08-27 1982-03-10 Seikagaku Kogyo Co Ltd Latex sensitized with group polysaccharide antibody in streptococcus hemolyticus
US4497900A (en) * 1982-04-12 1985-02-05 Abbott Laboratories Immunoassay for Neisseria gonorrhoeae antigens
EP0109012A3 (en) * 1982-11-12 1984-08-08 Abbott Laboratories Determination of streptococci
US4525452A (en) * 1983-01-24 1985-06-25 Btc Diagnostics Limited Partnership Enzyme immunoassay with step of immersing sample in deionized water
AU2346684A (en) * 1983-04-18 1984-11-07 Quidel Removal of self-binding and staph a cross-reactivity of anti-strep antibody
US4582810A (en) * 1983-09-30 1986-04-15 Becton, Dickinson And Company Immuno-agglutination particle suspensions

Also Published As

Publication number Publication date
FI79614C (fi) 1990-01-10
FI844676L (fi) 1985-08-28
DK161219C (da) 1991-11-25
DE3465110D1 (en) 1987-09-03
EP0153477B1 (en) 1987-07-29
CA1227131A (en) 1987-09-22
DK72085A (da) 1985-08-28
US4618576A (en) 1986-10-21
DK161219B (da) 1991-06-10
EP0153477A1 (en) 1985-09-04
AU580971B2 (en) 1989-02-09
MY101456A (en) 1991-11-18
JPS60188847A (ja) 1985-09-26
DK72085D0 (da) 1985-02-15
FI844676A0 (fi) 1984-11-28
AU3474184A (en) 1985-09-05
JPH0315147B2 (fi) 1991-02-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
FI79614B (fi) Testfoerpackning och foerfarande foer bestaemning av streptococcus a
US4847199A (en) Agglutination immunoassay and kit for determination of a multivalent immune species using a buffered salt wash solution
JP2837846B2 (ja) グループa連鎖球菌抗原を露出させる方法およびグループa連鎖球菌を同定するための改善された診断試験
US4474878A (en) Sandwich EIA for antigen associated with hepatitis
Kelen et al. Rapid detection of Australia/SH antigen and antibody by a simple and sensitive technique of immunoelectronmicroscopy
US4642285A (en) Sandwich EIA for antigen
US4157280A (en) Test set for detecting the presence of antigens associated with hepatitis
DK174032B1 (da) Sæt samt fremgangsmåde til immunometrisk dosering, der kan anvendes på hele celler
US5468618A (en) Article for performing immunological assays utilizing organic dyes to immobilize immunologically reactive components to a solid phase support and methods for producing and utilizing same
CA1124642A (en) Antibody adsorbed support method for carcinoembryonic antigen assay
CA2076592A1 (en) Method, test device and kit for assay of specific binding ligand using controlled flow through filtration membrane
Zugker et al. Preparation of quality control specimens for coagulation
US4808524A (en) Test kit and method for the determination of Streptococcus A antigen
JPH02140147A (ja) 赤血球から血漿を分離する方法および装置
Smink et al. Immunologic demonstration of a deficiency of Hageman factor-like material in Hageman trait
USRE33850E (en) Test kit and method for the determination of Streptococcus A antigen
JPS59107263A (ja) ストレプトコツカス類の測定法
AU602670B2 (en) Monoclonal antibodies useful in the identification of microorganisms causing peridontal disease
JPS60164250A (ja) ベ−タ溶血性連鎖球菌抗原の検出方法
CA1106281A (en) Detection of antigen associated with hepatitis by "sandwich" method
Sheagren et al. Technical aspects of the Staphylococcus aureus teichoic acid antibody assay: gel diffusion and counterimmunoelecrophoretic assays, antigen preparation, antigen selection, concentration effects, and cross-reactions with other organisms
EP0280557B1 (en) Test kit, extraction device and method for the determination of streptococcus a antigen
EP0451687A2 (en) Chlamydia half-sandwich immunoassay
CA1291032C (en) Method of detecting urinary tract infection or inflammation
JPH0510954A (ja) バクテロイデス・インターメデイウス、バクテロイデス・ギンギバリスまたはアクチノバシラス・アクチノマイセテムコミタンスの検出用製品、試験キツトおよびサンドイツチアツセイ

Legal Events

Date Code Title Description
MM Patent lapsed
MM Patent lapsed

Owner name: BECTON, DICKINSON AND COMPANY