FI72717C - Process for the preparation of novel therapeutically useful 2-hydroxymethyl-3,4,5-trihydroxypiperidine derivatives - Google Patents

Description

1 7271 71 7271 7

Menetelmä uusien, terapeuttisesti käyttökelpoisten 2-hyd-roksimetyyli-3,4,5-trihydroksipiperidiinijohdannaisten valmistamiseksi 5 Jakamalla erotettu hakemuksesta 782607Process for the preparation of new therapeutically useful 2-hydroxymethyl-3,4,5-trihydroxypiperidine derivatives 5 Separated from application 782607

Tämän keksinnön kohteena on menetelmä uusien, terapeuttisesti käyttökelpoisten 2-hydroksimetyyli-3,4,5-trihydroksipiperidiini johdannaisten valmistamiseksi, joilla on 10 yleinen kaava IThe present invention relates to a process for the preparation of novel therapeutically useful 2-hydroxymethyl-3,4,5-trihydroxypiperidine derivatives of general formula I.

CH OH RCH OH R

v / HO"<2VR2 (I)v / HO "<2VR2 (I)

15 HO / ^OH15 HO / ^ OH

jossa on C^_^g-alkyyli ja on -CN, -COOR', -CONHR', -CH2-NH-CO-R' tai -CH2-NH-S02R', jolloin R' on mahdolli-20 sesti fenyyliryhmällä substituoitu C^_g-alkyyliryhmä tai mahdollisesti C, -alkyvliryhmällä substituoitu fenyyli-wherein C 1-6 alkyl is -CN, -COOR ', -CONHR', -CH 2 -NH-CO-R 'or -CH 2 -NH-SO 2 R', wherein R 'is optionally substituted with a phenyl group A C 1-6 alkyl group or a phenyl group optionally substituted by a C 1-6 alkyl group;

1“D1, "D

ryhmä. Näitä uusia kaavan I mukaisia yhdisteitä voidaan käyttää lääkkeinä erityisesti sokeritautia, hyperlipemia?, ja liikalihavuutta vastaan sekä vaikuttamaan eläimillä 25 liha/rasva suhteen lihaosuutta edistävästi.group. These new compounds of the formula I can be used as medicaments, in particular against diabetes, hyperlipemia, and obesity, and to have a meat-to-fat ratio in animals.

Kaavan I mukaisten yhdisteiden edullista stereoiso-meerimuotoa voidaan kuvata kaavalla IbThe preferred stereoisomeric form of the compounds of formula I may be represented by formula Ib

CH OHCH OH

HO (Ib) OH 1HO (Ib) OH 1

Keksintö koskee lisäksi kaavojen I ja Ib mukaisten yhdisteiden farmaseuttisesti hyväksyttäviä suoloja, kuten esimerkiksi klorideja, sulfaatteja, asetaatteja, karbonaatteja ja oksalaatteja.The invention further relates to pharmaceutically acceptable salts of the compounds of formulas I and Ib, such as chlorides, sulphates, acetates, carbonates and oxalates.

--- 1. ___ 2 7271 7--- 1. ___ 2 7271 7

Erityisen edullisesti on -CN.Particularly preferably is -CN.

On havaittu, että uudet kaavan I mukaiset yhdisteet ovat vahvoja τί-glukosidaasien, varsinkin disakkaridaasien inhibiittoreita. Sen vuoksi uudet yhdisteet ovat arvokkai-5 ta, moniin aineenvaihduntatapahtumiin vaikuttavia aineita.It has been found that the novel compounds of the formula I are potent inhibitors of τί-glucosidases, in particular disaccharidases. Therefore, the new compounds are valuable substances that affect many metabolic events.

DE-hakemusjulkaisusta 2 656 602 tunnettuun 2-hydroksimetyyli- 3,4,5-trinydroksipiperidiiniin verrattuina uusilla yhdisteillä on edullisia terapeuttisia ominaisuuksia.Compared to 2-hydroxymethyl-3,4,5-trinydroxypiperidine known from DE-A-2 656 602, the new compounds have advantageous therapeutic properties.

Keksinnön mukaiselle menetelmälle on tunnusomaista, 10 ettäThe method according to the invention is characterized in that

1) yhdiste, jolla on kaava II1) a compound of formula II

CH OH 2_Θ H0—{ N}2—SO® 15 \_/ 3 (II)CH OH 2_Θ H0— {N} 2 — SO® 15 \ _ / 3 (II)

HO^ OHHO ^ OH

saatetaan reagoimaan syaanivetyhapon kanssa yhdisteeksi, jolla 20 on rakenne 1'is reacted with hydrocyanic acid to give a compound having the structure 1 '

CHo0H /-NHCH0OH / -NH

HO-^-CH (I·)HO - ^ - CH (I ·)

He/ \>HHe / \> H

2a) saadun, rakenteen 1' mukaisen yhdisteen sekundäärinen amiinityppiatomia alkyloidaan; tai 30 2b) saatu, rakenteen 1' mukainen yhdiste joko (i) hydrataan katalyyttisesti yhdisteeksi, jolla on rakenne I" ch2oh2a) alkylating the secondary amine nitrogen atom of the obtained compound of structure 1 '; or 2b) the resulting compound of structure 1 'is either (i) catalytically hydrogenated to a compound of structure I "ch2oh

3 5 V-NH3 5 V-NH

HO- -/ \- CH "NH ,ri)HO- - / \ - CH "NH, ri)

HB

HO OHHO OH

3 72717 ja sen jälkeen rakenteen I" omaavan yhdisteen primäärinen aminoryhmä alkyloidaan, asyloidaan tai sulfonyloidaan tai (ii) saatetaan reagoimaan isosyanaatin tai isotio-syanaatin kanssa, ja sen jälkeen sekundäärinen amiinityppi-5 atomi alkyloidaan; tai 2c) saatu, rakenteen 1' mukainen yhdiste saippuoidaan yhdisteeksi, jolla on rakenne I'"3,72717 and thereafter the primary amino group of the compound of structure I "is alkylated, acylated or sulfonylated, or (ii) reacted with an isocyanate or isothiocyanate, followed by alkylation of the secondary amine nitrogen-5 atom; or 2c) the resulting compound of structure 1 ' saponified to give a compound of structure I '"

CH OH i— NHCH OH i - NH

10 HO-f \-COOH10 HO-f \ -COOH

\—( (I"')\ - ((I "')

HO °HHO ° H

15 ja saatu, rakenteen I'" omaava yhdiste (i) esteröidään ja (ii) saatu esteri mahdollisesti saatetaan reagoimaan amiinin kanssa amidiksi tai (iii) saatu esteri mahdollisesti saatetaan reagoimaan 20 vetyä luovuttavan pelkistysaineen kanssa yhdisteeksi, jolla on rakenne I"" c2oh \15 and the resulting compound of structure I '"is (i) esterified and (ii) the resulting ester is optionally reacted with an amine to form an amide, or (iii) the resulting ester is optionally reacted with a hydrogen donating reducing agent to give a compound of structure I" "c2oh \

NHNH

25 HO ^ ^---- CH20H (I»») /\25 HO ^ ^ ---- CH2OH (I »») / \

HO °HHO ° H

ja vaiheessa (i), (ii) tai (iii) saadun yhdisteen sekundää-30 rinen amiinityppiatorni alkyloidaan.and alkylating the secondary amine nitrogen tower of the compound obtained in step (i), (ii) or (iii).

Vetyä luovuttavina pelkistysaineina voidaan käyttää esimerkiksi muurahaishappoa (Leuckart-Wallach-reaktio). Muurahaishappoa käytetään suurena ylimääränä. Käytettäessä formaldehydiä karbonyyliyhdisteenä voidaan reaktio 35 suorittaa vesiliuoksessa, käytettäessä ketoneja ja vähemmän reaktiokykyisiä aldehydejä on reaktio suoritettava 4 7271 7 vedettömässä muurahaishapossa. Reaktiolämpötilat ovat 100-200°C, ja reaktio on mahdollisesti suoritettava autoklaavissa .As the hydrogen-donating reducing agent, for example, formic acid (Leuckart-Wallach reaction) can be used. Formic acid is used in large excess. When formaldehyde is used as the carbonyl compound, the reaction 35 can be carried out in aqueous solution, when ketones and less reactive aldehydes are used, the reaction must be carried out in 4,771 7 anhydrous formic acid. Reaction temperatures are 100-200 ° C, and the reaction may need to be performed in an autoclave.

Vetyä luovuttavana pelkistysaineena voidaan käyttää 5 myös katalyyttisesti aktivoitua vetyä. Katalysaattorina tulee tällöin kysymykseen ennen kaikkea Raney-nikkeli, mutta myös jalometallikatalysaattorit. Reaktio suoritetaan yleensä vedyn paineissa 30-150 at ja lämpötilavälillä 70-150°C. Liuottimina käytetään proottisia, polaarisia 10 liuottimia, varsinkin alkoholeja.Catalytically activated hydrogen can also be used as the hydrogen-donating reducing agent. The catalysts in this case are, above all, Raney nickel, but also precious metal catalysts. The reaction is generally carried out under hydrogen pressures of 30 to 150 at and a temperature of 70 to 150 ° C. Protic, polar solvents, especially alcohols, are used as solvents.

Vetyä luovuttavina pelkistysaineina käytetään myös alkalimetallisyaaniboorihydridejä, dialkyvliamino-boraaneja ja alkalimetalliboorihydridejä. Erityisen edullisesti tässä menetelmävaihtoehdossa käytetään natrium-15 syaaniboorihydridiä.Alkali metal cyanoborohydrides, dialkylaminoboranes and alkali metal borohydrides are also used as hydrogen donating reducing agents. Sodium cyanoborohydride is particularly preferably used in this process variant.

Reaktio suoritetaan yleensä huoneen lämpötilassa. Voi kuitenkin olla myös edullista kuumentaa reaktioseos palautusjäähdytyslämpötilaan.The reaction is usually carried out at room temperature. However, it may also be advantageous to heat the reaction mixture to reflux.

Reaktio suoritetaan yleensä inertissä liuottimessa. 20 Vaikka voidaankin käyttää vedettömiä, aproottisia liuottimia (esim. tetrahydrofuraania, kun pelkistysaine on morfoliiniboraani), niin tavallisesti käytetään kuitenkin proottista liuotinta. Tällaiseksi sopii varsinkin alempi alkanoli (esim. vesipitoinen metanoli tai etanoli) 25 tai muut vesipitoiset liuotinsysteemit, kuten vesipitoinen dimetyyliformamidi, vesipitoinen heksametyylifosforihappo-triamidi, vesipitoinen tetrahydrofuraani tai vesipitoinen etyleeniglykolidimetyylieetteri.The reaction is generally carried out in an inert solvent. Although anhydrous, aprotic solvents (e.g., tetrahydrofuran when the reducing agent is morpholine borane) can be used, a protic solvent is usually used. Particularly suitable are lower alkanols (e.g. aqueous methanol or ethanol) or other aqueous solvent systems such as aqueous dimethylformamide, aqueous hexamethylphosphoric triamide, aqueous tetrahydrofuran or aqueous ethylene glycol dimethyl ether.

Reaktio suoritetaan yleensä pH-alueella 1-11, 30 edullisesti 4-7.The reaction is generally carried out in the pH range of 1 to 11, preferably 4 to 7.

Keksinnön mukaiset inhibiittorit sopivat lääkkeiksi seuraavilla indikaatioilla:The inhibitors according to the invention are suitable as medicaments for the following indications:

Sokeritaudin esiaste, mahakatarri, ummetus, maha-suoli-, infektiot, meteorismi ilmavaivat, verenpainetau-35 ti, ateroskleroosi ja varsinkin liikalihavuus, sokeritauti ja hyperlipoprotemia.Precursor of diabetes, gastritis, constipation, gastrointestinal, infections, flatulence, hypertension, atherosclerosis and especially obesity, diabetes and hyperlipoprotemia.

Il 7271 7Il 7271 7

Vaikutusspektrin laajentamiseksi voi olla suositeltavalla yhdistää ne glukosidihydrolaasien inhibiittorien kanssa, jolloin nämä lääkeaineet täydentävät toisiaan. Yhdistelmät voivat sisältää keksinnön mukaisia inhibiit-5 toreita keskenään tai yhdistelminä tunnettujen inhibiittorien kanssa. Saattaa esimerkiksi olla tarkoituksenmukaista yhdistää keksinnön mukaisia sakkaraasi-inhibiittoreita tunnettujen amylaasi-inhibiittorien kanssa.To broaden the spectrum of action, it may be advisable to combine them with glucoside hydrolase inhibitors, with these drugs complementing each other. The combinations may contain the inhibitors of the invention with each other or in combination with known inhibitors. For example, it may be appropriate to combine the sucrase inhibitors of the invention with known amylase inhibitors.

Monissa tapauksissa ovat edullisia myös keksinnön mu-10 kaisten inhibiittorien ja tunnettujen oraalisten sokeri- tautilääkkeiden (-sytotrooppisia sulfonyylivirta-ainejohdannaisia ja/tai verensokeriin vaikuttavia biguanidineja) sekä myös veren lidipitoisuutta alentavien lääkkeiden, kuten klofibraatin, nikotiinihapon, kolestyramiinin yhdistelmät.In many cases, combinations of the inhibitors according to the invention and known oral antidiabetic drugs (cytotropic sulfonyl current derivatives and / or blood sugar-acting biguanides) as well as blood lipid-lowering drugs such as clofibrate, nicotinic acid, cholestyramine are also preferred.

15 Yhdisteitä voidaan käyttää farmaseuttisina koostumuk sina laimentamattomina, esim. jauheina tai gelatiinipäällyk-sessä tai yhdistettyinä kantaja-aineen kanssa.The compounds may be used as pharmaceutical compositions undiluted, e.g. in powder or gelatin coating or in combination with a carrier.

Farmaseuttiset valmisteet voivat sisältää vaihtelevia määriä inhibiittoria, esim. 0,1-99,5 %, yhdessä farmaseutti-20 sesti hyväksyttävä, myrkyttömiä, inertin kantaja-aineen kanssa, joka voi sisältää yhtä tai useampaa kiinteätä, puolikiin-teätä tai nestemäistä laimennus- tai täyteainetta ja/tai myrkytöntä, inerttiä ja farmaseuttisesti hyväksyttävää apuainetta. Tällaiset farmaseuttiset valmisteet ovat edullisesti 25 annostusyksikköinä, so. fysikaalisesti rajoitettuina, määrätyn inhibiittorimäärän sisältävinä yksikköinä, jotka vastaavat annoksen osaa tai useampikertaista annosta, joka on tarpeen halutun estovaikutuksen saamiseksi. Annostusyksiköt voivat sisältää 1, 2, 3, 4 tai useampia yksikköannoksia tai 30 1/2, 1/3 tai 1/4 yksikköannoksesta. Yksikköannos sisältää edullisesti sellaisen määrän vaikuttavaa ainetta, jolla saavutetaan haluttu estovaikutus lääkeannossa etukäteen määrätyllä annostusohjelmalla annettaessa yksi tai useampia annostusyksiköitä, jolloin koko päiväannos, puolet, kol-35 mannes tai neljännes päiväannoksesta annetaan tavallisesti kaikkien päivän mittaan nautittujen pää- ja väli- 6 7271 7 aterioiden yhteydessä. Myös muita terapeuttisia aineita voidaan tällöin ottaa. Vaikka annostuksen ja annostusohjeinaan ammattimies jokaisessa tapauksessa suunnittelee huolella erikseen ottaen huomioon potilaan iän, painon ja kun-5 non, sairauden laadun ja vakavuuden, niin annostus on tavallisesti noin 1 - noin 10^ SIY/kg vuorokaudessa. Joissakin tapauksissa voi riittää pienempi annos, ja joissakin tapauksissa on suurempi annos.The pharmaceutical preparations may contain varying amounts of inhibitor, e.g. 0.1-99.5%, together with a pharmaceutically acceptable, non-toxic, inert carrier which may contain one or more solid, semi-solid or liquid diluents or liquids. an excipient and / or a non-toxic, inert and pharmaceutically acceptable excipient. Such pharmaceutical preparations are preferably in dosage units, i. as physically limited units containing a predetermined amount of inhibitor, corresponding to a portion or multiple of the dose required to produce the desired inhibitory effect. Dosage units may contain 1, 2, 3, 4 or more unit doses or 30 1/2, 1/3 or 1/4 unit doses. The unit dose preferably contains an amount of active ingredient that achieves the desired inhibitory effect in a predetermined dosage regimen when administering one or more dosage units, with the full daily dose, half, one-third to one-third or one-quarter of the daily dose usually administered over 6,772 7 meals. in connection with. Other therapeutic agents may also be taken. Although the dosage and dosage instructions will be carefully planned by one skilled in the art on a case-by-case basis, taking into account the age, weight and condition of the patient, the nature and severity of the disease, the dosage will usually be from about 1 to about 10 IU / kg per day. In some cases a lower dose may be sufficient, and in some cases a higher dose.

Oraaliin lääkeantoon voidaan käyttää kiinteitä ja 10 nestemäisiä annostusyksiköitä, esim. jauheita, tabletteja, drageita, kapseleita, rakeita, suspensioita, liuoksia jne.For oral administration, solid and liquid dosage units can be used, e.g., powders, tablets, dragees, capsules, granules, suspensions, solutions, etc.

Jauheet valmistetaan hienontamalla vaikuttava aine sopivan hienoksi ja sekoittamalla se samoin hienonnetun farmaseuttisen kantaja-aineen kanssa. Vaikka kantaja-ai-15 neena normaalisti käytetään syötävää hiilihydraattia, esim. tärkkelystä, laktoosia, sakkaroosia tai glukoosia, joita myös tässä tapauksessa voidaan käyttää, niin on kuitenkin edullisempaa käyttää ei-metabo.lisoituvaa hiilihydraattia, kuten esim. selluloosajohdannaisia.Powders are prepared by comminuting the active ingredient to a suitable size and mixing it with a comminuted pharmaceutical carrier. Although an edible carbohydrate, e.g. starch, lactose, sucrose or glucose, which can also be used in this case, is normally used as the carrier, it is nevertheless more preferable to use a non-metabolizable carbohydrate, such as cellulose derivatives.

20 Voidaan myös lisätä makeutusaineita, makuaineita, säilöntäaineita, dispergointiaineita ja värejä.Sweeteners, flavors, preservatives, dispersants and colors may also be added.

Kapselit voidaan valmistaa täyttämällä edellä kuvattu jauheseos valmiisiin gelatiinikuoriin. Jauheseokseen voidaan ennen täyttämistä lisätä liukastusainetta, kuten 25 piihappogeeliä, talkkia, magnesiumstearaattia, kalsium-stearaattia tai kiinteätä polyetyleeniglykolia. Seokseen voidaan myös sisällyttää hajoamista edistävää ainetta tai liukenemista edistävää ainetta, kuten agaria, kalsium-karbonaattia tai natriumkarbonaattia, jotta kapseleita 30 otettaessa inhibiittori tulisi helpommin hyväksikäytettävään muotoon.Capsules can be prepared by filling the powder mixture described above into finished gelatin shells. A lubricant such as silica gel, talc, magnesium stearate, calcium stearate or solid polyethylene glycol may be added to the powder mixture prior to filling. A disintegrant or solubilizer such as agar, calcium carbonate or sodium carbonate may also be included in the mixture to make the inhibitor easier to use when the capsules are taken.

Tablettien valmistus tapahtuu esimerkiksi valmistamalla karkea tai hieno jauheseos ja lisäämällä siihen liu-kastusainetta ja hajoamista edistävää ainetta. Tästä seok-35 sesta muodostetaan sitten tabletit. Jauheseos valmiste- 7 72717 taan jauhamalla sopivalla tavalla vaikuttava aine, ja sekoittamalla siihen laimennusainetta tai kantaja-aineita, kuten edellä kuvattiin. Voidaan myös lisätä sideaineita, kuten karboksimetyyliselluloosaa, alginaatteja, gela-5 tiinia tai polyvinyylipyrrolidoneja, liukenemista hidastavia aineita, kuten parafiinia, resorptiota edistävää ainetta, kuten esim. kvaternääristä suolaa ja/tai adsorp-tioainetta, kuten bentoniittia, kaoliinia tai dikalsium-fosfaattia. Jauheseos voidaan rakeistaa yhdessä sideaineen, 10 kuten siirapin, tärkkelystahnan, akaasiakumin tai selluloosa- tai polymeerimateriaalien liuosten kanssa. Senjälkeen tuote puristetaan suurisilmäisen seulan lävitse. Vaihtoehtoisesti jauheseos voidaan puristaa tableteiksi table-tointikoneessa, ja saadut laadultaan epätasaiset kappa-15 leet murskata sopivaan raekokoon. Jotta syntyneet rakeet eivät takertuisi tabletointikoneen suulakkeisiin, niihin voidaan lisätä liukastusainetta, kuten steariinihappoa, stearaattisuolaa, talkkia tai mineraaliöljyä. Tämä liukastettu seos puristetaan sitten tableteiksi. Vaikuttavat ai-20 neet voidaan myös yhdistää helppojuoksuisten, inerttien kantaja-aineiden kanssa ja muodostaa suoraan tableteiksi jättämällä pois rakeistus- tai murskaamisvaiheet. Tuote voidaan päällystää kirkkaalla tai läpinäkyttömällä päällysteellä, esim. shellakka-, sokeri- tai polymeeripäällys-25 teellä ja kiilloitetulla vahakerroksella. Tällaiseen päällysteeseen voidaan lisätä väriaineita, jotta voitaisiin erottaa erilaiset annostusyksiköt.Tablets are prepared, for example, by preparing a coarse or fine powder mixture and adding a Liu wetting agent and a disintegrant. This mixture is then formed into tablets. The powder mixture is prepared by grinding the active ingredient in a suitable manner and mixing it with a diluent or carriers as described above. Binders such as carboxymethylcellulose, alginates, Gela-5 thine or polyvinylpyrrolidones, solubilizers such as paraffin, a resorption enhancer such as a quaternary salt and / or an adsorbent such as bentonite, kaolinite or kaolin can also be added. The powder mixture may be granulated together with solutions of a binder such as syrup, starch paste, acacia or cellulosic or polymeric materials. The product is then pressed through a large mesh screen. Alternatively, the powder mixture can be compressed into tablets in a tableting machine, and the resulting non-uniform quality kappa-15 can be crushed to a suitable grain size. To prevent the resulting granules from sticking to the nozzles of the tableting machine, a lubricant such as stearic acid, stearate salt, talc or mineral oil may be added. This lubricated mixture is then compressed into tablets. The active ingredients can also be combined with easy-to-flow, inert carriers and formed directly into tablets by omitting the granulation or crushing steps. The product can be coated with a clear or opaque coating, e.g. shellac, sugar or polymer coating and a polished wax layer. Dyes may be added to such a coating to separate the different dosage units.

Oraalisti käytettäviä valmistemuotoja, liuoksia, siirappeja, eliksiirejä voidaan valmistaa annostusyksiköik-30 si siten, että tietty valmistemäärä sisältää tietyn vaikuttavan aineen määrän. Siirappi voidaan valmistaa liuottamalla vaikuttava aine vesiliuokseksi, joka sisältää sopivia makuaineita. Eliksiirit voidaan valmistaa käyttäen myrkyttömiä, alkoholipitoisia kantaja-aineita. Suspensiot 35 valmistetaan dispergoimalla yhdiste myrkyttömään kantaja- 8 7271 7 aineeseen. Voidaan myös lisätä liuotinvälittäjä ja emul-gointiaineita, esim. etoksiloituja isostearyylialkoholeja ja polyoksietyleenisorbitaaniestereitä, säilöntäaineita, makua parantavia aineita, esim. piparminttuöljyä tai sak-5 kariinia.Formulations for oral use, solutions, syrups, elixirs can be prepared in unit dosage form so that a certain amount of the preparation contains a certain amount of the active ingredient. The syrup may be prepared by dissolving the active ingredient in an aqueous solution containing suitable flavoring agents. Elixirs can be prepared using non-toxic, alcoholic carriers. Suspensions 35 are prepared by dispersing the compound in a non-toxic carrier. Solvent mediators and emulsifiers may also be added, e.g. ethoxylated isostearyl alcohols and polyoxyethylene sorbitan esters, preservatives, flavoring agents, e.g. peppermint oil or saccharin.

Annostusohjeet voidaan ilmoittaa pakkauksen päällä. Annostus voidaan lisäksi varmistaa käyttämällä vaikuttavat aineet hidastetusti vapauttavia valmisteita, esim. sisällyttämällä vaikuttava aine polymeerimateriaaliin, va-10 haan tms.Dosage instructions can be indicated on the package. Dosage can further be ensured by the use of sustained release formulations, e.g. by incorporating the active ingredient into a polymeric material, e.g.

Edellä mainittujen valmisteiden lisäksi voidaan valmistaa vaikuttavia aineita sisältäviä elintarvikkeita, esim. sokeria, leipää, perunatuotteita, hedelmämehua, olutta, suklaata ja muita makeistuotteita sekä säilykkeitä, 15 kuten marmelaadia, joihin tuotteisiin lisätään terapeuttisesti vaikuttava määrä ainakin yhtä keksinnön mukaista inhibiittoria.In addition to the above-mentioned preparations, foods containing active ingredients, e.g. sugar, bread, potato products, fruit juice, beer, chocolate and other confectionery products, as well as preserves, such as marmalade, can be prepared, to which a therapeutically effective amount of at least one inhibitor according to the invention is added.

Keksinnön mukaisia vaikuttavia aineita sisältävät ravintoaineet sopivat sekä aineenvaihduntahäiriöistä kär-2o siville potilaille dieettiruuaksi että terveiden henkilöiden ravinnoksi ennalta ehkäisemään ravinnon avulla aineenvaihduntahäiriöt .The nutrients containing the active ingredients according to the invention are suitable both as a dietary food for patients suffering from metabolic disorders and as a diet for healthy individuals for the prevention of metabolic disorders by means of food.

Keksinnön mukaisilla inhibiittoreilla on lisäksi kyky suuresti vaikuttaa eläimillä ei-toivotun rasvanmuo-25 dostuksen osuutta alentavasti ja niukka rasvaisen lihan (laiha liha) osuutta lisäävästi. Tällä on erityisesti merkitystä maatalouden hyötyeläinten kasvatuksessa ja ruokinnassa, erityisesti sikojen, mutta myös muiden hyöty eläinten ja lemmikkieläinten kasvatuksessa. Inhibiittorien 30 käytöllä voidaan lisäksi saavuttaa huomattavaa eläinten ruokinnan rationalisointia sekä ajan ja määrän että myös laadun suhteen. Koska ne vaikuttavat tietyssä määrin ruuansulatusta hidastavasti, pitenee ravintoaineiden viipymis-aika ruuansulatuskanavassa, mikä vaikuttaa ad libitum ruo-35 kinnassa säästöjä. Keksinnön mukaisia inhibiittoreita käy- I! 7271 7 tettäessä saadaan useissa tapauksissa lisäksi huomattava arvokkaan proteiinirehun säästö.In addition, the inhibitors of the invention have the ability to greatly reduce the proportion of unwanted fat intake in animals and to increase the proportion of lean fatty meat (lean meat). This is particularly important in the rearing and feeding of farm animals, especially pigs, but also in the rearing of other animals and pets. In addition, the use of inhibitors 30 can achieve a significant rationalization of animal nutrition in terms of both time and quantity as well as quality. Because they have a certain effect of slowing down digestion, the residence time of nutrients in the gastrointestinal tract is prolonged, which affects the ad libitum savings in digestion. The inhibitors according to the invention are used. In addition, in many cases, significant savings in valuable protein feed are achieved.

Vaikuttavia aineita voidaan siten käytännöllisesti katsoen käyttää kaikilla eläinruokinnan aloilla rasva-5 osuutta vähentävänä aineena sekä rehun valkuaisainetta säätävänä aineena.Thus, the active ingredients can be used in virtually all areas of animal nutrition as a fat-5 reducing agent as well as as a feed protein regulating agent.

Vaikuttavien aineiden teho on tällöin jokseenkin riippumaton eläimen lajista ja sukupuolesta. Erityisen arvokkaiksi vaikuttavat aineet ovat osoittautuneet eläin-10 lajeilla, joilla määrättyinä elämänvaiheina on taipumus vahvaan rasvoittumiseen.The efficacy of the active substances is then somewhat independent of the species and sex of the animal. Substances of particular value have been shown to be animal-10 species which, at certain life stages, tend to become severely obese.

Esimerkkeinä eläimistä, joilla inhibiittoreita voidaan käyttää rasvaosuuden vähentämiseen ja/tai ravinnon valkuaisaineen säästämiseen, voidaan mainita seuraavat 15 hyöty- ja lemmikkieläimet: lämminveriset eläimet, kuten nautakarja, siat, hevoset, lampaat, vuohet, kissat, koirat, kaniinit, turkiseläimet, kuten minkit, chinchillat, muut lemmikkieläimet, kuten marsut ja hamsterit, laboratorio- ja eläintarhaeläimet, kuten rotat, hiiret, apinat 2o jne, linnut, kuten broilerit, kanat, hanhet, ankat, kalkkunat, kyyhkyset papukaijat, ja kanarialinnut, sekä kylmäveriset eläimet, kuten kalat, esim. karpit, ja matelijat, esim. käärmeet.Examples of animals in which inhibitors can be used to reduce fat content and / or save dietary protein include the following useful and pet animals: warm-blooded animals such as cattle, pigs, horses, sheep, goats, cats, dogs, rabbits, fur animals such as minks, chinchillas, other pets such as guinea pigs and hamsters, laboratory and zoo animals such as rats, mice, monkeys 2o, etc., birds such as broilers, chickens, geese, ducks, turkeys, pigeons, parrots, and canaries, and cold-blooded animals such as fish, e.g., shells, and reptiles, e.g., snakes.

Eläimille annettava, halutun vaikutuksen saavut-25 tamiseen tarvittava vaikuttavan aineen määrä voi vaikuttavan aineen edullisten ominaisuuksien vuoksi vaihdella suuresti. Se on edullisesti noin 0,5 mg - 2,5 g, varsinkin 10 - 100 mg/rehu-kg vrk:ssa. Sen nauttimisen kestoaika voi vaihdella joistakin tunneista tai päivistä useam-30 piin vuosiin. Sopiva vaikuttavan aineen määrä ja sopiva sen nauttimisaika riippuvat läheisesti ruokinnan tavoitteesta. Ne riippuvat varsinkin eläimen lajista, iästä, sukupuolesta, terveydentilasta ja eläimen pitämisen tarkoituksesta, ja ne voi alan ammattimies helposti määrätä. 35 Keksinnön mukaisia vaikuttavia aineita annetaan 10 7 2 71 7 eläimille tavallisilla menetelmillä. Niiden antamistapa riippuu varsinkin eläimen lajista, käyttäytymisestä ja yleiskunnosta. Anto voidaan suorittaa oraalisti kerran päivässä tai kaksi kertaa päivässä säännöllisin tai epä-5 säännöllisin aikavälein. Tarkoituksenmukaisinta on useimmiten antaa vaikuttavia aineita suun kautta varsinkin eläinten ruokinta- ja/tai juomarytmiä noudattaen.The amount of active ingredient to be administered to the animals required to achieve the desired effect can vary widely due to the beneficial properties of the active ingredient. It is preferably about 0.5 mg to 2.5 g, especially 10 to 100 mg / kg of feed per day. The duration of its consumption can vary from a few hours or days to several 30 years. The appropriate amount of active ingredient and the appropriate period of ingestion depend closely on the purpose of the feeding. They depend in particular on the species, age, sex, state of health and purpose of keeping the animal and can be easily prescribed by a person skilled in the art. The active compounds according to the invention are administered to animals by conventional methods. The route of administration depends in particular on the species, behavior and general condition of the animal. Administration can be performed orally once daily or twice daily at regular or irregular intervals. In most cases, it is most appropriate to administer the active ingredients orally, especially in accordance with the feeding and / or drinking rhythms of the animals.

Vaikuttavat aineet voivat olla puhtaina aineina tai valmisteina, jolloin valmiste voi olla joko esiseoksena, 10 so seoksena myrkyttömien, inerttien kantaja-aineiden kanssa, tai myös koko ravintoannoksen osana lisärehuna tai yksinään annetun sekarehun seososana. On myös mahdollista antaa niitä sopivina valmisteina juomaveden kanssa.The active ingredients can be in pure form or in preparations, in which case the preparation can be either as a premix, i.e. as a mixture with non-toxic, inert carriers, or also as part of a complete diet as a supplementary feed or as a mixed feed mixture alone. It is also possible to administer them as suitable preparations with drinking water.

Vaikuttavia aineita voidaan mahdollisesti antaa 15 sopivina muotoina myös valmisteina muiden ravinto- ja vaikuttavien aineiden kanssa, esim. mineraalisuolojen, hivenaineiden, vitamiinien, valkuaisaineiden, energiaa antavien aineiden (esim. tärkkelys, sokeri, rasvat), väriaineiden ja/tai makuaineiden tai muiden rehun lisäaineiden, 20 kuten kasvua edistävien aineiden, kanssa. Vaikuttavia aineita voidaan antaa eläimille niiden ruokinnan aikana tai sen jälkeen.The active ingredients may also be administered in suitable forms as preparations with other nutrients and active ingredients, e.g. mineral salts, trace elements, vitamins, proteins, energy-giving substances (eg starch, sugar, fats), colorings and / or flavorings or other feed additives. , 20 such as growth promoters. The active substances can be administered to the animals during or after their feeding.

Edullisesti vaikuttavia aineita annetaan oraalisti rehun/tai juomaveden kanssa, jolloin niitä tarpeen mukaan 25 lisätään rehun ja/tai juomaveden koko määrään tai vain osaan niistä.Preferably, the active ingredients are administered orally with the feed and / or drinking water, in which case they are added to all or only a part of the feed and / or drinking water, if necessary.

Vaikuttavat aineet voidaan lisätä rehuun ja/tai juomaveteen tavallisin menetelmin yksinkertaisesti puhtaina aineina, edullisesti hienojakoisessa muodossa, tai 30 valmisteiden muodossa sekoitettuina syötävien, myrkyttömien kantaja-aineiden kanssa tai myös esiseoksena tai rehuväkevöitteenä.The active ingredients can be added to the feed and / or drinking water by conventional methods simply as pure substances, preferably in finely divided form, or in the form of preparations mixed with edible, non-toxic carriers or also as a premix or concentrate.

Rehu ja/tai juomavesi voi sisältää keksinnön mukaista vaikuttavaa ainetta esimerkiksi noin 0,001 - 5,0 % 35 varsinkin 0,02 - 2,0 % (paino-%). Vaikuttavan aineen edul- 11 7271 7 lisin pitoisuus rehussa ja/tai juomavedessä riippuu varsinkin eläinten nauttimasta rehu- ja/tai juomavesimääräs-tä, ja sen voi jokainen ammattimies helposti määrätä.The feed and / or drinking water may contain, for example, about 0.001 to 5.0% (in particular 0.02 to 2.0%) by weight of the active ingredient according to the invention. The preferred concentration of the active substance in the feed and / or drinking water depends in particular on the amount of feed and / or drinking water ingested by the animals and can be easily determined by any person skilled in the art.

Rehun laatu ja koostumus eivät tällöin merkitse.The quality and composition of the feed do not then matter.

5 Voidaan käyttää kaikkia tavallisia kaupallisia tai erityisiä rehukoostumuksia, jotka edullisesti sisältävät tavallisia, suunnitelmallisen ravitsemuksen kannalta tasapainotettuja energia- ja valkuaisaineita sekä vitamiineja ja mineraaliaineita. Rehu voi sisältää esimerkiksi kasvi-10 aineita, esim. öljykakkurouhetta, viljarouhetta, viljasi-vutuotteita, mutta myös heinää, säiliörehua, juurikkaita ja muita rehukasveja, sekä myös eläinkunnan tuotteita, kuten liha-, ja kalatuotteita, luujauhoa, rasvaa, vitamiineja, esim. A-, D-, E-, K- ja B-kompleksi-vitamiineja sekä 15 erityisiä proteiinilähteitä, kuten hiivoja sekä tiettyjä aminohappoja, mineraaliaineita ja hivenaineita, kuten fosforia ja rautaa, sinkkiä, mangaania, kuparia, kobolttia, jodia ym.All conventional commercial or special feed compositions may be used, which preferably contain the usual energy and protein, vitamins and minerals balanced in terms of planned nutrition. The feed may contain, for example, plant-10 substances, e.g. oil cake meal, cereal meal, cereal products, but also hay, silage, beets and other fodder plants, as well as animal products such as meat and fish products, bone meal, fat, vitamins, e.g. Complex vitamins A, D, E, K and B, as well as specific protein sources such as yeast as well as certain amino acids, minerals and trace elements such as phosphorus and iron, zinc, manganese, copper, cobalt, iodine and the like.

Esiseokset voivat sisältää ed-llisesti noin 0,1 -20 50 %, varsinkin 0,5 - 5,0 % (paino-%) esim. N-metyyli-1- desoksinojirimysiiniä erilaisten syötävien kantaja-aineiden ja/tai mineraalisuolojen kanssa, esim. rehukalkin (kal-siumkarbonaatti) kanssa, ja ne valmistetaan tavallisilla sekoitusmenetelmillä.The premixes may further contain from about 0.1 to 20% by weight, in particular from 0.5 to 5.0% (by weight) of e.g. N-methyl-1-deoxynojirimycin with various edible carriers and / or mineral salts, e.g. with feed lime (calcium carbonate) and are prepared by standard mixing methods.

25 Rehuseokset sisältävät edullisesti 0,001 - 5,0 %, varsinkin 0,02 - 2 % (paino-% esimerkiksi N-metyyli-l-des-oksinojirimysiiniä tavallisten rehuseoskomponenttien ohella, esim. viljarouheen, öljykakkurouheen, eläinvalkuaisen, mineraaliaineiden, hivenaineiden ja vitamiinien ohella.The compound feed preferably contains 0.001 to 5.0%, in particular 0.02 to 2% (by weight, for example, of N-methyl-1-desoxynojirimycin in addition to the usual feed compound components, e.g. cereal meal, oil cake cake, animal protein, minerals, trace elements and vitamins). .

30 Niitä voidaan valmistaa tavallisin sekoitusmenetelmin.30 They can be prepared by standard mixing methods.

Esiseoksissa ja rehuseoksissa olevat vaikuttavat aineet voidaan edullisesti suojata ilman, valon ja/tai kosteuden vaikutusta vastaan peittämällä niiden pinta sopivilla aineilla, esim. myrkyttömillä vahoilla tai gela-35 tiinilla.The active ingredients in the premixtures and compound feeds can advantageously be protected against the effects of air, light and / or moisture by covering their surface with suitable substances, e.g. non-toxic waxes or Gela-35.

Linnuille tarkoitetun rehuseoksen, joka sisältää 12 7271 7 keksinnön mukaista vaikuttavaa ainetta, koostumus on esimerkiksi seuraava: 200 g vehnää, 340 g maissia, 360,3 g soijarouhetta, 60 g naudantalia, 15 g dikalsiumfosfaattia, 10 g kalsium-5 karbonaattia, 4 g jodipitoista keittosuolaa, 7,5 g vitamii-ni-mineraaliseosta ja 3,2 g vaikuttavan aineen esiseosta sekoitettuna huolella 1 kgraan rehua.The composition of a compound feed for birds containing 12 7271 7 active ingredients according to the invention is, for example: 200 g wheat, 340 g maize, 360.3 g soybean meal, 60 g beef, 15 g dicalcium phosphate, 10 g calcium-5 carbonate, 4 g iodine-containing common salt, 7.5 g of a vitamin-mineral mixture and 3.2 g of a premix of active ingredient mixed thoroughly with 1 kg of feed.

Vitamiini-mineraaliseos sisältää: 6000 ky A-vitamiinia, 1000 ky D^-vitamiinia, 10 mg E-vita-10 miinia, 1 mg K^-vitamiinia, 3 mg riboflaviinia, 2 mg pyridoksiinia, 20 ^,ug Bj^vitamiinia, 5 mg kalsiumpantotenaat-tia, 30 mg nikotiinihappoa, 200 mg koliinikloridia, 200 mg MnSO^'i^O, 140 mg ZnS04*7H20, 100 mg FeSC>4-71^0 ja 20 mg CuS04*5H20.The vitamin-mineral mixture contains: 6000 IU of vitamin A, 1000 IU of vitamin D 1, 10 mg of E-Vita-10, 1 mg of vitamin K 2, 3 mg of riboflavin, 2 mg of pyridoxine, 20 μg of vitamin B 2, 5 mg of calcium pantothenate, 30 mg of nicotinic acid, 200 mg of choline chloride, 200 mg of MnSO 4, 140 mg of ZnSO 4 * 7H 2 O, 100 mg of FeSO 4 4-71 → 0 and 20 mg of CuSO 4 * 5H 2 O.

15 Vaikuttavan aineen esiseos sisältää esimerkiksi halutun määrän esim. 1600 mg N-metyyli-l-desoksinojirimy-siiniä ja lisäksi 1 g DL-metioniinia sellaisessa määrässä soijapapujauhoa, että esiseosta saadaan 3,2 g.For example, the premix of active ingredient contains the desired amount of e.g. 1600 mg of N-methyl-1-deoxynojirimycin and in addition 1 g of DL-methionine in an amount of soybean meal to give 3.2 g of premix.

Sioille tarkoitetusta rehuseoksesta, joka sisäl-20 tää kaavan I mukaista vaikuttavaa ainetta, esitetään seuraava koostumus: 630 g rehuviljarouhetta (sisältää 200 g maissi-, 150 g ohra-, 150 g kaura- ja 130 g vehnärouhetta), 80 g kalajauhoa, 60 g soijarouhetta, 58,8 g tapiokajauhoa, 38 g oluthiivaa, 50 g vitamiini-mineraali-seosta sioille 25 (koostumus esim. sama kuin kananpojilla) 30 g pellavansie- menkakkujauhoa, 30 g maissitärkkelysjauhoa, 10 g soijaöljyä, 10 g sokeriruokomelassia ja 2 g vaikuttavan aineen esiseosta (koostumus esim. sama kuin kananpojilla) sekoitettuna huolella 1 kg:aan rehua.A compound feedingstuff for pigs containing an active ingredient of the formula I is shown as follows: 630 g of feed grain meal (containing 200 g of maize, 150 g of barley, 150 g of oats and 130 g of wheat meal), 80 g of fishmeal, 60 g soybean meal, 58.8 g tapioca meal, 38 g brewer's yeast, 50 g vitamin-mineral mixture for pigs 25 (composition e.g. same as for chickens) 30 g linseed cake meal, 30 g corn starch meal, 10 g soybean oil, 10 g sugar cane molasses and 2 g cane molasses a premix of the substance (eg composition the same as for chickens) mixed thoroughly with 1 kg of feed.

30 Esitetyt rehuseokset sopivat edullisesti kananpoi kien ja sikojen kasvatukseen ja lihottamiseen. Niitä voidaan kuitenkin käyttää samoina tai samankaltaisina koostumuksina myös muiden eläinten kasvatukseen ja lihottamiseen .The compound feeds shown are preferably suitable for rearing and fattening chickens and pigs. However, they can also be used in the same or similar compositions for the rearing and fattening of other animals.

35 Inhibiittoreita voidaan käyttää yksinään tai myös 13 7271 7 erilaisina seoksina toistensa kanssa.35 The inhibitors can be used alone or also in 13 7271 7 different mixtures with each other.

Sakkaraasi-inhibiitiokoe in vitroIn vitro sucrase inhibition assay

Sakkaraasi-inhibiitiokokeella on mahdollista määrittää aineen entsyymi-inhibiitioaktiviteetti vertaamalla 5 liuotetun suolistodisakkaridaasikompleksin aktiivisuutta inhibiittorin läsnäollessa ja ilman inhibiittoria (ns 100 % arvo). Substraattina, joka määrää inhibiitiokokeen spesifisyyden, käytetään tällöin käytännöllisesti katsoen glu-koosivapaata sakkaroosia (glukoosi < 100 ppm); entsyymikö aktiivisuusmääritys perustuu glukoosidehydrogenaasin ja kofaktorina olevan nikotinamidi-adeniinidinukleotidin vapauttaman glukoosin spektrofotometriseen määritykseen.The sucrase inhibition assay makes it possible to determine the enzyme inhibitory activity of a substance by comparing the activity of a dissolved intestinal disaccharidase complex in the presence and absence of an inhibitor (so-called 100% value). The substrate which determines the specificity of the inhibition test is then virtually Gluose-free sucrose (glucose <100 ppm); whether the enzyme activity assay is based on a spectrophotometric assay of glucose dehydrogenase and glucose released by the cofactor nicotinamide adenine dinucleotide.

Sakkaraasi-inhibiittoriyksikkö (SIY) määritellään sellaiseksi inhibiitioaktiivisuudeksi, joka määritellyssä k5 koepanoksessa alentaa yhden yksikön verran sakkarolyyt- tistä aktiivisuutta (sakkaraasiyksikkö = SY); sakkaraasi-yksikkö määritellään tällöin entsyymiaktiviteetiksi, joka etukäteen määritellyissä olosuhteissa hajottaa yhden ^umoolin sakkaroosia minuutissa ja siten vapauttaa yhden 20 ^umoolin glukoosia, joka määritetään kokeessa, ja fruktoosia, jota ei kokeessa huomioida.A sucrase inhibitor unit (SIY) is defined as an inhibitory activity that reduces saccharolytic activity by one unit in a defined k5 test batch (sucrase unit = SY); the sucrase unit is then defined as the enzyme activity which, under predetermined conditions, degrades one μmol of sucrose per minute and thus releases one 20 μmol of glucose, which is determined in the experiment, and fructose, which is not taken into account in the experiment.

Suolistodisakkaridaasikompleksia saadaan sian ohut-suolilimakalvosta trypsiinisulatuksella, saostamalla 66 %: sesta etanolista -20°C:ssa, lisäämällä sakkaa 100-mmolaa-25 rista fosfaattipuskuria (pH 7,0) ja lopuksi dialysoimalla samaa puskuria vastaan.The intestinal disaccharidase complex is obtained from porcine thin-intestinal mucosa by trypsin digestion, precipitation from 66% ethanol at -20 ° C, addition of the precipitate in 100 mM phosphate buffer (pH 7.0) and finally dialysis against the same buffer.

lopultaan koeliuosta, joka on valmistettu siten, että koepanoksen ekstinktio on vähintään 10 %, muttei kuitenkaan yli 25 % 100 %-arvon alapuolella, lisätään lOO^ul 30 suolistodisakkaridaasikompleksin laimennusta 0,1-m malei-naattipuskurissa (pH 6,25), ja seosta esi-inkuboidaan 10 min 37°C:ssa. Disakkaridaasikompleksin laimennus on säädettävä aktiivisuuteen 0,1 SY/ml. Tämän jälkeen sakkaro-lyyttinen reaktio pannaan alulle lisäämällä lQO^ul 0,4-m 35 sakkaroosi liuosta (SERVA 35579) 0,1-m maleinaattipusku- 14 7271 7 rissa pH-arvossa 6,25 ja päätetään 20 minuutin inkubaatio-ajan jälkeen 37°C:ssa lisäämällä 1 ml glukoosidehydroge-naasireagenssia /1 pullollinen lyofilisoitua glukooside-hydrogenaasi-mutarotaasi-seosta (MERCK 14053) ja 331,7 mg 5 /3-nikotinamidiadeniinidinukleotidia (vapaa happo, BOEHRINGER, puhtausaste I) 250 ml:ssa 0,5-m trispuskuria, pH 7,67. Glukoosin osoittamiseksi seosta inkuboidaan 30 minuuttia 37°C:ssa, ja glukoosi määritetään fotometrillä aaltopituudella 340 mm reagenssisokeakoetta (sisältää ent-10 syymin, muttei sakkaroosia)vastaan.finally, a test solution prepared so that the extinction of the test batch is at least 10% but not more than 25% below 100% is added to 100 of a 30 dilution of the intestinal disaccharidase complex in 0.1 M maleate buffer (pH 6.25), and the mixture is pre-incubated for 10 min at 37 ° C. The dilution of the disaccharidase complex must be adjusted to an activity of 0.1 SY / ml. The sucrolytic reaction is then initiated by the addition of 10 μl of a 0.4 M solution of sucrose (SERVA 35579) in 0.1 M maleinate buffer at pH 6.25 and terminated after an incubation period of 20 minutes. At 1 ° C by adding 1 ml of glucose dehydrogenase reagent / 1 flask of lyophilized glucose dehydrogenase-mutarotase mixture (MERCK 14053) and 331.7 mg of 5/3 nicotinamide adenine dinucleotide (free acid, BOEHRINGER, purity I) in 250 ml 5-m tri-buffer, pH 7.67. To detect glucose, the mixture is incubated for 30 minutes at 37 ° C, and glucose is determined with a photometer at a wavelength of 340 mm against a reagent blank (containing ent-10 enzyme but no sucrose).

Inhibiittorien estoaktiivisuuden laskemista vaikeuttaa se, että jo vähäiset muutokset koesysteemissä esimerkiksi vähäinen vaihtelu 100 %-arvojen määrityksissä, vaikuttavat koetulosten arvoihin sellaisina määrinä, joi-15 ta ei voi jättää huomioonottamatta. Nämä vaikeudet voidaan välttää suorittamalla jokainen määritys samanaikaisesti standardin kanssa; standardina käytetään kaavan C25H43°i8N mukaista sakkaraasi-inhibiittoria, jonka spesifinen esto-aktiivisuus on 77 700 SIY/g, ja jota lisäämällä 10-20 ng 20 kokeeseen aikaansaadaan edellä määriteltyä suuruusluokkaa oleva inhibitio. Kun tunnetaan 100 %-arvon ja standardin inhiboiman koepanoksen ekstinktioiden erotus 340 nm:ssä, saadaan 100 %-arvon ja koeliuoksen inhiboiman panoksen ekstinktioiden erotuksesta ottamalla huomioon 25 käytetty inhibiittorin määrä laskettuna tunnetulla tavalla ominaisestoaktiivisuus, joka ilmoitetaan sakkaraasi-inhi-bitio-yksikköinä grammaa kohti (SIY/g).The calculation of the inhibitory activity of inhibitors is complicated by the fact that even small changes in the test system, for example a slight variation in the determinations of 100% values, affect the values of the test results in amounts that cannot be disregarded. These difficulties can be avoided by performing each assay simultaneously with the standard; a sucrase inhibitor of the formula C25H43 ° 18N with a specific inhibitory activity of 77,700 SIY / g is used as a standard, and the addition of 10-20 ng to the experiment provides an inhibition of the order of magnitude defined above. When the difference between the extinctions of the 100% value and the standard inhibited test batch at 340 nm is known, the difference between the 100% value and the extinctions of the test solution inhibited batch is obtained by taking into account the amount of inhibitor used, calculated as sucrase inhibition per gram (SIY / g).

Spesifinen sakkaraasi-inhibitioaktiivisuus in vitro: 1-desoksinojirimysiini 465 000 SIY/g 30 M-metyyli-l-desoksinojirimysiini 2 330 000 SIY/gSpecific sucrase activity in vitro: 1-deoxynojirimycin 465,000 SIY / g 30 M-methyl-1-deoxynojirimycin 2,330,000 SIY / g

Keksinnön mukaisella menetelmällä valmistettujen yhdisteiden arvokkaat ja yllättävät terapeuttiset ominaisuudet ilmenevät myös seuraavista terapeuttisista koetuloksista.The valuable and surprising therapeutic properties of the compounds prepared by the method of the invention are also apparent from the following therapeutic test results.

35 Suoritetussa rasituskokeessa rottia ruokittiin ra-35 In a stress test performed, rats were fed

IIII

15 72 71 7 vinnolla, jossa oli vaihtelevia määriä keitettyä tärkkelystä sekä tutkittavaa ainetta. Veren glukoosipitoisuus mitattiin 30 min kuluttua ruokinnasta ja vertailuun käytettiin rottia, jotka saivat vain keitettyä tärkkelystä, 5 sekä rottia, jotka eivät saaneet ravintoa.15 72 71 7 with varying amounts of cooked starch and test substance. Blood glucose levels were measured 30 min after feeding and rats fed only boiled starch and rats not fed were used for comparison.

FR-kuulutusjulkaisusta 2 336 941 tunnetulle desok-sinojirimysiinille, ch2oh HO —O__M ^For deoxynojirimycin known from FR-A-2 336 941, ch2oh HO —O__M ^

10 \ \ H10 \ \ H

HO "" |HO ""

OHOH

rasituskokeessa saatua rasitusarvoa merkittiin suhteellisella arvolla 1. Seuraavasta taulukosta käy ilmi kuinka 15 paljon parempia keksinnön mukaisella menetelmällä valmistetut kaavan I mukaiset yhdisteet ovat.the stress value obtained in the stress test was denoted by a relative value of 1. The following table shows how much better the compounds of formula I prepared by the process of the invention are.

ch2oh 20 ho —r2 ohch2oh 20 ho —r2 oh

Esim· R2 Kerroin 25 1 CH3 CN <16,7 4 CH3 CH2-NH-COCH3 12,2 5 CH3 CH -NH-C0-® 8,9 6 CH3 CH2-NH-S02-(Q-CH3 13,3 CH3 CH -NH-CO-CH -φ 16,7 30 ^-CH3 CH3 CH2-NH-CO-^) 16,7 16 7271 7Example · R2 Coefficient 25 1 CH3 CN <16.7 4 CH3 CH2-NH-COCH3 12.2 5 CH3 CH -NH-CO-® 8.9 6 CH3 CH2-NH-SO2- (Q-CH3 13.3 CH3 CH -NH-CO-CH-^ 16.7 30 ^ -CH3 CH3 CH2-NH-CO- ^) 16.7 16 7271 7

Esimerkki 1 1- syaani-l-desoksinojirimysiiniExample 1 1-Cyano-1-deoxynojirimycin

HOCHHOCH

\ 2\ 2

5 HO-< )—- CN5 HO- <) —- CN

HO / ''OHHO / '' OH

Ba(OH)2·8H2O:n (21,2 g) liuokseen vedessä (200 ml) lisätään 17,5 g nojirimysiinibisulfiittiadduktia. Seosta 10 sekoitettiin tunnin ajan huoneen lämpötilassa, sitten kiinteä aine suodatettiin eroon. Suodokseen lisätään 12 ml nestemäistä syaanivetyä, ja seosta sekoitetaan 30 minuuttia. Liuos suodatetaan jälleen ja haihdutetaan 20 ml:ksi rotaa-tiohaihduttimessa. Jäännökseen lisätään ensin 20 ml meta-15 nolia, jolloin haluttu tuote alkaa kiteytyä; kiteytyminen saadaan täydellisemmäksi lisäämällä 100 ml etanolia. Sakka suodatetaan.To a solution of Ba (OH) 2 · 8H 2 O (21.2 g) in water (200 mL) is added 17.5 g of nojirimycin bisulfite adduct. The mixture was stirred for 1 hour at room temperature, then the solid was filtered off. 12 ml of liquid hydrogen cyanide are added to the filtrate, and the mixture is stirred for 30 minutes. The solution is filtered again and evaporated to 20 ml on a rotary evaporator. 20 ml of methanol are first added to the residue, whereupon the desired product begins to crystallize; crystallization is completed by adding 100 ml of ethanol. The precipitate is filtered off.

Saanto: 12,0 g 1-syaani-l-desoksinojirimysiiniä, sp 152-153°C. Uudelleenkoteyttämällä hieman vettä sisältävästä 20 metanolista sulamispiste kohoaa 155-156°C:seen.Yield: 12.0 g of 1-cyano-1-deoxynojirimycin, mp 152-153 ° C. By recrystallization from a little methanol containing 20 methanol, the melting point rises to 155-156 ° C.

Esimerkki 2 2- metyyli-syaani-l-desoksinojirimysiini (kaava I) HOCH \ 1 /—N-CH3Example 2 2-Methyl-cyano-1-deoxynojirimycin (Formula I) HOCH 1 / N-CH 3

25 HO -( -CN25 HO - (-CN

HO^ ^OHHO ^ ^ OH

Yhdiste valmistettiin metyloimalla pelkistävästä 1-syaani-l-desoksinojirimysiiniä 35-%:11a formaldehydin 30 vesiliuoksella ja NaCNBH3:lla metanolissa. Tällöin seokseen, jossa oli 1-syaani-l-desoksinojirimysiiniä, ja me-tanolia, lisättiin formaldehydin vesiliuosta ja NaCNBH^-Seosta sekoitettiin yön yli huoneen lämpötilassa, sitten se haihdutettiin kuiviin rotaatiohaihduttimessa. Jäännös 35 liuotettiin etanoli/vesiseokseen 2:1, ja liuos vietiin 0 17 7271 7 vahvasti happamella H -muodossa olevalla ionivaihtajalla (Amberlite IR 120) täytettyyn pylvääseen. Pylväs pestiin 2 litralla etanoli/vesi-seosta 2:1. Sitten pylväästä elu-oitiin reaktiotuote etanoli/2-%:nen vesipitoinen NH^-seok-5 sella 2:1. Yksittäiset fraktiot tutkittiin ohutkerroskro-matografialla, ja N-metyylisyaani-l-desoksinojirimysiiniä sisältävät fraktiot yhdistettiin ja haihdutettiin kuiviin. Massaspektri: tärkeimmät piikit ylemmällä massa-alueella ovat m/e = 171 (m-C^OH) , m/e = 157 ja m/e = 144.The compound was prepared by methylation of the reducing agent 1-cyano-1-deoxynojirimycin with 35% aqueous formaldehyde and NaCNBH3 in methanol. To a mixture of 1-cyano-1-deoxynojirimycin and methanol was added aqueous formaldehyde and the NaCNBH 4 mixture was stirred overnight at room temperature, then evaporated to dryness on a rotary evaporator. Residue 35 was dissolved in ethanol / water 2: 1 and the solution was applied to a column packed with 0 17 7271 7 strongly acidic ion exchanger (Amberlite IR 120). The column was washed with 2 liters of ethanol / water 2: 1. The reaction product was then eluted from the column with 2: 1 ethanol / 2% aqueous NH 4. The individual fractions were examined by thin layer chromatography, and the fractions containing N-methylcyano-1-deoxynojirimycin were combined and evaporated to dryness. Mass spectrum: the main peaks in the upper mass range are m / e = 171 (m-CH 2 OH), m / e = 157 and m / e = 144.

10 Esimerkki 3 1-desoksinojirimysiini-l-karboksyylihappoExample 3 1-Deoxynojirimycin-1-carboxylic acid

HOC HHOC H

S-»„S »"

HO { )— COOHHO {) - COOH

/ N»/ N »

HOHO

10 g 1-syaani-l-desoksinojirimysiiniä ja 5 g NaOH:ta kuumennettiin 100 ml:ssa vettä palautusjäähdyt-20 täen tunnin ajan. Seos tehtiin sitten heikosti happamek-si (pH 4) väkevällä HCl:llä ja haihdutettiin kuiviin ro-taatiohaihduttimessa. Jäännös uutettiin kuumalla metano-lilla, NaCl erotettiin, ja metanoliliuos haihdutettiin jälleen kuiviin. Jäännös kiteytettiin ensin pienestä ve-25 simäärästä ja sitten vesi/metanoli-seoksesta.10 g of 1-cyano-1-deoxynojirimycin and 5 g of NaOH in 100 ml of water were refluxed for 20 hours. The mixture was then weakly acidified (pH 4) with concentrated HCl and evaporated to dryness on a rotary evaporator. The residue was extracted with hot methanol, the NaCl was separated off and the methanol solution was evaporated to dryness again. The residue was crystallized first from a small amount of water and then from a water / methanol mixture.

Saanto: 10,5 g 1-desoksinojirimysiini-l-karboksyylihap-poa, sp 268-270°C.Yield: 10.5 g of 1-deoxynojirimycin-1-carboxylic acid, mp 268-270 ° C.

Esimerkki 4 1-desoksinojirimysiini-l-karboksyylihappoetyyli-30 esteriExample 4 1-Deoxynojirimycin-1-carboxylic acid ethyl 30 ester

CH20HCH20H

_N H_N H

HO_/ \-C00C2 H_ 1 V“\HO_ / \ -C00C2 H_ 1 V “\

HO OHHO OH

18 7271 7 7 g 1-desoksinojirimysiini-l-karboksyylihappoa ja 100 ml HCl-etanoliliuosta kuumennettiin palautusjäähdyttäen 2 tuntia. Sitten seos haihdutettiin kuiviin rotaatio-haihduttimessa. Jäännökseen lisättiin etanolia ja emäksen 5 vapauttamiseksi ammoniakin etanoliliuosta. Sakka suodatettiin, ja etanoliliuos haihdutettiin.18 7271 7 7 g of 1-deoxynojirimycin-1-carboxylic acid and 100 ml of HCl-ethanol solution were heated under reflux for 2 hours. The mixture was then evaporated to dryness on a rotary evaporator. Ethanol and ethanolic ammonia solution were added to the residue to liberate the base. The precipitate was filtered off and the ethanol solution was evaporated.

Saanto: 8 g ei-kiteistä 1-desoksinojirimysiini-l-karboks-yylihappoetyyliesteriä.Yield: 8 g of non-crystalline 1-deoxynojirimycin-1-carboxylic acid ethyl ester.

NMR-spektri 100 MHzrllä CH^ODtssä 10 Tripletti ä= 1,3 ppm (3H, -COO-Ct^-CH^) HOH-C.Nuclear Magnetic Resonance Spectrum at 100 MHz CH 2 OD 10 Triplet λ = 1.3 ppm (3H, -COO-CH 2 Cl 2) HOH-C.

Multipletti b= 2,4-2,6 ppm (1H, C-N ) h/I vMultiplet b = 2.4-2.6 ppm (1H, C-N) h / I v

Multipletti ό= 3,2-3,5 ppm (4H9 Multipletti 6 = 3,6-3,9 ppm (2H, - Ci^OH)Multiplet δ = 3.2-3.5 ppm (4H9 Multiplet δ = 3.6-3.9 ppm (2H, --Cl 2 OH)

Kvartetti 0 = 4,2 5 ppm (2H, -COO-CH^-CH^)Quartet 0 = 4.2 δ ppm (2H, -COO-CH 2 -CH 2)

Esimerkki 5 20 N-metyyli-l-desoksinojirimysiini-l-karboksyyli- happoetyyliesteri (kaava I)Example 5 N-Methyl-1-deoxynojirimycin-1-carboxylic acid ethyl ester (Formula I)

CH20HCH20H

N)—N-CHN) -N-CH

HO / \ _COOC_HHO / \ _COOC_H

25 / \25 / \

HO x OHHO x OH

Otsikon yhdiste valmistetaan analogisella esimerkin 2 mukaan 1-desoksinojirimysiini-l-karboksyylihappo-30 etyyliesteristä. Massaspektri: tärkeimmät piikit ylemmällä massa-alueella ovat m/e = 218 (M-CH2OH), m/e = 200, m/e = 176, m/e = 158 ja m/e = 126.The title compound is prepared in analogy to Example 2 from 1-deoxynojirimycin-1-carboxylic acid ethyl ester. Mass spectrum: the main peaks in the upper mass range are m / e = 218 (M-CH 2 OH), m / e = 200, m / e = 176, m / e = 158 and m / e = 126.

Esimerkki 6 1-desoksinojirimysiini-l-karboksyylihappobentsyy-35 li amidi 19 7271 7 h°-ch2 HO— <^J>- 5 / \Example 6 1-Deoxynojirimycin-1-carboxylic acid benzyl-35-amide 19 7271 7 h ° -ch2 HO - <^ J> - 5 / \

HO OHHO OH

500 mg 1-desoksinojirimysiini-l-karboksyylihappo-etyyliesteriä ja 1 ml bentsyyliamiinia keitettiin yhdessä 5 minuuttia. Seoksen jäähdyttyä sitä sekoitettiin usei-10 ta kertoja eetterin kanssa, ja eetterikerros dekantoitiin. Jäännös kiteytettiin metanolista.500 mg of 1-deoxynojirimycin-1-carboxylic acid ethyl ester and 1 ml of benzylamine were boiled together for 5 minutes. After cooling, the mixture was stirred several times with ether, and the ether layer was decanted. The residue was crystallized from methanol.

Saanto: 400 ml 1-desoksinojirimysiini-l-karboksyylihappo-bentsyyliamidia, sp 221-222°C.Yield: 400 ml of 1-deoxynojirimycin-1-carboxylic acid benzylamide, mp 221-222 ° C.

Esimerkki 7 15 N-metyyli-l-deoksinojirimysiini-l-karboksyylihappo- bentsyyliamidi (kaava I) ho-ch2 y n-ch3 /—\ 20 H0\)_ C0-NH-CH2-^£yExample 7 N-methyl-1-deoxynojirimycin-1-carboxylic acid benzylamide (Formula I) ho-ch2 y n-ch3 / - \ 20 H0 \) _C0-NH-CH2- ^ £ y

HO OHHO OH

Valmistetaan analogisesti esimerkin 2 mukaan 1-des-25 oksinojirimysiini-l-karboksyylihappobentsyyliamidista.Prepared in analogy to Example 2 from 1-des-25-oxynojirimycin-1-carboxylic acid benzylamide.

Sp 229-230°C (metanoli).Mp 229-230 ° C (methanol).

Esimerkki 8 1-aminometyyli-1-desoksinojirimysiini ho-ch2Example 8 1-Aminomethyl-1-deoxynojirimycin ho-ch2

30 / NH30 / NH

HO ( ) CH2-NH2 / \HO () CH2-NH2 / \

HO OHHO OH

5 g 1-syaani-l-desoksinojirimysiiniä hydrattiin 35 ravistuskolvissa 100 ml:ssa vettä tunnin ajan 3,5 at H2~ 20 7271 7 paineessa käyttäen Raney-nikkeliä (10 g) katalysaattorina. Katalysaattori suodatettiin pois, ja liuos haihdutettiin kuiviin rotaatiohaihduttimessa. Jäännöstä keitettiin pienessä määrässä metanolia, liuos suodatettiin ja haihdutet-5 tiin jälleen kuiviin. Jäännös kiteytettiin noin 15 ml:sta metanolia. Saanto: 3,4 g 1-aminometyyli-l-desoksinojiri-mysiiniä, sp 148-150°C. Uudelleenkiteyttämällä metanolis-ta sp kohosi 15 4-155°C:seen.5 g of 1-cyano-1-deoxynojirimycin were hydrogenated in 35 shaking flasks in 100 ml of water for 1 hour under a pressure of 3.5 at H2 ~ 20 7271 7 using Raney nickel (10 g) as a catalyst. The catalyst was filtered off and the solution was evaporated to dryness on a rotary evaporator. The residue was boiled in a small amount of methanol, the solution was filtered and evaporated to dryness again. The residue was crystallized from about 15 ml of methanol. Yield: 3.4 g of 1-aminomethyl-1-deoxynojirimycin, mp 148-150 ° C. By recrystallization from methanol, mp rose to 4-155 ° C.

Esimerkki 9 10 1-asetamidometyyli-l-desoksinojirimysiini HOCH 7 \Example 9 1-Acetamidomethyl-1-deoxynojirimycin HOCH 7 \

J-NHJ-NH

HO-( )—CH2-NH-C-CH3HO- () -CH2-NH-C-CH3

✓ ( O✓ (O

15 HO OH15 HO OH

3,8 g:aan 1-aminometyyli-l-desoksinojirimysiiniä 40 ml:ssa metanoli/vesiseosta 1:1 lisättiin 0°C:ssa 3 mol asetanhydridiä. Seosta sekoitettiin 15 minuuttia 0°C:ssa 20 ja sitten 30 minuuttia huoneen lämpötilassa. Sitten seos haihdutettiin kuiviin rotaatiohaihduttimessa. Jäännös liuotettiin noin 60 ml:aan vettä, ja liuos neutraloitiin 0 emäksisellä ioninvaihtajalla (OH -muoto). Ioninvaihtaja poistettiin, ja seos haihdutettiin jälleen kuiviin. Jään-25 nös kiteytettiin kahdesti etanolista. Saanto: 3 g 1-aset-amidometyyli-l-desoksinojirimysiiniä, sp 169-171°C. Massaspektri: tärkeimmät piikit ylemmällä massa-alueella ovat 5 m/e = 216, m/e = 203, m/e = 162 (base peak) ja m/e = 144.To 3.8 g of 1-aminomethyl-1-deoxynojirimycin in 40 ml of a 1: 1 methanol / water mixture was added 3 mol of acetic anhydride at 0 ° C. The mixture was stirred for 15 minutes at 0 ° C and then for 30 minutes at room temperature. The mixture was then evaporated to dryness on a rotary evaporator. The residue was dissolved in about 60 ml of water, and the solution was neutralized with a 0 basic ion exchanger (OH form). The ion exchanger was removed and the mixture was evaporated to dryness again. The residue was crystallized twice from ethanol. Yield: 3 g of 1-acetamidomethyl-1-deoxynojirimycin, mp 169-171 ° C. Mass spectrum: the main peaks in the upper mass range are 5 m / e = 216, m / e = 203, m / e = 162 (base peak) and m / e = 144.

30 Esimerkki 10 N-metyyli-l-asetamidometyyli-1-deoksinojirimysiini (kaava I) CH, OH \—N-CHj 35 HO VcHj-NH-CO-CHjExample 10 N-methyl-1-acetamidomethyl-1-deoxynojirimycin (Formula I) CH, OH \ -N-CHj 35 HO VcHj-NH-CO-CHj

HO OHHO OH

21 7271 7 Tämä yhdiste valmistettiin analogisesti esimerkin 2 kanssa l-asetamidometyyli-l-desoksinojirimysii-nistä.21 7271 7 This compound was prepared in analogy to Example 2 from 1-acetamidomethyl-1-deoxynojirimycin.

Massaspektri: tärkeimmät piikit ylemmällä massa-alueella 5 ovat m/e = 176 ja m/e = 158. Vähemmän intensiivisiä piikkejä: m/e = 230, m/e = 218 ja 217.Mass spectrum: the main peaks in the upper mass range 5 are m / e = 176 and m / e = 158. Less intense peaks: m / e = 230, m / e = 218 and 217.

Esimerkki 11 1-bentsoyyliaminometyyli-l-desoksinojirimysiiniExample 11 1-Benzoylaminomethyl-1-deoxynojirimycin

10 H0C\Hl NH10 H0C \ Hl NH

HO ^ ^~CH, -NH-C0-^O)HO ^ ^ ~ CH, -NH-CO- (O)

HO OHHO OH

]_5 Tämä yhdiste valmistettiin analogisesti esimerkin 9 mukaan 1-aminometyyli-l-desoksinojirimysiinistä, ja bentsoyylikloridista, sp 216°C (metanoli). Massaspektri: tärkeimmät piikit ylemmällä massa-alueella ovat m/e = 278, m/e = 265, m/e = 175, m/e = 162 ja m/e = 105.This compound was prepared analogously to Example 9 from 1-aminomethyl-1-deoxynojirimycin, and benzoyl chloride, mp 216 ° C (methanol). Mass spectrum: the main peaks in the upper mass range are m / e = 278, m / e = 265, m / e = 175, m / e = 162 and m / e = 105.

20 Esimerkki 12 N-metyyli-l-bentsoyyliaminometyyli-l-desoksinojiri- mysiini (kaava I) HOCH, VN-CHj 25 HO*/ ^"CHj-NH-CO-<(^0) HO OH 1 2 3 4 5 6 Tämä yhdiste valmistettiin analogisesti esimerkin 2 2 kanssa 1-bentsoyyliaminometyyli-l-desoksinojirimysii- 3 mistä. Sp 135-136°C (butanoli).Example 12 N-Methyl-1-benzoylaminomethyl-1-deoxynojirimycin (Formula I) HOCH, VN-CH 2 HO * / CH 2 -NH-CO - <(^ 0) HO OH 1 2 3 4 5 6 This compound was prepared in analogy to Example 2 2 from 1-benzoylaminomethyl-1-deoxynojirimycin, mp 135-136 ° C (butanol).

44

Analyysi: C H NAnalysis: C H N

55

Laskettu: 58,1 7,1 9,0 6Calculated: 58.1 7.1 9.0 6

Saatu: 57,2 7,3 9,0 22 7271 7Found: 57.2 7.3 9.0 22 7271 7

Esimerkki 13Example 13

1-tosyyliamidometyyli-l-desoksinojirimysiini CH j OH1-tosylamidomethyl-1-deoxynojirimycin CH 2 OH

5 )~NH y—v HO —( V-CH,-NH-S0,-(OVcH,5) ~ NH y — v HO - (V-CH, -NH-SO, - (OVcH,

H 0/ ^OHH 0 / ^ OH

960 mg 1-aminometyyli-l-desoksinojirimysiiniä ja 10 1 g tosyylikloridia 10 ml:ssa metanoli/vesiseosta 1:1 keitettiin palautusjäähdyttäen 3 tuntia. Sitten liuotin haihdutettiin rotaatiohaihduttimessa, ja jäännöstä sekoitettiin asetonin kanssa. Kiinteä aine suodatettiin, liuotettiin veteen ja liuos neutraloitiin emäksisellä ionin-15 vaihtajalla. Ioninvaihtaja poistettiin, liuos haihdutettiin kuiviin rotaatiohaihduttimessa, ja jäännös kiteytettiin uudelleen vedestä. Saanto: 600 mg 1-tosyyliamido-metyyli-l-desoksinojirimysiiniä, sp 173-175°C.960 mg of 1-aminomethyl-1-deoxynojirimycin and 10 l of tosyl chloride in 10 ml of a 1: 1 methanol / water mixture were refluxed for 3 hours. The solvent was then evaporated on a rotary evaporator and the residue was stirred with acetone. The solid was filtered, dissolved in water and the solution neutralized with a basic ion-15 exchanger. The ion exchanger was removed, the solution was evaporated to dryness on a rotary evaporator, and the residue was recrystallized from water. Yield: 600 mg of 1-tosylamido-methyl-1-deoxynojirimycin, mp 173-175 ° C.

NMR-spektri:NMR Spectrum:

Sing letti: cf - 2,3 6 ppm ^3H , —3~Sing: cf - 2.3 δ ppm ^ 3H, -3 ~

Multipletti: (f = 2,4-2,7 Dm[ IH, ΗΟΗ^χ^ / ) v 25 ΑΑ'ΒΒ' -systeemi välillä / ^ Λ </ = 7,2 ja 7,8 ppm MH, Hy-mV I 1Multiplet: (f = 2.4-2.7 Dm [1H, ΗΟΗ ^ χ ^ /) v 25 ΑΑ'ΒΒ 'system between / ^ Λ </ = 7.2 and 7.8 ppm MH, Hy-mV I 1

Muita kahdeksaa C-H-protonia ei voida erikseen erottaa. Ne absorboivat välillä S = 2,9 ja S - 3,9 ppm.The other eight C-H protons cannot be separated. They absorb between S = 2.9 and S - 3.9 ppm.

23 7271 723 7271 7

Esimerkki 14 N-metyyli-1-tosyyliamidometyyli-1-desoksino-jirimysiini (kaava I) HOCH2Example 14 N-Methyl-1-tosylamidomethyl-1-deoxino-tririmycin (Formula I) HOCH2

HO ' ^ OHHO '^ OH

10 yhdiste, valmistettiin analogisesti esimerkin 2 kans sa 1-tosyyliamidometyyli-l-desoksinojirimysiinistä. Sp. 218-219°C (vesi).10, was prepared analogously to Example 2 from 1-tosylamidomethyl-1-deoxynojirimycin. Sp. 218-219 ° C (water).

Analyysi: C H NAnalysis: C H N

Laskettu: 50,0 6,7 7,8 15 Saatu: 49,7 6,6 8,1Calculated: 50.0 6.7 7.8 15 Found: 49.7 6.6 8.1

Esimerkki 15 N-n-nonyyli-l-asetamidometyyli-desokinojiri-mysiini (kaava I) ho-ch2 2° \_N <ch2,8-ch3Example 15 N-n-nonyl-1-acetamidomethyl-dequinojirimycin (formula I) ho-ch2 2 ° \ _N <ch2,8-ch3

HO-( )-CH -NH-CO-CHHO- () -CH -NH-CO-CH

HO OHHO OH

25 Yhdiste valmistettiin analogisesti esimerkin 1 kans sa 1-asetamidometyyli-l-desokinojirimysiinistä pelkistävästä alkyloimalla nonyylialdehydillä ja NaCNBH^lla metanolissa. Massaspektri: tärkeimmät piikit ylemmällä massa-alueella: m/e = 329, m/3 = 288 (base peak), m/e = 270 ja m/3 = 258.The compound was prepared in analogy to Example 1 from reductive alkylation of 1-acetamidomethyl-1-desoquinojirimycin with nonylaldehyde and NaCNBH 4 in methanol. Mass spectrum: main peaks in the upper mass range: m / e = 329, m / 3 = 288 (base peak), m / e = 270 and m / 3 = 258.

30 Esimerkki 16 5-amino-5.6-didesoksi-D-glukoosi-l-sulfonihappo (kaava III) (a) 5-atsido-3-0-bentsyyli-5.6-didesoksi-l.2-O-iso-propylideeni-ct-D-glukofuranoosi 35 CH3 / \Example 16 5-Amino-5,6-dideoxy-D-glucose-1-sulfonic acid (Formula III) (a) 5-Azido-3-O-benzyl-5,6-dideoxy-1,2-O-isopropylidene-ct -D-glucofuranose 35 CH3 / \

WW

! 0! 0

°A° A

24 7271 7 86 g (0,5 mol) 3-0-bentsyyli-6-desoksi-l. 2-O-isopro-pyl ideeni-5-O-metyy li sul f onyyli-pt-L-idof uranoos ia (valmistettu julkaisussa Carbohyd. Res. (1967), 45-52, T.D. Inch, esitetyllä tavalla), 500 ml dimetyylisulfoksidia ja 65 g 5 (1 mol) NaN^:a kuumennetaan 120-125°C:ssa heikossa typpivir- rassa 5 tuntia. Seoksen jäähdyttyä se kaadetaan 500 ml:aan jäävettä, uutetaan 3 kertaa petrolieetterillä, orgaaninen faasi pestään vedellä ja kuivataan Na2S04:llä. Seos haihdutetaan kuiviin rotaatiohaihduttimessa, jolloin saadaan 156 g 10 (99 %) epäpuhdasta 5-atsido-3-0-bentsyyli-5.6-didesoksi- 1.2-Oisopropylideeni-A-D-glukofuranoosia öljynä, joka voidaan halu-taessa puhdistaa kromatografoimalla firman Merck silikageelillä (70-230 mesh) käyttäen liuottimena heksaa-ni/eetteriä 3:1.24 7271 7 86 g (0.5 mol) of 3-O-benzyl-6-deoxy-1. 2-O-Isopropylidene-5-O-methylsulfonyl-pt-L-idofuranose (prepared as described in Carbohyd. Res. (1967), 45-52, TD Inch), 500 ml dimethyl sulfoxide and 65 g of 5 (1 mol) NaN 2 O are heated at 120-125 ° C under a gentle stream of nitrogen for 5 hours. After cooling, the mixture is poured into 500 ml of ice water, extracted 3 times with petroleum ether, the organic phase is washed with water and dried over Na2SO4. The mixture is evaporated to dryness on a rotary evaporator to give 156 g (99%) of crude 5-azido-3-O-benzyl-5,6-dideoxy-1,2-isopropylidene-AD-glucofuranose as an oil which can be purified, if desired, by chromatography on Merck silica gel (70 -230 mesh) using 3: 1 hexane / ether as solvent.

15 H^-NMR-spektrin tyypilliset nauhat (100 MHz, liuotin C,D^ ) : cf = 7,.15 ppm (m, 5H) 5,72 ppm (d, J=4 Hz, 1H), 1,32 6 o ppm (s, 3H), 1,17 ppm (d, J=6 Hz, 3H), 1,06 ppm (s. 3H).Typical bands of the 1 H-NMR spectrum (100 MHz, solvent C, D 2): cf = 7.15 ppm (m, 5H) 5.72 ppm (d, J = 4 Hz, 1H), 1.32 Δ ppm (s, 3H), 1.17 ppm (d, J = 6 Hz, 3H), 1.06 ppm (s, 3H).

(b) 5-amino-3-0-bentsyvli-5.6-didesoksi-l.2-O-iso-propyylideeni-/*,-D-glukofuranoosi 20 1 lo, 6 g (0,156 mol) LiAlH4:ää lisättiin 250 ml:aan vedetöntä tetrahydrofuraania, ja seokseen tiputettiin huoneen lämpötilassa 100 g (0,313 mol) puhdistamatonta 5-atsido-30 3-0-bentsyyli-5.6-didesoksi-l. 2-isopropylideeni-Ti-D-gluko-furaanosia 200 ml:ssa vedetöntä tetrahydrofuraania. Seosta sekoitettiin yön yli huoneen lämpötilassa ja keitettiin tunnin ajan palautusjäähdyttäen. Seoksen jäähdyttyä siihen lisättiin tipoittain jäillä jäähdyttäen 6 ml vettä ja 35 sitten 13 ml 15-%:ista KOH-liuosta, seosta sekoitettiin yön yli, sakka suodatettiin, ja suodos haihdutettiin ro- 25 7271 7 taatiohaihduttimessa. Jäännökseen lisättiin 50 ml eetteriä, ja eetteriliuos uutettiin kaksi kertaa 100 ml :11a 2-n kloo-rivetyhappoa. Vesifaasi säädettiin alkaliseksi 45-%:isella NaOH-liuoksella ja uutettiin eetterillä (3 x 200 ml). Orgaa-5 ninen faasi kuivattiin Na2SO^:llä ja liuotin haihdutettiin rotaatiohaihduttimessa. Saatiin 62,5 g (68 S) 5-amino-3-0-bentsyyli-5.6-didesoksi-l. 2-0-isopropylideeni-'A-D-glukofura-noosia öljynä.(b) 5-Amino-3-O-benzyl-5,6-dideoxy-1,2-O-isopropylidene-β, β-D-glucofuranose to anhydrous tetrahydrofuran, and 100 g (0.313 mol) of crude 5-azido-3β-O-benzyl-5,6-dideoxy-1 was added dropwise to the mixture at room temperature. 2-Isopropylidene-Ti-D-glucofuran in 200 ml of anhydrous tetrahydrofuran. The mixture was stirred overnight at room temperature and refluxed for one hour. After cooling, 6 ml of water and then 13 ml of 15% KOH solution were added dropwise under ice-cooling, the mixture was stirred overnight, the precipitate was filtered off, and the filtrate was evaporated on a rotary evaporator. To the residue was added 50 ml of ether, and the ether solution was extracted twice with 100 ml of 2N hydrochloric acid. The aqueous phase was basified with 45% NaOH solution and extracted with ether (3 x 200 mL). The organic phase was dried over Na 2 SO 4 and the solvent was evaporated on a rotary evaporator. 62.5 g of (68S) 5-amino-3-O-benzyl-5,6-dideoxy-1 were obtained. 2-O-Isopropylidene-'A-D-glucofuranose as an oil.

^H-NMR-spektrissä (100 MHz, liuottimena CDC1-,) saa~ 10 tiin seuraavat tyypilliset nauhat: tf - "7,3 ppm (m. 5H), 5,58 ppm (d, J=4 Hz, 1H) 5,70 ppm (d, J =12Hz, 1H), 5,58 ppm (d, J = 4 Hz, 1H), 5,42 ppm (d, J=12 Hz, 1H), 3,98 ppm (d, J=4 Hz), 1,45 ppm (s, 3H9, 1,30 ppm (s, 3H), 1,15 ppm (d, J=6 Hz, 3H).The 1 H-NMR spectrum (100 MHz, solvent CDCl 3) gave the following typical bands: tf - "7.3 ppm (m. 5H), 5.58 ppm (d, J = 4 Hz, 1H) 5.70 ppm (d, J = 12 Hz, 1H), 5.58 ppm (d, J = 4 Hz, 1H), 5.42 ppm (d, J = 12 Hz, 1H), 3.98 ppm (d , J = 4 Hz), 1.45 ppm (s, 3H9, 1.30 ppm (s, 3H), 1.15 ppm (d, J = 6 Hz, 3H).

15 (c) 5-amino-5.5-didesoksi-l.2-isopropylideeni-.A-D- glukofuranoosi CH3 H„N---; Λ 2 / \ 20 ( OH) lo(C) 5-amino-5,5-dideoxy-1,2-isopropylidene-.alpha.-D-glucofuranose CH3 H2N; Λ 2 / \ 20 (OH) lo

°-yL° -yL

50 g (0,17 mol) 5-amino-3-0-bentsyyli-5.6-didesoksi-25 1.2-0-isopropanylideeni-,>!rD-glukofuranoosia 1 litrassa meta- nolia hydrattiin 70 at paineessa 60°C:ssa palladiumhiilika-talysaattorin (5-%:inen, 10 g) läsnäollessa 5 tuntia. Katalysaattori suodatettiin pois ja liuos haihdutettiin rotaatiohaihduttimessa. Saanto: 25,7 g (76 %). Tuote kiteytettiin 30 uudelleen etikkaesteristä.50 g (0.17 mol) of 5-amino-3-O-benzyl-5,6-dideoxy-1,2,2-O-isopropanylidene-N, N-glucofuranose in 1 liter of methanol were hydrogenated at 70 ° C at 60 ° C. Palladium on carbon in the presence of a catalyst (5%, 10 g) for 5 hours. The catalyst was filtered off and the solution was evaporated on a rotary evaporator. Yield: 25.7 g (76%). The product was recrystallized from ethyl acetate.

^H-NMR-spektrissä (100 MHz, yhdiste liuotettiin CDCl^zeen, ja liuos ravistettiin D20:n kanssa) saatiin: d = 5,97 ppm (d, J=4 Hz, 1H), 4,50 ppm (d, J=4 Hz, 1H), 4,34 ppm (d, J=4 Hz, 1H), 1,49 ppm (s. 3H), 1,32 ppm (s.1 H-NMR spectrum (100 MHz, the compound was dissolved in CDCl 3, and the solution was shaken with D 2 O) gave: d = 5.97 ppm (d, J = 4 Hz, 1H), 4.50 ppm (d, J = 4 Hz, 1H), 4.34 ppm (d, J = 4 Hz, 1H), 1.49 ppm (s. 3H), 1.32 ppm (s.

35 3H), 1,28 ppm (d, J=6 Hz, 3H).35 3H), 1.28 ppm (d, J = 6 Hz, 3H).

(d) 5-amino-5.6-didesoksi-D-glukoosi-l-sulfonihappo 26 7271 7 C»20H© 7— ^η HO--------S03®(d) 5-Amino-5,6-dideoxy-D-glucose-1-sulfonic acid 26 7271 7 C »20H © 7— ^ η HO -------- SO3®

HO OHHO OH

10 g (0,049 ml) 5-amino-5.6-didesoksi-l.2-0-isopropylideeni-O^-D-glukofuranoosia suspendoitiin 50 ml:aan vettä, ja suspensioon johdettiin 15 tunnin ajan rikkidioksidia. Saatiin 10 kirkas liuos, joka kuumennettiin 60°C:seen. Noin 4 tunnin kuluttua 5-amino-5.6-didesoksi-D-glukoosi-l-sulfonihappo alkoi kiteytyä liuoksesta. Seoksen jatkokäsittely suoritettiin lisäämällä seokseen 100 ml metanolia, antamalla seoksen seistä yön yli ja suodattamalla sitten erottunut 5-amino-15 5.6-didesoksi-D-glukoosi-l-sulfonihappo. Saanto: 8,5 g (71 %), sp. 180°C (hajoaa).10 g (0.049 ml) of 5-amino-5,6-dideoxy-1,2-O-isopropylidene-N, N-D-glucofuranose were suspended in 50 ml of water, and sulfur dioxide was bubbled into the suspension for 15 hours. A clear solution was obtained which was heated to 60 ° C. After about 4 hours, 5-amino-5,6-dideoxy-D-glucose-1-sulfonic acid began to crystallize from solution. Further work-up was carried out by adding 100 ml of methanol, allowing the mixture to stand overnight and then filtering off the separated 5-amino-15,5-dideoxy-D-glucose-1-sulfonic acid. Yield: 8.5 g (71%), m.p. 180 ° C (decomposes).

'1'H-NMR-SOektrissä (100 MHz, liuotin DMSO-d,) oli ·*· b tyypilliset nauhat: d= 1,13 ppm (d, J=6 Hz).The 1 H-NMR spectrum (100 MHz, solvent DMSO-d 2) showed typical bands: d = 1.13 ppm (d, J = 6 Hz).

Claims (6)

27 7271 7 Patenttivaatimus Menetelmä uusien, terapeuttisesti käyttökelpoisten 2-hydroksimetyyli-3,4,5-trihydroksipiperidiinijohdannaisten 5 valmistamiseksi, joilla on yleinen kaava I CH OH r / 1 y—nA process for the preparation of new therapeutically useful 2-hydroxymethyl-3,4,5-trihydroxypiperidine derivatives of the general formula I CH OH r / 1 y-n 10 HO7 ^ OH jossa on C^_^g-alkyyli ja R2 on -CN, -COOR', -CONHR', -CH2-NH-CO-R' tai -CH2-NH-S02P', jolloin R' on mahdollisesti fenyyliryhmällä substituoitu C^_g-alkyyliryhmä tai mahdolli-15 sesti C^_g-alkyyliryhmällä substituoitu fenyyliryhmä, tunnettu siitä, että 1. yhdiste, jolla on kaava II CH-OH \ ©HO7 ^ OH having C1-6 alkyl and R2 is -CN, -COOR ', -CONHR', -CH2-NH-CO-R 'or -CH2-NH-SO2P', wherein R 'is optionally a phenyl group substituted by a C 1-6 alkyl group or a phenyl group optionally substituted by a C 1-6 alkyl group, characterized in that 1. a compound of the formula II CH-OH 20. NH2 0 HQ~ y-SO3 ' (II) HO OH saatetaan reagoimaan syaanivetyhapon kanssa yhdisteeksi, 25 iolla on rakenne 1' CH-OH HO--( \- CN \-V d’)20. NH 2 O HQ ~ y-SO 3 '(II) HO OH is reacted with hydrocyanic acid to give a compound having the structure 1' CH-OH HO - (\ - CN \ -V d ') 30 HO7 OH 2a) saadun, rakenteen 1' mukaisen yhdisteen sekundäärinen amiinityppiatomi alkyloidaan; tai 2b) saatu, rakenteen 1' mukainen yhdiste, joko 7271 7 28 --V . . (i) hydrataan katalyyttisesti yhdisteeksi, jolla on rakenne I" CH~OH \ /--NHHO7 OH 2a) the secondary amine nitrogen atom of the obtained compound of structure 1 'is alkylated; or 2b) a compound of structure 1 'obtained, either 7271 7 28 --V. . (i) catalytically hydrogenated to a compound of structure I "CH-OH \ / NH 5 HO--/ \- CH2-NH2 (I,,) HO OH ja sen jälkeen rakenteen I" omaavan yhdisteen primäärinen 10 aminoryhmä alkyloidaan, asyloidaan tai sulfonyloidaan tai (ii) saatetaan reagoimaan isosyanaatin tai isotiosya-naatin kanssa, ja sen jälkeen sekundäärinen amiinityppiatomi alkyloidaan; tai 2c) saatu, rakenteen 1’ mukainen yhdiste saippuoidaan 15 yhdisteeksi, jolla on rakenne I'" CH0OH Vnh HO-/ \-COOH 20 (I'" ’ H0 OH ja saatu, rakenteen Iomaava yhdiste (i) esteröidään ja 25 (ii) saatu esteri mahdollisesti saatetaan reagoimaan amiinin kanssa amidiksi tai (iii) saatu esteri mahdollisesti saatetaan reagoimaan vetyä luovuttavan pelkistysaineen kanssa yhdisteeksi, jolla on rakenne I"" 30 ch2oh / N? (I"") HO-( \-CH2OH 1 HO/ ^OH ja vaiheessa (i), (ii) tai (iii) saadun yhdisteen sekundäärinen amiinityppiatomi alkyloidaan. 29 Patentkrav 7 2 717 Förfarande för framställning av nya, terapeutiskt användbara 2-hydroximetyl-3,4,5-trihydroxipiperidinderivat 5 med den allmänna formeln I C\20H ^r_ -O 10 / \ HO OH väri R, är C -alkyl och R_ är -CN, -C00R', -CONHR', J- l"lo z -CH?-NH-CO-R' eller -CH^-NH-SO^R', varvid R' är en even-15 tuellt med en fenylgrupp substituerad C-, _^-alkylgrupp eller eventuellt med en C1_s~alkylgrupp substituerad fenylgrupp. kännetecknat därav, att 1. en förening med formeln II ™ CH-OH 20 x2 © /~NH2 Θ H°—S°3 (II) / \ HO OH 25 omsätts med cyanvätesyra tili en förening med strukturen 1' CH OH \2 )-N HHO - / - CH2-NH2 (I ,,) HO OH followed by the primary amino group of the compound of structure I "is alkylated, acylated or sulfonylated, or (ii) reacted with an isocyanate or isothiocyanate, followed by a secondary alkylation of the amine nitrogen atom, or 2c) saponifying the obtained compound of structure 1 'to a compound of structure I' "CH0OH Vnh HO- / \ -COOH 2 O (I '"' HOH OH and esterifying the resulting compound of structure (i) and (Ii) optionally reacting the resulting ester with an amine to an amide, or (iii) optionally reacting the resulting ester with a hydrogen donating reducing agent to give a compound having the structure I "" 30 ch2oh / N? (I "") HO- (\ -CH2OH 1 HO / ^ OH and the secondary amine nitrogen atom of the compound obtained in step (i), (ii) or (iii) are alkylated. allmänna formeln IC \ 20H ^ r_ -O 10 / \ HO OH color R, är C -alkyl and R_ är -CN, -C00R ', -CONHR', J- l "lo z -CH2 -NH-CO-R 'eller - CH 2 -NH-SO 2 R ', even R' is even substituted with a phenyl group substituted by a C 1-6 alkyl group or an optionally substituted C 1-8 alkyl group with a phenyl group. kännetecknat därav, att 1. en förening med formuleln II ™ CH-OH 20 x2 © / ~ NH2 Θ H ° —S ° 3 (II) / \ HO OH 25 omsätts med cyanvätesyra account en förening med structuren 1 'CH OH \ 2 ) -NH 30 HO -( }-CN f1') /' \ HO OH 2a) den sekundära aminkväveatomen i den erhällna 35 föreningen med strukturen I1 alkvleras; eller 2b) den erhällna föreningen med strukturen 1' antingen30 HO - (} -CN f1 ') /' \ HO OH 2a) den secondary to the amino acid 35 of the structure I1; or 2b) are preferably formed with the structure 1 'antennas