FI71749B - Foerfarande foer framstaellning av vid behandling av hoegt blodtryck anvaendbar angiotensin omvandlande enzym-inhibitor - Google Patents
Foerfarande foer framstaellning av vid behandling av hoegt blodtryck anvaendbar angiotensin omvandlande enzym-inhibitor Download PDFInfo
- Publication number
- FI71749B FI71749B FI792806A FI792806A FI71749B FI 71749 B FI71749 B FI 71749B FI 792806 A FI792806 A FI 792806A FI 792806 A FI792806 A FI 792806A FI 71749 B FI71749 B FI 71749B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- proline
- solution
- compound
- benzoyl
- formula
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/06—Dipeptides
- C07K5/06139—Dipeptides with the first amino acid being heterocyclic
- C07K5/06173—Dipeptides with the first amino acid being heterocyclic and Glp-amino acid; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
- C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
- C07D207/04—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
- C07D207/10—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
- C07D207/16—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
- C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
- C07D207/18—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member
- C07D207/22—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
- C07D207/46—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with hetero atoms directly attached to the ring nitrogen atom
- C07D207/50—Nitrogen atoms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/06—Dipeptides
- C07K5/06086—Dipeptides with the first amino acid being basic
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
[ilir7! ΓΒ1 (11)KUUkLUTUSJULKA,SU 717/iq dfM 9 J ^ UTLÄGGNINGSSKRIFT /1/49 C my on:-tty
Pj) x , . i o ai« u J
(51) Kv.ik.‘/int.ci.* C 07 K 5/06, 5/08 SUOMI —FINLAND (21) Patenttihakemus - Patentansökning 79280β (22) Hakemispäivä — Ansökningsdag 10.09 79 (Fl) ' ' (23) Alkupäivä — Giltighetsdag 10.09.79 (41) Tullut julkiseksi — Blivit offentlig |2 03 80
Patentti- ja rekisterihallitus Nähtäväksipanon ja kuul.julkaisun pvm. - , n Q£
Patent- och registerstyrelsen ^ * Ansökan utlagd och utl.skriftcn publicerad ' ‘00 (86) Kv. hakemus — Int. ansökan (32)(33)(31) Pyydetty etuoikeus — Begärd prioritet 11 .09.78 06.11.78, 14.08.79, 14. 08.79, 14.08.79 14.08.79, 14.08.79, 14.08.79, 14.08.79 USA(US) 941289, 958180, 064897, 064898 064899, 064900, 064901, 064902, 064903 (71) The University of Miami, Coral Gables, Florida, USA(US) (72) James Walter Ryan, Miami, Florida, Alfred Chung, Miami. Florida, USA(US) (74) Oy Kolster Ab (54) Menetelmä verenpainetaudissa käytettävän angiotensiiniä muuttavan entsyymi-inhibiittorin valmistamiseksi - Förfarande för framställ-ning av vid behandling av högt blodtryck användbar, angiotensin omvandlande enzym-inhibitor
Angiotensiiniä muuttavalla entsyymillä eli peptidyylidipe?--tidihydrolaasilla, jota nimitetään seuraavassa ACE:ksi, on keskinen merkitys verenpainetaudin fysiologiassa. Entsyymi pystyy muuttamaan dekapeptidin, angiotensiini I;n, jossa on aminohapposarja
AspArgValTyrlleHisProPheHisLeu oktapeptidiksi, angiotensiini II:ksi, poistamalla karboksipääte-ryhmän HisLeu.
Kemialliset symbolit tarkoittavat seuraavaa:
Ala = L-alaniini Arg = L-arginiini Asp = L-aspartiinihappo < Glu = pyro-L-glutamiinihappo Gly = glysiini 2 71749
Hip = hippurihappo (bentsoyyliglysiini)
His = L-histidiini Ile = L-isoleus.iini Phe = L-fenyyl.ialaniini Pro = L-proliini ^ Pro = L-3,4-dehydroproliini Ser = L-seriini Trp = L-tryprofaani Tyr = L-tyrosiini Vai = L-valiini ACE = angiotensiiniä muuttava entsyymi
Hepes = N^-hydroksietyylipiperatsiini-N'-2-etaanisulfoni-happo.
Angiotensiini I:ä muodostuu reniini-entsyymin vaikutuksesta, jota on munuaisissa; muissa kudoksissa ja plasmassa esiintyy endopeptidaasi, joka vaikuttaa seerumin CL-2-globuliiniin.
Tietyt veressä esiintyvät peptidit aiheuttavat kohonnutta verenpainetta. Yksi näistä on angiotensiini II, joka on voimakas pressori (verenpainetta kohottava aine). Bradykiniini, nonapeptidi, jolla on sarja: ArgProProGlyPheSerProPheArg, on voimakas depresso-ri (verenpainetta alentava aine). Suoran pressorivaikutuksen lisäksi angiotensiini II kiihottaa aldosteronin vapautumista, mikä kohottaa verenpainetta aiheuttamalla solunulkopuolisen suolan ja nesteiden retentiota. Terveen ihmisen veressä on angiotensiiniä mitattavissa oleva määrä. Munuaisverenpainetautia sairastavilla sen kon-sentraatio veressä on kuitenkin kohonnut.
Sekä terveillä että verenpainetautia sairastavilla ihmisillä ACE-aktiv.iteettitaso on tavallisesti yli sen tason, joka tarvitaan angiotensiini II:n tason pitämiseen havaittavalla tasolla. On kuitenkin havaittu, että olennaista verenpaineen alenemista veren-painetautipotilailla saadaan käsittelemällä ACE-inhibiittoreilla (Gavras, I. et ai., New Engl. J. Med. 291 (1974), 8177-
Esillä oleva keksintö koskee menetelmää uusien ACE-inhibiit-toreiden valmistamiseksi, joilla on kaava
O
R—A—S-(CH„) -CH-C-R- I
2 n | 2 R1 11 3 71 749 jossa R on vety, formyyli, asetyyli, propanoyyli, butanoyyli, bentsoyy li , syklopentyylikarbonyyl.i , tert. -butyylioksikarbonyyli , syklopentyylikarbonyyli-L-lysyyli tai pyro-L-glutamyyli, A on L-fenyy1 ialanyy1i, glysyyli, L-alanyyli, L-tryptofyyli, L-isoleusyyli, L-leusyyli tai L-valyyl.i, jolloin Ct-amino liittyy R:ään amidisidoksella, sillä ehdolla, että fenyylialanyyli on ra-seeminen, kun R on bentsoyyli, R.j on vety tai metyyli, R on L-proliini, L-3,4-dehydroproli.ini tai D,L-3,4-dehydro- 1 0 , .... proliini, jolloin iminoryhmä on liittynyt viereiseen £ -ryhmään imidisidoksella, ja n on 0 tai 1, jolloin kun n on 0, niin R^ on metyyli,
Kaikilla tässä esitetyillä aminohapoilla on L-konfiguraatio jollei muuta mainita. Fenyy lialaniin.i on raseeminen, kun R on bentsoyy li. Keksinnön mukaiset yhdisteet ovat ACE-inhibiittoreita, ja niitä voidaan käyttää oraalista tehokkaina verenpainetta alentavina aineina.
Havainto, että keksinnön mukaisilla yhdisteillä on voimakas ACE-inhibiitiovaikutus, lisää huomattavasti inhiboivien yhdisteiden lukumäärää. Vaikka monet tunnetut inhibiittorit ovat proliinijohdannaisia, on korvaamalla proliini muilla aminohapoilla saatu tehokkaita inhibiittoreita. Arginiini, fenyylialaniini ja alaniini voivat korvata proliinin siten, ettei tehon muuttumista voida havaita.
Proliinin korvaamista L-3,4-dehydroproli.in.illa on paljon tutkittu. Substituoimalla bradykiniin.in 7-asema L-3,4-,/^Pro-ryhmällä saadaan bradykiniinijohdannainen, jonka fysiologinen aktiviteetti on merkitsevästi alentunut ^Fischer, G. H. et ai., Arch. Biochem. Biophys. 189 (1978), 81_7* Toisaalta ACE-inhibiittorin BPPQ 3-, 5-tai 9-aseman substituutio L-3,4-APro-ryhmällä parantaa inhibiitto-riaktiviteettia. Nykyisin ei voida selittää niitä erilaisia tuloksia, joita saadaan korvattaessa proliini A.Pro-ryhmällä. Ei myöskään ole saatu selvää kuvaa siitä, mikä vaikutus on ACE-inhibiitto-reiden erilaisissa asemissa olevilla muilla proliinijohdannais- tai analogis ubstituenteillä.
4 71749
Aminohapon vaikutusta edellä olevan kaavan rikkiatomin vasemmalla puolella olevaan osaan ei tähän mennessä ole tutkittu. On uskottu, että tämä aminohappo toimii entsyymin lisätunnusasemana.
Jos tämä pitäisi paikkansa, voitaisiin odottaa, että yhdiste, jonka tässä asemassa on aminohappo, olisi parempi inhibiittori. Ei ole tunnettua, mitkä aminohapot mahdollisesti vaikuttavat tässä asemassa tietyn yhdisteen inhibiittoriaktiviteet.in parantamiseksi.
Nyt on siis havaittu, että erilaiset aminohapot ovat vaikuttavia ja että hydroksiproliinei 11a, proli.inilla, L- ja D,L-dehydro-proliinilla ja tiatsolid1inijohdannaisi11a on kaikilla tehokas verenpainetta alentava vaikutus ja korkea ACE-inhibiittoriteho.
Tunnetaan melko läheistä rakennetta olevia yhdisteitä, nimittäin kaptopriilia ja sen analogeja, joilla yhdisteillä on kaava 0 n R-S-(CH ) -CH-C-R-2 n j 2 R1 jossa R on vety, alkyyli tai asyyli. Näistä yhdisteistä siis puuttuu ryhmä A. Kaptopriilissa ja sen analogeissa ei myöskään ole sellaisia R-ryhmiä, jotka ovat aminohapon tai sen analogin jäännöksiä. Lisäksi löytyy huomattavia ominaisuuksiin liittyviä eroja. Uusien yhdisteiden merkaptoryhmä on stabiili in vivo ja niiden molekyylissä on yksi entsyymiä tunnistava kohta enemmän - näitä seikkoja ei ole esitetty eikä edes ehdotettu alan aikaisemmissa julkaisuissa. Useimmat, vaikkakaan ei kaikki, tällaiset aikaisemmat julkaisut ovat peräisin E. R. Squibb and Sons, Inc.:sta, kaptopriilin /~(3-merkapto- 2-metyylipropionyyli)-proliinin/ kehittäjältä. Kaikki tällaiset aikaisemmat julkaisut koskevat vain yksinkertaisia "kaptopriilieste-reitä" ja analogisia markaptoasyylijohdannaisia.
Tiedetään, että nämä yksinkertaiset esterit - edelläolevan kaavan I mukaiset yhdisteet, joissa R on asyyliryhmä kuten asetyyli-tai bentsoyyliryhmä, ja joista puuttuu hakijan vaatimuksissa määritelty ryhmä A - hydrolysoituvat helposti vastaaviksi vapaiksi mer-kaptaaneiksi (ks. esim. US-patentt.i 4 356 1 82, Eur. J. Pharm. 67 (1980), ss. 97 - 99 ja Clin. Pharmacol. Ther. 27 (1980), ss. 636 -641 ) .
Il 5 71749
Siten uusia yhdisteitä on helpompi käsitellä kuin kaptoprii-lia tai sen analogia, niiden paremman kemiallisen pysyvyyden ansiosta. Lisäksi kaptopriil.i muodostaa helposti sekasulfideja, jotka saattavat olla antigeenisiä, ja onkin todettu hajanaisia allergisia reaktioita (ks. Gavras et ai., New England J. Med. 298 (1978), s. 991 ja Hoorntje et ai., The Lancet I. (1980), ss. 1212 - 1214).
Uudet yhdisteet ovat siten parempia angiotensiiniä muuttavan entsyymin inhib.iittoreita, eli pysyvämpiä kuin tunnetut yhdisteet (vähemmän herkkiä R-A-ryhmän hydrolyyttiseen poistoon), ja vähemmän todennäköisiä indusoimaan D-penisillamiinin kaltaisia reaktioita. Uusia yhdisteitä voidaan säilyttää pitkiä aikoja niiden hajoamatta, eikä tarvitse lisätä pelkistävää ainetta dimeroitumisreaktioiden estämiseksi .
Farmakologiset kokeet ja niiden tulokset
Keksinnön mukaisesti valmistettujen yhd.i steiden vaikut us qraalisesti annettuna
Rotat (210 - 290 g) saivat paastota yön yli, sitten ne nukutettiin intraperitoneaalisesti pentobarbitaal.i 11a (50 - 60 mg/kg) . Eläimille suoritettiin rintakehän avaus ja ne saivat mekaanista tekohengitystä. Reisilaskimoon asetettiin kanyyli angiotensiini I:n injisoimiseksi, ja toinen kanyyli asetettiin päävaltimoon valtimo-verenpaineen suoraa mittausta varten. Reisilaskimoon injiso iti in 1000 yksikköä hepariinia koaguloitumisen estämiseksi. Verenpaine mitattiin piirturiin yhdistetyllä painemuuttajalla. Rotille annettiin injektiona 160 - 400 ng/kg angiotens.iini I: tä 20 μΐ-.ssa 0,9-% NaCl-liuosta (tämä angiotensiin.i I:n määrä riittää kohottamaan valtimo-verenpainetta keskimäärin 27 - 50 mm Hg). Kun kunkin rotan reagoiminen angiotensiin.i I:n antoon oli määritetty, anett.iin rotalle maha-putken kautta 5,5 - 23 mmoolia/kg koeyhdistettä (koeyhdiste oli liuotettu 0,15 ml:aan vettä + 10 jul:aan 1-n natriumbikarbonaattia). Tietyin aikavälein mitattiin ang.iotensi.ini I:n annosten (160 - 400 ng/kg) vaikutus valtimoverenpaineeseen. Tulokset nähdään taulukossa 1. Yhdisteen numeron jälkeen on suluissa ilmoitettu sen annossuuruus. Niinpä 13 (13,6) osoittaa, että esimerkin 13 mukaisesti valmistettua yhdistettä annettiin oraalisesti 13,6 yumoolia/kg. Aika minuutteina tietyn yhdisteen oraaliannon jälkeen angiotens!ini I:n vaikutusta mitattaessa on ilmoitettu hakasuluissa "% kontrollista"-luvun jälkeen.
6 71749 ' · ' r~. t~·“λ r ' —- ' *-» —* ' f vt <0 u~\ ci r—* ^ <r ort »? <f -«.t ,/n N.r o ·-< /—- I O' »·< csi f'4 rn j iy~t KT- —· *-* —* 01
^ O O <Γ <T Ό <3 vD ^ v? vO O
O o 00 r» r-. r - vj m < Ό n sr r- m 0 r—t 1—< r—* r—* i'—' r—* r—* .--s m h ,-. h n a) n o· ^ o r> st (N nn vj vna ο π ^vO 1 + ^OHfsc4nn 4θνί>ΓΝθηςτ\»ΗΗΗΗΝΝ Γ> ^ W — C ^ c m ιλ »n 01 w -- toor^r^inr^r^r^-y^inr^mcN-i’ £ Q) οσ'σΌΝσ'Ό'Γίη'ί'ί'ί^'ί^ιηιηντνοΝΝ
0) (U Q) X C rH •H : oJ
Q. I r—» . I · > . ,OD 00 m l/n £71 ._ voOcJOOvrmoooico-<n\ocoo
UC CN1^ I
u c m ^ '”' Γ· 3 ' o^^^mvoocvio^o^r^vj· CUC Ο^0\®00«ΛνΛιΛΠΓηνβΠί0<ί £> Π3 ***·
•H P rH -P fO
05 03
rnn vooN'TinrocoojcoaDfCo^tN
w /'—s 1 + H(Nn*jinvoM£HMNN
Cn Π3 Γί — —————————————— yj ._ ο^^ΠΝΓΝΓΝΟ^^η-ίηηΓη r*· ' 1 \ 0) —* tr>-P ^ r- c -p 0 a op c
O 1' O c ,—..—, .—. >—..—. —·—^ .—..— -—-<sjsjvc«nocr\NonJOH
, ^ *H ·#η m c*» i— '-<oN0icooc'f^o^Nnsjr>0')a''-'^'J'D<^
j I ^ ^ 1 + rsNNn(nminrsrsO)--'^i-^^rHr-iM-,CM(NMNM
\£ νχΐ p ^ '«—' ONsi^OOCCOCOcOONNOOOvOCDCOCO'T'JOO'J
^ J CD 0 o\ vo n < -j cn NHHN^-jn^<r\i)vOO<ccoco d ! . +j ε -1 I 03 (Π Ή
PI : 1—I -H CO
rj H H 0 '! C/50 m ^ .—nnx^m^^^ffxfOsrvD-Nnvr
1 p CD v 0^ 1 + inM^rjmnnNisjnoMD^HHH
Eh [ C C WO w cnvO^O'O'H^'iCCvOvOOCOOCC^^vO'CvO
I £0 ’HC ©ι/Ν\0«ΝΓΗθΙί\|Μ^~-i—« ,-< fsf fj <N <N <N
03 Μ Ό c JZ 03 C 03 >h ^
·· C
H *H ^ ininom-^rvinin^no 1 + ^-<ηη<ίΐηίθσι^ I J'' ,
_J _, O^'i^^erjsJstvOCCO
•ή >-» ο ά <r nj <r rn sj <r 0 0 c°i cn (u - c c
d) *H
-p ε
0 0J
friri m\oo 'ΛιησΌίο^'Λ'ίοο
^ q ^-v j ^.rH-tfsinninin^o^LO
<44
v " OrN(j\\^CDCCnn^-<vOvD
oi— vOvrtnnncnnriMcn
•H
·—> «— »—« *—· «—^ r—» r—» *—· CT\ <J* O ^ tnM'-M^forNDsfH^^of'Winr'' 1 -f· \£p —1 m m νΰ r~- co 0 > -—' ·~* ·—' ·—* ·“♦
fN<N
^ 0'-^fv>C'nomoO'>or^r-.o<T'-<rvn^
·<Γ (M M n r*i -T tr, vn N
m <n h m ^ < h o<^ 1 + mΓ2,^2.
cnS
s—^ o O ^ r^· on O O <r c>i c-j c^i **4
r— —. r— ------ r-.. r-^ O IN m 1^ r~N
c-v tn co <—> r, co r ί m <* (n cr, cr; r« o o O ^ n vO vg 1 I n ^ m (N n n <f ν'ίπ o co ^ ^ H
, Γ0 ^ ^ w-
It
-. OOC-CO»TOCOOO-COOO<«-DOOOO
—' 0 <r 01 <·: 01 .-1 esi μ-- 01 c l — ··* c~i <N o'i -n I ^ 71749 7
Keksinnön mukaisesti valmistettujen yhdisteiden vaikutus suonensisäisesti annettuna
Nukutetut rotat preparoitiin samoin kuin edellisessä kokeessa. Kun rotan reaktio angiotensiini I:n antoon oli määritetty, annettiin sille tutkittavaa yhdistettä injektiona reisilaskimoon 2 yimoolia/kg 15 pl:ssa 0,01-n natriumbikarbonaattiliuosta. Tietyin aikavälein mitattiin angiotensiini Iin (400 ng/kg) vaikutus val-timopaineeseen. Tulokset nähdään taulukossa 2. Tulokset ovat samansuuntaisia taulukon 1 tulosten kanssa.
Taulukko 2
Angiotensiini I:n annoksella 400 ng/kg saatu verenpaineen kohoaminen %:eina kontrollista /minuutteja suonensisäisestä annosta/
Yhdiste (annos) 20 37 41 (2)_(2)___(2)_ 1007. [-5] 1007. [-5] 1007. [-5] 0 [+0.5] 8 [+3] 8 [+0,5] 19 [3] 15 [9] 18 [5] 19 [9] 23 [14] 21 [11] 22 [13] 23 [19] 24 [14] 31 [18] 33 [24] 29 [17] 31 [22] 41 [37] 34 [20] 50 [34] 46 [45] 42 [24] 63 [47] 46 [54] 47 [32] 78 [65] 46 [77] 53 [43] 75 [103] 51 [87] 58 [49] 94 [113] 61 [56] 71 [71] 78 [76] 76 [88] 76 [99] 74 [109] 84 [125] 71749
Esimerkissä 1 on selitetty menetelmä uusien yhdisteiden aktiivisuuden määrittämiseksi, ja esimerkit 2-50 valaisevat keksinnön mukaista menetelmää. Esimerkkiosan lopussa on lueteltu keksinnön mukaisesti valmistettujen yhdisteiden aktiivisuus. Näissä esimerkeissä ohutkerroskromatografia (TLC) suoritettiin silikageelilevyillä. Ohutkerroskromatografiässä käytettyjä liuotinsysteemejä on merkitty seuraavilla numeroilla: 1) metanoli:kloroformi, 1:1 (tilavuusosia), 2) bentseeni:vesi:etikkahappo, 9:1:9, 3) etikkahappo:vesi:n-butanoli, 26:24:150, 4) n-butanol.i :pyridiini :etikkahappo: vesi , 15:10:3:12, 5) kloroformi:metanoli:ammoniumhydroksidi, 60:45:20, 6) kloroformi:metanoli:etikkahappo, 2:1:0,003, 7) n-butanoli:et.ikkahappo:ves.i, 4:1:1, ja 8) etyyliasetaatti:etikkahappo, 38:2.
Paperielektroforeesissa käytetyt puskurit olivat seuraavat: pH 1,9 - muurahaishappo:etikkahappo:vesi, 3:2:25, ja pH 5,0 - dietyleeni-glykoli:etikkahappo:pyridiini:vesi, 100:6:8,5:885. Aminohappojen tert.-butyyl.ioksikarbonyyli-, bentsoyyli-, asetyyli-, formyyli-, propanoyyli-, fenyyliasetyyli- ja fenyylipropanoyylijohdannaiset ovat kaupallisesti saatavia tuotteita. Sephadej^ LH-20, Sephade^5> G-10 ja SephadeisS) g-26 ovat Pharmacia Inc. :n tavaramerkkejä (Uppsala , Ruotsi).
Esimerkki 1 ACE-aktiviteettikoe
Useimmissa tässä kuvatuissa kokeissa entsyymi määritettiin 0,05-m Hepes-puskurissa, pH 8,0, joka sisälsi 0,1-m NaCl ja 0,75-m
Na0SO.. Käytetty substraatti oli bentsoyyli-GlyHisLeu lopullisessa 1 4 -4 -4 konsentraatiossa 1x10 -m (K ^ 2 x 10 -m) yhdessä noin 130 000 cpm:n kanssa [ H^bentsoyyli-GlyHisLeu (25 Ci/mmooli) kanssa. Entsyymi laimennettiin edellämainittuun puskuriin sellaiseen pitoisuuteen, että puskuroitu entsyymi pystyi hydrolysoimaan 13 % substraatista 15 minuutin inkuboinnissa 37°C:ssa. Koe aloitettiin esi-inkuboimalla 40 μΐ entsyymiä ja 10 pl vettä tai inhibiittoria veteen liuotettuna 5 minuuttia 37°C:ssa. Tämän jälkeen lisättiin reaktion alkuunsaami-seksi 50 μΐ substraattia, ja liuosta inkuboitiin 15 minuuttia 37°C:ssa. Reaktion päättämiseksi lisättiin 1 ml 0,1-m HCl:ää ja sitten 1 ml etyyliasetaattia. Seosta sekoitettiin pyörivässä sekoittimessa ja lingottiin lyhyen aikaa faasien erottamiseksi.
9 71749
Siirrettiin 500 μΐ etyyliasetaattifaasia nestetuikeput-keen, joka sisälsi 10 ml Riafluoria (tavaramerkki; New England Nuclear Corp., Boston, Massachusetts, USA). I^-arvojen määrittämiseksi, entsyym.iaktiviteetti määritettiin inhibiittorin läsnäollessa sarjassa erilaisia konsentraatioita ja verrattiin aktiviteettiin ilman inhibiittoria. Inhibii ttorikonsentraat.ion ja inhibiitio-% :n välisestä graafisesta kuvaajasta saatiin Ir.-arvo.
5 u
Esimerkki 2 3-asetyylitiopropanoyyli-L-pro 1 i 1 ni-1ert.-butyyliesterin syn- teesi 0,86 5 g 3-asetyyl.itiopropaanihappoa liuotettiin 2 ml: aan uudelleen tislattua tetrahydrofuraania ja liuos jäähdytettiin 0°C:seen. Lisättiin disykloheksyylikarbodi-im.idin (1,2031 g) jäähdytetty liuos 2 ml:ssa tetrahydrofuraania ja sitten L-proliini-tert.-butyyliesterin (1 g) jäähdytetty liuos. Reaktioseosta sekoitettiin tunnin ajan 0°C:ssa ja sitten yön yli 4°C:ssa. Reaktioseos suodatettiin ja suodos pestiin etyyliasetaatilla. Suodoksesta poistettiin liuottimet alennetussa paineessa kiertohaihduttimessa. Jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin,liuos pestiin 3 kertaa kylmällä 1-n sitruuna-hapolla, 2 kertaa kyllästetyllä natriumkloridiliuoksella, 2 kertaa 1-n natriumbikarbonaattiliuoksella ja 3 kertaa kyllästetyllä natriumkloridiliuoksella. Liuos kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja suodatettiin. Haihduttamalla liuotin alennetussa paineessa kiertohaihduttimessa 30°C:ssa saatiin kirkas, väritön öljymäinen tuote noin 87 %:n saannolla. Tuote eteni ohutlevykromatografiässä viidellä eri liuotinsysteemillä yhtenä ainoana täplänä.
Rjr-arvot liuotinsysteemeillä 1/ 2 ja 3: R^(1) = 0,78, R^(2) = 0,80 ja R^(3) = 0,69. Paperielektroforeesissa saatiin sekä pH-arvos-sa 1,9 että pH-arvossa 5,0 yksi ainoa neutraalivyöhykkeessä oleva täplä.
Esimerkki 3 3-merkaptopropanoyyli-L-proliinin synteesi
Asetyyliryhmän poistamiseksi 0,5 g esimerkissä 2 valmistettua 3-asetyylitiopropanoyyli-L-proliini-tert.-butyyliesteriä sekoitettiin huoneen lämpötilassa typpisuojakaasussa 5,5-n ammoniakin metanoliliuoksen (4,5 ml) kanssa. Liuotin haihdutettiin 25°C:ssa kiertohaihduttimessa. Tuote liuotettiin metanoliin ja haihdutettiin vielä 2 kertaa kiertohaihduttimessa. Saatu kirkas, öljymäinen jään- 10 71 749 nös liuotettiin etyylieetteriin, pestiin 2 kertaa 5-% kaliumbisul-faattiliuoksella ja kerran kyllästetyllä natriumkloridiliuoksella, kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja suodatettiin. Jäljellä oleva liuotin poistettiin tyhjössä, jolloin saatiin kirkasta, öljymäistä tuotetta, joka kolmella eri liuotinsysteemillä eteni ohutkerroskromato-grafiassa yhtenä ainoana täplänä. Tert.-butyyliesterisuojaryhmä poistettiin reaktiossa trifluorietikkahapon kanssa anisolissa.
Rf (1) = 0,78, Rf(2) = 0,80 ja Rf(3) = 0,70.
Esimerkit 4-6
Korvaamalla esimerkissä 2 käytetty 3-asetyylitiopropaani-happo 2-asetyylitiopropaanihapolla, 3-asetyylitio-2-D-metyylipropaa-nihapolla tai 3-asetyylitio-2-D ,L-metyylipropaan.ihapolla ja noudattamalla olennaisesti esimerkkien 2 ja 3 menetelmiä saatiin seuraa-vat yhdisteet. Poistamalla ensimmäisenä vaiheena tert.-butyylieste-risuojaryhmä trifluorietikkahapolla anisolissa voidaan muodostaa di-sykloheksyyliamiinisuola, jota käytetään isomeerien resoluutiossa. Toisena vaiheena voidaan poistaa asetyyliryhmä ammoniakin metanoli-liuoksella siten kuin esimerkissä 2 on kuvattu.
Esimerkki Yhdiste 4 2-merkaptopropanyyli-L-proliin.i 5 3-merkapto-2-D-metyylipropanoyyli-L-proliini 6 3-merkapto-2-D ,L-metyylipropanoyy li -L-proliini.
Esimerkki 7 3-merkapto-2-metyylipropanoyyli-L-3,4-dehydroproliinin synteesi 1 mmooli L-3,4-dehydroproliinia (Δ3Ργο) liuotettiin dimetyy-liformamidiin ja liuos jäähdytettiin -15°C:seen. Liuos neutraloitiin lisäämällä 1 ekvivalentti N-etyylimorfoliinia. Toisessa astiassa sekoitettiin -10°C:ssa 1 ekvivalentti 3-asetyylitio-2-metyylipropaani-happoa ja yhtä suuri tilavuusmäärä dimetyyliformamidia 1,1 ekvivalentin kanssa 1,1'-karbonyylidi-imidatsolia, ja liuosta sekoitettiin tunnin ajan. Ensimmäinen, Δ Pro:a sisältävä liuos sekoitettiin toisen 3-asetyylitio-2-metyylipropaanihappoa sisältävän liuoksen kanssa -10°C:ssa. Seosta sekoitettiin tunnin ajan -10°C:ssa. Sitten sen annettiin hitaasti lämmetä huoneen lämpötilaan. Liuotin poistettiin alennetussa paineessa 40°C:ssa kiertohaihduttimessa. Jäännökseen lisättiin etyyliasetaattia (25 ml) ja liuos jäähdytettiin 0°C:seen. Lisättiin 2 ml 1-n sitruunahappoa, faasit sekoitettiin, jonka jälkeen ii 71749 niiden annettiin erottua. Faasit erotettiin erotussuppilossa, orgaaninen faasi pestiin vielä 2 kertaa 2 ml:11a 1-n sitruunahappoa, 2 kertaa kyllästetyllä natriumkloridiliuoksella ja kuivattiin lopuksi magnesiumsulfaatilla. Magnesiumsulfaatti suodatettiin ja liuotin haihdutettiin kiertohaihduttimessa. Jäännös liuotettiin ja kiteytettiin polaarittomasta liuottimesta, kuten bentseenistä, jolloin saatiin 3-asetyylitio-2-D,L-metyylipropanoyyli-L-3,4-dehydroproli.inia. Haluttaessa valmistaa 2-D-metyyli-.isomeer.i jäännös liuotetaan asetonitrii-liin (noin 3 ml) ja lämmitetään 40°C:seen. Liuokseen lisätään 1 ekvivalentti disykloheksyyliamiinia ja liuoksen annetaan seistä huoneen lämpötilassa yön yli. Kiteet suodatetaan ja pestään 3 kertaa aseto-nitriilillä. Haluttaessa voidaan lisäpuhdistus suorittaa kiteyttämällä isopropanolista. Asetyylisuojaryhmä voidaan poistaa esimerkissä 3 kuvatulla tavalla.
Rf( 2) = 0,68 ja Rf( 3) = 0,41.
Esimerkit 8-11
Korvaamalla esimerkissä 7 käytetty L-3,4-dehydroproliini D,L-3,4-dehydroproliinilla, L-3-hydroksiproliinilla, L-4-hydroksi-proliinilla tai L-tiatsolidiini-4-karboksyylihapolla ja olennaisesti noudattamalla esimerkin 7 menetelmää saadaan seuraavat yhdisteet.
Esimerkki Yhdiste 8 3-merkapto-2-D-metyylipropanoyyli-D,L-3,4-dehydropro1i in i 9 3-merkapto-2-D-metyy l.ipropanoyy li-L- 3-hydrok-siproliini 10 3-merkapto-2-D-metyylipropanoyyli-E-4-hydrok- siproliini 1 1 3-merkapto-2-D-metyylipropanoyyli-L-t.iatso- lidiini-4-karboksyylihappo
Esimerkki 12
Vastaavasti korvaamalla esimerkkien 7-11 3-asetyylitio-2-metyylipropaanihappo 3-asetyylitiopropaanihapolla tai 2-asetyylit.io-propaanihapolla saadaan noudattamalla olennaisesti edellä kuvattuja menetelmiä L-3,4-dehydroprol.iini-, D,L-3,4-dehydroproliini-, L-3-hydroksiproliini- ja L-tiatsolidiin.ijohdannaiset.
71749
Esimerkki 13 N- Z3~(N‘ -asetyyli-L-fenyylialanyylitio)-2-D-metyylipro- panoyyl.i7-L-proliinin synteesi
CC
Liuos, jossa oli 41,5 mg N -asetyyli-L-fenyylialaniinia (sp. 165 - 166°C; /-^?D = +37,3) 0,5 ml:ssa uudelleen tislattua di-metyyliformamidia, jäähdytettiin jää-kuivajää-asetöni-hauteessä -20°C:seen. Liuokseen lisättiin kylmä liuos, jossa oli 35 mg 1,1*— karbonyylidi-imidatsolia 1,0 ml:ssa dimetyyliformamidia. Liuosta sekoitettiin -10°C:ssa 2 tuntia, sitten se lisättiin kylmään N-etyyl.i-morfoliinilla neutraloituun liuokseen, jossa oli 48 mg 3-merkapto- 2-D-metyylipropanoyyli-L-proliinia 1 mltssa dimetyyliformamidia. Reaktioseosta sekoitettiin -10°C:ssa vielä tunnin ajan, jonka jälkeen se sai lämmetä hitaasti huoneen lämpötilaan. Liuotin poistettiin alennetussa paineessa 40°C:ssa, ja jäännökseen lisättiin etyyliasetaattia. Seos jäähdytettiin jäähauteessa ja pestiin 0,1-n hydroklo-ridilla ja sitten 3 kertaa kyllästetyllä natriumkloridiliuoksella ja kuivattiin magnesiumsulfaatilla. Orgaaninen liuotin haihdutettiin kie£tohaihdutt.imessa. Tuote puhdistettiin kromatografoimalla Sepha-dex-^LH-20 -kolonnissa (1,2 x 95 cm) eluo.imalla isopropanolilla. Pääfraktiot yhdistettiin ja liuotin haihdutettiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 35,5 mg otsikon yhdistettä. Aminohappoana-lyysi: Phe 1,00, Pro 0,89. Se oli yhtenäistä ohutkerroskromatografi-assa liuotinsysteemeillä 1, 2, 3 ja 5.
Rf (1) = 0,47, Rf(2) = 0,65, Rf(3) = 0,45, Rf(5) = 0,64,
Rf (6) = 0,54 ja Rf(7) = 0,59.
NMR 6(CDCl3:ssa): 1,17 (3H, b.d. CH3), 1,75 - 2,35 (4H, m, CH2) , 1,91 (3H, s, CH3) , 2,55 - 3,25 (5H, m, CH ja CH2) , 3,4 - 3,8 (2H, m, CH2), 4,1 - 4,6 (1H, m, CH), 4,6 - 5,0 (1H, m, CH), 6,63 (1H, d, NH) , 6,82 (1H, s, COOH) ja 7,17 (5H, b.s., aromaatta H).
Esimerkit 14 - 19
Korvaamalla esimerkissä 13 käytetty -asetyylifenyyliala-niini N ^-asetyyliglysiinillä , N -asetyylialaniililla , N^-asetyy-litryptof äänillä, N ^ -asetyylityros.iinilla , N ^ -asetyyli-isoleusii-nilla, N °*·-asetyyli leusiinilla, N ^-asetyyl.ihistidiinillä, N^-ase-tyylivaliinilla tai -propanoyyli-L-tryptofäänillä ja noudattamal la olennaisesti esimerkin 13 menetelmää saatiin seuraavat yhdisteet.
il 71749
Esimerkki Yhdiste 14 ΝΛ-^3-(Ν'* -asetyyliglysyylitio)-2-D-me~ tyylipropanoyyli7_L-proliini; l°Oo =
. -51,0; Rf(6) = 0,48 ja R (7) = 0,42; NMR
6 (CD3OD;ssa): 1,20 (3H, b.d., CH-j) , 1,9 - 2,3 (4H, m, CH ) , 2,00 (3H, s, CH3), 2,5 - 3,2 (3H, m, CH ja CH2), 4,04 (2H, s, CH2) ja 4,2 - 4,7 (1H, m, CH); I = 4.0 x 10"7.
1 5 N 0t-)/3- (N ^-asetyyli-L-isoleusyylitio) - 2-D-metyylipropanoyyli7-L-proliini; ipCJO =-97,8; NMR 8 (CDC1 : ssa) : 0,9 (3H, t, CH3), 0,95 (3H, d, CH3), 1,25 (3H, d, CH3), 1,7 - 2,5 (7H, m, CH ja CH2), 4,0 - 5,0 (2H, m, CH), 6,3 - 6,8 (1H, m, NH) ja 8,48 (1H, s, COOH).
1 6 N^-^3- (N^-asetyyli-L-leusyylitio) -2-D- metyylipropanoyyliy^-L-proliini ; D ~ -151,3; NMR S (CDCl3:ssa): 0,92 (6H, d, CH3), 1,21 (3H, d, CH ), 2,01 (3H, s, CH3CO), 1,4 - 4,0 (12H, m, CH ja CH2), 4.0 - 5,0 (2H, m, CH), 6,0 - 6,6 (1H, m, NH) ja 6,72 (1H, s, COOH).
17 N01 -/3- (N -asetyyli-L-valyy litio) -2-D- metyylipropanoyyli^-L-proliin.i; =-153,5; NMR5 (CDCIj : ssa) : 0,90 ( 3H , d, CH3) , 0,96 (3H, d, CH3) , 1,23 (3H, d, CH3), 1,7 - 2,5 (4H, m, CHj) , 2,08 (3H, s, CH3CO), 2,5 - 4,0 (6H, m, CH ja CHj), 4,1 - 5,0 (2H, m, CH), 6,58 (1H, d, NH) ja 8,58 (1H, s, COOH).
1 8 N (N0^ -asetyyli-L-alanyylit.io) -2- D-metyylipropanoyyli7-L-proliini; =-151,7; NMR 8 (CDCl^ssa): 1,20 (3H, d, CH3) , 1,37 (3H, d, CH3) , 2,01 (3H, s, CH3CO), 1,7 - 2,5 (4H, m, CH2), 2,5 - 4,0 (5H, m, CH ja CH ), 4,0 - 5,0 (2H, m, CH) ja 6,5 - 7,3 (2H, m, NH ja COOH).
717 4 9 1 4
Esimerkki Yhdiste 19 Ν' -/3- (Ν'* -propanoyy li-L-tryptofyy li- t.io) -2-D-metyyli-propanoyyli7-L-prolii-ni; //>?D =-116,7; NMR (CDCl^ssa): 1,0 (3H, t, CH3CH2), 1,21 (3H, d, CH3), 1,6 - 4,0 (13H, m, CH ja CH2>, 4,0 - 5,3 (2H, m, CH), 6,0 - 6,6 (1H,m, NH), 6,8 - 7,8 (5H, m, aromaatti H) ja 8,8 - 9,2 (2H, m, NH ja COOH).
Esimerkki 20 (χ Cu N -/3-(N -tert.-butyylioks.ikarbonyyli-L-f enyy lialanyy l.itio) - 2-D-metyylipropanoyyli7~L-prol.iin.in synteesi
Oi
Liuos, jossa oli 133 mg N -tert.-butyylioksikarbonyyli-L-fenyylialaniinia (N ^-Boc-L-Phe) 0,5 ml:ssa uudelleen tislattua dime tyyli f ormarnidia, jäähdytettiin jää-kuivajää-asetonihau teessä -20°C: seen .Liuokseen lisättiin kylmää 1 ,1 ' -karbonyylid.i-imidatsolin (87 mg) liuosta 1,0 ml:ssa dimetyyliformam.idia. Liuosta sekoitettiin -10°C:ssa 2 tuntia, jonka jälkeen se lisättiin kylmään N-etyylimor-foliinilla neutraloituun liuokseen, joka sisälsi 119,5 mg 3-merkap-to-3-D-metyylipropanoyyli-L-proliin.ia 1 mlrssa dimetyyliformarnidia. Reaktioseos neutraloitiin N-etyylimorfol.iinilla. Seosta sekoitettiin -10°C:ssa vielä tunnin ajan ja annettiin hitaasti lämmetä huoneen lämpötilaan. Liuotin haihdutettiin alennetussa paineessa 40°C;ssa, ja jäännökseen lisättiin asetonia. Seos jäähdytettiin jäähauteessa ja pestiin 0,1-n hydroklor.idilla ja sitten 3 kertaa kyllästetyllä natriumkloridiliuoksella. Liuos kuivattiin vedettömällä magnesium-sulfaatilla ja haihdutettiin kiertojjaihduttimessa. Tuote puhdistettiin nestekromatografiällä Sephadex^G-10 tm-pylväässä (1,2 x 95 cm) ja eluoitiin tetrahydrofuraani-isopropanoliseoksella 3:7 (tilavuus-osia) . Tuotetta sisältävät fraktiot yhdistettiin ja haihdutettiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 165 mg otsikon yhdistettä.
Se todettiin homogeeniseksi paperielektroforeesilla pH:ssa 5,0 ja ohutkerroskromatografiällä liuotinsysteemeillä 1, 2 ja 3.
R - (1) = 0,60, R.(2) = 0,76; 0,82 ja R.(3) - 0,68; 0,72.
1 1 r 1 9
Aminohappoanalyysi· Phe 1,00 ja Pro 1,00. Eg0c-Phe= ®»67 (e!'^ ilmoittaa yhdisteen suhteellisen kulkumatkan verrattuna
Boc-Phe 1 yhdisteen Boc-Phe kulkemaan matkaan paperielektroforeesissa pH:ssa 1,9) .
71 749 15
Esimerkit 21 - 23 Käyttämällä esimerkissä 20 käytetyn N^-Boc-Phe:n sijasta N^-Boc-glysiiniä, N^-Boc-alaniinia, Nα-Boc-tryptofaania, N ^-Boc-tyrosiinia, N^-Boc-isoleusiinia, N ^-Boc-le us iin.ia, Na -Boc-histi-
fV
diiniä tai N -Boc-valiin.ia ja noudattamalla olennaisesti esimerkin 20 menetelmää saadaan seuraavat yhdisteet.
Esimerkki Yhdiste 21 N^·* -^3- (N ^-tert. -butyylioksikarbonyyli- glysyylitio)-2-D-metyylipropanoyyli/-L-proli.ini; C°0^ =-82,0; Rf(6) = 0,63,
Rf (7) = 0,70; <c 1/0, MeOH) = -101,7; NMR 6 (CDCl3:ssa): 1,22 (3H, b.d, CH3), 1,43 (9H, s, CH ) , 1,7 - 2,4 (4H, m, CH2), 2,6 - 3,2 (3H, m, CH ja CH2>, 3,4 - 3,8 (2H, m, CH2), 3,98 (2H, d, CH2), 4,4 - 4,7 (1H, m, CH) ja 8,68 (1H, s, COOH); I = 2,4 x 10~7.
22 N^-£3- (N^-tertf-butyylioksikarbonyyli- L-isoleusyylitio)-2-D-metyylipropanoyyli/-L-proliini; Rf(1) = 0,82, R^(2) = 0,72, (3) = 0,78. IR (CHCl3:ssa) karbonyylinau-ha kohdissa 1643 ja 1690 - 1740 cm ^ ja NH-nauha kohdassa 3445 cm \ 23 N*"^ -/3- (N^ -tert. -butyylioksikarbonyyli-L-alanyyl.itio) -2-D-metyylipropanoyyli7-L-proliini; sp. 143 - 145°C; 7r^7D = -153,8.
Esimerkki 24 (v N -syklopentyylikarbonyyll-L-fenyylialaniinin synteesi
Disykloheksyylikarbodi-imidin (2,06 g) jäähdytettyyn liuokseen 10 mlrssa dikloorimetaania lisättiin -5°C:ssa liuos, jossa oli 1,4114 g syklopentaanikarboksyylihappoa 5 ml:ssa dikloorimetaania. Sitten lisättiin 1,36 ml:lla N-etyyl.imorfoliin.ia neutraloitu liuos, jossa oli 4,28 g L-fenyyl.ialaniinibentsoyyliesterin tolueenisulfo-naattisuolaa 10 nlrssa dimetyyliformamidia. Reaktioseosta sekoitettiin 0°C:ssa tunnin ajan ja sitten 3 tuntia huoneen lämpötilassa. Disykloheksyyliurea suodatettiin ja suodokseen lisättiin 50 ml etyyliasetaattia. Orgaaninen faasi neutraloitiin, kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja suodatettiin. Liuotin haihdutettiin kier-tohaihduttimessa. Jäännös kiteytettiin isopropanolista ja heksaanis-ta, jolloin saatiin 2,35 g valkeita kiteitä, sp. 88 - 89°C.
16 71749 R^(1) = 0,75 ja Rj(3) = 0,76, Elektroforeesissa sekä pH-ar- vossa 1,9 että pH-arvossa 5,0 saatiin yksi ainoa neutraalivyöhykkees- _ 1 sä oleva täplä. IR (CHCl^): karboksyyli kohdissa 1665 ja 1736 cm -5 -1 ja NH-nauha kohdassa 3430 cm Alkuaineanalyysi:
Laskettu: C 75,19 H 7,17 N 3,9855
Todettu: C 74,96 H 7,17 N 4,09.
Bentsyyliesteriryhmä poistettiin hydraamalla vedettömässä alkoholissa 10-% palladium-hiilikatalysaattorin (2 g) läsnäollessa. Katalysaattori poistettiin suodattamalla ja etanoli haihdutettiin kiertohaihduttimessa. Jäännös kiteytettiin eetteristä ja heksaanis-ta, jolloin saatiin 1,15 g otsikon yhdistettä valkeina kiteinä, sp. 107 - 108°C. Niillä oli seuraava alkuaineanalyysi:
Laskettu: C 68,94 H' 7,33 N 5,36
Todettu: C 68,90 H 7,32 N 5,34.
Tuote oli homogeeninen paperielektroforeesilla pH-arvoissa 1,9 ja 5,0; pH-arvossa 5,0 tuote liikkui anodia kohti. IR (CHCl^.) :
-1 -1 J
juova kohdassa 1722 cm ja vahva absorptio 2300 - 2800 cm . Ohut- kerroskromatografiällä tuote oli yhtenäinen liuotinsysteemeillä 1, 2 ja 3.
Rf (1) = 0,60, Rf(2) = 0,68 ja Rf(3) = 0,64.
Otsikon yhdisteestä käytetään lyhennettä -cpc-L-Phe.
Esimerkki 25 N-/3- (N ^-syklopentyylikarbonyyli-L-fenyylialanyylitio) -2-D-metyylipropanoyyl.l7-L-proliinin synteesi
Liuos, jossa oli 52,5 mg esimerkissä 24 valmistettua yhdistettä 0,5 ml:ssa uudelleen tislattua d.imetyylif ormamid.ia, jäähdytettiin jää-kuivajää-asetoni-hauteessa -20°C:seen. Sen jälkeen se lisättiin 1,1'-karbonyylidi-imidatsolin (34 mg) kylmään liuokseen 1,0 ml:ssa o dimetyyliformamidia. Liuosta sekoitettiin -10 C:ssa 2 tuntia, jonka jälkeen siihen sekoitettiin kylmä, N-etyylimorfoliinilla neutraloitu, 3-merkapto-2-D-metyylipropanoyyli-L-proliinin (45,6 mg) liuos 1 ml:ssa dimetyyliformamidia. Reaktioseosta sekoitettiin -10°C:ssa vielä tunnin ajan ja lämmitettiin hitaasti huoneen lämpötilaan. Liuotin poistettiin alennetussa paineessa 40°C:ssa ja jäännökseen lisättiin etyyliasetaattia. Seos jäähdytettiin ja pestiin 0,1-n hydrokloridillä ja sitten 3 kertaa kyllästetyllä natriumkloridiliuok- n 17 71 749 sella. Liuos kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ia haihdutettiin kiertohaihduttimessa. Tuote puhdistettiin Sephadex LH-20 -pylväässä (1,2 x 95 cm) eluoimalla isopropanolilla. Tuotetta sisältävät fraktiot yhdistettiin ja haihdutettiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 60,5 mg otsikon yhdistettä. Se todettiin homogeeniseksi ohutkerroskromatografiällä liuotinsysteemeillä 1, 2, 3 ja 5.
Rf (1) = 0,48, Rf (2) = 0,73, R (3) - 0,62 ja Rf (5) = 0,72.
Aminohappoanalyysi: Phe 1,00, Pro 1,06.
Esimerkit 26 - 28 Käyttämällä esimerkissä 24 käytetyn L-Phe-suolan sijasta gly-siini-, L-alaniini-, L-tryptofaani-, L-tyrosiin.i-, L-isoleusiini- , L-leusiini-, L-histid.iin.i- tai L-val.iinibentsoyyl.iesterin tolueeni-sulfonaattisuolaa ja noudattamalla olennaisesti esimerkkien 24 ja 25 menetelmiä saatiin seuraavat yhdisteet.
Esimerkki Yhdiste 26 N ^ -^3- (N0' -syklopentyylikarbonyyliglysyyli-tio)-2-D-metyylipropanoyyli/-L-proliini; =-157,6; Rf (6) = 0,54, Rf(7) = 0,80; I50 = 1,2 x 10"7.
27 N^-/3-(N^ -syklopentyylikarbonyyli-L-isoleu-syylitio) -2-D-metyyl.ipropanoyyli/-L-proliini;
Rf(1) = 0,65, Rf(2) = 0,76, Rf(3) = 0,70; IR (CHCl^) karbonyylinauha kohdissa 1645, 1675 ja 1722 cm"1.
28 li /3- (N ^ -syklopentyyl.ikarbonyyli-L-alanyyli-tio) -2-D-metyylipropanoyyli7-L-proli.ini; =-157,6; Rf(6) = 0,63, Rf(7) = 0,72; NMR 6 (CDCl^iSsa ja CD^ODissa): 1,20 (3H, b.d., CH^)» l, 38 (3H, d, CH3), 1,5 - 2,4 (12H, m, CH2), 2,4 - 3,2 (4H, m, CH ja CH2>, 3,3 - 3,8 (2H, m, CH_) ja 4,2 - 4,8 (2H, m, CH); I = 4,2 x _7 ^ 50 10 .
71749 18
Esimerkki 29 ry N " - (3-L-fenyylialanyylit.io-2-D-metyylipropanoyyli) -L-proliin.in synteesi
Esimerkissä 20 valmistetun yhdisteen suojaryhmä poistettiin sekoittamalla yhdisteen (30 mg), anisolin (50 jul) ja vedettömän trifluorietikkahapon (200 jul) seosta huoneen lämpötilassa tunnin ajan. Anisoli ja trifluorietikkahappo haihdutettiin alennetussa paineessa 35°C:ssa ja jäännöstä trituroitiin vedettömässä eetterissä. Saatu valkea jäännös puhdistettiin kromatografoimalla Sephadex*' G-1 0 *"m-pylväässä (1,2 x 95 cm) ja eluoimalla 5-% etikkahapolla. Tuotetta sisältävät fraktiot yhdistettiin ja kylmäkuivattiin, jolloin saatiin 17,5 mg otsikon yhdistettä. Se oli homogeeninen paperielektroforee-silla pH-arvoissa 1,9 ja 5,0 ja ohutkerroskromatografisesti liuotin-systeenmeillä 4 ja 5.
Rf(4) = 0,52, Rf (n-butanoli/EtAc/HOAc/H20, 1:1:1:1) = 0,51.
EH-Phe = 1'00' = °'82·
Esimerkit 30 ja 31
Vastaavasti esimerkkien 21 - 23 yhdisteistä poistettiin suojaryhmät olennaisesti esimerkissä 29 kuvatun menetelmän mukaisesti, jolloin saatiin seuraavat yhdisteet:
Esimerkki Yhdiste 30 N01 - ( 3-glysyylitio-2-D-metyylipropanoyyli) - L-proliini; 9 3,6; R^(6) = 0,16, R^(7) = 0,09; NMR Ö (CD3OD:ssä): 1,17 (3H, b.d., CH3), 1,8 - 2,4 (4H, m, CH2), 2,4 - 3,3 (3H, m, CH ja CH2), 3,5 - 3,9 (2H, m, CH2), 4,11 (2H, s, CH2) ja 4,3 - 4,7 (1H, m, CH); I50 = 6,5 x 10"8.
31 -(3-L-isoleusyylitio-2-D-metyylipropano-yyli)-L-proliini; Rf(1) = 0,42, Rf( 2) = 0,35.
Esimerkki 32
Syklopentaanikarboksyylihapon N-hydroksisukkinimidiesterin synteesi
Syklopentaanikarboksyylihapon (5,71 g) ja N-hydroksisukk.in-imidin (5,76 g) 0°C:iseen liuokseen dimetyyliformamidissa lisättiin disykloheksyylikarbodi-im.idin (11,4 g) jäähdytetty liuos dimetyyliformamidissa. Reaktioseosta sekoitettiin 0°C:ssa 30 minuuttia ja 19 71 749 sitten 4°C:ssä yön yli. Kiteinen disykloheksyyliurea suodatettiin ja pestiin etyyliasetaatilla. Yhdistetty suodos ja pesuneste haihdutettiin alennetussa paineessa ja jäännös kiteytettiin bentseenistä ja heksaanista, jolloin saatiin 5,77 g valkoisia kiteitä, sp. 72,5 - 73°C. IR-spektri kloroformissa oli tyypillinen N-hydroksisukkin-imidiestereille. Alkuaineanalyysi oli seuraava:
Laskettu: C 56,86 H 6,20 N 6,63
Todettu: C 56,77 H 6,07 N 6,66.
Esimerkki 33 5? S.
N -syklopentyylikarbonyyli-N -tert.-butyylioksikarbonyyli-L-lysiinin synteesi
Liuosta, jossa oli 1,2316 g -tert.-butyylioksikarbonyy- li-L-lysiiniä ja 420 mg natriumbikarbonaattia 10 ml:ssa vettä ja 5 ml:ssa tetrahydrofuraania, sekoitettiin ja jäähdytettiin jäähautees-sa. Siihen lisättiin sitten esimerkin 32 tuotteen (1,19 g) kylmä liuos 10 ml:ssa tetrahydrofuraania. Reaktioseosta sekoitettiin yön yli huoneen lämpötilassa, sitten tetrahydrofuraani haihdutettiin kiertohaihduttimessa 35°C:ssa. Reaktioseokseen lisättiin 20 ml vettä ja pH säädettiin kiinteällä natriumbikarbonaatilla arvoon 9. Vesifaa-si uutettiin 3 kertaa etyyliasetaatilla ja orgaaninen faasi hylättiin. Vesiliuos jäähdytettiin jäähauteessa, tehtiin etyyliasetaatin läsnäollessa happameksi pH-arvoon 2 1-n hydroklorid.illa. Orgaaninen faasi pestiin 2 kertaa jäävedellä ja sitten 2 kertaa kyllästetyllä natrium-kloridiliuoksella. Orgaaninen liuos kuivattiin magnesiusulfaatilla ja suodatettiin. Suodos haihdutettiin kiertohaihduttimessa ja jäännös kiteytettiin eetteristä ja heksaanista, jolloin saatiin 1,135 g valkeita kiteitä, sp. 104,5 - 105,5°C. Alkuaineanalyysi oli seuraava:
Laskettu: C 59,63 H 8,83 N 8,18
Todettu: C 59,74 H 8,85 N 8,24.
Tuote oli homogeeninen paperielektroforeesissa pH-arvoilla 1,9 ja 5,0. pH-arvossa 5,0 tuote liikkui anodia kohti. Ohutkerroskro-matografiassa tuote oli homogeeninen liuotinsysteemeillä 1, 2 ja 3.
Rf(1) = 0,52, Rf(2) = 0,83 ja Rf(3) = 0,69.
IR (CHC1-): karbonyylinauhat kohdissa 1650 - 1680 ja 1690 - -1 J -Ί 1720 cm ja NH-nauhat kohdissa 3340 ja 3440 cm 20 71 749
Esimerkki 34 rv £ N -syklopentyylikarbonyyli-N -tert.-butyylioksikarbonyyli-L-lysiini-N-hydroksisukkinimldiesterin synteesi Liuos, jossa oli 1,027 g esimerkin 33 tuotetta ja 346 mg N-hydroksisukkinimid.iä 10 ml:ssa Ci^C^sa, jäähdytettiin -5°C:seen. Kylmään liuokseen lisättiin sekoittaen disykloheksyylikarbodi-imidin (680 mg) kylmä liuos 5 ml:ssa Cl^C^sa. Reaktioseosta sekoitettiin 0°C:ssa 30 minuuttia ja sitten 4°C:ssa yön yli. Kiteinen disykloheks-yyliurea suodatettiin ja pestiin etyyliasetaatilla. Yhdistetty suo-dos ja pesuneste pestiin kahdesti 1-n natriumbikarbonaatilla, kahdesti vedellä ja lopuksi kyllästetyllä natriumkloridiliuoksella. Orgaaninen faasi kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja haihdutettiin kiertohaihduttimessa. Jäännös kiteytettiin iso-propanolista, jolloin saatiin 0,844 g valkeita kiteitä, sp. 140,5°C. IR-spektri kloroformissa oli tyypillinen N-hydroksisukkinimidieste-rien spektri. Alkuaineanalyysi oli seuraava:
Laskettu: C 57,39 H 7,57 N 9,56
Todettu: C 57,10 H 7,57 N 9,61.
IR (CHC1-.) : karbonyylinauha kohdissa 1640 - 1720, 1742, 1787 -1 J
ja 1815 cm
Esimerkki 35 N ^-syklopentyylikarbonyyli-N ^-tert.-butyylioksikarbonyyli-L-lysyyli-L-fenyylialaniinin synteesi
Liuos, jossa oli 220 mg esimerkin 34 tuotetta 2 ml:ssa di-oksaania, lisättiin pisaroittaan seokseen, jossa oli 99,1 mg L-fenyy-lialaniinia ja 51 mg natriumbikarbonaattia veden (2 ml) ja dimetyyli-formamidin (1 ml) seoksessa. Reaktioseosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa yön yli ja dioksaani haihdutettiin sitten kiertohaihduttimessa 35°C:ssa. Reaktioseokseen lisättiin 10 ml etyyliasetaattia, se jäähdytettiin ja tehtiin happameksi pH-arvoon 2 0,1-n hydrokloridil- la, ja vesifaasi hylättiin. Orgaaninen faasi pestiin jäävedellä, kyllästetyllä natriumkloridiliuoksella ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja haihdutettiin kiertohaihduttimessa. Jäännös kiteytettiin eetteristä ja petrolieetteristä (kp. 30 - 60°C), jolloin saatiin valkeata kiinteätä ainetta, sp. 90 - 92°C. Tuote oli homogeenista paperielektroforeesissa pH-arvoilla 1,9 ja 5,0 ja ohutkerroskroma-tografiällä liuotinsysteemeillä 1, 2, 3 ja 4.
ti 71 749 21
Rf(1) = 0,66, Rf(2) = 0,67, Rf(3) = 0,645 ja Rf(4) = 0,76. Alkuaineanalyysi oli seuraava:
Laskettu: C 63,78 H 8,03 N 8,58
Todettu: C 63,40 H 8,07 N 8,34.
-1 IR (CHCl^): karbonyylinauha kohdassa 1650 - 1720 cm Esimerkki 36 NOc -/j- -syklopentyylikarbonyyli-N^ -tert. -butyylioksi-karbonyyl.i-L-lysyyli-L-fenyylialanyy litio) -2-D-metyylipro-panoyyli7~L-proliinin synteesi
Liuos, jossa oli 73,5 mg esimerkin 35 tuotetta 0,5 ml:ssa uudelleen tislattua dimetyyliformamidia, jäähdytettiin -20°C:seen jää-kuivajää-asetoni-hauteessa. Siihen lisättiin 1,1'-karbonyylidi-imidatsolidin (26 mg) kylmä liuos 1,0 ml:ssa dimetyyliformamidia. Liuosta sekoitettiin -10°C:ssa 2 tuntia, sen jälkeen siihen sekoitettiin kylmä N-etyylimorfoliin.illa neutraloitu 3-merkapto-2-D-metyyli-propanoyyli-L-proliinin (36 mg) liuos 1 ml:ssa dimetyyliformamidia. Reaktioseosta sekoitettiin -10°C:ssa vielä tunnin ajan, jonka jälkeen sen annettiin hitaasti lämmetä huoneen lämpötilaan. Liuotin haihdutettiin alennetussa paineessa 40°C:ssa, ja jäännökseen lisättiin etyyliasetaattia. Seos jäähdytettiin jää-vesi-hauteessa ja pestiin 1-n sitruunahapolla ja sitten 3 kertaa kyllästetyllä natriumkloridiliuok-sella. Liuos kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ia haihdutettiin k.iertohaihduttimessa. Tuote puhdistettiin Sephadex*^ LH-20 4" ΤΥΪ -pylväässä (1,2 x 95 cm) eluoimalla tetrahydrofuraani-isopropano-liseoksella 3:7 (t.ilavuusosia) . Tuotetta sisältävät fraktiot yhdistettiin ja haihdutettiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin ot- :χ ^ Cv
sikon yhdistettä, jota voidaan lyhennettynä nimittää N -^3-(N
cpc-N^ -Boc-L-Lys-L-Phe-tio) -2-D-metyylipropanoyyli7“L-prol.iiniksi ;
Rf(3) = 0,73.
Esimerkki 37 cl ~~ ex N -/3-(N -syklopentyylikarbonyyli-L-lysyyli-L-fenyyliala-nyylitio)-2-D-metyylipropanoyyli7~L-proliinin synteesi N -Boc-ryhmä poistettiin lysiinistä sekoittamalla esimerkin 36 tuotteen (30 mg) anisolin (50 pl) ja vedettömän trifluori-etikkahapon (200 pl) seosta huoneen lämpötilassa tunnin ajan. Ani-soli ja trifluorietikkahappo haihdutettiin alennetussa paineessa 35°C:ssa ja jäännöstä trituro.itiin vedettömässä eetterissä. Jäännös puhdistettiin nestekromatograf iällä Sephadex**^ G-1 0 ^-pylväässä 71749 22 (1,2 x 95 cm) eluoimalla 5-% etikkahapolla. Tuotetta sisältävät fraktiot yhdistettiin ja kylmäkuivattiin, jolloin saatiin otsikon yh- C)c Ct diste, jota lyhennettynä voidaan nimittää N -/3-(N -cpc-L-Lys-L-Phe-tio) -2-D-metyylipropanoyyli)r-L-proliiniksi.
Rf ( 3) = 0,16, Rf ( 4) 0,52, Rf (Et0Ac/H0Ac/butanol.i/H20, 1:1:1:1) = 0,58.
1 9 E_ ' , ,=0,79.
Lys(cpc)
Esimerkki 38
Pyro-L-glutamyyli-L-fenyylialaniinibentsyyliesterin valmistus
Liuosta, jossa oli 0,52 g pyro-L-glutamiinihappoa, 1,72 g L-fenyylialaniinibentsyyliesteritolueenisulfonihappoa ja 0,55 ml N-etyylimorfoliinia 5 ml:ssa dimetyyliformamid.ia ja 20 ml:ssa dikloo-rimetaania, sekoitettiin jäähdyttäen jäähauteessa. Reaktioseokseen lisättiin 0,826 g disykloheksyylikarbodi-imidiä 2 ml:ssa dikloori-metaania. Reaktioseosta sekoitettiin jäävesihauteessa tunnin ajan ja huoneen lämpötilassa yön yli. Disykloheksyyliurea suodatettiin ja pestiin etyyliasetaatilla. Yhdistetty suodos ja pesunesteet haihdutettiin alennetussa paineessa kiertohaihduttimessa 40°C:ssa. Jäännökseen lisättiin etyyliasetaattia (25 ml) ja orgaaninen liuos neutraloitiin. Orgaaninen faasi kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja haihdutettiin kiertohaihduttimessa. Jäännös kiteytettiin isopropanolista ja eetteristä, jolloin saatiin 1,01 g valkeita neulasia, sp. 103 - 104,5°C. Tuote oli homogeenista kaikissa ohutkerroskromatografia- ja elektroforeesisysteemeissä.
Rf(1) = 0,69, Rf(2) = 0,61 ja Rf(3) = 0,66.
Paperielektroforeesissa pH-arvoissa 1,9 ja 5 saatiin yksi ainoa täplä neutraalivyöhykkeessä. IR (CHC1.J : karbonyylinauhat kohdis- -1 J -1 sa 1650 - 1750 cm ja NH-nauhat kohdissa 3310 ja 3418 cm
Alkuaineanalyysi oli seuraava:
Laskettu: C 68,84 H 6,05 N 7,64
Todettu: C 68,58 H 6,05 N 7,56.
23 71749
Esimerkki 39 ' n 7
Py ro-L-glutamyy l.i-L-f enyyl.jalani inin valmistus Esimerkin 38 tuotteen (1,0 g) bentsoyyliesterisuojaryhmä poistettiin katalyyttisellä hydrauksella 10-% palladiumhiilikatalysaat-torin (150 mg) läsnäollessa jääetikan (0,15 ml) ja etanolin (15 ml) seoksessa I^-paineella 138 kPa huoneen lämpötilassa yön yli. Katalysaattori poistettiin suodattamalla ja liuotin haihdutettiin kierto-haihduttimessa. Tuote kiteytettiin isopropanolista ja bentseen.istä, jolloin saatiin kaikkiaan 402 mg valkeita kiteitä, sp. 147 - 149°C. Saatu tuote oli homogeenista elektroforeesissa pH-arvoilla 1,9 ja 5,0 ja ohutkerroskromatografiässä liuotinsysteemeillä 1, 2 ja 3.
Rf (1) = 0,28, Rf(2) = 0,35 ja Rf(3) = 0,51.
IR (CHC13): 1668, 1719, 2300 - 2800, 3270 ja 3370 cm'1. Aminohappoanalyysi: Phe 1,00, Glu 1,06.
Alkuaineanalyysi oli seuraava:
Laskettu: C 60,86 H 5,84 N 10,14
Todettu: C 60,37 H 5,85 N 9,98.
Esimerkki 40 - j3>~ (pyro-L-glutamyyl.i-L-fenyylialanyylitio) -2-D-metyyli-propanoyyli^-L-proliinin valmistus
Liuos, jossa oli 87 mg 1,1*-karbonyylidi-imidatsolia 1,0 ml:ssa dimetyyliformamidia, lisättiin -15°C:ssa liuokseen, jossa oli 139 mg esimerkin 39 tuotetta 0,5 ml:ssa dimetyyliformamidia. Reaktio- seosta sekoitettiin -10°C:ssa tunnin ajan, jonka jälkeen siihen lisättiin 3-merkapto-2-D-metyylipropanoyyli-L-proliinin (119,5 mg) jä N-etyylimorfoliinin (0,072 ml) seos 1 ml:ssa dimetyyliformamidia. Reaktioseosta sekoitettiin -10°C:ssa vielä tunnin ajan, sitten se sai lämmetä hitaasti huoneen lämpötilaan. Dimetyyliformamidi haihdutettiin alennetussa paineessa kiertohaihduttimessa 40°C:ssa ja jäännökseen lisättiin 7 ml etyyliasetaattia ja 2 ml 1-n sitruunahappoa. Orgaaninen faasi pestiin 2 kertaa 1-n sitruunahapolla ja 2 kertaa kyllästetyllä natriumkloridiliuoksella, kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja suodatettiin. Liuotin haihdutettiin kiertohaihduttimessa. Jäännös puhdistettiin kromatografoimalla SephadexR G-25 tm-pylväässä (1,2 x 99 cm) eluoimalla n-butanoli-etikkahappo-vesiseoksel-la 4:1:5 (tilavuusosia). Tuote oli ohutkerroskromatografiällä (systeemit 1, 2 ja 3) ja elektroforeesilla (pH 5,0) homogeeninen.
Rf (l) = 0,43, Rf (2) = 0,63 ja Rf( 3) = 0,48.
^Glu-Phe = 0,73. Aminohappoanalyysi Glu 0,99, Phe 1,00, Pro 1,07.
24 „ , „ 71 749
Esimerkki 41
Ού OC
N -/.3-(N~ -bentsoyyli-L-tryptofyyl.it.to)-2-D-metyylipropano- yyli7~L~proliinin synteesi ry
Liuos, jossa oli 62 mg N -bentsoyyli-L-tryptofaania 0,5 mltssa uudelleen tislattua dimetyyliformamidia, jäähdytettiin jää-kuivajää-asetoni-hauteessa -20°C:seen. Siihen lisättiin kylmä liuos, jossa oli 35 mg 1,1'-karbonyylidi-imidatsolia 1,0 ml:ssa dimetyyliformamidia. Liuosta sekoitettiin -10°C:ssa 2 tuntia, jonka jälkeen se lisättiin N-metyyl.imorfoliinilla neutraloituun kylmään liuokseen, jossa oli 48 mg 3-merkapto-2-D-metyylipropanoyyli-L-prol.iinia 1 ml:ssa dimetyyliformamidia. Reaktioseosta sekoitettiin -10°C:ssa vielä tunnin ajan ja sen annettiin hitaasti lämmetä huoneen lämpötilaan. Liuotin poistettiin alennetussa paineessa 40°C:ssa ja jäännökseen lisättiin etyyliasetaattia. Seos jäähdytettiin jäähauteessa, pestiin kerran 0,1-n hydrokloridilla ja 3 kertaa kyllästetyllä natriumkloridi-liuoksella. Liuos kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja haihdutettiin kie^tohaihduttimessa. Jäännös puhdistettiin kromatogra-foimalla Sephadex®" LH-20 tm-pylväässä (1,2 x 95 cm) eluoimalla iso-propanolilla. Tuotetta sisältävät fraktiot yhdistettiin ja haihdutettiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 60,5 mg otsikon yhdistettä vaahtona. Se oli homogeenista ohutkerroskromatografiässä liuotin-systeemeillä 2, 3 ja 5.
Rf(2) = 0,70, Rf(3) = 0,68, Rf (4) = 0,59, Rf(5) = 0,74,
Rf (Et0Ac/Bu0H/H0Ac/H20, 1:1:1:1) = 0,74.
N MR S (CDC13:ssa) : 1,10 (3H, b.d. CH3) , 1,65 - 2,3 (4H, m, CH2), 2,6 - 3,1 (3H, m, CH ja CH^ , 3,2 - 3,7 (4H, m, CH2) , 4,05 - 4,35 (1H, m, CH) , 4,8 - 5,1 (1H, m, CH) ja 6,88 - 7,82 (10H, m, aro maattinen H) .
Esimerkit 42 - 44 Käyttämällä esimerkissä 41 käytetyn -bentsoyyl.i-L-trypto- fäänin sijasta N^-bentsoyyli-L-tyrosiinia, N^-bentsoyyli-L-histi-
CX (X
diiniä, N -bentsoyylifenyylialaniinia, N -bentsoyy l.iglysiiniä,
rV f> (V
N -bentsoyyli-L-alaniinia, N -bentsoyyli-L-isoleusiinia, N ^-bent-
Cx soyyli-L-leusiinia tai N -bentsoyyl.i-L-val.iinia ja noudattamalla olennaisesti esimerkin 41 menetelmää saadaan seuraavat yhdisteet.
25 71 749
Esimerkki Yhdiste 42 N ^ -/3- (N ^ -bentsoyylifenyy lialanyyl.itio) -
2-D-metyyl.ipropanoyyli7-L-prol.iini; /7*,7D
= -116,8; Rf (1 ) = 0,52, Rf(2) = 0,70, Rf(3) = 0,56, Rf(4) = 0,61, Rf(5) = 0,75, Rf(6) = 0,56, Rf (7) 0,74; NMR (CDCl3:ssa ja CD3OD:ssä): 1,19 (3H, b.d. CH3), 1,5 - 2,4 (4H, m, CH2), 2,5 - 3,3 (5H, m, CH ja CH2), 3,3 - 3,8 (2H, m, CH2), 4,0 - 4,4 (1H, m, CH), 4,8 - 5,2 (1H, m, CH), 7,23 (5H, s, aromaattinen H), 7,2 - 7,9 (5H, m, aromaattinen H), 3,4 x 10 4 3 N ^-^/3- (N ^-bentsoyyliglysyylitio) -2-D-me- tyylipropanoyyl.i^-L-prol.iini ; {pCjD =-111,0; Rf (2) = 0,60, Rf(3) = 0,46, Rf(5) = 0,60,
Rf (6) = 0,55, Rf(7) = 0,68; NMRS (CDC1:ssä): 1,15 (3H, b.d., CH3), 1,6 - 2,4 (4H, m, CH2), 2,5 - 3,2 (3H, m, CH ja CH2), 3,3 - 3,8 (2H, m, CH2) , 4,1 - 4,6 (1H, m, CH) , 4,30 (2H, d, CH2), 7,2 - 8,1 (5H, m, aromaattinen H) ja 10,10 (1H, s, COOH); I5Q = 1,1 x 10~7.
44 N^C-(N^-bentsoyyli-L-alanyylitio) - 2-D-metyylipropanoyyl -L-proliini; = 392; Rf (6) = 0,58, Rf (7) = 0,75, NMR (CDC13:ssa) : 1,19 (6H, b.d. CH3) , 1,22 (3H, b.d. CH3), 1,5 - 2,4 (7H, (3H, m, CH ja CH2), 3,4 - 3,9 (2H, m, CH2), 4,1 - 4,45 (1H, m, CH), 4,6 - 5,0 (1H, m, CH) , 7,45 - 8,1 (5H, m, aromaattinenH).
71749 26
Esimerkki 45 -bentsoyylifenyylialaniini-N-hydroksisukkinimidiesterin valmistus 1,347 g bentsoyylifenyvlialaniinia ja 0,576 g N-hydroksisuk-kinimidiä sekoitettiin tetrahydrofuraani-dimetyyliformamidiseokseen (1:1). Seokseen lisättiin 1,133 g disykloheksyylikarbodi-imidiä ja sen annettiin seistä yön yli 4°C:ssa.
Reaktioseos suodatettiin ja liuotin haihdutettiin alennetussa paineessa 30°C:ssa. Saatu valkea jäännös kiteytettiin tetrahydrof uraani-isopropanoliseoksesta , jolloin saatiin 1,194 g (65,2 %) valkeata kiinteätä ainetta, sp. 156-157°C. Sen IR-spektrissä kloro- -1 -1 formissa oli seuraavat nauhat: 3440 cm (NH-ryhmä), 1818 cm , — 1 _ i 1790 cm ja 1744 cm (N-karboksisukkinimidi-ryhmä) ja 1669 cm (N-bentsoyyliryhmä).
Esimerkki 46 (N^-bentsoyylif enyylialanyylitio) -2-D-metyylipropano- y^li Zz L-proliinin synteesi
Reaktioseos, jossa oli 93,3 mg 2-D-metyyli-3-merkaptopropa-noyvli-L-proliinia, 62 mg 1-hydroksibentsotriatsolia (HOBt), 165 mg ,N-bentsoyylifenyylialanyyli-N-hydroksisukkinimidiesteriä (valmistettu esimerkissä 87), jäähdytettiin jäähauteessa noin 0°C:seen, sitten lisättiin 0,0544 ml N-etyylimorfoliinia. Reaktioseosta sekoitettiin jäähauteessa 3 tuntia, sen annettiin seistä yön yli 4°C:ssa ja sitten huoneen lämpötilassa 20 tuntia. Reaktio saatettiin loppuun lisäämällä 25^1 N,N-dimetyyli-1,3-propaanidiamiinia ja sekoittamalla vielä 2 tuntia. Reaktioseokseen lisättiin etyyliasetaattia ja seos pestiin kylmällä 0,1-n hydrokloridilla ja sen jälkeen 2 kertaa vedellä ja 3 kertaa kyllästetyllä natriumkloridilla. Seos kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja suodatettiin. Liuotin haihdutettiin alennetussa paineessa kiertohaihduttimessa, jolloin saatiin kirkas, öljymäinen tuote.
Se puhdistettin kromatografoimalla Sephadex® LH-20tm-pylväässä (1,2 x 96 cm) ja eluoimalla tetrahydrofuraanilla, ja koottiin 2,5 ml:n fraktioita. Fraktiot 30-31 yhdistettiin ja haihdutettiin suurtyhjössä, jolloin saatiin 110 mg valkeata, kumimaista tuotetta. Siihen lisättiin vedetöntä eetteriä, eetteri dekantoitiin ja tuote liuotettiin tetrahydrofuraaniin, liuos siirrettiin pulloon, kuivattiin typpivirrassa ja sitten P20^:llä yön yli. Saatiin 82 mg vaahtomaista ainetta.
27 71 749
Fraktiot 29, 32 ja 33 kromatografoitiin uudelleen samanlaisissa olosuhteissa. Toisen kromatografoinnin fraktiot 33-36 yhdistettiin. Niistä saatiin käsittelemällä edellä mainitulla tavalla vielä 51 mg tuotetta. Kokonaissaanto oli 71 %. (1)= 0,52, Rf(2) = 0,7, Rf(3) = 0,56, Rf(4) = 0,61, Rf(5) = 0,72,
Rf (BuOH/HOAc/EtOAc/H20, 1:1 : 1 : 1 ) = 0,725. E^-Phe = 1'07'
Vaihtoehtoinen menetelmä -bentsoyylifenyyli- alanyylitio) -propanoyyliy^-De, 4-dehydroproliinin ja läheisten yhdisteiden valmistamiseksi on kuvattu seuraavissa kahdessa esimerkissä.
Esimerkki 47 2-bentsoyylifenyylialanyylitiopropaanihapon synteesi
Bentsoyylifenyylialaniinin liuos 30 ml:ssa uudelleentislat-tua dimetyvliformamidia jäähdytettiin -20°C:seen. Siihen lisättiin voimakkaasti sekoittaen pisaroittaan 1,1'-karbonyylidi-imidatsolin liuos 10 ml:ssa uudelleentislattua dimetyyliformamidia. Lämpötila ei tällöin saanut kohota yli -14°C. Lisäyksen päätyttä liuosta sekoitettiin -10°C:ssa 2 tuntia. Sitten siihen lisättiin uudel-leentislatulla N-etyylimorfoliinilla neutraloitu D,L-tiomaitohapon liuos uudelleentislatussa dimetyyliformadissa, ja sekoitusta jatkettiin -10°C:ssa tunnin ajan. Liuos sai sitten lämmetä huoneen lämpötilaan ja siihen lisättiin suunnilleen yhtä suuri tilavuus-määrä etyyliasetaattia. Seos jäähdytettiin ja neutraloitiin väkevällä hydrokloridilla, joka oli kyllästetty natriumkloridilla. Orgaaninen faasi pestiin 3 kertaa natriumkloridi-liuoksella, jossa oli 5 tilavuusosaa kyllästettyä natriumkloridiliuosta ja 1 tilavuus-osa vettä. Joissakin tapauksissa saatiin kolmikerrossysteemi. Tällöin keskimmäinen kerros otettiin talteen ja yhdistettiin alemman vesifaasin kanssa. Orgaaninen faasi kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja haihdutettiin kiertohaihdutti-messa. Yhdistetty vesifaasi ja keskimmäinen faasi tehtiin happa-meksi väkevällä hydrokloridilla pH-arvoon 2 0°:ssa ja uutettiin 3 kertaa etyyliasetaatilla. Orgaaninen faasi pestiin kyllästetyllä natriumkloridiliuoksella ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja haihdutettiin kiertohaihdutti-messa. Saatiin kirkas öljy, sp. 151-152°C (EtOAc/n-heksaanista). Rf(1) = 0,65, Rf(2) = 0,72, Rf(3) = 0,68, Rf(Bu0H/Et0Ac/H0Ac/H20, 1:1:1:1) = 0,83.
Analyysi CigHigNS04
Laskettu: C 63,85 H 5,36 N 3,92 S 8,97
Todettu: C 62,80 H 5,31 N 3,90 S 9,21 28 71749
Esimerkki 48 N fi- (N ^-bentsoyylifenyylialanyylitiopropanoyyli7-L-3,4- dehydroproliinin synteesi
Boc-L-3,4-dehydroproliinista (213 mg, 1 mmooli) poistettiin suojaryhmä käsittelemällä tunnin ajan 1 ml :11a vedetöntä trifluori-etikkahappoa. Lisättiin vedetöntä etyylieetteriä 3 ml, ja liuottimet haihdutettiin kiertohaihduttimessa 30°C:ssa. Jäännös pestiin 3 kertaa eetterillä ja kuivattiin sitten tyhjöeksikkaattorissa natriumkloridilla.
Liuos, jossa oli 358 mg (1 mmooli) esimerkin 89 tuotetta 3 mlrssa uudelleentislattua dimetyyliformamidia jäähdytettiin -20°C: seen kuivajää-asetonihauteessa. Siihen lisättiin pisaroittain 1,1 -karbonyylidi-imidatsolin (171 mg, 1,05 mmoolia) liuos 1 ml:ssa uudelleentislattua dimetyyliformamidia pitäen reaktioseoksen lämpötila -10 - 15°C:ssa. Reaktioseosta sekoitettiin 2 tuntia, jonka jälkeen siihen lisättiin kylmä trietyyliamiinilla neutraloitu L-3,4-dehydroproliinitrifluoriasetaatin liuos 2 ml:ssa dimetyyliformamidia. Reaktioseos sai lämmetä hitaasti huoneen lämpötilaan, liuotin poistettiin kiertohaihduttimessa suurtyhjössä 35°C:ssa ja jäännös liuotettiin 10 ml:aan etyyliasetaattia ja 2ml:aan vettä.
Seos tehtiin happameksi pH-arvoon 2 1-n hydrokloridilla 0°C:ssa.
Orgaaninen faasi erotettiin ja otettiin talteen. Vesifaasi uutettiin vielä 3 kertaa 5 ml:11a etyyliasetaattia.
Orgaaniset faasit yhdistettiin, pestiin 2 kertaa vedellä, 3 kertaa kyllästetyllä natriumkloridiliuoksella ja käsiteltiin sitten värinpoistohiilellä. Orgaaninen faasi kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja suodatettiin. Suodos haihdutettiin kuiviin kiertohaihduttimessa, jolloin saatiin 366 mg öljymäistä tuotetta. Se puhdistettiin kromatografoimalla Sephadejc LH-20tm-pylväässä (1,2 x 98 cm), joka oli tasapainotettu metanolilla. Eluoitiin metanolilla ja koottiin 150 tipan (2,9 ml) fraktioita. Haluttu yhdiste oli fraktiossa 24-29. Liuotin poistettiin kiertohaihduttimessa ja jäännös puhdistettiin kromatografoimalla uudelleen Sephadex^H-20tm-pylväässä, joka oli tasapainotettu iso-propanolilla. Eluoitiin isopropanolilla, tuotetta sisältävät fraktiot yhdistettiin ja haihdutettiin kiertohaihduttimessa.
Saatu tuote oli ohutkerroskromatografiamäärityksen mukaan liuotin-systeemeillä 2 ja 3 noin 95-% puhdasta.
Rf (2) = 0,73, Rf(3) = 0,615, Rf(Bu0H/Et0Ac/H0Ac/H20, 1:1:1:1) = 0,73. E^^-Phe-tiopropionihappo = 1,00 tl 71749 29
Esimerkit 49 ja 50
Analogisella tavalla valmistettiin lähtien tert-butaani-karbonyyliglysiinistä (sp. 134-136°C)
Esimerkki Yhdiste 49 N0^· /3- (Γ^-tert-butaanikarbonyyliglysyyli-tio)-2-D-metyylipropanoyyliJ-L-proliini;
JpCj D = “101,7, Rf (6) = 0,56, Rf(7) = 0,63, NMR (CDCl3:ssa): 1,21 (3H, d, CH-^), 1,35 (9H, S, CH3), 1,5-2,5 (4H, m, CH2) , 2,5-3,9 (5H, m, CH ja CHg), 3,9-4,8 (3H, m, CH ja CH2)» 6,5-7,4 (1H, m, NH), 11,11 (1H, S, COOK)
Ja vastaavasti (N^-asetyyli-L-fenyylialanyylitio) propanoyylij -L-proliineista 50 -bentsoyyli-L-fenyyli-alanyylitio) propanoyyli^-L-proliiniz-^jfD = -44,4, R^(6) = 0,83, Rf(1) = 0,58, Rf{2) = 0,78, Rf{3) = 0,59, Rf(4) = 0,59
Keksinnön mukaisesti valmistettujen yhdisteiden aktiivisuus (estovaikutus in vitro)
Edellä syntetisoitujen yhdisteiden estovaikutus mitattiin in vitro esimerkissä 1 kuvatulla tavalla. Entsyymivalmiste saatiin ihmisen virtsasta J. W. Ryan'in et ai., Tissue and Cell 10 (1978), s. 555 kuvaamalla tavalla. Taulukossa 3 on eri yhdisteiden l^Q-arvot. I^-arvo ilmoittaa inhibiittorin konsentraation, joka tarvitaan entsyymin inhiboimiseen 50-% standardikoeolosuhteissa, jossa koesysteemi sisältää substraattia olennaisesti alle K -arvon.
m 30 7 1 7 4 9
Taulukko 3
Yhdiste ΐ,_Λ - -3 ο — ft
Esimerkki 13 2,6 x 10 M
— ft
Esimerkki 20 3,4 x 10 M
— 9
Esimerkki 25 7,5 x 10 M
Esimerkki 29 8,8 x 10 ^ M
Esimerkki 36 2,5 x 10-^ M
— ft
Esimerkki 37 1,5 x 10 M
-9
Esimerkki 41 9,4 x 10 M
Esimerkki 42 2,5 x 10~® M
-9
Esimerkki 43 7,5 x 10 M
— 9
Esimerkki 48 (raseeminen) 3 x 10 M
Claims (6)
- 31 71749
- 1. Menetelmä verenpainetaudissa käytettävän angiotensiiniä muuttavan entsyymi-inhibiittorin valmistamiseksi, jolla on kaava 0 R-A-S-(CH„) -CH-C-R„ T 2 n | 2 i R1 jossa R on vety, formyyli, asetyyli, propanoyyli, butanoyyli, bentsoyyli, syklopentyylikarbonyyli, tert.-butyylioksikarbonyyli, syklopentyylikarbonyyli-L-lysyyli tai pyro-L-glutamyyli, A on L-fenyylialanyyli, glysyyli, L-alanyyli, L-tryptofyyli, L-isoleusyyli, L-leusyyli tai L-valyyli, jolloin Ci-amino liittyy R:ään amidisidoksella, sillä ehdolla, että fenyylialanyyli on ra-seeminen, kun R on bentsoyyli, R.j on vety tai metyyli, R2 on L-proliini, L-3,4-dehydroproliini tai D,L-3,4-dehydro-proliini, jolloin iminoryhmä on liittynyt viereiseen ^c=:0 -ryhmään imidisidoksella, ja n on 0 tai 1, jolloin kun n on 0, niin R1 on metyyli, tunnettu siitä, että 1. yhdiste, jonka kaava on 0 R,-S(CH^) -CH-C-OH j 2 n j R1 saatetaan reagoimaan R2:n ^anssa yhdisteeksi, jolla on kaava 0 R--S(CH-) -CH-C-Ro 3 2 n | ώ R1 joissa kaavoissa R^ on asetyyli, ja R^, R2 ja n merkitsevät samaa kuin edellä, 71 749 32 2. vaiheessa 1) saadusta yhdisteestä poistetaan R^, jolloin saadaan yhdiste, jolla on kaava 0 HS-(CH-) -CH-C-R_ Z n Z R1 3. vaiheesta 2) saatu yhdiste saatetaan reagoimaan kaavan R-A mukaisen yhdisteen kanssa, jolloin saadaan yhdiste, jolla on kaava O R-A-S-(CH ) -CH-C-R„ Z n | Z R1 jossa R, A, R^, R2 ja n merkitsevät samaa kuin edellä.
- 2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnet-t u siitä, että vaiheen 1) reaktio suoritetaan joko 1,1'-karbonyy-lidi-imidatsolin tai disykloheksyylikarbodi-im.idin läsnäollessa ja vaiheen 3) reaktio suoritetaan 1,1'-karbonyylidi-imidatsolin läsnäollessa.
- 3. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, tunnet-t u siitä, että vaiheessa 1) R2:lla on myös karboksyylin suojaryh-mä, joka poistetaan vaiheessa 2).
- 4. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, tunnet-t u siitä, että R on bentsoyyli, A on fenyylialanyyli, R^ on metyyli, R2 on proliini ja n on 1. tl 71749 33
- 1. Förfarande för fraraställning av v.id behandling av högt blodtryck användbar, angiotensin omvandlande enzyminhibitor med formeIn O R-A-S-(CH-) -CH-C-R- I z n z R1 väri R är väte, formyl, acetyl, propanoyl, butanoyl, bensoyl, cyklo-pentylkarbonyl, tert.-butyloxikarbonyl, cyklopentylkarbonyl-L-lysy1 eller pyro-L-glutamyl, A är L-fenylalanyl, glycyl, L-alanyl, L-tryptofyl, L-iso-leucyl, L-leucyl eller L-valyl, varvid Οί-amino är i amidbindning med R, med det villkoret, att fenylalanyl är rasemisk, när R är bensoyl, R1 är väte eller metyl, R2 är L-prol.in, L-3,4-dehydroprolin eller D ,L-3,4-dehydro-prolin, varvid iminogruppen är i imidb.indning med närliggande ^C=0 -grupp, och n är 0 eller 1 , varvid da n = 0, är R^ metyl, kännetecknat därav, att 1. en förening med formeln 0 R -S(CHJ -CH-C-OH 3 2 n | R1 omsättes med R2 för erhällande av en förening med formeln 0 R_-S(CH_) -CH-C-R» ό ύ n j λ R1 i vilka formeln R^ är acetyl, och R^, R^ och n betecknar detsamma som tidigare,
Applications Claiming Priority (18)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US94128978A | 1978-09-11 | 1978-09-11 | |
US94128978 | 1978-09-11 | ||
US95818078A | 1978-11-06 | 1978-11-06 | |
US95818078 | 1978-11-06 | ||
US6490079 | 1979-08-14 | ||
US6489979 | 1979-08-14 | ||
US06/064,900 US4690939A (en) | 1979-08-14 | 1979-08-14 | Anti-hypertensive agents |
US06/064,901 US4695577A (en) | 1979-08-14 | 1979-08-14 | Anti-hypertensive agents |
US6490379 | 1979-08-14 | ||
US06/064,902 US4690940A (en) | 1979-08-14 | 1979-08-14 | Anti-hypertensive agents |
US06/064,903 US4698355A (en) | 1979-08-14 | 1979-08-14 | Anti-hypertensive agents |
US6490179 | 1979-08-14 | ||
US6489779 | 1979-08-14 | ||
US06/064,898 US4690938A (en) | 1979-08-14 | 1979-08-14 | Anti-hypertensive agents |
US6490279 | 1979-08-14 | ||
US06/064,899 US4698356A (en) | 1979-08-14 | 1979-08-14 | Anti-hypertensive agents |
US06/064,897 US4690937A (en) | 1979-08-14 | 1979-08-14 | Anti-hypertensive agents |
US6489879 | 1979-08-14 |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
FI792806A FI792806A (fi) | 1980-03-12 |
FI71749B true FI71749B (fi) | 1986-10-31 |
FI71749C FI71749C (fi) | 1987-02-09 |
Family
ID=27578299
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
FI792806A FI71749C (fi) | 1978-09-11 | 1979-09-10 | Foerfarande foer framstaellning av vid behandling av hoegt blodtryck anvaendbar, angiotensin omvandlande enzym-inhibitor. |
Country Status (15)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP0009898B1 (fi) |
AT (1) | AT390795B (fi) |
AU (1) | AU532424B2 (fi) |
BG (1) | BG34463A3 (fi) |
CS (1) | CS242857B2 (fi) |
DE (1) | DE2965443D1 (fi) |
DK (1) | DK376179A (fi) |
FI (1) | FI71749C (fi) |
GR (1) | GR73585B (fi) |
HU (1) | HU187258B (fi) |
IL (1) | IL58223A (fi) |
IT (1) | IT1193214B (fi) |
NZ (1) | NZ191524A (fi) |
PH (1) | PH19104A (fi) |
PT (1) | PT70158A (fi) |
Families Citing this family (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
ZA794723B (en) * | 1978-09-11 | 1980-08-27 | Univ Miami | Anti-hypertensive agents |
ZA802420B (en) * | 1979-05-18 | 1981-04-29 | Squibb & Sons Inc | Aminoacyl derivatives of mercaptoacyl amino acids |
PT70158A1 (en) * | 1980-03-03 | 1982-03-01 | Univ Miami | Process for preparing anti-hypertensive agents |
US4734420A (en) * | 1980-03-05 | 1988-03-29 | University Of Miami | Anti-hypertensive agents |
US4690936A (en) * | 1980-03-05 | 1987-09-01 | University Of Miami | Anti-hypertensive agents |
EP0036713B1 (en) * | 1980-03-05 | 1984-01-18 | University Of Miami | Angiotensin converting enzyme inhibitors |
FR2480747A1 (fr) * | 1980-04-17 | 1981-10-23 | Roques Bernard | Derives d'acides amines et leur application therapeutique |
US4512979A (en) * | 1981-03-23 | 1985-04-23 | Merck & Co., Inc. | Dipeptides containing thialysine and related amino acids as antihypertensives |
AT386603B (de) * | 1981-06-19 | 1988-09-26 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Verfahren zur herstellung von neuen prolinderivaten |
JPS57209270A (en) * | 1981-06-19 | 1982-12-22 | Chugai Pharmaceut Co Ltd | Proline derivative |
HUT46044A (en) * | 1986-11-21 | 1988-09-28 | Richter Gedeon Vegyeszet | Process for producing immunstimulant peptides inhibiting multiplication of leukaemic cells and pharmaceutics comprising same |
CN1081650C (zh) * | 1995-12-27 | 2002-03-27 | 罗纳-普朗克·维斯科苏希公司 | 缩聚物,尤其是聚酰胺6,6后冷凝的方法 |
US20110081367A1 (en) | 2008-06-14 | 2011-04-07 | Veredus Laboratories Pte Ltd | Influenza sequences |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AU509899B2 (en) * | 1976-02-13 | 1980-05-29 | E.R. Squibb & Sons, Inc. | Proline derivatives and related compounds |
US4053651A (en) * | 1976-05-10 | 1977-10-11 | E. R. Squibb & Sons, Inc. | Compounds and method for alleviating angiotensin related hypertension |
AU518147B2 (en) * | 1976-12-03 | 1981-09-17 | E.R. Squibb & Sons, Inc. | Derivatives of thiazolidine, thiazine and morpholine carboxylic acids |
US4091024A (en) * | 1976-12-03 | 1978-05-23 | E. R. Squibb & Sons, Inc. | Pyrrolidine and piperidine-2-carboxylic acid derivatives |
US4116962A (en) * | 1976-12-03 | 1978-09-26 | E. R. Squibb & Sons, Inc. | Pyrrolidine and piperidine-2-carboxylic acid derivatives |
US4113715A (en) * | 1977-01-17 | 1978-09-12 | E. R. Squibb & Sons, Inc. | Amino acid derivatives |
US4108886A (en) * | 1977-03-11 | 1978-08-22 | E. R. Squibb & Sons, Inc. | Thiopropanoylamino acid derivatives |
-
1979
- 1979-09-04 GR GR59962A patent/GR73585B/el unknown
- 1979-09-10 DE DE7979301854T patent/DE2965443D1/de not_active Expired
- 1979-09-10 NZ NZ191524A patent/NZ191524A/xx unknown
- 1979-09-10 EP EP79301854A patent/EP0009898B1/en not_active Expired
- 1979-09-10 FI FI792806A patent/FI71749C/fi not_active IP Right Cessation
- 1979-09-10 AT AT0596279A patent/AT390795B/de not_active IP Right Cessation
- 1979-09-10 PT PT197970158A patent/PT70158A/pt unknown
- 1979-09-10 AU AU50705/79A patent/AU532424B2/en not_active Ceased
- 1979-09-10 DK DK376179A patent/DK376179A/da not_active Application Discontinuation
- 1979-09-10 HU HU79MI656A patent/HU187258B/hu not_active IP Right Cessation
- 1979-09-11 CS CS796150A patent/CS242857B2/cs unknown
- 1979-09-11 IL IL58223A patent/IL58223A/xx unknown
- 1979-09-11 IT IT25612/79A patent/IT1193214B/it active
- 1979-09-11 BG BG7944830A patent/BG34463A3/xx unknown
-
1981
- 1981-03-23 PH PH25401A patent/PH19104A/en unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
NZ191524A (en) | 1982-12-07 |
BG34463A3 (en) | 1983-09-15 |
CS242857B2 (en) | 1986-05-15 |
EP0009898A1 (en) | 1980-04-16 |
PT70158A (en) | 1979-09-30 |
AU532424B2 (en) | 1983-09-29 |
ATA596279A (de) | 1989-12-15 |
DE2965443D1 (en) | 1983-07-07 |
PH19104A (en) | 1986-01-02 |
EP0009898B1 (en) | 1983-05-18 |
IL58223A (en) | 1984-01-31 |
HU187258B (en) | 1985-12-28 |
AT390795B (de) | 1990-06-25 |
DK376179A (da) | 1980-03-12 |
CS615079A2 (en) | 1985-08-15 |
IT1193214B (it) | 1988-06-15 |
FI71749C (fi) | 1987-02-09 |
GR73585B (fi) | 1984-03-26 |
AU5070579A (en) | 1980-03-20 |
FI792806A (fi) | 1980-03-12 |
IT7925612A0 (it) | 1979-09-11 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US4522752A (en) | Retro-inverso analogues of the bradykinin potentiating peptide BPP5a and methods for their preparation | |
US4692458A (en) | Anti-hypertensive agents | |
FI67539B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av nya terapeutiskt anvaendbara peptidyl-ng-karboxyl-arginaldehyder | |
US5114918A (en) | Endothelin antagonistic cyclic pentapeptides | |
US4692459A (en) | Anti-hypertensive agents | |
FI71749B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av vid behandling av hoegt blodtryck anvaendbar angiotensin omvandlande enzym-inhibitor | |
US4707490A (en) | Anti-hypertensive agents | |
CA2338524A1 (en) | Inhibitors of urokinase and blood vessel formation | |
EP0480044A1 (en) | Novel 4h-3,1-benzoxazin-4-one derivative | |
EP0036713B1 (en) | Angiotensin converting enzyme inhibitors | |
US4713367A (en) | Retro-inverso analogs of the bradykinin potentiating peptide BPP5a | |
US4734420A (en) | Anti-hypertensive agents | |
US4698356A (en) | Anti-hypertensive agents | |
US4690940A (en) | Anti-hypertensive agents | |
US4695577A (en) | Anti-hypertensive agents | |
US4690939A (en) | Anti-hypertensive agents | |
KR840002357B1 (ko) | S-(아실아미도아실)메르캅토아실 프롤린류의 제조방법 | |
US4698355A (en) | Anti-hypertensive agents | |
US4690936A (en) | Anti-hypertensive agents | |
US4690938A (en) | Anti-hypertensive agents | |
US4833152A (en) | Anti-hypertensive agents | |
US4690937A (en) | Anti-hypertensive agents | |
JP2004083427A (ja) | 環状ヘキサペプチド及びプロテアソーム阻害剤 | |
IE48823B1 (en) | Novel anti-hypertensive mercaptoacylamino acid derivatives,their preparation and use | |
NO831112L (no) | Fremgangsmaate for fremstilling av blodtrykkssenkende midler |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM | Patent lapsed |
Owner name: THE UNIVERSITY OF MIAMI |