CS242857B2 - Method of enzyme inhibitors production - Google Patents
Method of enzyme inhibitors production Download PDFInfo
- Publication number
- CS242857B2 CS242857B2 CS796150A CS615079A CS242857B2 CS 242857 B2 CS242857 B2 CS 242857B2 CS 796150 A CS796150 A CS 796150A CS 615079 A CS615079 A CS 615079A CS 242857 B2 CS242857 B2 CS 242857B2
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- compound
- formula
- proline
- lysyl
- methyl
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/06—Dipeptides
- C07K5/06139—Dipeptides with the first amino acid being heterocyclic
- C07K5/06173—Dipeptides with the first amino acid being heterocyclic and Glp-amino acid; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
- C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
- C07D207/04—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
- C07D207/10—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
- C07D207/16—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
- C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
- C07D207/18—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member
- C07D207/22—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
- C07D207/46—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with hetero atoms directly attached to the ring nitrogen atom
- C07D207/50—Nitrogen atoms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/06—Dipeptides
- C07K5/06086—Dipeptides with the first amino acid being basic
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
(54) Způsob výroby inhibitorů enzymu
Způsob výroby nových inhibitorů enzymu pro přeměnu angiotensinu typu peptidyldipeptidhydrolázy obecného vzorce I R-A-S-(CH2)n-CH-^-R2 (I) k
a jejich solí, přijatelných z fyziologického hlediska, spočívá v tom, že se uvede v reakci sloučenina obecného vzorce II
O
R -S-(CH_) -CH-Ó-CH
2 П | (II) R1 se sloučeninou obecného vzorce R2H za vzniku sloučeniny obecného vzorce III
(III) načež se odstraní R^, a takto získaný produkt se uvede v reakci se sloučeninou
R-A za vzniku sloučeniny obecného vzorce I, která se popřípadě převádí reakcí a anorganickou baží na sůl, přijatelnou z fyziologického hlediska.
Inhibitory jsou použitelné z farmaceutického hlediska v medicíně.
Vynález se týká způsobu výroby antihypertenzivních látek.
Enzym způssObjící přeměnu angiotenzinu (peetidyldipeptidhydroláza, dále ACE) má základní úlohu v fyziologii zvýšeného krevního tlaku. Tento enzym je schopen přeměěit dekapeptid angiotenzin I se sledem
AspArgVvlTTyileHšsProPheHisLeu na rktapeptid angiotenzin II odstraněním karboxyterminálni skupiny HisLeu. Syrnbboy, užívané pro různé aminorksleiny jsou uvedeny v následníci tabulce:
Ala = L-alenin
Arg = L-argi-nin
Asp = L-asparagová yseenina <Glu = pyro-L-gutaminová kyselina
Gly = glycin
Hip = Hippurová kyselina (bennoolglycin)
His = L-h
Ile = L-ísoIiucíí
Leu = L-leucin
She = L-fenyIiIiííí
Srr = L-prolin
Asrr = L-3,4-dehyyrorprOin
Ser = L-serin
Trp = L-tryptofan
Tyr = ь^уго^г
Van = L-valin
ACE = enzym, způs^^ící přeměnu angiotenzinu
Hepes - kyselina N-2 hydroxyy ey lpiperaoin-N'-2-etanlulO<inová
Anniotenzin I se vytváří působením enzymu reninu, eidopplPidáoy z ledvin, dalších tkání a plazmatu na sérově 1X1:1-2^10611111. *
Krevní tlak je ovlV^í^r^v^Sn různými peptidy, které se nacHázeí v krvi. Jedna z těchto látek angi^enz^ II silně zvyšuje krevní tlak. DdIší z těchto látek, bndykinin, nrnapeppid se sekvenci ArgSrrSrrGlySheSerSrrSheArg sUně snižuje krevní tlak. Kromě přímého vlivu na krevní tlak vyvolává angin^nz^ II uvolňování alJostemu, který zvyšuje krevní tlak tak, že působí zadržení mimobuněčných solí a kapp^. Anniotenoii II je možno prokázat v měl.t^en^éb ^^οζ^ι v krvi zdravých lidí. Ve zvýšeném ^Οζ^ι se nachází v krvi nemocných s ledvinovou hyppetenzí.
Přebytek účiunoH ACE je obvykle možno prokázat v krvi nor^áních lidí i v krvi lidí se zvýšeným krevním taakem, takže tohoto enzymu je dostatek k udržení žádoucí hladiny angiotenzinu II. Bylo však zjišěčrio, že snížení krevního tlaku je možno dosáhnout u hyperteioiviích nemocných podáváním inhibitoru ACE /G^i^jras I., a další, New Engl. J. Med.· 291, 817 (1977)/.
Předmětem vynálezu je způsob výroby nových inhibitorů ACE obecného vzorce o
)!
R-A-S-(CI^)n-CH-C-R2 kde
R znamená atom vodíku, formy1, acetyl, propanoyl, butanoyl, fenylaceeyl, fenylpropanoyl, benzoy1, cyklopentylkarbonyl, terc.butyloxykarbonyi, cykiyppttylkaabboyl-L-lysyl, pyro-L-glutamml-LLlysyl, L-lysyl, L-arginyl nebo pyro-Liglutamyl,
A znamená L-fenylalahyl, glycyl, L-alanyl, L-tryptofenyl, L-tyr^oy^l, L-tryptofenyl, L-tyrosyl, L-isoleucyl, L-ltucyl, L-histidyl nebo L-valyl, jejichž alaaaamiyyykupiya jt vázána amidovou vazbou na R, přičemž v případě, že R znamená benzooví, je fenylalanyl v racemické formě,
R^ znamená atom vodíku nebo meeyl,
R2 znamená L·lprq^i.y, L-3,4-dehhУirlrolin, D,L-3,4-iehhУdr>yruOiy, L-3-hydroxyyrr)Oiy, L-4lhydroxyyrc>liy nebo L-thiazolidiy, jejíchž imiyyykupiya je vázána imidovou vazbou na sousední skupinu n znamená celé iíslo 0 nebo 1, přieemž v případe, že n = 0, R^ znamená metl.· ‘
Všechny uváděné aminyУklУtiyy maj konfiguraci L, rn^eí-liL uvedeno jinak· V případě, že R znamená benzol, je fenylalanin v racemické formě. Slyuieniyy, vyrobené způsobem podle vynálezu jsou inhibitory ACE a je možno jich užžt jako pen^lně účinných ^^hypertenzivních látek·
Zjištění iyhibiifí účinnoosi s^udenin podle vynálezu vzhledem k ACE znamená úplně nový přístup v oMassi ίyhibiifíih ylluinnin· Známé inhibitory jsou obvykle také proHnové deriváty a subbyituce dalšími arninokyyylinami rovněž poskytuje úiiyyé inhibitory· Arginin, fenylalanin a alanin jsou ύϋ^ϋγ^ί. látkami, jimiž je možno prolín nahhaadt·
Náhrada L-3,4-dehyldooroMnu za prolin byla sledována v někoOika systémech. V případě, že se užije L-3,4-iehhliOlroliy v poloze 7 brad kininu, získá se bradykiyinyvý derivát s podstatně sníženou fyziologickl)u účinnoosí, jak bylo uvedeno v publikaci Fisher G. H. a další, Arch· Biochem. Blopíis. 189, 81 (1978). Na druhé straně při téže látky v poloze 3, 5 nebo 9 slybityiyy BPP^a, která je inhibiOreem ACE, dojde ke zvýšení účinnoosi· Nelze však pozorovat žádnou zákonitou souuislost mmei výsledky, které byly získány při pokusu o náhradu prolinu dehydroproinnem, protože tyto výsledky si navzájem odp^uu!. Nelze tedy předem usouuit na výsledek pokusu o získání analogů inhibitorů ACE.
Až dosud nebyl stanoven přesný vliv aminoУylУtiyy, která se nachází na levé straně atomu síry ve svrchu uvedeném obecném vzorci. Jde patrně o to, že tato aminoУyyyeřna je dalším uozrbšovacím místem pro enzym. V případě, že je tento předpoyiad správný, bylo by možno oieyávat, že slybčnyiya s a^ii^c^O^y^l^seeí^íou v této poloze bude úi^nějším inhibitorem· Nebylo vsak známo, která z aminyУylУtiy by byla v této poloze účinná a která by zvýšila iyhibiiyí účinnost dané slybinniny· Nyní bylo zjištěno, že úiinyé jsou různé aIninolylУtiyy a že hyd^oxl^^ny, prolin, L-, a D,L-3,4lithyllioyru)liy i thiazllidfooié deriváty jsou úiiyyými antihyrerttyziiyími sl^obinyiyam. a maj . poměrně vysokou úiiyylst při i^nhi-bjici ACE.
Vynález bude ro<irθbnnti popsán v soobiiSolSi s následnuícími příklady- V těchto příkladech byla ihrymiaoygdait na tenké vrstvě prováděna při pobití vrstev sililagtlb· Jednnlliié systémy rozpouštědel pro toto pocítí byly iísOoyáyy následujícím způsobem:
1) směs meeanolu a chloro^mu v objemovém poměru 1:1,
2) směs benzenu, vody a kyseliny octové v objemovém poměru 9:1:9,
3) směs kyseliny octové, vody a n-butanolu v objemovém poměru 26 : 24 : 150,
4) směs n-butanolu, pyridinu, kyseliny octové a vody v objemovém poměru 15 : 10 : 3 : 12,
5) směs chloroformu, metanolu a hydroxidu amonného v objemovém poměru 60:45: 20.
Pro elektroforézu na papíře byly užity nás3.eddjící pufry:
pH 1,9 - směs kyseeiny mravenčil, kyseliny octové a vody v objemovém poměru 3 : 2 : 25, pH 5,0 - směs dietylenglykolu, kyseeiny octové, pyridinu a vody v objemovém poměru 100 : 6 : 8,5 885.
Terc.butylfxykarbfnylfvé, benzoylové, acetyiové, formyiové, propanoy^vě, butanoylové, fenylacetylové a fenylpropanoylové derivSty aminooysslin se běžně doddsají. Sephadex LH-20, Sephadex G-10 a Sephadex G-25 jsou obchodní značky výrobků fimy Pharmacia, lne., Uppsala švédsko.
PPi přípravě přihSáŠek č. 941 289 a 958 180 bylo možno připravit N-beezzfl-L-fenySalanin způsobem, který je uveden v příkaadech 4 a 2 svrchu uvedených přihSSšek. Poo^^ji bylo z publikace Fischer a Moooeeyat, Ber, 33, 2383 (1900) zjišjёnf, že způsobem, popsaným ve svrchu uvedených příkaadech je možno připravit spíše racemát než L-formu. Byio také pafУSzSnf, že k výrobě sloučenin, které jsou účinné jako inhibitory enzymu pro přeměnu angiotenzinu jsou všechny tři optické isomery, a to N-beleofS-D,LL-eneSalaeie, N-bennool-L-flnnSaiaein a N--bbeeofS-D--ennSalanin.
PPi podáváni přihlášek 64 897 až 64 903 byio rovněž předpokládáno, že všechny ami.nokyseliny musí být v L-formě, aby připaavované sloučeniny byly účinné jako inhibitory ACE. Poo^ě! bylo paoУSoSeo, že k tomuto účelu je možno užít také D-formy a D,L-formy.
Předmětem vynálezu je způsob výroby nových inhibitorů enzymu pro přeměnu angiotensinu typu peptidyldiplptidhsdaflSzs obecného vzorce I
O
II
R-A-S- (CH2) n-CH-C-Rz 1
R1 kde
R znamená atom vodíku, formyS, ace^i, propanoyl, butanool, fleylacelyl, feeylpro>panof у , benzooS, cyklfpeneylkarboneS, tlr.butslfxyУarbofnS, cyklopeentSkaaboonS-LLlssyl, pyro-L-glutamml-L-lyssS, L-lysyl, L-arginyl nebo pyro-L-glutamyS,
A znamená D-flneSalaneS, , glycyl, D,L-alanyl, D-alanyl, L-aLan^)·,
L-tryptofyl, D,LLtrsptofyl, D-tryptofyl, DI^L-tyrosi^i, D-tyrosyl, D,L-ísoL^iuc^^íL, D-isoleucyl, L-í^soL^iuc^^I, D^-leucyl, D-leucyl, L-leucyl, D,L-histidyS, L-histidyl, D,Llvvay 1, D-vaayl nebo L-vaayl, jejichž alfaaamieosУupiea je vázaná amidovou vazbou na R, v případě, že R má odlišný význam od atomu vodíku, p^eemž v případě, že R znamená benzool, je fenylalanyl v radlické foamě,
Rj znamená atom vodíku nebo metyl,
R2 znamená L-prolin, L-3,4-dehhУdaoaafin, D,L-l3,4-dehhУdrfУrfie, L-3-hsdaoxyyarfie, L-4-hydroxχyyrfie nebo kyselinu L-thiazolddeyaabboxsfovou, jejíchž ίmiefsУuydna je vázána imidovou vazbou na sousední skupinu Q a i1
-Cn znamená celé číslo 0 nebo 1, přičemž v yříyadě, že n = 0, Rr znamená meeyl, a jejcch soH, yřijaleenýih z fsziofogickéhf hlediska, vy^naču^í se tím, že se uvede v reakci sloučenina obecného vzorce II (II) kde
R a n mají shora uvedený význam, znamená acetyl, se sloučeninou obecného vzorce
R2H kde atom vodíku je vázán na atom dusíku, iminoskupiny 0,
R2 má svrchu uvedený význam, za vzniku sloučeniny obecného vzorce III
R3-S-(CH2)
(III) kde
R, R2, R^ a n maaí svrchu uvedený význam, načež se odstraní R, za vzniku sloučeniny obecného vzorce IV
O
П
HS-(CH2)n-CH-C-R2 (IV) R1 kde
R, R2 a n maaí svrchu uvedený význam, a takto získaný produkt se uvede v reakci se sloučeninou obecného vzorce V
R-A (V) kde
R a A maaí svrchu uvedený význam, za vzniku sloučeniny obecného vzorce I
O
II *
R-A-S-CH2)nCH-C-R2(I) R1 .
kde’
R, A, R^ a R2 a n maaí svrchu uvedený význam,’ která se popřípadě převádí reakcí s anorganickou nebo organickou bázi na sůl, přijatelnou z fyziologického hlediska.
Sloučeniny obecného vzorce I tvoří bazické soli s různými anorganickými nebo organickými bázemi. Jde o amonné soli, soli s alkalickými kovy, s kovy alkalických zemin, s organickými bázemi, s aminokyselinami apod. Příklddem solí s alkalíkýým kovem může být sodná a draselná sůl. Přík^dem soH s kovy alkalických zemin mohou být soli vápenaté nebo hořečnaté. Případem solí s organickými bázemi mohou být soli s benzathinem, N-mety 1-D-gUkaaminem nebo hydrabaminy. Příkladem solí s lminokkselinlmi mohou být arginin a lysin. Výhodné jsou sodné nebo draselné soli nebo soli s lysínem. Výhodné jsou netoxické, z fyziologického hlediska přijatenné soli.
SoH se tvoří tak, že se uvede v reakci volná kyšelina obecného vzorce I s jedním ekvivalentem příslušné zásady, která dodává požadovaný kation v rozpouštědle nebo v prostředí, v němž je sůl nerozpustná nebo ve vodě a následným odstraněním vody lyofilizlií.
SoH podle vynálezu působí inhibici přeměny dekapeepidu angiotenzinu I na a^<^l.otenzin II a tím je těmto sloučeninami možno snnžit zvýšený krevní tlak, způsobený zvýšenou hladinou arg^tenz^! Působením enzymu reninu na angiotenzinogen, pseudoglobulii krevní plazmy vzniká angioteizii I. Апс;1о1пп21п I je enzymem ACE přeměňován na мдмtenzin II. Tato látka zvyšuje krevní tlak a je patrně příčnnou zvýšeného krevního tíLaku u různých skupin savců, jak bylo prokázáno u krys a u psů. Sloučeniny podle vynálezu působí inhibici sledu (renin) (ACE) lniioteniini>len --> ^íotenz^ I------^ange^enz In II čímž se snižuje nebo vylučuje tvorba lngioteiziiu II. Z toho vyplývá, že podáváním prostředku s obsahem sloučenin obecného vzorce I nebo některé z jejích solí je možno snnžit hypertenzi u savců, u nichž je tento stav způsoben ligioteizinem. Používá se obvykle jedné, s výhodou dvou až čtyř denních dávek o velikosti 0,1 až 100 mg denně, s výhodou 1 až 50 mg denně. Pokusy byly popsány v publikacích S. L. Engge, T. R. Schaaefer, Μ. H. Waugh a B. Rubin, Proč. Soc. Exp. Biol. Med. 143, 483 (1973).'Sloučeniny se s výhodou poddával perorálně, je však také možno je podat parennerálně, například podkožně, nitoosvalově, nitroSiině nebo iitrLlpniiOorlnáliě.
SsH podle vynálezu je možno užít ke snížení krevního Háku ve formě tablet, kappsí nebo elixírů pro perorální podání nebo ve formě sterilních roztoků nebo suspenzí pro parenneeální podání. 10 až 500 mg soli nebo směsi solí obecného vzorce I se ms:í s nosičem, pojvvem, konzervační látkou, stlbilizálonem, vonnými nebo chuťovými látkami na lékovou formu běžným způsobem. Mužství účinné látky v těchto prostředcích je takové, aby bylo možno dosáhnout účinné dávky ve svrchu uvedeném rozmezí.
V případě tablet, kappsí a podobně je možno užžt běžných pomocných látek, nappíklad tragantové pryže, akáciové pryže, kukuřičného škrobu nebo želatiny, hydrogeenosfomčíiíu vápenatého, desintegračního činidla, nappíklad kukuřičného škrobu, bramborového škrobu, alginové kyseniiy a podobně, kluzných látek, nappíklad staranu horečnatého, , sladidel například sacharózy, laktózy nebo sachaainu, chuťových látek, nappíklad oleje z máty peprné nebo třešňové 5Шсп. V případě kappsí je možno užžt i kapalného nosiče, nappíklad llflatikkého oleje. Je možno užít i další mateii^ly, zejména jako povlaky nebo ke změně fyzikální formy léků. Naaříklad tablety je možno povlékat šelakem, cukrem nebo smí£^:í těchto látek. Sirupy nebo elixíry mohou obsahovat účinnou látku, sacharózu jako sladidlo, meeylplraben nebo propyl.paraken jako konzervační činidlo, barvivo a chuťové látky, např. třešňovou nebo pomerančovou příchuť.
Steeilní prostředky k iinekCnm účelům se vyrábí běžným způsobem tak, že se účinná látka rozpuutí nebo uvede v suspenzi např. ve vodě, v rostliim^m oleji, jako sezamovém oleji, kokosovém oleji, arašídovém oleji, oleji z baviníkových semen a podobně, je možno užt také syntetických nosičů, nappíklad etyloleátu a podobně. Tyto roztoky mohou obsahovat také pufr, konzervační .látku apod.
Příklad 1
Zajištění ACE
Pro většinu popsaných pokusů byla účinnost enzymu stanovena v 0,05 M pufru Hepes o pH 8,0 s obsahem 0,1 M NaC! a 0,75 M Na„SO.. Bylo pouušto substrátu bennool-Gly-Hisp
- 4 2 -4 T3j pL·ej v ^nečné kornc.'^^! 1 x 10 M, (К «5*2 xlO M), spiu s 130 000 cpm L,íjbtozoylp GlyHisLeu (25 Ci/ninn]). Enzym byl zředěn svrchu uvedeným pufem tak, še 40 /11 p^^rovap ného enzymu bylo schopno hydrolyzovat 13 % subbtrátu po 15minutové inkubaci při teplotě 37 °C. Na pčátku pokusu bylo 40 /11 enzymu a 10 /11 vody nebo iohibityru, rozpustěn^o ve vodě jedem lnk^nb-yváoy po dobu 5 minut při teplotě 37 °C. Pak bylo přidáno 50 /11 subsitrátu a tyztyk byl ink^ubo'ván 15 minut při ^plotě 37 °C. Reakce byla ukon^na přidáním 1 ml 0,1 M HC1 a pak 1 ml ttylřettátj. Směs byla míchána na rotační třepačce a pak byla krátce odstředěna k odstranění fází.
Pak bylo 500 /11 etylřeetátyvé vrstvy přeneseno do nádobky pro kapalinovou scénnilaei s obsahem 10 ml Riafluor (New England Nuulear Coyppyrřion, Boston, MařsSřeuuetttS . Pro stanovení hodnoty byla srovnávána účinnost enzymu za příУoinoySi inhibitoru o různé kyncetOraci s účinností v nepřítomnosi inhibitoru. Srovnání koncentrace inhibitoru a 1^оЬ1^Ь1^с^п v procentech ummoňuje stanoven^í ^q·
Příklad 2
Syntéza t-butylesteru 3-acetylthiopropannyl-L-prolinu
0,865 g 3-řcetylthУopropřokysteiny se rozpustí ve 2 ml rtdtstiУvaaného tetrahydrof'urřnu (THF) a rozpk se zchladí na 0 °C. Pak se přidá 1,203 1 g dieyklyhtxy]křrbydiiiidu ve 2 ml THF a 1 g zchl^azcného roztoku L-prolin-terc. bjtyltstttu. Reakční směs se hodinu míchá při t^^tě 0 °C a pak přes noc při tejotě 4 °C. Pak se rea^ní směs fixuje a sraženina se promne etylaettátem· Z fittrátů se odpad rozpouštědlo za sníženého tlaku v rotačním odpařoval. Odparek se rozpustí v etylacetátu a roztok se třikrát prommje chladným roztokem kyseliny eit^or^ové o kynceeOrřci 1 N, pak se promyje ještě dvaRkrát nasyceným roztokem chloridu sodného, dvakrát chladným roztokem hydrogetnUhičitaou sodného o koncerιOraci 1 N a znovu třikrát nasyceným roztokem chloridu sodného. Roztok se vysuší bezvodým síranem hyřečoatým a zfiltruje. Roopouutědlo se odpaří za sníženého tlaku v rot^ním odpařovači při teplotě 30 °C, čims se zífskě ve výtěsku př^dzně 87 % čirý bezbarvý olejovitý výsledný produkt. PPi chromatografii na tenké poyUití systému rozpouštědla č. 5 vytváří výsledný produkt jedinou skvrnu.
vrstvě při
Příklad 3
Způsob výroby 3-meekaatopropaaool-LLprr>yinu v mnnosSví při teplotě Rooproušědlo
Produkt z příkjadu 2, terc.butylester 3-řcetylthiyptypřnoyl-L-prolinu 0,5 g se smísí se 4,5 ml mmtanolového roztoku amoniaku o koncentraci 5,5 N místnooSi v dusíkové atmosféře na 1 hodinu k odstranění acetylové skupiny. se pak odpaří na rotacím odpařovači při tepote; 25 °C. pak se produkt znovu rozpustí v meeanolu a odpaří a postup se ještě dvakrát opakuje, načeš se Čirý olejovitý zbytek rozpustí v etyléteru, dvakrát se promyje 5% hydrogensíranem draselným a jednou nasyceným roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem horečnatým a zfiltruje. Zbylé rozpouštědlo se odpad ve vakuu, číms se získá čirý olejovitý produkt, který vytváří jedinou skvrnu při ehrommřoyrařfi na tenké vrstvě při pouští tří odlišných systémů rozpouštědla. Terc.butylesttryvá ochranná skupina se odstraní reakcí s kyselinou trijlyryecУovyu v anis^lu.
Píkl^^dy 4 až 6
V případě, že se v příkladu 2 užije místo kyseliny 3-acetylthiopropanové kyselina 2-acetylthiopropanová, 3-acetylthio22-D-metylproaanová nebo 3-aceeylttir-2-D,L-meeylpropanová a postup se jňi^rk provádí způsobem podle příkladu 2 a 3, získáaí se násSeddjící sloučeniny. Oddtraněním terc.butylesterové ochranné skupiny působením kyseHny Opif ^ΡΟΟί:!vé v rnisrlu v prvním stupni je možno získat dicy klohexylaininivru sůl, která usnadní rozdělení isomerů. Acetylová ochranná skupina se odstraňuje ve druhém stupni metanolovým roztokem amoniaku způsobem podle případu 3.
Příklad
SlouCenina
2- merkaplopooplanol-LL0lolin
3- merrkppo^ 2D-d с Ьу^^^и^ O-OL-pr o in
3-me г к čí p p o-2oD,L-mettlp r o p a rnrl-O Lp po O in
Příklad 7
Způsob výroby 3-merrkaaol-2mсrylpaopapnrl-L-3,4-dehtdroraolinu mmml L-^j-dehyyldo^oHnu (Д3Рго) se rrz^stí v dimetylrrсmamidu (DMF) a rrzork se zchladí na -15 °C. Pak se rozt:^ ne^ta^^e přidáním 1 ekvivalente N-etylmoftújnu. V oddělené rea^ní nádobě se při tre^otě -10 °C smísí 1 ekvivalent ^rcct^^^i^-mm tiyl arrpankylstinl ve stejněn objemu dimetyfrrсmaíiUu s 1,1 tkvivalentem j^-karbonyldiimidizolu a roztok se hodinu míchá. Pak se první roztok s obsahem dehylroraolinu smísí s druyým s obalem 3-acetyltt0O22-íttllarlpřikysttiiy, ^^^r se udržuje ni -10 °C.
Slité roztoty se míchali ještě hodinu při 0^1ι01 -10 °C a pak se nechapí ^mmL· ^°г^1р0 na teplitu místnooti. Rooppottёdlo se odpalí na rotačním odpařovači zp sníženého tlaku při tejoté 40 °C. Přidá se 25 ml et^ice^Ou a roztok: se zchlaď ni 0 °C. Pak se přidají 2 ml 1 N kyseliny citrónové, obě fáze se aromI^:í a pak se oddělí na dělící nálevce, organická fáze se dvakrát primyje 2 ml 1 N kyseeiny citrónové, dvakrát nasyceným roztokem chloridu sodného, načež se vysuší bezvodým sípaném ^řečnitým. Síran hořečnatý se odddlí iitriicí a rozpouštědlo se odpaří np rotačním odpařovači. Odparek se rupnutí a nechá ařtkrystřlrv111 z nepolárního rozpouštědla, např. benzenu, čímž se získá 3-icceylttio-2-D,L-metllarrpřnorl--L-3,4-dttyddorloO1n. V případě, že se požaduje 2-D--^сГо^ 1-í^o^m^r, odparek se rozmístí v ^^Iížu1 3 ml ρο^οι^οί^ a roz^ se zahřeje np 40 °C. přk se přidá 1 ekvivalent dicyklottxylaíίnt a roztok se nechá stát přes noc při teplotě místněji. Vzniklé krystaly se o^i^d^l^ií iilPrrcí a třikrát se primy^ Je--i nutná vyšší čistota produktu, je možno jej překrystrlrvrt z itrppoořiolu. Acetylová ochranná skupina se odstraňuje stenným způsobem jako v příkladě 3.
Příklady 8 pž 11
V případě, že se v příkladě 7 nahradí L-3,4-dehhУuooaolii D,L-3,4-dttydroprolineí, L-l-hydr^n^l^em, Lo4-tldrrxyprrlineí nebo L-ttiřzrldditeс a jinak se postup provádí způsobem podle příkladu 7, je možno získat nááseduuící sloučeniny:
Příklad Sloučenina
3-íetkaaao-2-D-mettlorroani>r Ι-d ,L-3,4-UthyduoraoOii
3-íetkaplo-2-D-íeeyloproaioyl-L-3-tlUprxyprolii
3·-íetrkaaor2-D-oítylalrrlřny l-L-4-htluorypaoOii
3-mtrkaPtr-20D-mtttyroraařillL-tla1zldUii _
Příklad 12
Obdobně v případě, že se v příkladech 7 až 11 nahradí kyselina 3-acety1thio-2-mety1propanová kyselinou 3-acetylhhoppopaanovou nebo 2-acetylhhOppopaanovou, získaj se detiváty L-3,4-dehhydrorrlinu, D,L-3,4-dehhldrorrii-nu, L-3-hydroxyyrolinu, L-4-hydroxyprolinu a L-thiaz^l-idi^nu, přičemž reakce se provádí obdobným způsobem.
Příklad 13
Způsob výroby ř°c- [3- (№* -aceey 1-L-1 enylalanylthio) -2-D-InettlprooaanlУJ2L2prolinu
Rootok 41,5 mg №* -acetyl-L-íeny!alaninu v 0,5 ml retestnvaaného dlm^e:yl.lpи^l^mldu se zchladí v Rzni se suchým ledem a acetonem na te^otcu -20 °C. pak se k tomuto roztok přidá zchlazený roztok 35 mg 1,l'-karbonyldiimidazolu v 1,0 ml dimetyHormamidu. Roztok se míchá při teplotě -10 °C 2 hodiny a pak se přidá ke chladnému roztoku 48 mg 3-meekappo-2-D-reet1propraool--Lprolinu v 1 ml dimetyHormamidu, který byl n^i^^iral.zK^í^á^n N-etyimorfolinem. Reakční směs se míctá při ^^otě -1° °C jestě hodinu a pak se pomalu zahřeje na teplotu místno^i. Rooppoštědlo se o^s^ttramí za sníženého tlaku při teplotě 40 °C a k odparku se přidá etylacetát.
Směs se zchladí na ledové lázni a promyje se 0,1 N kyselinou chlorovodíkovou a pak třikrát nasyceným roztokem chloridu sodného. Organické rozpouštědlo se odstraní na rotačním odpaarovaai po vysušení bezvodým síranem horečnatým. Produkt se čistí chromatograaií na sloup^:i Sephadexu LH-20tm o rozměrech 1,2 x 95 cm, s!^oupec se vymývá ι^ρ^ιnolem. Hlavní frakce se slijí a rozpouštědlo se odpaaí za sníženého taku, iímž se získá 35,5 mg výsledného produutu. Tento produut je hommoennn při chromrtogrglii na tenké vrstvě při použití rozpouštědel 1, 2, 3 a 5. '
Příklady 14 až 21
V případě, že se v 13 nahradí №<*—icc ey Heny IiHí.í N^-aceuylglycппсг,
NW-lcetУlpyptlf>lieer, N^-acetsyltyrl>sinem, №-accПуНсо^ц^^^ № ^^tyl^uc^em n№-acc ey liaí-stici ппг m netai NX-aaett^1.valn^f^m a j:inik sn . postupujn způsobem podle případu 13, získaj sn ndáledduící sloučeniny:
Příklad Sloučenina №*- f 3- (N^acetykilyc1 Rhw) ч^гоИп №*- [3-(NN--letyУlL-tPyptlfylthlo)2--E)-retylrPlrarιilУ] -L-jdtoIAí №**- f3- -^-^meRyl^o^noyl] -L^nHn №°- f3- (^'№--^lCety-L-lillieш^c^Уit:hlo)2-D)-^m2ttylpPlp^r^noУl -L-prolíin
Ν°°-f3- (№ -a^etty-L-ieuo^y.t^h.Ll)-2-D-met1]pPOpanoly.] H-^oIíí
N*3*- f3-(№ -acceyl-L-hhltidytthlo)-2---nttylrrlplni)l1i-L-rr<llii №*-[3-(№ -lcetyl-L-vllylthlo)2--D-retylrPlralil11-L-prolii №°-[32(№ -lcetyl-L-lll.iylthlo)2--D-retyyrPlraanlУ]-L-jdpoI.í
Příklad 22
Obdobným způsobem je možno získat L-3,4-detlhУdooPPlhnlvc', D,L23,42dehh1dPlPrHnové, IJ-3-hydroxyppoliiOvé, L24-hydPOxypr(llinové a L-thilZllidilPvé deriváty tak, že se 3-merklpt(l-2-D-mreyУlrolPl(iyl--L-proin v případech 13 až 21 nahradí výslednými produkty z případů 3 až 12 a postupuje se způsobem podle příkladu 13.
Příklad 23
V případě, že se užijí N^-propanoylové, N^-butanoylové, N^-fenylacetylové nebo N^-^enylfirofianoy^vé deriváty L-Phe, Gly, L-Ala, L-Trp, L-Tyr, L-Ile, L-Leu, L-His a L-Val místo N -acetylových derivátů v příkladech 13 až 22 a provádí se způsob podle případu 13, získaií se odpoofídiící formylové, propanoylové, butanoylové, fenylacetylové a fenylprypanoylyvé deriváty.
Příklad 24
Způsob výroby №°-[з- (Neteře. butyyoxykarbynylfLffěnylll·lnylhhyo)-f-D-metylorУolnoyll -L -prolinu
Roztok 133 mg NOftěre.butylyχykarboyyll-L-fenylllaninu (N ΛfвyCfL-Phě) v 0,5 ml reděs.tiУovanéhУ UiletyfУrrmaliUt se zchladí v lázni se suchým ledem a acetonem na teplotu -20 °C. K tomuto roztoku se přidá chladný roztok 87 mg 1,lfklarbynyldiimidlzylu v 1,0 ml ^ιθΙυΗοιιιιι^. Roztok se mícM 2 hodiny při -10 °C a pak se přiclá к chladnému roztok 119,5 mg 3-meěkkl0oyf2--metelpooyonanУ-L-pooУinu v 1 ml dimeeylformamidu, který b.l nenUraizoován N-etyllorfolieel. Reakkení směs se neettalizuje N-etyllorfolieel. Pak se reakení směs míchá při -10 °C ještsě ^dinu naeež se ^mmlu nechá zteplat na tepotu místnooti. Rozpco^tědlo se odpojí za sn^eného t^aku při 40 °C a k oděrku se přidá etyl acetát. Směs se zchladí na ledové lázni a promyje se 0,1 N kyseliny chlorovodíkovou a pak třikrát nasyceným roztokem chloridu sodného. RGozpoutědlo se odpaří na rotačním odpařovači po vysušení bezvodným síranem hořečnatým. Produkt se čistí kapalinovou chromloyrrlfí při ^oodtí Sephadexu G~10tmi při rozměrech sloupe 1,2 x 95 ^, sloi^ec se vymývá siIsí tetrahydrofuranu a itopryplnolu v objemovém poměru 3:7. Hlavní frakce se slijí a rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku, čímž se získá 165 mg výsledného produktu. Tento produkt je při elektrooeréze na papíře homogenní při pH 5,0, stejné jako při chrymlloyralfí na tenké vrstvě při poo^i! rozpouštědla 1, 2 a 3.
P řík a a dy 25 až 32
Ot 04 04
V případě, že se užije místo N -Boc-Phe v případě 24 N -Boocglycinu, N -Boc-alannu, Nl:'-Boc-trl0tУflnt, N°-Bвc^tt^l^<^í^:jnu, Nα-^f^вУcfs^;lěш^:Lnu, NN-BвycIěucint, N^-Bbo^^^^íu nebo N -Boc-valinu a provádí se postup podle příkladu 24, získaií se náál_eduuící sloučeniny:
Příklad Sloučenina
N--- [3- (^°ff-ěeec.tullУolkkarbУnllglycllthyo)22---letl0proolnoyl]-L-orolin
N^- [3-(N^-terc.butyyχykaaroony1fLftrlotyfllthyo)-2-Ο-ιθtylproplnyyl] -L-prolin
27 N^-- [З- (NN-těrc.butllУXlkarboyil-L-ttlrУtlthyy)-2-D-llěУlpryp0liyll-L-poolii 28 N^-- [З- (N^-erc. buty l^oxyWtony 1-L- ^oleu^!_tHio) -2-D-met^^op^oy^ ^^r^^
N05- [3- Ш*°--егс. butyloxlklrboil 1L-lěш^^/lth:LУ) -2-Dfletllproolnoyl- ^^rolin
N*-- [3- (Neteře. buí:yloxykk^ooу11--]-у^^^etyl^o^noyl] ^^rolin №- [3- (Neteře. Outllyχykalboyil----allltyj.y) -2-Ο-ιι^lpro^nyy 1] ^^rolin
N^--[3- (NN-těrc.outllУxlklroУУil-L-lllillthyy)2f-lf-letlOpyypliУy 1] ^^rolin
Příklad 33
Obdobným způsobem je možno získat L-3,4-Uehylluoooo0iiové, L-3,4-dehhlluooooУiiové,
L^-hydrox^^li-nové, L-4-УlUroxyρrolirlOvé a L-tУίlzylUdinové deriváty tak, že se nahradí
3-τměrkaOoyf2f)-fltělpooooaoiУlL-fooУyi v příkladech 24 až 32 produkty z případů 3 až a provádí se způsob podle případu 24.
Příklad 34
Způsob výroby
Chladný roztok 2,06 g dicyklohexylkarbodiimidu v 10 ml dichlormetanu se přidá k roztoku 1,411 4 g cyklopentankarboxylove kyseliny v 5 ml dichlormetanu při teplotě -5 °C. Pak se přidá 4,28 g toluensuloonatové soH benzoolesteru L-fenylalaninu v 10 ml dimeeylformamiťm neutraHowanělu 1,36 ml Nť^lt^]Lmlf(^linu. Reakční směs se míchá při O °C hodinu a pak ještě 3 hodiny při teplotě mísSnnoSi. Dicyklohexylmočovina se odstraní filtrací a k hUrátu se přidá 50 ml e^^dtá^. Organická fáze se promývá do neutrální reakce, vysuší se beovodým' síranem horečnatým a filmuje. Rooppoutědlo se odpaří na rotačním odpařovaai. Odparek se nechá krystalizovat oe smís^i isopropanolu a hexanu, čímž se získá 2,35 g bHých k^stal-ů o bodu ^ní 88 až 89 °C.
Elemennární analýza krystalů:
vypočteno : C 75,19, H 7,17,
N 3,985 5 %, nalezeno: C 74,96, H 7,17, N 4,09 %.
Benzolester se odstraní h^ng^o^zou při potltití 2 g 10% palladia na aktivním uhří v absolutním alkoholu. Katalyzátor se oddělí fi-tra^cí a etanol se odstraní na rotačním odpaaooaři. Odparek se nechá krystalizovat z éteru a hexanu, čímž se získá 1,15 g bílých k^sta^ výsledného ^o^ktu o ^р»1^1 tání I07 až 108 °C.
Elemeenámí analýza krystalů:
vypočteno: C 68,94 H 7,33.3 N 5,36 %, zaLeonno: C 68,90 H 7,32 N 5,34 %.
Produkt je homogenní při nlnktrlfc)rézn na papíře při pH 1,9 i 5,0 a při chromatografi na tenké vrstvě při pobuřtí rozpouštědla 1, 2 a 3. Výsledný produkt je označován oc
N -cpc-L-Phe.
Příklad 35
Způsob výroby Na- [з-(lN-cykl(lpenzylkarboonl--Lfennlalazylthlo)22-D-mntylplpprzoyl] ~L-ptlLήu
Roztok 52,5 mg sloučeniny z příkaadu 34 v 0,5 ml rndnstilvvanéhl dimetlflormaoidu se zchladí v lázni ze suchého l^u a acetonu na -20 °C. К tomuto roztoku se přiclá chladný roztok 34 mg 1,1'-krrblzylěiioiěazllt v 0 1,0 ml dioetyflormaoiěu. Roztok se míchá 2 hodiny při Ii^o11 -10 °C a pak se smísí s chladným roztokem 45,6 mg 3-merkapto -2-D-mentlproppazll-LLppolizu v 1 ml ěioetyflormaoidu, neutrrlilvvaného nem. Reakční směs se míchá další hodinu při lnplltě -10 °C a pak se jDomalu zahřeje na tepotu оХзЬпо^. tooppetědlo se odpaří za sníženém tLlakzu při te^ot:.1 40 °C k odparku se přidá ntylrcntát. Směs se zchladí a promne se 0,1 N kyselinou chlorovodíkovou a pak třikrál nasyceným roztokem chloridu sodného. Rclppllttёdll se odpaří na rotačním odpařovači po vysušení bnovodým síranem hořečnatým. Produkt se čistí na sloupei Sepnadexu LH-2O10 o rozměru 1,2 x 95 sl^ltpec se vymývá isopropanolem. Hlavní frakce se slijí a rozpouštědlo se odpairí za sníženého tlaku, čímž se získá 60,5 mg výsledného produktu, který je homc)genní při chrnnorolgarfi na tenké vrstvě při poltití rozpouštědla 1, 2, 3 a 5.
Pík a a dy 36 až 43 *
V připadl, že se místo L-Phe soH v příkaadu 34 užije tllunzsullozátové sooi bezzooy242857 esteru glycinu, L-alaninu, L-tryptofanu, L-tyrosinu, L-isoleucinu, L-leucinu, L-histidinu nebo L-valinu, přičemž se postupuje způsobem podle příkladu 34 a 35, získají se následující sloučeniny:
Příklad
Sloučenina
N06- [З-(N^-cyklopentylkarbonylglycylthio)-2-D-metylpropanoy1]-L-prolin
N - £3- (N O^-cy klopen ty lkarbony 1-L-tryptofy lthio) -2-D-metylpropanoyl] -L-prolin №°-[з-(N^-cyklopentylkarbony1-L-tyrosylthio)-2-D-metylpropanoy1]-L-prolin №°- [з- (N^-cyklopentylkarbony 1-L-isoleucylthio) -2-D-metylpropanoylj -L-prolin
N^- [з-(N^-cyklopentylkarbony1-L-leucylthio)-2-D-metylpropanoy1] -L-prolin
N^- [3-(N^-cyklopentylkarbonyl-L-histidylthio)-2-D-metylpropanoyl] -L-prolin
N&- [з-(N^-cyklopentylkarbonyl-L-valylthio)-2-D-metylpropanoyl]-L-prolin
N^- [з-(N^-cyklopentylkarbonyl-L-alanylthio)-2-D-metylpropanoyl]-L-prolin
Příklad 34
Obdobným způsobem je možno získat L-3,4-dehydroprolinové, L-3,4-dehydroprolinové, L-3-hydroxyprolínové, L-4-hydroxyprolinové a L-thiazolidinové deriváty tak, že se užijí výsledné produkty z příkladů 3 až 12 místo 3-merkapto-2-D-metylpropanoyl-L-prolinu z příkladů 35 až 43 a provádí se způsob podle příkladu 35.
Příklad 35
Způsob výroby ΝΛ- (3-L-fenylalanylthio-2-D-metylpropanoyl)-L-prolinu
Produkt z příkladu 24 se zbaví ochranné skupiny tak, Že se míchá směs 30 mg produktu, 50 £11 anisolu a 200 yul bezvodé kyseliny trifluoroctové (TFA) při teplotě místnosti hodinu. Anisol a TFA se odstraní za sníženého tlaku při teplotě 35 °C a odparek se rozetře s bezvodým éterem. Bílý odparek se čistí chromatografií na sloupci Sephadexu G-10tm o rozměru 1,2 x 95 cm a sloupec se vymývá 5% kyselinou octovou. Hlavní frakce se slijí a lyofilizují, čímž se získá 17,5 mg výsledné sloučeniny. Tento produkt je homogenní při elektroforéze na papíře při pH 1,9 a 5,0 a při chromatografii na tenké vrstvě při použití rozpouštědla 4 a 5.
Příklad | у 46 až 53 |
Způsobem | podle příkladu 45 je možno zbavit ochranných skupin výsledné produkty |
z příkladů 25 až 32, čímž se získají následující sloučeniny:
Příklad | Sloučenina |
46 | Να- (3-glycylthio-2-D-metylpropanoyl)-L-prolin |
47 | N -(3-L-tryptofylthio-2-D-metylpropanoyl)-L-prolin |
48 | №- (3-L-tyrosylthio-2-D-metylpropanoyl) -L-prolin |
49 | N -(3-L-isoleucylthio-2-D-metylpropanoyl)-L-prolin |
50 51 | ΝΛ- (3-L-leucylthio-2-D-metylpropanoyl)-L-prolin N0*’- (3-L-histidylthio-2-D-metylpropanoyl) -L-prolin |
52 | №*- (3-L-valylthio-2-D-metylpropanoyl)-L-prolin |
53 | N -(3-L-alanylthio-2-metylpropanoy1)-L-prolin |
Příklad | 54 |
Obdobným způsobem je možno získat L-3,4-dehydroprolinové, D,L-3,4-dehydroprolinové,
L-3-hydroxyprolinové, L-4-hydroxyprolinové a L-thiazolidinové deriváty tak, že se zbaví ochranné skupiny sloučeniny z příkladu 33. Tato reakce se provádí v podstatě způsobem podle příkladu 45.
Příklad 55
Způsob výroby N-hydroxysukcinimidesteru kyseliny cyklopentankarboxylové
Chladný roztok 11,4 g ěiiykluhnxylCarOuěiimiěu v dimetyfoommamudu se po kapkách přidá ke s^^s^s. 5,71 g iyklupnttankαrOoxyluvé С^сП^у a 5,76 g N-hydroxysukcinimidu v dimnyklorm^amidk při te^oté 0 °C. Reakční směs se při této temo-té míchá 30 minut a pak ješté pfes noc při 4 °C. Krystalická dicykuohnxylmuCovita se odcddí fi-ira^cí a sraženina se promyje nУylαintánem. Filtráty se slijí, rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku a odparek se nechá krystalizovat ze směsi benzenu a hexanu, čími se získá 5,77 g oílýih ^^^lů o ynpluyě Ыт 72,5 až 73 °C. Absorjační s^Jdirum v indč^venném světle v chlorooormu je typické pro tání 72,5 až 73
N-hydrouχsukkintmiddsUery.
vypočteno: C 56,86 nalezeno: C 56,77
H 6,20
H 6,07
N 6,63 %,
N 6,66 %.
Příklad 56
Způsob výroby N^-cyk:^ppnnylkar-boo^-N^-erc .
Roztok 1,231 6 g N -terc.butyluxykarboutl-L-lyuitk a 420 mg hydrogeenkhičitanu sodného v 10 ml vody a 5 ml tetrahydrofuranu se zchladí na ledové lázni za stálého míchání. K roztoku se přidá chladný roztok 1,19 g produktu z případu 55 v ' 10 ml tetrahydrofuranu. ^opooátsědlo se odpaíí na rotacím odpařovači při teplot^ě 35 °C po mícMní reakční směsi přes noc při teplotě místnooSi. Pak se k reakCní směsi přidá 20 ml vody a pH se upraví na 9 pevných hydrogennUhiCУαteem sodným. Vodná fáze se třikrát extrahuje etylacetáeem a organická fáze se odloží. Vodný roztok se zchladí na ledové lázni a pak se okysseí na pH 2 přidáváním 1 N kyseliny chlorovodíkové za přítomnt)oui etylacetátu. Organická fáze se dvakrát promyje ledovou vodou a pak jettě dvakrát nasyceným roztokem chloridu sodného. Organický roztok se vysuší bezvodým síranem hořečnatým a pak se zfiltruje. Rooppiiutědlo se odpaH na vat ze smmsi éteru a 104,5 ai 105,5 °( hexanu čími se rotaCním odpařovači a odparek se nechá krystali-zozíuká 1,135 g bílých krystalů o teplotě tání
C.
Elemeenární analýza:
vypočteno: C nalezeno: C
59,63
59,74
H 8,83
H 8,85
N 8,18
N 8,24 pouuití elektroforézy na papíře při pH 1 a pH 5,0 a při je homogenní při
Produkt ppiiuití chroImayuenαie na tenké vrstvě s rozpouštědly 1, 2 a 3.
Příklad 57 Způsob výroby N^^hh^c^i:¢^u^χ^y^ί^uccl^:im.d^í^u:eru -L-lysinu
NΛ-cykl^ope^t:ylkarbo^t^l-N - t^erc . butyloxykarbony 1Rpztok 1,027 g produkte z příkladu ihluridk se zchladí na tepotu -5 °C. K roztok 680 mg ěiiyCluhnxylkаoOoěiamidu v 5 ml menykentěcihpuiěu. Reakční směs se míchá při m^ot1 0 °C po do^ 30 minut a pac při te^ot1 4 °C přes noc. Krystalická dicykoohexymočovina se oddělí fikncí a promyje nУylαcnyáeem. Filtráty se slijí, dvakrát se promyjí 1 N hydrogentlUhiCiαteem sodným, dvakrát vodou a nakonec roztokem chloridu sodného. Organická fáze se vysuší bezvodým síranem horečnatým, zfilmuje se a rozpouštědlo se odpaaí na rotačním uěpaacvali. Odparek se nechá krystalizovat z iso56 a 346 mg N-hydroxysukcinimidu v 10 ml mej^J.roztoto se přidá za sálelio míhání chladí propanolu, čímž se získá 0,844 g bílých krystalů o teplotě tání 140,5 °C. Absorpční spektrum v inračeerenném světle v chloroOormu je typické pro N-hydrooyysUkCnnmideeSery.
Elemeenární analýza:
vypočteno: C 57,39 H 7,57 N 9,56 %, nalezeno: C 57,10 H 7,57 N 9,61 %.
Příklad 58
Ct £
Způsob výroby N -cyklopentylkarbonyl-N -terc.butyloxykarboonl-L-iysyl-L-fenylalaninu
Rootok 220 mg produktu z příkaadu 57 ve 2 ml dioxaou se po kapkách přidá ke směěi 99 L mg L-lerylalaninu a 51 mg hydrogeeuuiičitanu sodného ve smměi 2 ml vody a 1 ml dimetyioormamidu. Reakční směs se míchá při teplotě místnooti přes noc, načež se dioxan odstraní na rotacím odpařov<ači při te^otě 35 °C. K reatání sméěi se přidá 10 ml etylacetátu, směs se zchladí, okysseí na pH 2 přidáním 0,1 N chlorovodíkové kyseainy a vodný roztok se odloží. Organická fáze se promyje ledovou vodou, roztokem nasyceného chloridu sodného a pak se vysuší bezvodým síranem hořečnatým. Rozppoutědlo se odpaří na rotačním odpaiovači a odparek se nechá krystalizovat ze síísí éteru a petroléteru o teplotě varu 30 až 60 °C, čímž se získ^á 95 mg pevné bílé látky o teplotě tání 90 až 92 °C. Produkt je homDc^e^r^r^jf při elektroforčíze na papíře při pH 1,9 a 5,0 a při chromatografii na tenké vrstvě při pouuití rozpouštědel 1, 2, 3 a 4.
Elemennární analýza:
vypočteno: C 63,78 H 8,03 N 8,58 %, nalezeno: C 63,40 H 8,07 N 8,34 %.
PPíklad 59 Způsob výro^ N<X- [З- (NN°cyklopunnnlkarrюbur-N--tere.CutUlouχkaraobur-L1“lyssl--Lfnnnl· alanylthio)-2-D-meeylprupannu1]-L-prulinu
Rootok 73,5 mg produktu z příkladu 58 v 0,5 ml· rndnstiUrranélo dίretyf0ormrridu se zchlaď v lázni, se suchým ledem a acetonem při ^plotě -20 °C. K roztoku se přiclá chladný roztok 26 mg 1,1'-karbonnldiiridazulu v 1,0 ml di^^^tLyi-orm^a^^du. Rootok se míchá 2 hodiny při t.eplotě -10 °C a pak se smísí s hladným roz'^(^k^(^m 36 mg 3-г^п)^^^г^1^(^-2-П-ггПуlpropaanol-LLprolinu v 1 ml dimettyJ-oom^amidu, n^tra^o^aného И^Ьу^сг^^^^ Reakční směs se míchá při te^otě -10 °C jettě hodinu a pak se nechá ^malu zteplat na tep]otu mís^oosi. RouppuUtёdlu se odpaří za soleného tlaku při teplotě 40 °C a k odparku se přidá etylacetát. Směs se zchladí ve sísí. vody a ledové drti a promyje se 1 N roztokem k^í^e^i-i^ny citrónové a pak třikrát nasyceným roztokem chloridu sodného. Roupouutёdlu se odpaaí na rotačním odpařovači po vysušení bezv-odým síranem horečnatým Produkt se čistí chrorn^o^a^í na slou^i Sephato LH-20tm o r^o2m^:mch 1,2 x 95 ^, sloupec se vymývá smě^E^zí tetrahydrofuranu a isopropanolu v objemovém poměru 3:7. Hlavní frakce se slijí a rozpouštědlo se odpaaí za sníženého taaku, čímž se získá výsledný ^o^kt, který je možno zkráceoě ožnout jako N^^HN^c^-N^-Boc-LLy s-Plnethw) -2-D-meeylppouraonUl--L-poUin.
Příklad 60 Způsob výroby N (NN--clk(^urn0r'híkrbbUJ^r.l]^1 L-l^lyl -L -feo^;Lrl^rnylt^li0з-2-D^-retl]^rr:urm^o^ol]-L-proliou £
Slkupioa N -Boc se odstraní z lysinu tak, že se míchá směs 30 mg produktu z příkaadu s 50 /11 anisolu a 200 /11 bez^vódé kyseliny trifluoroctové při teplotě místnosti hodinu. Anisol a kyselina trifluoroctová se odstraní za sníženého tlaku při teplotě 35 °C a odparek se rozetře s bezvodým éterem. Odparek se čistí chromatografii na sloupci Sephadexu G-10tm o rozměrech 1,2 x 95 cm, sloupec se vymývá 5% kyselinou octovou. Hlavní frakce se slijí a lyofilizují, čímž se získá výsledný produkt, který je možno zkráceně označit N*-[з—(N^-cpc-L-Lys-L-Phe-thio)-2-D-metylpropanoyl]-L-prolin.
Příklady 61 až 68
V případě, že se užije glycin, L-alanin, L-traptofan, L-tyrosin, L-isoleucin, L-leucin, L-histidin nebo L-valin místo L-fenylalaninu v příkladu 58 a provádí se způsob podle příkladů 58, 59 a 60, je možno získat následující sloučeniny:
Příklad Sloučenina
N6*- [3-(N*-суklopentylkarbony1-L-lysylglycylthio)-2-D-metylpropanoyl]-L-prolin
N -[3-(N -cyklopentylkarbonyl-L-lysyl-L-tryptofylthio)-2-D-metylpropanoyl] -L-prolin
N -[3-(N -cyklopentylkarbonyl-L-lysyl-L-tyrosylthio)-2-D-metylpropanoyl]-L-prolin ř/*- [3-(N^-cyklopentylkarbony1-L-lysy1-L-isoleucylthio)-2-D-metylpropanoyl]-L-prolin
N -[3-(N -cyklopentylkarbonyl-L-lysyl-L-leucylthio)-2-D-metylpropanoyl]-L-prolin №*-[3-(N -cyklopentylkarbonyl-L-lysyl-L-histidylthio)-2-D-metylpropanoyl]-L-
-prolin
N -[3-(N -cyklopentylkarbonyl-L-lysyl-L-valylthio)-2-D-metylpropanoyl]-L-
-prolin
N -[3-(N*-cyklopentylkarbonyl-L-lysyl-L-alanylthio)-2-D-metylpropanoyl]-L-prolin
Příklad 69
Obdobným způsobem je možno získat L-3,4-dehydroprolinové, D, L-3,4-dehydroprolinové, L-3-hydroxyprolinové, L-4-hydroxyprolinové a L-thiazolidinové deriváty, tak, že se užijí produkty z příkladů 3 až 12 místo 3-merkapto-2-D-metylpropanoyl-L-prolinu v příkladech 59 a 61 až 68, přičemž se provádí způsob podle příkladů 59 a 60.
Příklad 70
V případě, že se užije kyseliny pyro-L-glutamové místo kyseliny cyklopentakarboxylové v příkladu 55 a provádí se způsob podle příkladů 55 až 57, získá se N-hydroxysukcinimidesber N°^-pyro-L-glutamyl-N^-terč.butyloxykarbonyl-L-lysinu. V případě, že oc f se tímto způsobem nahradí N -cpc-N -Boc-L-Lys-N-hydroxysukcinimidester z příkladu 58 a provádí se způsob podle příkladů 58 a 59, získají se pyro-L-glutamylové deriváty.
Příklad 71
Způsob výroby benzylesteru pyro-L-glutamyl-L-fenylalaninu
Roztok 0,52 g kyseliny pyro-L-glutamové, 1,72 g L-fenylalaninbenzylesteru kyseliny toluensulfonové a 0,55 ml N-etylmorfoiinu v 5 ml dimetylformamidu a 20 ml dichlormetanu se zchladí za stálého míchání na ledové lázni. К reakční směsi se pak přidá roztok 0,826 g dicyklohexylkarbodiimidu ve 2 ml dichlormetanu a reakční směs se míchá na lázni z vody a ledové drti hodinu, načež se ještě míchá přes noc při teplotě místnosti. Dicyklohexylmočovina se oddělí filtrací, produkt se promyje etylacetátem. Filtráty se slijí a rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku na rotačním odpařovači při teplotě 40 °C. К odparku se přidá 25 ml etylacetátu a organický roztok se promývá do neutrální reakce. Organická fáze se vysuší bezvodým síranem hořečnatým, načež se zfiltruje a rozpouštědlo se odpaří na.rotačním odpařovači. Získaný materiál se nechá krystalizovat ze směsi isopropanolu a éteru, čímž se získá 1,01 g bílých jehličkovitých krystalů o teplotě tání
103 až 104 °C. Tento materiál je homogenní při chromatografií na tenké vrstvě i při elektroforéze. | ||
Elementární analýza: | ||
vypočteno: C 68,84 | H 6,05 | N 7,64 %, |
nalezeno C 68,58 | H 6,05 | N 7,56 %. |
Příklad 72
Způsob výroby pyro-L-glutamyl-L-fenylalaninu
Benzoylesterová ochranná skupina v 1,0 g sloučeniny z příkladu 71 se odstraní katalytickou hydrogenolýzou působením 150 mg 10% (hmotnostní) paladia na aktivním uhlí v 0,15 ml ledové kyseliny octové a 15 ml etanolu při tlaku vodíku 0,14 MPa při teplotě místnosti přes noc. Katalyzátor se oddělí filtrací a rozpouštědlo se odpaří na rotačním odpařovači. Materiál se nechá krystalizovat z isopropanolu a benzenu, čímž se získá 402 mg bílých krystalů o teplotě tání 147 až 149 °C. Materiál je homogenní při elektroforéze při pH 1,9 i 5,0 a při chromatografií na tenké vrstvě při použití rozpouštědla 1, 2 a 3.
Elementární analýza:
vypočteno: C 6,86 H 5,84 N 10,14 %, nalezeno: C 60,37 H 5,85 N 9,98 %.
Příklad 73
Způsob výroby řf*-[3-(pyro-L-glutamyl-L-fenylalanylthio)-2-D-metylpropanoyl]-L-prolinu
Roztok 87 mg 1,1'-karbonyldiimidazolu v 1,0 ml dimetylformamidu se přidá к roztoku 139 mg produktu z příkladu 72 v 0,5 ml dimetylformamidu při teplotě -15 °C. Reakční směs se míchá při teplotě -10 °C hodinu, načež se přidá směs 119,5 mg 3-merkapto-2-D-metylpropanoyl-L-prolinu a 0,072 ml N-etylmorfolinu v 1 ml dimetylformamidu. Reakční směs se míchá ještě hodinu při teplotě -10 °C a pak se nechá pomalu zteplat na teplotu místnosti. Dimetylformamid se odstraní za sníženého tlaku na rotačním odpařovači při teplotě 40 °C, načež se přidá 7 ml etylacetátu a 2 ml 1 N roztoku kyseliny citrónové. Organická fáze se dvakrát promyje 1 N roztokem kyseliny citrónové a dvakrát nasyceným roztokem chloridu sodného. Organická fáze se vysuší bezvodým síranem horečnatým a pak se zfiltruje. Rozpouštědlo se odstraní na rotačním odpařovači. Odparek se čistí na sloupci Sephadexu G-25tm o rozměre 1,2 x 99 cm při použití směsi n-butanolu, kyseliny octové a vody v objemovém poměru 4:1:5. Produkt byl homogenní při chromatografií na tenké vrstvě při použití rozpouštědel 1, 2 a 3 a při elektroforéze při pH 5,0.
Příklad 74
V případě, že se nahradí pyro-L-glutamová kyselina N ,N-bis-terc.butyloxykarbonyl-L-lysinem (dále bis-Boc-L-Lys) nebo N°í,N,N-triadamantyloxykarbonyl-L-argininem (dále tri-Adoc-L-arginin) a provádí se postup podle příkladu 71, získají se odpovídající deriváty bis-Boc-L-Lys nebo tri-Adoc-L-Arg-L-Phe-benzylešteru. Bis-Boc-L-Lys se obchodně dodává, tri-Adoc-L-Arg je možno získat způsobem podle publikace Jager, G. a Geiger R.,
Chem. Ber. 103, 1 727 (1970).
Příklad 75
V případě, že se užijí benzzpesteop G'.p, ALa, Trp, Tpr, Iíe, Leu, His nebp Val a •ppovádí se ppstup ppdle pří^kiač^r^ú 71 a 74, získají se odproíírlící rУ°ObL-gauaamdaové derivátp a derivátp eis-BocbL-Lds a t^rbA^c^c^i-^Lb^Aog. Benzypesteop jspu obcУodně dpdávány. Bennzpesteopvé pcyoanné skupinp se pak pdstoani způspbem ppdle případu 72.
Příklad 76
Slpučeniod z příkaaclů 72, 74 a 75 se uvedpu v oeakci se slpučeni^r^am. z příkladů 3 až 12, přččemž se popvádí postup podle příkaadu 73, čímž se získaj odpooíírlící derivátp eis-BoCbL-Lps a r^rbA^ť^c^i-^L-^Aog. Uvedené pcyoanné skupinp se pak pdstoani půspbením kpselinp trffal°liclové v anisdu.
V případě, že se popvádí zpúspbp podle případů 2 až 12 a 71 až 76, je mežrn získat skupinu thioieseelOvýiУ sapučenin obecnéУo vzpoce
II
R-A-S- (CH^-CH-C^ R1 kde R1 znamená L-arginyl, L-lpspl nebp ' pyrp-L-glutamyl, znamená L-fenylalanyl, glpiyl, L-alanyl, Ь-ЪоррЪ^у!, L-tpopsyl, L-ispleucyl, L-leucyl, L-histirpl nebp L-vaayl, jejichž lllalamΐnoskupina se váže amidovou vazbpu na R, znamená atom vpdíku nebp meepl, ' R2 znamená L-prolin,
L-3,4-dehydroprolin, D,L-3,4-dehydropr°lin, L-3-hydroxyprolin,
L-4-hydroxyprolin nebi L-thiazolidin, jejichž iminpskupina se váže imidpvpu vazbpu na skupinu zna^ená celé číslo 0 neto 1 přičemž v že R.. je mm^l, je n oOvnp 0.
I 1 íkl a d 77
Způsob výopbp №- ^-(N^-beezoyldL-try^o^lt^o )-2-D-meey lp°ppaaopd]- L-pro linu
Roztpk 62 mg N -eenzzod-L--tgprtoaanu v 0,5 m. °edestilovanéУo dieetpfO°empmidu se zchaadí v lázni s acetenem a sucyým ledem na b20 °C. К tamutp opztpku se při^clá cyladný ^z^k 35 mg 1,l-kaaebondldiimrdlzolu v 1,0 ml dimetplOormlmidu. Rzztpk se míchá 2 izdinp při tepLotě bl0 °C a pak se přidá ke zcylazenému ^zMu 48 mg ^merkapto-^-D-rnee^b rr<cpaanod-L-prolinu v 1 ml dimetplloreamidu,neutollicovanéУo N-etpleogfodinee. Reakční směs se mícyá při rer]orě -10 °C ještě b^c^jÍnu a pak se necyá poeelu zteplat na te^tu eístnolti. Rolproutědlp se pdpaří za sníženéyp tlaku při rerlorě 40 °C a к pdparku se přidá etdllietát. Směs se z^J^iadjí v ledpvé lázni a popmpje se 0,1 N opztokem kpselinp cУlorovodíkové a pak ještě třikrát naspceným opztokem ihlo°idu sodnéУo. Rolpoputёdlp se odpalí na oplačním pdpařovaČi pp vpsušení bezvodýe síranem Уpřečnprým. se čistí kppalinovou chromeaeogaafí Sepyadeyu LH-20tm p nzměre^ 1,2 y 95 sl^pupec se vpmývá ispproplnplem. Hlavní frakce se slijí a oozrouštědlo se ddpaaí za ·sníženéyp daku, čímž se získá 60,5 mg výslednéip popduktu v pěnooité fprmě. Tentp popdukt je ipmogenní při cyro-mtoogalfi na tenké vostvě při p^v^užt^jí oozrouštědel 1,2, 3 a 5.
P ř í k 1 ad y 78 až 85
Oí. Qíf v případě, ze se užije N -benzoyl-L-tyrosin, N -benzoyl-L-histidin, N -benzoylfenylalanin, N^-beezo^glycin, -N”-bennoy1-L-alanín, N^-bbezo^-I—itoleucin, ^-benno0!L-Lleucin nebo f^-^enoyl-L-Lvlin místo N°°-bbezoyyyL-L.ryptofanu v příkaadu 77 a provádí se způsob podle příkladu 77, je možno získat násteddjící sloučeniny:
Příklad Sloučenina
N°°-f3-(N Lbenzoy1-L-tyrotyltiio)22-D-metylprypalnylj-L-prolin nC°“[-— (N^-bbnnn^-L—h^tidyl-t^y) L2-DLmmtylpropanoyl] “L-joroHn [3-(NN-bbtzoylfftn1alanyltiio)22-D-metylpropanyyl] «--prolin
N-”-3“ (N “brnno^-g^c^t^o) L^DLmmeylpropanoyl] “--prolin 82 N°C-[--NQ6-benzoy1-L-al lnn1tiio)-2-D-metylprypaanyl1 -L-proJ-i-n 83 N^- [-l (№°1Ьтгоу1-Ь“ i ·leucylt^o) ^-D^eeylpropanyo1j “--^rolin δ4 [з“ (N^benzo1 1^L-ilew^j^1Lt^iÍ^o) -2-^οο^ lpoopanoyl] --^rolin
N*- ^-(-1-btnzoy1-L“valyltiio) ^-D-mety^rojDaan^J-L-^rolin
Pří k 1 ad 86 obdobným opůtobem je možno zítkat --3,4-dbhiydropoOinové, D,L--,4-dehiddooroУlnové, bL-Liidrox^rolinové, L-4Liydroxyprolinové a L-tiilzylidZnoré deriváty tak, že te u^žijí tloučeniny o příkladů 3 až 12 místo --ret0aprroI2D-Lr ty1prooraoy l-L-->roУinu v případech 77 až 85 a provádí se opůsob podle případu 77.
Dd^í možný opůtob výroby NN-[-- (--”benzoo1ftnyllllnylthioI2L-D-rtrylprorlnoyl] ---prolinu je poptán v následuuícíci dvou případech.
Příklad 87 ού
Způsob výroby N-hydroxysuUcCnimidesttou N LbeInzoy1ftnylalaninu
1,347 g bbnnoylfenyla-aninu a 0,576 g N-hydroxysukcinimidu se smísí te směsí tetiaiydrofuranu a diretyfУormarídu v objemovém poměru 1:1, Směs se inkubuje přes noc pi ' tepLot^ě 4 °C za příOomoyti 1,133 g dicyklohexylkaobodiimidu.
Reakční směs se г^ТхЪ^гuje a roopouŠtědlo se odpairí oa sním^o tkku při .e^o.ě 30 °C. Získá se bílý odparek, který se nechá překryt^-ont oe směěi tetrahydrofuranu a itopropyla-kohoJe, čímž se ve výtěžku 65,2 % oítká 1,194 g bílé pevné látky o teplotě tání I56 až 157 °C. Absorpční spektrum v ^^č^renném světle v c^oro^rmu má maxima při 3 44G cm-1 pro skupinu -nh-, při 1 818 cm 1, 1 790 cm 1 a 1 744 cm 1 pro N-karboxysukciniridorou skupinu a při 1 669 cm”1 pro N-bmzoylovou skupinu.
Příklad 88
Způsob výrob1 ν’-- [3-(N<*Lbenzzo1fenn1allny1tiiУ)-2-DLrrtylrrypranyl1-L-prolinu
Reakční směs, obsa^^ící 93,3 mg 2-D-mrey1--2rberkprt)oroyrnoyУ-L-LroУinu, 62 mg 1-hydroxybbenonitriaooyu (HOBtt , 165 mg N^I^ř^r^noy1í^<^i^n^1<^:lanili^NL^hydryxysi^)^í^i.nimi.dei^1teru, připaavené o^sobem podye 87 se ochyadí na l^ni při .e^o^ 0 °C, načež se přidá ještě 0,054 4 ml N^71^001011^. Reakční směs se míchá 3 hodiny na ledové l^ni a pak se i-nkubuje j^es noc při t^lot^ 4 °C, načež se nechá stát 20 hodin při teplotě místnnyti. Reakce se ukončí přidáním 25 yil — N-Limetel-I ,3“po^opandiam.nu, pak se směs míchá ještě 2 hodiny a ke smčěi se přidá Гг111уг1г^г, načež se směs poomývá extrakcí chladným rootokem kyseliny chlorovodíkové o konceenraci 0,1 N a pak dvakrát vodou a třikrátnasyceným lootokem chloridu sodného. Směs se vysuší b^v-odým síranem horečnatým a ofiltrnje.
Rozppoštědlo se za sníženého offku na rotačním odpařovaa!, Čímž čirý olejovitý produkt.
se získá 1,2 x 96 cm.
a 31 se
Produkt se čistí ctooomrfo^a^í na sloupe;! Sephadexu LH~2ot’m o rozměru Sloupec se vymývá tetaahydrofraanem a oddeííafí se frakce po 2,5 ml. Frakce slijí, rozpouštědlo se odpafí ve vakuu, čímž se získá 110 mg produktu. K tomuto ma^eřá^ se přidá bezvodý éter, čímž dojde k vysrážení bílého pryžovitého ma^eřá^, který se rozpuusí v Oetrahydrofι:ιrf nu a suší v proudu dusíku, načež se suší ještě přes noc kysličníkem fosfoeečným. Tímto způsobem se získá 82 mg pěnooitého produktu.
Frakce 29, 32 a 33 se znovu chromaáografují za stejných podmínek. Frakce 33 až 36 z této druhé chromaaoorraie se slijí a zpracují stejným způsobem, čímž se získá ještě 51 mg výsledného produktu, takže celkový výtěžek je 71 %·
Daftí možný způsob výroby NW-[2-(N ^enzoyd^eyla^r^lthio) propaac^lj-L-3 ;4-dehydroprolinu a příbuzných derivátů je popsán v následuuících dvou příkladech.
Příklad 89
Způsob výroby k^í^e^l.i^ny 2-benc:zol0enylflf nylthópropa anové
Roztok ben^o^enyla^ninu ve 30 ml redestioovaného . dimety00ormfmidu' se zchladí na -20 °C. Pak se přidá po ka^á^ za enerůck^o mícMní roztok l,l'-k.vrbonyl·diimidvzolu v 10 ml rndnstioovaného dimetvl0ommvm:.du, te^ota nesmí ^es^nout -I4 °C. Po skončeném jídávání se roztok mí^á 2 hodiny při teplotě -l0 °C, načnž se přidá za stiálě^o míchání při teplot^ě 10 °C v ^ůb^u 1 h<odiny kyselina D,L-tt0omléčná v ondnloiooaaéém dLm^et^I.. formamidu, předem neutraMo^aném ^de^to^aným N-etylmorOoineem. Roztok se pak pomalu zahřeje na teplotu místnoosi a přidá se stejný objem etyl^acetátu. Směs se zchladí a aeeft·afizfje koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou v nasyceném roztoku chloridu sodného. Organická fáze se třikrát promyje nasyceným roztokem chloridu sodného, tj· 5 objemy nasyceného chloridu sodného s 1 objemem vody. V některých případech se získá třívrstevný systém. V tomto případě se odebere střední vrstva a smísí se fází. Organická fáze se vysuší bezvodým síranem horečnatým, zfiltruje a odpaaí na rotačním odpařoval. Vodná fáze a středí fáze se okyss^í při te^otě 0 °C kyselinou chlorovodíkovou na pH 2 a třikrát se extrahuje nOylacntáeem· Organická fáze se poomyje nasyceným chlorddem sodným a vysuší bezvodým síranem horečnatým, pak se zfiltruje a odpailí na rotačním odpařovaai, čímž se získá čirá olejovitá kappaina.
spodní vodnou koncentrovanou
Příklad 90 Způsob onroby N0¢-[2-(NOC-bencoyllL·-fenalPlanalttiopropρaaylj-L-3,4·-dehhddoppolhau
213 mg (mol) Boc-L-3,4-dehtddoppo0iaf se zbaví ochranné skupiny působením 1 ml bezvodé kyseliny ti^ful^oorocto^v^é po dobu 1 hodiny. Přidafí se 3 ml bezvodého etyléteou v rozpouštělo· se odpaří na rotačním odpařovači při -to^^ě 30 °C. Odparek se třikrát promyje éterem v pvk se vysuší hydroxidem sodným ve vakuu. Roztok 358 mg (1 mmol) produktu z příkfadu 89 ve 3 ml т^Б^^ааис^ dhmetyfroomvmidu se zchlaď nv -20 °C v lázni se suchým ledem v acetonem. Pvk se po kapkách přidá roztok 171 mg (1,05 molu) l,l'-frrbonyldiiridazrlf v 1 ml оп^ЮПотaného dimetyioormvmidu, přičemž teplota makání soOěi se udmuje v rozmezí -10 až -15 °C. Reakční směs se 2 hodiny mícM, na^ se přiclá roztok.L-3,4-deetddoprplrnatiffuorfon0á0f ve 2 ml dhmetyf0ormfmidu, aeutrflZroaaaéhr trettylomneem. Reakční směs se pommlu zahřeje nv teplotu míslaorli. Rozppoutědlo se odpaaí . nv rotačním od^řovači ve vakuu při 35 °C. Odparek se roziou^í v 10 ol ^у^^t^át^u v 2 ol vody. Směs se okysel 1 N kyselinou chlrro>vrdíkroru na pH 2 při ^eplot^ě 0 °C, organická fáze se odddlí v vodná fáze se třikrát extrahuje 5 ol etllacetátf.
Organické fáze se slijí a promyjí dvakrát vodou, třikrát nasyceným chlorddem sodným a pak se odbarví aktivním uhlím. Pak se organická fáze vysuší bezvodým síranem hořečnatým a zfiltuuje. Filtrát se odpaří dosucha na rotačním odpařovači, čímž se získá 366 mg olejrvitéhr produktu. Tento produkt se čistí ^γοι№1ο^&13.ϊ na Sephadexu LH-2otnl o rozměru 1,2 x 98 cm v meeanolu, sloupec se vymývá metanolem. Frakce o obsahu 150 kapek (2,9 ml) se rdeeííají, žádaná sloučenina je obsažena ve frakcích 24 až 29. Rozpooštědlr se odpaaí na rotačním odpařovaH.
jak je možno prokázat na tenké vrstvě při poruití systémů rozpouštědel 2 a 3.
DdIší čistění se provádí fouhou chrombčorgalfí na Sephadexu LH-20tn, druhý slou^c je v ilOoropčnolu a vymývá se isrprrpaioleb, hlavní frakce se slijí a rozpouštědlo se odpaří na rotačním обра^уа^. Produkt má čistotu přibližně 95 %, ^γοι^Ιο^ηΙ^
Příklad schopnost různých svrchu získaných sloučenin in vitro byla měřena způsobem podle příkaadu 1. Enzym byl připraven z lědské moOi způsobem podle publikace Ryan J. W. a další, Tissue and Ceei 10, 555 (1978). V tabulce 1 jsou pro různé enzymu za než K .
m
Inhibiční sloučeniny. Hodnota Ι^θ je koncentrace inhibitoru, nutná k standardních podmínek v systému, který obsahuje v znázorněny hodnoty I5Q vyvolání 50% inhibice m^nožst^jí nižším
Sloučenina z příkladu I5Q (M)
13 | 2,6 χ 10~8 -8 |
24 | 3,4 x 10 8 -9 |
25 | 7,5 x 10 9 |
45 | 8,8 x 10-9 -8 |
59 | 2,5 x 10 8 -8 |
60 | . 1,5 x 10 8 -9 |
77 | 9,4 x 10 9 ~8 |
80 | 2,5 x 10 8 -9 |
81 | . 7,5 X 10 у |
90 (racemát) | -9 3 x 10 9 |
Příklad 92
Sseooální účinnost pro různé sloučeniny
Krysy o hmOnnosi 210 až 290 g byly udržovány na lačno přes noc a pak byly anestetzoovány iitrnperitoieálií injekcí penioOíčrítčlu v dávce 50 až 60 m^ikg. Byla provedena tracheoltobie a zvířata byla opatřena kanylou a bylo zavedeno meehaaiické dýchání. Do stehenní žíly byla zavedena kanyla pro injekci angiotenlinu I, druhá kanyla byla zavedena do krkavice pro přímé mmření tepenného taku. ·Stehenní žilou bylo vstříknu^ 1 000 jednotek heparinu k zábraně sraženiny. Krevní tlak byl měřen elektricky v souvislosti s po^iratem. ZvířaSůb bylo podáno 160 až 400 ng/kg <angionenoiiu I ve 20 pl 0,9% chloridu sodného. Jde o m^nOžst^:í angirnenoinu I, které stačí ke zvýšení tuláku o 27 až 50 mm Hg. Jakmile bylo dosaženo tohoto výsledku, bylo žaludeční sondou podáno v dávce 5,5 až 23 ^jmbOů/kg sloučenina podle vynálezu v roztoku v 0,15 ml vody s 10Д11 1 N hydrogenuhhičilaiu sodného. V různých intervalech byl měřen vliv dávky 160 až 400 ng/kg angiotenzinu I na průměrný tepenný tlak. Výsledky jsou uvedeny v tabulce 2. Dávka sloučeniny je uvedena v závorce za číseem sloučeniny. NNaPíklad údaj 13 (13,6) znamená, že bylo perorálně podáno 13 ^/umol/kg sloučeniny z příkaadu 3. Čas v minutách po p^e^rSlním podáni této sloučeniny je uveden v závorkách za údajem % konzoly.
d л: ι—I
Vliv angiotenzinu I v dávce 160 až 400 ng/kg na krevní tlak v % kontrol (minuty po perorálním podání)
o řcol ПЙ1 ’ cnjI 11 ·—<]
CN I I I. +t <-4 CN CN cn ID
- LJuJL-JL-JL-J L_Jl_J o o cn r- cn σ>
N* О O CN OJ OJ rH
OJ rH rH 1 Lf/ 1 cn* * 11 m’ 1 СЕТ íoTI Ho4 1 1 C? 1 o*
L=b lCj LCl i 1П) cn
О О O 00
O -О’ Ol OJ o oo o o <o co
OJ rH O) O) rH rH
O o 00 OJ CN rH <0 0 0 0 0 rH OJ OJ СП LT)
Příklad 93
Účinnost různých sloučenin při nitnžilním podání
Krysy byly aneetetizovány způsobem podle příkaadu 92. Po ustálení odpovědi na angiotenzin I byla podána stehenní žilou sloučenina podle vynálezu v dávce 2 ^moly/kg v 15 0,01 N hydroggeuuiičitanu sodného. Po určitých intervalech pak byly sledovány účinky angiotenzinu I v dávce 400 ng/kg na průměrný tepenný tlak. Výsledky jsou uvedeny v tabulce 3, která je jňnak upravena stejně jako v tabulce 2.
Tabulka 3
Krevní tlak po podání 400 ng/kg angiotenzinu I v % kontrol (minuty po п^к^НпО podání)
Sloučenina (dávka)
24 | (2) | 60 c | 1) | 77 | (2) |
100! | i l-5] | 100% | [-5] | 100! | i [-5] |
0 | [+0,5] | 8 | M | 8 | [+0,5] |
19 | [3] | 15 | Μ | 18 | [5] |
19 | [9J | 23 | M | 21 | [11] |
22 | M | 23 | [19] | 24 | [14] |
31 | [18] | 33 | C24J | 29 | [17] |
31 | [22j | 41 | [37] | 34 | [20] |
50 | [34] | 46 | [45J | 42 | [24] |
63 | [47] | 46 | [54] | 47 | [32] |
78 | [65] | 46 | [77] | 53 | [43] |
75 | [103] | 51 | [87] | 58 | [49] |
94 | [113] | 61 | [56] | ||
71 | [71] | ||||
78 | [76] | ||||
76 | [88] | ||||
76 | [99] | ||||
74 | [109] | ||||
84 | p25] |
P říkl a d 94
Při zkouškách na účinnost ACE byl enzym zkoumán v 0,05 M Hepes pufru při pH 8,0 s obsahem 0,1 M chloridu sodného a 0,75 M síranu sodného. Použitým substrátem byl -4 -4 benzoyl-GlyHisLeu v konečné klncenUraci 1 x 10 Μ, (K 5=« 2 x 10 M, spolu s 130 000 cpm L^H^enzoylGlyHisLeu (0,9 TBg/moo) . Enzym byl zi^eděn ve svrcM uvedeném pufru tak, že · 40 ^1 enzymu bylo schopno hydrolyzovat 13 % subbto^u při to^baci při foroto 37 °C po dobu 15 minut. Na počátku pokusu bylo předběžně inkubováno 40 ^1 enzymu a 10 ^11 pufru nebo to^^ton rozpuštěného v pufru 5 minut při to^otě 37 °C. Pak bylo přidáno 50.^1 subbttotu c zahájení reatae a roztok byl ín^bov^ 15 minut při teplotě 37 °C. Realkce byla ukončena přidáním 1 ml kybeliny chlorovodíkové o ClncenUraci 0,1 M a pak 1 ml etylacetátu. Směs byla míchána na rotačním míchacío zařízení a pak krátce odstředěna k oddělení fází.
500 Д11 etylacetátové vrstvy bylo přeneseno do nádobky pro kapalinovou s obsahem 10 ml prostředku Riafluor (New England Nuclear Coopooaaion, Bobton, Mabbachusetts. Pro stanovení hodnot Ι5θ byla srovnávána účinnobt enzymu za přítomno^i inhibitoru v různé ConcenUraci s účinnosto bez inhibitoru. Srovnáním koncentrace inhibitoru a % inhibice byla získána hodnota Ι^θ.
Příklad 95
Způsob výroby N- [3- (beleofSLlLfeneSalanylthio)-2-D-melylpafpaaeoS]-L-yrf linu
a) Zyůsob výroby N-^-ÍBod-^en^a janeSthio)-2-D-ielylyroyaaeoS]-L-prolieu
Roztok 133 mg (0,5 immiu) Boc-L-Phe-OH v 0,5 ml aldlstiOoaaného dimetyf0aimtmidu byl zchlazen na tepotu -20 °C v 1szč:í se suchým ledem a acetonem. Pak bylo přidáno ' 87 mg (0,054 mamou) 1,1'-Уarífnyldimidazflu v 1 ml dimetyi0aimamidu a roztok byl míchán při te^o^ -l0 °C 2 hodiny. Ray byl ^idáín 1 ml dim^ltyL.fam^am.du s obsahem 119,5 rng (0,55 mnmlu) 2·lD-milyS---ielykaPoopaopaeyl-lLppolieu a 0,075 ml (0,55 mírnou) N-etylmoo folíču při te^otě -10 °C a při te^otá byla směs míhána ješ^ hodinu, eačeí bylo možno ji nechat zteplat na teplotu mstnooli. Po odpaření rozpouštědla bylo př-ldáno 10 ml ltslailtStu a roztok byl zchlazen v ledové Lázni. Organický roztok byl dvakrát promyt 2 ml 1 N kyseliny citrónové a pak dvakrát nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. EtyLailtátovS fáze byla usušena bezvodým síranem hořlčeatým a po ϋΐ^ίϋί bylo rozpouštědlo odstraněno na rotačním odpaaovaai. Odparek byl rozpuštěn v malém ©íčo^ví βΐίεί isfyroyaeolu a tutaahydrofuraeu v objemovém poměru 7:3a nanesen na sloupec o rozm^ěru 1,2 x 99 cm s obsahem Sephadexu LH-20 v rovnovážném stavu v tomtéž rozpouštědle. Byly odebírány frakce po 2,55 ml. Frakce 31 až 36 byly slity a rozpouštědlo bylo odpařeno na rotačním odpařovaai. Odparek byl znovu rozpuštěn v téže směsi isoprOpanolu a tltrahsdaofuraeu a znovu nanesen na sloupec o rozměru 1,2 x 98 cm s obsahem Sephadexu G-10 v rovnovážném stavu v tomtéž rozpouštědle.
až 23 byly slity, čímž bylo získáno 165 frakcí z prvního chromatooiafického stupně
PPi lllУtroforézl na papíře bylo m^žno prokázat, že Látka je čistá, ll·lУtroforézt byla prováděna při pH 5,0. Tentýž výsledek byl prokázán při ihromiaofgatii na tenké vrstvě lilУaaglLu při poojítí tří systémů rozpouštědel. PPi analýze tminnOyselie bylo dosaženo výsledku P^e1,00, PrO1,01.
Byly opět odebírány frakce po 2,55 ml. Frakce mg výsledného produktu. Čištění vedlejších bylo získáno ještě 40 mg výsledného produktu.
b) Zyusob výroby N- [з-(HCl.H-LLilneSalteylthif)-2-D-ielylyropaaeoS]-L-prolieu
0,2 ml anisolu se přidají ke 200 mg N-[3-(Booi·L-flnylaL.aeylthfo)22-l-InltylafPpaeoyí|-^^olinu a směs se míchá při tepLotě 0 °C. pak se přidá 0,4 ml bezvodé У^!^с^]..^пу tr.fUuoroi!tové a roztok se míchá 45 minut při teplotě místnooli. Kyselina trifbrodová se odstraní na rotačním odpařovači při 30 °C a přičlá se 1 ml ltsLailtStu, nasyceného chlorovodíkem. Přebytek kyseliny chlorovodíkové a ltslailtStu se o^traní na rotačním očpařovaač, čímž se získá olejovitý zbytek. Přidá se bezvodý ^slét^ a směs se nectá ^dinu stát při í^lotO 0 °C. Pátrací se zísyá Má peveá ^^a, ytlas se něyoLiУaSt promyje bezvodým éterem a pak se vysuší ve vakuu hydroxidem sodným a kysličníkem ifsfolečnýo.
c) Zyůsob výroby N- [3- (beleofS-LLLflnylalaeylthfo)-l-D-mltslyroyanoyl] ^^rolinu mg (0,23 mamou) N- £3-(HC1. ^L-funSa lanylthio) -2-Ε)-©θ1υ lpropanoy 1] -Ldioxanu, yřldestifovanéhf nad sodíkem se smísí s 0,029 ml (0,25 maoou)
Surový jarodukt se (žiltí eteelleím na lL^^upec G-25 v rovnovážném stavu ve směěi elbUtte^f.u, 4:1:5. Vzorek se rozpětí ve s^^ě^í. 0,3 ml nejprve provádí horní fází. ^θΙ^^Ι se o,
Roztok 93
-prolinu v 0,5 b^i^z^z^oSL^C^l^c^jri^d^u v 0,099 ml (0,71 mamou) N-ety ^©oroHnu. Reakce se nechá hodinu probíhat při teplotě ms^s^j^c^osii, načež se přidá ještě 0,029 ml íeneooSchhoridu a 0,034 í. N-eeyliOorolieu. Po další hodině se přidá 0,2 í. ledové Уу^с^П.-^пу octové. Rooppuušědlo se odpaří na rotačním odpařovači při te^otá 35 °C.
o ruzж^jau 1,2 x 97 cm s obsahem S^jahadexu kyselině octové a vodě v objemovém poměru spodní fáze a 0,3 ml horní fáze. Eluce se frake po 2,75 ml. Frayce l6 až 18 se slijí a roz^uštMlo se odpaří při teplotě 37 °C na rotační odparce. Produkt se pak nanese na sloupec o rozměru 1,2 x 9 8 cm s obsahem lilУaaglLu v ltslailtStu a tímto rozpouštědlem se také vymývá, přil<^mí se oddeííaaí frakce o objemu 5,15 ml. Frakce 46 až 60 se lijí, čímž se získá 52,5 mg produktu ve formě čisté látky, jak je možno prokázat chromatografii na tenké vrstvě při použití 2 systémů rozpouštědel.
Příklad 96
Způsob výroby N- [3- (benzooy-D-feeyyaftnyl-thi^-^-D-aetLy^ro^no^j-L-ppolinu * a) Způsob výroby N-£з-(HCy.H-f)-ffeyУafanoУthίo)-2-D-aetyyprgptnyyU]-L“proyiУU
Roztok 531 mg (2 mnmoy) Boo-D-fennytltoiou ve 3 ml redestiovtaného dimetyioomataidu se ochladí nt -20 °C t energicky se míchá. Př.te se roztok 1,1'fkfobonyldiiaidaoolu v aao^sví 341 mg (0,1 onm^) ve ,3 ml d^et^foaatmidu při -10 °C t výsleclný roztok se aíchá 2 hodiny při t^eplot^ě -l0 °C. Pak se při-dá ještě roztok 456 ml (2,1 ашюк) faaeyl-3fmerkatPoppooptyyl-f-ppoUiou ve 2 ml dίmetyfgoaIpamidu t 0,285 ml N-etylmoofolinu (2 ? 1 iranmlu) t oeakčyí.saěs se míchá při ~10 °C ještě ^dinu, ntčei se nectá pommlu ztepltt nt teplotu ms^t^t^o^utt.. Rooppoštědlo se odstátní nt rot-téní odparce při tohoto 35 °C, odparek se rozpustí ve 25 ml btylf-etáts t přitej se 3 ml vody. Směs se zchlt^ nt 0 °C t ptk se okysel.! 0,3 ml kωncentrované kyseliny -hlorovgSíkgvé. Orgayická fáze se jednou pogayje chL^dnou zředěnou kyselinou chlorovodíkovou, třikrát vodou t třikrát ntsyceným vodným roztokem chloridu sodného. Organická fáze se vysuší bezvodým síranem hgřečyatýa t ptk se zfiltruje. RogpoιlStědlg se odpaří na rotační odparce, čími se získá olejovitý zbytek. Tento produkt se čistí nt sloupci o rozměrech 2,2 x 9'8 cm s obsthem Sephadexu LH-20 t vymývá se směsí isopoopayolu t tetaahydrofurayu v objemovém poměru 7 : 3. OOdbíratí se irtkce po 5,6 ml. Frtkce 34 ti 38 se slijí, frak-e 33, 39, 40 s 41 se rovněž slijí, rozpouštědlo se odpaří t lrtk-b se znovu uloží nt vrchol téhož sloupce. Krtkce 37 ti 40 t frak-b 34 ti 38 se ptk dále čistí nt sloupec i o a:gom^ru 1,2 x 98 cm s obsthem sUkta^^ v btyla-btátu, sloupec se vymývá btyfacetábea. (ЭОсЬ^о^ se lrtkcb po 5,0 ml. Fotkce 22 ti 29 se slijí t rozpouštědlo se odpaří nt agtačyí odparce. Odparek se rozpustí v 1 ml bezvodé kyseliny triUlgru-cUové s obst^em 0,5 ml t^isolu. OOstrtnění gchotyyých skupin se provádí 0,5 hodiny při teplotě aístnouti, rozpouštědlo se ptk odpai: í nt aott^í oharce při teplot 35 °C. Odparek se roz^oust-í v 1 ml etyla-btáts, natyceného chlgrovgsíkea, Ppi teplotě 0 °C se přidá 5 ml bezvoteho éteas, čími dojte ke vzniku Mlé traibniyy. Směs se nb-há todinu stát při teplotá 0 °C t ptk se bílá pevná látkt oddděí HHtací t pětkrát se poomyje éterem. Produkt se suší přes noc ve vtkuu hydogχddea sodným t kyslččníbea fosforečným. Výtěiek je 381 mg.
b) Způsob výaoby N-[з-(íebiogl-f-flbylafaaylthig)-2-Dfaaeylprgpaaogl]-L-prglir'ls 93 mg (0,23 anrolu) poQdukbu ze stupně t) N-[3-(HCl.H.D .feb^alt paopaaygl·J-L-paoliys se uvede v retkci se 0,029 ml (0,25 m^mo,ů) íeuyoglc-lorίSs v 0,5 ml abdbstigvtanéhg bezvoteho dioxayu při te^otá 0 °C t O^O ml (0,71 mrm^) N-ebylmgr^linu. ReakCní směs se míchá energicky při teplotě místnoosi 3 hgdiny. Pak se přidá 0,015 ml íeniOol·chlorids t 0,018 ml N-etylaggfglios t směs se ještě hgdinu míchá, ntčei se rozpouštělo odpalří při te^otá 30 °C.’ Odparek se rozpust:! v malě mn^^ví hgryí t dolní fáze smě^s^s. o-ístayglu, kysebiyy octové t vody v objemovém poměru 4:1:5 t ntne^ se nt sloupec o rozměrech, 1,2 x 98 cm s obsthem Sephadexu G-25. Sloupec se vymývá horní fází t odde^atí se fraк-b po 2,6 ml. Fatkce 15 ti 24 se slijí t rozpouštědlo se oSppfí. Odparek se rgopustí v malém aaygiSví etyla-etáts t dále se čistí nt sloupci sUktarelu o rozměrech 1,2 x 95 cm. Sloupec se vymývá etytsce^eem t odde^atí se frak-b po 5 ml. Fatkce s gbtahbm h^vního vrcholu se slijí t rozpouštědlo se gdpρaí. Ma^eřá! se dále čistí -hrgmaaggraffí nt sloupci o agzm^rb-h 1,8 x 89 cm s obsthem Sephtdexu LH-20 ve taasi iso t tetrahydoofsrays v objemovém poměru 7:3.
Sloupec se vymývá toutéi smmsí t odde^atí se frak-b po 5,7 ml. Z fotkcí 15 ti 18 se získá 98 mg produktu, který je Čistou látkou při elektrgfgréob nt papíře při pH 5,0 t 2,0 t při -hrgmafggrafii nt tenké vrstvě.
Příklad 97
Způsob výroby N-|_3-(benzoyl-D,L-fenylalanylthio)-2-D-metylpropanoylj-L-prolinu
Při poiuití Boo-D--enolnlnoiou a Boo-L-·fenylnlnninu v poměru 50 : 50 je možno získat způsobem 'podle příkladů 95 n 96 N-[3-(benzool-D,L-2fenylnlnnylthio)-2---meeylpro^<^r^ool] -^mhn.
P říkl n d 98
Způsob výroby N-(2-beeozylleenlarannlthiypropanoyl)-L-prolinu n N-U-bennoollennlalnnylthioprypaanol)-L-proliou n jej-ch derivátů
Požadovaoé sloučeninl se získají tnk, ie se užije 2·2merrkatootryaaoylyLL-rrlin nebo 3·2merrkatoyroytaoyl--“-rolin msto 2---meryl-3-merrkatoyroyaayyl---prolinu při provádění způsobů podle příknadů 95 ni 97 n merkaatoslyučraina se uvede v renkci s Boc-D-feoylananOnem, Boy-L-feoylaranOaem nebo se směsí tě-hto látek v poměru 50 : 50.
MerrkatoOdrrváty svr-hu uvedených sloučen je možno získnt způsoby, popsnnými v lieenatuře.
P Píkl a d 99
Způsob výrobl derivátů L-3,4-dehhУrryrrlinu, -,L-)3,4-drhydroyrrlinu, L-3-)hydroxyproУiou, L-4-hydroxyproliou n L2thinoolidi--2-narboxylové kyselinl
Požndovnná látkn se získá tnk, ie se užije příslušná meekaatosloučenina, v níi f se užije místo L-prolinu L-3,4-dehydroopolinu, D,L-3,4-dehydroyrrУinl, L-3-hydroxyprolinu, L^^ld^^va^H-nu nebo L-thiazolidi242-nrrboxylové kyselinl, n jinnk se postupuje způsobem podle případů 95 ni 98.
Příslušné merkantos^ušeninl je možno získnt způsobem popsnným podle přihlášek č. 64 897 ni 64 903.
P říkl n d 100
Způsob výrobl derivátů D-tryptyfanu, D-tlrosinu, --isolru-inu, --Хпст,
--hhstídinu n -^аМт.
Požndovnná sloučeninn se získá tnk, ie se užije Boo-D--nanin, Boo-D--ryptofnn, Boy-D--yrosin, Boo-D--solrucin, Boo-D-2ruciy, Boyc--hhstidin nebo BoycD-vaain místo Boy-D-2enylalnninu n jinnk se postupuje způsobem podle příknadů 95, 98 n 99.
P říkl n d 101
Způsob výrobl derivátů D^-nlminu, -,L-triptoranu, -,L-tyrosinl, -,L-isolrucinu, -'L-leu-inu, -,L-hhstidinl n D,L-valinu
Užije se sméěi Boo-D-A n Boo-L-A, kde A znnmená nlnnin, tYrosin, i^soleucin, leucin, histidin n valin v poměru 50 : 50 ms'iy směsi Boo-D-fenylnlnninu n Boo-L-frnylalaninu n jnank se postupuje způsobem podle příknadů 97 ni 99.
P říkl n d 102
V přípndě, ie se užije přís^šná sloučeninn místo beanzolcChoridu v příkaadr-h 95, 96 n 98 ni 101 n postupuje se známým způsobem, napříklnd způsobem podle přihlášek
č. 64 897 až 64 903, získají se formylderiváty, acetylderiváty, propanoylderiváty, butanoylderiváty, fenylacetylderiváty, fenylpropanoylderiváty, cyklopentankarbonylderiváty, cyklopentankarbonyl-L-lysylderiváty, pyro-glutamyl-L-lysylderiváty, L-lysylderiváty,
L-arginylderiváty a pyro-L-glutamylderiváty.
Příklad 103
Způsob výroby N-!3-(benzoyl-L-fenylalanylthio)-2-metylpropanoyl]-L-5-oxoprolinu mmolů kyseliny L-glutamové se uvede v reakci s 11 mmoly kyselého chloridu kyseliny metakrylové ve 35 ml 1 N hydroxidu sodného. Po 60 minutách stání při teplotě místnosti se reakce ukončí přidáním 2 N kyseliny chlorovodíkové do pH 2.
Produkt se dvakrát extrahuje stejným objemem etylacetátu. Organická fáze se odpaří na malý objem na rotační odparce a produkt krystalizuje po přidání etyléteru. Pevný produkt se oddělí filtrací. Pak se uvede v reakci 6 mmolů produktu se 6 mmoly cyklohexylkarbodiimidu ve 25 ml bezvodého tetrahydrofuranu při teplotě 0 °C na 1 hodinu a pak při teplotě 4 °C přes noc. Dicýklohexylmočovina se odstraní filtrací. Rozpouštědlo se z filtrátu odpaří a 5 mmolů výsledného anhydridu se rozpustí ve 3 ml bezvodého tetrahydrofuranu a 6 ml bezvodého etyléteru. К tomuto roztoku se přidá 5 mmolů dicyklohexylaminu ve 2 ml etyléteru za vzniku metakryloyl-L-5-oxoprolinu. Tato sůl se převede na volnou kyselinu přidáním 2 M kyseliny chlorovodíkové do pH 2,0.
Produkt se extrahuje etylacetátem, organická fáze se odpaří dosucha a produkt se nechá krystalizovat ze směsi hexanu a etylacetátu. Pak se uvedou v reakci 3 ml metakryloyl-L-5-oxoprolinu v 5 ml toluenu s 3 mmoly kyseliny thioloctové za současného zahřívání na teplotu varu pod zpětným chladičem na 1 hodinu, čímž se získá 3-acetylthio-2-metylpropanoyl-L-5-oxoprolin.
Tento produkt se nechá krystalizovat se směsí etylacetátu a hexanu. Odstranění ochranných skupin se provádí v kapalném amoniaku v metanolu za přítomnosti anisolu. Rozpouštědlo se odpaří na rotační odparce. Produkt se rozpustí v etylacetátové a organická fáze se promyje chladnou zředěnou kyselinou chlorovodíkovou. Rozpouštědlo se z organické fáze odstraní na rotační odparce.
Produkt se rozpustí v etylacetátu a organická fáze se promyje chladnou zředěnou kyselinou chlorovodíkovou. Rozpouštědlo z organické fáze se odpaří a odparek se rozpustí po 4 ml dimetylformamidu, načež se přidají 2 mmoly 1-hydroxybenzotriazolu a 2 mmoly N-hydroxysukcinimidesteru benžoyl-L-fenylalaninu. Reakce se nechá probíhat 48 hodin při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odpaří na rotační odparce.
Odparek se rozpustí v malém objemu etylacetátu. Organická fáze se promyje chladnou zředěnou kyselinou chlorovodíkovou a pak nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Pak se organická fáze vysuší síranem hořečnatým, který se pak odstraní filtrací. Z filtrátu se odstraní rozpouštědlo na rotační odparce a odparek se rozpustí v 0,5 ml tetrahydrofuranu. Výsledný roztok se nanese na sloupec o rozměrech 2,5 x 100 cm s obsahem Sephadexu LH-20 a sloupec se vymývá tetrahydrofuranem. Frakce, které obsahují produkt s absorpcí při 280 nm se slijí a rozpouštědlo se odstraní odpařením na rotační odparce ve vakuu.
Příklad 104
Inhibiční schopnost různých svrchu uvedených sloučenin in vitro byla měřena způsobem, popsaným v příkladu 94. Enzym byl získán z lidské moče způsobem, popsaným v publikaci Ryan J. W. a další, Tissue and Cell 10, 555 (1978). V tabulce 1 jsou uvedeny hodnoty Ι^θ pro různé sloučeniny. Hodnota Ι5θ je koncentrace inhibitoru, nutná к 50% inhibici enzymu za standardních podmínek při úrovni pod K^.
Ta b и lka | 1 , | |
Sloučenina | I50 | |
Příklad 95 | M x 1Ο’8 M | |
Příklad 96 | 9 χ. 10'9 M | |
P Píkl a d | 105 |
Způsob výroby sodné -prolinu soli №*- [3- (N -bennc>oy_D/L-fenylalanylthoo)---D~metylpropanoyl] -L0,5 mnolů 1 M roztoku hydrogeenUličitanu sodného se přidá Na-[3- (Bz-D,LL-eenlalannlthio)-2-D-ooeylproppanol]-L-prolinu v Rooppotétědlo se odpaisí na ro^ční oharce při teplotě З5 °C. K k 234,3 og (0,5 mnmlu) 1 ol absolutniho etanolu.
o].ejovi-tému -bytku se přidá čerstvý etanol a rozpouštědlo se -novu odpaH stejným způsobem. Postup se opakuje ještě jednou pří poouiti absolutního alkoholu a pak ještě dvaJcrát při poouití benzenu.
BiLý odparek se vysuší kysličníeeo fosfoeečnýo. Po překrystalování z 95% etanolu a benzenu se ve výtěiku 55,1 % získá za rozkL^ldu, k o°knuuí ďochází při 135 og bílých to-ystalů s boteo t^ní 185 až 186 °C t^e^o^ 153 °C. Při analýze v i^nfrie2rvn^í^o svět^le v paletách s bromidem draselným je
600 cm-1 a pás pro ^^ester při možno prokázat pásy pro amfoterní ion při 1 398 a
682 cm \
Při vlvítrofortzv na papíře pří pH 2 a 5 a při clrvmflpvea:lfi na tenké vrstvě silikagelu pří poouiti tři systémů rozpouštědel jv možno prokázat pouze jedinou skvrnu, důkaz byl prováděn v ultraiiaOotóf světle při krátkých vlnových délkách po reakci s fenazinoeeosulfáteo.
pro C25H27N2SMaO5.2H2O vypočteno: C 57,02 nalezeno: C 56,37
5,93
5,59
N 5,32
N 5,30
S 6,09
S 5,99 %.
Příklad
106
Způsob výrot>y
-prolinu drasvlnt so°.i
ΝΛ-[3-(Ν -bennz^-D,LLfvnulllanyltlio)22-D-fetylofOpanjolL -LDraselná sůl svrchu uvedené sloučeniny se získá způsobem podle případu 105 s tím rozdílem, že . se užije 1 M lydrogevnUličitau draselný místo lydrogevnUličitauu sodného. Po ^ekrystalování se získá 70 mg bílé pvvué 1^пу s tvplot^ou t^í 132 až 134 °C za rozHa^. Hodnoty při analýze infaieervnnýf světem při vllítrofortzv a chromflogealfi odppvíddaí hodnotám pro sodnou sůl z případu 105.
Příklad 107
Způsob výroby so°.i ^^sinu s Ν*5[3-(Ν -bvnjzvl-D,LLfenylalanylth0o)2-DD-fvtllorvoanoyí] -L-prvljvef
Roztok 73,1 mg (0,5 mnmou) L-lysinu ve volné formě v 0,3 ml deionizované vody se po ka^^h přidá za sUtého míhání k roztoku 234,3 mg (0,5 mum^u) ^-^-(N^-benuzo1“D,L“fvullllluylthvo)22-DmetylorvoalUvlJ-L-orvl·inu v 1 ml absolutn^o alkoholu. Rozpooutědlo se odpaisí na rotační odparce za vzniku bílého odparku. Přidá se čerstvý absooi^Iiuí alkohol a postup se opak^e, načež se opakuje ještě dvakrát při pcouití absolutního alkoholu a dvakrát pří poouití benzenu.
Konečný výtěžek byl 0,292 g o teplotě tání 152 až 154,4 °C za rozkladu po usušení ve vakuu kysličníkem fosforečným. Po překrystalování z absolutního alkoholu s několika kapkami vody a benzenu bylo získáno 141 mg bílé sraženiny o teplotě tání 162,5 až 163,5 °C za rozkladu, к měknutí dochází při teplotě 160 °C. Při analýze v infračerveném světle v paletách s bromidem draselným bylo možno prokázat pásy pro amfoterní ion při 1 389 a 1 620 cm1, pás pro karbonylovou skupinu amidu při 1 641 cm 1 a pás pro thioester při 1 678 cm Při elektroforéze na papíře při pH 5 a při chromatografii na tenké vrstvě silikagelu při použití 3 systémů rozpouštědel bylo možno prokázat přítomnost svrchu uvedené výsledné látky a lysinu.
Další soli, přijatelné z fyziologického hlediska je možno získat tak, že se nahradí hydrogenuhličitan sodný nebo draselný nebo lysin v příkladech 105 až 107 jinou bází a dále se postupuje stejným způsobem. Obdobným způsobem je také možno získat soli jiných sloučenin.
I
Příklad 108
Perorální účinnost sodné soli řf*-[з-(N*-benzoyl-D,L-fenylalanylthio)-2-D-metylpropanoyl]-L-prolinu
Krysy o hmotnosti 150 až 190 g byly ponechány přes noc bez potravy a pak byly anestetizovány intraperitoneálně pentobarbitalem v dávce 50 až 60 mg/kg. Byla provedena tracheotomie a zavedeno mechanické dýchání. Do stehenní žíly byla zavedena kanyla pro vstřikování angiotenzinu I, druhá kanyla byla zavedena do kmene krkavice pro přímé měření tepenného tlaku. Do stehenní žíly bylo vstřiknuto 1 000 jednotek heparinu, aby nedošlo ke sražení krve. Krevní tlak byl měřen polygrafem. Krysám bylo podáno 400 mg/kg angiotenzinu I ve 20 yul 0,9% chloridu sodného. Toto množství stačí ke zvýšení krevního tlaku na 45 mm rtuti. Po získání této hodnoty byla podávána žaludeční sondou zkoumaná látka v dávce 10 mmolů. v 0,15 ml vody s 10 /ul 1 N hydrogenuhličitanu sodného. Po určitých časových intervalech byl měřen tepenný krevní tlak. Výsledky jsou uvedeny v následující tabulce
Doba po podání účinné látky (minuty) | Krevní tlak jako reakce na 400 ng/kg angiotenzinu I (% kontrol) |
+5
120
150
180
210
240
100 (45 mm Hg)
Příklad 109
Účinnost draselné soli N**-[3-(N*-benzoy1-D,L-fenylalanylthio)-2-D-metylpropanoy1]-L-prolinu při nitrožilním podání
Účinnost svrchu uvedené látky při nitrožilním podání byla stanovena způsobem podle příkladu 108 s tím rozdílem, že účinná látka byla podávána nitroŽilně v dávce 1 yumol/kg.
Výsledky jsou uvedeny v následující tabulce.
Doba po nitrožilním podání účinné látky v minutách + 5
Krevní tlak jako odpověd na dávku 400 ng/kg angiotenzinu I (% kontrol)
100 % (54 mm Hg)
120
Vynález byl popsán v souvislosti s několika různými specifickými provedeními, je však zcela zřejmé, že se týká i dalších provedení základního vynálezu, tak jak je možno je odvodit z běžné praxe, které se způsob podle vynálezu týká.
Dále budou formou tabulek uvedeny vlastnosti sloučenin, které je možno vyrobit způsobem podle jednotlivých příkladů.
V další tabulce budou uvedeny také sloučeniny, které v příkladech nebyly uvedeny, které však je možno rovněž získat způsobem podle vynálezu.
Tabulka I
Sloučenina z příkladu
Vlastnost
13; Acetyl-L-fenylalanin
13; №*-[3-(N^-acetyl-L-fenylalanylthio)-2-D-metylpropanoylj-L-prolin
Teplota tání = 165 až 166 °C [«]D = +37,3 molekulová hmotnost = 406
Rf(l) = | 0,47 | ||
Rf(2) = | 0,65 | ||
Rf(3) = | 0,45 | ||
Rf(5) = | 0,64 | ||
Rf(6) = | 0,54 | ||
Rf(7) = | 0,59 | analýza | aminokyselin Phel,00 Pro0,89 |
NMR «Г (v | CDC13 | ): 1,17 | (3H, b.d., CH3), |
1,75 až | 2,35 | (4H, M, | CH2), 1,91 (3H, s, CH3), |
2,55 až | 3,25 | (5H, m, | CH, a CH2), |
14; Acetylglycin
14; N06- [3-Na-acetylglycylthio)-2-D-metylpropanoyí]-L-prolin
3,4 až 3,8 (2H, m, CH2) ,
4,1 až 4,6 (1H, m, CH), 4,6 až 5,0 (1H, m, CH),
6,63 (1H, d, NH),
6,82 (ГН, s COOH),
7,17 (5H, b,s., aromatický H)
Teplota tání = 207 až 209 °C
Molekulová hmotnost = 316 [«]D = -51,0
Rf(6) = 0,48
Rf(7) = 0,42
Tabulka pokračování
Sloučenina z příkladu
Vlastnost
NMR ď (v CD3OD): 1,20 (3H, b.d., CH3),
1,9 až 2,3 | UH, m, | CH2), 2,00 | (3H, s, CH3), |
2,5 až 3,2 | (3H, m, | CH a CJJ2) , | 4,04 (2H, s, CH2), |
4,2 až 4,7 | (1H, m, | CH, So = | 4,0 x 10-7 |
teplota. tání = 139 | až 140 °C |
[<*.] D = +2,5
17; Acetyl-L-isoleucin
17; N^^-CN^-ace^l-L-isoleucylthio)-2-D-metylpropanoyl]-L-prolin
18; Acetyl-L-leucin
18; N*-[3-(lí*-aaetyl-L-leucylthio)-2-D-metylpropanoyl]-L-prolin
20; Acetyl-L-valin
20; ^-[з-^-аси^уЫ,-valylthio)-2-D-metylpropanoyl]-L-prolin
21; Acetyl-L-alanin
2,1, tP*- [3- (Na- acetyl-L-alanylthio)-2-D-metylpropanoy^-L-prolin
23; Propanoyl-L-tryptofan 23; ΝΚ- ^-N^-pro^no^-Latryptofylthio)-2-Dametylpropanoy 1^-L-prolin 24; N^-f3-(N^-^rc.tut^loxykarbonyl-L-fenylalanylthio)a2aD-metylρropanoyl] -L-prolin 25; Terc.butyloxykarbonylglycin 25/ N^-pHN^-terc. butyloxykarbonylglycylthio))-2- . -Dametylpropanoyl] -L-prolin
NMR X (v CDClj): 0,9 (3H, t, CH3), 0,95 (3H, d, CH3) , l, 25 (3H, d, CH3), 1,7 až 2,5 (7H, m, CH a CH3), 4,0 až 5,0 (2H, m, CH), 6,3 až 6,8 (1H, m, NH),
8,48 (1H, S, COOH) teplota tání = 181 až 182 °C
Ио = -24,0
Í*Jd = <51,3 · ’
NMR ď (v CDC13): 0,92 (6H, d, CH3), 1,21 (3H, d,
CH3), 2,01 (3H, S, CH3 CO), 1,4 až 4,0 (12H, m, CH a CH2), 4,0 až 5,0 (2H, m, CH), 6,0 až 6,6 (1H, m, NH), 6,72 (1H, S, COOH).
teplota tání = 154 až 155 °C
HD = -θ'4 [*] D = -153,5
NMR cT (v CDC13): 0,90 (3H, d, CHj), 0,96 (3H, d, CH3), l, 23 (3H, d, CH3), 1,7 až 2,5 (4H, π», CH2), 2,08 (3H, S, CHjCO) , 2,5 až 4,0 (6H, m, CH a C^) , 4,1 až 5,0 (2H, m, CH), 6,58 (1H, d, NH), 8,58 (1H, S, COOH). teplota tání = 120 až 124 °C M D = -60,0 .
MD = -151,7
NMR (v CDC13): 1,20 (3H, d, CHj), 1,37 (3H, d, CH3), 2,01 (3H, S, CH3CO), 1,7 až 2,5 (4H, m, CH2), 2,5 až 4,0 (5H, m, CH a CH2) , 4,0 až 5,0 (2H, m, CH) , 6,5 až 7,3 (2H, m, NH a COOH).
teplota tání = 170 až 172 °C · [<*]n = + 22,9
К = -116,7
NMR X (v CDC13): 1,0 (3^ CH3CH2) , 1,21 (3^ d, CH3), 1,6 až 4,0 (13H, π/CH a CH2), 4,0 až 5,3 (2J, m, CH), 6,0 až 6,6 (1H, m, NH), 6,8 až 7,8 (5H, m, aromatický H), 8,8 až 9,2 (2H, m, NH a COOH).
Rf(1) = 0,60
Rf(2) = 0,76, 0,82
Rf(3) = 0,68, 0,72 analýza amin°kyselin P3^iil,00 Prol,00 teplota tání = 87 až 88 °C molekulová hmotnost =374 ř*]D = -82,0
Rf(6) = 0,63
Rf(7) = 0,70 D (C 1,0, MeOH) = -101,7 .
NMR ď (v CDC13): 1,22 (3H/ b,d,m 03, 1,43 '(9H/ s/
CH3), 1,7 až 2,4 (4H, m, C^), 2,6 až 3,2 (3H, m,
CH a CH2), 3,4 až 3,8 (2H, m, C^), 3,98 (2H, d, CHj) ,
4,4 až 4,7 (1H, m, CH), 8,68 (1H, s, COOH),
I50 = 2,4 x 10-7
Tabulka pokračováni
OC r &
28, N -[3~(Ν -ter^butyloxyk^rl^c^ooll-iL-soleuuclthio) ^-D-my^ropn^no! -Lί · Π
-prolin 32; N^^-ÍN^-terc^ut^lox1karbouoJlL-aaannltllo)-2-D-гПу ^Γοι^^γ 1J j^ppooio 34; NO--clklurentankarbonnr^-1по11г1го1п
Rf(l) = 0,82
Rf(2) = 0,72 ,
Rf(3) = 0,78
IR (CHH1-) má karbony^^ pásy při 1 643 ; 1 690 až 1 740 cm'1 a NH pás při 3 445 cm 1 * teplota táni = 143 až 145 °C WD = -153,8 clruraryogarin bennylesteru:
na tenké vrstvě:
Rf(1) = 0,75
Ri(3) = 0,76 ’
IR (CH^^1-) má karbooylové pásy při 1 665, 1 736 a ] -1 ’
NH pás pri 3 430 cm . Chrooraouearin о^ппЬуП1£1kovaného derivátu na tenké vrstvě:
35; Ν^-^-jN^-cyklo^ntan karbcunl--~-θeol1aarolthiu)-2---rety1rropanuyl] -L-prolio
36; cyklo^n takarboonlgly cin 36; [3-(NC--cyk1upnntankarbounlleyc!cl1tliu)-2-'D-гПу lproppany 1] --,-^1701 io 1 f- [3- (I^-cyklo^ntankarbc)uol----soleuuclthiu) -2-D-ггtylrropaooy1J-L-prolio
43? cyk1urnntrnkarbonnl-L-alani'
O r OJ
43; N -[3-N -cykll>pnnt:ankrrbonnl-L-alary 1ϋίο)22-0-^ ty lprop^r^ool] -L-prolio
Rf(1) = 0,60
Rf(2) = 0,68
Rf(3) = 0,64
IR (CHC1-) má posun karbonylového pásu z 1 736 na 1 722 cí_1
Rf(1) = 0,48
Rf(2) = 0,73
Rf(3) = 0,62
Rf(5) = 0,72 te^ota tání = 109 až 110 °C
M | = 157,6 | |
Rf | (6) | = 0,54 |
Rf | (7) | = 0,80 |
I5 | . = | 1,2 χ 10' |
Rf | (1) | = 0,65 |
Rf | (2) | = 0,76 |
Rf | (3) | = 0,70 |
IR (CHCCj) má karbon pylové pásy při 1 645, 1 675 a 1 722 cm_1 45; N^-U-L-^rylalary l^iote^ota táni = 149 až 150 °C
Μθ = -37,9 m^oi^J^i^^lová hmoonost = 384 [°-.]D = -157,6
Rf(6) = 0,63
Rf(7) = 0,72
NMR f (V CDCI3 + CD3OD): 1,20 (3H, b.d., CH3),
1,38 (3H, d,m, CH3) , 1,5 až 2,4 (12H, m, C^) ,
2,4 až 3,2 (4H, m, CH a C^), 3,3 až 3,8 (2H, m,
4,2 až 4,8 (2H m, CH) . = 4,2 x 10_7
-2-D-ineey ^ropanO!)-L-prolio 46)CXN -(3-glycy lУ1iu-2----
-reeylrroprrnul))LLppoUio
Rf(1) = 0,51
Rf(4) = 0,52
Rf(5) = 0,51
Rf(8) = 0,1 mooekulová hřmenost = 274 [c-] d = -93,6
Rf(6) = 0,16
Rf(7) = 0,09
Tabulka pokračování 49; №*-(3-L-isulnucilthiu-2-D-yenykppoppαtyl)-L-ppolit ?
55t Nrhydroxysukcinimid ester С1!^€^].1^пу iyClupnntankarOoxylové 56 ; NN°-Ci ykopeetannklгbonty-N-tnrc.Outyloxykarbotyy-L-lysin
57; ^-cyklopentatkapbonty-N^-terč.OutyloxiCarOonfl-L-yyгtn-i-hУy(;Jruχysukiitimiě ester 58; N<°-cc'ykoppetankcrbontl-N--terc. OIrryyuxyyaαbouny--L-ysyk-L~feny a r «
59; N t[3-(N -cykl-opentankarOonnl-yysyl-L-fntyylyant’kthiu) -2-D-mmnylpoopanoul] -L-proyin 2/* 60; N0:ι6'-[3-N—-iyClopettatyaPoonnk-L-lysyl-L-fenylalannkthio)-2-D-menykptopρatoУ]-L-prolin
71; p^po-^:^-^<^ílutamyl-^]^-^.fe^i^l.alatin0nn2yynstnp NMR cT (v CI^OD) : 1,17 (3^ O.d., CH^ , 1,8 ai 2,4 (4h, m, CH2) , 2,4 ai 3,3 (3H, m, CH a C^), 3,5 ai
3,9 (2H, m, CH2), 4,11 (2H, S, C^), 4,3 ai 4,7 (1H, m, CH), I50 = 6,5 x 10“8
Rf(D = 0,42
Rf(2) = 0,35
IR (CDC1q) má CarOonylové pásy při 1 738, 1 784 a 1 812 cm 1
Rf(1) = 0,52
Rf(2) = 0,83
Rf(3) = 0,69
IR (CHHl.) má CaoOony1uvé pásy při 1 650 ai 1 680,
690 ai 1 720 cm a NH-pás ppi 3 340 a 3 440 cm
IR (CHd-) má CarOonylové pásy ppi 1 640 ai 1 720,
742, 1 787 a 1 815 cm-1
Rf(l) = 0,66
Rf(2) = 0,67
Rf(3) = 0,645
Rf(4) = 0,76
IR (CDdj má karOonylové pásy při 1 650 ai 1 720 cm Rf(3) = 0,73
Rf(3) = 0,16
Rf(4) = 0,52
Rf(5) = 1,58
Rf(l) = 0,69
Rf(2) = 0,61
Rf(3) = 0,66
IR (CHHlj má a NH pásy při
Carbonylové pásy při
310 a 3 418 от’1
650 ai
750 cm ’
72; pyro--L-gykУayyk--L-fnnylalanán
73; N^-^Hp^o-L-^lumm^-L-fntylalatylthiu)-2-D-yenyУppoppatylk-L-prolin 77; [з-Ч^-Ьоппоуl-lLtp^to- fythio)-2-D-yetylpropantuk]-L-prolin
Rf(1) = | 0,28 | ||
Rf(2) = | 0,35 | ||
Rf(3) = | 0,51 | ||
analýza | amino^isdin | ^1,06 | РЬП1,оо |
Rf(l) = | 0,43, 0,45 | ||
Rf(2) = | 0,63 | ||
Rf(3) = | 0,48 | ||
Rf(4) = | 0,75 | ||
analýza | amynnOcyunin | Glu0,99 | Phei,00 Proi,07 |
mmoekulová hmoonost = 507
Rf(2) = | 0,70 | ||
Rf(3) = | 0,68 | ||
Rf(4) = | 0,59 | ||
Rf(5) = | 0,74 | ||
Rf(6) = | 0,56 | ||
Rf(7) = | 0,73 | ||
NMR y (v CDDOD): | 0 1,10 (3^ O.d. | , CH3j, 1,65 ai | |
2,3 (4H, | , m, CH2) | , 2,6 ai 3,1 (3H, | m, CH a C^p , |
Tabulka pokračování
80; bennoyУ-L-feiylllamii
80; N00- -3- (NN-benioyl-LLfnniy111пуlthio)22-Dmetylpryplni)yУl -L-prolin
CH2), 4,05 až 4,35 (1H, m, CH), CH) , m, aromaaický H) až 141,5 °C
-116,8
0,52
0,70 : 0,56
0,61
0,75 : 0,56
0,74
81; bennoolglycin 81; N^-^-N^-^nno^glycylthio) 2 2-D-metylprypannyy] -L-prolin
2; -(N-bbenzyy1-L-llliylthyo)2 2-Dmntylprypani>yy] -L-prolin
89; kyselina /2-Ьпп2оуУ^пу13,2 až 3,7 (43, m,
4.8 až 5,1 (13, m,
6,88 až 7,82 (103, teplota tání = 140 &ÍD = -37,3 moOekulyvá hmoonost = 468
D
Rf(1)
Rf(2)
Rf(3)
Rf(4)
Rf(5)
Rf(6)
Rf(7)
NMR ď (v CDCI3 + CD3OD) : 1,19 (33, b.^ CH^ 1,5 až 2,4 (43, m, CH— , 2,5 až 3,3 (53, .m, CH a CH2), 3,3 až 3,8 (23, m, C^), 4,0 až 4,4 (13, m,
CH), 4,8 až 5,2 (13, m, CH), 7,23 (53, s, aromaaický H), 7,2 až 7,9 (53, m, aromaaický H) I5Q = 2,4 x χ 10“7 teplota tání = 188 až mooekulová hmoonost = >1D = -пъо
Rf(2) = 0,60 Rf(3) = 0,46
R. (5) = 0,60 Rf(6) = 0,55 Rf(7) = 0,68
NMR < (v CDD13): 1,15 (43, m, CH2), 2,5 až 3,2 (33, m,
3.8 (23 d, CH2) (13, s, cooh) i5 0 mooekulová hmoonost =
R. (6) = 0,58 Rf(7) = 0,75
NMR cT (v CDD1J : 1,19
CH3), 1,5 až 2,4 (73, (23, m .¾) (13, m, CH), 7,45 až 8,1 (53, m, krystalo^ce o etyl^acetát^u a hexanu vede k získání °C,
191 °C
378 (33, b.d.
CH3), 1,6 až 2,4 ,jH2) , 2,5 až 3,2 (33, m, CH a CH3) , 3,3 až m, СНз), 4,1 až 4,6 (13, m, CH), 4,30 (23 7,2 až 8,1 (53, m, arymaaický H), 10,10 1,1 χ 10-7
392 (63, b.d.., CH^ 1,22 (33, b.d^ 33, m, CH a CH3), 3,4 až 3,9 ^n2), 4,1 až 4,45 (13, m, CH), 4,6 až 5,0
CH), 7,45 až 8,1 (53, m, lrymaaický 3).
alanylthóopoopion0vá | bílých krystal! a tepJote tení | 151 až 152 |
elemeeiáriϊ analýza: | ||
vypočteno: C 63,85 H 5,36 | N 3,92 | |
illezeno : C 62,80 H 5,31 Rf(1) = 0,65 R.(2) = 0,72 Rf(3) = 0,68 Rf(4) = 0,83 | N 3,90 | |
90/ №*-^-(Na-benno^lL-teny1- | Rf(2) = 0,73 | |
lllnylthyo)priplniyУ] -L-3,4- | Rf(3),= 0,59 | |
-dehydrooproin | R. (4) = 0,615 Rf(5) = 0,73 |
Vylsёl0ivky k tabulce I:
IR = absorpční speklum!!. íffřčterriétho světla m = sřtdněě siiný pás s = silýý pás
b.d. = ΐη^ηζίνηί pás
1/ Sloučenina z příkladu 24 a tato odppríddrí sloučeninám z příkladu 45 a 49, zbaveným ochranných skupin, pro něž byly uvedeny fyzikáiněchtíίcké ílistiosti.
2/ Sloučenina z tohoto příkladu odpovídá skupin, pro niž byly fyzkkáinёtheíίcké Tabulka II
Sloučenina
Terc.OutinkaiPooílglycii [3- (NN6-ttrc.bttřnkřrbonnlo glycylthOo)2----сttylpropřiryl]-
-L-prolin .
iloučmině z příkladu 60, zbavené . ochranných ^ι^ΟίΟδ^ uvedeny.
N&- [2- (Να'-οι^νΡΐ-ίηίγ^ΙΐίγΙOhio)aprakrírl]-L-ρrolií ί [ N N - [2ff eja^njthio) propřioyl] -L-proli^í
Vlastnost
Ot^^n táií - l34 iž I36 °C
MD = -101,7
Rf(6) = 0,56
Rf(7) = 0,63
NMR Š (v CDD13): 1,21 (3H, d, ΙΙ^ , 1,35 (Ж S, CH3), 1,5 řž 2,5 (4H, m, CH2), 2,5 řž 3,9 (5H, m, CH a CH2), 3,9 řž 4,8 (3H, m, CH a CH2), 6,5 řž 7,4 (1H, m, NH), 11,11 (1H, S, COOO).
MD = -44,4
Rf(6) = 0,83
Rf(1) = 0,58
Rf(2) = 0,78 .
Rf(3) = 0,59
Rf(4) = 0,59
Tabulka III
Sloučenina č.
Název sloučeniny
Betίorl-D--ennlřlřίiί
Bet ízoI-^D—a lnn ii
Benίorl-D-ltuciί
Ac c ty 1-D-fti y lil rnii
Pr o p a iíoIí ID -trypt of a i
Be n ízoIi I— -trypt of a i
Cy y k-o p e n i a η ί k rb o oíI-D - a lrni i
Be n nz» oIs a rk o s in
Be n ízi ol~—--g lut a min
Be t^ol-I--p po o i i
Cy 1c loh e x čí a íkřp o oíI-' ID—ir lnni i Terc.butinkaiPoníl-D-aliiii
Cy llopropaηίkipoonl-D-alinií
C1 lc loh e x a n ikip boilg ly c ii
1y к loh e χ a η ί kil) o onls a rko s ii
1y к lop ro p a n i kil) o onlg lyci i
Adaimntannylglycii
Cy к lo h e n a niknrboy 1 -I.-a lnn in k a III pokračování
Ccllohexxazrenyl-D-alrniz
CylkohexxaZknbonyl-D-txxylalrziy
Cy У k.oh ex а гУнЬ^у----lnu c in
Cc у к o ia í x a аУааЬопу 1 -D -tryptof rz
CC i k. o h e x xank boy у 1 -D-fe xylo g- <c in
Cyklohexankarbony ^П-шоПЬюпрп
Cy к kLohe x a n n krb o onl-D--g lut a min
Adammn taanу ЗУ-D--Гми
Acdy I-D-Iiucíz
Terč.buχrloa-bx1bоly1-D-teny1glyeiy y-HexxaУanbbny1-L-aIrniz n-He xaa Ζιι^ηηΐ- D -a t-rniz
Acdy l---ilrziy
CC- l ohxx xaZarbony Z->-δθ lnucin
Acety1-D-vvliz
Cy к lohe x a ta Z a ab o n у-1->-vvlin
Accltl-L-ppyliz n-Bu ta n к a r Id o n у1----a lan in
Propaayn1---alrzin
Isoproprz к а г b o n у1---- a láni, z n-Pe n z а n к a iforny-----a lan nin
33x1x131^0031-D-tezylrlnniz n-He xaaZaabooyl-D-Iiucin n-He xannarboonL·--vvlin n-He i x гУ^Ьо! у ЗУ--ryptof rz
Isnbutrnкarboayl----rlrniz z-B^nzoil--·-r lrziz n-He x xt гУкгЬоау 1 -D-prr liz
C У lo b u t а n к ar rb о nnli-- -r lnz in
Ci У ко ia e; a r b o n oZ-D--11 o Збо lxuc in
Terč.ОиХаптоХуУкагЬопу-З-аТапРп
Cy У loh e i? p а n У a nb о nyl--- a lnni n
Nw- [з-(N*-bezyoa1-D~fezy1alrzyl·thio)-t-D-oxtylprapryoylj -L-proliy
N**- [З- (N^^xzzy^-^xlrzylt^wH^F-mxXy^nppxyn^j tL-proliz
N°*~ [3- (N^bnxzyy ЗУ-О-lexuy lXhw i -2-D-moχy1oPt>0Proyl1-L-ppУliy №*- [3- (NN--reXy1-D-feУz1alnУz1tiil) -23-ооХу lproprnoy lj -L-pryliz №*- [3- (N^-jpo^nn^-D^r^Po^^^n) 22-D-oxXylproprzoy l- -L-proliy nP*-[3- (N^_0eazoyl --•Ι^^Ζι^^Ι^ο^^Ο-οχΙ^Ι^οιοχιζ0!- -ЗЬ-^туЗу N0--[3- (NN-cc-konPxZarnarbonn^ddalon^X^n) -З-ооХу^ьо^уу1-- -L-proliy
N -^3-N tnχnzol1salbaly1thin) t2tD-meXy1pPonρnyyП-У-Ь-рто^у
З (NN-nxzoll----glltamo-Xhla)-2-D-oeχylproprnoyзО 3-proliz -f 3- (^-Dnxzoi^iL-ppolylthio) -2----017^0^137^ -L-ppoJLiz
N**- [33 (No0'tcyklohexnУknrnayy iy-D-al-azy 1xííi) 33-oety ^ьо^пу01- -L-praliy
N t[3- (N^tirč . 3^)(1^003---^33033061^^^^0^ -L-proliz
3- (^-CT/^oppy^n^rbony3-0-33^1^11^0^2^^0^1^0^11301] -L-proliz
ÍL·-[3- (N^Oteyk0oiχχanyarrboylggyyc1tiio) -2---оtylpropayoy 1] -Ltproliz [3- (N^-cyklo^xxrykiboy^iapbysyl^w H^^mxty 1propxrna11 -L-proliz ^--33-tcyaloprnpar^z^anbоoy:^ggl^yy1lliio) 22-D-oeИЗ^о^уоо-- --t -prnliz k a III pokračování N°p [3- (N^-addamy řoyřjj^jtliio) p2pD-InitylppoyařnyI.J-IlppoI.-o N06- [3- (4Pe Cy)lyohtxřokapboyol-LLalřnolthiy) -2pDpmety jropanojj -L-prolin [3- (^í4ecykyohtxřomitylkařboynl“D”Př)jjolthiy) p2p-piityypropanooy- -
-L-proHo
N*-[3- (NO°-cykyo0eeankopaon00pDpDeeyyařařnythiy) -2pDpmetyJ-propanoyl·] -
-L-p^i^Ií^o
N^-C 3- (N peykyyhtxanOařroyyypDDleejeythiy)-2pDpiityyprypannyy‘) . ' -L-prolio №*-[3- (N^terc. butřlyχykařboyny-D-Př)jnolthiy)p2pD-ietylprypanoyyl -L-prolin ^-[з-(NpcykyyhetařOarbonynpD-DryypoyyythLУ)p2pDpiitylpropřOOy 1] -L-prolio
N04- [3- (N^c^fLyOex^řorřrnj-D^pyjj^jthio) ^--mejpro panoyyJ -L-pryHo
N^-[3- (N peyklyhtxřnkařboУny-D-mityloyolthiy) -2pDpietylpryrřnyyy] -L-prolio N-[3- (NONICykyyhexankarbyny l·D-I^l)ntřiyl)Lhiy) -2pietylpropřoyyy] -L-pryyio n°5[3- (N-Iřdřm^j^Otřnoy 1-^--1^1 thio) p 2-D-mitylpгypanool.]-Lpproyio
N®-- [3- (^-aaceidpDi ltucylthi.y) p2pDpm^et^;Lpropřn(^y^1.] iLppryyio
N I(3-I-pařano1thiyI2---iety1ppypařoyy) -L-ppyOio [3- (N^-terc. butyyyχykařboУo1pDp:If to1lgyce1thiy) ^^-me^bpropřnУoyjiLpproyio oč
N - (3pD-feno1yУ1eyythiop2p-piityypгypařoy1) -^-^-^-^p^c^^i^o
N04-]-- (N pnI h^exankarbyn1 ^L-abanybthio- p2pDpmetf1.prypř^(^y^1] -Lippobin
N04- [3- (N pO-htxanOařroУnypP-Přano1thiy) ρ2ρ-ρϋ^l·propřnoy].] -L-prolio
N4-'-—- (uf-·řett1lp--řlřoyythiy) -p-ppy ]-io
-[3- (NN-e1klyhtxajlnařbonylyL^so^mje1thiy) p^D-mm^ylpro panool·]-L-probio №*-[з- (Nf-řett1b--pvabylthiy)p2pDpmmeybprypřnool·]Ч-^уЬто „ 3- (NN°ccУkУ0exankokayny01D-Daby1thio)p2-D-ietyУpropanny1]i
-L-probio №°[3- (NN-7řettbpP-IPryybthiyj2p--ietylprypařnyb] -L-proGo ^3°73- (Nsf-n-ppeOařoy1pDpPřařιo1thiy) ^^-mmt^l^o^nyj- ^-pryl.-o <-[3 - (NN°prУoPřnybpppařařo1thiy)--2pD-ietybprypřnoyb] ^-prol·.0 n°—I3- (N7-isy^o^aoj^D-abaajtlhio) p2pDpiitylrropřnoo1] -Lppryyio №^[3- (N^y-heeařojP-áUjthiy) -^^--^^ρο^ιο^1 -L^poMo N-[3- (N0-4noheeař0arЬyny01Dp-feyyařař01thiyj2ρDpietylprypřnyy1)] -L-proDirn (N6-n-hexřnkřrbony 1pDpPřyyitУytjce1thiy- p2pDpmetyyprypaooyJJ -
---proyio
N -[3-N -o-htxan0ařroyyy-Ppvařy1thiy)p2---ietyl·ptypanoy1] -L-prol-io ^°- [3- (NN-o-hω^é^ř0ařts^y^n1)I—-:r1royf^1)thi^y) ^^-mmt^^ropřnyj- ---proJlio
N^--3p (Ň-dtУpentřnyy 1---31·πο1 thio) l^o^yyjj --pprolio №^[3- (№-butjιoyy 1p-pa1řno1thiy) -2pDpiityУrrypřnoyb)] ^-^roHo
Při získávání fyzikálně chemických hodnot bylo užito chromatografie na tenké vrstvě
silikagelu a | následujících systémů rozpouštělei: | ||
Systém | 1 | směs metanolu a chloroformu v objemovém poměru 1:1 | |
Systém | 2 | [Rf(2)] = | směs benzenu, vody a n-butanolu v objemovém poměru 9:1:9 |
Systém | 3 | směs kyseliny octové, vody a n-butanolu v objemovém poměru 26:24:150 | |
Systém | 4 | faf(4)] = | směs n-butanolu, pyridinu, kyseliny octové a vody v objemovém póměru 15:10:3:12 |
Systém | 5 | [Rf (5)] = | směs n-butanolu, kyseliny octové, etylacetátu a vody v objemovém poměru 1:1:1:1 |
Systém | 6 | LR f(6)] = | směs chloroformu, metanolu a kyseliny octové v objemovém poměru 2:1:0,003 |
Systém | 7 | [Rf (7).] = | směs n-butanolu, kyseliny octové a vody v objemovém poměru 4:1:1 |
Systém | 8 | [Rf (8)J = | směs etylacetátu a kyseliny octové v objemovém poměru 38: |
Získané | hodnoty NMR-spektra byly zjištěny při 60 MHz. | ||
Hodnota | Ι5θ: koncentrace, inhibující na 50% enzym pro přeměnu angiotensinu. |
Systém к provádění zkoušky:
ml směsi sestává z 0,6 ml boritanového pufru, 0,2 ml 17,5 mM benzoyl-Gly-His-Leu-boritanového pufru, boritanového pufru s obsahem zkoumané látky a enzymu, inkubace 60 minut při 37 °C.
Boritanový pufr:
0,1 M kyseliny borité s obsahem 0,8 M NaCl a 0,1 M Na2CO3 s obsahem 0,8 M NaCl se smísí a pH se upraví na hodnotu 8,3.
АСЕ: práškový acetonový extrakt králičí plíce.
Měření: Absorpce v ultrafialovém světle při 228 nm po extrakci benzoyl-Gly etylacetátem.
Claims (16)
1, íyínaaující se tím, že ponuce odp^vídaící báze za
18. Způsob podle bodů
1, vyznačující se tím že se ponuce odpooídající báze za
17. Způsob podle vzniku soli s lysinem.
bodu
1, vyzi^ě^auující se tím, že se
0OUžije odpovídající báze za vzniku
16. Způsob vzniku draselné podle sooi.
bodu
1. Způsob výroby inhibitorů enzymu pro přeměnu angiotensinu typu peptidyldipeptidhydrolázy obecného vzorce I
O II R-A-S-(CH„)-CH-C-R„ z n i z (I) kde
R znamená atom vodíku, for-myl, propanool, butanc^l, fen^la^ť^^t^Jl, fenyloryolnoyl, benzoo^, cyklopeenylkar-bonny, těre.OutlOoxlklrOonil, cyklypoěiylkalroУiL---fystl, pyro-L-gΙ^ιιπιΙ-Ε-Ι^υΙ, L-lysyl, L-argi-ny]. nebo pyro-Lfglttllyl,
A znamená , L-fěiylallnil, glycyl, D,L-alanylr D-alanyl, L-alany!,
L·-·trlp^of;^^:l, d,l-tryppoffi, D-iry^titofyl, D,L-tyrosy1, D-t^osy!, L-t^osy!, D,L-isyf leucyl, D^so^^y!, L-j.sУlětcy 1, DzL-leucyl, D-leucyl, L-leucyl, Dlb-yssidyl, D-hýstidy 1, L-hУttjUll, DrL-va^ 1, D-va^l nebo jejichž lLlalalinoskupina je vázána amidovou vazbou na R, v případě, že R má odlišný význam od atomu vodíku, ořeeeli v případě, že R znamená benzoo^, je fěiylllliyl v racemické formě,
Rj znamená atom vodíku nebo metyl, .
R2 znamená L-prooin, L-3,4-dehyluryoo0ii, D,L-3,4-UehyУuryor0ii, L-3fУydroxχyoo0ii, L-4-Уldroxyyor0ii nebo kyšelinu L-tУilZУlUdiklaoboxyOovyt, jejíchž iliiosktpina je vázána iliUyvou vazbou na sousední skupinu li
-C- a n znamená celé číslo 0 nebo 1, přečeli v případě, že n = 0, R- znamená meeyl, a jejích scoí, ořilaeeinýiУ z flziyOogickéУy hlediska, vyzna^u^cí se tím, že se uvede v reakci sloučenina obecného vzorce II
O
R3-S-(C^n-CH-C-CH (II) kde
R- a n maj shora uvedený význam,
R3 znamená lceěyl, se sloučeninou obecného vzorce R2H kde atym vodíku je vázán na atom dusíku ilinoskupinl a
R2 má svrchu uvedený význam, za vzniku sloučeniny obecného vzorce III
II Ra-S-ÍCHo) -CH-C-R.
2. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že se reakce se sloučeninou obecného vzorce R2H provádí za přítomnosti 1,1'-karbonyldiimidazolu nebo dicyklohexylkarbodiimidu a poslední reakční stupeň se provádí za přítomnosti 1,1'-karbonyldiimidazolu.
2 η , 2 (IV) kde
Rp R_2 a n mají svrchu uvedený význam, a takto získaný produkt se uvede v reakci se sloučeninou obecného vzorce V
R-A (V) kde
R a A mají svrchu uvedený význam, za vzniku sloučeniny obecného vzorce I
Q r-a-s-(cho) -CH-C-R. . z n , 2.
(I) R1 kde
R, A, Rp R2 a n mají svrchu uvedený význam, která se popřípadě převádí reakcí s anorganickou nebo organickou bází na sul, přijatelnou z fyziologického hlediska.
3. Způsob podle bodu 2, vyznačující se tím, že se reakce provádí se sloučeninou obecného vzorce V, v níž R znamená benzoyl.
3 2 n i 2
I (III) ' R1 kde
R-, R-1 R3 a n mají svrchu uvedený význam, načež se odstraní R3, za vzniku sloučeniny obecného vzorce IV
O
II
HS-(CH0) -CH-C-jU
4. Způsob podle bodu 2, vyznačující se tím, že se reakce provádí se sloučeninou obecného vzorce V, v níž R znamená formyl, acetyl, propanoyl, butanoyl, fenylacetyl a fenylpropanoy1.
5. Způsob podle bodu 2, vyznačující se tím, že se reakce provádí se sloučeninou obecného vzorce V, v níž R znamená cyklopentylkarbonyl nebo terč.butyloxykarbonyl.
6. Způsob podle bodu 2, vyznačující se tím, že se reakce provádí se sloučeninou obecného vzorce V, v níž R znamená cyklopentylkarbonyl-l-lysyl nebo pyro-L-glutamyl-L-lysy1.
7. Způsob podle bodu 2, vyznačující se tím, že se reakce provádí se sloučeninou obecného vzorce V, v níž R znamená L-arginyl, L-lysyl nebo pyro-L-glutamyl.
8. Způsob podle bodu 2, vyznačující se tím, že se reakce provádí se sloučeninou obecného vzorce V, v níž R znamená benzoyl, A znamená fenylalanyl, se sloučeninou obecného vzorce II, v níž R^ znamená metyl a n je 1 a se sloučeninou HR2, která znamená L-prolin.
9. Způsob podle bodu 1 pro výrobu inhibitoru enzymu pro přeměnu angiotenzinu obecného vzorce I
O ii
R-A-S-(CH ) -CH-C-R2 (I) kde
R znamená atom vodíku, formyl, acetyl, propanoyl, butanoyl, fenylacetyl, fenylpropanoyl, benzoyl, cyklopentankarbonyl, terč.butoxykarbonyl, cyklopentankarbonyl-L-lysyl, pyro-L-glutamyl-L-lysyl, L-lysyl, L-arginyl nebo pyro-L-glutamyl,
A znamená L-fenylalanyl, D-fenylalanyl, D,L-alanyl, D-alanyl, D,L-tryptofyl, D-tryptofyl, D,L-tyrosyl, D-tyrosyl, D,L-isoleucyl, D-isoleucyl, D,L-leucyl, D-leucyl, D,L-histidyl, D-histidyl, D,L-valyl nebo D-valyl, jejich alfa-aminoskupina je vázána imidovou vazbou na R,
Rj znamená atom vodíku nebo metyl,
R2 znamená L-prolin, L-3,4-dehydroprolin, D,L-3,4-dehydroprolin, L-3-hydroxyprolin, L-4-hydroxyprolin, L-thioazolidin-4-karboxylovou kyselinu nebo L-5-oxoprolin, jejichž iminoskupina je vázána imidovou vazbou na skupinu
O
II -C- a n znamená celé Číslo 0 nebo 1, přičemž v případě, že n znamená 0, znamená R^ metylovou skupinu, vyznačující se tím, že se reakce provádí se sloučeninou obecného vzorce V, v němž A má význam, uvedený v bodu 1.
10. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že se reakce provádí se sloučeninou obecného vzorce V, v níž R znamená benzoyl, A znamená D-fenylalanyl nebo L-fenylalanyl, se sloučeninou obecného vzorce II, v níž n je 1 a znamená metyl a se sloučeninou HR2, která znamená L-prolin.
11. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, Že se reakce provádí se sloučeninou obecného vzorce V, v níž R znamená atom vodíku, A znamená L-fenylalanyl, se sloučeninou obecného vzorce II, v níž n je 1 a R^ znamená metyl a se sloučeninou HR2, která znamená L-prolin.
12. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že se reakce provádí se sloučeninou obecného vzorce V, v níž R znamená atom vodíku, A znamená D-fenylalanyl, se sloučeninou obecného vzorce II, v níž n je 1 a R^ znamená metyl a se sloučeninou HR^, která znamená L-prolin.
13. Způsob podle bodu 1 pro výrobu fyziologicky přijatelných solí sloučeniny obecného vzorce I
II
R-A-S-(CH2)n-CH-C-R2 (I) kde
R znamená atom vodíku, formyl, acetyl, propanoyl, butanoyl, fenylacetyl, fenylpropanoyl, benzoyl, cyklopentankarbonyl, terč.butoxykarbonyl, cyklopentakarbonyl-L-lysyl, pyro-L-glutamyl-L-lysyl, L-lysyl, L-arginyl nebo pyro-L-glutamyl,
A znamená fenylalanyl, glycyl, alanyl, tryptofyl, tyrosyl, isoleucyl, leucyl, histidyl nebo valyl, jejichž alfa-aminoskupina je vázána amidovou vazbou na R,
R^ znamená atom vodíku nebo metyl,
R2 znamená'L-pyrolin, L-3,4-dehydroprolin, D,L-3,4-dehydroprolin, L-3-hydroxyprolin, L-4-hydroxyprolin, L-thiazolidin-4-karboxylová kyselina nebo L-5-oxoprolin, jejichž iminoskupina je vázána imidovou vazbou na skupinu
O
II
-C- a n znamená celé číslo 0 nebo 1, přičemž v případě, že n znamená 0, znamená R metylovou skupinu, vyznačující se tím, že se sloučenina obecného vzorce I uvede v reakci s vhodnou anorganickou nebo organickou bází.
14. Způsob podle bodu 1, vyz^e^auující se tím, že se použije odpooídající báze za vzniku sodné, draselné, vápenaté nebo hořeinaté sooi nebo sooi s benzathianem, hydrabaminem
N-metyl-D-gukaaminem, arginínem nebo lysň^(^m.
15. Způsob sodné sooi.
podle bodu
16, 17, 18 a 19, íyínajijící se tím, že se reakce provádí se slouitninou obecného vzorce V, v níž R znamená benzoyl,
A znamená fenylalanyl, se slyuitninyu obecného vzorce II, v níž R r znamená mej^y., která znamená L-prolin.
Applications Claiming Priority (9)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US94128978A | 1978-09-11 | 1978-09-11 | |
US95818078A | 1978-11-06 | 1978-11-06 | |
US06/064,899 US4698356A (en) | 1979-08-14 | 1979-08-14 | Anti-hypertensive agents |
US06/064,902 US4690940A (en) | 1979-08-14 | 1979-08-14 | Anti-hypertensive agents |
US06/064,900 US4690939A (en) | 1979-08-14 | 1979-08-14 | Anti-hypertensive agents |
US06/064,901 US4695577A (en) | 1979-08-14 | 1979-08-14 | Anti-hypertensive agents |
US06/064,903 US4698355A (en) | 1979-08-14 | 1979-08-14 | Anti-hypertensive agents |
US06/064,898 US4690938A (en) | 1979-08-14 | 1979-08-14 | Anti-hypertensive agents |
US06/064,897 US4690937A (en) | 1979-08-14 | 1979-08-14 | Anti-hypertensive agents |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CS615079A2 CS615079A2 (en) | 1985-08-15 |
CS242857B2 true CS242857B2 (en) | 1986-05-15 |
Family
ID=27578299
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CS796150A CS242857B2 (en) | 1978-09-11 | 1979-09-11 | Method of enzyme inhibitors production |
Country Status (15)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP0009898B1 (cs) |
AT (1) | AT390795B (cs) |
AU (1) | AU532424B2 (cs) |
BG (1) | BG34463A3 (cs) |
CS (1) | CS242857B2 (cs) |
DE (1) | DE2965443D1 (cs) |
DK (1) | DK376179A (cs) |
FI (1) | FI71749C (cs) |
GR (1) | GR73585B (cs) |
HU (1) | HU187258B (cs) |
IL (1) | IL58223A (cs) |
IT (1) | IT1193214B (cs) |
NZ (1) | NZ191524A (cs) |
PH (1) | PH19104A (cs) |
PT (1) | PT70158A (cs) |
Families Citing this family (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
ZA794723B (en) * | 1978-09-11 | 1980-08-27 | Univ Miami | Anti-hypertensive agents |
ZA802420B (en) * | 1979-05-18 | 1981-04-29 | Squibb & Sons Inc | Aminoacyl derivatives of mercaptoacyl amino acids |
PT70158A1 (en) * | 1980-03-03 | 1982-03-01 | Univ Miami | Process for preparing anti-hypertensive agents |
US4734420A (en) * | 1980-03-05 | 1988-03-29 | University Of Miami | Anti-hypertensive agents |
US4690936A (en) * | 1980-03-05 | 1987-09-01 | University Of Miami | Anti-hypertensive agents |
EP0036713B1 (en) * | 1980-03-05 | 1984-01-18 | University Of Miami | Angiotensin converting enzyme inhibitors |
FR2480747A1 (fr) * | 1980-04-17 | 1981-10-23 | Roques Bernard | Derives d'acides amines et leur application therapeutique |
US4512979A (en) * | 1981-03-23 | 1985-04-23 | Merck & Co., Inc. | Dipeptides containing thialysine and related amino acids as antihypertensives |
AT386603B (de) * | 1981-06-19 | 1988-09-26 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Verfahren zur herstellung von neuen prolinderivaten |
JPS57209270A (en) * | 1981-06-19 | 1982-12-22 | Chugai Pharmaceut Co Ltd | Proline derivative |
HUT46044A (en) * | 1986-11-21 | 1988-09-28 | Richter Gedeon Vegyeszet | Process for producing immunstimulant peptides inhibiting multiplication of leukaemic cells and pharmaceutics comprising same |
CN1081650C (zh) * | 1995-12-27 | 2002-03-27 | 罗纳-普朗克·维斯科苏希公司 | 缩聚物,尤其是聚酰胺6,6后冷凝的方法 |
US20110081367A1 (en) | 2008-06-14 | 2011-04-07 | Veredus Laboratories Pte Ltd | Influenza sequences |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AU509899B2 (en) * | 1976-02-13 | 1980-05-29 | E.R. Squibb & Sons, Inc. | Proline derivatives and related compounds |
US4053651A (en) * | 1976-05-10 | 1977-10-11 | E. R. Squibb & Sons, Inc. | Compounds and method for alleviating angiotensin related hypertension |
AU518147B2 (en) * | 1976-12-03 | 1981-09-17 | E.R. Squibb & Sons, Inc. | Derivatives of thiazolidine, thiazine and morpholine carboxylic acids |
US4091024A (en) * | 1976-12-03 | 1978-05-23 | E. R. Squibb & Sons, Inc. | Pyrrolidine and piperidine-2-carboxylic acid derivatives |
US4116962A (en) * | 1976-12-03 | 1978-09-26 | E. R. Squibb & Sons, Inc. | Pyrrolidine and piperidine-2-carboxylic acid derivatives |
US4113715A (en) * | 1977-01-17 | 1978-09-12 | E. R. Squibb & Sons, Inc. | Amino acid derivatives |
US4108886A (en) * | 1977-03-11 | 1978-08-22 | E. R. Squibb & Sons, Inc. | Thiopropanoylamino acid derivatives |
-
1979
- 1979-09-04 GR GR59962A patent/GR73585B/el unknown
- 1979-09-10 DE DE7979301854T patent/DE2965443D1/de not_active Expired
- 1979-09-10 NZ NZ191524A patent/NZ191524A/xx unknown
- 1979-09-10 EP EP79301854A patent/EP0009898B1/en not_active Expired
- 1979-09-10 FI FI792806A patent/FI71749C/fi not_active IP Right Cessation
- 1979-09-10 AT AT0596279A patent/AT390795B/de not_active IP Right Cessation
- 1979-09-10 PT PT197970158A patent/PT70158A/pt unknown
- 1979-09-10 AU AU50705/79A patent/AU532424B2/en not_active Ceased
- 1979-09-10 DK DK376179A patent/DK376179A/da not_active Application Discontinuation
- 1979-09-10 HU HU79MI656A patent/HU187258B/hu not_active IP Right Cessation
- 1979-09-11 CS CS796150A patent/CS242857B2/cs unknown
- 1979-09-11 IL IL58223A patent/IL58223A/xx unknown
- 1979-09-11 IT IT25612/79A patent/IT1193214B/it active
- 1979-09-11 BG BG7944830A patent/BG34463A3/xx unknown
-
1981
- 1981-03-23 PH PH25401A patent/PH19104A/en unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
NZ191524A (en) | 1982-12-07 |
BG34463A3 (en) | 1983-09-15 |
EP0009898A1 (en) | 1980-04-16 |
PT70158A (en) | 1979-09-30 |
AU532424B2 (en) | 1983-09-29 |
ATA596279A (de) | 1989-12-15 |
DE2965443D1 (en) | 1983-07-07 |
PH19104A (en) | 1986-01-02 |
EP0009898B1 (en) | 1983-05-18 |
IL58223A (en) | 1984-01-31 |
HU187258B (en) | 1985-12-28 |
AT390795B (de) | 1990-06-25 |
FI71749B (fi) | 1986-10-31 |
DK376179A (da) | 1980-03-12 |
CS615079A2 (en) | 1985-08-15 |
IT1193214B (it) | 1988-06-15 |
FI71749C (fi) | 1987-02-09 |
GR73585B (cs) | 1984-03-26 |
AU5070579A (en) | 1980-03-20 |
FI792806A (fi) | 1980-03-12 |
IT7925612A0 (it) | 1979-09-11 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US5700827A (en) | Amino acid derivatives, processes for the manufacture thereof and pharmaceutical compositions (II) containing these compounds | |
FI67539B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av nya terapeutiskt anvaendbara peptidyl-ng-karboxyl-arginaldehyder | |
CA2234610C (en) | New amino acid derivatives, processes for preparing them and pharmaceutical compositions containing these compounds | |
US4885283A (en) | Phosphinic acid derivatives | |
US4692459A (en) | Anti-hypertensive agents | |
EP0216539A2 (en) | Novel amino acid derivatives | |
US4707490A (en) | Anti-hypertensive agents | |
AU611850B2 (en) | Oligopeptidyl nitrile derivatives, agents containing them, a process for their preparation, and their use | |
CS242857B2 (en) | Method of enzyme inhibitors production | |
NO871295L (no) | Fremgangsmaate for fremstilling av terapeutisk aktive aminosyrederivater. | |
FR2531951A1 (fr) | Derives peptidiques inhibiteurs de proteases acides, procede pour leur preparation et medicaments qui en contiennent | |
NZ242246A (en) | Amidinophenylalanine derivatives and pharmaceutical compositions. | |
NO172935B (no) | Analogifremgangsmaate for fremstilling av terapeutisk aktive amid-derivater | |
US5190921A (en) | Amino acids and peptides having a modified tyrosine residue, their preparation and their application as medicaments | |
NO831112L (no) | Fremgangsmaate for fremstilling av blodtrykkssenkende midler | |
US4698356A (en) | Anti-hypertensive agents | |
US4690939A (en) | Anti-hypertensive agents | |
US4695577A (en) | Anti-hypertensive agents | |
US4690940A (en) | Anti-hypertensive agents | |
US4698355A (en) | Anti-hypertensive agents | |
US4690938A (en) | Anti-hypertensive agents | |
KR840002357B1 (ko) | S-(아실아미도아실)메르캅토아실 프롤린류의 제조방법 | |
SI8811355A (en) | Process for preparing of L-alanine-L-proline derivatives | |
IE48823B1 (en) | Novel anti-hypertensive mercaptoacylamino acid derivatives,their preparation and use | |
NO168306B (no) | Analogifremgangsmaate til fremstilling av en inhibitor forangiotensin-omdannende enzym |