FI64596B - PROCEDURE FOR FRAMSTAELLNING AV 9- (2,6-DIHALOGENBENYL) ADENIN VAESENTLIGEN FRI FRAON 3-ISOMEREN - Google Patents

Description

RHr^l rBl KUULUTUSjULKAISURHr ^ l rBl ANNOUNCEMENT

Ma IBJ (”) UTLAGG NI NGSSKRI FT 64 5 96 C /40 F-ter.Ui nyonncUy 12 12 1933 ^ Patent ecddelat (51) Kv.ik.Va.3 C 07 D 473/34- // C 07 D 473/00 SUOMI—FINLAND (M) Patunttlhakumu* — Pttennnseknln| 780200 (22) H»k»ml»ptW4—Ans6lcnlng*d*g 23.01.78 ' * (23) AlkupUvt—GHtlgheud·! 23.01.78Ma IBJ (”) UTLAGG NI NGSSKRI FT 64 5 96 C / 40 F-ter.Ui nyonncUy 12 12 1933 ^ Patent ecddelat (51) Kv.ik.Va.3 C 07 D 473 / 34- // C 07 D 473 / 00 FINLAND — FINLAND (M) Patunttlhakumu * - Pttennnseknln | 780200 (22) H »k» ml »ptW4 — Ans6lcnlng * d * g 23.01.78 '* (23) AlkupUvt — GHtlgheud ·! 23/1/78

(41) Tullut Julkiseksi — Bllvlt offanttlg qQ_ qQ_ -jQ(41) Become Public - Bllvlt offanttlg qQ_ qQ_ -jQ

Patentti- ja rekisterihallitut ....Patent and registration authorities ....

_ . . . (44) Nihttvikslpanon ft kuuLJullulsun pvm.— οη no o,_. . . (44) Date of entry into force of the date of entry into force

Patent· och registerstyrelaen AraBkan utlagd och utMtcrKtun publlcerad υο* -5 (32)(33)(31) Pyydetty etuoikeus »Begird prlorttet 07.02.77 14.02.77, 20.10.77 USA(US) 766326, 768235, 81+3919 (71) Merck & Co., Inc., 126 E. Lincoln Avenue, Rahway, New Jersey, USA(US) (72) Michael Cornells Vander Zvan, Maple Glen, Pennsylvania,Patent · och registerstyrelaen AraBkan utlagd och utMtcrKtun publlcerad υο * -5 (32) (33) (31) Privilege claimed »Begird prlorttet 07.02.77 14.02.77, 20.10.77 USA (US) 766326, 768235, 81 + 3919 (71 ) Merck & Co., Inc., 126 E. Lincoln Avenue, Rahway, New Jersey, USA (72) Michael Cornells Vander Zvan, Maple Glen, Pennsylvania,

Roger James Tuli, Metuchen, New Jersey, George David Hartman,Roger James Fire, Metuchen, New Jersey, George David Hartman,

Lansdale, Pennsylvania, Leonard Maurice Weinstock, Belle Mead,Lansdale, Pennsylvania, Leonard Maurice Weinstock, Belle Mead,

New Jersey, Ichiro Shinkai, Westfield, New Jersey, USA(US) (7¾) Oy Roister Ab (54) Menetelmä 3-isomeeristä oleellisesti vapaan 9-(2,6-dihalogeeni-^ bentsyyli)adeniinin valmistamiseksi - Förfarande för framställ-ning av 9“(2,6-dihalogenbensyl)adenin väsentligen fri frln 3~ -isomerenNew Jersey, Ichiro Shinkai, Westfield, New Jersey, USA (7) Oy Roister Ab (54) Process for the preparation of 9- (2,6-dihalo-4-benzyl) adenine substantially free of the 3-isomer - Förfarande för framställ-Ning from 9 "(2,6-dihalobenzyl) to the 3-isomer of adenine

Keksintö koskee uutta menetelmää 3-isomeeristä oleellisesti vapaan 9-(2 ,6-dihalogeenibentsyyli)adeniinin valmistamiseksi alky-loimalla adeniinin alkali- tai maa-alkalimetallisuola 2,6-dihalo-geenibentsyylihalogenidilla ja puhdistamalla saatu isomeeriseos.The invention relates to a new process for the preparation of 9- (2,6-dihalobenzyl) adenine substantially free of the 3-isomer by alkylation of the alkali or alkaline earth metal salt of adenine with 2,6-dihalobenzyl halide and purification of the resulting isomer mixture.

9-(2,6-dihalogeenibentsyyli)adeniinit, jotka eivät oleellisesti sisällä 3-isomeeriä, ovat käyttökelpoisia hoidettaessa ja ehkäistäessä ennakolta kokkidioosia (US-patentti 3 846 4 26) .9- (2,6-dihalobenzyl) adenines, which are substantially free of the 3-isomer, are useful in the treatment and prevention of coccidiosis (U.S. Patent 3,846,426).

Keksinnön mukaiselle menetelmälle on tunnusomaista, että alkylointi suoritetaan kiinteä aine-neste- tai neste-neste-kaksi-faasisysteemissä, jolloin a) kiinteä aine-neste-kaksifaasisysteemissä kiinteän faasin muodostaa adeniinin alkali- tai maa-alkalimetallisuola ja neste- faasin muodostaa liuos, joka sisältää 2,6-dihalogeenibentsyyli-halogenidia ja oniumsuola-faasinsiirtokatalysaattoria, jonka 2 rakennekaava on: 6 4 5 9 6The process according to the invention is characterized in that the alkylation is carried out in a solid-liquid or liquid-liquid two-phase system, wherein a) in a solid-liquid-two-phase system the solid phase is formed by an alkali or alkaline earth metal salt of adenine and the liquid phase is formed by a solution contains 2,6-dihalobenzyl halide and an onium salt phase transfer catalyst having the structural formula 2: 6 4 5 9 6

© Q© Q

(R)3NR] Z tai θ © (R1)3PR zw jossa R on C1+_^g-alkyyli, R^ on C1_g-alkyyli ja Z® on anioni, joka on kloori, bromi tai jodi, aproottisessa veteen sekoittuvassa tai veteen sekoittumattomassa orgaanisessa liuottimessa, jolloin veteen sekoittuva liuotin sisältää 0 - noin 5 moolia vettä adeniinisuola-moolia kohti, b) neste-neste-kaksifaasisysteemissä toisen nestefaasin muodostaa adeniinin alkali- tai maa-alkalimetallisuolan vesiliuos ja toisen nestefaasin muodostaa liuos, joka sisältää 2,6-dihalogeeni-bentsyylihalogenidia ja oniumsuola-faasinsiirtokatalysaattoria, jonka rakennekaava on: Θ © (R)3NR1 ΊΤ tai Θ ©(R) 3NR] Z or θ © (R1) 3PR zw wherein R is C1-8 alkyl, R1 is C1-8 alkyl and Z® is an anion which is chlorine, bromine or iodine in an aprotic water-miscible or water-miscible in an immiscible organic solvent, wherein the water-miscible solvent contains 0 to about 5 moles of water per mole of adenine salt, b) in a liquid-liquid two-phase system, the second liquid phase is an aqueous solution of an alkali or alkaline earth metal salt of adenine and the second liquid phase is a solution containing 2.6- a dihalobenzyl halide and an onium salt phase transfer catalyst having the structural formula: Θ © (R) 3NR1 ΊΤ or Θ ©

(R1)3PR TT(R1) 3PR TT

joissa R, R^ ja Z® merkitsevät samaa kuin edellä, aproottisessa veteen sekoittumattomassa orgaanisessa liuottimessa; ja (1) saatu isomeeriseos uutetaan laimealla typpihapolla ja (2) saadussa tuotteessa oleva 3-isomeeriseos dealkyloidaan väkevällä rikkihapolla karbeniumioneja sitovan tolueenin tai ksyleeniseoksen läsnäollessa.wherein R, R1 and Z® are as defined above, in an aprotic water-immiscible organic solvent; and (1) the resulting isomer mixture is extracted with dilute nitric acid and (2) the 3-isomer mixture in the resulting product is dealkylated with concentrated sulfuric acid in the presence of carbenium ion-binding toluene or xylene mixture.

Kokkidioosi on laajalle levinnyt siipikarajatauti, jonka saavat aikaan Eimeria-suvun alkueläinten alulle panemat infektiot, jotka aiheuttavat vakavia sairauksia siipikarjan suolistossa ja umpisuolessa. Eräitä merkittävimpiä tällaisia lajeja ovat E. tenella, E. acervulina, E. necatrix, E. brunetti ja E. maxima. Tätä tautia levittävät yleensä linnut, jotka saavat tarttuvaa organismia saastuneesta lannasta tai maasta, tai saastuneesta rehusta tai juomavedestä. Tämä tauti ilmenee verenvuotona, veren keräytymisenä umpisuoleen, veren kulkeutumisena siipikarjan lantaan, heikkoutena ja ruuansulatushäiriöinä. Tauti johtaa usein eläinten kuolemaan, mutta ankarien infektioiden jälkeen eloon jääneen siipikarjan markki-na-arvo on infektiosta johtuen oleellisesti heikentynyt. Kokkidioosi 64596 on sen vuoksi tauti, jonka taloudellinen merkitys on suuri, ja siksi on suoritettu laajakantoisia tutkimuksia uusien ja parempien menetelmien löytämiseksi siipikarjan kokkidioosi-infektioiden kontrolloimiseksi ja hoitamiseksi.Coccidiosis is a widespread poultry border disease caused by infections initiated by protozoa of the genus Eimeria, which cause serious diseases in the intestines and appendix of poultry. Some of the most significant such species are E. tenella, E. acervulina, E. necatrix, E. brunetti and E. maxima. This disease is usually spread by birds that get the infectious organism from contaminated manure or land, or from contaminated feed or drinking water. This disease manifests itself as bleeding, blood accumulation in the colon, blood transport to poultry manure, weakness, and indigestion. The disease often results in the death of animals, but the market value of surviving poultry after severe infections has been substantially reduced due to the infection. Coccidiosis 64596 is therefore a disease of great economic importance, and therefore extensive studies have been conducted to find new and improved methods for controlling and treating coccidiosis infections in poultry.

9-(2 ,6-dihalogeenibentsyyli)adeniineja, jotka ovat käyttökelpoisia kokkidioosi-infektioiden kontrolloimiseksi ja hoitamiseksi, on valmistettu alkyloimalla epäselektiivisesti emäskatalyy-tein adeniinin suolaa vesipitoisissa liuottimissa tai vesipitoisissa proottisissa orgaanisissa liuottimissa. Nämä reaktiot ovat homogeenisia ja nopeita, mutta niiden haittana on se, että niissä saadaan 3-isomeerin ja 9-isomeerin seoksia, joissa 3-isomeerin osuus on suuri.9- (2,6-dihalobenzyl) adenines useful for controlling and treating coccidiosis infections have been prepared by non-selective alkylation of the adenine salt with base catalysts in aqueous solvents or aqueous protic organic solvents. These reactions are homogeneous and rapid, but their disadvantage is that they give mixtures of the 3-isomer and the 9-isomer with a high proportion of the 3-isomer.

Seulonta Ames-kokeessa paljastaa, että 3-isomeeri antaa heikon positiivisen tuloksen, ja sen katsotaan olevan todennäköisesti mu-tageeninen. 3-isomeeri-sivutuotteen läsnäolo 9-(2,6-dihalogeeni-bentsyyli)adeniinin joukosssa tekee seoksen näin ollen käyttökelvottomaksi kokkidioosin torjuntaan johtuen siipikarjan lihassa pysyvien jäännösten aiheuttamista ongelmista. Jotta saataisiin käyttökelpoista tuotetta, on toivottavaa, että siinä ei ole oleellista määrää 3-isomeeriä, määriteltynä siten, että havaittavissa oleva määrä on alle 100 ppm.Screening in the Ames assay reveals that the 3-isomer gives a poor positive result and is considered likely to be mutagenic. The presence of the 3-isomer by-product among 9- (2,6-dihalobenzyl) adenine thus renders the mixture unusable for controlling coccidiosis due to problems caused by residues in poultry meat. In order to obtain a useful product, it is desirable that it does not contain a substantial amount of the 3-isomer, defined as having a detectable amount of less than 100 ppm.

Alkyloitaessa adeniinia emäs-katalyytein aproottisissa liuottimissa, kuten dimetyyliformamidissa ja dimetyylisulfoksidissa, 9-isomeerin suhde 3-isomeeriin nähden saadaan suuremmaksi, mutta haittapuolena on se, että nämä liuottimet ovat kalliita. Myös tuotteen eristäminen muodostuu vaikeammaksi. Reaktioseos on jäähdytettävä kaatamalla se veteen ja suodattamalla talteenotettu tuote, on liuottimen poistamiseksi pestävä toistuvasti. Tämä pienentää saantoa.Alkylation of adenine with base catalysts in aprotic solvents such as dimethylformamide and dimethyl sulfoxide results in a higher ratio of the 9-isomer to the 3-isomer, but the disadvantage is that these solvents are expensive. Isolation of the product also becomes more difficult. The reaction mixture must be cooled by pouring it into water and the recovered product filtered off, washed repeatedly to remove the solvent. This reduces the yield.

Alkylointireaktiossa saatu tuote puhdistuu vain osittain tavanomaisin menetelmin, kuten etanolilla tai vedellä pesemällä ja kiteyttämällä uudelleen liuottimista, kuten etikkahaposta, vesipitoisesta etikkahaposta, dimetyyliformamidista tai dimetyylisulfoksidista. Ravistelemalla tuotetta laimean typpihapon tai tetrafluori-boorihapon (HBF^) kanssa, tuote saadaan myös jonkin verran puhtaammaksi .The product obtained in the alkylation reaction is only partially purified by conventional methods such as washing with ethanol or water and recrystallization from solvents such as acetic acid, aqueous acetic acid, dimethylformamide or dimethyl sulfoxide. Shaking the product with dilute nitric acid or tetrafluoroboric acid (HBF 2) also gives the product some purity.

Edellä kuvatuilla tavanomaisilla puhdistusmenetelmillä, joissa pestään tai uudelleenkiteytetään raakaa 9-(2,6-dihalogeenibent-syyli)adeniinia, saadaan tuote, joka sisältää noin 4 % 3-isomeeriä.The conventional purification methods described above, in which crude 9- (2,6-dihalobenzyl) adenine is washed or recrystallized, give a product containing about 4% of the 3-isomer.

64596 Täten, esimerkiksi, uutettaessa raakaa 9—(2 —kloori—6-fluoribentsyy— 1 i)adeniinia, jossa on 20 % 3 —isomeeriä laimealla, typpihapon vesiliuoksella, saadaan 9-(2-kloori-6-fluoribentsyyli)adeniinia , jossa on 3-4 % 3-isomeeriä talteen otetun 9-(2-kloori-6-fluoribentsyyli)-adeniidin määrän ollessa 96-97 %. Toistettaessa tämä menettely käyttämällä rikastettua 9-(2-kloori-6-fluoribentsyyli)adeniidi-näytettä, 3-isomeerin määrää ei saada pienemmäksi kuin noin 0,3 - 0,5 % (3 000 - 5 000 ppm). Tämä johtuu seoksen ilmeisestä taipumuksesta muodostaa kiinteän aineen liuoksia, joissa on 9-isomeeriä ja 3-isomeeriä. Sama hankaluus on otettava huomioon, kun 3-isomeeriä yritetään poistaa suorittamalla kaksi uusintakiteytystä etikkahappoa käyttäen. 3-iso-*· meerin määrä pysyy rajoissa 0,05 - 0,1 % (500 - 1 000 ppm) vaikka nestefaasi ei ole 3-isomeerin kyllästämää.64596 Thus, for example, extraction of crude 9- (2-chloro-6-fluorobenzyl) adenine with 20% of the 3-isomer with dilute aqueous nitric acid gives 9- (2-chloro-6-fluorobenzyl) adenine, in which is 3-4% of the 3-isomer recovered with 96-97% of 9- (2-chloro-6-fluorobenzyl) adenide. When this procedure is repeated using an enriched 9- (2-chloro-6-fluorobenzyl) adenide sample, the amount of 3-isomer is not less than about 0.3 to 0.5% (3,000 to 5,000 ppm). This is due to the apparent tendency of the mixture to form solid solutions with the 9-isomer and the 3-isomer. The same inconvenience must be taken into account when attempting to remove the 3-isomer by performing two recrystallizations using acetic acid. The amount of 3-isomer remains in the range of 0.05 to 0.1% (500 to 1,000 ppm) even if the liquid phase is not saturated with the 3-isomer.

Julkaisussa J. Org. Chem. 3_6, 3211 (1971) on esitetty, että 9-substituoituja adeniineja (2_) voidaan valmistaa suorittamalla lohkaisu pelkistäen ja syklisoimalla sen jälkeen 7-aminofuratsaano- /3,4-d7pyrimidiinit (1).In J. Org. Chem. 3_6, 3211 (1971) discloses that 9-substituted adenines (2_) can be prepared by cleavage by reduction and subsequent cyclization of the 7-aminofurazane- [3,4-d] pyrimidines (1).

00

t IIt II

R CH - -i X/ f 2 I M JL NH0 fV > fY o L R' (1) NH2 CX> R’ (?) 64596 Iällä tavalla voidaan valmistaa suuri määrä erilaisia adeniini-johdannaisia, mutta el ole pystytty aikaansaamaan S-substituoimat-toman 7-amidofuratsaano/3 , M ~d~7pyr f] n ien Cl, R-H, Y = 0) muuttumista 2-subst i tuo i tumat tom:! ks i aden lineiksi (2, R=I1) , mikä johtuu edellisten yhdisteiden hydrolyytt. ise s tä epästabxlisuudesta .R CH - -i X / f 2 IM JL NH0 fV> fY o LR '(1) NH2 CX> R' (?) 64596 In this way a large number of different adenine derivatives can be prepared, but it has not been possible to obtain S-unsubstituted toman 7-amidofurazan / 3, M ~ d ~ 7pyr f] n ien Cl, RH, Y = 0) see i Aden lines (2, R = I1) due to the hydrolysis of the previous compounds. ise of this instability.

Keksinnön mukaisella mene leimalla saadaan erittäin käyttökelpoisia kokkidloosia torjuvia 9-(2 , ö-dihalogeenibentsyyli)adeniineja , jotka eivät oleellisesti sisällä 3-isomeeriä, jolla mahdollisesti on karsinogeeninen vaikutus, jolloin sen läsnäolo voi tehdä seoksen käyttökelvottomaksi.The process label according to the invention provides highly useful anti-coccidiosis 9- (2,6-dihalobenzyl) adenines which do not substantially contain the 3-isomer, which may have a carcinogenic effect, the presence of which may render the mixture unusable.

Nyt on havaittu, että 3-is0meeristä oleellisesti vapaita 9-(2,6-dihalogeenibentsyyli)adeniineja voidaan saada alkyloimalla ade-niinin suolaa kaksifaasisysteemiä käyttäen oniumsuola-faasinsiirto-katalyytin läsnäollessa ja deulkyloimaila selektiivisesti 3-isomeeri-sivutuote rikkihapolla karbenium-ioninsitojan läsnäollessa.It has now been found that substantially 3- (2,6-dihalobenzyl) adenines free of the 3-isomer can be obtained by alkylating a salt of adenine using a two-phase system in the presence of an onium salt phase transfer catalyst and selectively deulfylating the 3-isomer by-product with carboxylic acid sulfuric acid.

(2,6-dihalogeenibentsyyli)adeniidlt saadaan alkyloimalla ade-niinin suolaa 2 ,6-dihalogeenibentsyylihalogenidille kiinteän aineen ja nesteen käsittävässä kaksifaasisysteemissä, jossa kiinteän faasin muodostaa adeniinin suola ja nestefaasin muodostaa alkylointiaineen ja oniumsuolan liuos orgaanisessa liuottimessa; tai nesteen ja nesteen käsittävässä kaksifaasisysteemissä, jossa toisena nestefaasina on adeniinisuolan vesiliuos ja toinen nestefaasi sisältää alkylointiaineen ja oniumsuolan. Oniumsuolaa, kuten ammonium- tai fosfonium-suolaa käytetään katalysaattorina siirtämään adeni.i.nisuolaa kiinteästä faasista nestemäiseen orgaaniseen f aas iin tai ves ipi toisesta nestefaasista orgaaniseen nestefaasiin, jossa adeniinin alkylointi tapahtuu. Prosessista käytetään yleisesti nimitystä "faas insii rtokata-lyysi" ja oniumsuolasta käytetään nimitystä "faasinsiirtokatalysaat-tori".(2,6-dihalobenzyl) adenide is obtained by alkylating an adenine salt to 2,6-dihalobenzyl halide in a solid-liquid two-phase system in which the solid phase is formed by an adenine salt and the liquid phase is formed by a solution of an alkylating agent and an onium salt in an organic solvent; or in a two-phase system comprising a liquid and a liquid, wherein the second liquid phase is an aqueous solution of an adenine salt and the second liquid phase contains an alkylating agent and an onium salt. An onium salt such as an ammonium or phosphonium salt is used as a catalyst to transfer the adenium salt from the solid phase to the liquid organic phase or from the aqueous liquid phase to the organic liquid phase in which the alkylation of the adenine takes place. The process is commonly referred to as "phase transfer catalysis" and the onium salt is referred to as "phase transfer catalyst".

Valmistettavia yhdisteitä voidaan kuvata seuraavaila kaavalla: . Γ2 7 I !| V Xj ? l.The compounds to be prepared can be described by the following formula:. Γ2 7 I! | V Xj? l.

I /Λ ch 64596 jossa X-^ ja ovat toisistaan riippumatta halogeeneja, so. fluori-, kloori-, bromi- tai jodiatomeja. Spesifisiä esimerkkejä edellä esitetyn rakennekaavan mukaisista yhdisteistä ovat 9-(2,6-dikloori-beritsyyli)adeniin i. ja 9-( 2-kloori-6-f luoribentsyyli)adeniini .I / Λ ch 64596 wherein X- ^ and are independently halogens, i. fluorine, chlorine, bromine or iodine atoms. Specific examples of the compounds of the above structural formula are 9- (2,6-dichlorobercyl) adenine i. And 9- (2-chloro-6-fluorobenzyl) adenine.

"Faasinsiirtokatalysaattorin" muodostavat oniumsuolat, joissa on typpiatomiin tai fosforiatomiin liittyneitä alkyyliryhmiä. Keksinnön mukaisessa menetelmässä voidaan käyttää mitä tahansa alkyyli-ammonium- tai fosfoniumsuolaa, edellyttäen, että alkyyliryhmät ovat riittävän suuria liuottaakseen adeniinisuolan valittuun orgaaniseen faasiin, mutta eivät niin suuria , että muodostuu emulsioita.The "phase transfer catalyst" consists of onium salts having alkyl groups attached to a nitrogen atom or a phosphorus atom. Any alkylammonium or phosphonium salt can be used in the process of the invention, provided that the alkyl groups are large enough to dissolve the adenine salt in the selected organic phase, but not so large as to form emulsions.

Sopivia liuotinsysteemejä ovat aproottiset liuottimet, jotka ovat inerttejä, so. eivät reagoi reaktioseoksen aineosien kanssa vallitsevissa reaktio-olosuhteissa. Aproottiset liuottimet ovat edullisia siksi, että 9-isomeerin suhden 3-isomeeriin nähden saadaan suureksi. Siinä tapauksessa, että reaktio suoritetaan kiinteän aineen ja nesteen käsittävässä kaksifaasisysteemissä, aproottinen liuotin voi olla joko veden kanssa sekoittuvaa tai sekoittumatonta. Ratkaisevaa merkitystä ei ole sillä, onko veden kanssa sekoittuvat liuottimet vedettömiä, mutta liian suurten vesimäärien vaikutuksesta pyrkii muodostumaan suuremmin osuuksin 3-isomeeriä. Siinä tapauksessa, että käytetään neste-neste-kaksifaasisysteemiä, aproottinen orgaaninen liuotin rajoittuu liuottimiin, jotka eivät sekoitu veden kanssa. Vesifaasin vesimäärällä ei ole ratkaisevaa merkitystä.Suitable solvent systems include aprotic solvents which are inert, i. do not react with the components of the reaction mixture under the prevailing reaction conditions. Aprotic solvents are preferred because the ratio of the 9-isomer to the 3-isomer is high. In the case where the reaction is carried out in a two-phase system comprising a solid and a liquid, the aprotic solvent may be either miscible or immiscible with water. It is not critical whether the water-miscible solvents are anhydrous, but excessive amounts of water tend to form higher proportions of the 3-isomer. In the case where a liquid-liquid two-phase system is used, the aprotic organic solvent is limited to solvents which are immiscible with water. The amount of water in the aqueous phase is not critical.

Adeniinin alkali- tai maa-alkalimetallisuolan rakennekaava on: NH ® -L /N ^ Ν' Ύ \ CM0 l i '/ vn-'^nThe structural formula of the alkali or alkaline earth metal salt of adenine is: NH ® -L / N ^ Ν 'Ύ \ CM0 l i' / vn - '^ n

LL

jossa M® on alkali- tai maa-alkalimetallikationi, b ja c ovat sellaisia kokonaislukuja, että c kationimoolia M® neutraloi b anioni-moolia. Suola suspendoidaan aproottiseen orgaaniseen liuottimeen tai liuotetaan vesipitoiseen liuokseen. Tähän lisätään liuos, jossa 7 64596 on alkylointlaine, jonka rakennekaava onwherein M® is an alkali or alkaline earth metal cation, b and c are integers such that c moles of cation M® neutralizes m moles of anion. The salt is suspended in an aprotic organic solvent or dissolved in an aqueous solution. To this is added a solution of 7 64596 is an alkylating agent having the structural formula

‘K'K

Y-CH2 \\ // /--' / X.Y-CH2 \\ // // - '/ X.

jossa ja ovat edellä määriteltyjä ja Y on poistuva ryhmä, joka on halogeeni, dimetyylisulfoniumhalogenidi tai tosyyli, ja oniumsuo-la-"faasinsiirtokatalysaattori" aproottisessa liuottimessa. Edullinen poistuva ryhmä on halogeeni. Substituoitua tolueenia lisätään adeniiniin nähden ekvimolaarinen määrä tai hieman ylimäärin. Saatua heterogeenista reaktioseosta sekoitetaan nopeasti, kunnes reaktio on päättynyt.wherein and are as defined above and Y is a leaving group which is halogen, dimethylsulphonium halide or tosyl, and an onium salt-la "phase transfer catalyst" in an aprotic solvent. The preferred leaving group is halogen. Substituted toluene is added in an equimolar amount or slightly in excess of adenine. The resulting heterogeneous reaction mixture is stirred rapidly until the reaction is complete.

Menetelmässä adeniini suspendoidaan sopivaan aproottiseen liuot-timeen. Tähän lisätään ekvivalenttimäärä emästä. Edullisia ovat emäkset, joiden pK^ on suurempi kuin 10,5, jolloin adeniini on muuttunut pääasiallisesti täydellisesti anionikseen. Esimerkkejä sopivista emäksistä ovat karbonaatit, esim. alkalimetallikarbonaatit, kuten natriumkarbonaatti ja kaliumkarbonaatti, hydroksidit, esim. alkali-metallihydroksidit, kuten natriumhydroksidi, kaliumhydroksidi ja li-tiumhydroksidi, tetra-alkyyliammoniumhydroksidi ja alkoholaatit, esim. kaliumetylaatti, natriumetylaatti. Yleensä sopivia ovat kaikki emäkset, joiden emäksisyys riittää muodostamaan adeniini-anionin käytettävässä liuotinsysteemissä. i;In the method, adenine is suspended in a suitable aprotic solvent. To this is added an equivalent amount of base. Bases with a pK 2 greater than 10.5 are preferred, with the adenine being substantially completely converted to the anion. Examples of suitable bases are carbonates, e.g. alkali metal carbonates, such as sodium carbonate and potassium carbonate, hydroxides, e.g., alkali metal hydroxides, such as sodium hydroxide, potassium hydroxide and lithium hydroxide, tetraalkylammonium hydroxide, potassium sodium hydroxide, and alcoholate. In general, all bases which are sufficiently basic to form an adenine anion in the solvent system used are suitable. i;

Adeniinisuola voidaan valmistaa in situ lisäämällä ekvivalent-timäärä emästä, tai adeniinisuolaa voidaan valmistaa mukavasti liuottamalla adeniini vesiliuokseen, jossa on ekvivalenttimäärä vahvaa emästä, haihduttamalla vesi pois ja käyttämällä adeniinisuola-hydraattia sisältävä jäännös alkyloinnissa.The adenine salt can be prepared in situ by adding an equivalent amount of base, or the adenine salt can be conveniently prepared by dissolving adenine in an aqueous solution containing an equivalent amount of strong base, evaporating the water off, and using the adenine salt hydrate-containing residue in alkylation.

Keksinnön mukaisen menetelmän edullisessa suoritusmuodossa adeniinin maa-alkalimetallisuola alkyloidaan 2-kloori-6-fluoribent-syylihalogenidilla tai 2,6-diklooribentsyylihalogenidilla , jolloin saadaan (2-kloori-6-fluoribentsyyli)adeniinia tai (2,6-diklooribent-syyli)adeniinia isomeeriseoksena, jossa ainakin 70 paino-% on 9-(2-kloori-6-fluoribentsyyli)adeniinia tai 9-(2,6-dikloori bentsyyli)ade-niinia. Alkylointi suoritetaan kiinteän aine-neste- tai neste-neste- 64596 kaksifaasisysteemissä. Kiinteän aineen ja nesteen käsittävässä kak-sifaasisysteemissä on kiinteää faasia, jonka muodostaa adeniinin maa-alkalimetallisuola, ja nestemäinen faasi, jonka muodostaa liuos, joka sisältää 2-kloori-6-fluoribentsyylihalogenidia tai 2,6-dikloo-riberttsyylihalogenidia ja faasinsiirtokatalysaattorina kvaternääris-tä ammoniumsuolaa, jonka rakennekaava on: © © (R)3NR1 z jossa R on C^_^g-alkyyli, R^ on C^_g-alkyyli ja on anioni, joka on kloori, bromi tai jodi, aproottisessa, veden kanssa sekoittuvassa liuottimessa, joka on asetoni, asetonitriili tai heksametyylifos-foriamidi, jolloin veden kanssa sekoittuva liuotin voi sisältää 0-5 moolia vettä kohden adeniinisuolaa ja silti muodostuu halutussa suhteessa 9-isomeeriä. Reaktio voidaan suorittaa myös veden kanssa se-koittumattomassa orgaanisessa liuottimessa, joka on heksaani, bent-seeni,tolueeni, metyleenikloridi, kloroformi tai petrolieetteri.In a preferred embodiment of the process of the invention, the alkaline earth metal salt of adenine is alkylated with 2-chloro-6-fluorobenzyl halide or 2,6-dichlorobenzyl halide to give (2-chloro-6-fluorobenzyl) adenine or (2,6-dichlorobenzyl) adenine as an isomeric mixture. wherein at least 70% by weight is 9- (2-chloro-6-fluorobenzyl) adenine or 9- (2,6-dichlorobenzyl) adenine. The alkylation is performed in a solid-liquid or liquid-liquid 64596 two-phase system. The solid-liquid biphasic system has a solid phase formed by an alkaline earth metal salt of adenine and a liquid phase formed by a solution containing 2-chloro-6-fluorobenzyl halide or 2,6-dichloroterbertyl halide and an ammonium phase catalyst as a phase transfer catalyst. , having the structural formula: © R (R) 3 NR1z wherein R is C1-6 alkyl, R1 is C1-6 alkyl and is an anion which is chlorine, bromine or iodine in an aprotic water-miscible solvent, which is acetone, acetonitrile or hexamethylphosphoramide, wherein the water-miscible solvent may contain 0 to 5 moles of water per adenine salt and still form the desired 9-isomer. The reaction can also be carried out in a water-immiscible organic solvent such as hexane, benzene, toluene, methylene chloride, chloroform or petroleum ether.

Kun reaktio suoritetaan neste-neste-kaksifaasisysteemissä, toinen nestemäinen faasi on adeniinin maa-alkalimetallisuolan vesi-liuos ja toinen nestemäinen faasi on liuos, joka sisältää 2-kloori- 6-fluoribentsyylihalogenidia tai 2,6-diklooribentsyylihalogenidia ja faasinsiirtokatalysaattorina kvaternääristä ammoniumsuolaa, jonka rakennekaava on:When the reaction is carried out in a liquid-liquid-two-phase system, the second liquid phase is an aqueous solution of the alkaline earth metal salt of adenine and the second liquid phase is a solution containing 2-chloro-6-fluorobenzyl halide or 2,6-dichlorobenzyl halide and a quaternary ammonium :

0 Q0 Q

(RigNR-j^ jossa R, R·^ ja zP ovat edellä määriteltyjä, aproottisessa, veden kanssa sekoittumattomassa orgaanisessa liuottimessa, joka on heksaani, bentseeni, tolueeni, metyleenikloridi, kloroformi tai petrolieetteri .(RigNR-j ^ where R, R · ^ and zP are as defined above in an aprotic, water-immiscible organic solvent which is hexane, benzene, toluene, methylene chloride, chloroform or petroleum ether.

Toisen edullisen suoritusmuodon mukaan natriumadeninaatti al-kyloidaan 2-kloori-6-fluoribentsyylikloridilla, jolloin saadaan (2-kloori-6-fluoribentsyyli)adeniinia isomeeriseoksena, jossa on ainakin 70 paino-% 9-(2-kloori-6-fluoribentsyylDadeniinia. Alkylointi suoritetaan kiinteä aine-neste- tai neste-neste-kaksifaasisysteemis-sä, jolloin kiinteän aineen ja nesteen käsittävässä reaktiosystee-missä kiinteänä faasina on natriumadeninaatti ja nestemäisenä faasina on liuos, joka sisältää 2-kloori-6-fluoribentsyylikloridia ja 64596 faasinsi irtokatalysaattorj na kvaternääristä ammoniumsuolaa, jonka rakennekaava on: © O.According to another preferred embodiment, the sodium adeninate is alkylated with 2-chloro-6-fluorobenzyl chloride to give (2-chloro-6-fluorobenzyl) adenine as a mixture of isomers containing at least 70% by weight of 9- (2-chloro-6-fluorobenzyladenine). in a solid-liquid or liquid-liquid two-phase system, wherein in the solid-liquid reaction system, the solid phase is sodium adenate and the liquid phase is a solution containing 2-chloro-6-fluorobenzyl chloride and 64596 of a phase-on-quaternary catalyst, with the structural formula: © O.

(n-R)3NCH3 Ci"' jossa R on Cg_-^2_n~a-lkyyli 5 asetonissa R voi olla 8-12 hiiliatomia sisältävien n-alkaanien seos. Tällainen tetra-alkyyliammoniumsuolo-jen seos, jossa R on ensisijaisesti kaprylyyli (Cg), tunnetaan valmisteena Aliquat 336 (valmistaja General Mills, Inc., Chemical Division, 4-620 West 77th Street, Minneapolis, Minnesota. Reaktioseoksen ei tarvitse olla vedetön, se voi sisältää 0 - noin 5 moolia vettä moolia kohden natriumadeninaattia ja silti saadaan halutussa suhteessa 9-isomeeriä.(nR) 3NCH3 C1 "'wherein R is C8-C2-n-alkyl in acetone R may be a mixture of n-alkanes having 8 to 12 carbon atoms. Such a mixture of tetraalkylammonium salts wherein R is primarily caprylyl (C8), known as Aliquat 336 (manufactured by General Mills, Inc., Chemical Division, 4-620 West 77th Street, Minneapolis, Minnesota. The reaction mixture need not be anhydrous, may contain from 0 to about 5 moles of water per mole of sodium adenate and still be obtained in the desired ratio. isomer.

Kun reaktio suoritetaan neste-neste-kaksifaasisysteemissä, toisena nestemäisenä faasina on adeniinin maa-alkalimetallisuolan vesi-liuos ja toisen nestemäisen faasin muodostaa liuos, joka sisältää 2-kloori-6-fluoribentsyylikloridia ja faas insIirtokatälysaattorina kvaternääristä ammoniumsuolaa, jonka rakennekaava on: (r)3nch z© . . p ... . . .When the reaction is carried out in a liquid-liquid-two-phase system, the second liquid phase is an aqueous solution of the alkaline earth metal salt of adenine and the second liquid phase is a solution containing 2-chloro-6-fluorobenzyl chloride and a phase transfer catalyst of a quaternary ammonium salt: z ©. . p .... . .

jossa R on Cg_12-alkyyli ja Zv-"' on anioni, joka on kloori, bromi tai jodi, heksaaniliuoksessa.wherein R is C 1-12 alkyl and Zv- "is an anion which is chlorine, bromine or iodine in hexane solution.

Adeniinin ja alkylointia.ineen suhteellisia määriä voidaan vaihdella verrattain laajoissa rajoissa. Reagoivia aineita voidaan käyttää stökiometrisin määrin, so. reagensseja voidaan käyttää yhtä monta moolia tai alkylointiainetta voidaan käyttää ylimäärin, esim. 2-10 % mooliylimäärin, tai jopa enemmänkin. Edullinen ylimäärä on noin 2-mooli-%. On edullista, että faasinsiirtokatalysaattorina käytetään adeniinin suhteen noin 1 mooli-% - 10 rnooli-%. Myöskin käytettävän liuottimen määrää voidaan vaihdella laajoissa rajoissa. Liuotinta käytetään niin suurin määrin, että heterogeenista reaktioseosta voidaan sekoittaa siten, että reaktio saadaan tapahtumaan kohtuullisella nopeudella ja reaktiotuote eristetyksi helposti. Useimmissa tapauksissa liuos, jossa adeniinisuolan määrä liuottimessa on 5-15 paino-%, on sopiva.The relative amounts of adenine and alkylating agent can vary within relatively wide limits. The reactants can be used in stoichiometric amounts, i. the reagents may be used in the same number of moles or the alkylating agent may be used in excess, e.g. 2-10% molar excess, or even more. The preferred excess is about 2 mole%. It is preferred that about 1 mol% to 10 mol% of adenine be used as the phase transfer catalyst. The amount of solvent used can also be varied within wide limits. The solvent is used to such an extent that the heterogeneous reaction mixture can be stirred so as to cause the reaction to proceed at a reasonable rate and to easily isolate the reaction product. In most cases, a solution in which the amount of adenine salt in the solvent is 5 to 15% by weight is suitable.

Reaktioseoksen komponentit yhdistetään reaktioväliaineessa millä tahansa sopivalla tavalla ja missä tahansa järjestyksessä.The components of the reaction mixture are combined in the reaction medium in any suitable manner and in any order.

10 64 59610 64 596

Kuvaavana esimerkkinä sopivasta tavasta yhdistää reaktioseoksen komponentit keskenään on adeniinin. lisääminen reaktioväliaineessa olevan emäksen liuokseen, minkä jälkeen lisätään substituoitu tolueeni joko laimentamattomana tai sopivassa liuottimessa, ja lopuksi lisätään "faasinsiirtokatalysaattori". Muu menetelmät reagoivien aineiden ja katalysaattorin yhdistämiseksi ovat itsestään selviä alan asiantuntijoille, mutta on edullista, että niiden yhdistäminen suoritetaan siten, että adeniinianioni muodostuu viimeistään kun substituoitu tolueeni lisätään ja mieluimmin ennen tätä ajankohtaa. "Faasinsiirtokatalysaattori" lisätään edullisesti viimeiseksi.An illustrative example of a suitable way to combine the components of the reaction mixture is adenine. addition to a solution of the base in the reaction medium, followed by the addition of substituted toluene either undiluted or in a suitable solvent, and finally the addition of a "phase transfer catalyst". Other methods for combining the reactants and the catalyst will be apparent to those skilled in the art, but it is preferred that the combination be performed so that the adenine anion is formed at the latest when the substituted toluene is added and preferably before this time. The "phase transfer catalyst" is preferably added last.

Reaktioajalla ja lämpötilalla ei juuri ole ratkaisevaa merkitystä. Kuitenkin reaktioaika lyhenee reaktiolämpötilan kohotessa. Reaktio suoritetaan tarkoituksenmukaisesti lämpötilan ollessa noin huoneen lämpötilan ja noin 150°C:n välillä. Kuitenkin on edullista, että reaktio suoritetaan valitun liuottimen kiehumislämpötilassa.Reaction time and temperature are of little importance. However, the reaction time shortens as the reaction temperature rises. The reaction is conveniently carried out at a temperature between about room temperature and about 150 ° C. However, it is preferred that the reaction be carried out at the boiling point of the selected solvent.

Kun liuottimena käytetään heksametyylifosforiamidia, on vältettävä korkeampia lämpötiloja kuin 155°C alkyloitumisen selektiivisyyden heikentyessä liian korkeissa lämpötiloissa. Reaktio voidaan suorittaa tunnin - 24 tunnin kuluessa, mutta useimmissa tapauksissa alky-lointireaktio on päättynyt 2-4 tunnin kuluttua.When hexamethylphosphoramide is used as the solvent, temperatures higher than 155 ° C should be avoided as the selectivity of alkylation decreases at too high temperatures. The reaction can be carried out within one to 24 hours, but in most cases the alkylation reaction is complete after 2 to 4 hours.

Reaktion päätyttyä reaktioseos jäähdytetään suunnilleen huoneen lämpötilaan kiinteän tuotteen saostamiseksi. Sen jälkeen tuote otetaan talteen tavalliseen tapaan, esimerkiksi suodattamalla, ja puhdistetaan. 9-(2,6-dihalogeenibentsyyli)anediinit puhdistetaan seu-raavassa esitetyllä tavalla, jolloin esimerkkinä on 9-(2-kloori-6-fluoribentsyyli)adeniin puhdistus.Upon completion of the reaction, the reaction mixture is cooled to approximately room temperature to precipitate a solid product. The product is then recovered in the usual manner, for example by filtration, and purified. 9- (2,6-dihalobenzyl) anedines are purified as follows, exemplified by purification of 9- (2-chloro-6-fluorobenzyl) adenine.

9-isomeerin ja 3-isomeerin välillä on kaksi kemiallista eroavuutta, jotka muodostavat perustan puhdistuskäsittelylle: 1) 3-isomeeri (pK2 5,6) on 40 kertaa emäksisempi kuin 9—(2— kloori-6-fluoribentsyyli)adeniini (pK 4,0) ja 2) 3-isomeeri on ke-There are two chemical differences between the 9-isomer and the 3-isomer that form the basis of the purification treatment: 1) the 3-isomer (pK2 5.6) is 40 times more basic than 9- (2-chloro-6-fluorobenzyl) adenine (pK 4, 0) and 2) the 3-isomer is

gLgL

miallisesti pysymättömämpi kuin 9-(2-kloori-6-fluoribentsyyli)ade-niini vahvoissa happoliuoksissa.more unstable than 9- (2-chloro-6-fluorobenzyl) adenine in strong acid solutions.

pKa~eroa käytetään hyväksi pienentämään osittain 3-isomeerin määrää raa'assa reaktioseoksessa ja erityisesti poistamaan 7-isomee-ri, jolloin kiinteä raaka 9-(2-kloori-6-fluoribentsyyli)adeniini, joka sisältää 20 % 3-isomeeriä, laimealla typpihapon vesiliuoksella, jolloin saadaan 9-(2-kloori-G-fluoribentsyyli)adeniinia, jossa on 64 5 96 3-4 % 3-isomeeriä, talteenotetun 9-(2-kloori-6-fluoribentsyyli)-adonlinin määrän ollessa 9 6-9 7 %.The pKa difference is exploited to partially reduce the amount of the 3-isomer in the crude reaction mixture and in particular to remove the 7-isomer, whereby the solid crude 9- (2-chloro-6-fluorobenzyl) adenine containing 20% of the 3-isomer with dilute nitric acid with an aqueous solution to give 9- (2-chloro-G-fluorobenzyl) adenine with 64 5 96 3-4% of the 3-isomer, the amount of 9- (2-chloro-6-fluorobenzyl) adonlin recovered being 9-9 7%.

Liiallisten 9-isomeerihäviöiden välttämiseksi uuttamisen aikana, parhaat tulokset saavutetaan, josa 3-isomeerin määrä määritetään nestekromatogafisesti (L.C.-analyysi), kuten alla on selostettu ja lisätään 3-isomeerin määrää vastaava moolimäärä (tai hiukan ylimäärin) happoa. Uuttaminen voidaan suorittaa lämpötilan ollessa huoneen lämpötilan ja noin 100°C:n välillä. Kiehumislämpötila ja voimakas sekoitus vastaavat edullisia olosuhteita. Uuttaminen on riittävä sekoitettaessa voimakkaasti noin tunnin - noin viiden tunnin ajan. Optimiaika on noin kaksi tuntia. Kuuma seos otetaan talteen suodattamalla ja pestään kuumalla vedellä, emäksellä ylimääräisen hapon poistamiseksi ja lopuksi uudelleen kuumalla vedellä.To avoid excessive 9-isomer losses during extraction, the best results are obtained if the amount of 3-isomer is determined by liquid chromatography (L.C. analysis) as described below and a molar amount (or slightly excess) of acid corresponding to the amount of 3-isomer is added. The extraction can be performed at a temperature between room temperature and about 100 ° C. The boiling temperature and vigorous stirring correspond to the preferred conditions. Extraction is sufficient with vigorous stirring for about an hour to about five hours. The optimal time is about two hours. The hot mixture is collected by filtration and washed with hot water, base to remove excess acid and finally again with hot water.

3-isomeeri saadaan sitten poistetuksi täydellisesti (<100 ppm) hajottamalla selektiivisesti kemiallisesti 3-isomeeriä käyttämällä hyväksi sille ominaista heikompaa termodynaamista stabiliteettia.The 3-isomer is then completely removed (<100 ppm) by selective chemical decomposition of the 3-isomer, taking advantage of its inherent poorer thermodynamic stability.

3-isomeeri voidaan pilkkoa täydellisesti ja selektiivisesti adenii-niksi ja bentsyylipolymeeriksi käsittelemällä 96 %:isella rikkihapolla, vaikuttamatta haitallisesti 9-isomeeriin, seuraavan reaktio-kaavan mukaisesti: nh2 nh2 fV\ rY\The 3-isomer can be completely and selectively cleaved to the adenine and benzyl polymer by treatment with 96% sulfuric acid without adversely affecting the 9-isomer according to the following reaction formula: nh2 nh2 fV \ rY \

I HI H

CH„ , ...CH „, ...

2 adenixnx C\^V r I i! ''h/·' - CH® -j2 adenixnx C \ ^ V r I i! '' h / · '- CH® -j

Cl JZ .f 3-isomeeri ,| („^0) j karhen iumion i l polymeeri 12 64596Cl JZ .f 3-isomer, | („^ 0) j karhen iumion i l polymer 12 64596

Samoissa olosuhteissa 9-(2-kloori-6-fluoribentsyyli)adeniini ei reagoi. Täten käsiteltäessä 9-(2-kloori-6-fluoribentsyyli)adeniinia, joka sisältää 3-H % isomeeriä, 96-%:isella rikkihapolla, saadaan 96 %:n saannoin 9-(2-kloori-6-fluoribentsyyli)adeniinia, jossa on alle 100 ppm 3-isomeeriä. Polymeerin erottaminen täydellisesti 9-(2-kloori-6-fluoribentsyyli)adeniinin joukosta on osoittautunut hyvin vaikeaksi. Tämä ongelma on ratkaistu suorittamalla rikkihappo-käsittely sopivan karbeniumioneja sitovan aineen läsnäollessa, joka reagoi karbeniumionien kanssa ja estää polymeerin muodostumisen.Under the same conditions, 9- (2-chloro-6-fluorobenzyl) adenine does not react. Thus, treatment of 9- (2-chloro-6-fluorobenzyl) adenine containing the 3-H% isomer with 96% sulfuric acid gives, in 96% yield, 9- (2-chloro-6-fluorobenzyl) adenine, in which is less than 100 ppm of the 3-isomer. Complete separation of the polymer from 9- (2-chloro-6-fluorobenzyl) adenine has proved very difficult. This problem is solved by performing a sulfuric acid treatment in the presence of a suitable carbenium ion scavenger which reacts with the carbenium ions and prevents the formation of a polymer.

Sopivia karbeniumioneja sitovia aineita ovat tolueeni ja ksy-leeniseokset. Esimerkiksi tolueeni reagoi välituotteena muodostuvan karbeniumionin kanssa muodostaen transalkylointituotteen, jolloin po-lymerisoituminen estyy, Γ CH2+ ~ CH3 CH3Suitable carbenium ion scavengers include toluene and xylene mixtures. For example, toluene reacts with the intermediate carbenium ion to form a transalkylation product, preventing polymerization, Γ CH2 + ~ CH3 CH3

Cl F I ICl F I I

1 P „! + [I —> |l I C1 ; " ^ n„_>\ - . \ // (HS04 ) /—'1 P „! + [I -> | l I C1; "^ n„ _> \ -. \ // (HS04) / - '

FF

o- , m- ja p-transalky-lointituoteo-, m- and p-transalkylation product

Suorittamalla dealkylointi rikkihapolla tolueenin läsnäollessa 9-(2-kloori-6-fluoribentsyyli)adeniinistä, jossa on 3-4 % 3-isomeeriä saadaan erittäin puhdasta 9-(2-kloori-6-fluoribentsyyli)adeniinia, 13 64596 jossa ei ole lainkaan polymeeriä, ja joka sisältää alle 100 ppm 3-isomeeriä, saannon ollessa 97-98 %.Carrying dealkylation with sulfuric acid in the presence of toluene gives 9- (2-chloro-6-fluorobenzyl) adenine with 3-4% of the 3-isomer to give highly pure 9- (2-chloro-6-fluorobenzyl) adenine, 13,64596 with no polymer , and containing less than 100 ppm of the 3-isomer, in a yield of 97-98%.

Dealkylointi vaatii 3-isomeerin suhteen ainakin kaksinkertaisen mooliylimäärän rikkihappoa. 3-isomeerin konsentraatio määritetään nectekromatografisesti (L.C.-analyysi). Ylimäärin käytettävän rikkihapon määrällä ei ole ratkaisevaa merkitystä. Esimerkiksi raakaa 9-(2-kloori-6-fluoribentsyyli)adeniinia voidaan käyttää yhtä suuri painomäärä kuin mitä rikkihapon tilavuus tai raa'an 9-(2-kloori-6-fluoribentsyyli)adeniinin painomäärään nähden enintään 10-kertainen tilavuusmäärä rikkihappoa. Edullinen suhde on 1 g raakaa 9-(2-kloori-6-fluoribentsyylDadeniinia kutakin 2 ml kohden rikkihappoa .Dealkylation requires at least twice the molar excess of sulfuric acid relative to the 3-isomer. The concentration of the 3-isomer is determined by nectromatography (L.C. analysis). The amount of excess sulfuric acid used is not critical. For example, crude 9- (2-chloro-6-fluorobenzyl) adenine can be used in an amount equal to the volume of sulfuric acid or up to 10 times the volume of crude 9- (2-chloro-6-fluorobenzyl) adenine by weight. The preferred ratio is 1 g of crude 9- (2-chloro-6-fluorobenzyladenine for every 2 ml of sulfuric acid.

Käytettävän kaitoeniumioneja sitovan aineen määrällä ei ole ratkaisevaa merkitystä, edellyttäen, että sitä on läsnä 3-isomeeriin nähden ainakin ekvimolaarinen määrä. Suuri ylimäärä on kuitenkin suositeltava, koska se toimii sekä reagenssina että liuottimena.The amount of caitonium ion binding agent used is not critical, provided that it is present in an amount at least equimolar to the 3-isomer. However, a large excess is recommended as it acts as both a reagent and a solvent.

Raakaa 9-(2-kloori-6-fluoribentsyyli)adeniinia käsitellään väkevän rikkihapon kanssa lämpötilan ollessa huoneen lämpötilan ja noin 90°C välillä. Edullinen lämpötila on huoneen lämpötila ja reaktion loppuun saattamisen varmistamiseksi kuumennetaan lopuksi noin 10 minuuttia noin 80°C:ssa. Reaktioajalla ei ole ratkaisevaa merkitystä edellyttäen, että käytetty aika on vähintään kaksi tuntia. Reaktion kestettyä kaksi tuntia, se on tapahtunut pääasiallisesti täydellisesti ja voidaan lopettaa sopivaksi katsotulla hetkellä. Mitään haitallisia vaikutuksia ei ole havaittu, vaikka reaktion on annettu jatkua 36 tunnin ajan. Sopiva optimiaika on laboratorio-mittakaavassa suoritettavissa reaktioissa noin viisi tuntia ja noin 24 tuntia tuotantomittakaavassa suoritettavissa reaktioissa.The crude 9- (2-chloro-6-fluorobenzyl) adenine is treated with concentrated sulfuric acid at a temperature between room temperature and about 90 ° C. The preferred temperature is room temperature and is finally heated to about 80 ° C for about 10 minutes to ensure completion of the reaction. The reaction time is not critical, provided that the time used is at least two hours. After two hours of reaction, it is substantially complete and can be stopped at the time deemed appropriate. No adverse effects were observed, although the reaction was allowed to proceed for 36 hours. A suitable optimum time is about five hours for laboratory-scale reactions and about 24 hours for production-scale reactions.

Vesikerros erotetaan reaktioseoksesta. Vesifaasin erottumisen helpottamiseksi voidaan kuumentaa 50 - 100°C:ssa riippuen liuottimen ja läsnäolevasta hapon määrästä. Vesifaasi tehdään emäksiseksi limäämällä emästä. Mikä tahansa emäs on sopiva edellyttäen, että se inuodosLaa vesiliukoisen sulfaatin. Sopivia emäksiä ovat natrium-hydroksidi, kaiiumhydroksidi, ammoniumhydroksidi , natriumkarbonaatti ja ka] i umkarbonaa 1t; i . Edullinen emäs on nat riumhydroksid i.The aqueous layer is separated from the reaction mixture. To facilitate the separation of the aqueous phase, it can be heated at 50 to 100 ° C depending on the amount of solvent and acid present. The aqueous phase is made basic by liming the base. Any base is suitable provided that it leaches water-soluble sulfate. Suitable bases include sodium hydroxide, potassium hydroxide, ammonium hydroxide, sodium carbonate and carbonate; i. The preferred base is sodium hydroxide.

14 6459614 64596

Kun vesifaasi on tehty.vahvasti emäksiseksi, puhdas tuote saostuu ja kootaan talteen suodattamalla ja pestään vedellä tai vesipitoisella alkoholiliuoksella ja kuivataan vakuumissa.After the aqueous phase is made strongly basic, the pure product precipitates and is collected by filtration and washed with water or aqueous alcohol and dried in vacuo.

Kallis adeniini voidaan ottaa talteen alkalisesta suodokses-ta neutraloimalla suodos ja ottamalla saostunut adeniini talteen suodattamalla.Expensive adenine can be recovered from the alkaline filtrate by neutralizing the filtrate and recovering the precipitated adenine by filtration.

Analyysi I 9-isomeerin, 3-isomeerin ja 7-isomeerin painoanalyysi, kun 3-isomeeriä on läsnä enemmän kuin 1 %Analysis I Weight analysis of the 9-isomer, the 3-isomer and the 7-isomer in the presence of more than 1% of the 3-isomer

Tuotteessa olevien 9-isomeerin, 3-isomeerin ja 7-isomeerin paino-%:t määritetään suurpainenestekromatografiaa (L.C.) ja UV-tek-niikkaa käyttäen. 9-isomeerin ja 7-isomeerin paino-%:t määritetään suurpainenestekromatografiän (L.C.) avulla käyttämällä 15 cm:n korkuista 5 mikronin täysin huokoista piidioksidikolonnia (DuPont, Zorbax-SIL) ja eluoimalla seoksella CHCl3:MeOH (95:5) ja mittaamalla kunkin komponentin absorbanssi kohdalla 254 nm. Sisäisenä standardina käytettiin 9-bentsyyliadeniinia (tarkkuus - 0,3 %). 3-isomeerin paino-% määritetään U.V.-analyysin avulla. Näytteen analysointi tapahtuu 0,1 norm, emäksen metanoliliuoksessa kohdalla 310 nm. 3-isomeerin arvo on tämän aallonpituuden kohdalla 2300, eikä 9-isomeeri absorboi lainkaan (tarkkuus - 0,1 %).The weight percentages of the 9-isomer, the 3-isomer and the 7-isomer in the product are determined using high pressure liquid chromatography (L.C.) and UV techniques. The weight percentages of the 9-isomer and the 7-isomer are determined by high performance liquid chromatography (LC) using a 15 cm high 5 micron fully porous silica column (DuPont, Zorbax-SIL) and eluting with CHCl 3: MeOH (95: 5) and measuring each component absorbance at 254 nm. 9-Benzyladenine (accuracy - 0.3%) was used as an internal standard. The weight% of the 3-isomer is determined by U.V. analysis. The sample is analyzed in a 0.1 norm, methanol solution of the base at 310 nm. The value of the 3-isomer at this wavelength is 2300 and the 9-isomer does not absorb at all (accuracy - 0.1%).

II Pienten 3-isomeerimäärien' paino-%:n analyysi rikkihappo- käsittelyn jälkeenII. Analysis by weight of small amounts of 3-isomers after sulfuric acid treatment

Tuotteessa olevan 3-isomeerin määrä painoprosentteina määritetään suurpainenestekromatografisesti (L.C.) käyttämällä 10 mikronin, 30 cm:n korkuista, mikrohuokoista, oktadekyylisilaanilla sidottua faasikolonnia (Waters’ Associates Micro Bondapak C-18 No. 27324), ja liikkuvana faasina metanoli-vesi-fosfaatti-seosta 35°C:ssa. Liikkuva faasi valmistetaan 30 osasta metanolia ja 70 osasta 0,01-molaarista Na2HP01+:a, jonka pH on säädetty arvoon 7 HgPO^llä. Arvo saadaan U.V.-määritystä käytettäessä kohdalta 280 nm. Reagenssin herkkyysraja on 100 ppm.The amount by weight of the 3-isomer in the product is determined by high pressure liquid chromatography (LC) using a 10 micron, 30 cm high, microporous, octadecylsilane-bound phase column (Waters' Associates Micro Bondapak C-18 No. 27324), and methanol-water-phosphate as the mobile phase. mixture at 35 ° C. The mobile phase is prepared from 30 parts of methanol and 70 parts of 0.01 molar Na 2 HPO 2, the pH of which has been adjusted to 7 with HgPO 4. The value is obtained at 280 nm using the U.V. assay. The sensitivity limit of the reagent is 100 ppm.

i 15 64596i 15 64596

Seuraavat esimerkit valaisevat keksintöä.The following examples illustrate the invention.

Esimerkki 1Example 1

Menetelmä adeniinin alkyloimiseksi <x,2-dikloori-6-fluorito-lueenilla Aliquat 336:n läsnäollessa heksaani-vesi-seoksessa (heterogeeninen neste-neste-reaktioseos)Process for the alkylation of adenine with λ-2-dichloro-6-fluorotoluene in the presence of Aliquat 336 in hexane-water (heterogeneous liquid-liquid reaction mixture)

Kolmikaulaiseen pyöreäpohjäiseen 1 1 pulloon, joka oli varustettu lämpömittarilla, jäähdyttäjällä, typen sisäänjohtoput-kella ja ylhäältä tulevalla mekaanisella sekoittimella pantiin peräkkäin 40 ml vettä, 8,0 g natriumhydroksidia (0,20 moolia) ja, natriumhydroksidin liuotettua, 27,60 g adeniinia (puhtaus 98 %, 0,20 moolia). Adeniinin liuettua lisättiin liuos, jossa oli 39,95 g «,2-dikloori-6-fluoritolueenia (kaasukromatografisen määrityksen perusteella puhtaus 91,5 %, 0,20 moolia + 2 %) ja 5,04 g valmistetta Aliquat 336 (0,01 moolia, 5-mooli-%) 300 ml:ssa heksaania. (Mitään reaktiota ei tapahdu, jos ei lisätä "faasinsiirtokatalysaattaria"). Seosta sekoitettiin kiehuttaen kuusi tuntia, jäähdytettiin huoneen lämpötilaan ja kiinteät aineet Otettiin talteen suodattamalla. Kiinteät aineet pestiin kahdesti 100 ml:11a vettä ja kuivattiin va-kuumissa (100°C, yön ajan), jolloin saatiin 52,32 g 2-kloori-6-fluoribentsyloituneita adeniineja (94 %). U.V. (N/10 HC1) \maks. = 264, E% = 535; L.C.: 9-isomeeriä = 69,9 paino-%; U.V.: 3-isomee-riä = 25,0 paino-%.A 3-necked round bottom 1 L flask equipped with a thermometer, condenser, nitrogen inlet tube, and mechanical stirrer from above was sequentially charged with 40 mL of water, 8.0 g of sodium hydroxide (0.20 mol), and, after dissolving sodium hydroxide, 27.60 g of adenine. purity 98%, 0.20 mol). After dissolving the adenine, a solution of 39.95 g of β-dichloro-6-fluorotoluene (purity 91.5%, 0.20 mol + 2% as determined by gas chromatography) and 5.04 g of Aliquat 336 (0.01 moles, 5 mole%) in 300 ml of hexane. (No reaction occurs without the addition of a "phase transfer catalyst"). The mixture was stirred at reflux for six hours, cooled to room temperature and the solids were collected by filtration. The solids were washed twice with 100 mL of water and dried in vacuo (100 ° C, overnight) to give 52.32 g of 2-chloro-6-fluorobenzylated adenines (94%). U.V. (N / 10 HCl) \ max. = 264, E% = 535; L.C .: 9-isomer = 69.9% by weight; U.V .: 3-isomer = 25.0% by weight.

Epäpuhtaiden 2-kloori-6-fluoribentsyloitujen adeniinien puhdistus 30 g edellä saatua raaka-ainetta lisättiin 60 ml:aan kuumaa etikkahappoa (65°C). Lämpötila kohotettiin 100°C:seen, jolloin koko ainemäärä liukeni. Kuuma etikkahappoliuos suodatettiin esiläm-mitetyn sintratun lasisuppilon läpi ja suodos lisättiin tiputtamalla 10 minuutin kuluessa 240 ml:aan hyvin sekoitettua vettä, jonka lämpötila oli 95°C (lisättäessä vettä etikkahappolluokseen, saadaan tuotteen asetaattisuolaa, joka on puuvillaa muistuttavaa ainetta). Liuoksen jäähdyttyä 37°C:seen pääosa tuotteesta saostui. Tuote koottiin talteen suodattamalla, pestiin kerran 25 ml:11a etikkahappo-vesi-seosta (1:4), kahdesti 25 ml:11a vettä ja kuivattiin vakuumissa (95°C, kuusi tuntia), jolloin saatiin 20,83 g \ \ 16 64596 9-(2-kloori-6-fluoribentsyyli)adeniinia (69,5 %). U.V.: 3-isomee-riä = 3,0 paino-%; L.C.: 9-isomeeriä = 89 paino-%.Purification of crude 2-chloro-6-fluorobenzylated adenines 30 g of the crude material obtained above were added to 60 ml of hot acetic acid (65 ° C). The temperature was raised to 100 ° C, at which point all of the material dissolved. The hot acetic acid solution was filtered through a preheated sintered glass funnel and the filtrate was added dropwise over 10 minutes to 240 ml of well-stirred water at 95 ° C (adding water to the acetic acid solution gives the acetate salt of the product as a cotton-like substance). After cooling the solution to 37 ° C, most of the product precipitated. The product was collected by filtration, washed once with 25 ml of acetic acid-water (1: 4), twice with 25 ml of water and dried in vacuo (95 ° C, six hours) to give 20.83 g of \ 64496 9- (2-chloro-6-fluorobenzyl) adenine (69.5%). U.V .: 3-isomer = 3.0% by weight; L.C .: 9-isomer = 89% by weight.

Esimerkki 2Example 2

Menetelmä adeniinin alkyloimiseksi a,2-dikloori-6-fluorito-lueenilla valmisteen Aliquat 336 läsnäollessa asetonissa (kiinteä aine-neste-reaktioseos) 250 ml:n pyöreäpohjaiseen pulloon pantiin peräkkäin 100 ml asetonia, 6,95 g 97-%:isen puhdasta adeniinia (50 mmoolia) ja 4,0 g natriumhydroksidiliuosta (50 %, 50 mmoolia) ja suspensiota kiehutettiin puolitoista tuntia. Suspensioon lisättiin liuos, jossa oli 9,8 g a, 2-dikloori-6-f luoritolueenia (91 ,4-% : isesti puhdasta, 50 mmoolia) ja 1,25 g valmistetta Aliquat 336 (2,5 mmoolia, 5 mooli-%) 10 mlrssa asetonia ja kiehutettiin nopeasti sekoittaen kuusi tuntia. Ilman "faasinsiirtokatalysaattoria" reaktio on noin viisi kertaa hitaampi.) Reaktioseos jäähdytettiin huoneen lämpötilaan ja kiinteät aineet otettiin talteen suodattamalla. Kiinteä aines pestiin kahdesti 15 ml:11a asetonia ja sen jälkeen ravisteltiin 15 minuutin ajan 50 ml:n kanssa 0,1-norm, natriumhydroksidiliuosta (tämä poistaa reagoimattoman adeniinin ja alkyloinnin aikana muodostuneen NaCl:n). Kiinteä aines otettiin talteen suodattamalla, pestiin kahdesti 20 ml:11a vettä ja kuivattiin vakuumissa (100°C:ssa 4,5 tuntia), jolloin saatiin 13,12 g 2-kloori-6-fluoribentsyloitu-neita adeniineja (94,4 %). U.V.: (N/10 HC1) xmaks. = 262, E% = 534; L.C.: 9-isomeeriä = 77,4 paino-%; U.V.: 3-isomeeriä = 20,4 paino-%.Method for alkylation of adenine with α, 2-dichloro-6-fluoro-toluene in the presence of Aliquat 336 in acetone (solid-liquid reaction mixture) 100 ml of acetone, 6.95 g of 97% pure adenine were placed successively in a 250 ml round bottom flask. (50 mmol) and 4.0 g of sodium hydroxide solution (50%, 50 mmol) and the suspension were boiled for 1.5 hours. To the suspension was added a solution of 9.8 g of 2-dichloro-6-fluorotoluene (91, 4% pure, 50 mmol) and 1.25 g of Aliquat 336 (2.5 mmol, 5 mol%). ) In 10 ml of acetone and boiled with rapid stirring for six hours. Without a "phase transfer catalyst", the reaction is about five times slower.) The reaction mixture was cooled to room temperature and the solids were collected by filtration. The solid was washed twice with 15 ml of acetone and then shaken for 15 minutes with 50 ml of 0.1 N sodium hydroxide solution (this removes unreacted adenine and NaCl formed during alkylation). The solid was collected by filtration, washed twice with 20 ml of water and dried in vacuo (100 ° C for 4.5 hours) to give 13.12 g of 2-chloro-6-fluorobenzylated adenines (94.4%). . U.V .: (N / 10 HCl) xmax. = 262, E% = 534; L.C .: 9-isomer = 77.4% by weight; U.V .: 3-isomer = 20.4% by weight.

Puhdistus 10 g edellä saatua ainetta lisättiin 18 ml:aan kuumaa jää-etikkahappoa (,>'60oC). Seos lämmitettiin 110°C:seen (liukeneminen tapahtui 60° ja 90°C:n välillä), suodatettiin ja suodos lisättiin 80 ml:aan kuumaa vettä (95°C) viiden minuutin kuluessa nopeasti sekoittaen (huuhtelua varten lisättiin vielä 2 ml etikkahappoa). Lämpötilan pudottua 37°C:seen suspendoituneet kiinteät aineet otettiin talteen suodattamalla, pestiin kerran 10 ml:11a seosta, jossa suhde H20:H0Ac oli 4:1, ja kahdesti 15 ml:lla vettä. Kuivaamalla vakuumiuunissa (100°C:ssa kuusi tuntia) saatiin 7,64 g 9-(2-kloo-ri-6-fluoribentsyyli)adeniinia, 76,4 %. U.V.: (N/10 HCD^maks. = 17 6 4 5 9 6 260 , E% 570‘, DSC = 0,5 mooli-% epäpuhtautena ( 5 000 ppm), sp. (korjaamaton) = 244,5 - 246°C; levykromatograafinen silikageelillä suoritettu määritys, käyttämällä seosta CHCl^:MeOH (10:1), osoitti, että läsnä oli vähäistä epäpuhtautta kohdalla - 0,57 ja päätäp-lä oli kohdalla = 0,86.Purification 10 g of the material obtained above were added to 18 ml of hot glacial acetic acid (>> 60 ° C). The mixture was heated to 110 ° C (dissolution occurred between 60 ° and 90 ° C), filtered and the filtrate was added to 80 ml of hot water (95 ° C) over 5 minutes with rapid stirring (2 ml more acetic acid was added for rinsing). . After the temperature dropped to 37 ° C, the suspended solids were collected by filtration, washed once with 10 ml of a 4: 1 mixture of H 2 O: HCOAc and twice with 15 ml of water. Drying in a vacuum oven (100 ° C for six hours) gave 7.64 g of 9- (2-chloro-6-fluorobenzyl) adenine, 76.4%. UV: (N / 10 HCD 2 max. = 17 6 4 5 9 6 260, E% 570 ', DSC = 0.5 mol% as impurity (5,000 ppm), m.p. (uncorrected) = 244.5 - 246 ° C, plate chromatographic analysis on silica gel using CHCl 3: MeOH (10: 1) showed the presence of a minor impurity at -0.57 and the end point at = 0.86.

Esimerkki 3Example 3

Menetelmä natriumadeninaatti-hydraatin alkyloimiseksi oc,2-dikloori-6-fluoritolueenilla valmisteen Aliquat 336 läsnäollessa heksametyylifosforiamidissa (kiinteä aine-neste-reaktioseos)Process for the alkylation of sodium adeninate hydrate with α, 2-dichloro-6-fluorotoluene in the presence of Aliquat 336 in hexamethylphosphoramide (solid-liquid reaction mixture)

Vaihe 1Phase 1

Natriumadeninaatti-hydraattia valmistett. i in liuotta-tamalla mooli adeniinia 400 ml:aan 2,5-molaarista natriumhydroksi-dia (1,0 moolia). Liuosta konsentroitiin pyörivässä haihduttimessa vakuumissa höyryhauteen lämpötilassa, kunnes se tuli ylikylläs-tetyksi. Liuos kaadettiin lasiseen maljaan, ja natriumadeninaatin kiteydyttyä ainetta kuivattiin vakuumissa yön ajan 75°C:ssa. Kuivattu aine jauhettiin vapaasti valuvaksi jauheeksi; KF = 8,3 %; ekv. paino (HCIO^) = 85,4 (mp. = 170,8) (ekv. paino-titrauksilla HCl:lla arvoksi saatiin 172-173).Sodium adeninate hydrate prepared. by dissolving a mole of adenine in 400 ml of 2.5 molar sodium hydroxide (1.0 mole). The solution was concentrated on a rotary evaporator under vacuum at steam bath temperature until supersaturated. The solution was poured into a glass dish, and the crystallized material of sodium adeninate was dried under vacuum overnight at 75 ° C. The dried material was ground to a free-flowing powder; KF = 8.3%; eq. weight (HCl 2) = 85.4 (mp = 170.8) (eq. weight titrations with HCl gave 172-173).

Vaihe 2Step 2

Alkylointi 100 ml:n pulloon pantiin 50 ml heksametyylifosforiamidia (HMPA) (erikoiskuivausta ei suoritettu) ja 8,5b g (50 mmoolia) natriumadeninaatti-hydraattia (valmistettu menetelmällä, a oka on esitetty vaiheessa 1. Kun koko natriumademdnaattimäärä oli suspendoitunut tasaisesti, 10-15 minuutin kuluessa lisättiin 9,9 g oC , 2-dikloori-6-fluonitolueenia (puhtaus 92,3 %, 50 mmoolia + 2 %). Reaktioseosta sekoitettiin yön ajan (neljä tuntia riitti täydelliseen konversioon) ja sen jälkeen se kaadettiin hitaasti (kolmen minuutin kuluessa) 100 ml:aan vettä nopeasti sekoittaen (ph = 7,9 noin viiden minuutin kuluttua),. Reap, e imattoman adeniinin poistumisen varmistamiseksi suspensioon ί :i sir t i in nat-riumhydroksid.il iuosta 0,6 g (50 %, 7,5 mmoolia). Kun seosta oli sekoitettu 15 minuuttia, suspendoituneet kiinteät aineet oi.otti in talteen suodattamalla, postiin kahden.·*"! 25 ml :11a vettä ja kv;ivat'- 64596 tiin vakuumissa (neljä tuntia 7 5°C: ssa) , neliöin saatiin 13,?9 g 2-kloori-6-f luoribentsy loi tuj a acieni ineja (95,B % ) . U.V.: 3-i some eriä = 11,7 paino-% ·, L.C.: 9-isomeeriä - BM,B paino-% .Alkylation A 100 mL flask was charged with 50 mL of hexamethylphosphoramide (HMPA) (no special drying was performed) and 8.5b g (50 mmol) of sodium adeninate hydrate (prepared by the method shown in Step 1). When the entire amount of sodium adenate was uniformly suspended, 10- 9.9 g of oC, 2-dichloro-6-fluoronoluene (purity 92.3%, 50 mmol + 2%) were added over 15 minutes, the reaction mixture was stirred overnight (four hours was sufficient for complete conversion) and then slowly poured (three hours). minutes) to 100 ml of water with rapid stirring (ph = 7.9 after about five minutes) .Reap, e to ensure the removal of unabsorbed adenine to the suspension ί: i ti ti in sodium hydroxide.il solution 0.6 g (50% After stirring for 15 minutes, the suspended solids were collected by filtration, mailed to two .mu.l of 25 ml of water and water under vacuum (four hours for 7 hours). ° C), 13.9 g of 2-chloro-6 were obtained -f luoribenzy created tuj a acieni ineja (95, B%). U.V .: 3-i batches = 11.7 wt% ·, L.C .: 9-isomer - BM, B wt%.

Vaihe 3Step 3

Puhdistus 10 g edellä saatua niinettä liuot et Li in IB ml: aan 9 5°C etikka-happoa. Liuos suodatettiin kuurnana ja suodoc lisätt iin tiputtamalla muutaman minuutin kuluessa 80 ml:aan 95°C vettä nopeasti sekoittaen (lisäksi käytettiin 2 ml kuumaa etikkahappoa kaiken jäljellä olevan aineen huuhtomaseksi kuumaan veteen). Seoksen jäähdyttyä 37°C:seen, suspendoitunee t kiinteät aineet otettiin talteen suodattamalla, pestiin kerran 10 miellä etikkahappo-vesi seosta (1:5), kahdesti 10 ml:11a vettä ja kuivattiin vakuumi r.sa (yön ajan 75° C:ssa), jolloin saatiin 8,45 g 9-(2-k)oori-6-1luoribentsyyli)ade-nii.nia (84,5 %). Levykromatogra fisessu määri lyksessä silikagee-lillä seosta CHCl3:MeOH (10:1) käytettäessä sa,.tl. i.Xn yksi täplä; sp. 243-245°C; DSC = 0,8 mooli-% epäpuhtautta; U.V.: (N/10 HC1) ^raaks. = 259, E% = 562; U.V.: 3-isomeei >iä = <~2 paino-%.Purification Dissolve 10 g of the product obtained above in 1 ml of acetic acid. The solution was filtered through a pad and the filtrate was added dropwise over a few minutes to 80 ml of water at 95 ° C with rapid stirring (in addition, 2 ml of hot acetic acid was used to rinse any remaining material into hot water). After cooling to 37 ° C, the suspended solids were collected by filtration, washed once with 10 ml of acetic acid-water (1: 5), twice with 10 ml of water and dried under vacuum at 75 ° C overnight. ) to give 8.45 g of 9- (2-k) -o-6-fluorobenzyl) adenyl (84.5%). Plate chromatography on silica gel using CHCl 3: MeOH (10: 1). i.Xn one spot; mp. 243-245 ° C; DSC = 0.8 mol% impurity; U.V .: (N / 10 HCl) ^ raaks. = 259, E% = 562; U.V .: 3-isomers = <2% by weight.

Esimerkki 4Example 4

Menetelmä natriumadeninaattl-hydraatin alkyl oliniseksl ex , 2-dikloori-6-fluoritolueenilla valmisteen Aliquat 336 läsnäollessa asetonissa (kiinteä aine-neste-reak t i. o s e o s ) 250 ml:n pyöreäpohjai seen pulloon pantiin peräkkäin 100 ml asetonia ja 8,54 g natri umadeninaat ti-hyd raat t ia (5,0 mmoolia, valmistettu menetelmällä, jota on selostettu esimer'ki ssä 3 vaiheen 1 yhteydessä). Suspensioon lisättiin liuos, jossa oli 9,8 g c*,2-di-kloori-6-f luori tolueenia (puhtaus 91,4 %, 50 mmoolia) ja 1,25 g valmistetta Aliquat 336 ( 2,5 mmoolia , 5 mooli ·%) 1 0 ml: ssa asetonia ja kiehutettiin nopeasti sekoittaen kuusi tuntia. Reaktioseos jäähdytettiin huoneen lämpöt ilaan ja kiinteä aines o Le t i iin talteen suodattamalla, pestiin kahdesti 15 rmlrij,- -r-ml oivia ja sen jälkeen ravisteltiin 15 minuutin ajan 50 ml : n k an·; '.· a r‘ , 1 - norm , wt-riumhydroksidiliuosta (tämä poistaa reagoim.il rom m aeeni in in ja alkyloinnin aikana muodostuneen NaClrn). Kiinteä, aines otettiin talteen suodattamalla, postiin kahdesti 20 ml :11a vettä ja kuivat- 19 64596 tiin vakuumissa (100°C; 4,5 tuntia), jolloin saatiin 13,2 g 2-kioo-ri-6-fluoribentsloituja adeniineja (95 %). U.V.: (N/10 HC1) \maks . = 262, E% = 534; L.C.: 9-isomeeriä = 83 paino-%; U.V.: 3-isomeeriä 16 paino-%.Process with sodium olefinate hydrate with alkyl ol, 2-dichloro-6-fluorotoluene in the presence of Aliquat 336 in acetone (solid-liquid reaction mixture) A 250 ml round bottom flask was charged successively with 100 ml of acetone and 8.54 g of sodium umadeninate ti-hydrate (5.0 mmol, prepared by the method described in Example 3 in connection with Step 1). To the suspension was added a solution of 9.8 g of *, 2-dichloro-6-fluoro toluene (purity 91.4%, 50 mmol) and 1.25 g of Aliquat 336 (2.5 mmol, 5 mol · %) In 10 ml of acetone and boiled with rapid stirring for six hours. The reaction mixture was cooled to room temperature and the solid was collected by filtration, washed twice with 15 ml / ml, and then shaken for 15 minutes with 50 ml. '. · A r', 1-norm, wt-rium hydroxide solution (this removes the reacted rom m inene and the NaCl formed during the alkylation). The solid was collected by filtration, mailed twice with 20 mL of water and dried in vacuo (100 ° C; 4.5 hours) to give 13.2 g of 2-chloro-6-fluorobenzylated adenines (95 %). U.V .: (N / 10 HCl) \ max. = 262, E% = 534; L.C .: 9-isomer = 83% by weight; U.V .: 16-isomer 16% by weight.

Esimerkki 5Example 5

Menetelmä kaliumadeninaatti-hydraatin alkyloimiseksi oi, 2-dikloori-6-fluoritolueenilla valmisteen Aliquat 336 läsnäollessa asetonissa (kiinteä aine-neste-reaktioseos)Process for the alkylation of potassium adeninate hydrate with o, 2-dichloro-6-fluorotoluene in the presence of Aliquat 336 in acetone (solid-liquid reaction mixture)

Menetelmä suoritettiin esimerkissä 4 esitetyllä tavalla sillä poikkeuksella, että natriumadeninaatti korvattiin ekvivalentti-määrällä kaliumadeninaattia. Kaliumadeninaattia valmistettiin menetelmällä, joka on esitetty esimerkissä 3 vaiheen 1 yhteydessä sillä poikkeuksella, että natriumhydroksidi korvattiin ekvivalentti-määrällä kaliumhydroksidia. 2-kloori-6-fluoribentsyloitujen ade-niinien saanto oli 94 %. L.C.: 9-isomeeriä = 82 paino-%; U.V.: 3-isomeeriä =18 paino-%.The procedure was performed as described in Example 4, except that sodium adeninate was replaced with an equivalent amount of potassium adeninate. Potassium adeninate was prepared by the method set forth in Example 3 in connection with Step 1, except that sodium hydroxide was replaced with an equivalent amount of potassium hydroxide. The yield of 2-chloro-6-fluorobenzylated adenines was 94%. L.C .: 9-isomer = 82% by weight; U.V .: 3-isomer = 18% by weight.

Esimerkki 6Example 6

Menetelmä natriumadeninaatti-hydraatin alkyloimiseksi tk-(Y)- 2-kloori-6-fluoritolueenilla valmisteen Aliquat 336 läsnäollessa asetonissa (kiinteä aine-neste-reaktioseos)Process for the alkylation of sodium adeninate hydrate with tk- (Y) -2-chloro-6-fluorotoluene in the presence of Aliquat 336 in acetone (solid-liquid reaction mixture)

Menetelmä suoritettiin, kuten esimerkissä 4 on esitetty sillä poikkeuksella, että <X,2-dikloori-6-fluoritolueeni korvattiin ek-vivalenttimäärällä (X-(Y)-2-kloori-6-fluoritolueenia, jossa Y:llä on seuraavassa taulukossa I mainitut arvot: 64596 20The procedure was carried out as described in Example 4, with the exception that <X, 2-dichloro-6-fluorotoluene was replaced by an equivalent amount of X- (Y) -2-chloro-6-fluorotoluene, where Y has the conditions listed in Table I below. values: 64596 20

Taulukko I CH„YTable I CH „Y

ciT\TCIT \ T

Il ^ 2-kloori-6-fluori 9-isomeerin ja bentsyloitujen ade- 3-isomeerin suhde* niinien saanto 0 Y = °”n""^=^~CH3 85 % 2:1Ratio of the N-2-chloro-6-fluoro 9-isomer to the benzylated ade-3-isomer * Yield 0 O = ° "n" "^ = ^ ~ CH3 85% 2: 1

SS

(tosyyli) Y = I 85 % 7:3 Y = S(CH3)2 C1U 31 % 3:1 Y = Br 85 % i+: 1 x Eräissä tapauksissa saatiin pieniä määriä, enintään 10 % muita tuotteita, todennäköisesti muita isomeerejä (1-isomeeriä ja 7-iso-meeriä)(tosyl) Y = I 85% 7: 3 Y = S (CH3) 2 C1U 31% 3: 1 Y = Br 85% i +: 1 x In some cases small amounts, up to 10% of other products, probably other isomers (1 isomer and 7-isomer)

Esimerkki 7Example 7

Menetelmä natriumadeninaatti-hydraatin alkyloimiseksi o(,2,6-triklooritolueenilla valmisteen Aliquat 336 läsnäollessa asetonissa (kiinteä aine-neste-reaktioseos) 250 ml:n pyöreäpohjaiseen pulloon pantiin peräkkäin 100 ml asetonia ja 8,54 g natriumadeninaatti-hydraattia (50 mmoolia, valmistettu menetelmällä, joka on esitetty esimerkissä 3 vaiheen 1 yhteydessä). Suspensioon lisättiin liuos, jossa oli 10 g <*,2,6-triklooritolueenia (puhtaus 98 %, 50 mmoolia) ja 1,25 g valmistetta Aliquat 336 (2,5 mmoolia, 5 mooli-%) 10 ml:ssa asetonia ja kiehutettiin nopeasti sekoittaen kuuden tunnin ajan. Reaktioseos jäähdytettiin huoneen lämpötilaan ja kiinteä aines otettiin talteen suodattamalla, pestiin kahdesti 15 ml :ll.a asetonia ja sen jälkeen ravisteltiin 15 minuutin ajan 50 ml:n kanssa 0,1-norm, natriumhydrok-sidiliuosta (tämä poistaa reagoimattoman adeniinin ja alkyloinnin 21 64596 aikana muodostuneen NaCl:n). 'Kiinteä aines otettiin talteen suodattamalla, pestiin kahdesti 20 ml:11a vettä ja kuivattiin vakuumissa (100°C, 4,5 tuntia), jolloin saatiin 13,8 g 2,6-diklooribentsyloi-tuja adeniineja (94 %). U.V.: (N/10 HC1) xmaks. = 262, E% = 494¾ L.C.: 9-isomeeriä 81 paino-%; U.V.: 3-isomeeriä = 17 paino-%.Method for alkylation of sodium adeninate hydrate with 2,6-trichlorotoluene in the presence of Aliquat 336 in acetone (solid-liquid reaction mixture) A 250 ml round bottom flask was sequentially charged with 100 ml of acetone and 8.54 g of sodium adeninate hydrate (50 mm by the method described in Example 3 in connection with step 1.) A solution of 10 g of <*, 2,6-trichlorotoluene (purity 98%, 50 mmol) and 1.25 g of Aliquat 336 (2.5 mmol, 5 mol%) in 10 ml of acetone and boiled with rapid stirring for 6 hours The reaction mixture was cooled to room temperature and the solid was collected by filtration, washed twice with 15 ml of acetone and then shaken for 15 minutes with 50 ml. 0.1-norm, sodium hydroxide solution (this removes unreacted adenine and NaCl formed during alkylation 21,64596). The solid was collected by filtration, washed twice with 20 ml of water and dried. was dried in vacuo (100 ° C, 4.5 hours) to give 13.8 g of 2,6-dichlorobenzylated adenines (94%). U.V .: (N / 10 HCl) xmax. = 262, E% = 494¾ L.C .: the 9-isomer 81% by weight; U.V .: 3-isomer = 17% by weight.

Esimerkki 8Example 8

Menetelmä natriumadeninaatti-hydraatin alkyloimiseksi <x,2,6-triklooritolueenilla valmisteen Aliquat 336 läsnäollessa tolueenis-sa (kiinteä aine-neste-reaktioseos) 250 ml:n pyöreäpohjaiseen pulloon pantiin peräkkäin 100 ml tolueenia ja 8,54 g natriumadeninaatti-hydraattia (50 mmoolia, valmistettu menetelmällä, joka on esitetty esimerkissä 3 vaiheen 1 yhteydessä). Suspensioon lisättiin liuos, jossa oli 10 g <*,2,6-tri-klooritolueenia (puhtaus 98 %, 50 mmoolia) ja 1,25 g valmistetta Aliquat 336 ( 2,5 mmoolia, 5 mooli-%) 10 Jnl:ssa tolueenia ja kiehutettiin nopeasti sekoittaen kuusi tuntia. Reaktioseos jäähdytettiin huoneen lämpötilaan ja kiinteä aines otettiin talteen suodattamalla, pestiin kahdesti 15 ml:11a tolueenia ja sen jälkeen ravisteltiin 15 minuuttia 50 ml:n kanssa 0,1-norm, natriumhydroksidiliuos-ta (tämä poistaa kaiken reagoimattoman adeniinin ja alkyloinnin aikana muodostuneen NaCl:n). Kiinteä aines otettiin talteen suodattamalla, pestiin kahdesti 20 ml:lla vettä ja kuivattiin vakuumissa (100°C, 4,5 tuntia), jolloin saatiin 10,2 g 2,6-diklooribentsy-loituja adeniineja (76 %). U.V.: (N/10 HC1) \maks. = 262, E% = 498; L.C.: 9-isomeeriä = 80 paino-%; U.V.: 3-isomeeriä = 20 paino-%.Method for alkylation of sodium adeninate hydrate with ε, 2,6-trichlorotoluene in the presence of Aliquat 336 in toluene (solid-liquid reaction mixture) A 250 ml round bottom flask was sequentially charged with 100 ml of toluene and 8.54 g of sodium adeninate hydrate (50.5 g). , prepared by the method set forth in Example 3 in connection with Step 1). A solution of 10 g of <*, 2,6-trichlorotoluene (purity 98%, 50 mmol) and 1.25 g of Aliquat 336 (2.5 mmol, 5 mol%) in 10 .mu.l of toluene were added to the suspension. and boiled with rapid stirring for six hours. The reaction mixture was cooled to room temperature and the solid was collected by filtration, washed twice with 15 ml of toluene and then shaken for 15 minutes with 50 ml of 0.1 N sodium hydroxide solution (this removes any unreacted adenine and NaCl formed during alkylation). of). The solid was collected by filtration, washed twice with 20 ml of water and dried in vacuo (100 ° C, 4.5 hours) to give 10.2 g of 2,6-dichlorobenzylated adenines (76%). U.V .: (N / 10 HCl) \ max. = 262, E% = 498; L.C .: 9-isomer = 80% by weight; U.V .: 3-isomer = 20% by weight.

Esimerkki 9Example 9

Menetelmä raa'an 9-(2-kloori-6-fluoribentsyyli)adeniinin puhdistamiseksi rikkihappokäsittelylläProcess for the purification of crude 9- (2-chloro-6-fluorobenzyl) adenine by treatment with sulfuric acid

Sekoitettuun suspensioon, jossa oli epäpuhtaita 2-kloori-6-fluoribentsyloituja adeniineja (2,0 g, L.C.-määritys: 9-/3-/7-iso-meerien painoprosentit = 79,7/17,8/1,2) ksyleenissä (4 ml), lisättiin tiputtamalla huoneen lämpötilassa väkevää rikkihappoa (96 %, 4 ml). Seosta sekoitettiin 12 tuntia huoneen lämpötilassa ja sen jälkeen vielä 10 minuuttia 80°C:ssa. Kun reaktioseos oli jäähdytetty huoneen lämpötilaan, se kaadettiin jääveteen (25 ml), jossa 6 4 5 9 6 2 2 oli ksyleeniä (10 ml). Saatu seos siirrettiin höyryvaippaiseen ero-tussuppiloon ja lämmitettiin 85°C:seen sakan liuottamiseksi uudelleen. Vesikerros erotettiin ja tehtiin emäksiseksi lisäämällä väkevää ammoniumhydroksidia. Saostunut kiinteä aines suodatettiin erilleen ja pestiin kuumalla vedellä (/ x 10 ml). Saanto 1,53 g (95,6 % käytettävissä olleesta 9-isomeerista laskien). L.C.-määritys: 9-iso-meeriä 100,07 %; 3-isomeeriä ei todettavissa (<100 ppm); 7-iso-meeriä 0,8 %.To a stirred suspension of impure 2-chloro-6-fluorobenzylated adenines (2.0 g, LC determination: weight percent of 9- / 3- / 7-isomers = 79.7 / 17.8 / 1.2) in xylene (4 mL), concentrated sulfuric acid (96%, 4 mL) was added dropwise at room temperature. The mixture was stirred for 12 hours at room temperature and then for a further 10 minutes at 80 ° C. After cooling to room temperature, the reaction mixture was poured into ice water (25 ml) containing 6 x 5 9 6 2 2 xylene (10 ml). The resulting mixture was transferred to a steam jacketed separatory funnel and heated to 85 ° C to redissolve the precipitate. The aqueous layer was separated and basified by the addition of concentrated ammonium hydroxide. The precipitated solid was filtered off and washed with hot water (/ x 10 ml). Yield 1.53 g (95.6% based on the available 9-isomer). L.C. assay: 9-isomer 100.07%; No 3-isomer detected (<100 ppm); 7-isomer 0.8%.

Esimerkki 10Example 10

Menetelmä epäpuhtaan 9-(2-kloori-6-fluoribentsyyli)ade-niinin puhdistamiseksi uuttamalla laimealla typpihapolla ja käsittelemällä rikkihapollaProcess for the purification of crude 9- (2-chloro-6-fluorobenzyl) adenine by extraction with dilute nitric acid and treatment with sulfuric acid

Vaihe A Uuttaminen laimealla typpihapollaStep A Extraction with dilute nitric acid

Suspensiota, jossa oli 90,0 g (0,194 moolia) epäpuhtaita 2- kloori-6-fluoribentsyloituja adeniineja (9- ja 3-isomeerien painotit = 79,1 ja 19,3 L.C.-määrityksen perusteella), vastaten 31,64 g 9-isomeeriä ja 7,72 g 3-isomeeriä, 440 ml:ssa vettä, jossa oli 19,0 ml (0,0285 moolia) 1,5-norm, typpihappoa, lämmitettiin kiehuttaen ja voimakkaasti sekoittaen kaksi tuntia. Seos suodatettiin kuumana esilämmitetyllä suppilolla, pestiin kuumalla vedellä (3 x 50 ml:n lietteinä), väkevällä NH^OHilla (2 x 25 ml) ja kuumalla vedellä (3 x 50 ml). Tuote suodatettiin imussa kosteankui-vaksi ja lopuksi kuivattiin vakuumissa 65-70°C:ssa yön ajan, jolloin saatiin 31,67 g (saanto 97,1 %) 9-isomeerin suhteen rikastuneita 2-kloori-6-fluoribentsyloituja adeniineja. Saanto on laskettu käytettävissä olleen 9-isomeerin perusteella ja korjattu puhtaaksi tuotteeksi. L.C.-määritys: 9-isomeeriä 97,2 % ja 3-isomeeriä 3,0 %.A suspension of 90.0 g (0.194 moles) of impure 2-chloro-6-fluorobenzylated adenines (weights of 9 and 3 isomers = 79.1 and 19.3 by LC assay), corresponding to 31.64 g of 9- isomer and 7.72 g of the 3-isomer, in 440 ml of water containing 19.0 ml (0.0285 moles) of 1,5-nitric acid, were heated to reflux with vigorous stirring for two hours. The mixture was filtered hot on a preheated funnel, washed with hot water (3 x 50 mL slurries), concentrated NH 4 OH (2 x 25 mL) and hot water (3 x 50 mL). The product was filtered off with suction to dryness and finally dried in vacuo at 65-70 ° C overnight to give 31.67 g (yield 97.1%) of the 9-isomer enriched 2-chloro-6-fluorobenzylated adenines. The yield is calculated on the basis of the available 9-isomer and corrected to the pure product. L.C. assay: 97.2% of the 9-isomer and 3.0% of the 3-isomer.

Vaihe B 3-(2-kloori-6-fluoribentsyylDadeniinin dealky-lointi rikkihapollaStep B Dealkylation of 3- (2-chloro-6-fluorobenzyladenine with sulfuric acid

Voimakkaasti sekoitettuun suspensioon, jossa oli 50,0 g (0,18 moolia) 9-isomeeririkasta ?-kloori-6-fluoribentsyloitujen adeniinien seosta (L.C.-määrityksen perusteella 9- ja 3-isomeerien määrät 96,8 ja 3,2 paino-%) vastaten 48,4 g 9-isomeeriä ja 1,6 g 3- isomeeriä , 100 ml: ssa t.oluomia ( reagenssilaatu) , lisättiin ti- 23 64596 puttamalla 100 ml väkevää rikkihappoa (tarkistuksessa = 96,02 %) jäähdyttämällä tarvittaessa jää/vesi-seoksella lämpötilan pitämiseksi välillä 50-60°C. Seosta lämmitettiin sekoittaen 18 tuntia 50-60°C:ssa (koko kiinteä ainemäärä liukeni happoon ja saatiin kak-sifaasinen systeemi). Erä jäähdytettiin huoneen lämpötilaan ja kaadettiin jää/vesi-seokseen (300 ml), minkä jälkeen tuote saostui sulfaattisuolana. Seos siirrettiin höyryvaippaiseen erotussuppi-loon käyttämällä huuhteluun kuumaa vettä ja lämmitettiin 80-85° Ctseen sakan liuottamiseksi uudelleen ja vesikerroksen erottamiseksi tolueenikerroksesta. Vesikerros (650 ml) erotettiin ja pestiin 50 ml:11a kuumaa tolueenia käyttämällä samaa laitetta. Vesikerros tehtiin (sen ollessa vielä lämmin) emäkssiseksi (Ph = 10) lisäämällä varovaisesti väkevää ammoniumhydroksidiliuosta. Saostunutta valkeaa kiinteää ainetta vanhennettiin sekoittaen tunnin ajan ja otettiin talteen erän ollessa vielä lämmin. Tuote pestiin kuumalla vedellä (3 x 100 ml) ja 50-%:isella metanolin vesiliuoksella (2 x 100 ml). Erä imettiin kosteankuivaksi ja kuivattiin lopuksi vakuumissa 70°C:ssa yön aikana, jolloin saatiin puhdasta 9 — (2 — kloori-6-fluoribentsyyli)adeniinia. Saanto oli 47,8 g (käytettävissä olevasta 9-isomeeristä laskien 98,8 %), sp. 247-248°C; le-vykromatograafisessa analyysissä silikageelillä käyttämällä CHC1-:To a vigorously stirred suspension of 50.0 g (0.18 moles) of a mixture of 9-isomer-rich β-chloro-6-fluorobenzylated adenines (96- and 3.2% by weight of the 9- and 3-isomers as determined by LC). ), corresponding to 48.4 g of the 9-isomer and 1.6 g of the 3-isomer, in 100 ml of t.ol.ol. / water mixture to keep the temperature between 50-60 ° C. The mixture was heated with stirring for 18 hours at 50-60 ° C (all solids dissolved in acid to give a biphasic system). The batch was cooled to room temperature and poured into ice / water (300 mL), after which the product precipitated as the sulfate salt. The mixture was transferred to a steam jacketed separatory funnel using hot water for rinsing and heated to 80-85 ° C to redissolve the precipitate and separate the aqueous layer from the toluene layer. The aqueous layer (650 mL) was separated and washed with 50 mL of hot toluene using the same apparatus. The aqueous layer was basified (while still warm) (Ph = 10) by careful addition of concentrated ammonium hydroxide solution. The precipitated white solid was aged with stirring for 1 hour and collected while the batch was still warm. The product was washed with hot water (3 x 100 mL) and 50% aqueous methanol (2 x 100 mL). The batch was sucked wet dry and finally dried in vacuo at 70 ° C overnight to give pure 9- (2-chloro-6-fluorobenzyl) adenine. The yield was 47.8 g (based on 98.8% of the available 9-isomer), m.p. 247-248 ° C; by flash chromatographic analysis on silica gel using CHCl 3:

OO

MeOH-seosta (9:1) näkyviin tuli pääasiallisesti yksi ainoa täplä, = 0,48. Mitään polymeeriä tai muuta epäpuhtautta ei havaittu.The MeOH mixture (9: 1) showed mainly a single spot, = 0.48. No polymer or other impurity was detected.

L.C.-määrityksessä 9-isomeerin määräksi saatiin 100,68 %; 3-iso-meeriä ei todettu, Kokonaissaanto oli 95,9 %.In the L.C. assay, the amount of the 9-isomer was 100.68%; No 3-isomer was detected, Total yield was 95.9%.

Claims (3)

24 6 4 5 9 624 6 4 5 9 6 1. Menetelmä 3-isomeeristä oleellisesti vapaan 9-(2 ,6-dihalo-geenibentsyyli)adeniinin valmistamiseki alkyloimalla adeniinin alkali- tai maa-alkalimetallisuola 2,6-dihalogeenibentsyylihalogeni-dilla ja puhdistamalla saatu isomeeriseos, tunnettu siitä, että alkylointi suoritetaan kiinteä aine-neste- tai neste-neste-kaksifaasisysteemissä, jolloin a) kiinteä aine-neste-kaksifaasisysteemissä kiinteän faasin muodostaa adeniinin alkali- tai maa-alkalimetallisuola ja neste-faasin muodostaa liuos, joka sisältää 2,6-dihalogeenibentsyyli-halogenidia ja oniumsuola-faasinsiirtokatalysaattoria, jonka rakennekaava on: © © OOgNR-j^ Z tai 0 Θ (R1)3PR jossa R on C^-^g-alkyyli, R^ on C^g-alkyyli ja on anioni, joka on kloori, bromi tai jodi, aproottisessa veteen sekoittuvassa tai veteen sekoittumattomassa orgaanisessa liuottimessa, jolloin veteen sekoittuva liuotin sisältää 0 - noin 5 moolia vettä adeniinisuola-moolia kohti, b) neste-neste-kaksifaasisysteemissä toisen nestefaasin muodostaa adeniinin alkali- tai maa-alkalimetallisuolan vesiliuos ja toisen nestefaasin muodostaa liuos, joka sisältää 2 ,6-dihalogeeni-bentsyylihalogenidia ja oniumsuola-faasinsiirtokatalysaattoria, jonka rakennekaava on: Θ © (R)3NR1 Z tai © © - (R1)3PR z joissa R, R-^ ja Z^ merkitsevät samaa kuin edellä, aproottisessa veteen sekoittumattomassa orgaanisessa liuottimessa; ja (1) saatu isomeeriseos uutetaan laimealla typpihapolla ja (2) saadussa tuotteessa oleva 3-isomeeri dealkyloidaan väkevällä 2 6 64596 rikkihapolla karbeniumioneja sitovan tolueenin tai ksyleeniseoksen läsnäollessa.Process for the preparation of 9- (2,6-dihalobenzyl) adenine substantially free of the 3-isomer by alkylation of an alkali or alkaline earth metal salt of adenine with 2,6-dihalobenzyl halide and purification of the resulting isomer mixture, characterized in that the alkylation is carried out on a solid. in a liquid or liquid-liquid two-phase system, wherein a) in a solid-liquid two-phase system, the solid phase is formed by an alkali or alkaline earth metal salt of adenine and the liquid phase is a solution containing 2,6-dihalobenzyl halide and an onium salt phase transfer catalyst, the structural formula is: © OOgNR-j ^ Z or O Θ (R 1) 3 PR wherein R is C 1-6 alkyl, R 1- is C 1-6 alkyl and is an anion which is chlorine, bromine or iodine in aprotic water in a miscible or water-immiscible organic solvent, wherein the water-miscible solvent contains 0 to about 5 moles of water per mole of adenine salt, b) in a liquid-liquid two-phase system, the second liquid phase is formed by adenine An aqueous solution of an alkali or alkaline earth metal salt and a second liquid phase are formed by a solution containing 2,6-dihalobenzyl halide and an onium salt phase transfer catalyst having the structural formula: Θ © (R) 3NR1 Z or © © - (R1) 3PR z where R , R 1 and Z 2 are as defined above in an aprotic water-immiscible organic solvent; and (1) the resulting isomer mixture is extracted with dilute nitric acid and (2) the 3-isomer in the resulting product is dealkylated with concentrated 2,646,596 sulfuric acid in the presence of carbenium ion-binding toluene or xylene mixture. 2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä 3-isomeeristä oleellisesti vapaan 9-(2-kloori-6-fluoribentsyyli ) adeniinin tai 9-(2,6-diklooribentsyyli)adeniinin valmistamiseksi, tunnettu siitä, että alkylointi suoritetaan kiinteä aine-neste- tai neste-neste-kaksifaasisysteemissä, jolloin a) kiinteä aine-neste-kaksifaasisysteemissä kiinteän faasin muodostaa adeniinin maa-alkalimetallisuola ja nestefaasin muodostaa liuos, joka sisältää 2-kloori-6-fluoribentsyylihalogenidia tai 2,6-diklooribentsyylihalogenidia ja faasinsiirtokatalysaattorina kvaternääristä ammoniumsuolaa, jonka rakennekaava on Θ 0 (R)3NR1 zw jossa R on -alkyyli, on C-^_g-alkyyli ja on anioni, joka on kloori, bromi tai jodi, aproottisessa veteen sekoittuvassa liuot-timessa, joka on asetoni, asetonitriili tai heksametyylifosfori-amidi, jolloin veteen sekoittuva liuotin sisältää 0-5 moolia vettä adeniinisuolamoolia kohti, tai veteen sekoittumattomassa orgaanisessa liuottimessa, joka on heksaani, bentseeni, tolueeni, metylee-nikloridi, kloroformi tai petrolieetteri, b) necte-neste-kaksifaasisysteemissä toisen nestefaasin muodostaa adeniinin maa-alkalimetallisuolan vesiliuos ja toisen neste-faasin muodostaa liuos, joka sisältää 2-kloori.-6-fluoribentsyylihalogenidia tai 2 ,6-diklooribentsyylihalogenidia ja faasinsiirto-katalysaattorina kvaternääristä ammoniumsuolaa, jonka rakennekaava on: Θ o (r^nr-l iy jossa R, R^ ja Z® merkitsevät samaa kuin edellä, aproottisessa veteen sekoittumattomassa orgaanisessa liuottimessa, joka on heksaani, bentseeni, tolueeni, metyleenikloridi, kloroformi tai petrolieetteri; ja Cl) saatu isomeeriseos uutetaan laimealla typpihapolla ja (2) saadussa tuot teossa oleva 3-isomeeri dealkyloidaan väkevällä 2 6 64596 rikkihapolla karheniumioneja sitovan tolueenin tai ksyleeniseoksen läsnäollessa.Process for the preparation of 9- (2-chloro-6-fluorobenzyl) adenine or 9- (2,6-dichlorobenzyl) adenine substantially free of the 3-isomer according to claim 1, characterized in that the alkylation is carried out in solid-liquid or liquid form. in a liquid-two-phase system, wherein a) in a solid-liquid-two-phase system, the solid phase is formed by an alkaline earth metal salt of adenine and the liquid phase is formed by a solution containing 2-chloro-6-fluorobenzyl halide or 2,6-dichlorobenzyl halide and a phase transfer catalyst as an ammonium (R) 3 NR 1 zw wherein R is -alkyl, is C 1-6 alkyl and is an anion which is chlorine, bromine or iodine in an aprotic water-miscible solvent which is acetone, acetonitrile or hexamethylphosphoramide, wherein the water-miscible the solvent contains 0 to 5 moles of water per mole of adenine salt, or in a water-immiscible organic solvent such as hexane, benzene, toluene, methyl ee-nichloride, chloroform or petroleum ether, b) in a necte-liquid two-phase system, the second liquid phase is formed by an aqueous solution of the alkaline earth metal salt of adenine and the second liquid phase is formed by a solution containing 2-chloro-6-fluorobenzyl halide or 2,6-dichlorobenzazide halide as a catalyst, a quaternary ammonium salt having the structural formula: wherein R, R 1 and Z® are as defined above in an aprotic water-immiscible organic solvent which is hexane, benzene, toluene, methylene chloride, chloroform or petroleum ether; and Cl) the resulting isomer mixture is extracted with dilute nitric acid and (2) the 3-isomer in the resulting product is dealkylated with concentrated 2,646,596 sulfuric acid in the presence of toluene or xylene mixture which binds carhenium ions. 3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä 3-isomeeristä oleellisesti vapaan 9-(2-kloori-6-fluoribentsyyli)adeniinin valmistamiseksi, tunne tiu siitä, että alkylointi suoritetaan kiinteä aine-neste-kaksifaasisysteemissä, jolloin kiinteä faasi on nat-riumadeninaattia ja nestefaasin muodostaa liuos, joka sisältää 2-kloori-6-fluoribentsyylikloridia ja faasinsiirtokatälysaattorina kvaternääristä ammoniumsuolaa, jonka rakennekaava on: Θ Ö (n-R)3NCH3 Cl jossa R on Cg_12-n-alkyyli, asetonissa, joka sisältää 0 - noin 5 moolia vettä, natriumadeninaattimoolia kohti; ja (1) saatu isomeeriseos uutetaan laimealla typpihapolla ja (2) saadussa tuotteessa oleva 3-isomeeri dealkyloidaan väkevällä rikkihapolla karheniumioneja sitovan tolueenin tai ksyleeniseoksen läsnäollessa. [t . Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä 3-isomeeristä oleellisesti vapaan 9-(2-kloori-6-fluoribentsyyli)adeniinin valmistamiseksi, tunnettu siitä, että alkylointi suoritetaan nes-te-neste-kaksifaasisysteemissä, jolloin toisen nestefaasin muodostaa adeniinin maa-alkalimetallisuolan vesiliuos ja toisen nestefaasin muodostaa liuos, joka sisältää 2-kloori-6-fluoribentsyylikloridia ja faasinsiirtokatalysaattorina kvaternääristä ammoniumsuolaa, jonka rakennekaava on: © © (R)3nch3 z jossa R on Cg_12-alkyyli jd on anioni, joka on kloori, bromi tai jodi, heksaanissa: ja (1) saatu isomeeriseos uutetaan laimealla typpihapolla ja (2) saadussa tuotteessa oleva 3-isomeeri dealkyloidaan väkevällä rikkihapolla karheniumioneja sitovan tolueenin tai ksyleeniseoksen läsnä ollessa. 64596 2 7Process for the preparation of 9- (2-chloro-6-fluorobenzyl) adenine substantially free of the 3-isomer according to claim 1, characterized in that the alkylation is carried out in a solid-liquid two-phase system, the solid phase being sodium adenate and the liquid phase forming a solution containing 2-chloro-6-fluorobenzyl chloride and, as a phase transfer catalyst, a quaternary ammonium salt having the structural formula: (Ö (nR) 3NCH3 Cl wherein R is C8-12-n-alkyl, in acetone containing 0 to about 5 moles of water per mole of sodium adeninate; and (1) the resulting isomer mixture is extracted with dilute nitric acid and (2) the 3-isomer in the resulting product is dealkylated with concentrated sulfuric acid in the presence of toluene or xylene mixture which binds carhenium ions. [t. Process for the preparation of 9- (2-chloro-6-fluorobenzyl) adenine substantially free of the 3-isomer according to claim 2, characterized in that the alkylation is carried out in a liquid-liquid two-phase system, the second liquid phase being an aqueous solution of adenine alkaline earth metal salt and the second liquid phase a solution containing 2-chloro-6-fluorobenzyl chloride and, as a phase transfer catalyst, a quaternary ammonium salt having the structural formula: wherein R is C 8-12 alkyl jd is an anion which is chlorine, bromine or iodine in hexane: and (1 ) the mixture of isomers obtained is extracted with dilute nitric acid and (2) the 3-isomer in the obtained product is dealkylated with concentrated sulfuric acid in the presence of toluene or xylene mixture which binds carhenium ions. 64596 2 7