FI120095B - Menetelmä peptidien valmistamiseksi, joilla on kasvuhormonia vapauttavaa aktiivisuutta - Google Patents
Menetelmä peptidien valmistamiseksi, joilla on kasvuhormonia vapauttavaa aktiivisuutta Download PDFInfo
- Publication number
- FI120095B FI120095B FI940807A FI940807A FI120095B FI 120095 B FI120095 B FI 120095B FI 940807 A FI940807 A FI 940807A FI 940807 A FI940807 A FI 940807A FI 120095 B FI120095 B FI 120095B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- ala
- dphe
- trp
- phe
- dala
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 121
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 70
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 38
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 10
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims description 10
- 102000018997 Growth Hormone Human genes 0.000 title abstract description 95
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 title abstract description 95
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 title abstract description 95
- 230000003578 releasing effect Effects 0.000 title description 23
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 27
- 125000000030 D-alanine group Chemical group [H]N([H])[C@](C([H])([H])[H])(C(=O)[*])[H] 0.000 claims description 26
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 23
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 21
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- COLNVLDHVKWLRT-MRVPVSSYSA-N D-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-MRVPVSSYSA-N 0.000 claims description 14
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 claims description 12
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 11
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 9
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 claims description 7
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 claims description 7
- 125000000174 L-prolyl group Chemical group [H]N1C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[C@@]1([H])C(*)=O 0.000 claims description 6
- QIVBCDIJIAJPQS-SECBINFHSA-N D-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-SECBINFHSA-N 0.000 claims description 4
- 150000003862 amino acid derivatives Chemical class 0.000 claims description 4
- 238000006482 condensation reaction Methods 0.000 claims description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 4
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 claims description 4
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 claims description 2
- 101100129088 Caenorhabditis elegans lys-2 gene Proteins 0.000 claims 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 abstract description 23
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 55
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 52
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 47
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 45
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 41
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 38
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 29
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 25
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 25
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 23
- 229910001868 water Inorganic materials 0.000 description 23
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 22
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 20
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 20
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 19
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 18
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 18
- 235000019439 ethyl acetate Nutrition 0.000 description 18
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 16
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 15
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 15
- 239000000047 product Substances 0.000 description 13
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- -1 DAIa Chemical group 0.000 description 12
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 12
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 11
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 11
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 10
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 10
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 10
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 10
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 9
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 9
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 9
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 9
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 8
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 8
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 8
- WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N pentobarbital Chemical compound CCCC(C)C1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- NWQWNCILOXTTHF-HLCSKTDOSA-N (2s)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2r)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-aminopropanoyl]amino]-3-(1h-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-3-naphthalen-2-ylpropanoyl]amino]propanoyl]amino]-3-(1h-indol-3-yl)propanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]hexanamide Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@@H](N)C)C(=O)N[C@H](CC=1C=C2C=CC=CC2=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(N)=O)C1=CNC=N1 NWQWNCILOXTTHF-HLCSKTDOSA-N 0.000 description 7
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 108010083553 alanyl-histidyl-(2-naphthyl)alanyl-tryptophyl-phenylalanyl-lysinamide Proteins 0.000 description 7
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 7
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 7
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 7
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 7
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 7
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 7
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 7
- HRNLPPBUBKMZMT-SSSXJSFTSA-N (2s)-6-amino-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-aminopropanoyl]amino]-3-naphthalen-2-ylpropanoyl]amino]propanoyl]amino]-3-(1h-indol-3-yl)propanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]hexanamide Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](CC=1C=C2C=CC=CC2=CC=1)NC(=O)[C@H](N)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(N)=O)C1=CC=CC=C1 HRNLPPBUBKMZMT-SSSXJSFTSA-N 0.000 description 6
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N Histamine Chemical compound NCCC1=CN=CN1 NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 6
- WUGMRIBZSVSJNP-UHFFFAOYSA-N N-L-alanyl-L-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(N)C)C(O)=O)=CNC2=C1 WUGMRIBZSVSJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 6
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 6
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 6
- 229960000208 pralmorelin Drugs 0.000 description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 6
- 238000000967 suction filtration Methods 0.000 description 6
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 6
- 102100033367 Appetite-regulating hormone Human genes 0.000 description 5
- QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N D-alpha-Ala Natural products CC([NH3+])C([O-])=O QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical class [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 5
- 108010085742 growth hormone-releasing peptide-2 Proteins 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- ADFXKUOMJKEIND-UHFFFAOYSA-N 1,3-dicyclohexylurea Chemical compound C1CCCCC1NC(=O)NC1CCCCC1 ADFXKUOMJKEIND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QWCKQJZIFLGMSD-UHFFFAOYSA-N 2-Aminobutanoic acid Natural products CCC(N)C(O)=O QWCKQJZIFLGMSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FUOOLUPWFVMBKG-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoisobutyric acid Chemical compound CC(C)(N)C(O)=O FUOOLUPWFVMBKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101710119601 Growth hormone-releasing peptides Proteins 0.000 description 4
- QWCKQJZIFLGMSD-VKHMYHEASA-N L-alpha-aminobutyric acid Chemical compound CC[C@H](N)C(O)=O QWCKQJZIFLGMSD-VKHMYHEASA-N 0.000 description 4
- HKXLAGBDJVHRQG-YFKPBYRVSA-N L-lysinamide Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(N)=O HKXLAGBDJVHRQG-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 4
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 4
- 102100022831 Somatoliberin Human genes 0.000 description 4
- 101710142969 Somatoliberin Proteins 0.000 description 4
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 4
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 4
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 4
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 4
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 4
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 4
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 4
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 229960001412 pentobarbital Drugs 0.000 description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 4
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 4
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 4
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 4
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 4
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WUGMRIBZSVSJNP-UFBFGSQYSA-N Ala-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H](N)C)C(O)=O)=CNC2=C1 WUGMRIBZSVSJNP-UFBFGSQYSA-N 0.000 description 3
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 3
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 3
- QMMFVYPAHWMCMS-UHFFFAOYSA-N Dimethyl sulfide Chemical compound CSC QMMFVYPAHWMCMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 description 3
- 239000000095 Growth Hormone-Releasing Hormone Substances 0.000 description 3
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N L-Alanine Natural products C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 description 3
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- 125000000393 L-methionino group Chemical group [H]OC(=O)[C@@]([H])(N([H])[*])C([H])([H])C(SC([H])([H])[H])([H])[H] 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N N-Methylmorpholine Chemical compound CN1CCOCC1 SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 3
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 3
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 3
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 3
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 125000000051 benzyloxy group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])O* 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 3
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 3
- MGHPNCMVUAKAIE-UHFFFAOYSA-N diphenylmethanamine Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(N)C1=CC=CC=C1 MGHPNCMVUAKAIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 229960001340 histamine Drugs 0.000 description 3
- 229910000040 hydrogen fluoride Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000021332 multicellular organism growth Effects 0.000 description 3
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 3
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 3
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 3
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 3
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 3
- 239000003488 releasing hormone Substances 0.000 description 3
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 229940095064 tartrate Drugs 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 238000010792 warming Methods 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical group CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical class [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 2
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 102100039256 Growth hormone secretagogue receptor type 1 Human genes 0.000 description 2
- 101710202385 Growth hormone secretagogue receptor type 1 Proteins 0.000 description 2
- ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N Guanidine Chemical compound NC(N)=N ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical class C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical group CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-diisopropylethylamine Substances CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical group OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VJLLEKDQJSMHRU-STQMWFEESA-N Phe-Gly-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O VJLLEKDQJSMHRU-STQMWFEESA-N 0.000 description 2
- 108010007568 Protamines Chemical class 0.000 description 2
- 102000007327 Protamines Human genes 0.000 description 2
- 102000005157 Somatostatin Human genes 0.000 description 2
- 108010056088 Somatostatin Proteins 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 239000012445 acidic reagent Substances 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 2
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 239000012300 argon atmosphere Substances 0.000 description 2
- 229910052785 arsenic Inorganic materials 0.000 description 2
- RXQNHIDQIJXKTK-UHFFFAOYSA-N azane;pentanoic acid Chemical compound [NH4+].CCCCC([O-])=O RXQNHIDQIJXKTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical group OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002876 beta blocker Substances 0.000 description 2
- 229940097320 beta blocking agent Drugs 0.000 description 2
- UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N beta-alanine Chemical compound NCCC(O)=O UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 2
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 2
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 2
- 150000004662 dithiols Chemical class 0.000 description 2
- POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-M dodecanoate Chemical group CCCCCCCCCCCC([O-])=O POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 239000012458 free base Substances 0.000 description 2
- BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N gamma-aminobutyric acid Chemical compound NCCCC(O)=O BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 2
- 229960002885 histidine Drugs 0.000 description 2
- 125000004029 hydroxymethyl group Chemical group [H]OC([H])([H])* 0.000 description 2
- 239000003701 inert diluent Substances 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 229940070765 laurate Drugs 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 2
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 2
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 description 2
- 150000004702 methyl esters Chemical class 0.000 description 2
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 2
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 2
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 229940049964 oleate Drugs 0.000 description 2
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical group CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 229940039748 oxalate Drugs 0.000 description 2
- 229910052763 palladium Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 229940048914 protamine Drugs 0.000 description 2
- 230000022558 protein metabolic process Effects 0.000 description 2
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N sarcosine Chemical group C[NH2+]CC([O-])=O FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960001153 serine Drugs 0.000 description 2
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 description 2
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000007909 solid dosage form Substances 0.000 description 2
- NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N somatostatin Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)[C@@H](C)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)N)C(O)=O)=O)[C@H](O)C)C1=CC=CC=C1 NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N 0.000 description 2
- 229960000553 somatostatin Drugs 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 2
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 2
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical group CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960004441 tyrosine Drugs 0.000 description 2
- 229940070710 valerate Drugs 0.000 description 2
- NQPDZGIKBAWPEJ-UHFFFAOYSA-N valeric acid Chemical group CCCCC(O)=O NQPDZGIKBAWPEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 2
- USMNOWBWPHYOEA-XKSSXDPKSA-N (+)-beta-thujone Chemical compound O=C([C@H]1C)C[C@@]2(C(C)C)[C@@H]1C2 USMNOWBWPHYOEA-XKSSXDPKSA-N 0.000 description 1
- DFZVZEMNPGABKO-SSDOTTSWSA-N (2r)-2-amino-3-pyridin-3-ylpropanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC1=CC=CN=C1 DFZVZEMNPGABKO-SSDOTTSWSA-N 0.000 description 1
- IYKLZBIWFXPUCS-VIFPVBQESA-N (2s)-2-(naphthalen-1-ylamino)propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(N[C@@H](C)C(O)=O)=CC=CC2=C1 IYKLZBIWFXPUCS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- OCLLVJCYGMCLJG-ZDUSSCGKSA-N (2s)-2-azaniumyl-2-naphthalen-1-ylpropanoate Chemical compound C1=CC=C2C([C@](N)(C(O)=O)C)=CC=CC2=C1 OCLLVJCYGMCLJG-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- AHYFYYVVAXRMKB-KRWDZBQOSA-N (2s)-3-(1h-indol-3-yl)-2-(phenylmethoxycarbonylamino)propanoic acid Chemical compound N([C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)O)C(=O)OCC1=CC=CC=C1 AHYFYYVVAXRMKB-KRWDZBQOSA-N 0.000 description 1
- WZHKXNSOCOQYQX-FUAFALNISA-N (2s)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2r)-2-[[(2s)-2-amino-3-(1h-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-3-(1h-indol-3-yl)propanoyl]amino]propanoyl]amino]-3-(1h-indol-3-yl)propanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]hexanamide Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(N)=O)C1=CN=CN1 WZHKXNSOCOQYQX-FUAFALNISA-N 0.000 description 1
- HBAHZZVIEFRTEY-UHFFFAOYSA-N 2-heptylcyclohex-2-en-1-one Chemical compound CCCCCCCC1=CCCCC1=O HBAHZZVIEFRTEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KDHUXRBROABJBC-UHFFFAOYSA-N 4-Aminocatechol Chemical compound NC1=CC=C(O)C(O)=C1 KDHUXRBROABJBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonium chloride Substances [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical class [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 241000238424 Crustacea Species 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N D-OH-Asp Natural products OC(=O)C(N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000008574 D-amino acids Chemical group 0.000 description 1
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N Elaidinsaeure-aethylester Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000033962 Fontaine progeroid syndrome Diseases 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 1
- 101710198286 Growth hormone-releasing hormone receptor Proteins 0.000 description 1
- 102100033365 Growth hormone-releasing hormone receptor Human genes 0.000 description 1
- 108010010234 HDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000015779 HDL Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 102000002265 Human Growth Hormone Human genes 0.000 description 1
- 108010000521 Human Growth Hormone Proteins 0.000 description 1
- 239000000854 Human Growth Hormone Substances 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical compound Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N L-Aspartic acid Natural products OC(=O)[C@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- WTDRDQBEARUVNC-UHFFFAOYSA-N L-Dopa Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C(O)=C1 WTDRDQBEARUVNC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QUOGESRFPZDMMT-UHFFFAOYSA-N L-Homoarginine Natural products OC(=O)C(N)CCCCNC(N)=N QUOGESRFPZDMMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019766 L-Lysine Nutrition 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N L-Methionine Natural products CSCCC(N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000004201 L-cysteine Substances 0.000 description 1
- 235000013878 L-cysteine Nutrition 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 229930182844 L-isoleucine Natural products 0.000 description 1
- 125000002061 L-isoleucyl group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])[C@](C([H])([H])[H])([H])C(C([H])([H])[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000004395 L-leucine Substances 0.000 description 1
- 235000019454 L-leucine Nutrition 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 229930195722 L-methionine Natural products 0.000 description 1
- QEFRNWWLZKMPFJ-UHFFFAOYSA-N L-methionine sulphoxide Natural products CS(=O)CCC(N)C(O)=O QEFRNWWLZKMPFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002842 L-seryl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])O[H] 0.000 description 1
- 125000000510 L-tryptophano group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2N([H])C([H])=C(C([H])([H])[C@@]([H])(C(O[H])=O)N([H])[*])C2=C1[H] 0.000 description 1
- 125000003798 L-tyrosyl group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C1=C([H])C([H])=C(O[H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 108010007622 LDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000007330 LDL Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N Lithium Chemical class [Li] WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010024769 Local reaction Diseases 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical class [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001367 Merrifield resin Polymers 0.000 description 1
- 101100270435 Mus musculus Arhgef12 gene Proteins 0.000 description 1
- NSTPXGARCQOSAU-VIFPVBQESA-N N-formyl-L-phenylalanine Chemical compound O=CN[C@H](C(=O)O)CC1=CC=CC=C1 NSTPXGARCQOSAU-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- CHJJGSNFBQVOTG-UHFFFAOYSA-N N-methyl-guanidine Natural products CNC(N)=N CHJJGSNFBQVOTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 208000001132 Osteoporosis Diseases 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical class [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RVQDZELMXZRSSI-IUCAKERBSA-N Pro-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 RVQDZELMXZRSSI-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- 101001075370 Rattus norvegicus Gamma-glutamyl hydrolase Proteins 0.000 description 1
- 101000633010 Rattus norvegicus Somatostatin Proteins 0.000 description 1
- 208000001647 Renal Insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 108010077895 Sarcosine Proteins 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 241001214347 Tehran virus Species 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M Trifluoroacetate Chemical group [O-]C(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Chemical compound CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940022663 acetate Drugs 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 description 1
- 108010011559 alanylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 150000003973 alkyl amines Chemical class 0.000 description 1
- 150000001370 alpha-amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000008206 alpha-amino acids Nutrition 0.000 description 1
- 229940124277 aminobutyric acid Drugs 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000001195 anabolic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 229910052787 antimony Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 1
- 239000008135 aqueous vehicle Substances 0.000 description 1
- 125000003710 aryl alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 229960005261 aspartic acid Drugs 0.000 description 1
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 229910052788 barium Inorganic materials 0.000 description 1
- DSAJWYNOEDNPEQ-UHFFFAOYSA-N barium atom Chemical class [Ba] DSAJWYNOEDNPEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 229940050390 benzoate Drugs 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000012455 biphasic mixture Substances 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 1
- 125000004218 chloromethyl group Chemical group [H]C([H])(Cl)* 0.000 description 1
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 1
- 239000000544 cholinesterase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 1
- 230000007012 clinical effect Effects 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000002285 corn oil Substances 0.000 description 1
- 235000005687 corn oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- ORQXBVXKBGUSBA-UHFFFAOYSA-N cyclohexyl D-alanine Natural products OC(=O)C(N)CC1CCCCC1 ORQXBVXKBGUSBA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000113 cyclohexyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000003412 degenerative effect Effects 0.000 description 1
- 238000002716 delivery method Methods 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 125000005265 dialkylamine group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 1
- 208000010643 digestive system disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- SWSQBOPZIKWTGO-UHFFFAOYSA-N dimethylaminoamidine Natural products CN(C)C(N)=N SWSQBOPZIKWTGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MHUWZNTUIIFHAS-CLFAGFIQSA-N dioleoyl phosphatidic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(O)=O)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC MHUWZNTUIIFHAS-CLFAGFIQSA-N 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- CJYQQUPRURWLOW-YDLUHMIOSA-M dmsc Chemical compound [Na+].OP(=O)=O.OP(=O)=O.OP(=O)=O.[O-]P(=O)=O.O=C1C2=C(O)C=CC=C2[C@H](C)[C@@H]2C1=C(O)[C@]1(O)C(=O)C(C(N)=O)=C(O)[C@@H](N(C)C)[C@@H]1[C@H]2O CJYQQUPRURWLOW-YDLUHMIOSA-M 0.000 description 1
- 230000003670 easy-to-clean Effects 0.000 description 1
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 1
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 239000002702 enteric coating Substances 0.000 description 1
- 238000009505 enteric coating Methods 0.000 description 1
- 239000002329 esterase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N ethyl oleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N 0.000 description 1
- 229940093471 ethyl oleate Drugs 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 229940050411 fumarate Drugs 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 229960003692 gamma aminobutyric acid Drugs 0.000 description 1
- 108010077689 gamma-aminobutyryl-2-methyltryptophyl-2-methyltryptophyl-2-methyltryptophyl-lysinamide Proteins 0.000 description 1
- 238000002290 gas chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- BEBCJVAWIBVWNZ-UHFFFAOYSA-N glycinamide Chemical compound NCC(N)=O BEBCJVAWIBVWNZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N hcl hcl Chemical compound Cl.Cl IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 239000001307 helium Substances 0.000 description 1
- 229910052734 helium Inorganic materials 0.000 description 1
- SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N helium atom Chemical compound [He] SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012456 homogeneous solution Substances 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-M hydrogensulfate Chemical compound OS([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M hydroxide Chemical compound [OH-] XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 229940102223 injectable solution Drugs 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 description 1
- 201000006370 kidney failure Diseases 0.000 description 1
- DWKPPFQULDPWHX-VKHMYHEASA-N l-alanyl ester Chemical compound COC(=O)[C@H](C)N DWKPPFQULDPWHX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229940001447 lactate Drugs 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 229960003136 leucine Drugs 0.000 description 1
- 229960004502 levodopa Drugs 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000008297 liquid dosage form Substances 0.000 description 1
- 229910052744 lithium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Chemical class 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 1
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 125000005487 naphthalate group Chemical group 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012299 nitrogen atmosphere Substances 0.000 description 1
- 239000012457 nonaqueous media Substances 0.000 description 1
- 239000012038 nucleophile Substances 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 1
- JIIGCFAEDFDFJH-UHFFFAOYSA-N pentanide Chemical group CCCC[CH2-] JIIGCFAEDFDFJH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002304 perfume Substances 0.000 description 1
- 229960005190 phenylalanine Drugs 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 230000001817 pituitary effect Effects 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Chemical class 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 150000003141 primary amines Chemical class 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000001012 protector Effects 0.000 description 1
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- WRHZVMBBRYBTKZ-UHFFFAOYSA-N pyrrole-2-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN1 WRHZVMBBRYBTKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 229940043230 sarcosine Drugs 0.000 description 1
- 239000012047 saturated solution Substances 0.000 description 1
- 150000003335 secondary amines Chemical class 0.000 description 1
- 239000010703 silicon Substances 0.000 description 1
- JXKPEJDQGNYQSM-UHFFFAOYSA-M sodium propionate Chemical compound [Na+].CCC([O-])=O JXKPEJDQGNYQSM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000004324 sodium propionate Substances 0.000 description 1
- 229960003212 sodium propionate Drugs 0.000 description 1
- 235000010334 sodium propionate Nutrition 0.000 description 1
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000008279 sol Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 238000013223 sprague-dawley female rat Methods 0.000 description 1
- NHXLMOGPVYXJNR-UHFFFAOYSA-N srif Chemical compound N1C(=O)C(C(C)O)NC(=O)C(CCCCN)NC(=O)C(CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)NC(=O)C(CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)C(CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(CCCCN)NC(=O)C(NC(=O)CNC(=O)C(C)N)CSSCC(C(O)=O)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(O)C)NC(=O)C1CC1=CC=CC=C1 NHXLMOGPVYXJNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 239000003206 sterilizing agent Substances 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 229940086735 succinate Drugs 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229960002898 threonine Drugs 0.000 description 1
- 125000000026 trimethylsilyl group Chemical group [H]C([H])([H])[Si]([*])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229910052721 tungsten Inorganic materials 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004295 valine Drugs 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 1
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 1
- 210000002268 wool Anatomy 0.000 description 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- ORQXBVXKBGUSBA-QMMMGPOBSA-N β-cyclohexyl-alanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1CCCCC1 ORQXBVXKBGUSBA-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/60—Growth hormone-releasing factor [GH-RF], i.e. somatoliberin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/06—Antihyperlipidemics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/02—Drugs for disorders of the endocrine system of the hypothalamic hormones, e.g. TRH, GnRH, CRH, GRH, somatostatin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/06—Drugs for disorders of the endocrine system of the anterior pituitary hormones, e.g. TSH, ACTH, FSH, LH, PRL, GH
- A61P5/08—Drugs for disorders of the endocrine system of the anterior pituitary hormones, e.g. TSH, ACTH, FSH, LH, PRL, GH for decreasing, blocking or antagonising the activity of the anterior pituitary hormones
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Obesity (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Description
X
Menetelmä peptidien valmistamiseksi, joilla on kasvuhormonia vapauttavaa aktiivisuutta Tämä keksintö koskee menetelmää sellaisten uusien 5 pol ypept.idiyhdls teiden valmistamiseksi, jotka edistävät kasvuhormonin vapautumista, kun niitä annetaan eläimille, edullisesti ihmisille.
Keksinnön tausta
Kasvuhormonin (GH) tasojen nostaminen eläimissä, 10 esimerkiksi nisäkkäissä ihmiset mukaanlukien, antamalla GH:ta vapauttavia yhdisteitä, voi johtaa painon nousuun ja maidontuotannon tehostumiseen, jos antamisen jälkeen ilmenee riittävän kohonneita GH-tasoja. Lisäksi tiedetään, että kasvuhormonitasojen nousu nisäkkäissä ja ihmisissä 15 voidaan saada aikaan käyttämällä tunnettuja kasvuhormonia vapauttavia aineita, kuten luonnossa ilmeneviä kasvuhormonia vapauttavia hormoneja.
Kasvuhormonitasojen nousu nisäkkäissä voidaan myös saada aikaan käyttämällä kasvuhormonia vapauttavia pep-20 tideja, joista jotkin on kuvattu aikaisemmin, esimerkiksi patenteissa US 4 223 019, US 4 223 020, US 4 223 021, US 4 224 316, US 4 226 857, US 4 228 155, US 4 228 156, US 4 228 157, US 4 228 158, OS 4 410 512, US 4 410 513.
Kohonneiden GH-tasojen aikaansaamiseksi on myös 25 käytetty vasta-aineita, jotka on suunnattu endogeenista j kasvuhormonin vapautumisen inhibiittoria, somatostatiinia j (SEIF) vastaan. Tässä jälkimmäisessä esimerkissä kasvuhormonitaso ja kohotetaan poistamalla endogeeninen GH:n vapau- j humisen inhibiittori (SRIF) ennen kuin se pääsee aivo- | s 30 lisäkkeeseen, jossa se estää GH:n vapautumista. j
Kuhunkin näistä menetelmistä, joilla voidaan edistää kasvuhormonitasojen kohoamista, sisältyy materiaaleja, jotka ovat kalliita syntetisoida ja/'tai eristää riittävän puhtaana kohde-eläimelle antamista varten. Lyhytketjuiset, 35 molekyylipainoltaan pienet, suhteellisen yksinkertaiset i 2 polypeptidit, jotka ovat sulit eel li sen halpoja valmistaa ja joilla on kyky edistää kasvuhormonin vapautumista, olisivat suotavia, koska niiden pitäisi olla helposti ja halvalla valmistettavissa, helposti modifioitavissa kemialli-5 sesti ja/'tai fysikaalisesti, samoin kuin helposti puhdistettavissa ja formuloitavissa, ja niillä pitäisi olla e r i n oma i s et ku1j et usomina isuudet.
Vaikka tunnetaankin joitakin lyhytketjuisia polypeptide jä jotka voivat edistää kasvuhormonitasojen vapau-10 tumista ja nousua veressä, kuten His-DTrp-Äla-Trp-DPhe-Lys-NH2, kuten pohditaan patentissa ÖS 4 410 512, on tärkeää kyetä tarkoin muuttamaan polypeptidejä eri syistä, kuten vapautuminen, biologinen imeytyminen, lisääntynyt retentioaika jne, Aminohappomuutoksilla tietyissä kohdissa 15 voi kuitenkin olla dramaattisia vaikutuksia lyhytketjuisen peptidin kykyyn edistää kasvuhormonin vapautumista.
Olisi suotavaa, jos olisi olemassa erilaisia lyhyt-ketjuisia polypeptidejä, jotka voivat edistää kasvuhormonitasojen vapautumista ja nousua eläinten veressä, erityi-20 sesti ihmisissä. Olisi myös edullista, jos sellaisia polypeptide jä voitaisiin käyttää edistämään kasvuhormoni-tasojen vapautumista ja/tai nousua eläinten ja ihmisten veressä.
Olisi myös suotavaa tarjota menetelmiä, joilla 25 voitaisiin edistää kasvuhormonitasojen vapautumista ja/tai nousua eläinten veressä sellaisia lyhytketjuisia polypeptidejä käyttämällä.
Keksinnön yhteenveto
Keksintö koskee siten menetelmää sellaisen peptidin 30 valmistamiseksi, jolla on kaava 'Äi-A2-Äla-C2~C3”Ä5, jossa Äi on Gly, DAla, β-Ala, Sar, Ava, Äib, ct-aminovoihappo (ABU), NH2 (CH2) 5CO tai Na-4-imidat sollet i kka-happo (ΙΜΆ), Ä2 On DTrp, DBNal, Ä5 on Ä3-ft4“A5· , Ά3-Α5-, Α4-Α5Λ täi Ä5·, 35 jossa 3 a) Ä3 on Ala, Gly, DAIa, Pro tai desAla, bj Ä4 on Ala, Gly, DAla, Pro, CG-Cio-suoraketj uinen alkyyliaminokarboksyylihappO tai desAla, ja c) A$.· on Lys (e~Ri, R2) -Z, 0rn(5-Ri,R2) -Z, NH(CH2)>;N-5 (R3,Bii), Lys-Z, Qrn-Z tai Arg-Z, joissa Ri on suora ket j uinen
Cz-CiQ-alkyyiirybjmä tai H-atomi, R2 on suoraketjuinen C2^ Cio~alkyyliryhrnä tai H~atomi, mutta Ri ja R2 eivät samanaikaisesti ole H, R2 on suoraketj uinen Cs-Cio-alkyyliryhmä tai H-atomi, R4 on suoraketj uinen Cs-Cio-alkyyliryhmä tai 10 H-atomi, Z on NH( suoraketj uinen C2-Cio-alkyyliryhmä), N { suoraketj uinen Cs-Cio-alkyyliryhmä) 2, O- ( suoraketj uinen C2-Cio~alkyyli ryhmä), NH2 tai OH, x on 2 — 15, C2 on Trp, Phe tai ChxAla, C3 on DPhe, DPal tai DChxÄla, 15 ja edellä mainittujen peptidien orgaanisten ja epäorgaanisten additiosuolojen valmistamiseksi.
Ai on edullisesti DAla.
A2 on edullisesti D%a:l.
Ä5 on edullisesti .
20 Cs on edullisesti Trp tai Phe.
Edullisemmin C2 on Trp.
C3 on edullisesti DPhe.
Polypeptidi on edullisesti Äi~Ä2-Ala-C2-DPhe-Ä5, edullisemmin polypeptidi on Äi-As-Ala-Trp-DPhe-As.
25 Keksinnön mukaiselle menetelmälle on tunnusomaista, että (i) edellä kuvatut aminohapot tai aminohappojohdannaiset liitetään yhteen peptidin muodostamiseksi käyttäen kiinteän faasin menetelmää, tai (li) suoritetaan edellä kuvattujen aminohappojen tai aminohappojohdannaisten tai 30 näiden peptidifragmanttien syntetisointi liuosvaihemene- telmällä, joka sisältää ainakin kahden fragmentin kohden-saatioreaktion, peptidin muodostamiseksi.
Kuvioiden lyhyt kuvaus
Kuvio 1 on sarja kuvaajia, joista käy ilmi ihmisen 35 kasvuhormonin tasot seerumissa ajan funktiona.
4
Keksinnön yksityiskohtainen kuvaus
Olemme keksineet menetelmän valmistaa useita niisiä lyhytketjuisia polypeptideja, jotka saavat aikaan kasvu-hormonitasojen vapautumisen ja nousun eläinten veressä.
5 Polypeptidit ovat seuraahan kaavan mukaisia:
Ai-Ä2-Ala-Trp-DPhe-Äb, jossa Αχ on Gly, DAla, β-Ala, Sar, Ava, Aito, xmidatsolisti kkahappo, N-a.lempi alkyyliaminokarboksyylihappo, N, N-bis-alempi alkyyliaminökarboksyylihäppo, jossa alempi 10 alkyyliryhmä sisältää 2 - noin 10 suoraketjuista hiili-atomia. Alempi alkyyliryhmä on edullisesti 2 - 6 suora-ketjuista hiiliatomia. Alempi alkyyliryhmä voi olla substituoitu tai substituoimaton. Edullisia substituent-teja ovat 0, N tai Si. Alempi alkyyliryhmä on edullisesti 15 substituoimaton. Edullinen atsolikarboksyylihappo on Na-4-imidatsolietikkahappo {IMA). Ai on edullisesti Gly tai DAla. Ai on edullisimmin DAla.
Ä2 on DTrp, D%al. Edullisemmin Ä2 on DpNal.
As on A3-Ä4-Äs>, A3-A5', A4-Ä5’ tai As -. As on edullases-20 ti As-, As on Ala, Gly, DAla, Pro tai desAla. A4 on Ala, Gly, DAla, Pro,, lineaarinen alempi alkyyliaminokarboksyylihappo, tai des Ai a .· As.· on Lys(e-Ri, Ra) -Z, Orn (δ-Ri, R2J -Zr LArg (g-Rs-Re) , N.H (CH2) XN (R3,R4) * As- voi olla myös lys-Z,. Orn-Z tai Arg-Z, kun Ai ei ole: His, Ri on lineaarinen 25 alempi alkyyliryhmä tai H-atomi. R2 on lineaarinen alempi alkyyliryhmä tai H-atomi. Kun Rx on H, Ra ei ole H, samaten kun Ra on H, Ri ei ole H. R3 on lineaarinen alempi alkyyliryhmä tai H-atomi. R4 on lineaarinen alempi alkyyliryhmä tai H-atomi, Rs ja Rö ovat lineaarisia 30 alempia arkyyliryhmiä- Alempi alkyyliryhmä sisältää 2 -noin 10 suoraketjuista hiiliatomia. Alempi alkyyliryhmä on edullisesti 2 - 6 suoraketjuista hiiliatomia. Alempi alkyyliryhmä voi olla substituoitu tai substituoimaton. Edullisia substituentteja voivat olla O, N tai Si. Alempi 35 alkyyliryhmä on edullisesti substituoimaton:, g on guani- 5 diini. Z on NH(lineaarinen alempi alkyyliryhmä), M(lineaarinen alempi alkyyliryhmä)2, Ö~(lineaarinen alempi alkyyliryhmä) , RHa tai OH, jossa lineaarinen alempi aikyyli-ryhmä on edellä olevan määritelmän mukainen, x on 2 - 15. 5 x on edullisesti 2 - 6. Ä5> on edullisesti Lys-NHz. Ja minkä tahansa mainitun polypeptidin orgaaniset tai epäorgaaniset addit iosuolat.
Käytetyt aminohappotähteiden lyhenteet ovat stari-dardinomaisen peptidinimistön mukaisia: 10 Gly — Glysiini
Tyr = L-tyrosiini
Ile = L-isoleusiini
Glu - L-glutamiinihappo
Thr — L-treoniini 15 Phe == L-fenylalaniini
Ala = L-alaniini
Lys = L-lysiini
Asp = L-asparagiinihappo
Cys - L-kysteiini 20 Arg = 1-arginiini
Ava = aminovaleriaanahappo
Aib = aminoisovoihappo
Gin - L-glutamiini
Pro = L-pr. Oliini 25 leu ~ L-leusiini
Met = L-metIoniini
Ser = L-seriini
Asn == L-asparagiini
His = L-histidiinl 30 Trp - L-trypto£aani
Vai = L-valiini DOPA = 3,4-dihydro ks i f enyia1ani i n i
Met(Ö) ~ metioniinisulfoksidi
Abu - a-aminovoihappo 35 iLys « N—isopropyyli-L-lysiini 6 4-Abu ™ 4-aminovoihappo
Orn = L-o:r äitiini:
DaNal = a-naftyyli-D-alaniini
DpNal = β-naftyyii-D-alaniini 5 Sar = sarkosiini LAxg - homoarginiini
Chx = sykloheksyyli
ChxAla = L-sykloheksyylialaniini DCHxAla = D-sykloheksyylialaniini 10 IMA = Na-imidatsolietikkahappo
Tee - 1,2,3,4-tetrahydro-7-karoliini-3- karboksyyilhappo:
Tic = 1,2,3,:4-te:tbahydroiS:okinoliini-3- karbo ks yy1Ihappo 15 Tip = 4,5,6,7-tetrahyöro^lB-imidatsQ [e] karbpks yy1ihappo a, gamma-ABU = alfa, garnma-aminovoihappo DPal = D-3-pyridyylialaniini
Kaikki kolmikirjaimiset aminohappolyhenteet, joita 20 edeltää "D", viittaavat aminohappotähteen D-konfiguraati-oon, ja. glysiinin ajatellaan sisältyvän termiin "luonnossa ilmenevät 'L-aminohapot”.
Näissä lyhytketjäisissä polypeptideissä tietyt kohdat sietävät enemmän muutoksia kuin toiset, ilman että ne 25 vaikuttaisivat haitallisesti peptidin kykyyn edistää kas-vuhormonitasojen vapautumista ja/tai nousua eläinten veressä. Esimerkiksi As”kohta. Toiset kohdat sietävät vähemmän sellaisia muutoksia. Esimerkiksi keskellä sijaitsevat aminohappotähteet Ala, Trp, DPhe:, jotka on esitetty vas-30 taavasti merkein Cif C2 ja C3. Aikaisemmin uskottiin esimerkiksi, että Ai ja Ä2 pitäisi olla L- ja vastaavasti D-mUor dossa, ja että Trp ja DPhe pitäisi olla myös L- ja D-muodossa., mikä muodostaa LD LD -sarjan. Havaitsimme kuiten- j kin, että LD LD -sarja voi olla DD LD -sarja. Täten ha-35 valttiin yllättäen, että polypeptidi jolla on kaava Ä1-Ä2- 7
Ci“C2~C.3”Ä5f jossa Ai, Aj, As ovat edellä kuvatun kaltaisia ja Ci on Ala, C2 on Trp, Phe ja ChxA.la ja C3 on DPhe, DPal tai DChxAla, edistää fcasvuhormonitasojen vapautumista ja/-tai nousua eläimissä.
5 C2 on edullisesti Trp tai Phe, edullisemmin C? on
Trp.
C.3 on edullisesti DPhe. Kun C2 on ChxÄla, C3 on edullisesti DPhe. Kun C3 on DPal, Z on edullisesti OH.
Lisääntynyt taipuisuus, joka liittyy siihen että 10 valitaan emäksisiä, neutraaleja tai happamia aminohappotähteitä ja L- ja D-muotoja, joita voidaan käyttää aminohappojen Ai, Ä2, A3, Ä4, As, Ca ja C3 tapauksessa, tarjoaa suuren hallittavuuden halutun peptidin fysikaalis-kemiallisia ominaisuuksia silmälläpitäen.
15 Vaikka peptideillä 0Α1β-0βΝ3ΐ-Α1η-ΤΓρ-0ΡΗβ-Κγ3-ΝΗ2 ja DAla-Dphal-Ala-Phe-DPhe-Lys-NHa on samanlaista GH:ta vapauttavaa aktiivisuutta, Trp:n substituointi Phe:llä voi lisätä peptidin DAla-DpNal-Äla-Phe-DPhe-Lys-NHs kemiallista stabiiliutta, koska Trp hapettuu herkemmin kuin Phe. Sa-20 moin Trp:n substituointi Phe:llä antaa peptidille enemmän hydrofobisuutta ja tämä jäljempänä kuvattu fysikaäiis-ke-miallinen ominaisuus: voi olla edullinen ajateltaessa suun kautta, ihon läpi ja/ta.i. nenän kautta imeytymisen tehostamista samoin kun peptidin formulointia. Lisäksi DAla-25 D hNa 1 -Ä1 a-Tr p - DPh e -Lys-NHz: n ja DAla^Nal-Ala-Phe-DPhe-Lys-N:H2:n ED50 {50-prosenttx:sesti: tehokas annos) rotan solun histamiinimäärityksessä on samanlainen, se on: 30,5 ± 0,5 ja 30,8 ± 0,3 pg/ml ja molemmat ovat parannus verrattuna Aia - H i s - D βΝ a 1 - Ai a -/F rp - D Ph e - Ly s - N H 2: n hist ami ini a kt i ivisuu-30 teen, joka oli 11,0 ± 1,0 pg/ml. Peptidit, joilla on vähemmän histamiinia vapauttavaa, aktiivisuutta (korkeampi ED50) voivat olla kliinisesti tehokkaampia, koska ne voisivat tuottaa vähemmän haitallisen paikallisreaktion peptidin injektiokohtaan ja/tai voivat vähemmän todennäköi- 8 sesti tuottaa systeemisiä antigeenisiä haitallisia kliinisiä vaikutuksia.
Taipuisuus tarjoaa myös tärkeitä etuja halutun peptidin formuloinnissa ja antamisessa mille tahansa lajille.
5 Nämä muutokset voivat myös parantaa suun kautta tapahtuvaa imeytymistä, samoin kuin peptidien metaboliaa ja erittymistä. Äla-His-D%al-Äla~Trp—DPhe-tys—ΝΗ2 (GHRP-1 > on esimerkiksi kasvuhormonia vapauttavalta kyvyltään ihmisessä tehokkaampi kuin Ala-His-DTrp-Ala-Trp-phe-Lys-NHs. DAla-10 D%ar-Ala-Trp~DPhe-Lys-NH2 (GHRP-2) on kuitenkin tehokkaampi kuin GHRP-1 suun kautta annettuna. Katso kuvio 1, jossa esitetään kasvuhormonitasot normaalien nuorten miesten seerumissa ajan funktiona, sen jälkeen kun on annettu 300 pg/kg GHRP-1:tä 40 kohteelle, kuvaajassa vasemmalla 15 (o), 600 ug/kg GHRP-1:tä 39 kohteelle, keskellä (A), ja 100 pg/kg GHRP-2:ta 11 kohteelle, kuvaajassa oikealla (□) . Näissä tutkimuksissa GHRP annettiin ensiksi 20 ml:ssa H20:ta, jota seurasi heti 100 ml Η20:ta, normaaleille nuorille miehille,: joiden keski-ikä oli noin 25. Veri otet-20 tiin kuten kuvaajassa on esitetty. GH mitattiin radioimmunologisella määrityksellä.
Odotetaan myös, että koska näissä peptideissä aromaattiset sivuketjut voidaan poistaa tietyistä kohdista, joissa niiden aikaisemmin ajateltiin olevan välttämättö-25 miä, ja että D-aminohappotähteen pitäisi olla biologisesti suojatumpi kuin h-muodon, voidaan käyttää joillekin peptideille suurempaa suojausta ja pienempiä painoja, jotta pölypeptidiä saadaan edelleen tarkoin muuteltua jotta saadaan mahdolliseksi sellaiset ominaisuudet kuten imeyty-30 minert nenän kautta, suun kautta, ihon läpi, stabiilisuus in vivo jne.
Ri.:n, IA:n, Ra:n, R4:n ja Z:n osia voidaan myös vaihdella, mikä tarjoaa näin ollen lisäkontrollin halutun yhdisteen fysikaalis-kemiallisten ominaisuuksien suhteen.
9
Vastaavasti voidaan saada aikaan peptidin: tehostunut vapautuminen tiettyyn reseptoriin ja tietyssä lajissa..
Edullisia kasvuhormonia vapauttavia yhdisteitä, joita valmistetaan tämän keksinnön mukaisella mene telinä!-5 la, ovat:
Ai-A2-A1 a -T r p - D Phe - A5, tai minkä tahansa sellaisen polypeptidin orgaaniset 10 tai epäorgaaniset additiosuoXat, joissa Ai, Ä2 ja As ovat edellä olevan määritelmän mukaisia.
Edullisessa suoritusmuodossa kasvuhormonia vapauttavalla peptidillä, jota valmistetaan tämän keksinnön mukaisella menetelmällä, on kaava: 15 DAla-Ä2 -Ala-Trp-DPhe-Äs, ja sen orgaaniset tai epäorgaaniset additiosuolar.
Tämän yhdisteryhmän eäullisillä jäsenillä on kaava: 20 D Ai a - D^Nal-Ala-T r p - D Plie-Ly sNH2, ΟΆΐ3-0%θ1~Αΐ3~ΤΓρ-ΟΡΗθ-:31γ3 (ε-iPr) NHa, DAla-DTrp-Äla-Trp-DPhe-Lys{e-iPr)NH2, DÄla-DTrp-Ala-Trp-DPhe-LysNHs, DAla-D%al-:Ala-Trp-DPhe-NH {CH2) 5NH2, 2 5 NH2 (CH2) 5 CO - -N ai -Ä i a - T r p - D - Phe -NH (CH2) 5NH2, samoin kuin näiden orgaaniset tai epäorgaaniset additiosuolat.
Nämä yhdisteet ovat tällä hetkellä edullisimpia, koska nämä lyhytketjuisemmat polypeptidit ovat halvempia 30 syntetisoida, ja näiden spesifisten yhdisteiden on osoitettu edistävän hyvin tehokkaasti seerumin kasvuhormoni-tasojen nousua.
Muilla edullisilla kasvua vapauttavilla peptideillä^ | on kaava Ai-As-Ala-Phe-DPhe-As, Edullisiin jäseniin tässä 35 yhdisteryhmässä kuuluvat ne, joissa Ai on ΝαΙΜΑ, a,gam- 10 ma,ABU, DAla, His, Ala, His tai a,gamma,ABU, Ä2 on DpNai tai DPhe, ja As on LysNH2, LysNHz, Ärg HH2, NH-CHx-NHa (1,4-Chx-diamiini) tai Lys EA. Esimerkiksi NaiMA-D^Nal-Ala-Phe-DPhe-LysNHa, a, gamma, ABU-DpHal-Ala-Phe-DPhe-LysNH2, 5 DAla-DPhe -Ala- Phe - D Phe-Ly s NH2, PA1 a - H i s-DpNal-A1 a - Phe-DFh e -
LysMH?., Hal MA- D% a 1 - Al a ~ Ph e - D Ph e - NB-CHx- HH2,: ö, gamma, ABU-
DpHai-Ala-Phe-QPhe-KH-Ghx-NH2, DAla-D^al-Ala-Phe-DPhe-Lys EA, DAl:a-DpNal-Ala-Phe-DPhe“ArgNH:2, samoin kuin näiden orgaaniset tai epäorgaaniset additiosuolat.
10 Edullisiin peptideihin kuuluvat polypeptidit, joilla on kaava A1-A2-C1-C2-C3-Ä5, jossa Οχ on Ala, C.; on Trp, Phe: tai ChxAla, C3 on DPhe tai DChxÄla, Αχ on edullisesti DAla. Aa on edullisesti D^Nal:. Esimerkiksi DAla-Dί3Nal-Ala-ChxÄla-DPhe-L·ysNH2, DÄla-D^Nal-Ala-Phe-DChx:-15 Ala-LysHHa ja DÄla-DpNal-Ala-ChxÄla-DChxAlä-LysNH2, samoin kuin näiden orgaaniset tai epäorgaaniset additiosuolat.
iässä kuvatut yhdisteet ovat tyypillisesti helppoja syntetisoida, ne edistävät tehokkaasti seerumin hormonitasojen nousemista, ja ne ovat suotavia kaupallisen mitta— 20 kaavan tuotannossa ja. hyötykäytössä. Lisäksi nämä yhdisteet voivat olla edullisia sikäli että niillä on fysikaa-lis-kemiallisiä ominaisuuksia, jotka ovat suotavia silmälläpitäen sellaisten polypeptidiyhdisteiden tehokasta antamista monille erilaisille eläinlajeille, mikä johtuu tai-25 puisuudesta jonka ovat mahdollistaneet erilaiset substituutiot polypeptidiyhdisteiden monissa eri kohdissa, ja siitä että on valittu näiden polypeptidiyhdisteiden C-ter-minaalisen osan ja keskiosan polaarinen, neutraali tai ei-polaarinen luonne, niin että se piisi yhteensopiva halutun 30 antotavan kanssa, on suun kautta, nenän kautta, jatkuva antaminen, jossa käytetään erityisiä kemiallisia/mekaani-siä antömenetelmiä, Näitä peptidejä voidaan käyttää terapeuttisesti mihin tahansa tarkoitukseen johon kasvuhormonia voidaan 35 käyttää, kuten hoidettaessa hypotalamus-aivolisäke-peräis- 11 tä kiSpiökasvuisuuttar osteoporoosia, palovammoja ja munuaisten vajaatoimintaa akuuttia käyttöä varten, yhdisty-mätöntä luunmurtumaa varten ja haavan paranemisen edistämiseen. Lisäksi sitä voidaan käyttää edistämään kirurgiasi 5 ta toipumista ja akuuteissa/kröönisissa heikentävissä lääketieteellisissä sairauksissa. Suotuisia anabolisia vaikutuksia saadaan ihoon, lihakseen ja luuhun suhteessa ikään-tymisprosessiin ja samanaikaiseen elimistön rasvan vähenemiseen. Mukaan kuuluu myös syöpäpotilaiden hoito näillä 10 peptideillä, esimerkiksi näivetyksen estäminen ja/tai vähentäminen syöpäpotilaita. Nämä terapeuttiset käytöt saadaan aikaan käyttämällä peptidin terapeuttisesti tehokasta määrää. Sellainen määrä on se, joka tarvitaan edistämään seerumin kasvuhormoni tasojen vapautumista, kuten jäi jenipä-15; nä pohditaan.
Tämän keksinnön mukaisella menetelmällä valmistettavia yhdisteitä voidaan myös käyttää kohottamaan veren GH-tasoja eläimissä, lisäämään maidon tuotantoa naudoissa, lisäämään ruumiin kasvua sellaisissa eläimissä kuten 20 nisäkkäät (esim:, ihmiset, lampaat, naudat ja siat) samoin kuin kaloissa, siipikarjassa, muissa selkärankaisissa ja äyriäisissä, ja lisäämään villan ja/tai turkin tuotantoa nisäkkäissä· Ruumiin kasvun määrä riippuu eläinlajin sukupuolesta ja iästä, annettavan kasvuhormonia vapauttavan 25 yhdisteen määrästä ja identiteetistä, antoreitistä ja vastaavasta. Samoin tämän keksinnön mukaiset yhdisteet lisäävät seerumin GH:ta ihmisissä, lisäävät ruumiin kasvua lyhytkasvuisilla lapsilla, alentavat ruumiin rasvapitoisuutta ja parantavat proteiinimetaboliaa tietyissä lapsissa, 30 /parantavat ihon, lihaksen, luun proteiinimetaboliaa samalla kun ne alentavat vanhusten ruumiin rasvapitoisuutta, erityisesti kun läsnä on GH-puutos.
Nämä peptidit ovat myös hyödyllisiä parannettaessa seerumin pasvaprofiilia ihmisissä, sikäli että ne laskevat 35 seerumissa seerumikolesterolin ja "low density" -lipopro- 12 teiinin määrää ja nostavat seerumissa "high density" -li-poproteiinin määrää.
Tämän 'keksinnön mukaisesti uudet polypeptidiyhdisteet voidaan syntetisoida tavanomaisten liuosfaasin ja 5 kiinteän faasin peptidikemian menetelmien mukaisesti, tai sinänsä tunnetuilla tavoilla.
Peptidiamidej a varten kiinteän faasin synteesi aloitetaan edullisesti peptidin. C-terminaalisesta päästä.
Sovelias lähtömateriaali voidaan Valmistaa esimerkiksi 10 kiinnittämällä tarvittava suojattu alfa-aminohappo kloori-metyloituun hartsiin, hydroksimetyylihartsiiii, bentshyd-ryyliamiini (BHA) -hartsiin tai parametyylibentsyylihyd-ryyliamiini (p-Me-BHA) -hartsiin. Bio-Rad Laboratories (Richmond, California) myy yhtä sellaista kloorimetyy1i-15 hartsia kauppanimellä BIGBEADS SX-1. Hydroksimetyylihart-sin valmistus kuvataan Bodanskyn ym. artikkelissa, Cheminä. (Lontoo) 38, 1597 (1966). BHA-hartsin ovat kuvanneet Piettä ja Marshall, Chem. Comm., 650 (1970) ja se on kaupallisesti saatavilla (Peninsula Laboratories, Inc., Bel-20 mont, California).
Alkukiinnityksen jälkeen alfa-aminon suoj aryhmä voidaan poistaa valikoimalla happamia reagensseja, mukaan lukien tri fluorietikkahapon (TFA) tai suolahapon (HC1) liuokset orgaanisissa liuottimissa. huoneenlämmössä, Alfa- j 25 aminon suojaryhmäh poistamisen jälkeen jäljellä olevat suojatut aminohapot voidaan liittää: vaiheittain halutussa järjestyksessä. Kukin suojattu aminohappo voidaan saattaa yleensä reagoimaan noin kolmihkertaisena ylimääränä käyttämällä soveliasta karboksyyliryjmnäaktiyaattoria, kuten .30: disykloheksyylikarbodl-iniidi (DCC) tai di-isopropyylikar- bodi-imidi (DXC) liuoksessa, esimerkiksi metyleenlklo-ridissä (CH2CI2) tai dimetyyliformamidissa (DMF) ja näiden seoksissa.
Sen jälkeen kun haluttu aminohapposekvenssi on 35 saatu valmiiksi, haluttu peptidi voidaan lohkaista irti 13 bentshydryyiiamilriihar.tsikantaj asta käsittelemällä sellaisella reagenssilla kuten fluorivety (HP), joka ei pelkästään lohkaise peptidiä irti hartsista vaan lohkaisee irti yleisimmin käytetyt sivuketjun: suoja ryhmät. Kun käytetään 5 kloorimetyylihartsia tai hydxoksimetyylihartsia, HF-käsittely johtaa vapaan peptidihapon muodostumiseen. Peptidi-alkyyliamidejä ja -estereitä voidaan kuitenkin valmistaa näistä peptidihartseista löhkäiSemal la. soveliaalla alkyy-liamiinilla, dialkyyliamiinilla tai diaminoalkäahilla tai 10 transesteröimällä alkoholilla korkeissa pH-arvoissa.
Edellä kuvattu kiinteän faasin menetelmä on sinänsä tunnettu ja sen ovat kuvanneet Stewart ja Young, Solid Phase Peptide Synthesis: toinen laitos {Pierce Chemical
Co., Rockford, IL 1084).
15 Bodansky ym. esittävät teoksessa Peptide Synthesis, toinen laitos, John Wiley & Sons, New York, N.Y. 197 6, joitakin hyvin tunnettuja liuosmenetelmiä, joita voidaan käyttää syntetoitaessa tämän keksinnön peptidiosat.
Uskotaan, että peptidit on edullisempi syntetisoida 2.0, liuosvaihemenetelmällä, joka sisältää ainakin kahden pep- j tidifragmentin kondensointlreaktion. ) Tämä menetelmä käsittää sen, että peptidifragmentti X-Ai-Y kondensoidaan peptidifragmentin U-V-W kanssa, jolloin kaikki aminohapposivuketjut paitsi Ai: n sivuketjut 25 ovat neutraaleja tai suojattuja, ja jossa X on suo j. jossa suoj . on N-pään suojaryhmä: Y on A2-Q, Ala-Ag-Q, Aa-Ala-Q, Äla~Ä2“Ala-Q, A^-Ala-Trp-Q, Äla-Az-Äla-Trp-Q, Ala-Q tai -Q, jossa kun Y on Q, U on J-A2-Ala-Trp tai J-Ala~Ä2-Ala-Trp.
Kun Y on Äla-Q, ϋ on J-A2-Ala-Trp. Kun Y on A2-Q tai Ala-30; Ä2-Q, U on J-Ala—Trp. Kun Y on A2-Ala-Q tai Älä-Ä2-A3-Q, U
on J-Trp. Kun Y on Äs-Ala-Trp-Q tai Ala-Ä2-Ala-Trp-Q, U on J. V on As tai Z. Kun V on As, W on 2. Kun V on Z, W ei j ole läsnä. Ai, Ä2, As ja Z ovat kuten tässä On määritelty. | Q on peptidifragmentin karboksipää ja se on -0R3 tai | 35 -M, jossa M on osa jonka typpeä: sisältävä nukleofiili ky- | .1 ! 14 kenee syrjäyttämään, ja R3 on H, alkyyliryhmä joka sisältää yksi - noin 10 hiiliatomia, aryyliryhmä jossa on 6 ~ noin 12 hiiliatomia, tai aryyXialkyyliryhmä jossa on 7 - noin 12 hiiliatomia, J edustaa osoitetun fragmentin amiinipäätä 5 ja on H tai suojaryhmä, joka ei estä kytkentäreaktiota, esimerkiksi bentsyyli.
Tämän jälkeen suojaryhmät poistetaan. Vaihtoehtoisesti näin muodostunutta suojattua peptidiä voidaan käyttää jatkokondensaatioissa isomman peptidin valmistamiselle) si.
Tämä edullinen menetelmä kuvataan täydellisemmin US-patenttihakemuksessa nro 558 121, jonka John C. Hubbs ja S.W. Parker ovat panneet vireille 24, heinäkuuta 1990 otsikolla "Process for Synthesizing Peptides", joka liite-1,5: tään tähän viitteenä ja julkaistaan mmerolla WO92Q1709.
Tämän keksinnön mukaisella menetelmällä valmistetut peptidit voidaan antaa suun kautta, parenteraalisesti {lihaksensisäinen (i.m.), vatsaontelon sisäinen (i.p.), laskimonsisäinen (i.v.) tai ihonalainen (s.c.) injektio), 20 nenän kautta, vaginan kautta, peräsuolen kautta tai kielen alle, samoin kuin keuhkojen sisäisenä inhalaationa ja ne voidaan formuloida annosmuodoiksi, jotka soveltuvat kullekin antoreitille. Parenteraalinen antaminen on edullista.
25 Kiinteisiin annosmuotoihin suun kautta antamista varten kuuluvat kapselit, tabletit, pillerit, jauheet ja rakeet. Sellaisissa kiinteissä annosmuodoissa vaikuttava aine sekoitetaan ainakin yhden inertin kantajan kanssa, kuten sakkaroosi, laktoosi tai tärkkelys. Sellaiset annos-30 muodot voivat myös sisältää, normaalin käytännön mukaisesti, muitakin lisäaineita kuin inerttejä laimennusaineita, esim. liukuaineita kuten magnesiumstearaatti. Kapseleiden, tablettien ja pillereiden tapauksessa annosmuodot voivat myös sisältää puskuroivia aineita. Tabletit ja pillerit 35 voidaan lisäksi valmistaa enteropäällysteillä.
15
Nestemäisiin annosmuotoihin suun kautta tapahtuvaa antamista varten kuuluvat emulsiot, liuokset, suspensiot, siirapit, eliksiirit jotka sisältävät sinänsä tunnettuja inerttejä laimennusaineita, kuten vettä. Sellaisten inert-5 tien laimennusaineiden lisäksi koostumuksiin voi lisäksi sisältyä apuaineita, kuten kostutusaineita, emulgointi- ja suspensointiaineita ja makeutus-, maku- ja hajuaineita.
Tämän keksinnön mukaisella menetelmällä valmistettaviin valmisteisiin parenteraalista antamista varten kuulo luvat steriilit vesipohjaiset tai ei-vesipohjäiset liuokset, suspensiot tai emulsiot. Esimerkkejä ei-vesipohjäisistä liuottimista tai vehikkeleistä ovat propyleeni-glykoli, polyetyleeniglykoli, kasviöljyt, kuten oliiviöljy ja maissiöljy, liivate ja injektoitavissa olevat orgaani-'
15 set esterit kuten etyyliolaaatti. Sellaiset annosmuodot voivat myös sisältää apuaineita kuten säilytys-, kostutus-, emulgointi- ja dispergointiaineita. Ne voidaan steriloida esimerkiksi suodattamalla bakteereja pidättävän suodattimen läpi, sisällyttämällä koostumuksiin steriloivia ainei-20 ta, säteriyttämällä koostumuksia tai kuumentamalla koostumuksia. Ne voidaan myös valmistaa steriiliin vesiliuokseen., tai johonkin muuhun steriiliin injektoitavissa olevaan liuokseen välittömästi ennen, käyttöä. I
Tämän keksinnön mukaisesti valmistettavat uudet j 25 koostumukset ovat myös hyödyllisinä annettuna yhdessä kasvuhormonia vapauttavan hormonin kanssa (se on: luonnossa Ilmenevä kasvuhormonia vapauttava hormoni, sen analogit ja funktionaaliset ekvivalentit) samoin kuin yhdistelmänä muiden sellaisten yhdisteiden kanssa, jotka edistävät kas-30 vuhormonin vapautumista, esimerkiksi kasvuhormonia vapauttavat peptidit (katso US-patentti nro 4 880 778, johon viitataan täten viitteenä), esimerkiksi asetyylikoliinl-esteraasin inhibiittorit, β-salpaajat, a-2-salpaajat jne.
Sellaiset yhdistelmät edustavat erityisen edullista keinoa 35 antaa tämän keksinnön mukaisia kasvuhormonia vapauttavia 16 peptidejä, koska yhdistelmä edistää paljon suuremman kasvuhormonimäärän vapautumista kuin yhdistelmän kunkin komponentin aiheuttaman vasteen summan perusteella ennustetaan, se on: yhdistelmä tarjoaa synergistisen responssin 5 yksilöllisen komponentin Suhteen. Edellä siteeratussa patentissa kuvataan lisää yksityiskohtia kasvuhormonia vapauttavien peptidien yhdistelmien antamisesta. Sellaiset synergistiset yhdisteet ovat edullisesti yhdisteitä, jotka toimivat agonistina kasvuhormonia vapauttavan hormonin 10 reseptorissa tai inhiboivat somatostatiinin vaikutusta. Synergismi voi olla binääristä, se on: tämä yhdiste ja yksi synergistisistä yhdisteistä, tai sisältää useamman kuin yhden synergistisen yhdisteen.
Yhdistelmät., jotka aiheuttavat tehokkaasti kasvu- 1.5 hormonitason vapautumisen ja nousun sellaisen eläimen veressä kuten ihmiset, sisältävät tehokkaan määrän polypeptide jä, jotka on valittu tässä patenttivaatimuksiin kuuluvista polypeptideistä ja ainakin yhdestä seuraavista ryhmistä: ryhmän 1 polypeptidit, tai yhdiste joka edistää 20 kasvuhormonien vapautumista esim., ryhmän 2 polypeptidit, jossa ryhmän 1 polypeptidit voivat olla mitä tahansa luonnossa ilmeneviä kasvuhormonia vapauttavia 'hormoneja ja niiden funktionaalisia ekvivalentteja, missä mainitut polypeptidit vaikuttavat nisäkkäiden ja muiden selkärankais-25 ten ja äyriäisten kasvuhormonia vapauttavan hormonin reseptoriin, ryhmän 2 polypeptidit voivat olla mitä tahansa po-lypeptidejä, joilla on rakenne:
Tyr-DArg-Phe-NHb, 30 Tyr-DAla-Phe-NHs,
Tyr-DArg (NO;?) -Phe-NH?,
Tyr-DMet (O) -Phe-NHa,
Tyr-DAla-Phe-Gly-NH2,
Tyr-DÄrg-Phe-Gly-NHs, 35 Tyr-DThr-Phe-Gly-NHs, 17
Phe-DArg-Phe-Gly-NH2,
Tyr-DArg-Phe-Sar-NH2,
Tyr-DAla-Gly-Phe-NH2,
Tyr-DArg-Gly-Trp-NH2, 5 Tyr“DArg(N02)~phe-Gly-NH2,
Tyr-DMet (G)-Phe-Gly-NH2, (NMe) Tyr-DArg-Phe-Sar-NPh,
Tyr-DArg-Phe-Gly-öli,
Tyr-DArg-Gly-(NMe)Phe-NH2, 10 Tyr-DArg-Phe-Sar-oli,
Tyr-DAla-Phe-Sar-oli,
Tyr-DAla-Phe-Gly-Tyr-NH2,
Tyr-DAla-(NMe)Phe-Gly-Met(0}-oli,
Tyr-DArg-(NMe)Phe-Gly-Met(0}-oil, 15 Gly-Tyr-DArg-Phe-Gly~NH2,
Tyr-DThr-Gly-Phe-Thz-NH2, Gly-Tyr-DAla-Phe-Gly-NH2,
Tyr-DAla-Phe-Gly-oli,
Tyr-DAla-Gly-(NMe)Phe-Gly-oli, 20 Tyr-DArg-Phe-Sar-NHs,
Tyr-DAla-Phe-Sar-NHj,
Tyr-DAla-Gly-(NMe)Ph.e-NH2, Sar-Tyr-DArg-Phe-Sar-NHa,
Tyr-DCys-Phe-Gly-DCys-NHz (syklinen disulfidi), 25 Tyr-DCys-Phe-Gly-DCys-NH2 (vapaa ditioli),
Tyr-DCys-Gly-Phe-DCys-NH2 {syklinen disulfidi), Tyr-DCys-Gly-Phe-DCys-NHa (vapaa ditioli), Tyr-DAla-Phe-Gly-Tyr-Pro-Ser-NHa, Tyr-DAla-Phe-Sar-Tyr-Pro-Ser-NH2, 30 Tyr-DAla-Phe-Sar-Phe-Pro-Ser-NMa,
Tyr-DAla-Phe-Gly-Tyr-Hyp-Ser-NHa, Tyr-DAla-Phe-Sar-Tyr-Hyp-Ser-NH2, Tyr-DAla-Phe-Sar-Phe-Hyp-Ser-NHa, Tyr-DArg-Phe-Gly-Tyr-Hyp-Ser-NH2, 35 Tyr-DArg-Phe-Sar-Tyr-Pro-Ser-NHs, 18
Tyr-DÄrg-Bhe-Sar-Tyr-Hyp-Ser-NHj, Tyr-DArg-Bhe-Gly-Tyr- Pro-Ser-NH2, ja mainittujen ryhmän 2 polypeptidien orgaaniset tai epäorgaaniset additiosuolat, jossa mainittu yhdistelmä 5 annetaan sellaisena suhteena että mainittu yhdistelmä: aiheuttaa tehokkaasti kasvuhormonin synergistisen vapautumisen ja kohoamisen sellaisen eläimen veressä.
Muut yhdisteet, jotka edistävät kasvuhormonien vapautumista, ovat ammattimiehen tiedossa ja niihin kuuluvat 10 asetyylikoliiniesteraasin inhibiittorit, (3-salpaajat ja ot“ -a gon x $t 11.
Edullisesti käytetään luonnossa ilmeneviä kasvuhormonia vapauttavia hormoneja ja näiden funktioekvi-valentteja yhdessä yhdisteiden kanssa, jotka edistävät 15 kasvuhormonien vapauttamista, yhdessä näiden peptidien kanssa. Esimerkiksi ryhmän 1 ja ryhmän 2 yhdisteitä näiden peptidien kanssa, toinen esimerkki on ryhmän 1 yhdisteet tai β-salpaajat näiden peptidien kanssa.
Tämän keksinnön mukaisesti valmistettavan polypep-20 tidin määrä tai polypeptidien yhdistelmän määrä, joka annetaan, vaihtel.ee riippuen monista tekijöistä, esim. tietty hoidettava eläin, sen ikä ja sukupuoli, haluttu terapeuttinen vaikutus, antoreitti ja mitä polypeptidiä tai polypeptidien yhdistelmää käytetään. Kaikissa tapauk-25 sissa käytetään kuitenkin annosta, joka tehokkaasti (terapeuttisesti tehokas määrä) edistää kasvuhormonitason vapautumista ja nousua vastaanottavan eläimen veressä. Tavallisesti tämä annostaso on välillä noin 0,1 pg - 10 mg polypeptidin kokonaismääränä painokiloa kohti. Ammattimies 30 voi määrittää helposti kokeellisesti edullisen määrän tämän paljastuksen perusteella.
Esimerkiksi annostavan ollessa i.v, ihmisissä edullinen annostaso on välillä noin 0,1 pg - 10 pg poly— peptidin kokonaismääränä painokiloa kohti, edullisemmin 35 0,5 pg - 5 pg polypeptidin kokonaismääränä painokiloa koh- 19 ti,: vielä edullisemmin noin 0,7 g g - noin 3,0 pg painokiloa: kohti. Kun käytetään kasvuhormonia vapauttavien peptidien yhdistelmiä, voidaan käyttää alhaisempia: määriä tässä: kuvattua peptidiä, 5 Kun esimerkiksi yhdistetään tässä kuvattu peptidi esimerkiksi US-patentin nro 4 880 788 ryhmän I synergis-tisän yhdisteen kanssa, kuten G:HRB, edullinen alue on noin 0,1 pg - noin 5 pg tässä kuvattua yhdistettä painokiloa kohti ja noin 0,5 pg - noin 15,0 pg synergististä yhdis-10 tettä (esim, GHRH) ja edullisemmin noin 0,1 pg - noin 3 pg tätä yhdistettä noin 1,0 pg:n - noin 3 pg:n kanssa synergististä yhdistettä painokiloa kohti.
Kun antotapa on suun kautta antaminen, tarvitaan tyypillisesti suurempia: määriä. Esimerkiksi ihmisillä suun 15 kautta antamista varten anrtostaso on tyypillisesti noin 30 pg - noin 1 200 pg polypeptidiä painokiloa kohti, edullisemmin noin 70 pg - noin 600 pg polypeptidiä painokiloa kohti, vielä edullisemmin noin 200 pg - noin 600 pg poly-peptidin kokonaismääränä painokiloa kohti. Lehmät ja siat 20 tarvitsevat hoin saman annostason kuin, ihmiset, kun taas rotat tarvitsevat tyypillisesti korkeampia annostasoja. Tarkka taso voidaan päätellä helposti kokeellisesti tämän paljastuksen nojalla:.
Kuten edellä on sanottu, yleensä kasvuhormonia va-25 pauttavien peptidien yhdistelmien antaminen mahdollistaa: sen, että käytetään: alempia annoksia yksilöllisiä kasvuhormonia vapauttavia yhdisteitä suhteessa niihin annos-tasoihin, joita vaadittaisiin yksittäisten kasvuhormonia vapauttavien yhdisteiden tapauksessa, jotta saataisiin 30 aikaan samanlainen vaste, mikä johtuu yhdistelmän synergia ti sestä vaikutuksesta.
Tämän keksinnön suojapiiriin kuuluvat myös koostumukset, jotka sisältävät vaikuttavana aineenaan edellä kuvattujen polypeptidien ja niiden yhdistelmien orgaanisia 35 ja epäorgaanisia additiosuoloja, mahdollisesti liittyneenä 20 kantajaan, Xalmeimusaineeseen, ainetta hitaasti vapauttavaan matriisiin tai päällysteeseen.
Kasvuhormonia vapauttavien yhdisteiden tai näiden yhdistelmien, joiden ajatellaan kuuluvan tämän keksinnön 5 suojapiiriin, orgaanisiin tai epäorgaanisiin additiosuo-loihin kuuluvat sellaisten orgaanisten osien suolat kuten asetaatti, trlfluoriasetaatti, oksalaatti, valeraatti, oleaatti, lauraatti, bentsoaatti, laktaatti, tösylaatti, sxtraatti, maleaatti, fumaraatti, sukkinaatti, tartaraat-10 ti, naftalaatti ja vastaavat, ja sellaisten epäorgaanisten osien suolat kuten ryhmän I (se on: alkalimetallisuolat), ryhmän II (se on: maa-'alkalimetallisuolat) , ammonium- ja protamiinisuolat, sinkki, rauta ja vastaavat sellaisten vastaionien kanssa kuten kloridi, bromidi, sulfaatti, fos-15 faatti ja vastaavat, samoin kuin orgaanisten osien suolat joihin edellä viitataan.
Farmaseuttisesti soveliaat suolat ovat edullisia kun ajatellaan antamista ihmiskohteisiin. Sellaisiin suoloihin kuuluvat myrkyttömän alkalimetallin suolat, maa-20 alkalimetallisuolat ja ammoniumsuolat., joita käytetään yleisesti farmaseuttisessa teollisuudessa, mukaan lukien natrium-, kalium-, litium-, kalsium-, magnesium-, barium-, ammonium- ja protamiinisuolat, jotka valmistetaan sinänsä tunnetulla tavalla, lermi sisältää myös myrkyttömät happa-25 mat additiosuolat, jot.ka valmistetaan yleensä niin, että tämän keksinnön mukaiset yhdisteet saatetaan reagoimaan soveliaan orgaanisen tai epäorgaanisen hapon kanssa. Edustaviin suoloihin kuuluvat hydrokloridi, hydrobromldi, sulfaatti, bisulfaatti:, asetaatti, oksalaatti, valeraatti, 30 oleaatti, lauraatti, boraatti/ bentsoaatti, laktaatti, fosfaatti, tösylaatti, siträatti, maleaatti* fumaraatti, sukkinaatti, tartaraatti, naftylaatti ja vastaavat.
Keksintöä havainnollistavat lisäksi seuraavat, ei- I
rajoittavat esimerkit, 35 21
Esiraarfcfci 1
Kasvuhormonia vapauttavien; peptidien synteesi
Parametyylibentshydryyliamiinihydra kloridi (pMe-BHÄ.HC1) -hartsi sijoitetaan reaktioastiaan kaupallisesti 5 saatavilla olevassa automatisoidussa peptidisynteti saatto-rissa. Hartsi substituoidaan vapaalla amiinilla aina sub-stituutioasteeseen S mmöl/g. yhdisteet valmistetaan liittämällä yhteen yksittäisiä aminohappoja peptidisekvenssin karboksipäästä alkaen* siten että käytetään soveliasta 10 aktivoivaa ainetta, kuten N,N'-dxsykloheksyylikarbodi-imi-di (DCC). Yksittäisten aminohappojen alfa-amiini suojataan es imerkiks i t-but yylioksi karbohyyli johdannaisena (t-Boc) ja reaktiivisen puolen ketjun funktionaaliset ryhmät suojataan kuten taulukossa 1 pääpiirteittäin esitetään.
15 Taulukko 1
Sivuketjun suoj arybmät, jotka ovat soveliaita kiinteän faasin peptidisynteesissä Ärginiini: Ng-tosyyli Äspäragiinifrappo: Q-bentsyyli 20 Kysteiini: S-para-itietyylibentsyyli
Glutamiinihappo; O-bentsyyli
Histidiini: N^-tosyyli
LySiini:: NB-2/ 4-diklöoribentsyylioksikarbonyyli
Metioniini: 5~sulfoksidi 25 Seriini: O-bentsyyli
Treeniin i: O-bentsyyli T r yp t d fä ani: Nia-fo rmy y 1 i
Tyro s i i n i: 0-2,6-dikloor ib en t s yyli
Ennen ensimmäisen aminohapon inkorporaatiota hart-30 siä ravistellaan kolme kertaa (noin yksi minuutti kerrallaan) diklödrimetaanin kanssa {CH2CI2, noin 10 ml/hartsi-gramma ), neutraloidaan ravistelemalla kolmasti {noin kaksi minuuttia kerrallaan) dikloorimetaanissa olevan N/N-di-isopropyylietyyliamiinin (DIEA) kanssa {10:90, noin 10 35 ml/härtsigrairana) ja ravistellaan kolmasti {noin yksi 22 minuutti kerrallaan) dikloorimetäänin kanssa (noin 10 ml/hartsigramma)„ Ensimmäinen aminohappo ja kukin seu-raavista aminohapoista liitetään hartsiin käyttäen esimuo-dostettua symmetristä anhydridiä, niin että käytetään so-5 veliaalla tavalla. suojatun aminohapon hartsin reak tio kapasiteebin noin 6,0-kertaista kokonaismäärää ja DIG:n hartsin sitomiskapasiteetin noin 2,0-kertaista kokonaismäärää soveliaassa määrässä dikloorimetaania. Sellaisille aminohapoille, jotka ovat huonoliuokoisia dikloorimetaa-10 nissa, lisätään N,N-dimetyyliformamidia (DBF) homogeenisen liuoksen aikaansaamiseksi. Yleensä symmetrinen anhydridi valmistetaan jopa 30 minuuttia ennen kuin se pannaan reak-tioastiaan huoneenlämpötilassa tai sitä alemmassa lämpötilassa. Symmetrisen anhydridin valmistuksessa muodostuva 15 disykloheksyyliurea poistetaan suodattamalla liuos omalla painollaan reaktioastiaan. Aminohapon hartsiin liittämisen edistymistä seurataan yleensä väritestillä käyttämällä sellaista reagenssia kuten ninhydriini (joka reagoi primääristen ja sekundääristen amiinien kanssa). Sen jälkeen 20 kun suojattu aminohappo on liitetty täydellisesti hartsiin (> 99 %), alfa-aminon suojaryhmä poistetaan käsittelemällä happamalla reagenssilla (happamilla reagensseilla). Yleisesti käytetty reagenssi koostuu tirif luorietikkahapon (TFA) liuoksesta dikloorimetaanissa (33:66).
25 Sen jälkeen kun haluttu aminohapposekvenssi on saa tu valmiiksi, haluttu peptidi voidaan lohkaista irti hart-sikantajasta käsittelemällä sellaisella reagenssilla kuten fluorivety (HF), joka ei pelkästään lohkaise peptidiä hartsista vaan lohkaisee irti useimmin käytetyt sivuketjun 30 suojaryhmät. Kun käytetään BHä- tai p-Me-BHA-hartsia, HF-käsittely tuottaa suoraan vapaat peptidi amidit. Kun käytetään aminohappo-Merrifield-hartsia,: vapaat peptidi- alkyyiiamidit lohkaistaan irti käsittelemällä soveliaalla: amiinilla (tässä tapauksessa Boc-N—FMOG-Lys:n käyttö teki-35 si mahdolliseksi FMGC-ryhmän samanaikaisen poistamisen).
23 Täydellinen menetelmä,: jolla kukin yksittäinen aminohappotähde voidaan Inkorporoida hartsiin, esitetään pääpiirteittäin taulukossa 2.
Taulukko 2 5 Menetelmä, jolla yksittäiset aminohapot voidaan inkorporoida hartsiin Reagenssi Ravistelut Äika/Ravistelu I. Dikloorimetääni 3 1 min 10 2. T FA- d i k 1 oo r ime t a a n i .1 2 min (33;66} 3. TFE-dikloorimetaani 1 20 min (33:66) 4. Dikloorimetaani 3 1 min 15 5. DIEÄ, DM F 2 2 min (10:90) 6. Dikldörimetaani 3 1 min 7. B o c -aminohappo/DIC 1 15-120 min* i 8. Dikloorimetaani 3: 1 min 20 10. Tärkkäile llittämis- \ „ j reaktion edistymistä j II. Toista vaiheet 1-12 | kullekin yksittäiselle j aminohapolle j 25___
Liittämisaika riippuu yksittäisestä aminohaposta.
Liittymisastetta voidaan yleensä seurata väritestillä.
Jos liittyminen on epätäydellistä, sama aminohappo voidaan liittää uudelleen -eri menetelmällä, esim, HOBt-aktiivisel- | 30 la esterillä. Jos liittyminen on mennyt loppuun, voidaan j sitten liittää seuraava aminohappo. j Tätä menetelmää käyttäen valmistettiin yhdisteet, j jotka on kuvattu taulukoissa 3, 4, 5 ja 6. j ] | j -i * i 24
Esimerkki 2 GH:n vapautuminen rotissa in vivo
Hankittiin kypsymättömiä: Sprague-Dawley-naarasrot-tia (Charles River Laboratories, Wilmington, MÄ}. Säapumi-5 sen jälkeen niitä pidettiin 25 °C:n lämpötilassa 14:10 tunnin valo:pimeys-jaksolla. Vettä ja purina-rotanrehua oli saatavilla mielinmäärln. Poikaset pidettiin emojensa luona 21 päivän vanhoiksi.
Kaksikymmentäkuusi päivää vanhoja rottia, kuusi 10 rottaa per käsittelyryhmä, nukutettiin vatsaontelon sisäisesti pentobarbitaalilla (50 mg/kg) 20 minuuttia ennen i.v.-käsittelyä peptidillä. Normaali suolaliuos, joka oli 0,1-prosenttinen; liivatteen suhteen, oli vehikkeli peptidien laskimonsisäisille (i.v,) injektioille. Nukutetut 15 rotat,: jotka painoivat 55 - 65 grammaa/ injektoitiin i.v. taulukossa 3 osoitetulla määrällä kasvuhormonia vapauttavia yhdisteitä. Injektio tehtiin 0,1 ml:n liuoksena kau-lalaskimoon.
Kaikki eläimet uhrattiin giljotiinilla 10 minuuttia 20 viimeisen testi-injektion jälkeen (katso taulukko 3). Pään irrottamisen jälkeen kerättiin vartalosta tulevaa verta veren GH-tasojen määrittämiseksi. Sen jälkeen kun veren oli annettu hyytyä, se sentrifugoitiin ja seerumi erotettiin hyytymästä. Seerumi pidettiin pakastettuna siihen 25 päivään saakka, jolloin kerättiin näyte radioimmunologiseen määritykseen (RIA) kasvuhormonitasojen määritystä varten seuraavan menetelmän mukaisesti, jonka kehitti National Institute of Arthritis, Diabetes and Digestive and Kidney Diseases (NIÄDDK).
30 Reagenssit lisätään yleensä RIA-analyysiputkiin yhdellä istumalla: jääkaappilämpötilassa (+4 °€) seuraavas-sa j ärj estyksessä: a) puskuri, b) "kylmä" (se on: ei-radioaktkivinen) standardi 35 tai tuntematon analysoitava seeruminäyte, 25 p) radiojodeerattu ka s vuho rmon iantigeeni, ja d) kasvuhormonia vastaan suunnattu antiseerumi.
Reagenssin lisäys suoritetaan yleensä nils, että saadaan aikaan lopullinen Rlä-putken laimennos noin 5 1:30: 000 (antiseerumin suhde nesteen kokonaistilavuuteen, ti1avuus/tilavuus)
Sekoitettuja reagensseja inkuboidaan sitten tyypillisesti huoneenlämpötilassa (noin 25 °C) noin 24 tuntia ennen toisen vasta-aineen lisäystä (esim. apinan gammag.lo-10 buliinia vastaan suunnattu vuohen tai kanin antiseerumi) joka sitoutuu kasvuhormonia vastaan suunnattuun, komplek-soituneeseen antiseerumiin ja aiheuttaa sen saastumisen. RIÄ-putkien saostuneet sisällöt: analysoidaan sitten silmälläpitäen laskentatapahtumien lukumääriä tietyssä aika-15 jaksossa gammatuikelaskurissa. Valmistetaan standärdikäyrä piirtämällä kuvaajaan radioaktiivisten laskentatapahtumien lukumäärä kasvuhoi^onl (GH) -tason funktiona. Tuntemattomien GH-tasot määritetään sitten standardikäyrän referenssinä .
20 Seerumin GH mitattiin RIÄrlla reagensseilla, jotka saatiin National Hormone and Pituitary Program -ohjelmalta.
Taulukossa 3 olevat seerumitasot mitataan yksikössä ng/ml lähtien rotan GH:n standardiarvosta 0,61 kansainvä-25 lista yksifcköä/mg (lö/mg). Tulokset mitataan keskiarvona +/- keskiarvon keskivirhe (SEM.) . Tilastollinen analyysi suoritettiin Studentin t-testiliä- Taulukossa 3 esitetyt tulokset ovat keskiarvoja kuudella rotalla tehdyistä tutkimuksista .
30 i 26
Taulukko 3
In vivo GH-vapahtuminen, jonka kasvuhormonia vapauttavat yhdisteet saivat aikaan pentobarbitaatilla nukutetuissa 5 rotissa.
(Eläimet uhrattiin ID minuuttia viimeisen injektion jälkeen)
Sarake A Kokonais- Kontrolli- Vapautunut GH
10 GH:ta väpaut- annos3 seerumi Seerumin GH ng/ml tava peptidi (jjg/iv) GH ng/ml + SEM (N-6) ± SEM (N=6)
Ala-His-DiSNal- 0,1 337 + 51 610 ± 90
Aia-Trp-DPhe-Lys-NH2b 0,3 337 + 51 1140 + 187 1.0 337+51 2909+257 3.0 337 + 51 3686 + 436
His-DTrp-Ala-Trp·' 0,1 131 + 43 540 + 148 DPhe»tys-HH2b 0,3 131+43 751+ 88 1,0' 131 + 43 1790 + 252 7.0 131 + 43 2481 + 209 DAia-D/3Nal-Ala- Ö^I 337" i 51~ 1381 + 222 ”
Trp-DPhe-Lys-NH, 0,3 337 + 51 2831 ± 304 10 337 + 51 2886 + 179 30 337+51 3678+287 15 DAla-DTrp-Ala-Trp- DPhe*Lys-NH2 0,1 111 ± 24 526 ± 86 0,3 111 + 24 1608 + 204 1.0 111 ± 24 2820 + 346 3.0 111 + 24 2437 + 214
Ala-Hi s - DjÖHa 1 - Ala -
Trp-DPhe-hySrHH2b 0,3 160 + 51 1418 + 302 lr0 160 ± 51 2201 + 269 ; 27
His-DTrp-Ala-Trp DPhe-Lys-NH^ 0,1 140 + 10 200 + 40 0,3 140 + 10 505 + 50 1.0 140 ± 10 1640 ± 215
Ala-His-D/JNal-Ala -
Trp-DPhe-Lys-HH2b 0,3 228 + 23 1746 ±318 1.0 228 ± 23 2610 ± 176
Gly- D/3Nal * Ala-Trp- DPha-Lys-NH, Q3 160 ± 36 1237 ± 249 1.0 160 ± 36 2325 ± 46 3.0 160 ± 36 2694 ± 370 10,0 160 ± 36 3454 ± 159
Ala - His - D0ilä 1 - Ala -
Trp - DPhe - Ly s - HH2b 0,1 160 ± 36 822 ± 243 0r3 160 ± 36 1594 + 292 1.0 160 ± 36 2180 ± 284
Gly -D#Nal-Ala-Trp- DPhe-Lys-NH2 0,3 215 ± 33 1301 + 260 1.0 215 ± 33 2211 ± 146 3.0 215 + 33 2364 ± 365
Sar-D^Nal-Ala-Trp- DPhe-Lys-NHj 0,3 262 ± S3* 908 ± 264* 1.0 262 ± 53* 1681 ± 262* 3.0 262 ± 53 2600 ± 316* 5 ______________
Gly > Dj9Na 1 - Ala - Trp * DPhe-Lys-NH2 0,3 135 ± 32 1387 ± 352 1.0 135 ± 32 1958 ± 353 3.0 135 ± 32 2605 ± 97 /JAia - D/SNal * Ala - Trp - DPhe*Lys-NH? 0f 3 135 ± 32 1937 + 343 1.0 135 ± 32 3603 + 645 3.0 1.35 ± 32 4000 ± 500
Ava* ” - D/?Na 1 - Al a - ~~ '
Trp ·* DPhe - Lvs-* 0,3 135 ± 32 2469 ± 185 ifQ 135 ± 32 4034 ± 680 3f0 135 ± 32 3142 ± 392 28 D -Äl ä -0$ΝAI «Ala- Trp - DFhe - ——— nhch2ch2ch2ck2ch2nb2 0,3 m + 24 180 ± 37 1.0 111 + 24 636 + 133 3,0 111 + 24 1490 + 179 10,0 1U + 24 2248 + 70 D-Ala-DTrp-Ala-
Trp-öFhe - Ly s - ΝΓΗ 2 0,1 111 + 24 526 + 86 0,1 111 ± 24 1608 + 204 1.0 111 + 24 .2820 + 346 3.0 llli 24 2437 + 214
Aib-DjSNal-Ala-Trp- DPhe-tys-NH2 0,1 208 + 148* 26c + 58 0,3 208 ± 148* 331 + 108* 1.0 208 + 148* 368 + 133* 3.0 208 ± 148~ 1090 + 176* D-Ala - DilSNal - Ala -Trp - DPhe -
Lys( IPr) “NH2 0,1 215 + 49 608 + 115 0,3 215 + 49 1753 ± 419 1.0 215 + 49 1817 + 297 3.0 215 + 49 2336 + 196 *:) Liuotettu DMSChhon, 5 **) Liuotettu aminovaleriaanahappoon (Äva) a) Näin merkityt annokset annettiin 29 päivää van" hoiIle naaraspuolisille rotille b) Kontrolli - GHRP:t 10 Taulukossa 3 keksinnön mukaisia yhdisteitä ver rataan yhdisteisiin, jotka eivät ole tämän yleisen kaaväh mukaisia, ja niiden osoitetaan edistävän ylivertaisesti kasvuhormonitasojen vapautumista ja nousua sellaisten rot- j tien veressä, joille sellaisia yhdisteitä on annettu.
15 Edullisten yhdisteiden yllättävät kasvuhormonia: vapauttavat aktiivisuudet ovat varsin arvokkaita, koska lyhyempi-ketjuisen, molekyylipäinoltaan pienemmän polypeptidin, jossa on suhteellinen stabiili ja halpa aminohappo D-ala- 29 niini aminopäässä ja pentaanidiäMiini Lys:n paikalla C-päässä, pitäisi osoittautua olevan kustannuksiltaan alhainen keino lisätä kasvuhormonitasoj a eläimissä ja ihmisissä .
5 Esimerkki 3 - GH:n vapautuminen rotissa in vivo suun kautta tapahtuvan antamisen jälkeen
Esimerkin 2 menettely toistettiin, paitsi että rotille annettiin ilmaistut yhdisteannokset mahansisäisillä putkilla, Ennetut yhdisteet, käytetyt annostasot ja tulok-10 set esitetään taulukossa 4.
Taulukko 4
In vivo GH-vapautuminen, jota kasvuhormonia vapauttavat 15 yhdisteet edistivät pentoharbitaatilla nukutetuissa rotissa:, {Rotat uhrattu eri aikoina peptidin mahansisäisen antamisen jälkeen) 20 Sarake E Kokonais- Seerumin Seerumin GH:ta vapaut- annos GH ng/ml GH ng/ml tava peptidi (mg/kg) ± SEH (N=6) ± SEM (N=6) vi kap i s t e e s s ä {15' ) 25 {20’) (30')
Ala - HI s - D/3Na l*Ala-
Trp-DPha-Lys-HH?a 10 247 ± 32 786 + 244 30 247 + 32 1914 + 294 DÄla-D/?Mal*Ala- trpOPhe-Lys-lTHy 10" 247 * 32 116 + 298 30 247 £ 32 2038*444
Ava-DjSNal-Ala’
Trp-DPhe-Lys-NH2 30 322 +145* 2135 ± 586* 30
Cly-DjSHal-Ala-
Tjrp-Ofh€-Lys-NH2 30 247 + 32 1072 + 137
Ms-DTrp-Ala-
Irp-DPhe-Lys-NHx3 30 247 + 32 1810 +437
Ala-His-tySNal 1 Ala -
Trp-DPhe-Lys-NH2a 10 196 + 49(15') 1421+343 147 ± 30(207 1605 + 621 (201;) 133 + 18(30') 752 + 81 (30') DAla-DjUNal -Ala -
Trp-DPhe-Lys-NH2 10 196 + 49(15') 706 + 133 (15') 147 + 30(20') 1062 + 254 (20')
Gly-DtfNal-Ala-
Trp-DPhe- Lys-NH5 10 196 + 49(15') 957 + 188 (15') 147 + 30(20') 1685+524(20')
His-DTrp-Ala-
Trp-DPhe-Lys3 10 196+49(15') 1131 ± 189 (15') 147+30(20') 686+149(20')
Trp - DPhe - Lys -NH-j 10 194 + 49(15') 1202 ± 429 (15') 1 147+30(20') 1217+239(20’)
Ava-D4NaI-Ala-
Trp-DPhe-Lys-NHU 10 195+49(15') 1407+204 (15’) 147+30(20') 1251 ± 351 (20')
Suspensio (kevyt1 tai raskas2) etikkahappo lisätty 2 a) Kontrollipeptidit 5 GH:ta vapauttava aktiivisuus säilyy tämän keksinnön mukaisilla yhdisteillä hyödyllisillä tasoilla sen jälkeen kun ne on annettu rotille suun kautta. Tämä on arvokasta, koska tämä antomenateimä lisää peptidien terapeuttista 1Ö hyödyllisyyttä.
Esimerkki 4 - GH:n vapautuminen rotissa in vivo
Esimerkin 2 menettely toistettiin. Annetut yhdisteet, käytetyt annostasot ja tulokset esitetään taulukoissa 5 ja 6.
15 31
Taulukko 5
In vivo GH-vapautuminen,. jota kasvuhormonia vapauttavat synteettiset: peptidit edistivät pentobarbitaatilla nukute-5 tuissa rotissa.
(Eläimet uhrattiin 10 minuuttia viimeisen injektion jälkeen)
Kontrolli-
Sarake A Kokonais- seerumin Vapautunut GH
10 GH:ta vapaut- annos GH ng/ml Seerumin GH ng/ml tava peptidi (pg/iv) ± SEM (N=6) + SEM (N=6) DAla-DjSNal- 0,30 216 + 27 340 + 38
Ala-Ttp-DPhe-NH2 1,00 216 + 27 1205 + 335 3.00 216 + 27 1703 + 182 10.00 216 ± 27 2741+484 DAla»D/9NaI-Ala-Trp- DPhe-Ala*NH2 0,30 216 ± 27 611 + 68 1 0Q 216 ± 27 929 + 209 3.00 216+27 1765+320 10.00 216 + 27 2644 + 358 f ““ DAla - D/SNa 1 - A1 a - — ——
TrpDPhe-NH-Chx-NH2 0,03 216 ± 27 517 + 135 0,10 216+27 1078+174 0,30 216+27 1831+436 1.00 216 + 27 3120 + 761 I — — 0A1 a -DjSNal-Ala*'
Trp-DAla* Lys-HHj 0,10 187 + 36 220 + 34 0,30 187 + 36 167 ± 48 1.00 187+36 339+61 3.00 187 + 36 778 + 174 10.00 187+36 1676 + 470 30.00 187 + 36 1791 + 384 DAla - D^Nal -Ala*. b~Q3 153 + 27 409™ + 97
Tirp - DPhe - LysNH^ 0,10 153 + 27 1469 + 152 0,30 153 + 27 2322 + 265 15 1,00 153 + 27 2765 + 352 32 DAla-D^Nal-Ala-Trp-DPhe-Ala- NH(CH2)5NH2 0 03 177 ± 45 542 ± 98 0,10 177 ± 45 932 ± 84 0,,30 177 ± 45 1121 + 212 1.00 177 ± 45 2599 ± 144
NtiIMA-D#Nal-Ala-
Trp-DPhe-LysNH2 0,03 192 + 41 696 + 108 0.10 192 ± 41 1049 + 198 0* 30 192 ± 41 2567 + 419 1.00 192- ± 41 2001 + 341 DAla-D$Nal-Ala~Trp- DPhe-NH-Ghx-NJU 0,10 192 ± 41 846 + 105 0,30 192 ± 41 1886 + 493 1.00 192 + 41 2209 + 187 3.00 192+41 3359+433 DAla-Tcc-Ala-Trp- DPhe-Lys-MU 0,30 93 + 22 149 + 20 3.00 93 + 22 142 ± 35 DAla-Gly-Gly-Trp-DPhe .-
Lys-NH2 0,30 93 ± 22 107 + 14 3.00 93 + 22 89 + 15 DAla-D$Nal-Ala-
Trp-DPhe-Lys- NH2 0,03 93 + 22 230 + 23 0,10 93 + 22 1006 + 204 0,30 93 ± 22 2110 + 260 1 00 93 ± 22 1825 + 328 l DAla-DjSHal-Ala*Trp* DTIc-Lys-NfcL 0 03 93 ± 22 141 + 26 0#10 93 ± 22 156 + 62 0,30 93 ± 22 124 + 31 ljOO 93 ± 22 151 ± 24 DAla-Dj9Nal-Ala~
Trp-DFhe-Lys-QH 0,10 93+22 558+162 0,30 93 + 22 1730 ± 306 f 33 DAla*D0Nal-Ala- "
Tcc-DPhe-Lys-NH* 3,00 145 + 17 537 + 43 10.00 145 + 17 746 + 92 i *" DAla-D0Nal-Ala-Trp- DPal-Lys-NH, 0 10 145 + 17 365 ± 42 0,30 145 + 17 584 + 148 DAla - D/9Nal-Aia-Trp- DPal-Lys-OH 0,10 145 + 17 928 + 184 0,30 145 + 17 1782 ± 241
Tlp'Ala-D/3NaI - Ala-Ttp- DPhe-Lys-NHo 0,10 87 ± 11 168 ± 27 0,30 87 + 11 167 ± 28 1.00 87 ± 11 152 ± 74 3.00 87 + 11 272 ± 63 DAla - DjflNal-Ala* Trp - DPhe-Lys-NH2 0,03 247 + 53 870 + 136 0,10 247 + 53 1440 + 267 0,30 247 + 53 2420 + 456 1.00 247 ± 53 2855 + 347 3.00 247 + 53 3421 + 377 DAla-DTcc-Ala-Trp- DPhe-Lys-NH2 0,10 247+53 165 + 26 0,30 247 ± S3 183 + 9 1.00 247 > 53 207 + 18 3.00 247 + 53 153 + 22 10.00 247 + 53 269 + 47
Ava-Trp" DTrp-LyS'NHj 0^10 247 + 53 153 + 30 0,30 247+53 144 + 14 1.00 247 + 53 117 + 9 3.00 247 + 53 205 + 59 10.00 247 + 53 214 + 48 DAla-D^Nal-Ala-Trp» DPal-Lys-NH, ' 0,03 228 + 48 203 + 20 0,10 228 + 48 772+142 0,30 228 + 48 979 + 182 1.00 228+48 1691 + 139 3.00 228 + 48 3249 + 526 34
Ala-HIs-D£NaL-Ala-Trp- DPhe-Lys-NH2 0,10 228 + 48 894 + 112 0,30 228 + 48 1128 ± 274 1.00 228 + 48 1362 ±198 DAla-D/JNal -Ala-Trp- DPhe * Lys * OH 0,03 228 + *S 300 + 82 0,10 228 + 48 585 + 141 0,30 228 ± 48 1202 + 236 1.00 228 ± 48 2610 ± 355 DAla-DjMial-Äla-Trp- NMe-DPhe-Lys * NH 2 0,03 16? ± 29 123 + 17 0,10 167 + 29 132 + 30 0,30 167 ± 29 232 ± 49 1.00 167 ± 29 233 ±41
Ava-DAla-D£Nal- ~~~~
Ala - Trp - DPhe - Lys - NH2 0,03 167 ± 29 209 ± 33 0 10 167 ± 29 144 ± 42 0,30 167 + .29 185 ± 47 1.00 167 + 29 499 ± 110 £Ala-D£Nal~
Ala-Trp-DPhe-Lys-NH? 0,03 167 + 29 489 + 71 0,10 167 ± 29 1112 + 194 0,30 167 + 29 1993 + 259 1.00 167+ 29 3061 + 238 DAla-D^Nal-Gly-Trp- ’ ~~~ ~~ DPhe-Lys-NtU 0 10 121 + 14 226 + 26 0,30 121 + 14 170 ± 31 1.00 121 + 14 414 + 101 3.00 121 + 14 713 ± 126 DAl^-Dj8Nal-Gly-Giy- ~
Trp-DPhe-Lys-NH? 0,10 121 + 14 95 ± 15 0,30 121 + 14 82 + 16 1.00 121 + 14 177 + 43 3., 00 121 ± 14 223 + 58 5 35 DAla*D/JNal*Äla-Trp- DPhe-NH-Ch5C-NH2 0,03 121 + 14 335 ± 106 0,10 121 ± 14 652 + 129 0,30 121 ± 14 1528 + 252 1.00 121 + 14 2410 + 370 DAla-D/SNai-DAla-Trp- DPhe-Lys-NH, 0,10 200 ± 45 166 + 36 0r3ö 200 ± 45 197 ± 33 1.00 200 ± 45 343 + 73 3f00 200 ± 45 531 + 121 DAl a* DjSNa 1-Ala-Ala-
Trp-DPhe-Lys -NHo 0 ^10 200 + 45 147 + 21 0,30 200 + 45 184 + 45 1.00 200 + 45 206 ± 66 3.00 200 +.45 143 + 9 DAla-DflNal-Ala*Trp* D P h®-MK-Chs-NHg 0,10 200 + 45 1246 + 189 0,30 200 + 45 1616 + 250 1.00 200+ 45 2574 + 467 3.00 200. ± 45 2789 ± 130 DAla*D%al-Ala- Q~Ö3 200 ± 45 608 + 140
Trp-DPhe-Lys-NH, 0.30 200+45 920+225 1.00 200 + 45 1755 + 291 3.00 200 + 45. 2527 + 196 DAia-D£Nal -Ala-Trp-
Pro-Lys~NH2 0,03 157 + 40 113'+ 14 1.00 157 + 40 136 + 40 3.00 157 + 40 195 + 35 10^00 157 + 40 226 + 42 DÄla*D$Nal-Ala-Trp- DPro-Lys-MH., 0,30 157 + 40 234 + 36 1.00 157 + 40 358 + 48 3f00, 157 + 40 576 + 77 10,00 157 + 40 1624 + 241 36 DAla-D^Nal-Ala-Trp- DLeu-Lys-NHn 0 30 157 + 40 202 ± 27 ljxK) 157 + 40 165 + 12 '3,00 157 ± 40 307 + 51 10,00 157 + 40 1591 ± 568
Ava * D0Nal-Ala-Trp- DPhe-Lys-MH2 0,03 157 ± 40 768 ± 191 0,10 157 ± 40 1277 + 61 0,30 157 ± 40 1733 + 254 1.00 157 ± 40 2418 + 162 f 5 Taulukko 6
In vivo GH-vapautuminen, jota kasvuhormonia vapauttavat synteettiset peptidit edistivät pentobarbitaatilla nukutetuissa rotissa.
10 (Eläimet uhrattiin 10 minuuttia viimeisen injektion jälkeen)
Sarake A Kokonais- Kontrolli- Vapautunut GH | GH:ta vapaut- annos3 seerumi Seerumin GH ng/ml 15 tava peptidi (pg/iv) GH ng/ml + SEM (N=6) ± SEM (N—6) DAla*DjSNal-Ala- 0,03 186. ± 34 412 + 84 2rp*DPhe-iLysSH2 0,10 186 + 34 630 + 124 0,30 186 + 34 1877 + 195 1.00 186 + 34 3008 ± 417 DAla-D£INal-Ala~harao
Phe-0Phe-Lystffl2 0t03 93 ± 13 214 ± 71 0,10 93 ± 13 214 + 58 0,30 93 ± 13 406 + 121 1.00 93 + 13 1189 ± 120 | $ 37 DAla--Ala-Trp-DPhe-Ala-1,3- diaminopropa^P-i 0,03 93 + 13 444 + 60 0,10 93 ± 13 517 + 109 0,30 93 ± 13 2341 + 479 1.00 93 ± 13 2468 ± 276 DAla-D$Nal - Ala-Trp- DPhe-LysNH, 0,03 93 ± 13 362 + 64 0,10 93 + 13 800+192 0,,30 93 ± 13 2674 + 486 1.00 93 ± 13 3658 + 610 DAla-D0Nal-Ala-Trp- DPhe-Ala-1,6, 0,03 85 ± 16 395 ± 91 heksyylidianulini 0,10 85 + 16 905 + 113 0.30 85 + 16 735 + 166 1.00 85 + 16 2708 ± 310 IMA - DjSNa 1 - Ala - Trp - DPhe-Ala-l,3, 0,03 85 + 16 566 + 157 diaralnopropaäni 0,10 85 + 16 645 + 167 0,30 85 + 16 1428 ± 271 1.00 85 + 16 2972 ± 365 DAla-D/dKal-Ala-Irp- ~ DPhe-ArgNH? 0,03 125 + 12 252 + 29 0,10 125 + 12 645 ± 90 0-30 125 + 12 1180 ± 318 1.00 125+12 2197+285 ΪΗΑ-DiSMal-Ala-Trp- ““ ' " " DPhe-Ala-1,6 0,03 125 + 12 332 ± 59 heksyylidiamilni 0,10 125 + 12 609 + 165 0,30 123 + 12 1139 ± 232 1,00 125 + 12 1996 ± 372 38 DAla-D/3Nal-Ala-Trp-
LysNH2 0,30 160 + 33 187 + 44 1.,00 160 + 33 257 + 18 3.00 160 + 33 198 ± 31 10.00 160 + 33 193 + 33 30.00 ISO + 33 236 + 23 DAla-D/5Nal*Ala~
TrpNH2 0,30 160 + 33 115 + 22 1.00 160 ± 33 107 - + · 23 3.00 160 ± 33 101+ 13 10.00 160 + 33 199 + 40 30.00 160 + 33 232 + 69 ÖÄla - DjSNal -Ala-Trp- “ ~ ~ “““ D Phe > Al a - NH (OH 2.) 5 NH2 0,03 160 ± 33 517 + 89 0,10 160 + 33 1164+255 0,30 160 + 33 2023 + 242 1.00 160 + 33 3441 + 435 DAla - D/3Nal - Ala - Trp —
Pro-LysNHo 0,30 157 ± 40 113 ± 14 1.00 157 + 40 136 + 40 3^00 157+40 195 ± 35 10.00 157 + 40 226 + 42 DAla-D/SSal-Ala··
Trp-DPro-LysSHo 0,30 157 + 40 234 + 36 1.00 157 + 40 358 + 48 3.00 157 + 40 576 + 77 10.00 157 + 40 1624 + 241 DAla-D^Nal-Ala-Trp- DLeu-LvsNHn 0,30 157 + 40 202 ± 27 1 00 157 ± 40 165 + 12 3.00 157 + 40 307 ± 51 10.00 157.+ 40 1591 + 568
Ava-D$Nal-Ala-Trp DPhe-Lys^Hn 0,03 157 + 40- 768 + 191 0,10 157 ± 40 1277 + 61 0,30 157 + 40 1733 + 254 1.00 157 + 40 2418 + 162 5 39 ».yABU-D^NalrAla-
Trp-DPhe-LysNK? 0,03 108 ± 20 621 + 85 0,10 10S + 20 1230 + 317 0,30 108 + 20 2385 ± 182 1.00 108 ± 20 3011 + 380 DAIa-D£Na1-Ala -Trp- DPhe-HisNH2 0,03 108 ± 20 246 + 22 0,10 108 + 20 199+ 34 0,30 108 + 20 370 + 67 1.00 108 ± 20 1419 + 230 DAla - D^Nal - Ala - Phe - DPhs-LysNH, 0,03 108 + 20 366+81 0,10 108 ± 20 1011 + 175 0t3Q 108+20 2361+233 1.00 108 + 20 3057 ± 472 BAla-D^Nal-Ala-Trp- NH-Chx-NHo 0,10 108 ± 20 151 ± 35 0,30 108 + 20 251 + 43 1.00 108 + 20 227 + 55 3.00 108 + 20 349 + 72 DAla-D$Nal-Ala-Trp- DPhe-OmNHn 0,03 200 ± 33 515 ± 92 0,10 200 + 33 787 + 71 0,30 200 + 33 1288 ± 365 1.00 200 + 33 1888 + 615 DAla-D/SNal-Ala-Tcp- , 0 DHis-LysNH, 0r03 200 + 33 287 + 48 2 0,10 200+33 131+ 37 0,30 200 ± 33 337 + 78 1.00 200 + 33 457 + 124 40
Taulukoista 5 ja 6 käy ilmi/ että tämän kaavan mukaiset yhdisteet edistävät kasvuhormonitasojen vapautumista ja nousua veressä suuremmassa määrin kuin yhdisteet, jotka eivät ole kaavan mukaisia.
5 Esimerkki 5 SH:n vapautuminen ihmisissä in vivo
Normaaleille ihmiskohteille, miehille joiden keski-ifcä oli noin 25, annettiin suun kautta peptidiä AI a-Hi s·-:DpNal-Ala~Trp-DPhe-Lys“NH2 (GHRP-1) tai peptidiä DÄla-D%al-10 Ala-Trp-DPhe-Lys-NH2 (GHRP-2), Neljäkymmentä kohdetta sai 300: pg 1kg GHRF-l:tä 20 rnl:ssa H2Ö:ta, jota seurasi 100 ml pelkästään Huolta. 39 kohdetta sai 600 1kg GHRP-1:tä 20 ml:ssa H2O: ta, jota seurasi 100 ml Η20:ta, ja 11 kohdetta sai 100 pg/.kg GHRP-2:ta 20 ml:ssa HaÖ:ta, jota seurasi 15 100 ml H->0:ta. Verta otettiin ajoittain kuten kuviosta 1 käy ilmi, ja radioimmunologisella määrityksellä tutkittiin kasvuhormonitasot esimerkissä 2 kuvatulla menetelmällä. Tulokset esitetään kuviossa 1. Suun kautta tapahtuva antaminen (100 pg/kg GHRP-2:ta) sai aikaan korkeammat kas-20 vuhormoni.tasot kuin GHRP-l:n antaminen (300 pg/kg) suun kautta.
Esimerkki 6 GH:n vapautuminen rotissa in vivo
Noudatettiin esimerkin 2 mukaista yleistä menetel-25 mää, paitsi että peptidit injektoitiin ihonalaisesti pikemmin Jenin; laskiMonsisälsesti, ja uhrausaika oli 115 minuuttia pikemminkin kuin +10 minuuttia. Annetut yhdisteet, käytetyt annastasot ja tulokset esitetään taulukossa 7. ; 41
Taulukko 7
Kontrolli-
Sarake A Kokonais- seerumin Vapautunut GH
5 GH:ta vapaut- annos GH ng/ml Seerumin GH ng/ml tava peptidi (yg/iv) ± SEM (N-6) ± SEM (N=6) ....... ..... 1 - - ' ...............
IHA-D0Nal-Ala-
Phe-DPhe-Lys-NH2 0,03 147 + 21 181 + 36 0,10 147 + 21 399 + 40 q30 147 +21 808+187 1.00 147+21 2394+475 ctyABU- D^Nal-Ala-Phe- DPhe-Lys-KH, 0,03 147 + 21 192 + 29 0,10 147+21 288 + 62 0,30 147 + 21 461 + 90 1.00 147 + 21 1441 + 203 IHA-D£Nal-Ala-Trp-DPhe-Ala-1,5 - pencadiamine 0,03 147 + 21 475 + 96 0,10 147 + 21 916 + 169 0,30 147 + 21 1118 + 243 1-00 147 ± 21 2660 + 599
His - 1 - Ala- Fhe DPhe-Lys-MH, 0,03 217 + 33 317 + 55 0,10 217 ± 33 348 + 65 0,30 217 + 33 1283 + 258 1.00 217+33 1374+107
Ala-His-D^Nal-Ala-Phe-DPhe- Ly s - NH2 0,03 217 + 33 341 + 35 0,10 217 + 33 516 + 118 0,30 217 + 33 1060 ± 151 1.00 217 + 33 146? + 208 7ABU-0^tial-A la - Phe - D Ph e ~ Ly s - OT03 217 + 33 197 + 31 “2 0 10 217 + 33 132 ± 20 n*30 217 ± 33 524 + 116 l*(00 217 ± 33 1127 + 110 42 ÖAla - DjSNal - Al a -
Phe-DPhe-Lys- 0.03 217 + 33 287 + 62 NH, 0,10 217 + 33 1084 ± IS2 0.30 217 + 33 1982 ± 3*0 1.00 217 ± 33 2887 ± 275 DAla-DPhe-Ala-Phe- 0;03 132 ± 18 167 ± 29 DPhe-Lys-NH, 0.10 132 ± 18 499 ± 62 oj30 132 ± 18 1132 ± 145 1.00 132 ± 18 2147 ± 268 DAla-DjSNal-Ala-
Phe-DPhe-Lys-NH, 0,03 132 ± 18 336 ± 77 4 o; 10 132 ± 18 795 ± 132
Oj 30 132 + 18 1364 ± 224 1.00 132 ± 18 2272 ± 406 5 Esimerkki 7
Peptidifragmenttien kondensaatioreaktio peptidin muodostamiseksi Yleiset menetelmät
Sulamispisteet voidaan määrittää käyttämällä Thomas 10 Hoover -kapilläarisulamispistelaitetta. Infrapuna (IR) -spektrit voidaan mitata Rerkin-Elmer Model 137 tai Nicplet Model 5DX -spektrofatometrillä ja raportoida aaltolukuina (crrf1) . Massaspektrit (MS) voidaan hankkia käyttämällä VG Analytical Ltd.:n Model ZAB-1F massaspektrometria EI 15 (elektroni-impakti), FD (kehttädeadrptio) tai FÄB (nopea-atomipommit us) -tiloissa. GCHS voidaan hankkia käyttämällä Finnigan 4023 GCMS-laitetta, joka on varustettu 30 m DB5-kapillaaripylväällä (J & W Scientific), käyttäen heliumia kanta jakaasuna,. Optiset rotaatiot voidaan mitata käyttä-20 mällä Autopol III -polaximetria, jota valmistaa Rudolph Research.
1H -NM.R~ spektri voidaan hankkia JEOL GX-400 -NMR-instrumentilla,: joka toimii 400 MHz: n taa j uudella, tai JEOL GX-270 -NMR-instrumentilla, joka toimii 270 MHz:n 43 taajuudella. Nämä instrumentit .kykenevät rutiininomaisesti alle 0,7 Hz:n digitaaliseen resoluutioon. Kemialliset siirtymät ilmaistaan miljoonasosina suhteessa sisäiseen 3—(trimetyylisilyyli)-tetradeuteronatriumprQpionaattiin 5 (TSE) .
Korkean suorituskyvyn nestekromatografia (HBLC) voidaan saada aikaan käyttämällä Hitachi-järjestelmää·, joka koostuu L-5000-gradientin.säätelijästä ja 655Ä-pumpus-ta, joka. on kiinnitetty Vydac 2Q1TP1010 tai 218TP1010 se-10 mipreparatiiviseen pylvääseen. Veden, joka on 0,2-prosent-tinen trifluorietikkahapon suhteen, ja metanolin yhdistelmiä voidaan käyttää eiuointilxudttimena. Mielenkiintoiset yhdisteet eluoituvat tyypillisesti virtausnopeudella kuusi ml minuutissa, jolloin gradientti kasvattaa orgaanisen 15 komponentin osuutta nopeudella noin 1-2 % minuutissa. Sitten yhdisteet havaitaan soveliailla aallonpituuksilla käyttämällä LKB 2140 -UV-diodirividetektoria. Integroinnit voidaan sitten suorittaa käyttämällä Nelson Analytical -ohjelmistoa (versio 3.6).
20 Reaktiot suoritetaan inertissä typpi- tai argon- kaasukehässä ellei toisin spesifioida. Vedetön tetrahydro-furaani (THE’, U.V. grade) ja dimetyyliformamidi (DMF) voidaan ostaa Burdick and Jackson -yhtiöltä ja käyttää suoraan pullosta.
25 A. Tripeptidifragmentin - 2HN-Trp-DPhe-ijys (Boc) -KHa valmistus N“-benfcsyylioksikarbonyy li -N?-t-butoksikarbonyyli) -lysiiniamidi, 4.
10 °C:n lämpötilassa olevaan kafbonyylidi-imidat-30 solin (GDI, 2, 88,24 g, 0,544 mol) ja kuivan tetrahydrofu-r aan in (THEV 1500 ml) muodostamaan liuokseen lisätään hitaasti N“-bentsyylioksikarbonyyli- (N^-t-butofcsikarbonyy-li)lysiini (1, 180 g, 0,474 mol). Kaasun kehittymistä tarkkaillaan tämän lisäyksen aikana. Samalla kun N ^-bent-35 syylioksikarbonyyli-(K ‘’-t-butoksikarbonyyli) lysiini-imid- 4 4 atsoli-välituöte 3 on muodostumassa, lisätään kyllästetty ammoniakin ja THF:n (2000 ml) liuos (vedetön NHs-kaasu viedään THF: n läpi 5: - 10 °C:n lämpötilassa). Sen jälkeen kun välituotteen 3 muodostumisen arvioidaan olevan lopussa 5 (kun kaasun kehittyminen on loppunut, noin 2 tuntia)/ puolet 3:n sisältävästä THF-liuoksesta lisätään ammoniakki-liuokseen, 3:n sisältävän liuoksen loppuosa lisätään 30 minuuttia: myöhemmin. Jatkuva ammoniakkikaasun virtaus pidetään yllä koko additioiden ajan ja vielä 45 minuuttia 10 sen jälkeen. Kun kaksi 3:n sisältävää liuosta on lisätty, muodostuu valkoinen sakka. Reaktion annetaan lämmetä huoneenlämpötilaan ja sekoittua 15 tuntia. Liuotin poistetaan lietteestä in vacuo., jäännös lietetään veteen, ja tuloksena oleva kiinteä aine kerätään imusuödatuksella...
15 H^-t-bufcoksikarbonyylilysiiniamicLi, 5
Lysiiniamidin 4 (181,48 g, 0,479 mol) liuos metsuolissa (MeOH, 1000 ml) lisätään kataiysaattorilietteeseen {5-prosenttinen Pd/C (5 g) metanolissa (250 ml)) argonissa. Vetyä koputetaan reaktioseöksen läpi (noin 15 minuut-20 tia) ja reaktiota sekoitetaan sitten vetykaasukehän alla, kunnes HPLC-analyysi osoittaa että reaktio on täydellinen (36 tuntia). Vetykäasukehä syrjäytetään sitten argonilla, Reaktioliuos selkeytetään CeliteR -kerroksen läpi ja liuotin poistetaan in vacuo, jolloin saadaan, kiinteä aine.
25 ^“-bentsyylioksikarbonyyli-D-fenylalanyyli- (N^-fc-
butoksikarfoonyylx)lysiiniamidi, S
N^-bentsyylio ks i ka rhönyy1i-D-feny1alaniini (6, 126,39 g, 0,423 mol) lisätään hitaasti 10 °C:n lämpötilassa olevaan CDI-liuokseen (2, 66,03 g, 0,409 mol) THF:ssä 30 (500 ml) . Kaasun kehittymistä tarkkaillaan addition ai kana. Kun kaasun kehittyminen lakkaa, lysiiniamidl 5 (110,75 g, 0,452 mol) lisätään THF-liuoksena (500 ml). Noin 48 tunnin kuluttua seos suodatetaan kiinteiden aineiden poistamiseksi. Suodos konsentroidaan in vacuo.
35 45
Tuloksena oleva jäännös pannaan etyyliasetaattiin (EtOAc, 500 ml) ja pestään sitten seuraavasti erotussuppilossa : 1. HC1:n vesiliuos (1 N, 3 x 500 ml), pesun 1 pH 5 noin 8, seuraavien pesujen pH:t 1, 2. vesi (500 ml), 3. NasCCb (puolikyllästetty, 2 x 500 ml) suodatetaan muodostuneiden kiteisten kiinteiden aineiden keräämiseksi (8) , 10 4. vesi (3 x 500 ml),
Orgaaninen kerros kuivataan MgSO^llä, Selkeyttämisen jälkeen liuotin poistetaan in vacuo. Tuloksena, oleva jäännös voidaan jälleenkiteyttää kuumasta EtOAc:sta, jolloin saadaan toinen 8_:n näyte.
15 D-fenylalanyyli- (N^-t-butoksikarbonyyli) lysiiniami- di, 9.
Amidin 8 (120,53 g, 0,229 mol) metanoliliuos (1 500 ml) lisätään katalysaattörilietteeseen (50 g 5-pro-senttista Pd/C:tä 200 ml:ssa MeöHuta). Argonkaasukehä syr-20 jäytetään vedyllä. Kun HPLG-analyysi viittaa siihen, että reaktio on mennyt loppuun (noin 4 tuntia), vetykaasukehä syrjäytetään argonilla. Reaktioliuos selkeytetään sitten CeliteR -kerroksen läpi ja suodos saatetaan jäännökseksi in vacuo. Tämä dipeptidituote voidaan käyttää suoraan 25 tripeptidin 12 valmistuksessa.
^-bentsyylioksikarbonYyli-tryptofyyli-D-fenyyli- alanyyli- (H^-t-butoksikarbonyyli) lysiiniamidi, 12 N^-bentsyylioksikarbonyylitryptofäänin (10, 67,60 g, 0,200 mol), THF: n (500 ml) ja CDI: n (.2, 33, 05 g, 0,204 30 mol) 10 °C:n lämpötilassa olevaa liuosta sekoitetaan kunnes kaasun kehittyminen lakkaa. 9:n liuos (40,8 g, 0,103 mol) THFrssä (noin 200 ml) lisätään sitten reaktioseok-seen. Tuloksena olevan liuoksen annetaan reagoida 15 tunnin ajan samalla kun se lämpenee huoneenlämpötilaan. Muo-35 dostuva kiinteä aine kerätään sitten imusuodatuksellä.
46
Suodos saatetaan jäännökseksi konsentroimalla in vacuo. Tuloksena oleva jäännös ja kiinteä aine yhdistetään jälleen ja otetaan EtOAc:hen (4 000 ml) hiukan lämmittäen. Kun liuos jäähdytetään huoneenlämpötilaan, muodostuu kiin-5 teä aine. Kiinteä aine kerätään imusuodatuksella. Tämä kiinteä aine jälleenkiteytetään kuumasta MeOH:sta, jolloin saadaan puhdistettu tripeptidi 12. EtOAc-suodos (ensimmäisestä kiteytyksestä) pestään seuraavasti erotussuppilossa: 1. HCl:n vesiliuos (1 N, 2 x 500 ml), 10 2. vesi (1 x 500 ml), 3. Na2C03:n vesiliuos (puoli kyllästetty, 2 x 500 ml), 4. Ma-Cl:n vesiliuos (1 x 500 ml) .
Orgaaninen kerros kuivataan MgSQqillä ja selkeyte-15 tään sitten imusuodatuksella, Suodoksen liuotin poistetaan in vacuo. Tuloksena oleva jäännös otetaan uudestaan EtO-Äcihen, jolloin saadaan kuiva kiinteä aine. Kiinteä aine voidaan panna jälleenkiteytykseen kuumassa MeOH:ssa, jolloin saadaan toinen 12:n saanto valkoisena kiinteänä ai-2 0 neena.
Tryptofyyli-D-fenylalanyyli- (Κζ-t-butyylioksikarbo- nyylDlysiinlamidi, 13
Tripeptidin 12 (64,59 g, 0,091 mol) metanoliliuos (1 500 ml) lisätään katalysaaitorilietteeseen (5 g 5-pro-25 senttistä Pd/C:tä 250 ml:ssa MeOH:ta) argonkaasukehässä. lisätään vielä tilavuus: MeOH:ta (2250 ml) . Argonkaasukehä syrjäytetään vedyllä ja annetaan reagoida (noin 24 tuntia) . Kun reaktio on mennyt loppuun, vetykaasukehä syrjäytetään argonilla. Liuos .selkeytetään: CeliteR -kerroksen 30 läpi ja suodos konsentroidaan in vacuor jolloin saadaan tripeptidi 13 valkoisena kiinteänä: aineena.
47 B. Tripeptidifragmentin -K-DAla-D^Nal-Äla-OMe valmistus N°-bent:syylioksikarbonyyli-D-alanyyli“D"beta-naf-fcyylialanixnin metyyliesterx, 25 5 EtOÄc:n (400 ml) ja D-beta-naftyylialaniinimetyyli- esterihydrokloridin ¢22, 0,62 mol) liuos pestään kyllästetyllä natriumkarbonaatilla (400 ml) ja 0,8 N natrium-hydroksidin vesiliuoksella (noin 500 ml), Tuloksena oleva vesifaasi poistetaan (pH 8,5) ja orgaaninen faasi pestään 10 perätysten puolikyllästetyllä Na2C03-vesiliuoksella (150 mi) ja sitten vedellä (50 ml) . 22:n vapaa emäsmuoto eristetään konsentroimalla etyyliasetaattikerros in vacuo, Disyklohefcsyylikarbodi-imidi (DCC, noin 95 g, 0,46 mol) lisätään -5 °C:n lämpötilassa olevaan {jää-etanoli-15 haude) Ma-bentsyylioksikarbonyyli-D-alaniinin (19, 143,5 g, 0,50 mol), M-hydroksisukkinimidin (HONSu, 23, 0,62 mol) ja vasta valmistetun 22: n vapaan emäsmuodon (noin 0,52 mol) liuokseen DMF:ssä (noin 3 1). Tuloksena olevan reaktio-liuoksen annetaan sekoittua 24 tunnin ajan samalla kun 20 sitä läiimitetääh huoneenlämpötilaan. HPLC-analyysiä pitäisi käyttää tarkkailemaan meneekö reaktio loppuun. Jos: se ei ole mennyt, reaktioseos jäähdytetään sitten noin -5 °C:n lämpötilaan ja reaktioon lisätään lisäosa disyklö-heksyylikaxbodi-imidiä (noin 0,17 mol). Reaktioseoksen 25 annetaan sitten sekoittua vielä 24 tuntia samalla kun se lämmitetään huoneenlämpötilaan. Seos suodatetaan sitten disykloheksyyliurean (DCU) poistamiseksi:. Vesi (1 1) lisätään suodakseen ja tuloksena oleva liuos konsentroidaan in vacuo. Tuloksena oleva jäännös otetaan ;HCl:n l-normaali-30 seen vesiliuokseen (noin 1 1 kunnes vesifaasin pH saavuttaa pH:n 1). Vesifaasi uutetaan sitten kahdella annoksella: etyyliasetaattia (1. 1 kumpikin). Etyyliasetaattikerrokset heitetään pois. Vesifaasin pH säädetään sitten lisäämällä kylmää 2-normaalista natriumhydroksidia (500 ml), ja nat-35 riumhydroksidinappeja. Tämän neutraloinnin aikana liuos 48 pidetään kylmänä lisäämällä kylmää etyyliasetaattia (1 1). Kun vesifaasin pH saavuttaa noin arvon 7, tuloksena on yleensä valkoisen sakan tai öljyn runsas saostuminen. Tämä sakka kerätään imusuodatuksella tai dekantoirna 11a ja pes-5 tään peräjälkeen puplikyllästetyllä natriumkarbonaatilla (2 x 1500 ml), vedellä (6 x 1500 ml) ja etyyliasetaatilla (3 x 1500 ml) . Tuloksena oleva materiaali kuivataan voimakkaassa alipaineessa vakiopainoon. Tämä materiaali voidaan hydrolysoida suoraan ilman jatkopuhdistusta.
10 Na-bentsyylioksikarbonyyli-D-alaiiyyli-p-naftyyli-D- alaniini, 26
Natriumhydroksidin vesiliuos (192 ml, liuoksessa 0,08 g/ml, 0,38 mol) lisätään dipeptidin 25 (noin 0,38 mol) , veden (360 ml) ja MeOH:n (noin 6 1) liuokseen.
15 Liuosta sekoitetaan huoneenlämpötilassa kunnes hydrolyysi on täydellinen (noin 24 tuntia). Lähtöpeptidin katoaminen varmistetaan HPLC-analyysillä. Liuos konsentroidaan in vacuo jäännökseksi, joka liuotetaan veteen (noin 1 1).
Vesikerros (pH noin 10) uutetaan sitten EtOÄc:11a (2 x 20 500 ml) erotussuppilossa. Etyyliasetaattikerrokset heite tään pois. Tuloksena olevan vesifaasin pH säädetään noin 5:ksi väkevällä HCl:llä, jolioin tapahtuu yleensä valkoisen kiinteän aineen tai öljyn saostuminen. Tuote kerätään j a kuivataan in vacuo.
25 Kd-bentsyylioksikarbonyyli-D-alanYyli-D-beta-naf- tyylialaxiyyli-alaniinin metyyliesteri, 20 Dipeptidi N°-bentsyyIloksikarbonyyli-D-alanyyli-D-beta-naftyylialanlini (26, 0,253 mol) lisätään HONSu- liuokseen (23, 0,505 moi) DMF:ssä (800 ml) argonkaasuke- 30 hässä. Tähän liuokseen lisätään alaniinimetyyliesterihyd-mkloridin (15, 0,303 mol), N-metyylimorfoliiriin (16, 0,303 mol) ja DMF:n (200 ml) seos. Tuloksena oleva liuos jäähdytetään 10 °C lämpötilaan, jossa vaiheessa lisätään disykioheksyylifcarbodi—imidi (2_4, 0,265 mol) metyleeni- 35 kloridissa (273 ml). Reaktiota seurataan HPLCrllä samalla 49 kun reaktiolämpötila pidetään 10 öC:eessa kunnes reaktio on mennyt loppuun. Jos useiden päivienkään päästä {noin 4) reaktio ei ole edennyt loppuun, lisätään vielä annos |4/: aa (0,080 mol) ja reaktioseoksen annetaan sekoittua vielä 5 päivä 10 °C;n lämpötilassa. Reaktiota monitoroidaan taas HPLC-ahalyysillä kunnes se. on mennyt loppuun (tyypilli” sesfci noin 5 päivää). Reaktion aikana muodostuvat kiinteät aineet kerätään imusuodätuksella. SuodoS konsentroidaan sitten jäännökseksi in vacuo. Tuloksena oleva jäännös oter 10 tään etyyliasetaattiin ja uutetaan puolikyllästetyllä Na2C03:n vesiliuoksella (2 x 500 ml) . Etyyliasetaattifaasi kuivataan MgSO^: llä. Tuloksena oleva liuos selkeytetään; ja konsentroidaan jäännökseksi in vacuo.
2-normaalinen natriumhydroksidin vesiliuos (7,5 15 ml, 15 mmol) lisätään metanolin (500 ml) ja veden (200 ml) liuokseen, joka sisältää Nö-bentsyyliöksikarhönyyli-DAla-D^Nal-Ala-Omeia (13,7 mmol). Sen jälkeen kun reaktion on annettu sekoittua yli yön huoneenlämpötilassa, HPLC-ana-lyysi osoittaa jäljellä olevan lähtömateriaalin määrän. 20 Kun reaktio on oleellisesti mennyt loppuun (noin yli yön), tuloksena oleva liuos konsentroidaan in vacuo noin 200 ml:n tilavuuteen. Vesi (100 ml) lisätään ja pH säädetään noin 12:ksi lisäämällä 2-normaalista natriumhydroksi-dia (1 ml) . Tuloksena oleva liuos uutetaan etyyliasetaa-25 tiliä (2 x 500 ml) . Etyyliasetaattikerrokset heitetään pois. Vesifaasin pH säädetään sitten noin 5:ksi lisäämällä ;HCl:n vesiliuosta, mikä johtaa yleensä tuotteen saostu-miseen. On tärkeää minimoida vesifaasin tilavuus tämän saastumisen edistämiseksi. Vesifaasi dekantoidaan pois 30 tuotteesta j a tuotetta huuhdellaan sitten vedellä (2 x 50 ml). Eristetty tuote kuivataan vakiopainoon in vacuo.
C. Peptidifragmenttien kondensaatioreaktio heksa-peptidin tuottamiseksi
Kaksi peptidiä DÄla-DpNal-Ala-OH (33, 2,6 mmol) ja 35 Trp-D-Phe-Lys(Boc)-NH2 (13, 2,8 mmol) liuotetaan vedettö- 50 mään DMF:ään ja tuloksena oleva liuos konsentroidaan in vacuo. Tämä alustava konsentrointi suoritetaan yrityksenä poistaa mahdolliset läsnä kenties Olevat metanolijäännökset. Tuloksena oleva peptidiseos liuotetaan uudelleen 5 DMF:ään ja sitten lisätään K-hydroksisukkinimidi (5,1 mmöl). Tuloksena oleva liuos jäähdytetään sitten -2 °G:n liuoslämpötilaan ja sitten lisätään disyklohek-syylikarbodi-imidi (3,4 mmol) liuoksena met yleeni kloridissa (3,5 ml) . Tuloksena olevan reaktioseoksen annetaan 10 sekoittua -2 °C:n liuoslämpötilassa kolmen päivän ajan. HPLC-analyysiä käytetään määrittämään, onko reaktio mennyt oleellisesti loppuun. Tämän ajanjakson jälkeen, jos se ei ole mennyt, voidaan sitten lisätä vielä disykloheksyyli-karbodi-imidiä ja tuloksena olevan reaktioseoksen annetaan 15 sekoittua vielä päivä -2 °C; n lämpötilassa· Jos seuraavana päivänä (neljä päivää kaikkiaan) HPLC-analyysi viittaa jälleen epätäydelliseen: reaktioon, reaktioseoksen jäähdytys pitäisi lopettaa. Reaktion liuoslämpötilan voidaan antaa kohota hitaasti huoneenlämpötilaan (25 °C) tuntien 20 aikana (noin 8) . Tuloksena olevan reaktioseoksen annetaan sekoittua yli yön huoneenlämpötilassa. Menettely toistetaan kunnes reaktio on mennyt loppuun. Sitten lisätään vettä (50 ml) ja tuloksena olevan seoksen annetaan sekoittua vielä päivän. .Reaktioliuos suodatetaan sitten disyklo-25 heksyyliurean poistamiseksi ja tuloksena: oleva suodöa konsentroidaan in vacuo viskoosiksi öljyksi:· Tuloksena olevaan jäännökseen lisätään etyyliasetaatti ja puallkylläs-tetty natriumkarbonaatin vesiliuos (200 ml). Kaksifaasista seosta pyöritetään voimakkaasti pyöröhaihduttimessa noin 30 yhden tunnin ajan. Mitkä tahansa muodostuneet kiinteät aineet kerätään, jolloin tuote saadaan suodattamalla lasi-sintterisuppilossa. Orgaaninen kerros pestään vedellä ja, kuivataan sitten vakiopainoon in vacuo, jolloin saadaan tuote.
51 DAla“D“pNal“Äla-Trp-D-Phe-Lys-NH2 , 35
Heksapeptidi bentsyyliokslkarbonyyli-DÄla-D-pNal-Äla-Trp-D-Phe-Lys-(Boc)-NH2 (34, 1,02 mmol) lisätään tri- fluorietikkahapon (30 ml), dimetyylisulfidin (14 ml), 5 1>2-etääniditiolin (7 ml) ja anisölin (2,2 ml) huoneen- lämpöiseen liuokseen metyleenikloridissa (15 ml). Homogeenisen reaktioseoksen annetaan sekoittua 15 minuutin ajan. Tämän ajanjakson jälkeen lisätään vedetön eetteri (450 ml) , jotta saadaan aikaan epäpuhtaan, biologisesti 10 aktiivisen peptidituotteen 35 saostuminen. Tämä tuote eristetään suodattamalla lasisintterisuppilossa tai dekan-toimalla. Tuloksena oleva tuote liuotetaan veteen ja lyo-filisoidaan, lyofilisoitu tuote voidaan edelleen puhdistaa keskipäinekrqmätqgrafiaSsa 26 x 460 mm lasipylväässä, joka 15 sisältää Lichröprep™ R-18 -pylväspakkausmateriaalia (C-18, 25 - 40 nm, epäsäännöllinen mesh). Sen jälkeen kun peptidi on injektoitu liuoksena vedessä, pylväs eluo.idaan virtausnopeudella 9 ml minuutissa 0 - 25-prosenttisen metanoiin loivalla gradientilia 5 - 20 tunnin ajan, ja sitten gradi-20 entilla 25 - 55-prosenttinen metanoli noin 48 tunnin ajan. Gradientin metanolikonsentraatiota nostetaan sitten nopeudella 2 % tunnissa. Eluution aikana jäljellä oleva li-uotinkoostumus tehdään veteen, joka on 0,2-prosenttinen trifluorietikkahapon suhteen. Tuote (35) tunnistetaan 25 HPLC:llä ja eristetään konsentroimalla soveliaat eluutio-tilavuudet.
Keksintöä on kuvattu yksityiskohtaisesti viitaten erityisesti sen edullisiin suoritusmuotoihin. Ymmärretään kuitenkin, että ammattimiehet voivat tätä paljastusta poh-30 dittuaan tehdä variaatioita ja modifikaatioita keksinnön hengen ja suojapiirin sisällä.
Claims (5)
1. Menetelmä sellaisen farmaseuttisen ja eläinlääkinnässä käyttökelpoisen peptidin valmistamiseksi, jol-5 la on kaava Äi-Ä2-Ala-C2-C3-Ä5, jossa Ai. on Gly, DAla, β-Äla, Sar, Äva, Aib, ABU,
10 NH2(CH2)sC0 tai IMA, Ä2 on DTrp, DpNal, Ä5 on Ä3-A4-A5., Ä3-Αδ·, A4-A5· tai As>, jossa a) A3 on Ala, Gly, DAla tai Ero, bj A4 on Ala, Gly, DAla, Pro tai e2-Cio-suora-ketjuinen aikyyliaminokarboksyylihappo, ja 15 c) As·· on Lys(£-Ri,R2)-Z, Qrn (δ-Ri, R2)-Z, NH(CH2)XN- (R3, R4), Lys-2, Orn-Z tai Ärg-Z, joissa Ri on suoraketjuinen C2-Ci0-alkyyliryhmä tai H-atomi, R2 on suoraketj uinen C2~ CiQ~alkyyliryhmä tai H-atomi, mutta Ri ja R2 eivät samanai-kaisestri ole H, R3 on suoraketj uinen C 2 - C1 c - a i k y y 1 i r y hm ä 20 tai H-atomi, R.·; on suoraketj uinen C2-Cio-alkyyliryhmä tai H-atomi, Z on NH (suoraketjuinen Gz-Cia-alkyyliryhmä}, N (suoraket juinen C:2“Cio-aikyyli ryhmä) 2, ö- {suoraketj uinen Cs-Cxo-alkyyliryhmä), NH2 tai OH, x on 2 - 15, C2 on Trp, Phe tai ChxAla,
25 C:3 on DPhe:, DPal tai DChxAla, ja edellä mainittujen peptidien orgaanisten ja epäorgaanisten additiosuolojen valmistamiseksi, t u n -n e t t u siitä, että (i) edellä kuvatut aminohapot tai aminohappojohdannaiset liitetään yhteen peptidin muodostä-30 miseksi käyttäen kiinteän faasin menetelmää, tai (ii) suoritetaan edellä kuvattujen aminohappojen tai aminohappo-johdannaisten tai näiden peptidifragmahttien syntetisointi iiuosvaihemenetelmällä, joka sisältää ainakin kahden fragmentin kondensaatioreaktion, peptidin muodostamiseksi. |
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä:, t u n n e t t u siitä, että Αχ: on Gly tai DAla.
3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, t u n n e t t u siitä, että Ai on DAla.
4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, t u n n e t t u siitä, että Ä2 on DTrp tai Dr'N'ai.
5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, t u n n e t t u siitä, että Aa ori DpNal.
6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, 10. u n n ett u siitä, että Ä5 on A3-Ä4-A5·'.
7. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että As on Ä3-Ä5'.
8. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, t u n n e t t u siitä, että Ä5 on Ä4-A5*,
9. Jonkin patenttivaatimuksen 1-5 mukainen mene telmä, t u n n e t t u siitä, että As on As>.
10. Jonkin patenttivaatimuksen 1-5 mukainen menetelmä, t u n n e t t u siitä, että C2 on Trp tai Phe.
11. Jonkin patenttivaatimuksen 1 - 5, 9 tai 10 mu-20 kainen menetelmä, tunnettu siitä, että C3 on DPhe.
12. Patenttivaatimuksen 10 mukainen menetelmä, t u n n e t t u siitä, että C2 on Trp.
13. Patenttivaatimuksen 12 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että C3 on DPhe.
14. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä:, tunnettu siitä, että valmistetaan peptidi, jolla on kaava: DAI a - DpNa 1 -AI a-T rp-DPhe -Ly sMHs, DAI a - D PN a 1 -A 1 a - T r p -DPhe-Lys(E-i P r}NH2/
30 DÄla-DTrp-Ala-Trp-DPhe-Lys(ε-lPr)NH2, DAI a - DT rp-Al a -T rp-DPhe-Ly 314¾., DAla-DpNal-Äla-Trp-DPhe-NH:{G:H2)5NH2, NH2 (CH2) 5CO-Dp~Nal-Ala-Tr:p-DPhe-NH <CH2) 5NH2, Naim-D^Nal-Ala-Phe-pPhe-tysNHa, 35 a,yÄBU-D%al-Ala-Phe-DPhe-LysNH2, | DAla-DPhe-Äla-Phe-DPhe-LysNHa, NaIMA-DpNal-Ala-Phe-DPhe-NH-CHxNH2f af YÄBU-D^Nal-Ala-Phe-DPhe-NH-CHxNHa, DÄla-D^Nal-Ala-Phe-DPhe-LysNHa,
5 DMa-D%al-Ala-Trp“DPhe-ArgNH2, DAla-D^Nal-Äla-Phe-DPhe-Arg-NHa, DÄla-DpNal™Äla-ChxÄla-DPhe-LysNH2, DAla~DpNal~Ala-Phe-DChxAla-LysNH2, tai DÄla-DpNal~Äla-ChxAla-DChxÄla-LysNH2, 10 ja näiden orgaaniset tai epäorgaaniset additiosaolat. i | | ! ] | ] | Pafcenfckrav
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US07/748,350 US5663146A (en) | 1991-08-22 | 1991-08-22 | Polypeptide analogues having growth hormone releasing activity |
US74835091 | 1991-08-22 | ||
PCT/US1992/007026 WO1993004081A1 (en) | 1991-08-22 | 1992-08-20 | Peptides having growth hormone releasing activity |
US9207026 | 1992-08-20 |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
FI940807A FI940807A (fi) | 1994-02-21 |
FI940807A0 FI940807A0 (fi) | 1994-02-21 |
FI120095B true FI120095B (fi) | 2009-06-30 |
Family
ID=25009088
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
FI940807A FI120095B (fi) | 1991-08-22 | 1994-02-21 | Menetelmä peptidien valmistamiseksi, joilla on kasvuhormonia vapauttavaa aktiivisuutta |
FI20050467A FI120691B (fi) | 1991-08-22 | 2005-05-02 | Ei-terapeuttinen menetelmä kasvuhormonin vapautumisen edistämiseksi eläimessä |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
FI20050467A FI120691B (fi) | 1991-08-22 | 2005-05-02 | Ei-terapeuttinen menetelmä kasvuhormonin vapautumisen edistämiseksi eläimessä |
Country Status (26)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US5663146A (fi) |
EP (1) | EP0605484B1 (fi) |
JP (1) | JP3179489B2 (fi) |
KR (1) | KR100247212B1 (fi) |
CN (1) | CN1035256C (fi) |
AT (1) | ATE172742T1 (fi) |
AU (1) | AU666673B2 (fi) |
BG (1) | BG62655B1 (fi) |
BR (2) | BR9206398A (fi) |
CA (1) | CA2116120C (fi) |
CZ (1) | CZ293281B6 (fi) |
DE (1) | DE69227462T2 (fi) |
DK (1) | DK0605484T3 (fi) |
ES (1) | ES2124263T3 (fi) |
FI (2) | FI120095B (fi) |
HU (1) | HU223664B1 (fi) |
IL (1) | IL102848A (fi) |
MX (1) | MX9204861A (fi) |
NO (1) | NO314695B1 (fi) |
NZ (1) | NZ244034A (fi) |
PL (1) | PL169562B1 (fi) |
RO (1) | RO112507B1 (fi) |
RU (1) | RU2126014C1 (fi) |
SK (1) | SK282895B6 (fi) |
WO (1) | WO1993004081A1 (fi) |
ZA (1) | ZA926337B (fi) |
Families Citing this family (105)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1994026723A2 (en) | 1993-05-14 | 1994-11-24 | Genentech, Inc. | ras FARNESYL TRANSFERASE INHIBITORS |
CA2179597A1 (en) * | 1993-12-23 | 1995-06-29 | Nils Langeland Johansen | Compounds with growth hormone releasing properties |
RU2167881C2 (ru) * | 1993-12-23 | 2001-05-27 | Ново Нордиск А/С | Соединения, способствующие высвобождению гормона роста |
US20020111461A1 (en) * | 1999-05-21 | 2002-08-15 | Todd C. Somers | Low molecular weight peptidomimetic growth hormone secretagogues |
US5798337A (en) * | 1994-11-16 | 1998-08-25 | Genentech, Inc. | Low molecular weight peptidomimetic growth hormone secretagogues |
PL186520B1 (pl) * | 1995-06-22 | 2004-01-30 | Novo Nordisk As | Związk o właściwościach uwalniania hormonu wzrostu, kompozycja farmaceutyczna zawierająca ten związek i jego zastosowanie |
CA2252761A1 (en) * | 1996-04-24 | 1997-10-30 | Novo Nordisk A/S | Compounds with growth hormone releasing properties |
AU7906998A (en) | 1997-06-20 | 1999-01-04 | Novo Nordisk A/S | Compounds with growth hormone releasing properties |
US6127341A (en) * | 1997-06-20 | 2000-10-03 | Novo Nordisk A/S | Compounds with growth hormone releasing properties |
US6329342B1 (en) | 1997-08-19 | 2001-12-11 | Eli Lilly And Company | Treatment of congestive heart failure with growth hormone secretagogues |
ZA987383B (en) * | 1997-08-19 | 2000-02-17 | Lilly Co Eli | Treatment of congestive heart failure with growth hormone secretagogues. |
ATE470671T1 (de) | 1998-01-16 | 2010-06-15 | Helsinn Therapeutics Us Inc | Verbindungen mit wachstumshormon-freisetzender eigenschaft |
WO1999039730A1 (fr) * | 1998-02-09 | 1999-08-12 | Kaken Pharmaceutical Co., Ltd. | Preparation a administration orale contenant des peptides favorisant la secretion d'hormone de croissance |
US6919315B1 (en) | 1998-06-30 | 2005-07-19 | Novo Nordisk A/S | Compounds with growth hormone releasing properties |
US6682908B1 (en) | 1998-07-10 | 2004-01-27 | Merck & Co., Inc. | Mouse growth hormone secretagogue receptor |
CA2333857A1 (en) | 1998-07-13 | 2000-01-20 | Merck & Co., Inc. | Growth hormone secretagogue related receptors and nucleic acids |
JP2002522058A (ja) | 1998-08-10 | 2002-07-23 | メルク・アンド・カンパニー・インコーポレーテッド | イヌ成長ホルモン分泌促進物質受容体 |
JP2002525265A (ja) * | 1998-08-14 | 2002-08-13 | アドミニストレイターズ オブ ザ トゥレーン エジュケーショナル ファウンド | 成長ホルモン放出活性を有する化合物 |
US6639076B1 (en) | 1998-08-18 | 2003-10-28 | Eli Lilly And Company | Growth hormone secretagogues |
US6696063B1 (en) * | 1998-12-30 | 2004-02-24 | Applied Research Systems Ars Holding N.V. | Treatment of HIV-associated dysmorphia/dysmetabolic syndrome (HADDS) with or without lipodystrophy |
US7022677B1 (en) | 1999-02-18 | 2006-04-04 | Kaken Pharmaceutical Co., Ltd. | Amide derivatives as growth hormone secretagogues |
EP1930021A3 (en) | 1999-02-18 | 2008-06-18 | Kaken Pharmaceutical Co., Ltd. | Novel amide derivatives as growth hormone secretagogues |
US6828331B1 (en) | 1999-02-19 | 2004-12-07 | Eli Lilly And Company | Growth hormone secretagogues |
US20040192593A1 (en) | 1999-07-26 | 2004-09-30 | Baylor College Of Medicine | Protease resistant ti-growth hormone releasing hormone |
PL366132A1 (en) * | 1999-07-26 | 2005-01-24 | Baylor College Of Medicine | Super-active porcine growth hormone releasing hormone analog |
JP4691298B2 (ja) * | 1999-10-12 | 2011-06-01 | 科研製薬株式会社 | 粉末吸入用製剤及びその製造方法 |
UA73530C2 (uk) | 1999-11-10 | 2005-08-15 | Ново Нордіск А/С | Сполука з властивостями вивільнювати гормон росту |
JP3498041B2 (ja) * | 2000-05-29 | 2004-02-16 | 科研製薬株式会社 | プラルモレリン含有点鼻用製剤 |
DE60140285D1 (de) | 2000-05-31 | 2009-12-10 | Pfizer Prod Inc | Verwendung von Wachstumshormonsekretagoga zur Förderung der Beweglichkeit des Verdauungstrakts |
US7855229B2 (en) | 2000-08-24 | 2010-12-21 | University Of Tennessee Research Foundation | Treating wasting disorders with selective androgen receptor modulators |
US7919647B2 (en) | 2000-08-24 | 2011-04-05 | University Of Tennessee Research Foundation | Selective androgen receptor modulators and methods of use thereof |
US7622503B2 (en) | 2000-08-24 | 2009-11-24 | University Of Tennessee Research Foundation | Selective androgen receptor modulators and methods of use thereof |
US7645898B2 (en) | 2000-08-24 | 2010-01-12 | University Of Tennessee Research Foundation | Selective androgen receptor modulators and method of use thereof |
CN1491233A (zh) | 2001-02-02 | 2004-04-21 | 康久化学公司 | 长效生长激素释放因子衍生物 |
US7125840B2 (en) * | 2001-10-09 | 2006-10-24 | Eli Lilly And Company | Substituted dipeptides as growth hormone secretagogues |
MXPA04003944A (es) * | 2001-10-26 | 2004-07-08 | Baylor College Medicine | Una composicion y metodo para alterar la masa corporal fina y propiedades oseas en un sujeto. |
US8853266B2 (en) | 2001-12-06 | 2014-10-07 | University Of Tennessee Research Foundation | Selective androgen receptor modulators for treating diabetes |
US6831102B2 (en) | 2001-12-07 | 2004-12-14 | Bristol-Myers Squibb Company | Phenyl naphthol ligands for thyroid hormone receptor |
AU2002357143B2 (en) | 2001-12-11 | 2009-07-30 | Advisys, Inc. | Growth hormone releasing hormone supplementation for treating chronically ill subjects |
US7015219B2 (en) | 2001-12-19 | 2006-03-21 | Bristol-Myers Squibb Company | 3-aryl-hydroxybenzoxazines and 3, 4-dihydro-3-aryl-hydroxybenzoxazines as selective estrogen receptor beta modulators |
MXPA04007638A (es) * | 2002-02-07 | 2004-12-06 | Baylor College Medicine | Desarrollo modificado de la glandula pituitaria en productos de madres animales prenadas, tratadas con terapia de hormona liberadora de hormona del crecimiento. |
US7772433B2 (en) | 2002-02-28 | 2010-08-10 | University Of Tennessee Research Foundation | SARMS and method of use thereof |
US7381730B2 (en) | 2002-03-15 | 2008-06-03 | Bristol-Myers Squibb Company | 3-arylquinazoline derivatives as selective estrogen receptor beta modulators |
US7396846B2 (en) * | 2002-04-09 | 2008-07-08 | Eli Lilly And Company | Growth hormone secretagogues |
US20060167268A1 (en) * | 2002-04-09 | 2006-07-27 | Eli Lilly And Company, Patent Division, | Growth hormone secretagogues |
AU2003225305A1 (en) | 2002-05-08 | 2003-11-11 | Bristol-Myers Squibb Company | Pyridine-based thyroid receptor ligands |
US7405234B2 (en) | 2002-05-17 | 2008-07-29 | Bristol-Myers Squibb Company | Bicyclic modulators of androgen receptor function |
EP1536817A1 (en) | 2002-08-23 | 2005-06-08 | Gestion Univalor Société en Commandite | Growth hormone-releasing peptides in the treatment of prevention of atherosclerosis and hypercholesterolemia |
US7632858B2 (en) | 2002-11-15 | 2009-12-15 | Bristol-Myers Squibb Company | Open chain prolyl urea-related modulators of androgen receptor function |
US8309603B2 (en) | 2004-06-07 | 2012-11-13 | University Of Tennessee Research Foundation | SARMs and method of use thereof |
TW200504021A (en) | 2003-01-24 | 2005-02-01 | Bristol Myers Squibb Co | Substituted anilide ligands for the thyroid receptor |
US7105537B2 (en) | 2003-01-28 | 2006-09-12 | Bristol-Myers Squibb Company | 2-substituted cyclic amines as calcium sensing receptor modulators |
WO2004067719A2 (en) * | 2003-01-28 | 2004-08-12 | Advisys, Inc. | Growth hormone releasing hormone (ghrh) for use in reducing culling in herd animals |
US7205322B2 (en) | 2003-02-12 | 2007-04-17 | Bristol-Myers Squibb Company | Thiazolidine compounds as calcium sensing receptor modulators |
US7557143B2 (en) | 2003-04-18 | 2009-07-07 | Bristol-Myers Squibb Company | Thyroid receptor ligands |
TW200424214A (en) * | 2003-04-21 | 2004-11-16 | Advisys Inc | Plasmid mediated GHRH supplementation for renal failures |
US7265145B2 (en) | 2003-05-28 | 2007-09-04 | Bristol-Myers Squibb Company | Substituted piperidines and pyrrolidines as calcium sensing receptor modulators and method |
US7459460B2 (en) | 2003-05-28 | 2008-12-02 | Bristol-Myers Squibb Company | Trisubstituted heteroaromatic compounds as calcium sensing receptor modulators |
US7476653B2 (en) | 2003-06-18 | 2009-01-13 | Tranzyme Pharma, Inc. | Macrocyclic modulators of the ghrelin receptor |
US7361642B2 (en) * | 2003-08-04 | 2008-04-22 | Vgx Pharmaceuticals, Inc. | Canine specific growth hormone releasing hormone |
US7399826B1 (en) | 2003-10-02 | 2008-07-15 | Ali Sadat M | Peptide for promoting healing of fractures |
WO2005065722A2 (en) | 2003-12-31 | 2005-07-21 | Advisys, Inc. | Reducing arthritis and lameness in subjects by growth hormone releasing hormone (ghrh) supplementation |
EP1713828B1 (en) * | 2004-01-20 | 2011-04-27 | VGX Pharmaceuticals, LLC | Enhanced secretion/retention of growth hormone releasing hormone (ghrh) from muscle cells by species-specific signal peptide |
US20050164952A1 (en) * | 2004-01-23 | 2005-07-28 | Vital Pharmaceuticals, Inc. | Delivery system for growth hormone releasing peptides |
US7820702B2 (en) | 2004-02-04 | 2010-10-26 | Bristol-Myers Squibb Company | Sulfonylpyrrolidine modulators of androgen receptor function and method |
US7378426B2 (en) | 2004-03-01 | 2008-05-27 | Bristol-Myers Squibb Company | Fused heterotricyclic compounds as inhibitors of 17β-hydroxysteroid dehydrogenase 3 |
US7696241B2 (en) | 2004-03-04 | 2010-04-13 | Bristol-Myers Squibb Company | Bicyclic compounds as modulators of androgen receptor function and method |
US7625923B2 (en) | 2004-03-04 | 2009-12-01 | Bristol-Myers Squibb Company | Bicyclic modulators of androgen receptor function |
US9889110B2 (en) | 2004-06-07 | 2018-02-13 | University Of Tennessee Research Foundation | Selective androgen receptor modulator for treating hormone-related conditions |
US9884038B2 (en) | 2004-06-07 | 2018-02-06 | University Of Tennessee Research Foundation | Selective androgen receptor modulator and methods of use thereof |
MX2007000893A (es) * | 2004-07-23 | 2007-04-18 | Advisys Inc | La hormona liberadora de hormona de crecimiento mejora la respuesta inmune inducida por la vacunacion. |
JP2008510706A (ja) | 2004-08-18 | 2008-04-10 | エリクシアー ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッド | 成長ホルモン分泌促進物質 |
WO2006116401A1 (en) | 2005-04-28 | 2006-11-02 | Bristol-Myers Squibb Company | C-5 substituted quinazolinone derivatives as selective estrogen receptor beta modulators |
ES2453981T3 (es) | 2005-08-31 | 2014-04-09 | University Of Tennessee Research Foundation | Tratamiento de síntomas de enfermedad renal con moduladores selectivos de receptor de andrógenos (SARM) |
CU23558A1 (es) | 2006-02-28 | 2010-07-20 | Ct Ingenieria Genetica Biotech | Compuestos análogos a los secretagogos peptidicos de la hormona de crecimiento |
US8058253B2 (en) * | 2006-07-06 | 2011-11-15 | Vgx Pharmaceuticals, Inc. | Growth hormone releasing hormone treatment to decrease cholesterol levels |
JP5215300B2 (ja) | 2006-07-12 | 2013-06-19 | ユニバーシティ オブ テネシー リサーチ ファウンデーション | 置換アシルアニリドおよびそれらの使用方法 |
ES2558517T3 (es) | 2006-08-02 | 2016-02-04 | Cytokinetics, Inc. | Ciertas entidades químicas, composiciones y métodos que comprenden imidazopirimidinas |
US8299248B2 (en) | 2006-08-02 | 2012-10-30 | Cytokinetics, Incorporated | Certain 1H-imidazo[4,5-b]pyrazin-2(3H)-ones and 1H-imidazo[4,5-b]pyrazin-2-ols and methods for their use |
DK2054049T3 (en) | 2006-08-24 | 2016-08-01 | Univ Tennessee Res Found | SUBSTITUTED ACYLANILIDES AND PROCEDURES FOR USING THEREOF |
US9844528B2 (en) | 2006-08-24 | 2017-12-19 | University Of Tennessee Research Foundation | SARMs and method of use thereof |
US10010521B2 (en) | 2006-08-24 | 2018-07-03 | University Of Tennessee Research Foundation | SARMs and method of use thereof |
US9730908B2 (en) | 2006-08-24 | 2017-08-15 | University Of Tennessee Research Foundation | SARMs and method of use thereof |
EP2644618B1 (en) | 2007-02-09 | 2016-08-17 | Ocera Therapeutics, Inc. | tether intermediates for the synthesis of macrocyclic ghrelin receptor modulators |
EP2155769B1 (en) | 2007-05-04 | 2012-06-27 | Katholieke Universiteit Leuven KU Leuven Research & Development | Tissue degeneration protection |
US7968603B2 (en) | 2007-09-11 | 2011-06-28 | University Of Tennessee Research Foundation | Solid forms of selective androgen receptor modulators |
US8003689B2 (en) | 2008-06-20 | 2011-08-23 | Gtx, Inc. | Metabolites of selective androgen receptor modulators and methods of use thereof |
AR081331A1 (es) | 2010-04-23 | 2012-08-08 | Cytokinetics Inc | Amino- pirimidinas composiciones de las mismas y metodos para el uso de los mismos |
AR081626A1 (es) | 2010-04-23 | 2012-10-10 | Cytokinetics Inc | Compuestos amino-piridazinicos, composiciones farmaceuticas que los contienen y uso de los mismos para tratar trastornos musculares cardiacos y esqueleticos |
EP2560488B1 (en) | 2010-04-23 | 2015-10-28 | Cytokinetics, Inc. | Certain amino-pyridines and amino-triazines, compositions thereof, and methods for their use |
WO2013190520A2 (en) | 2012-06-22 | 2013-12-27 | The General Hospital Corporation | Gh-releasing agents in the treatment of vascular stenosis and associated conditions |
US9744149B2 (en) | 2012-07-13 | 2017-08-29 | Gtx, Inc. | Method of treating androgen receptor (AR)-positive breast cancers with selective androgen receptor modulator (SARMs) |
US10258596B2 (en) | 2012-07-13 | 2019-04-16 | Gtx, Inc. | Method of treating HER2-positive breast cancers with selective androgen receptor modulators (SARMS) |
US9622992B2 (en) | 2012-07-13 | 2017-04-18 | Gtx, Inc. | Method of treating androgen receptor (AR)-positive breast cancers with selective androgen receptor modulator (SARMs) |
US10314807B2 (en) | 2012-07-13 | 2019-06-11 | Gtx, Inc. | Method of treating HER2-positive breast cancers with selective androgen receptor modulators (SARMS) |
US10987334B2 (en) | 2012-07-13 | 2021-04-27 | University Of Tennessee Research Foundation | Method of treating ER mutant expressing breast cancers with selective androgen receptor modulators (SARMs) |
CN104754939A (zh) | 2012-07-13 | 2015-07-01 | Gtx公司 | 用选择性雄激素受体调节剂(sarm)治疗雄激素受体(ar)阳性乳癌的方法 |
US9969683B2 (en) | 2012-07-13 | 2018-05-15 | Gtx, Inc. | Method of treating estrogen receptor (ER)-positive breast cancers with selective androgen receptor modulator (SARMS) |
CA2889499C (en) | 2012-10-24 | 2019-09-10 | Daiichi Sankyo Company, Limited | Growth hormone secretagogue receptor agonists for treating amyotrophic lateral sclerosis |
WO2014168973A2 (en) | 2013-04-08 | 2014-10-16 | President And Fellows Of Harvard College | Methods and compositions for rejuvenating skeletal muscle stem cells |
US9119832B2 (en) | 2014-02-05 | 2015-09-01 | The Regents Of The University Of California | Methods of treating mild brain injury |
EP3148587B1 (en) | 2014-05-30 | 2021-02-24 | Pfizer Inc | Carbonitrile derivatives as selective androgen receptor modulators |
US20170121385A1 (en) | 2015-10-28 | 2017-05-04 | Oxeia Biopharmaceuticals, Inc. | Methods of treating neurodegenerative conditions |
CN114364669A (zh) | 2019-06-27 | 2022-04-15 | 赛特凯恩蒂克公司 | 1-(2-((((反式)-3-氟-1-(3-氟吡啶-2-基)环丁基)甲基)氨基)嘧啶-5-基)-1h-吡咯-3-甲酰胺的多晶型物 |
WO2023275715A1 (en) | 2021-06-30 | 2023-01-05 | Pfizer Inc. | Metabolites of selective androgen receptor modulators |
Family Cites Families (22)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4228155A (en) * | 1979-03-30 | 1980-10-14 | Beckman Instruments, Inc. | Synthetic peptides having pituitary growth hormone releasing activity |
US4228158A (en) * | 1979-03-30 | 1980-10-14 | Beckman Instruments, Inc. | Synthetic peptides having pituitary growth hormone releasing activity |
US4228157A (en) * | 1979-03-30 | 1980-10-14 | Beckman Instruments, Inc. | Synthetic peptides having pituitary growth hormone releasing activity |
US4223020A (en) * | 1979-03-30 | 1980-09-16 | Beckman Instruments, Inc. | Synthetic peptides having pituitary growth hormone releasing activity |
US4223019A (en) * | 1979-03-30 | 1980-09-16 | Beckman Instruments, Inc. | Synthetic peptides having pituitary growth hormone releasing activity |
US4224316A (en) * | 1979-03-30 | 1980-09-23 | Beckman Instruments, Inc. | Synthetic peptides having pituitary growth hormone releasing activity |
US4223021A (en) * | 1979-03-30 | 1980-09-16 | Beckman Instruments, Inc. | Synthetic peptides having pituitary growth hormone releasing activity |
CA1175810A (en) * | 1979-03-30 | 1984-10-09 | Frank A. Momany | Synthetic peptides having pituitary growth hormone releasing activity |
US4228156A (en) * | 1979-03-30 | 1980-10-14 | Beckman Instruments, Inc. | Synthetic peptides having pituitary growth hormone releasing activity |
US4226857A (en) * | 1979-03-30 | 1980-10-07 | Beckman Instruments, Inc. | Synthetic peptides having pituitary growth hormone releasing activity |
AU549053B2 (en) * | 1981-12-28 | 1986-01-09 | Beckman Instruments, Inc. | Synthetic peptides having pituitary growth hormone releasing activity |
US4410513A (en) * | 1981-12-28 | 1983-10-18 | Beckman Instruments, Inc. | Synthetic peptides having pituitary growth hormone releasing activity |
US4410512A (en) * | 1981-12-28 | 1983-10-18 | Beckman Instruments, Inc. | Combinations having synergistic pituitary growth hormone releasing activity |
US4880778A (en) * | 1986-05-12 | 1989-11-14 | Eastman Kodak Company | Combinations having synergistic growth hormone releasing activity and methods for use thereof |
US4839344A (en) * | 1987-06-12 | 1989-06-13 | Eastman Kodak Company | Polypeptide compounds having growth hormone releasing activity |
US4880777A (en) * | 1987-09-01 | 1989-11-14 | Eastman Kodak Company | Synthetic peptides having growth hormone releasing activity |
ATE122357T1 (de) * | 1988-01-28 | 1995-05-15 | Polygen Holding Corp | Polypeptide mit hormonwachstumsbefreiender wirkung. |
AU628322B2 (en) * | 1988-01-28 | 1992-09-17 | Eastman Kodak Company | Polypeptide compounds having growth hormone releasing activity |
JPH03504245A (ja) * | 1988-05-11 | 1991-09-19 | ポリゲン ホールディング コーポレイション | 成長ホルモン放出活性を有するポリペプチド化合物類 |
US5486505A (en) * | 1990-07-24 | 1996-01-23 | Polygen Holding Corporation | Polypeptide compounds having growth hormone releasing activity |
WO1992001709A1 (en) | 1990-07-24 | 1992-02-06 | Eastman Kodak Company | Process for synthesizing peptides |
IL98910A0 (en) * | 1990-07-24 | 1992-07-15 | Polygen Holding Corp | Polypeptide compounds having growth hormone releasing activity and pharmaceutical compositions containing them |
-
1991
- 1991-08-22 US US07/748,350 patent/US5663146A/en not_active Expired - Lifetime
-
1992
- 1992-08-18 IL IL102848A patent/IL102848A/en not_active IP Right Cessation
- 1992-08-20 SK SK204-94A patent/SK282895B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1992-08-20 CA CA002116120A patent/CA2116120C/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-08-20 HU HU9400495A patent/HU223664B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1992-08-20 CZ CZ1994400A patent/CZ293281B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1992-08-20 AT AT92919262T patent/ATE172742T1/de active
- 1992-08-20 JP JP50458593A patent/JP3179489B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1992-08-20 US US07/932,494 patent/US5776901A/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-08-20 BR BR9206398A patent/BR9206398A/pt not_active Application Discontinuation
- 1992-08-20 AU AU25416/92A patent/AU666673B2/en not_active Ceased
- 1992-08-20 EP EP92919262A patent/EP0605484B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-08-20 DE DE69227462T patent/DE69227462T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1992-08-20 PL PL92302434A patent/PL169562B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1992-08-20 RO RO94-00256A patent/RO112507B1/ro unknown
- 1992-08-20 DK DK92919262T patent/DK0605484T3/da active
- 1992-08-20 WO PCT/US1992/007026 patent/WO1993004081A1/en active Application Filing
- 1992-08-20 RU RU94016393A patent/RU2126014C1/ru not_active IP Right Cessation
- 1992-08-20 ES ES92919262T patent/ES2124263T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1992-08-20 NZ NZ244034A patent/NZ244034A/en not_active IP Right Cessation
- 1992-08-20 KR KR1019940700542A patent/KR100247212B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1992-08-21 MX MX9204861A patent/MX9204861A/es unknown
- 1992-08-21 ZA ZA926337A patent/ZA926337B/xx unknown
- 1992-08-22 CN CN92110868A patent/CN1035256C/zh not_active Expired - Fee Related
-
1994
- 1994-02-18 BG BG98489A patent/BG62655B1/bg unknown
- 1994-02-21 FI FI940807A patent/FI120095B/fi not_active IP Right Cessation
- 1994-02-21 NO NO19940592A patent/NO314695B1/no not_active IP Right Cessation
-
1997
- 1997-04-22 BR BR1100309-0A patent/BR1100309A/pt active IP Right Grant
-
2005
- 2005-05-02 FI FI20050467A patent/FI120691B/fi not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
FI120095B (fi) | Menetelmä peptidien valmistamiseksi, joilla on kasvuhormonia vapauttavaa aktiivisuutta | |
WO1989007111A1 (en) | Polypeptide compounds having growth hormone releasing activity | |
WO1989007110A1 (en) | Polypeptide compounds having growth hormone releasing activity | |
US5486505A (en) | Polypeptide compounds having growth hormone releasing activity | |
EP0417165B1 (en) | Polypeptide compounds having growth hormone releasing activity | |
EP0540676B1 (en) | Peptide compounds having growth hormone releasing activity | |
SK7252001A3 (en) | Antagonistic analogs of gh-rh inhibiting igf-i and -ii |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
FG | Patent granted |
Ref document number: 120095 Country of ref document: FI |
|
MM | Patent lapsed |