FI118904B - Monikanavainen testiväline, menetelmä sen valmistamiseksi ja sen käyttö - Google Patents

Monikanavainen testiväline, menetelmä sen valmistamiseksi ja sen käyttö Download PDF

Info

Publication number
FI118904B
FI118904B FI20030921A FI20030921A FI118904B FI 118904 B FI118904 B FI 118904B FI 20030921 A FI20030921 A FI 20030921A FI 20030921 A FI20030921 A FI 20030921A FI 118904 B FI118904 B FI 118904B
Authority
FI
Finland
Prior art keywords
test
test device
sample
channel
channels
Prior art date
Application number
FI20030921A
Other languages
English (en)
Swedish (sv)
Other versions
FI20030921A (fi
FI20030921A0 (fi
Inventor
Aimo Niskanen
Henri Laine
Mika Saramaeki
Original Assignee
Ani Biotech Oy
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from FI20030463A external-priority patent/FI20030463A0/fi
Application filed by Ani Biotech Oy filed Critical Ani Biotech Oy
Priority to FI20030921A priority Critical patent/FI118904B/fi
Publication of FI20030921A0 publication Critical patent/FI20030921A0/fi
Priority to EP04724033A priority patent/EP1608974B1/en
Priority to PCT/FI2004/000179 priority patent/WO2004086042A1/en
Priority to AT04724033T priority patent/ATE376186T1/de
Priority to JP2006505626A priority patent/JP2006521547A/ja
Priority to CA002518587A priority patent/CA2518587A1/en
Priority to US10/548,500 priority patent/US20070042444A1/en
Priority to DE602004009554T priority patent/DE602004009554T2/de
Publication of FI20030921A publication Critical patent/FI20030921A/fi
Publication of FI118904B publication Critical patent/FI118904B/fi
Application granted granted Critical

Links

Classifications

    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L3/00—Containers or dishes for laboratory use, e.g. laboratory glassware; Droppers
    • B01L3/50—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes
    • B01L3/502—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures
    • B01L3/5023—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures with a sample being transported to, and subsequently stored in an absorbent for analysis
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2200/00—Solutions for specific problems relating to chemical or physical laboratory apparatus
    • B01L2200/12—Specific details about manufacturing devices
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2300/00—Additional constructional details
    • B01L2300/06—Auxiliary integrated devices, integrated components
    • B01L2300/0627—Sensor or part of a sensor is integrated
    • B01L2300/0663—Whole sensors
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2300/00—Additional constructional details
    • B01L2300/08—Geometry, shape and general structure
    • B01L2300/0809—Geometry, shape and general structure rectangular shaped
    • B01L2300/0816—Cards, e.g. flat sample carriers usually with flow in two horizontal directions
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2300/00—Additional constructional details
    • B01L2300/08—Geometry, shape and general structure
    • B01L2300/0861—Configuration of multiple channels and/or chambers in a single devices
    • B01L2300/0864—Configuration of multiple channels and/or chambers in a single devices comprising only one inlet and multiple receiving wells, e.g. for separation, splitting
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2300/00—Additional constructional details
    • B01L2300/08—Geometry, shape and general structure
    • B01L2300/0861—Configuration of multiple channels and/or chambers in a single devices
    • B01L2300/087—Multiple sequential chambers
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2400/00—Moving or stopping fluids
    • B01L2400/04—Moving fluids with specific forces or mechanical means
    • B01L2400/0403—Moving fluids with specific forces or mechanical means specific forces
    • B01L2400/0406—Moving fluids with specific forces or mechanical means specific forces capillary forces
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L3/00—Containers or dishes for laboratory use, e.g. laboratory glassware; Droppers
    • B01L3/50—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes
    • B01L3/502—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures
    • B01L3/5027—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures by integrated microfluidic structures, i.e. dimensions of channels and chambers are such that surface tension forces are important, e.g. lab-on-a-chip

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Clinical Laboratory Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Blow-Moulding Or Thermoforming Of Plastics Or The Like (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)

Description

118904
Monikanavainen testiväline, menetelmä sen valmistamiseksi ja sen käyttö Testredskap med flera kanaler, metod för framställning därav samt dess användning
Keksinnön kohteena on monikanavainen immunodiffuusioon perustuva testiväline, joka mahdollistaa usean eri analyysin samanaikaisen tai rinnakkaisen suorittamisen. Keksinnössä kuvataan myös välineen valmistus ja sen käyttö.
Immunodiffuusioon perustuvia menetelmiä ja testivälineitä tunnetaan esimerkiksi seuraavista patenteista ja patenttihakemuksista US 4,757,002, US 3,990,852, US 4,562,147 ja EP 0 250 137. Immunodiffuusioon perustuvia immunokromatografia-menetelmiä on kuvattu esimerkiksi seuraavissa patenteissa ja patenttihakemuksissa EP 0 291 194, EP 0 284 232 (FI93150) ja WO 86/03839.
Edellä esitetyillä, immunodiffuusioon ja immunokromatografiaan perustuvilla testivälineillä suoritetaan yleensä ainoastaan yksi analyysi per testiväline. Varman diagnoosin tekeminen ja oikean hoitomuodon valitseminen tietystä sairaudesta tai oireyhtymästä kärsivälle potilaalle voi usein vaatia useita eri analyysejä. Jos oireiden ja *;··· sairauden aiheuttajan tunnistamiseen tai tiettyjen sairauksien poissulkemiseen tarvitaan :*·,· useita eri testejä niin diagnoosin tekeminen tulee niin kalliiksi, että yleensä suoritetaan * « :T: vain yksi tai hyvin rajoitettu määrä analyysejä, jotka valitaan sattumanvaraisesti hoitavan lääkärin arvion perusteella tai yleisesti käytössä olevista testeistä, jolloin muut : * ·* vaihtoehdot voivat jäädä selvittämättä.
" · · · • φ • · ** t
Perinteisiin immunodiffuusioon ja immunokromatografiaan perustuvien testivälineisiin M · : *.· liittyvät ongelmat on ratkaistu esillä olevalla keksinnöllä, jonka tunnusomaiset piirteet • · · *... * on esitetty patenttivaatimuksissa.
. .*.
• · · • · ·
Kuvioiden lvhvt kuvaus . *: *. Kuvio 1 esittää kahdeksankanavaista kanavaverkostoa, joka on eräs edullinen testiväline ....: jopa kahdeksan eri määrityksen tekemiseksi. Leimakohta 4 toimii samalla 2 118904 näytteenannostelukohtana S ja läpäisemättömän alueen 2 erottamat kanavat 1 sisältävät spesifisen sitojan vyöhykkeenä 3.
Kuvio la esittää jalostetun muodon kuvion 1 esittämästä testivälineestä jopa kahdeksan eri määrityksen tekemiseksi. Leimakohta 4 toimii samalla näytteenannostelukohtana 5 ja läpäisemättömän alueen 2 erottamat kanavat 1 sisältävät spesifisen sitojan vyöhykkeenä 3. Testivälineeseen on lisätty testejä ja valmistajaa kuvaavia merkintöjä.
Kuvio 2 esittää testivälinettä jolla voidaan suorittaa kuusi eri määritystä sekä näiden kontrollireaktiot tai vaihtoehtoisesti jopa kaksitoista eri määritystä kuudella eri leimalla. Yksi kanavista 1 on haarautunut kahteen kanavaan la, Ib jotka ovat läpäisemättömän alueen 2 erottamia. Näytteenannostelukohta sijaitsee kanavaverkoston keskellä ja jokainen kanava 1 sisältää leimakohdan 4 sekä yhden tai useamman suojavyöhykkeen 3.
Kuvio 3 esittää testivälinettä, jolla voidaan suorittaa neljä eri määritystä sekä näiden kontrollireaktiot tai vaihtoehtoisesti jopa kahdeksan eri määritystä neljällä eri leimalla.
Kuvio 4 esittää testivälinettä, jolla voidaan suorittaa neljä eri määritystä sekä näiden ·:··: kontrollireaktiot tai vaihtoehtoisesti jopa kahdeksan eri määritystä neljällä eri leimalla.
• · • · ·
• M
:T: Kuvio 5 esittää testivälinettä, jolla voidaan suorittaa jopa kuusi eri määritystä tai • tl • „, ϊ vaihtoehtoisesti kolme määritystä j a näiden kontrollireaktiot.
• t · • te t · t t t · ·
Kuvio 6 esittää testivälinettä, jolla voidaan suorittaa kaksitoista eri määritystä neljällä eri leimalla.
• · · • · · • « • t t · · t · *···' Kuvio 7 esittää kahdeksankanavaista kanavaverkostoa, joka on eräs edullinen testi väline jopa kahdenkymmenenneljän eri määrityksen tekemiseksi. Jokainen kanava 1 sisältää I»· kolme sitoj avyöhykettä 3.
··· • · · • · · ·:*·· Kuvio S esittää testivälinettä, jolla samanaikaisesti voidaan suorittaa kuusitoista eri määritystä.
3 118904
Kuvio 9 esittää testivälinettä, jolla voidaan suorittaa kaksikymmentä eri määritystä viidellä eri leimalla.
Kuvio 10 esittää testivälinettä, jolla voidaan suorittaa kaksi määritystä ja kontrollireaktio. Testivälineeseen on lisätty testejä ja valmistajaa kuvaavia merkintöjä.
Kuvio 11 esittää testivälinettä, jolla voidaan suorittaa kaksi määritystä ja kontrollireaktio. Testivälineeseen on lisätty testejä ja valmistajaa kuvaavia merkintöjä.
Kuvio 12 esittää testivälinettä, joka on valmistettu laserilla syövyttämällä, jolla voidaan suorittaa kolme rinnakkaista määritystä tai vaihtoehtoisesti kolme yksittäistä määritystä ja näiden kontrollireaktiot. Testivälineeseen on lisätty testejä ja valmistajaa kuvaavia merkintöjä.
Keksinnön kohteena on monikanavainen immunodififuusioon perustuva testiväline, joka sisältää huokoisen kantajamateriaalin, ja siinä olevana vyöhykkeenä (vyöhykkeinä) tai täplänä (täplinä) olevan yhden tai useamman spesifisen sitomisreagenssin (immunoreagenssin) ja näytteenannostelukohdan, joka on valinnaisesti varustettu *:**: suodattimena, esimerkiksi verisolujen poistamiseksi ja sisältää tulostettavissa olevan näytteen avulla liikkuvaksi saatavissa olevan leiman, joka on päällystetty toisella Y : spesifisellä sitomisreagenssilla (immunoreagenssilla). Leima on testivälineellä tai ··· • „. · lisätään näytteeseen.
• · · • · · • · • · φ · ·
Keksinnön mukaiselle testivälineelle on tunnusomaista, että se sisältää kanavaverkoston, joka on aikaansaatu syövyttämällä huokoiseen kantajamateriaaliin ·· · • · · : .* verkosto esimerkiksi laserilla tai käsittelemällä huokoista kantajamateriaalia vettä • · · • m *···* hylkivällä aineella, jonka kanaviin on annosteltu yksi tai useampi samanlainen tai erilainen spesifinen sitova aine, jotka on valittu eri markkeriryhmistä ja voivat olla ··· yhteisiä tietyn oireyhtymän diagnosoimiseksi ja jotka mahdollistavat usean määrityksen ·*·'· samanaikaisen suorittamisen, halutun sairauden ja/tai oireyhtymän tunnistamiseksi.
·:*·; Näytteenannostelukohta, joka voi olla täplä tai viivamainen, on sijoitettu esimerkiksi liuskan keskelle tai sen toisen päähän siten, että se mahdollistaa näytteen tasaisen 4 118904 jakaantumisen kuhunkin kanavaan. Jos kanavissa käytetään samaa spesifistä sitovaa reagenssia eri konsentraationa on mahdollista aikaansaada semikvantitatiivinen tulos.
Keksinnön mukainen testi väline sisältää useita kanavia, joilla voidaan määrittää useita analyyttejä samanaikaisesti tai rinnakkain. Testi välineessä voidaan valinnaisesti ryhmittää yhteen eri oireyhtymiin liittyviä sairaudenaiheuttajia tunnistavia reagensseja, esimerkiksi allergeenejä, sydäninfarktimarkkereita, sukupuolitautien tunnistamiseen ja veriseulontaan sopivia tunnistavia reagensseja, hengitystieinfektioiden aiheuttajia tunnistavia markkereita, IgG-, IgA- ja IgM-vasta-aineita, muiden infektiotautien aiheuttajia tunnistavia markkereita ja erilaisia syöpämarkkereita niiden samanaikaiseksi tai rinnakkaiseksi määrittämiseksi.
Keksintö kohdistuu myös menetelmään valmistaa kyseinen testiväline.
Valmistusmenetelmälle on tunnusomaista, että huokoiselle materiaalille muodostuu halutun muotoinen ja kokoinen useita kanavia sisältäviä kanavaverkosto (Kuviot 1-12) niin, että alustaan poltetaan tietty kuvio laserilla tai niin, että alustalle annostellaan vettä hylkivää ainetta. Jokaisen kanavan huokoiseen aineeseen kiinnitetään pysyvästi eli immobilisoidaan erilaiset tunnistavat spesifiset sitojareagenssit. Näistä kohdista .... Ϊ testireaktioiden analyysitulokset ovat luettavissa.
• · • · · • ·· • · :*·*: Tämän jälkeen huokoinen materiaali käsitellään aineella, joka tekee huokoisen aineen * :***: vapaat reaktiiviset kohdat inerteiksi eli ne eivät reagoi epätoivotulla tavalla, esimerkiksi i *’: hidastamalla tai estämällä näytteessä olevien analyyttien ja leimojen kulkeutumista :i t: pysyvästi kiinnitettyyn spesifiseen reagenssivyöhykkeeseen tai täplään. Testivälineen näytteenannostelukohtaan tai testikanavaan sille varatulle paikalle annostellaan + * · • *.: tulostettava, valinnaisesti näkyvä leima, johon on sidottu toinen spesifinen • · · sitomisreagenssi. Leima johon sitomisreagenssi on sidottu voidaan myös lisätä : näytteeseen, jolloin leima siirtyy välineelle näytettä lisättäessä :***: näytteenannostelukohtaan.
• · ♦ • · ·
Keksinnössä kuvataan myös testivälineen käyttö usean määrityksen samanaikaiseen tai rinnakkaiseen suorittamiseen halutun sairauden ja/tai oireyhtymän tunnistamiseksi.
5 118904
Haarautuneita kanavia voidaan myös käyttää toimivuuskontrollia varten jolloin toinen kanavista toimii testikanavana ja toinen toimivuus- tai kontrollikanavana. Testi välineeseen voidaan myös lisätä erillinen välineen ja reagenssien toimivuutta osoittava kontrollikanava.
Keksinnön mukainen monikanavainen testi väline ja sen käyttö diagnoosimenetelmissä poikkeavat edellä tekniikan taustaan kuuluvissa patenteissa ja patenttihakemuksissa kuvatuista testivälineistä ja diagnsoosimenetelmistä siinä, että hyvin pienellä huokoisesta materiaalista tehdyllä kappaleella voidaan suorittaa yksi tai useampi erilainen tai samanlainen, rinnakkainen testi, edullisesti 2 - 40, edullisemmin 4 - 30 ja edullisimmin 8-24 rinnakkaista testiä.
Etuja aikaisempiin menetelmiin ja testivälineisiin venattuna ovat reagenssi- ja materiaalikulutuksen, näytetilavuuden ja rahtikustannusten pieneneminen ja ympäristöystävällisyyden, säilyvyyden ja käyttäjäystävällisyyden parantuminen. Ympäristöystävällisyys paranee käytettyjen testivälineiden ympäristökuormituksen pienenemisen myötä. Keksinnön mukainen menetelmä antaa mahdollisuuden tehdä testivälineitä erittäin edullisesti vähäisen reagenssikulutuksen ja työkustannusten ····· säästön vuoksi.
• · • · · • *φ « · :*·*: Laserin käyttäminen kanavaverkoston valmistamiseen on edullinen tapa valmistaa ;***: keksinnön tarkoittamia testivälineitä. Tätä valmistustapaa varten käytettävä laite on ·· · ;***: halpa ja käyttökulut muodostuvat lähinnä käytetystä sähkömäärästä. Verrattuna vettä :t”: hylkivän aineen, kuten esimerkiksi kuuman vahan käyttöön laservalmistuksessa voidaan välttää kemikaalien käyttö valmistuksen aikana. Laseria käyttämällä saadaa aikaan • · · • V tarkka syövytysjälki (printtaus) ja koska tulostus (painojälki) on tarkka, testivälineet
• M
voidaan haluttaessa merkata valmistuksen yhteydessä, jolloin välineiden : sekaantumisvaara vähenee.
·#· ··· • · • · • · ·
Suuria määriä testejä voidaan valmistaa syövyttämällä yksittäiset kanavat, rinnakkaiset kanavat tai kanavaverkostot rullalle ja lisäämällä tarvittavat reagenssit ja käsittelyt samalla tuotantolinjalla ja lopuksi erottamalla testit toisistaan halutulla tavalla, 6 118904 yksittäisiksi testeiksi yhdelle tai useammalle määritykselle tai useamman rinnakkaisen testin testikokonaisuudeksi.
Tämän lisäksi testivälineellä voidaan tutkia pieniä potilasnäytetilavuuksia kuten virtsaa, verta, plasmaa, seerumia, sylkeä, kudosnesteitä, ulosteita, ympäristönäytteitä, jne. Pienellä näytemäärällä, jopa 1,0 - 50,0 μΐ, edullisesti 2,0 - 40,0 μΐ, edullisemmin 4,0 -20,0 μΐ tai edullisimmin 5,0 - 10,0 μΐ per testiväline riittää, saavutetaan etuja erikoisesti pikkulasten näytteistä tai sormenpääverinäytteistä määrityksiä tehtäessä.
Testi välineen valmistus
Testivälineen valmistukseen kuuluu kuusi päävaihetta. Kanavaverkoston muodostaminen, spesifisen reagenssin annostelu ja kiinnitys, huokoisen kanavan inertiksi tekeminen, toisella spesifisellä reagenssilla päällystetyn leiman annostelu, näytteenannostelukohdan tekeminen sekä testivälineen stabiloiminen ja säilyvyyden varmistaminen. Mainittujen päävaiheiden välillä testiliuska voidaan kuivata. Leiman annostelu testi välineelle voidaan jättää tekemättä jos leima lisätään näytteeseen.
Keksinnön mukaisessa testivälineessä hyvin pienelle huokoisesta materiaalista tehdylle kappaleelle voidaan suorittaa useampi erilainen tai samanlainen rinnakkainen testi • · :. * · · (Kuviot 1-12), kanavoimalla testiväline.
• · · • · · • · · • · · ·...* Kanavien valmistus φφ # : .* Keksinnön mukaisessa testivälineessä reagenssien ja näytteiden kanavointi saadaan lii Φ · *··.* aikaan käsittelemällä huokoinen ja nestettä siirtävä materiaali, kuten nitroselluloosa, polysulfonaatti, nylon, paperi vettä hylkivällä tai osittain vettä hylkivällä aineella, kuten φ φ φ •##·* vahalla, polyolefuneilla, polyakryylamidimaaleilla tai niiden seoksilla. Vettä hylkivien φ · aineiden annostelu huokoiselle aineelle, tapahtuu niiden sulamislämpötilassa edullisesti φ 50 - 80 °C lämpötilassa parhaiten painotekniikkaa, sivellintekniikkaa tai spray- φφφ :* tekniikkaa hyväksikäyttäen, siten että huokoiselle aineelle muodostuu halutunmuotoinen :T: vettä hylkivä kuvio, jonka sisään jää kanavaverkosto joka sisältää useita kanavia jotka *:**: ovat käsitellyn läpäisemättömän alueen erottamat ja joita pitkin näyte liikkuu kapillaari- ilmiön ja diffuusion vaikutuksesta. Annostelun jälkeen alusta jäähdytetään välittömästi 7 118904 huoneen lämpötilaan. Reagenssit voidaan annostella kanavaverkostoon siten, että ne säilyvät toimintakykyisinä.
Kanavat voidaan luonnollisesti aikaansaada myös stanssaamalla sopivan kokoisesta kantajamateriaalipalasta halutun muotoinen ja kokoinen kanavaverkosto.
Edullisesti kanavointi voidaan saada aikaan käsittelemällä huokoinen ja nestettä siirtävä materiaali, kuten nitroselluloosa laserilla. Sopiva laserteho syövyttää esimerkiksi nitroselluloosapohjasta nitroselluloosan niistä kohdista, joihin ei haluta nestevirtausta siten, että jäljelle käsiteltyihin kohtiin jää vain selluloosan alla oleva muovikalvo (mylardkalvo). Eri muotoiset kuviot (Kuvio 1-12) muodostuvat kanavista jotka sisältävät nitroselluloosaa tai muuta huokoista materiaalia ja kanavareunoista tai alustan reunaan asti ulottuvista käsitellyistä läpäisemättömistä alueista jotka on käsitelty laserilla käyttäen ennalta ohjelmoitua sopivaa tietokoneohjelmaa, 10 - 90 % laitteen maksimitehosta, edullisesti 10 - 80 %, edullisemmin 12 - 60 %, edullisimmin 15 - 40 %, 10 - 2500 mm/sekunti merkintänopeutta edullisesti 100 - 1500 mm/s, edullisemmin 400 - 1000 mm/s, edullisimmin 600 - 800 mm/s ja 50/1000 - 1000/1000 resoluutiota edullisesti 100/1000 - 800/1000, edullisemmin 150/1000 - 500/1000, edullisimmin ·:**: 200/1000 - 300/1000.
• · • · · • *· • · • ·· V · Kanavia erottava käsitelty läpäisemätön alue voi jatkua testivälineen reunoihin asti tai *·» ·...· vaihtoehtoisesti kuvioiden reunoihin voidaan jättää käsittelemätöntä aluetta.
·* · : *.* Syövyttämällä esimerkiksi laserkäsittelyllä testivälineeseen voidaan lisätä valmistajaa • · ja/tai testejä koskevia merkintöjä.
·· · · · : ** Kantajassa olevien reaeenssien annostelu • · * • * '*··* Kanavaverkostoon voidaan annostella ja tarvittaessa kiinnittää erilaisten testien suorittamiseen tarvittavat reagenssit. Reagensseja voidaan käyttää hyvin pieninä
• M
tilavuuksina. Tarvittavat reagenssit ovat vähintään kaksi spesifistä sitojareagenssia, joista toinen on immobilisoitu ja toinen on sidottu näyteliuoksen avulla liikkuvaksi *:**: saatavaan leimaan ja vähintään yksi tulostettava leima.
s 118904
Spesifiset sitoiareagenssit
Sopivia aineita ovat erilaiset sitomisreagenssit, erityiset immunokemialliset reagenssit, kuten vasta-aineet, vasta-ainefragmentit, rekombinantti vasta-aineet, rekombinantti vasta-ainefragmentit, antigeenit, mutta myös muut ligandit kuten reseptorit, lektiinit, biotiini, avidiini, jne. Erityisen soveltuvia ovat mono- ja polyklonaaliset vasta-aineet, antigeenit ja niiden fragmentit. Allergiatestauksessa allergeeneina voidaan käyttää mm. puiden, heinien tai rikkaruohojen siitepölystä valmistettuja uutteita, homeiden itiöistä, punkeista, kotipölystä, eläinten ihoepiteelistä, hyönteisistä, lateksista, parasiiteistä, lääkeaineista tai elintarvikkeista tehtyjä uutteita.
Sitojareagenssit voidaan immobilisoida tai kiinnittää kemiallisesti tai fysikaalisesti sinänsä tunnetulla menetelmällä huokoisen kantajan rakenteisiin halutuille kohdille ja samaan tai haarautuneeseen kanavaan voidaan myös valinnaisesti immobilisoida tai kiinnittää kemiallisesti tai fysikaalisesti sitojareagenssi kontrollireaktiota varten.
Huokoisen aineen inertiksi tekeminen
Kanavaverkoston valmistamisen ja spesifisen sitomisreagenssin annostelun jälkeen huokoinen kantaja-aine tehdään inertiksi nk. blocking aineella, jolloin huokoisen kantaja-aineen vapaana olevat reaktiiviset kohdat ja spesifisten sitomisreagenssien ei-spesifiset sitomiskohdat eliminoidaan sopivalla seoksella joka sisältää luonnollisia ja/tai • · synteettisiä polymeerejä, kuten albumiini ja kaseiini ja/tai PEG (polyetyleeniglykoli) ja ;***: PVA (polyvinyylialkoholi), nonionisia detergenttejä kuten heksaanisulfonihappo ja ··· :***: TRITON-X-IOO, BRI sekä säilöntäaineita kuten sokeria, esimerkiksi sakkaroosi ja ( .* trehaloosi tai näiden johdannaisia. Tämän jälkeen testiväline kuivataan.
·· · • Blocking aine voidaan haluttaessa lisätä vasta testivälineen valmistamisen jälkeen, ··· *... * näytteen annostelun yhteydessä.
• · · • · ♦ ··♦ :***; Leimakohdan valmistaminen ··« .·;·. Sopivia leimaus-aineita voivat olla erilaiset näyteviitauksen mukana liikkuviksi • · · m saatettavat muoviset tai metalliset mikropartikkelit, kuten lateksi, kulta, liposomit, väliaineet, fluoroforit, fluorokromit tai muut sellaiset metalli- tai väriainepartikkelit, 9 118904 jotka kykenevät sitomaan analyytit ja sitoutumaan spesifisiin sitojiin kuten vasta-aineet, reseptorit, lektiini tai muut ligandit. Leimana voidaan käyttää myös fluoresoivia partikkeleita, fluoresoivia väriaineita tai supeiparamagneettisia partikkeleita.
Leima voidaan kiinnittää huokoiseen kantajaan, testivälineen näytteenannostelukohtaan tai toiseen näytteenannostelukohdasta poikkeavaan kohtaan. Leimaa voidaan myös lisätä tutkittavaan näytteeseen ennen sen lisäämistä testiliuskalle.
Nävtteenannostelukohdan valmistaminen Näytteenannostelukohta voidaan vaihtoehtoisesti varustaa suodattimena asettamalla näytteen annostelukohdalle suodatin, joka estää esimerkiksi verisoluja kulkeutumasta kanaviin. Näytteenannostelukohta voi olla varustettu leimalla johon on sidottu toinen spesifinen sitojareagenssi.
Testivälineen stabiloiminen ia säilyvyyden varmistaminen
Testi väline voidaan tehdä säilyväksi käsittelemällä sitä esimerkiksi kuivaamalla niin, että sen suhteellinen kosteus on alle 8 %, minkä jälkeen se pakataan hermeettisesti ja säilytetään kuivana niin, että testiväline pysyy alle 8 % suhteellisessa kosteudessa. *:**: Tällöin sen toimivuus säilyy jopa 24 - 36 kuukautta, ilman oleellista toimintatehon : \: kuten herkkyyden tai spesifisyyden laskua.
φ · φ · • · · ti*
Testiväline voidaan tarvittaessa sijoittaa haluttuun kartongista tai muovista t · · • V valmistettuun koteloon, joka voidaan tarvittaessa varustaa testivälineen toimintaa ja . * * * *... * käyttöä kuvaavilla ohjeilla.
·· · • ·* Testivälineen rakenne ··· • · *···* Testivälineen rakennetta ja mahdollisia variaatioita on kuvattu kuvioissa 1-12.
• • φ · • φ φ • · φφφ
Testiväline koostuu useammasta, edullisesti 2-10, edullisemmin 3-8 kanavasta 1 jotka φ :*·*: voivat olla jakautuneita haarautumiskohdasta edelleen useampaan, edullisesti 2-5 φ *:**: kanavaan (la, Ib...), edullisemmin 2-3 haarautuneeseen kanavaan. Käsitelty läpäisemätön alue 2 erottaa kanavat 1 toisistaan ja ohjaa näytteen kulkua testivälineellä.
ίο 118904
Kanavat 1 tai haarautuneet kanavat (la, Ib...) sisältävät yhden tai useamman sitojareagenssin suojavyöhykkeenä tai -täplänä 3. Lisäksi testiväline sisältää yhden tai useamman leimakohdan 4 joka valinnaisesti voi olla yhdistettynä näytteenannostelukohtaan 5. Näytteenannostelukohta 5 voi valinnaisesti olla varustettuna suodattimella.
Kuvio 1 esittää testivälinettä jossa halutun kokoinen, esim. 25 x 25 mm nitroselluloosakalvo on jaettu kahdeksaan identtiseen kanavaan 1. Kanavat on valmistettu, painamalla kuvio huokoiseen materiaaliin, esimerkiksi nitroselluloosakalvoon ja siirtämällä leimasinlaitteella kuumaa, sulanutta n. 60°C polyolefiinia nitroselluloosakalvolle käsitellyille, vettä hylkiville alueille 2. Kukin kanava sisältää spesifisen sitojan 3. Leimakohta 4 testivälineen keskellä, sisältää toisen, tutkittavaa analyyttiä vastaan suunnattiin leimareagenssin. Näytteenannostelukohta 5 on sama kuin testivälineen leimakohta 4. Kuvion 1 testivälineelle on tyypillistä, että kussakin kanavassa voi olla eri spesifinen sitoja (esim. allergeeni) ja kanavien keskellä on kullekin sitojalle yhteinen partikkelileima (esimerkiksi antihuman IgE).
Kuvio la esittää testivälinettä jossa nitroselluloosakalvo on jaettu kahdeksaan ·:···. identtiseen kanavaan 1. Kanavat on valmistettu, syövyttämällä kuvio huokoiseen :\j materiaaliin, esimerkiksi nitroselluloosakalvoon laserilla siten, että kanavien väliin jää : käsitelty läpäisemätön alue 2 johon laserkäsittelyn aikana on jätetty merkintöjä koskien ·»· testiä ja valmistajaa. Kukin kanava sisältää spesifisen sitojan 3. Leimakohta 4 ·♦ · • V testivälineen keskellä, sisältää toisen, tutkittavaa analyyttiä vastaan suunnattiin ··· leimareagenssin. Näytteenannostelukohta 5 on sama kuin testivälineen leimakohta 4. Kuvion 1 testivälineelle on tyypillistä, että kussakin kanavassa voi olla eri spesifinen · · : .1 sitoja (esim. allergeeni) ja kanavien keskellä on kullekin sitojalle yhteinen ·1« • ♦ * · · · 1 partikkelileima (esimerkiksi antihuman IgE).
· · • e φ«· ··« :...i Kuvio 2 esittää testivälinettä, jossa yksi kanavista 1 sisältää haaroittuneet kanavat la ja ·1"· Ib jotka sisältävät yhden spesifisen sitojan, suojavyöhykkeessä 3. Muut kanavat 1 *;··· sisältävät kaksi suojavyöhykettä 3 joista toinen voi olla kontrollivyöhyke. Kaikki 11 1 1 8904 kanavat 1 sisältävät erillisen leimakohdan 4. Väline sisältää testivälineen keskellä erillisen näytteen annostelukohdan 5.
Kuvio 3 esittää testivälinettä, jossa neljä identtistä tai ei-identtistä kanavaa 1 sisältävät haaroittuneet kanavat la, Ib jotka sisältävät spesifisiä sitojia suojavyöhykkeessä 3 ja ennen kanavien haarautumiskohtia neljä erillistä partikkelileimakohtaa 4, jotka on päällystetty spesifisillä sitojilla. Väline sisältää erillisen näytteen annostelukohdan 5.
Kuvio 4 esittää testivälinettä, jossa neljä identtistä tai ei-identtistä kanavaa 1 jotka haarautuvat kanaviin la, Ib jotka vuorossaan sisältävät spesifisiä sitojia suojavyöhykkeessä 3 ja ennen kanavien haarautumiskohtia neljä erillistä partikkelileimakohtaa 4, jotka on päällystetty spesifisillä sitojilla. Väline sisältää erillisen näytteenannostelukohdan 5.
Kuvio S esittää testivälinettä, jossa näytteenannostelukohta 3 on sijoitettu testivälineen tai liuskan toiseen päähän. Väline sisältää kolme kanavaa 1 joihin kuhunkin on sijoitettu kaksi suojavyöhykettä 3. Leimakohta 4 on sama kuin näytteenannostelukohta S.
Kuvio 6 esittää testivälinettä, joka sisältää maksimissaan kaksitoista erilaista sitojaa .’. j kahdessatoista erillisessä suojavyöhykkeessä 3 neljässä eri kanavassa 1 jotka jakautuvat • · ·*:*. edelleen kolmeen kanavaan la, Ib ja le. Väline sisältää edelleen neljä erillistä ;***: leimakohtaa 4. Testiväline sisältää erillisen näytteen annostelukohdan S.
··· ·· * • · · • · • · : Kuvio 7 esittää testivälinettä joka sisältää kahdeksan identtistä kanavaa 1 joiden välissä on käsiteltyjä, läpäisemättömiä alueita 2. Jokainen kanava 1 sisältää kolme spesifistä ·· · j sitojaa, valinnaisesti eri analyyttejä vastaan, kolmessa erillisessä suojavyöhykkeessä 3.
···
Leimakohta 4 testivälineen keskellä, sisältää toista tutkittavaa analyyttiä vastaan : suunnattua leimareagenssia.
··· ··· • ♦ • · ··· .···, Kuvio 8 esittää testivälinettä joka sisältää kahdeksan kanavaa 1 jotka jokainen • · · haarautuvat kahteen kanavaan la ja Ib ja jotka jokainen sisältävät suojavyöhykkeen 3.
• · Väline sisältää yhteisen leima- ja näytteenannostelukohdan 4, S.
12 1 1 8904
Kuvio 9 esittää testivälinettä joka sisältää viisi kanavaa 1, jotka jokainen sisältää neljä suojavyöhykettä 3. Väline sisältää neljä erillistä leimakohtaa 4 ja näytteenannostelukohdan 5.
Kuvio 10 esittää testivälinettä virusantigeenin osoitusta varten, jossa näytteenannostelukohta 5 on sijoitettu testi välineen tai liuskan toiseen päähän. Väline sisältää kolme kanavaa 1 joihin kuhunkin on sijoitettu sitojavyöhyke 3 ja erillinen leimakohta 4. Väline on merkitty testiä ja valmistajaa kuvaavilla tiedoilla.
Kuvio 11 esittää testivälinettä sydäninfarktitestausta varten, jossa näytteenannostelukohta 5 on sijoitettu testivälineen tai liuskan toiseen päähän. Väline sisältää kolme kanavaa 1 joihin kuhiinkin on sijoitettu sitojavyöhyke 3 ja erillinen leimakohta 4. Väline on merkitty testiä ja valmistajaa kuvaavilla tiedoilla.
Kuvio 12 esittää kolmea testivälinettä, jossa näytteenannostelukohta 5 on sijoitettu testivälineen toiseen päähän. Välineet sisältävät leimakohdan 4 ja suojavyöhykkeet 3, joista toinen on kontrollikohta.
e • · • ·
Kuvattujen testivälineiden muoto ja koko ovat vain esimerkkejä siitä mitä keksinnön ··· : : mukainen menetelmä antaa mahdollisuuden valmistaa.
··« • · • · ··· M · • · · ϊ ·* Testivälineen käyttö usean analyysin suorittamiseksi samanaikaisesti tai rinnakkain » M» • · *···' Keksintö perustuu huokoisessa materiaalissa, kuten nitroselluloosassa tapahtuvaan nestevirtaukseen, joka tunnetusti tapahtuu diffuusion ja kapillaari-ilmiön vaikutuksesta · · :i(f käytännöllisesti katsoen kaikkiin suuntiin samalla nopeudella. Mainittu radiaalinen tai • · lateraalinen virtaus antaa mahdollisuuden siirtää näytettä, joka sisältää tutkittavia analyyttejä ja testireagensseja useaan kanavaan jotka toimivat eri testeinä · * '··.* samanaikaisesti, kunhan huokoisen materiaalin kanavointi on hoidettu luotettavasti.
» • · · : Testi välineelle annosteltu näyte reagoi näytteeseen lisätyn leiman tai välineelle "**: annostellun yhden tai useamman leiman kanssa ja tämä kompleksi puolestaan reagoi ,3 1 1 8904 myöhemmin testivälineellä eri kanavissa olevien kiinteiden sitojien kanssa. Myös immunologisia reagensseja voidaan immobilisoida siten, ettei niiden toiminta häiriinny. Näytteen lisäys testivälineelle tapahtuu annostelemalla pieni määrä näytettä tai sen laimennosta testivälineessä olevaan annostelukohtaan 5, josta se siirtyy leimakohtaan tai -kohtiin 4 ja edelleen kanavia pitkin testi vyöhykkeisiin 3, joissa tapahtuu leimassa olevan spesifisen sitojan, näytteessä olevan analyytin ja kiinteään kantajaan sidotun toisen spesifisen sitojan välinen reaktio. Tämä reaktio saadaan paljain silmin näkyväksi, mikäli leima on ollut värillinen partikkeli tai se voidaan lukea UV-valon alla paljain silmin valoa lähettävänä pisteenä, täplänä, viivana tai muuna kuviona tai se voidaan lukea ja tulkita tarkoitukseen sopivalla laitteella, fotometrillä, fluorometrillä tai magneettikentän muutosta mittaavalla laitteella.
Toisessa suoritusmuodossa leimakohta 4 on itse annostelukohdassa S, jolloin näytteen analyytti ja leiman spesifinen sitoja muodostavat kompleksin ennen näytteen siirtymistä kanavia pitkin.
Edelleen toisessa suoritusmuodossa leiman annostelu tapahtuu näytteeseen ennen näytteen lisäystä tesivälineelle.
• · !/.: Erikoisen suuri hyöty ko. testivälineestä on esimerkiksi allergiatestauksessa, jossa nyt • · · v ·' tarvitaan suhteellisen suuri seerumimäärä allergiaspesifisten IgE luokan vasta-aineiden ··« määrittämiseksi. Keksintöä sovellettaessa voidaan hyvin pienestä määrästä näytettä, ·· · • jopa vain 10 - 40 piistä seerumia, plasmaa tai kokoverta määrittää samanaikaisesti ja φφ· ·...· samalla testivälineellä potilaan herkistyminen jopa 24 tai useammalle eri allergeenille annostelemalla testivälineen joka kanavaan useampaa erilaista allergeenia.
·· · · · • φ • · φ φ · • · *···* Keksinnön yhdessä edullisessa suoritusmuodossa useampi erilainen leima on kiinnitetty φ testivälineelle. Näin yksi pieni näyte mobilisoi eri kanavissa olevat valinnaisesti ΙΙΦ toisistaan poikkeavat leimat. Tällainen testiväline soveltuu hyvin : *: *; immunoglobuliinispesifisiä vasta-ainemäärityksiä varten, eri taudinaiheuttaj ia vastaan.
φ φ φ 14 118904
Esimerkkejä testin soveltamisesta
Seuraavaksi esitetyt sovellusmuodot ovat esimerkinomaisia ja tulee huomioida, että alan ammattimiehelle on ilmeistä että keksintöä voidaan soveltaa myös muulla tavalla.
Esimerkki 1. Kanavaverkoston muodostaminen laserilla
Huokoiseen nitroselluloosakantajaan tehdään Domino DGM-1 ’’High Resolution Laser Marker” laitteella kuviossa la esitetyn muotoinen kuvio polttamalla nitroselluloosaa pois niistä kohdista, joihin ei haluta nestevirtausta. Testi välineeseen muodostuu verkosto jossa on kahdeksan kanavaa 1 käsiteltyjen, läpäisemättömien alueiden 2 erottamana. Sekaantumisvaaran poistamiseksi, nitroselluloosasta jätetään syövyttämättä tuotetta ja valmistajaa kuvaavat merkinnät.
Ennalta tietokoneohjelmaan ohjelmoitu, haluttu kuvio poltetaan, käyttäen 10 - 2500 mm/sekunti merkintänopeutta 700 mm/s ja 20%, 20W Laserin (85 - 132 V/170 - 260 V, I Phase sisäänsyöttötehoa ja 20W ulostulotehoa) maksimitehosta ja resolutiolla 250/1000.
Näin valmistettu testivälinepohja kanavaverkostolla käytetään alla esitettyjen ....: esimerkkien mukaisesti useamman analyysin samanaikaiseen suorittamiseen.
• * • · · • ·· • · : *:': Esimerkki 2. Testiväline allergiatestausta varten :***: Esimerkin 1 mukaisesti valmistetun testivälineen verkoston kanaviin 1 annostellaan • f* ;***: liuoksena tutkittavat spesifiset allergeenit, (konsentraatiossa 1-5 mg/ml) siten, että ne muodostavat liukenemattomat vyöhykkeet 3 taittuessaan annostelukohdan nitroselluloosaan. Jokaiseen kanavaan annostellaan eri allergeenit (puiden, heinien tai • · · ; rikkaruohojen siitepölystä valmistettuja uutteita, homeiden itiöistä, punkeista, • · · kotipölystä, eläinten ihoepiteelistä, hyönteisistä, lateksista, parasiiteistä, lääkeaineista tai : elintarvikkeista tehtyjä uutteita). Tämän jälkeen kanavien 1 reaktiivinen nitroselluloosa • φ · blokataan eli tehdä inertiksi liuoksella, joka sisältää naudan seerumi albumiinia (BSA) «·· .···. (0,1 - 5,0%), heksaanisulfonihappoa ja trehaloosia (1,0 - 3,0%). Liuos annostellaan • · · * testivälineen keskelle (10 - 100 μΐ), jonka jälkeen se kulkee diffuusion ja kapillaari- 15 1 1 8904 ilmiön vaikutuksesta jokaiseen kanavaan ja sitoo eli blokkaa nitroselluloosan vapaat reaktiiviset kohdat.
Tämän jälkeen testiväline kuivataan huoneen lämpötilassa kunnes kosteusprosentti on alle 8%.
Kuivauksen jälkeen testivälineen keskelle annostellaan manuaalisesti 1,0 - 10,0 μΐ anti Ig£:llä päällystettyjä värillisiä lateksipartikkeleita (0,2 - 1,0%) sisältävää vesiliuosta, jossa seos lisäksi sisältää BSA:ta 0, 1 - 1,0 %, Tween 20:ta, 0,01 - 0,05% ja trehaloosia 0,5 -1,5. Partikkelisooli kuivataan testivälineen keskelle.
Testiä käytettäessä, 10 - 50 μΐ allergisen henkilön seerumia tai sen laimennosta annostellaan testivälineen keskelle näytteenannostelukohtaan. Näyte liuottaa keskellä olevan leiman. Leiman antilgE vasta-aineet reagoivat näytteen allergiaspesifisten IgE molekyylien kanssa ja diffundoituvat kapillaari-ilmiön vaikutuksesta testikanaviin.
Mikäli tutkittava näyte sisältää spesifisiä IgE vasta-aineita jotakin tai useampia testivälineen vyöhykkeissä 3 olevia allergeeneja vastaan, syntyy kyseisen allergeenin ..,.: vasta-ainetta sisältävään reaktiokanavaan värillinen vyöhyke.
• · * · · • »· • e
Esimerkki 3. Testiväline aliergiatestausta varten
Huokoiseen nitroselluloosakantajaan tehdään sopivaa leimasinta käyttäen kuviossa 1
• M
esitetyn muotoinen kuvio, jossa kanavaverkosto on muodostettu siirtämällä noin 60°C värillistä polyolefunia huokoiselle kantajalle siten, että se tukkii kantajan huokoset halutuista kohdista ja testivälineeseen muodostuu verkosto jossa on kahdeksan kanavaa • · · • \·* 1 läpäisemättömien alueiden 2 erottamana.
• · · • * • e· • ·*· Tämän verkoston kanaviin annostellaan liuoksena tutkittavat spesifiset allergeenit, ··· (konsentraatiossa 1-5 mg/ml) siten, että ne muodostavat liukenemattomat vyöhykkeet • · · .···, 3 tarttuessaan annostelukohdan nitroselluloosaan. Jokaiseen kanavaan annostellaan eri • * · allergeenit (puiden, heinien tai rikkaruohojen siitepölystä valmistettuja uutteita, homeiden itiöistä, punkeista, kotipölystä, eläinten ihoepiteelistä, hyönteisistä, lateksista, ie 1 1 8904 parasiiteistä, lääkeaineista tai elintarvikkeista tehtyjä uutteita). Tämän jälkeen kanavien 1 reaktiivinen nitroselluloosa Mokataan eli tehdä inertiksi liuoksella, joka sisältää naudan seerumi albumiinia (BSA) (0,1 - 5,0%), heksaanisulfonihappoa ja trehaloosia (1,0 - 3,0%). Liuos annostellaan testivälineen keskelle (10 - 100 μΐ), jonka jälkeen se kulkee diffuusion ja kapillaari-ilmiön vaikutuksesta jokaiseen kanavaan ja sitoo eli Mokkaa nitroselluloosan vapaat reaktiiviset kohdat.
Tämän jälkeen testiväline kuivataan huoneen lämpötilassa kunnes kosteusprosentti on alle 8%.
Kuivauksen jälkeen testivälineen keskelle annostellaan 1,0 - 10,0 μΐ anti IgE:llä päällystettyjä värillisiä lateksipartikkeleita (0,2 -1,0%) sisältävää vesiliuosta, jossa seos lisäksi sisältää BSA:ta 0, 1 - 1,0 %, Tween 20:ta, 0,01 - 0,05% ja trehaloosia 0,5 - 1,5. Partikkelisooli kuivataan testivälineen keskelle.
Testiä käytettäessä, 10 - 50 μΐ allergisen henkilön seerumia tai sen laimennosta annostellaan testivälineen keskelle näytteenannostelukohtaan. Näyte liuottaa keskellä olevan leiman. Leiman antilgE vasta-aineet reagoivat näytteen allergiaspesifisten IgE
* ί * *: molekyylien kanssa ja diffundoituvat kapillaari-ilmiön vaikutuksesta testikanaviin.
* t i » • ·» • M* V ί Mikäli tutkittava näyte sisältää spesifisiä IgE vasta-aineita jotakin tai useampia • · · testivälineen vyöhykkeissä 3 olevia allergeeneja vastaan, syntyy kyseisen allergeenin i· » ί V vasta-ainetta sisältävään reaktiokanavaan värillinen vyöhyke.
• M
• · « · • · ·
Esimerkki 4. Testiväline sukupuolitautitestausta ja veriseulontaa varten ·· * • · • ·' Esimerkki 4 kuvaa keksinnön soveltamista sukupuolitautitestaukseen, jossa • **;·’ samanaikaisesti määritetään potilasnäytteistä sekä vasta-aineita, että virus- tai * •.:,; bakteeriantigeenej a.
• · · • · • · ·»·
Testiväline joka on esitetty kuviossa 2 ja johon monikanavainen verkosto valmistetaan *:·*: esimerkissä 1 kuvatulla tavalla, valmistetaan edelleen siten, että ensimmäinen kanava 1, joka haaraantuu kahteen osaan, muodostaa HIV1 ja HIV2 vasta-ainetesteille 17 1 1 8904 testikanavat. Näihin kanaviin sijoitetaan ko. viruksille tyypilliset polypeptidi- tai rekombinanttiantigeenit, viivana (0,1 - 0,5 μΐ), konsentraatiossa 0,5 - 5,0 mg/ml. Kanavaan 1 sijoitetaan värillinen leimakohta 4, joka on valmistettu, päällystämällä esimerkiksi kultapartikkelit sekä HIV1 että HIV2 viruksia tunnistavalla kolmannella polypeptidi tai rekombinantti antigeenillä.
Samassa testivälineessä toista kanavaa 1 käytetään HIV - virusantigeenin osoittamiseksi, sijoittamalla siihen kanavaan esim. HIV viruksen p24-antigeenia vastaan tuotettua monoklonaalisesta vasta-aineesta (0,5 - 5,0 mg/ml) tehty viiva tai täplä ja samaan haaraumattomaan kanavaan 1 niin kutsuttu kontrollireagenssivyöhyke, joka on monoklonaalinen vasta-aine samaa käytettyä leimavasta-ainetta vastaan.
Kolmas kanava 1 käytetään leukemiaviruksen (HTLV-1/2) vasta-aineiden osoittamiseksi, valmistamalla testiviiva 3 ja kontrolliviiva 3 edellä kuvatulla tavalla tälle virukselle tyypillisestä rekombinanttiantigeenista ja sijoittamalla tarvittava leima, joka on valmistettu päällystämällä kultapartikkelit toisella HTLV-1/2 virukselle tyypillisellä rekombinanttiantigeenilla saman kanavan leimakohtaan 4.
·;··· Neljänteen kanavaan 1 sijoitetaan vastaavalla tavalla Treponema pallidum bakteerin :*·,· vasta-aineiden osoittamiseen sopivat spesifisistä rekombinanttiantigeeneista tehdyt • · :T: reagenssivyöhykkeet 3.
··* f · • · ··« ♦ · · i \i Viidenteen kanavaan 1 sijoitetaan puolestaan Hepatiitti B viruksen pinta-antigeenia • · · osoittava testisysteemi käyttämällä kahta pinta-antigeenia vastaan tuotettua spesifistä vasta-ainetta, toista testivyöhykkeessä 3 ja toista leimakohdassa 4.
M · • · · • · • · *··
Kuudenteen kanavaan 1 sijoitetaan tarpeelliset reagenssit Hepatitis C-viruksen : osoittamiseksi. Testiviivaan 3 sijoitetaan HCV:lle tyypillinen rekombinattiantigeeni ja : " ]: leimakohta 4 valmistetaan päällystämällä kultapartikkelit antihuman IgG:llä.
··· • · · » · * ····{ Testi välineen kaikki kanavat 1 käsitellään niin kutsutulla blokkaus-liuoksella joka sisältää albumiinia (BSA) (0,1 - 5,0%), TRITON-X-100, BRI:tä ja sakkaroosia, 18 1 1 8904 annostelemalla tätä riittävä määrä testivälineen näytteenannostelukohtaan S, josta se diffundoituu jokaiseen kanavaan ja täyttää nitroselluloosan reaktiiviset kohdat. Testivälineen kuivaus suoritetaan vakuumikaapissa kuivaamisen nopeuttamiseksi.
Tämän jälkeen tarpeelliset, ylläkuvatut, kullekin testille ominaiset leimat annostellaan testivälineen niille varattuihin leimakohtiin 4 tarkoitukseen sopivaa automaattista annostelijaa käyttäen. Kuivaus suoritetaan kuten edellä mainitussa esimerkissä on kerrottu.
Potilasnäytteitä tutkittaessa seerumia, plasmaa tai kokoverta annostellaan testivälineen keskelle 10 - 50 μΐ ja tulokset voidaan lukea 1 - 10 min reaktioajan jälkeen. Positiivisessa tapauksessa testivyöhykkeeseen ilmestyy värillinen viiva tai spotti ja kontrollivyöhykkeisiin, niissä kanavissa tai haarautuneissa kanavissa joissa on sellainen, toinen värillinen vyöhyke.
Esimerkki 5. Testiväline sukupuolitautitestausta ja veriseulontaa varten
Esimerkki 5 kuvaa keksinnön soveltamista sukupuolitautitestaukseen, jossa samanaikaisesti määritetään potilasnäytteistä sekä vasta-aineita, että virus- tai bakteeriantigeeneja.
• · • · · • ·· :*·*: Testiväline joka on esitetty kuviossa 3 ja jonka kanavointi tehdään esimerkissä 1 kuvatulla tavalla, valmistetaan sijoittamalla ensimmäiseen kanavaan 1, HTV-j***: virusantigeenin osoittamiseksi, HIV viruksen p24-antigeenia vastaan tuotetusta polyklonaalisesta vasta-aineesta (0,5 - 5,0 mg/ml) tehty täplä ja samaan haaraumattomaan kanavaan 1 niin kutsuttu kontrollireagenssivyöhyke, joka on • i · : *.: polyklonaalinen vasta-aine käytettyä leimavasta-ainetta vastaan.
• t· • ♦ • ·
Toiseen kanavaan 1 sijoitetaan vastaavalla tavalla Treponema pallidum bakteerin vasta-aineiden osoittamiseen sopivat spesifisistä rekombinanttiantigeeneista tehdyt reagenssivyöhykkeet 3.
• · 19 1 18904
Kolmanteen kanavaan 1 sijoitetaan puolestaan Hepatiitti B viruksen pinta-antigeenia osoittava testisysteemi käyttämällä kahta pinta-antigeenia vastaan tuotettua spesifistä vasta-ainetta, toista testivyöhykkeessä 3 ja toista leimakohdassa 4.
Neljänteen kanavaan 1 sijoitetaan tarpeelliset reagenssit Hepatitis C-viruksen osoittamiseksi. Testiviivaan 3 sijoitetaan HCVrlle tyypillinen rekombinattiantigeeni ja leimakohta 4 valmistetaan päällystämällä kultapartikkelit antihuman IgG:llä.
Testivälineen kaikki kanavat 1 käsitellään niin kutsutulla blokkaus- liuoksella joka sisältää kaseiinia (0,1 - 5,0%), heksaanisulfonihappoa ja trehaloosia (1,0 - 3,0%), annostelemalla tätä riittävä määrä testivälineen näytteenannostelukohtaan 5, josta se diffundoituu jokaiseen kanavaan ja täyttää nitroselluloosan reaktiiviset kohdat. Testivälineen kuivaus suoritetaan vakuumikaapissa kuivaamisen nopeuttamiseksi.
Tämän jälkeen tarpeelliset, ylläkuvatut, kullekin testille ominaiset leimat annostella testivälineen niille varattuihin leimakohtiin 4. Kuivaus suoritetaan kuten edellä mainitussa esimerkissä on kerrottu.
Esimerkki 6. Testiväline sydäninfarktitestausta varten
Esimerkki, joka kuvaa hyvin keksinnön sovellutuksia, on testiväline sydäninfarktin • * ·. · toteamiseen potilaan kokoveri-, plasma- tai seeruminäytteestä.
» · ··· • · · • * · i***: Valmistetaan kuvion 4 testiväline neljää eri analyyttiä varten. Testivälineessä, joka valmistetun esimerkissä 1 kuvatulla tavalla, on neljä eri identtistä kanavaa, jotka haarautuvat edelleen kukin kahteen eri kanavaan. Testivälineellä voidaan siten määrittää ··
Troponiini I:n, Myoglobiinin, Kreatiinikinaasi MB isoentsyymin (CKMB) ja C- ·· · • V reaktiivisen proteiinin (CRP) esiintyminen potilasnäyteessä samanaikaisesti, samasta ··· näytteestä.
* • · « * * · «f· :"‘i Testivälineen kanaviin la ja Ib annostellaan la-kanavaan Troponiini I vasta-ainetta 0,1 - 0,5 μΐ, konsentraatiossa 1,0 - 5,0 mg/ml ja lb-kanavaan 0,1 - 0,5 μΐ antimouse vasta-ainetta, konsentraatiossa 1,0 - 5,0 mg/ml. Kanava la muodostaa niin kutsutun testikanavan ja kanava Ib muodostaa niin kutsutun sisäisen toimivuuskontrollikanavan.
20 1 1 8904
Toisen reaktioparin muodostavat Troponiini I:tä vastaan tehdyllä vasta-aineella päällystetyt värilliset partikkelit, jotka annostellaan kuten esimerkissä 1 on kuvattu kanavassa 1 varattuun leimakohtaan 4.
Edellä kuvatulla tavalla testivälineeseen valmistetaan spesifiset testit Troponiini I:n lisäksi Myoglobiinille, CKMB:lle ja C-reaktiiviselle proteiinille (CRP).
Testivälineen kaikki kanavat 1 käsitellään niin kutsutulla blokkaus- liuoksella joka sisältää polyetyleeniglykolia (PEG), TRITON-X-100:aa ja trehaloosia (1,0 - 3,0%), annostelemalla tätä riittävä määrä testivälineen näytteenannostelukohtaan 5, josta se diffundoituu jokaiseen kanavaan ja täyttää nitroselluloosan reaktiiviset kohdat. Testivälineen kuivaus suoritetaan vakuumikaapissa kuivaamisen nopeuttamiseksi.
Tämän jälkeen kullekin testille ominaiset leimat annostellaan testivälineen niille varattuihin leimakohtiin 4. Kuivaus suoritetaan kuten edellä mainitussa esimerkeissä on kerrottu.
Näyte annostellaan testivälineen keskelle, josta se diffundoituu radiaalisesti jokaiseen ····· identtiseen kanavaan aikaansaaden testi- ja kontrollireaktiot, mikäli tutkittavassa potilasnäytteessä on sydäninfarktin markkereita vastaavaa analyyttiä. Testaus • φ suoritetaan joko seerumi-, plasma- tai kokoverinäytteestä, jolloin hyväksi havaittu suodatinsysteemi poistaa kokoverinäytteestä punasolut ja valkosolut.
• · · • * · • · • ·
Esimerkki 7. Testiväline sydäninfarktitestausta varten
Valmistetaan esimerkissä 1 mainitulla tavalla kuvion 11 mukainen testiväline jossa on ·· · • merkitty spesifiset testit Troponiini I:lle ja Myoglobiinille.
··· • · • · »·· : Spesifiset testit Troponiini I:lle ja Myoglobiinille valmistetaan esimerkissä 6 esitetyllä Γ': tavalla. Myös kanavien blokkaus ja leimojen annostelu suoritetaan kuten esimerkissä 6.
Yksi kanava toimii kontrollikanavana jolla varmistetaan, että testi on säilytetty oikein ....: ja, että reagenssit toimivat.
118904 21
Esimerkki 8. Testiväline hengitystieinfektiotestausta varten
Seuraava esimerkki kuvaa keksinnön soveltamista sellaisissa hengitystie infektiotautitapauksissa, joissa halutaan mitata potilaan seerumi-, plasma- tai kokoverinäytteistä luokkaspesifisiä vasta-aineita, haluttua bakteeri- tai virusantigeeniä vastaan.
Valmistetaan kuvion 6 mukainen testiväline esimerkissä 1 kuvatulla tavalla. Jokaisesta tutkittavasta bakteerista tai viruksesta tehtyä antigeeniä sijoitetaan testikanavien 1 kohtiin 3 konsentraatiossa 0, 1 - 5,0 mg /ml, kunkin reagenssin kokonaistilavuuden ollessa 0, 1 - 0,5 μΐ. Kanavien 1 ei reaktiiviset kohdat blokataan ja testivälineet kuivataan kuten on esitetty esimerkissä 1. Jokaisen testikanavan haarautumiskohdan leimakohtaan 4 sijoitetaan vastaavasti kuhunkin testikanavaan anti-IgG, anti-IgM tai anti-IgA vasta-aineista tehdyt konjugaatit. Ne kuivataan kuten edellä on kuvattu.
Potilasnäyte (seerumi, plasma tai kokoveri) annostellaan testivälineen keskelle näytteenannostelukohtaan 5, josta se diffundoituu ja kulkeutuu kapillaari-ilmiön vaikutuksesta ensin konjugaattikohtiin ja reagoi kyseisten leimakohdassa 4 partikkelileimojen kanssa ja sen jälkeen jatkaa matkaa testivyöhykkeiden 3 kohdalle, joissa tapahtuu reaktio mikäli näytteessä on tutkittavaa bakteeria tai virusta vastaan ko.
·*·.· alaluokkaspesifistä vasta-ainetta. Positiiviset tulokset nähdään samalla tavalla kuin on • · esitetty edellä olevissa esimerkeissä.
*· • · • · ··· :***: Esimerkki 9. Testiväline syöpädiagnostiikkaa varten ! !,**i Esimerkki 9 kuvaa keksinnön soveltamista syöpädiagnostisessa testivälineessä. Kuvion 9 mukainen testiväline valmistetaan esimerkissä 1 kuvatulla tavalla. Testivälineessä on ” · · · • viisi kanavaa, jotka ovat käytännöllisesti katsoen identtiset. Kuhunkin kanavaan 1 • · · (vasemmalta oikealle) annostellaan syöpämarkkereita vastaan tehtyjä monoklonaalisia : vasta-aineita CA 125 (Cancer Antigen 125), PSA (prostate-specific antigen), pKAc (protein kinase A catalytic subunit), CEA (carcinoembryonic antigen), AFP (alphafetoprotein) konsentraatiossa 0,1-5,0 mg/ml kunkin testin kohdalle 0,1 - 0,5 μΐ.
• · 22 1 1 8904
Vasta-aineiden annostelun jälkeen, suoritetaan riittävä kuivaus, jonka jälkeen suoritetaan blokkaus käyttäen polyvinyylialkoholia (PVA), heksaanisulfonihappoa ja sakkaroosia. Tämän jälkeen testiväline kuivataan, jonka jälkeen se on valmis leimojen annostelua varten.
Vastaavasti jokaisen testikanavan alkuun, leimakohtaan 4 annostellaan vastaavalle syöpämarkkerille tehtyä spesifistä leimaa, jossa kultapartikkelit on päällystetty toisella kyseistä markkeria vastaan tehdyllä vasta-aineella, kuten on kuvattu aikaisemmissa esimerkeissä. Annostelun jälkeen testiväline kuivataan ja pakataan suojaavaan muovikoteloon.
Potilasnäytettä (seerumi, plasma, kokoveri, jne.) annostellaan 10 μΐ testivälineen näytteenannostelukohtaan 5, josta se kulkeutuu kutakin syöpämarkkeria vastaavaan kanavaan 1 liuottaen leiman leimakohdasta 4 ja edelleen testivyöhykkeisiin 3. Mikäli näytteessä esiintyy tutkittavaa syöpämarkkeria syntyy ko. kanavaan silminnähden havaittava testitulos.
Esimerkki 10 Testiväline virnsantigeenin osoittamista varten
Esimerkki 10 kuvaa keksinnön soveltamista testivälineessä virusantigeenien • 1 ·, · osoittamista varten.
• · ··* * · · • · ·
Testiväline joka on esitetty kuviossa 10 ja jonka kanavointi tehdään esimerkissä 1 :***: kuvatulla tavalla, valmistetaan sijoittamalla ensimmäiseen kanavaan 1, Rota-viruksen *«· osoittamiseksi, virusantigeeniä vastaan tuotetusta spesifisestä vasta-aineesta tehty täplä testi vyöhykkeeseen 3, joka on vasta-aine käytettyä leimavasta-ainetta vastaan, jota on • · · • 1.: leimakohdassa 4.
• · · • · • · • · · : Samassa testivälineessä kolmatta kanavaa 1 käytetään Adeno-virusantigeenin • •e osoittamiseksi, sijoittamalla siihen kanavaan viiva tai täplä testivyöhykkeeseen 3, joka . 1: ·. on spesifinen vasta-aine käytettyä leimavasta-ainetta vastaan, jota on leimakohdassa 4.
* · 23 1 1 8904
Testivälineen toista kanavaa käytetään kontrollikanavana, testi välineen toimivuuden tarkastamiseksi. Leimakohtaan lisätään epäspesifinen konjugaatti ja testivyöhykekohtaan anti-mouse vasta-aine.
Kanavien 1 ei reaktiiviset kohdat blokataan ja testivälineet kuivataan kuten on esitetty esimerkissä 1. Jokaisen testikanavan haarautumiskohdan leimakohtaan 4 annostellaan testille ominaiset leimat. Ne kuivataan kuten edellä on kuvattu.
Potilasnäyte (laimennettu ulostenäyte) annostellaan testivälineen näytteenannostelukohtaan 5, josta se difiundoituu ja kulkeutuu kapillaari-ilmiön vaikutuksesta ensin konjugaattikohtiin ja reagoi kyseisten leimakohdissa 4 olevien partikkelileimojen kanssa ja sen jälkeen jatkaa matkaa testivyöhykkeiden 3 kohdalle, joissa tapahtuu reaktio mikäli näytteessä on tutkittavaa virusantigeeniä. Positiiviset tulokset nähdään samalla tavalla kuin on esitetty edellä olevissa esimerkeissä.
• • m • t • · · • ·· • · ·«· • · · * » · ··· • · • · ··· * · * · · • · • · ··· • · • ·
«M
t ♦ · • · · • I « · • 1 · • · • · ··· • · · • · · ·»« »·· • · • · ·1· » · · • · · * · ·

Claims (14)

  1. 24 118904
  2. 1. Immunodiffuusioon perustuva testiväline, joka sisältää huokoisen kantajamateriaalin, ja siinä olevan vyöhykkeenä tai täplänä olevan spesifisen sitomisreagenssin (immunoreagenssin), erillisenä toimitettavan tai huokoiseen kantajaan valmiiksi annostellun, näytteen avulla liikkuvaksi saatavan tulostettavan leiman, johon on kytketty toinen spesifinen sitomisreagenssi (immunoreagenssi) ja valinnaisesti suodattimella varustetun näytteen annostelukohdan, tunnettu siitä, että se sisältää kantajamateriaalissa kanavaverkoston joka on aikaansaatu syövyttämällä huokoinen kantajamateriaali laserkäsittelyllä, jossa kanavaverkostossa on kaksi tai useampi kanava (1), jotka ovat käsitellyn alueen (2) erottamia, joihin on kiinnitetty yksi tai useampi spesifinen sitomisreagenssi (3), valinnainen leimakohta (4), joka on sijoitettu näytteen annostelukohdan (5) lähellä olevan kanavan päähän tai itse annostelukohtaan (5), joka on sijoitettu siten, että se mahdollistaa näytteen tasaisen jakaantumisen kuhunkin kanavaan.
  3. 2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen testiväline, tunnettu siitä, että se mahdollistaa diagnoosin tekemisen monen oireyhtymän aiheuttajan tai analyytin samanaikaisesti tai rinnakkaisesti tehdyn tunnistamisen perusteella. , 3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen testiväline, tunnettu siitä, että sillä tunnistetaan ····· . . samanaikaisesti useita allergian aiheuttajia, sydäninfarktimarkkereita, sukupuolitautien • · · aiheuttajia, veriseulonta-analyyttejä, hengitystieoireiden aiheuttajia, muiden • 1 · 1^' infektiotautien aiheuttajia ja/tai syöpämarkkereita. • « • 1 ··· ·» · * 1 · : ·1 4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen testiväline, tunnettu siitä, että huokoinen aine on • M • · *···1 nitroselluloosa. • · • « • " S. Patenttivaatimuksen 1 mukainen testiväline, tunnettu siitä, että spesifiset • ♦ *···1 sitojareagenssit ovat vasta-aineita, vasta-ainefragmentteja, rekombinantti vasta-aineita, :V: rekombinantti vasta-ainefragmentteja, antigeenejä, lektiinejä, reseptoreita ja/tai ligandeja. ··♦ • · · • · · · • · · ♦ ·· • · 25 118904
  4. 6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen testiväline, tunnettu siitä, että leimareagenssit ovat lateksi-, kulta-, metalli-, väripartikkeleita tai fluoresoivia aineita.
  5. 7. Patenttivaatimuksen 1 mukainen testiväline tunnettu siitä, että kantajamateriaaliin on laserkäsittelyllä syövyttämällä aikaansaatu testiä kuvaavia merkintöjä.
  6. 8. Menetelmä patenttivaatimuksen 1 mukaisen testivälineen valmistamiseksi, jossa menetelmässä huokoiselle materiaalille kiinnitetään tunnistava spesifinen immunoreagenssi, huokoinen materiaali käsitellään sitä inertiksi tekevällä aineella ja jossa näytteenannostelukohta on valinnaisesti varustettu suodattimena ja ilmennettävissä olevalla leimalla, johon sidotaan spesifinen immunoreagenssi, tunnettu siitä, että (a) huokoiselle materiaalille muodostetaan halutun muotoinen ja kokoinen kanavaverkosto syövyttämällä huokoinen materiaali laserkäsittelyllä, joka kanavaverkosto sisältää kahden tai usemman kanavan (1), ja käsitellyn alueen (2); (b) jokaiseen kanavaan (1) kiinnitetään vyöhykkeenä tai täplänä (3) yksi tai useampi tunnistava spesifinen sitojareagenssi.
  7. 9. Patenttivaatimuksen 8 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että aine, jolla huokoinen materiaali tehdään inertiksi on seos joka sisältää luonnollisia tai synteettisiä | ] polymeerejä, kuten albumiini ja kaseiini tai PEG (polyetyleeniglykoli) ja PVA • · · *· " (polyvinyylialkoholi), nonionisia detergenttejä kuten heksaanisulfonihappo ja TRITON- t · · ’·* X-100, BRI sekä säilöntäaineita kuten sokeria, esimerkiksi sakkaroosi ja trehaloosi tai *·· • · *···* näiden johdannaisia. ·*· · • · • · »»» • * *···' 10. Patenttivaatimuksen 8 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että reagenssien annostelun jälkeen testiväline kuivataan korkeintaan 8% kosteuteen ja pakataan • · • · ! ** hermeettisesti. »M » * • · ·· • · • · « • · · • * ··· f · * * • · · • • ft • · f • · · f a f • · f • · · • · 26 118904
  8. 11. Patenttivaatimuksen 8 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että huokoiselle materiaalille muodostetaan testiä kuvaavia merkintöjä syövyttämällä huokoinen materiaali laserkäsittelyllä.
  9. 12. Patenttivaatimuksen 1 mukaisen testivälineen käyttö usean määrityksen samanaikaiseen tai rinnakkaiseen suorittamiseen halutun sairauden ja/tai oireyhtymän tunnistamiseksi, tunnettu siitä, että näyte annostellaan testivälineessä olevaan annostelukohtaan (5), joka sisältää tunnistettavan näytteen avulla liikkuvaksi saatettavan leiman ja siihen kytketyn toisen spesifisen sitomisreagenssin, josta näyte ja reagenssit kulkeutuvat tasaisesti laserkäsittelyllä aikaansaadun kanavaverkoston kanaviin, jossa ne reagoivat tai ovat reagoimatta spesifisen sitomisreagenssin kanssa sen kiinnityskohdassa (3), josta positiiviset tai negatiiviset tulokset ovat suoraan luettavissa.
  10. 13. Patenttivaatimuksen 1 mukaisen testivälineen käyttö usean määrityksen samanaikaiseen tai rinnakkaiseen suorittamiseen halutun sairauden ja/tai oireyhtymän tunnistamiseksi, tunnettu siitä, että näyte annostellaan testivälineessä olevaan annostelukohtaan (5), josta se kulkeutuu kanavaan, jossa se sekoittuu ja reagoi näytteen avulla liikkuvaksi saatettavan leiman ja siihen kytketyn toisen spesifisen sitomisreagenssin kanssa, minkä jälkeen näyte ja reagenssit kulkeutuvat tasaisesti laserkäsittelyllä aikaansaadun kanavaverkoston kanaviin, jossa ne reagoivat tai ovat ttit. reagoimatta spesifisen sitomisreagenssin kanssa sen kiinnityskohdassa (3), josta • t . positiiviset tai negatiiviset tulokset ovat suoraan luettavissa. • · · • · • · · * · · • · · I.. 14. Patenttivaatimuksen 1 mukaisen testivälineen käyttö usean määrityksen • · samanaikaiseen tai rinnakkaiseen suorittamiseen halutun sairauden ja/tai oireyhtymän • · *.,1 tunnistamiseksi, tunnettu siitä, että näyte sekoitetaan erikseen olevaan leimaan ja siihen • · • · *** kytkettyyn toiseen spesifiseen sitomisreagenssiin ja seos annostellaan testivälineessä ,, olevaan annostelukohtaan (5), josta näyte ja reagenssit kulkeutuvat tasaisesti • · laserkäsittelyllä aikaansaadun kanavaverkoston kanaviin, jossa ne reagoivat tai ovat • · reagoimatta spesifisen sitomisreagenssin kanssa sen kiinnityskohdassa (3), josta • · •, ·. · positiiviset tai negatiiviset tulokset ovat suoraan luettavissa. • · · • · • · ··· ··· • · t • i · • · t · ♦ • ·· • ♦ 27 118904
FI20030921A 2003-03-28 2003-06-19 Monikanavainen testiväline, menetelmä sen valmistamiseksi ja sen käyttö FI118904B (fi)

Priority Applications (8)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FI20030921A FI118904B (fi) 2003-03-28 2003-06-19 Monikanavainen testiväline, menetelmä sen valmistamiseksi ja sen käyttö
DE602004009554T DE602004009554T2 (de) 2003-03-28 2004-03-29 Mehrfachkanal-testvorrichtung, verfahren zur herstellung davon und verwendung davon
AT04724033T ATE376186T1 (de) 2003-03-28 2004-03-29 Mehrfachkanal-testvorrichtung, verfahren zur herstellung davon und verwendung davon
PCT/FI2004/000179 WO2004086042A1 (en) 2003-03-28 2004-03-29 Multiple-channel test device, method for producing the same and use thereof
EP04724033A EP1608974B1 (en) 2003-03-28 2004-03-29 Multiple-channel test device, method for producing the same and use thereof
JP2006505626A JP2006521547A (ja) 2003-03-28 2004-03-29 多チャンネル試験器、その製造法及びその使用
CA002518587A CA2518587A1 (en) 2003-03-28 2004-03-29 Multiple-channel test device, method for producing the same and use thereof
US10/548,500 US20070042444A1 (en) 2003-03-28 2004-03-29 Multiple-channel test device, method for producing the same and use thereof

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FI20030463A FI20030463A0 (fi) 2003-03-28 2003-03-28 Monikanavainen testiväline, menetelmä sen valmistamiseksi ja sen käyttö
FI20030463 2003-03-28
FI20030921 2003-06-19
FI20030921A FI118904B (fi) 2003-03-28 2003-06-19 Monikanavainen testiväline, menetelmä sen valmistamiseksi ja sen käyttö

Publications (3)

Publication Number Publication Date
FI20030921A0 FI20030921A0 (fi) 2003-06-19
FI20030921A FI20030921A (fi) 2004-09-29
FI118904B true FI118904B (fi) 2008-04-30

Family

ID=26161353

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI20030921A FI118904B (fi) 2003-03-28 2003-06-19 Monikanavainen testiväline, menetelmä sen valmistamiseksi ja sen käyttö

Country Status (8)

Country Link
US (1) US20070042444A1 (fi)
EP (1) EP1608974B1 (fi)
JP (1) JP2006521547A (fi)
AT (1) ATE376186T1 (fi)
CA (1) CA2518587A1 (fi)
DE (1) DE602004009554T2 (fi)
FI (1) FI118904B (fi)
WO (1) WO2004086042A1 (fi)

Families Citing this family (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2007139649A (ja) * 2005-11-21 2007-06-07 Asahi Kasei Corp 分析装置の多孔体
GB0717043D0 (en) * 2007-04-10 2007-10-10 Inverness Medical Switzerland Assay device
DE102007036906A1 (de) 2007-05-07 2008-11-13 Stiftung Caesar Center Of Advanced European Studies And Research Poröse Mikrofluidikstrukturen
AU2008207371B2 (en) * 2007-09-01 2014-05-22 Abbott Rapid Diagnostics International Unlimited Company Assay device with shared zones
GB2460660B (en) 2008-06-04 2013-05-22 Alere Switzerland Gmbh Assay reader device & method for measuring hCG
US20110243811A1 (en) * 2008-08-26 2011-10-06 Wen-Pin Hsieh Substrate of analytical strip
CN102099682B (zh) * 2008-08-29 2013-12-18 红电医学科技股份有限公司 流体检测试片
JP2010071693A (ja) * 2008-09-16 2010-04-02 Fujifilm Corp センシング方法、センシング装置、検査チップおよび検査キット
US20100285991A1 (en) * 2008-09-16 2010-11-11 Glaxosmithkline Llc Combinatory analytical strip
TWI382177B (zh) * 2008-09-30 2013-01-11 Actherm Inc 二合一流體檢測試片
WO2010040250A1 (zh) * 2008-10-09 2010-04-15 红电医学科技股份有限公司 流体检测方法
CN102171364A (zh) 2008-10-17 2011-08-31 红电医学科技股份有限公司 流体检测试片及其测试方法
KR101178009B1 (ko) * 2008-10-17 2012-08-28 액텀 아이엔씨. 액체 시험 스트립 및 방법
KR101329846B1 (ko) 2009-03-23 2013-11-14 액텀 아이엔씨. 분석 스트립 및 그의 제조 방법
DE102010022836B4 (de) * 2010-06-07 2016-03-24 Sartorius Stedim Biotech Gmbh Analytische Testvorrichtung
CN110133277A (zh) * 2011-09-08 2019-08-16 Nexus Dx股份有限公司 多级分析物检定
EP2955519B1 (en) 2014-06-10 2019-08-07 Sartorius Stedim Biotech GmbH Lateral flow membrane for multiparameter readouts and immunoassay device comprising the same
US9791434B2 (en) * 2015-09-04 2017-10-17 The Florida International University Board Of Trustees Paper microfluidic devices for forensic serology
EP3171169B1 (en) 2015-11-19 2017-10-04 Sartorius Stedim Biotech GmbH Patterned membrane structure
KR102401909B1 (ko) * 2018-08-30 2022-05-24 주식회사 엘지화학 반응 최적화를 위한 고속 스크리닝 분석 시스템
CN109669036B (zh) * 2019-02-28 2024-03-15 深圳市易瑞生物技术股份有限公司 一种按压式多通道层析装置

Family Cites Families (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4410633A (en) * 1980-09-25 1983-10-18 Corning Glass Works Method for the measurement of free thyroxine or 3,5,3'-triiodothyronine in a liquid sample
US5120643A (en) * 1987-07-13 1992-06-09 Abbott Laboratories Process for immunochromatography with colloidal particles
US5252496A (en) * 1989-12-18 1993-10-12 Princeton Biomeditech Corporation Carbon black immunochemical label
US5110724A (en) * 1990-04-02 1992-05-05 Cholestech Corporation Multi-analyte assay device
US5710008B1 (en) * 1990-10-12 1999-09-07 Spectral Diagnostics Inc Method and device for diagnosing and distinguishing chest pain in early onset thereof
JP3479100B2 (ja) * 1993-06-02 2003-12-15 帝国臓器製薬株式会社 免疫化学的簡易半定量方法および装置
DE4323672A1 (de) * 1993-07-15 1995-01-19 Boehringer Mannheim Gmbh Vorrichtung zur gleichzeitigen Bestimmung von Analyten
US5707818A (en) * 1994-12-13 1998-01-13 Bsi Corporation Device and method for simultaneously performing multiple competitive immunoassays
US6340588B1 (en) * 1995-04-25 2002-01-22 Discovery Partners International, Inc. Matrices with memories
EP1027607A1 (en) * 1997-10-31 2000-08-16 Sarnoff Corporation Method for enhancing fluorescence
US7476548B2 (en) * 1998-04-23 2009-01-13 Bayer Healthcare Llc Dry reagent strip configuration, composition and method for multiple analyte determination
US6171870B1 (en) * 1998-08-06 2001-01-09 Spectral Diagnostics, Inc. Analytical test device and method for use in medical diagnoses
US6214629B1 (en) * 1998-08-06 2001-04-10 Spectral Diagnostics, Inc. Analytical test device and method for use in medical diagnoses
GB9822242D0 (en) * 1998-10-13 1998-12-09 Zeneca Ltd Device
US6436722B1 (en) * 2000-04-18 2002-08-20 Idexx Laboratories, Inc. Device and method for integrated diagnostics with multiple independent flow paths
US6656745B1 (en) * 2000-06-02 2003-12-02 Francis X. Cole Devices and methods for a multi-level, semi-quantitative immunodiffusion assay
JP2002202310A (ja) * 2000-10-27 2002-07-19 Morinaga Milk Ind Co Ltd 物質の検出試薬及び検出方法

Also Published As

Publication number Publication date
US20070042444A1 (en) 2007-02-22
DE602004009554T2 (de) 2008-07-24
DE602004009554D1 (de) 2007-11-29
EP1608974B1 (en) 2007-10-17
ATE376186T1 (de) 2007-11-15
CA2518587A1 (en) 2004-10-07
FI20030921A (fi) 2004-09-29
EP1608974A1 (en) 2005-12-28
FI20030921A0 (fi) 2003-06-19
WO2004086042A1 (en) 2004-10-07
JP2006521547A (ja) 2006-09-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
FI118904B (fi) Monikanavainen testiväline, menetelmä sen valmistamiseksi ja sen käyttö
US7344893B2 (en) Immuno-gold lateral flow assay
US6528323B1 (en) Bidirectional lateral flow test strip and method
CN101137897B (zh) 双通道免疫测定装置
US7238538B2 (en) Chromatographic assay device and methods
FI78361B (fi) Anordning foer kemiska analyser och anvaendning daerav.
CA1309654C (en) Membrane assay using focused sample application
CN100451652C (zh) 多通道测试装置、其生产方法及其用途
AU684585B2 (en) Interrupted-flow assay device
US5989924A (en) Device for determining an analyte in a sample
JP4216838B2 (ja) 非連続式免疫分析装置及びこれを利用した免疫分析方法
CN1646913B (zh) 敏感性免疫色原图像测试
US20100323369A1 (en) Diagnostic Testing Process
US20030045001A1 (en) Immunochromatographic test strip with arcuate sample application zone for ease-of-use in the field
WO2006047831A1 (en) Detection device and method
JP2010512537A (ja) 間接側方流動サンドイッチアッセイ
JP2007506115A (ja) 試料中の複数分析物の検出装置
WO1999040438A1 (en) Device and method to detect immunoprotective antibody titers
JP2013519899A (ja) 抗体及び抗原を検出するためのイムノアッセイデバイス
JPH11153600A (ja) 免疫測定用試験片及び該試験片を用いる測定法
KR20170139043A (ko) 백그라운드 노이즈를 저감한 면역크로마토그래피 장치 및 그 저감 방법
US7771928B2 (en) Immunoassay device and immunoassay method using the same
CN104897654B (zh) 一种微流控生物芯片检测装置及制备方法
WO2015008287A1 (en) Device and method for analysis of multiple analytes
JP2005257468A (ja) バイオセンサ

Legal Events

Date Code Title Description
MA Patent expired
FG Patent granted

Ref document number: 118904

Country of ref document: FI